I.

INTRODUCION:
L a coloracin es uno de los mtodos de ms importantes
en el laboratorio de microscopia, el estudiante debe estar
perfectamente familiarizado con este tipo de tcnicas que
se usan para observar clulas y bacterias. Su utilidad en la
prctica microbiolgica las referencias a la morfologa celular
bacteriana, entre ellos tenemos cocos, bacilos, etc.
Cristian !ram, quien la desarroll en "#$$. Sobre la base
de su reaccin a la tincin de !ram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos, !ram positivas y !ram negativas.
Las bacterias !ram%positivas y !ram%negativas estas tienen formas
distintas debido a las diferencias en la estructura de sus paredes
celulares. La pared de la clula sirve para cubrir al n&cleo y
dar su tama'o y forma al clela, as como para prevenir la
lisis osmtica.
(ara poner de mani)esto las clulas !ram negativas se
utiliza una coloracin de contraste. *abitualmente es un
colorante de color ro+o, como la safranina o la fucsina bsica.
,espus de la coloracin de contraste las clulas !ram negativas
son ro+as, mientras que las !ram positivas permanecen azules.
-l proceso de La decoloracin debe realizarse con poca agua para
evitar que pierdan la tincin las clulas !ram positivas. -. proceso
de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso del
tiempo porque las clulas pueden perder el color que le estamos
agregando. -s por ello que tenemos que tener muco cuidado en el
lavado, para obtener resultados satisfactorios.
II. OBJETIVOS:
Conocer las tcnicas de coloracin ms comunes/
Simple, ,oble y !ram.
-stablecer la importancia de las coloraciones en
microscopia.
0undamentar la importancia de las estructuras
celulares en las coloraciones microscpicas.
Conocer y saber en qu circunstancias utilizar estos
mtodos.
III. REVISIN LITERARIA:
Seg&n el manual de laboratorio y microbiologa general de
la universidad nacional agraria la molina esta tcnica se
usa con la )nalidad de apreciar las caractersticas
morfolgicas sin que este sufra variacin alguna.
Las tcnicas de tincin ms importante son. Simple
compuesta y diferencial.
Seg&n el libro de 1.C234.3L3!56 ,-
L64326732.38"9:;<.el e=perimento >%? nos indica
tambin e=iste una tencin acidorresistente se llama as
debido a la naturaleza acida del agente del colorante
empleado @ una solucin de *Cl al ;AB el alcool al 9CB
este decolorante es muco mas fuerte que la mezcla de
cetona @ alcool usada en el !ram nunca se debe de
usarse el acido para decolorar en el procedimiento de !ram
los organismos acidorresistentes son capaces de retener el
colorante a pesar de la energa que este produce .
Seg&n la enciclopedia libre 8DiEipedia<. Fcido%alcool
resistencia es la propiedad fsica de algunas bacterias a la
resistencia a la decoloracin de la fucsina bsica 8ro+o< la
cual penetra en la clula por accin del fenol y el calor. Las
bacterias cido%alcool resistentes no pueden ser
clasi)cados seg&n la tincin de !ram, la cual es la tcnica
ms com&n en la microbiologa contempornea.
Seg&n el libro de 1.C234.3L3!56 ,- L64326732.3 8"9:;<.
-ste procedimiento es necesario debido a que los miembros
del genero 1.C2346C7-2.G1. 8Hue generalmente son
acidorresistentes<. (orque estas poseen una concentracin
de elevada de material graso en su citoplasma.
Seg&n C*2.S7.6I !261 8"##;< .,escubri la tensin gram
por accidente mientras trataba de te'ir especmenes de
biopsias para poder diferenciar los microorganismos pero
su tcnica tena una gran desventa+a porque algunas si se
podan observar con facilidad mientras que otras no se
vean en absoluto.
IV. MATERIALES Y MTODOS:
a) Materiales.
1ucosa labial
Sarro dentario
6zul de metileno
Safranina
0ucsina bsica
Cristal violeta
-osina 8col. 6cido<
0ucsina acida
Jioleta de genciana
*emateina 8col. 4sica<
Lugol
6lcool
6lcool acetona
Kilol
6ceite de cedro
6gua destilada
Laminas y laminillas
1ecero
6sa de Eoll
1icroscopio compuesto
b) Mt!"!s. L!s #t!"!s $%e %tili&a#!s e'
este (e$%e)! e*(eri#e't! s!':
-=perimentacin.
3bservacin.
+) ,r!+e"i#ie't!.
C. -. C!l!ra+i.' si#(le
2ecoleccin de la muestra/ acer un raspado de mucosa labial
con una lmina portaob+etos.
2ealizar un frontis o e=tensin de la muestra en una lmina
portaob+eto
0i+ar la muestra al medio ambiente o con la ayuda de un
mecero a calor moderado
Cubrir la muestra con un colorante8azul metileno y verde
malaquita<de uno a cinco minutos
Lavar con agua corriente a corro dbil
Secar a calor moderado o medio ambiente
Colocar una gota de aceite de cedro en la e=tensin coloreada y
observar en el microscopio con los ob+etivos de "A= y $A=
3bservar a mediano y a mayor aumento8ob+etivo de inmersin
-squematizar
C. / C!l!ra+i.' "!ble
2ecoleccin de la muestra/ acer un raspado de mucosa labial
con una lmina portaob+etos.
2ealizar un frontis o e=tensin de la muestra en una lmina
portaob+eto
0i+ar la muestra en alcool o con la ayuda de un mecero a
calor moderado al medio ambiente
Colorear con emateina 8colorante bsico< de tres a cinco
minutos
Colorear el preparado en agua destilado de uno a dos minutos.
Colorear con eosina8colorante acida< de C a "A min
Lavar en agua de ca'o.
Sacar a medio ambiente y observar a mediano y gran
aumento8ob+etivo de inmersin<
esquematizar
C. 0 +!l!ra+i!'es "e 1ra#
2ecolectar la sustancia e=amen 8sarro dentario pus o esputo< en
un placa (etri.
Con una asa Eoll esterilizado el calor tomar una peque'a
porcin de la sustancia e=amen y realizar una frontis en una
lmina porta ob+eto.
0i+arlo al calor moderado.
6gregar violeta cristal asta cubrir el preparado y de+arlo en
reposo por espacio de uno a dos minutos.
-liminar el e=ceso del colorante, sin lavar la lmina.
Cubrir con Lugol durante un minuto.
Lavar suavemente con agua destilada.
,ecolorar con alcool acetona 8#AB de alcool y >A B de
acetona< para que no desprenda mas colorante.
Lavar el preparado en agua destilada.
6'adir o safranina y de+arlo en reposo por espacio de ;A a ?A
segundos asta eliminar el colorante.
Lavar el preparado en agua destilada.
Secar el preparado al medio ambiente o al calor moderado
Luego observar con ob+eto de inmersin de "AA=%$A= e
identi)car los tipos de bacterias8cocos, estreptococos,
diplococos, bacilos<
7e'ido de color violeta los gran positiva y color rosado la gran
negativa
V. RESULTADOS:
VI. DISCUSION:
Los resultados sobre un estudio de !ram positiva
o negativa es realmente importante para el
diagnostico y buen tratamiento de la patologa
relacionada microorganismos es necesario saber
cmo inLuyen en las manifestaciones clnicas las
diferencias e=istentes entre la pared celular de las
bacterias !ram positivas y !ram negativas en su
deteccin y en el tratamiento. (orque e=isten
componentes de la pared celular que contribuyen
a la virulencia de las bacterias protegindolas de
las respuestas inmunitarias. -n el laboratorio se
deseara eliminar de forma selectiva las bacterias
!ram positivas de una mezcla de bacterias !ram
positivas y !ram negativas. La tincin de !ram no
es una prueba )able de tincin de bacterias en
medios de cultivo con escasos nutrientes 8p. e+.,
cultivos vie+os o en fase estacionaria< o tratados
con antibiticos debido a la degradacin del
peptidoglicano por parte de estos frmacos.
VII. CONCLUCION:
VIII. RE2ERENCIAS BIBLIO3RA2ICAS:
16I22.HG-, J.M J3.L-I6S, 2. Libro de manual de
laboratorio de, microbiologa general.(!.">9
J.LL-.
C."9##.4.3L3!.6.:ed.1e=ico..I7-261-2.C6I6
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farmacuticas, >N edicin, -d. -lsevier -spa'a, >AA$.
426, S*6O P6CQ L "9:;M profesor de 4iologa .Gniversidad
estatal de California en 0ullerton .libro .1.C234.3L3!56 ,-
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>;C.
!-32!- 6. O.S72-.C*R16K ,. L-C*716I 8"9#9<
(26C7.C6S ,- L64326732.3 -I 1.C234.3L3!56 .>S
-dicin. -d. L.1GS6, (g. >C>.
I4. CUESTIONARIO:
-. De5'ir $%e es %'a +!l!ra+i.' si#(le6
"!ble 7 "i8ere'+ial.
C!l!ra+i.' "i8ere'+ial:
-s una tcnica de coloracin que se emplea con la )nalidad de
poder diferenciar sus caractersticas morfolgicas, que permiten
distinguir tipos de microorganismos.
C!l!ra+i.' Si#(le:
-sta es otra tcnica de coloracin, en la que solo se usa un
colorante. -ste tipo de tincin es bsicamente para diferenciar
13203L3!56 y organizacin celular.
C!l!ra+i.' "!ble:
Cuando la muestra se agrega varios colorantes
/. E'%#erar tres +!l!ra'tes 9+i"!s 7 tres
+!l!ra'tes b9si+!s.
C!l!ra'tes b9si+!s. Como por e+emplo.
azul de metileno.
-ntre los colorantes bsicos, los ms empleados son/ tionina, azul de toluidina, azul de
metileno, fucsina, violeta cristal, violeta de genciana, verde metilo, safranina y verde de
malaquita. -ntre los cidos podemos citar/ naran+a !, cido
pcrico, fucsina cida y eosina.
Colorantes Fcidos -ntre los colorantes bsicos, los ms empleados son/ tionina, azul
de toluidina, azul de
metileno, fucsina, violeta cristal, violeta de genciana, verde metilo, safranina y verde de
#ala$%ita. E'tre l!s 9+i"!s (!"e#!s +itar: 'ara':a 36 9+i"! (;+ri+!6 8%+si'a 9+i"a 7
e!si'a.
0ucsina cida
6zul de anilina
-osina
Iaran+a !
0. E*(li$%e +%9l es la "i8ere'+ia e'tre
+!l!ra'te 9+i"! 7 b9si+!.
<. E*(li+ar el 8%'"a#e't! "e la +!l!ra+i.'
1ra#.
Ti'+i.' "e 3ra#.:
Gtiliza varios colorantes 8cristal violeta "m, Todo "m, lavado con
alcool, Safranina ;A seg.<
Ti'+i.' "e 3ra#.:
,ividida en !ram. (ositivo y !ram. Iegativo, en el caso de los
!ram. 8U< la muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta
)+ada en su estructura determina la presencia de la misma puesto
que )+ en su estructura el cristal violeta.
T en el gran 8%< utilizamos salmonella identi)cada por la presencia
de mucas estructura un poco triangulares de color ro+o.
-n la muestra de la prctica anterior ; eran gran positivo por su
coloracin morada.
=. >%e 8%'+i.' +%#(le el l%1!l e' la
+!l!ra+i.' 1ra#.
Colorante acida Colorante bsico
Son aquellas que tiene a)nidad
especial por colorear la
cromatina nuclear, llamadas por
esto colorantes nucleares. tiene
una o ms cargas positivas
son aquellos con a)nidad
especial por colorear el
citoplasma por lo que se les
llama colorante
citoplasmtico ,llevan una carga
negativa
L a accin del lugol en esta coloracin es conseguir la mayor
)+acin de la violeta por los grmenes. !ram.U por unin de los
colorantes con el yodo del lugar.