Centro Bachillerato Tecnolgico

Industria y de Servicios N 103

Francisco Javier Mina

Prctica: Deteccin de Salmonella

Submdulo: Microbiologa II













INTRODUCCIN
Los miembros del gnero Salmonella han sido muy estudiados como patgenos
cuando se encuentran presentes en los alimentos. El control de este
microorganismo, tanto por parte de las autoridades sanitarias, como en las plantas
procesadoras de alimentos, depende en cierta medida del mtodo analtico
utilizado para su deteccin.
Este microorganismo fue inicialmente identificado en muestras clnicas y los
mtodos empleados para estos casos se adaptaron posteriormente para su
deteccin en alimentos. Las modificaciones a los mtodos consideraron dos
aspectos principales, el primero es el debilitamiento o dao a las clulas
bacterianas presentes en un alimento, debido al proceso a que est sujeto (por
ejemplo: tratamiento trmico, secado, etc.) y segundo, la variabilidad inherente a la
naturaleza del producto bajo estudio.

FUNDAMENTO
Para diversos alimentos existen diferentes protocolos para el aislamiento de
Salmonella, todos ellos son
esencialmente similares en principio y emplean las etapas de preenriquecimiento,
enriquecimiento selectivo,
aislamiento en medios de cultivo selectivos y diferenciales, identificacin
bioqumica y confirmacin serolgica de los microorganismos.

La presente tcnica para la deteccin de Salmonella en alimentos, describe un
esquema general que consiste de
5 pasos bsicos:
Preenriquecimiento, es el paso donde la muestra es enriquecida en un
medio nutritivo no selectivo, que permite restaurar las clulas de Salmonella
daadas a una condicin fisiolgica estable.
Enriquecimiento selectivo, empleado con el propsito de incrementar las
poblaciones de Salmonella e inhibir otros organismos presentes en la
muestra.
Seleccin en medios slidos, en este paso se utilizan medios selectivos
que restringen el crecimiento de otros
gneros diferentes a Salmonella y permite el reconocimiento visual de
colonias sospechosas.
Identificacin bioqumica, este paso permite la identificacin gnerica de
los cultivos de Salmonella y la
eliminacin de cultivos sospechosos falsos.
Serotipificacin, es una tcnica serolgica que permite la identificacin
especfica de un cultivo.
DETECCIN DE SALMONELLA























NOM 114
Pre enriquecimiento
Pesar 25g de
muestra
Transferir
muestra
Estriar en
agar XLD
Tomar
muestra
Transferir a
tde con caldo
tetrationato
Tomar 1ml
de muestra
Enriquecimiento
Incubar
Aislamiento
Identificacin
bioqumica
Incubar
Tomar
muestra
Tomar
muestra
Tomar
muestra
Estriar en
agar VB
Estriar en agar
entrico
HeHoen
Estriar en
agar SS
Tomar
muestra
Estriar en
agar Sulfito y
bismuto
Incubar
Tomar
muestra
Sembrar en
agar TSI
Tomar
muestra
Sembrar en
agar LIA
Incubar
Pruebas
complementarias
Sembrar en
agar Citrato
Simmons
Tomar
muestra
Incubar

























Tomar
muestra
Sembrar en
medio SIM
Incubar
Color
azul?
Positivo
Negativo
Movilidad
NO
SI
Positivo
Negativo
NO
SI
Crecimiento
en puncin?
Prod. H2S
Color
negro?
Positivo SI
Produccin
de indol
Anillo
rojo?
SI
Positivo
Inocular MR-
VP
Incubar
Prueba VP
Rojo
ladrillo?
NO
Negativo
SI
Positivo
Transferir 1ml de
cultivo a t.d.e.
Adicionar .6ml
de alfanaftol
Adicionar .2ml
de KOH 40%
Agregar
cristales de
creatinina

























Negativo
NO
Negativo NO
Prueba RM
Inocular
MR-VP
Tomar
muestra
Agregar rojo
de metilo
Rojo?
Negativo
NO
Positivo
SI
Tomar
muestra
Inocular en
Caldo Urea
Produccin
de gas?
Negativo
NO
Positivo
SI

RESULTADOS:
Se obtuvo el aislamiento de dicho microorganismo en cada uno de los medios,
unos medios estaban aislados de manera correcta ya que se apreciaba la
estructura de las colonias que ente crecieron y en otros medios aislados de forma
que no se lograba apreciar su forma individual.
Se obtuvo un frotis en el cual se observ que la Salmonella es un bacilo Gram
Negativo.
OBSERVACIONES:
El agua peptonada es de un color amarillo paja, no hubo cambio de color en ella
despus de su incubamiento, hubo presencia de animales no deseados tales
como los gusanos y el olor de este era desagradable, un olor a podrido.
El tubo que contena Caldo Base de Tetrationato era lechoso, despus de un
tiempo este sedimentaba en lo profundo del tubo, despus de que este se
incubara, no hubo alteracin alguna en el.
Los agares (XLD, Sulfito Bismuto, Salmonella Shigella y Verde Brillante) no
sufrieron alteracin en el momento de la siembra, pero a estos se les observaba
unas pequeas burbujas de las cuales se desconoca su origen.
Despus del tiempo de incubacin los agares sufrieron una alteracin en su color
adems del crecimiento bacteriano en ellas.
Observaciones: Debido a que las colonias se
encontraban muy juntas, no se pudo apreciar
muy bien la forma de estas; las colonias que
estn un poco separadas, nos dimos cuenta
que su forma era irregular y un poco elevada
y algunas de estas eran filamentosas, su
borde se encontraba de diferentes formas,
ondulado, lobulado y algunas enteras, hay 3
colores que se encuentran en este Agar que
son el blanco, negro y un poco anaranjado, su
consistencia era suave y viscosa, unas de las
colonias eran traslcidas y otras se
apreciaban muy brillantes.



Observaciones: Algunas de las colonias tienen
forma irregular y otras circulares, debido a esto
nos damos cuenta que su borde en entero y
ondulado, algunas de estas estaban un poco
elevadas y otras convexas, se encontraban de
color blanco y marrn, su aspecto era seco y su
consistencia membranosa.



Observaciones: En este agar existen
colonias de diferentes formas, irregulares,
puntiforme y circulares, algunas eran planas
y otras un poco elevadas, el borde de estas
era ondulado y entero, su color era blando y
algunas medio anaranjadas, su aspecto se
sentia humedo y granuloso, su consistencia
suave y viscosa y la luz reflejada en esta era
brillante y un poco opacas.



Observaciones: En este fue donde hubo menos
crecimiento y las colonias se encontraban un
poco mas aisladas, hubo de diferentes colores,
marrn, negro, blanco y unas de una tonalidad
un poco verdosa, estas eran irregulares,
puntiformes y circulares completamente planas,
su aspecto era hmedo, su consitencia era
viscosa, completamente opacas.



BIBLIOGRAFA
http://www.bidihmujer.salud.gob.mx/documentos/leyes/NOM-114-SSA1-
1994%20determinacion%20salmonella%20en%20alimentos.pdf

http://www.sag.cl/sites/default/files/it-lab-29-v01.pdf

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/salmonellainfections.html

NOM-114-SSA1-1994