Bioqumica Laboratorio # 4 DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS Y DE AMINOCIDOS EN ALIMENTOS
Profesor: anel adames
Integrantes: Marianela ojo ALCIBIADES CASAS GREGORIA CAMARENA
V cuatrimestre
Introduccin
El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una reaccin qumica sino a la absorcin o fijacin de yodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo cual solo ocurre en frio. Como reactivo se usa una solucin denominada lugol que contiene yodo y yodo potsico. Como los polisacridos no tienen poder reductor, la reaccin de Fehling da negativa. La prueba del almidn es una prueba muy sencilla pero que todava se utiliza para determinar la presencia de almidn en algunos alimentos. La prueba se basa en una reaccin fsica y no qumica, en la cual el almidn reacciona con yodo para formar un complejo de color azul intenso. Bajo las mismas condiciones, el glucgeno da una coloracin caf. Los azcares reductores son aquellos azcares que poseen su grupo carbonilo (grupo funcional) intacto, y que a travs del mismo pueden reaccionar con otras especies. El reactivo de Fehling es una disolucin que se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores. Sirve para demostrar la presencia de glucosa, as como para detectar derivados de esta tales como la sacarosa o la fructosa. El ensayo con el reactivo de Fehling se fundamenta en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. El reactivo de Fehling contiene sulfato de cobre y tiene la particularidad de cambiar de color, de azul a rojo, cuando el grupo carbonilo del azcar se oxida a carboxilo, reduciendo el Cu II a Cu I. Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70 C o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. La coagulacin de las protenas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalizacin por los agentes indicados, que al actuar sobre la protena la desordenan por destruccin de sus estructuras terciaria y secundaria.
DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS Y DE AMINOCIDOS EN ALIMENTOS
I. Determinacin de almidn y glucosa en alimentos Reactivos 1. Reactivo de lugol 2. Reactivo de Fehling 3. Almidn 4. Solucin de glucosa al 2% 5. Un trozo de pan 6. Una papa 7. Un pltano 8. Una manzana 9. Jugo de zanahoria, de durazno y de uva 10. Agua destilada 11. Azcar de mesa (comn)
Materiales 1. Pipeta 2. Esptula 3. Gradilla 4. Tubos de ensayo 5. Mortero y pistilo 6. Vasos de precipitados de 50 y de 300 ml. 7. Gotero 8. Mechero 9. Trpode 10. Malla de asbesto
Procedimiento 1. Prepare una solucin disolviendo 0.5 g de almidn en 10.0 ml. de agua; para esto utilice un vaso de precipitado de 50 ml. Tome 5.0 ml de La solucin por medio de una pipeta y aade ti-es gotas de Lugol, por medio de un gotero. Observe el cambio de coloracin de La solucin. Este tubo de ensayo debe ser colocado en la gradilla y se debe utilizar como muestra patrn de referencia. 2. Haga un pur con la papa, el pltano o el pan, partiendo o cortando pequeos trozos y Luego triturando; se puede utilizar un mortero para esto. 3. Para cada muestra utilice un tubo de ensayo diferente, aada 2.0 ml de agua destilada y agite. Luego adicione tres gotas de LugoL y agite. Compare La coloracin obtenida para cada alimento con La muestra patrn. Registre los resultados. 4. Aliste un bao Mara y ajuste La temperatura a 50C. Adicione 2.0 ml de la solucin de glucosa y adicione 2.0 ml de reactivo de Fehling (1.0 ml de reactivo de Fehling A y 1.0 ml de B). Caliente durante tres minutos. Observe Los cambios que se producen y guarde esta muestra como patrn 5. Nuevamente, para cada muestra utilice un tubo de ensayo diferente, aada 2.0 ml de agua destilada y agite. A cada tubo de ensayo adicione 2.0 ml de reactivo de Fehling (1.0 ml de A y 1.0 ml de B). Caliente en el bao Mara durante cinco minutos. Registre los cambios y compare con la muestra patrn.
Anlisis 1. Indique los alimentos que contienen almidn y los que contienen glucosa. 2. Es posible ordenar los alimentos con base en su contenido de almidn?
II.- Identificacin de algunos aminocidos presentes en alimentos 1. Huevo 2. Queso 3. Leche 4. Una manzana 5. Etanol 6. cido clorhdrico concentrado 7. Solucin de hidrxido de sodio al 10% 8. Solucin de sulfato de cobre al 1.0% 9. Solucin de acetato de plomo
Materiales 1. Diez tubos de ensayo 2. Gradilla 3. Dos vasos de precipitado de 250 ml 4. Trozo de tela 5. Embudo 6. Mechero de gas o de alcohol 7. Pinza para tubo de ensayo 8. Vidrio de reloj 9. Pipeta
Procedimiento 1. Realice un orificio pequeo en la cscara de un huevo y separe cuidadosamente la clara en un vaso de precipitado. Agite La clara durante un tiempo y agregue dos veces su volumen de agua. 2. Filtre La mezcla para as obtener una solucin de albmina homognea. Tome siete tubos de ensayo y mrquelos como A, B, C, D, E, y F y agregue 2.0 ml de esta mezcla en cada tubo. 3. Tome el tubo A y calintelo suavemente en la llama del mechero. Registre sus observaciones. Tubo A desnaturalizada la albumina al calentarse se torna blanca 4. Tome los tubos B, C, D y E y adicione 2.0 ml de etanol al B, 1.0 ml de hidrxido de sodio al 10% al C; 1.0 ml de cido clorhdrico concentrado al D; y 1.0 de cido ntrico concentrado al E. Registre Las observaciones para cada tubo Tubo B etanol se forma un precipitado Tubo C NaOH no hubo cambios Tubo D HCL Rx rpidamente y se torn Blanco Tubo E HNO3 Rx rpidamente y se torn Blanco con amarillo 5. Al tubo de ensayo C agregue nuevamente 1.0 ml de la solucin de hidrxido de sodio al 10% (se ha agregado en total 2.0 ml de hidrxido de sodio). Mezcle suavemente y aada dos gotas de solucin de sulfato de cobre al 1%. Registre sus observaciones. Se torn morado con burbujas en la parte superior 6. Al tubo de ensayo E adicione unas cuantas gotas de la solucin de hidrxido de sodio al 10%. Registre sus observaciones. Se puso ms caliente con ms burbujas como huevo sancochado y abajo amarillo con grnulos blancos. Ocurre una reaccin de coagulacin 7. Tome el tubo de ensayo F y aada 2.0 ml de la solucin de acetato de plomo y 1.0 ml de la solucin de hidrxido de sodio al 10%. Caliente hasta ebullicin. Observe el color del precipitado formado y su apariencia general. Despus de calentar se torn chocolate oscuro y una sustancia blanca en el fondo 8. En un vidrio de reloj coloca un trozo de queso y agregue unas gotas de cido ntrico concentrado. Registre sus observaciones. El queso qued como un plstico o endureci 9. Repita el procedimiento anterior con un trozo de manzana en lugar del queso. Se oxida tornndose chocolate 10. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de leche y aada 1.0 ml de cido ntrico concentrado. Caliente suavemente. Registre sus observaciones. Rx rpidamente amillo al fondo y blanco en la superficie se forma queso
Anlisis 1. Qu comportamiento comn observa para Los tubos A, B, C, D y E? Tubo A desnaturalizada la albumina al calentarse se torna blanca Tubo B etanol se forma un precipitado Tubo C NaOH no hubo cambios Tubo D HCL Rx rpidamente y se torn Blanco Tubo E HNO3 Rx rpidamente y se torn Blanco con amarillo 2. Cul es la finalidad de la prueba del paso cinco? La finalidad del paso 5 es identificar proteinas 3. Qu nombre recibe la prueba efectuada en el tubo de ensayo E? Xantoproteica 4. Qu tipo de aminocidos se puede identificar mediante La prueba con acetato de plomo? Cistena y metionina en mayor proporcin en la albumina que son los aminocidos azufrados naturales principales. Esta prueba detecta el azufre de los aminocidos Identifica aminocidos AZUFRADOS 5. Qu puede identificar con las ltimas tres pruebas? Las tres pruebas son para identificar aminocidos
Conclusin El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido no a una reaccin qumica sino a la absorcin o fijacin de yodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo cual solo ocurre en frio. Como reactivo se usa una solucin denominada lugol que contiene yodo y yodo potsico. Como los polisacridos no tienen poder reductor, la reaccin de Fehling da negativa. Las cadenas de protenas que hay en la clara de huevo se encuentran enrolladas adoptando una forma esfrica. Se denominan protenas globulares. Al frer o en este caso someter a calor la solucin de albmina de huevo, el calor hace que las cadenas de protena se desenrollen y se formen enlaces que unen unas cadenas con otras. Asimismo al aadir a esta albmina de huevo a cido ntrico (HNO3) o hidrxido de sodio (NaOH) ocurre la misma reaccin de coagulacin pero en diferentes proporciones dependiendo del mtodo utilizado y del reactivo aadido. Este cambio de estructura da a la clara de huevo la consistencia y color que se observa en las muestras de las soluciones de la albumina de huevo. Este proceso que se conoce con el nombre de desnaturalizacin