UNIVERSIDAD AUTONOMA DE ZACATECAS

Francisco Garca Salinas

AREA DE CIENCIAS QUIMICAS

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUIMICAS

PROGRAMA DE QUIMICO FARMACEUTICO BIOLOGO

LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA

DOCENTE: Araceli

INTEGRANTES DE EQUIPO:
Gwendolyne Mndez Frausto
Edwin Antonio Reyes Oliva
Laura Monserrat Saucedo Herrera
Flor de Mara Torres Jurez

Nombre de la prctica: Determinacin de glucosa (Mtodo glucosa oxidasa/peroxidasa)
OBJETIVO:
Realizar la determinacin de glucosa en suero por medio de una tcnica enzimtica-colorimtrica,
para la valoracin de las alteraciones del metabolismo de los carbohidratos.
INTRODUCCIN:
Clsicamente se han clasificado los mtodos de determinacin de la glucosa en tres apartados
diferentes:
Mtodos que dependen del poder reductor de la glucosa (mtodos reductores).
Mtodos qumicos.
Mtodos enzimticos.
Actualmente podemos decir que los primeros grupos se encuentran prcticamente obsoletos, por
lo tanto no nos referiremos a ellos.
Los mtodos enzimticos consiguen una gran especificidad, ya que utilizan enzimas purificadas
que actan selectivamente sobre la molcula de glucosa, no interfiriendo el resto de los hidratos
de carbono o derivados que se encuentran fisiolgicamente en los lquidos biolgicos.
Mtodo de la glucosa oxidasa
Es un mtodo especfico para la glucosa, pues la enzima glucosaoxidasa (GOD) acta oxidando a la
beta-D-glucosa, con una mnima accin sobre la alfa-D-glucosa, la cual est presente en las
soluciones en equilibrio con la forma beta. Habitualmente el punto de equilibrio se obtiene a
travs de mutarrotacin y se alcanza cuando existe un 36 por 100 en la forma alfa y un 64 por 100
en la forma beta. Para lograr una oxidacin completa de la glucosa es necesario que sta sea
transformada completamente en la forma beta, es decir, debe producirse una mutarrotacin total
de alfa a beta durante el periodo de incubacin la velocidad con la que se produce la
mutarrotacin est afectada por el pH, el aumento de temperatura y, ms especficamente, por
una enzima, la mutarrotasa. Algunas preparaciones comerciales de glucosa oxidasa contienen la
enzima glucomutarrotasa, que acelera especficamente este paso.
La reaccin tiene dos fases, en la primera la GOD oxida a la beta-D-glucosa:

La segunda fase se basa en la utilizacin de un sistema enzimtico conjugado, en el cual el H2O2
formado se acopla a travs de una peroxidasa (POD) a un receptor cromognico (aceptor de
oxigeno) y permite la medida fotomtrica directa de la glucosa.

Como receptores cromognicos se han utilizado la orto-toluidina, que da lugar a un cromgeno
rojo, etc.
Esta segunda fase es menos especfica porque hay muchas sustancias reductoras que compiten
con el aceptor de oxgeno, que por mtodos polarogrficos nos miden la velocidad de consumo se
oxgeno, el cual sera directamente proporcional a la cantidad de glucosa de la muestra,
permitiendo la determinacin directa de la glucosa.

MATERIAL:
Material biolgico
3 ml de sangre perifrica en ayuno sin anticoagulante

Reactivos
Reactivo R de color rosa para glucosa
Patrn de glucosa concentracin 5.56 mmol/L 100 mg/dl
Material para puncin sangunea
1 jeringa de 3 ml
1 tubo 13X100 mm con tapn
Gradilla
Torundas

Material para el desarrollo de la prctica
2 puntillas amarillas
Celdas para espectrofotmetro
3 tubos 12X75
1 tubo eppendorf
1 pipeta pasteur
1 aspirador
Gradilla

Equipo
Centrfuga
Espectrofotmetro para lecturas de 500 nm
Micropipeta para 6l y 600l
Incubadora a 37C
Cronmetro



PROCEDIMIENTO REALIZADO:
Se extrajo 3 ml de sangre perifrica en ayunas y fue colocada en un tubo 13X100 mm sin
anticoagulante y rotular.
Se centrifug los tubos a 3000 rpm durante 5 minutos y el suero se separ.
Se marcaron 3 tubos 12X75 mm como blanco, patrn, muestra.
El reactivo se esper a que estuviera a temperatura ambiente.
Se agreg lo siguiente en cada uno de los tubos:

Blanco Patrn Muestra
Patrn ------- 10l -------
Muestra ------- ------ 10l
Reactivo 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml



Se agit e incub durante 5 minutos a una temperatura de 37C.
Se ley la absorbancia del patrn y la muestra en el espectrofotmetro a una longitud de
onda 500 nm.


CLCULOS:
C
muestra
(mg/dl)=(absorbancia de la muestra/ absorbancia del patrn) X100 mg/dl
C
muestra
(mg/dl)=(0.096/ 0.138) X100 mg/dl
C
muestra
(mg/dl)= 69.56 mg/dl

RESULTADOS:
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA
Nombre del paciente: Laura Monserrat Saucedo Herrera
Sexo: Femenino Edad: 21
Fecha: 11/ febrero / 13
Mdico: A quien corresponda
PARMETRO RESULTADO VALORES DE REFERENCIA
Glucosa en ayuno 69.56 mg/dl 70-110 mg/dl

INTERPRETACIN:
En la prueba realizada al paciente se puede ver que los niveles de glucosa estn por debajo de los
valores de referencia pero se tomo como un resultado normal porque la diferencia es muy
pequea.
CONCLUSIONES:
Durante esta prctica realizamos la determinacin de glucosa en la muestra de sangre perifrica
de un paciente haciendo uso de un mtodo enzimtico oxidasa/peroxidasa para poder determinar
el metabolismo de carbohidratos y as lograr un diagnstico acerca de una patologa.
BIBLIOGRAFA CONSULTADA:
Daz Portillo J., Fernndez del Barrio MT., Paredes Salido F. Aspectos bsicos de bioqumica clnica.
(1997). Ediciones Daz de Santos. 293p.














PERFIL DE LIPIDOS
Objetivo:
Realizar la determinacin en suero de un perfil de lpidos el cual consiste en
colesterol total (por el mtodo colesterol oxidasa/peroxidasa), colesterol HDL
(por el mtodo por precipitacin con fosfotungato/magnesio), triglicridos
(por el mtodo glicerol fosfato oxidasa peroxidasa y colesterol LDL (por el
mtodo polivinil sulfato/polietilenglicol) para la evaluacin del riesgo
alergnico, as como de otras patologas.
Introduccin:
El perfil lipdico lo constituye la cuantificacin analtica de una serie de
lpidos que son transportados en la sangre por los diferentes tipos de
lipoprotenas plasmticas. La determinacin de estos parmetros es un
procedimiento analtico bsico para el diagnstico y seguimiento de
enfermedades metablicas, primarias o secundarias. Entre estos parmetros
analticos que se pueden determinar estn: el colesterol total, el colesterol
transportado por las LDL, el colesterol transportado por las HDL, los
triglicridos totales, ciertas apoprotenas particulares etc.
El colesterol es una sustancia adiposa que forma parte de las membranas
celulares. El cuerpo produce la mayor parte del colesterol en el hgado. Por
este motivo, los niveles de colesterol estn determinados en gran medida
por la gentica, y el colesterol alto puede ser una caracterstica hereditaria.
Una dieta con alimentos ricos en colesterol, grasas saturadas, grasas trans y
grasa total tambin puede afectar sus niveles de colesterol. La mayor parte
del colesterol presente en su dieta proviene de productos animales, tales
como carnes, grasas lcteas y yema de huevo.
Los niveles de colesterol altos contribuyen a la formacin de placa en los
vasos sanguneos; este proceso se denomina aterosclerosis. La placa de
colesterol dentro de las paredes de los vasos sanguneos hace que estos se
estrechen (enfermedad arterial coronaria), y aumenta su riesgo de ataque
cardaco y derrame cerebral. Es importante que controle sus niveles de
colesterol (perfil o panel lipdico) en forma rutinaria.
El colesterol total es el nivel total de colesterol en la sangre. Un nivel superior
a los 200 mg/dL se considera alto.
El colesterol LDL, o lipoprotenas de baja densidad, tambin se denomina
colesterol malo debido a la relacin comprobada entre los niveles altos de
LDL y la enfermedad cardaca. La meta principal de cualquier programa de
tratamiento para el colesterol es reducir el colesterol LDL. La cantidad de LDL
que debe reducirse depende de sus otros factores de riesgo de enfermedad
cardaca. Por ejemplo, un nivel de LDL de 130 mg/dL es aceptable en una
persona sana que no tiene factores de riesgo de enfermedad cardaca. Sin
embargo, si usted ya tiene una enfermedad cardaca u otros factores de
riesgo significativos como diabetes o enfermedad renal crnica, debe
reducirse su nivel de LDL en la mayor medida posible. Los pacientes
pertenecientes a este grupo de alto riesgo deben tener un nivel de LDL igual
o inferior a 70 mg/dL.
El colesterol HDL, o lipoprotenas de alta densidad, tambin se denomina
colesterol bueno. Se ha demostrado que niveles ms altos de colesterol
HDL reducen el riesgo de enfermedad cardaca. El HDL ayuda a eliminar parte
del colesterol del torrente sanguneo y lo lleva de regreso hacia el hgado. Los
niveles objetivo de HDL son superiores a 40 mg/dL en el caso de los hombres
y superiores a 50 mg/dL en el caso de las mujeres. En el caso de pacientes
con enfermedad cardaca, el nivel de colesterol HDL debe ser el ms alto
posible.
Los triglicridos son partculas de grasa cuyos niveles aumentan en
circunstancias tales como diabetes no controlada y obesidad. Cuando se
bebe demasiada cantidad alcohol y se toman determinados medicamentos,
pueden aumentar los niveles de triglicridos. Los niveles altos de triglicridos
(superiores a 150 mg/dL) significan un mayor riesgo de enfermedad cardaca.
La relacin colesterol total/HDL es un marcador importante de su riesgo de
enfermedad cardaca. En el mejor de los casos, este valor debera ser 3 o
menos.
Procedimiento realizado:
Colesterol total:
Se extrajo la sangre de un paciente y se separ el suero de esta, se rotularon
tres tubos de 12X75 como muestra, blanco y patrn, al tubo rotulado como
patrn se aadieron 10l del patrn ms 1ml de reactivo , al tubo rotulado
como blanco solo se aadieron 1ml de reactivo y al ltimo al tubo rotulado
como muestra se le aadieron 10l de suero y 1ml de reactivo, se agitaron
cada uno de los tubos y se incubaron en una estufa a 37C por 5 min pasado
el tiempo se leyeron las absorbancias en espectrofotmetro a 500nm.
HDL:
Precipitacin
Se tomaron 0.2 ml de suero y se depositaron en un tubo eppendorf al que se
le aadieron 0.5ml de reactivo precipitante, la mezcla fue agitada y incubada
por 10 minutos a temperatura ambiente. Transcurridos los 10 minutos se
prosigui a centrifugar durante 10 minutos a 4000 revoluciones por minuto,
de nueva fue recolectado el sobrenadante en un eppendorf limpio.
Colorimetra
Antes de comenzar con la segunda fase se atempero el reactivo de color a
temperatura ambiente. Se marcaron tres tubos de ensayo con las siguientes
leyendas: blanco, patrn y muestra. Al tubo blanco se le adicionaron 100l de
agua destilada, al tubo estndar se le adicionaron 100l de estndar y a el
tubo muestra se le adicionaron 100l de sobrenadante, por ultimo a cada
tubo se le adiciono 1000l de reactivo de color. Los tres tubos fueron
agitados y se incubaron 30 minutos a 37C. La absorbancia del patrn y la
muestra fueron ledas frente al blanco a una longitud de onda de 500nm.
Triglicridos:
Para comenzar la prctica colocamos los reactivos a temperatura ambiente
para que no hubiera algn tipo de interferencia en los resultados, luego
rotulamos tres tubos de 12X75 como blanco, patrn y muestra
respectivamente, despus aadimos 10 l de patrn y 10 l de muestra
(suero del paciente) al tubo respectivo ya marcado, para realizar las
reacciones adicionamos 1ml de reactivo a cada tubo blanco, patrn y
muestra mezclamos muy bien y pusimos a incubar durante 10 min a 37C en
la estufa, al trmino de este tiempo medimos la absorbancia (A) del patrn y
la muestra a 500 nm contra el blanco de reactivo para as llevar a cabo los
respectivos clculos. El color de la reaccin es estable durante 2 horas.
Clculos:
Colesterol total:
Formula




Sustitucin

HDL
Formula




Sustitucin

Triglicridos:
Formula





Sustitucin

ndice aterognico:
Formula

Sustitucin

Resultados:
Determinacin: Valor de la muestra. Valor normal.
Colesterol total 224mg/dl 140 a 200mg/dl
HDL 18mg/dl <40 a 120 mg/dl
Triglicridos >150 g/dl
LDL
ndice aterognico <3

Interpretacin:
Colesterol total:
Esta relativamente alto ya que el ndice normal es de 200mg/dl y obtuvimos
224.48 podra tener una dieta baja en grasas que provoquen una
estabilizacin en estos valores.
HDL:
El resultado obtenido indica que la paciente se encuentra dentro del rango
de referencia (40 a 120 mg/dl), obteniendo 48.89mg/dl.
Triglicridos:
Con el resultado obtenido de 30.87 mg/dl al res comparado con los valores
de referencia podernos ver que los niveles de triglicridos en el paciente son
normales ya que es considerado que hasta 150 mg/dl es un valor normal.

ndice aterognico:
Este nmero es alto ya que se obtuvo para nuestro paciente de 4.59 lo
normal debera de ser menor a 3, a partir de 4 se considera gran riesgo de
que este desarrollando ateroesclerosis.

Conclusin:
Es importante realizar un lipidograma completo y no simplemente
determinar un nivel de colesterol total dado que cada uno de los distintos
parmetros lipdicos es importante desde el punto de vista clnico. El perfil
lipdico proporciona una gran cantidad de informacin al mdico sobre el
riesgo de enfermedad cardaca y as poder sealar las mejores estrategias de
tratamiento.
Bibliografa:
DOcon Navaza C, Garca-Saavedra MJ, Vicente Garca JC (1999):
Fundamentos y Tcnicas de Anlisis Bioqumico, Anlisis de Muestras
Biolgicas. Editorial Paraninfo, Madrid.
Gonzlez de Buitrago JM, Arilla Ferreiro E, Rodrguez-Sedade M, Snchez
Pozo A (1998): Bioqumica Clnica . Editorial McGraw-Hill.-Interamericana,
Madrid.



















EXAMEN GENERAL DE ORINA
Objetivo:
Realizar el examen fsico, bioqumico y microscpico de la orina, y llevar a cabo la interpretacin
de los resultados obtenidos, como apoyo al diagnstico de patologas urinarias y sistmicas.
Introduccin:
Las caractersticas ms tiles del examen de orina son: lo fcil y rpidamente disponible de la
muestra a analizar, la posibilidad de obtener informacin sobre muchas funciones metablicas
importantes de nuestra fisiologa, y el ser un mtodo de laboratorio simple y rpido. Los
elementos que constituyen la orina son dinmicos y pueden variar con la dieta, actividad,
consumo de medicamentos y otras variables.
Apariencia: se refiere a la claridad o grado de turbidez de la orina. Si bien normalmente es clara, la
orina tambin puede verse turbia debido a precipitacin de cristales (uratos y fosfatos amorfos,
oxalato de calcio o cido rico), la presencia de clulas (bacterias, eritrocitos, leucocitos, cls.
epiteliales, etc.), o la existencia de proteinuria masiva o lipiduria. La presencia de espuma residual
orienta hacia proteinuria importante.
Color: el espectro normal va desde el cristalino al amarillo oscuro, dependiendo especialmente de
su concentracin. Esta coloracin es dada principalmente por el pigmento urocromo.
Olor: el olor caracterstico es sui generis o aromtico (debido a cidos orgnicos voltiles),
dependiendo en algunas ocasiones, al igual que con el color, de alimentos o drogas consumidas.
Este olor se transforma en amoniacal cuando la orina permanece por tiempo prolongado expuesto
al medio ambiente Existen algunos olores de orina que sugieren patologas especficas.
pH
El pH urinario de individuos normales tiene un rango de 4.5 a 8.0, pero en muestras matinales es
levemente cido, con pH de 5.0 a 6.0. Estos valores deben ser interpretados en relacin a la
informacin clnica obtenida del paciente, pues el pH puede variar segn su estado cido-bsico
sanguneo, la funcin renal, la presencia de infeccin urinaria, el tipo de dieta o drogas
consumidas, y el tiempo de obtenida la muestra. Las dietas altamente proteicas acidifican la orina,
en cambio aqullas ricas en vegetales la alcalinizan. El conocimiento de esta variable tiene gran
importancia al momento de identificar los cristales vistos en examen microscpico del sedimento
de orina. La determinacin de pH urinario por reaccin colorimtrica no es lo suficientemente
exacta para ser usada en el diagnstico de acidosis tubular renal, en que deben utilizarse pH-
metros calibrados.
Nitritos
Los nitratos presentes en la orina son convertidos a nitritos por la reduccin enzimtica de
bacterias, especialmente Gram (-). Los nitritos, que normalmente no se encuentran en la orina,
son detectados por la cinta reactiva, sugiriendo as una probable infeccin urinaria. La reaccin
positiva a nitritos debe ser siempre confirmada con urocultivo, pues tiene falsos (+) y (-).
Glucosa
Menos de 0.1% de la glucosa normalmente filtrada por el glomrulo aparece en la orina. Cuando la
glicemia supera el umbral renal de reabsorcin tubular de glucosa, lo cual ocurre entre los 160 a
180 mg/dl, aparece en elevadas cantidades en la orina, y es detectada en la cinta reactiva
mediante la reaccin de glucosa oxidasa. Esta reaccin es especfica para glucosa, no detectando
la presencia de otros azcares reductores, como galactosa y fructosa. Si bien es utilizada
especialmente para diagnosticar o controlar pacientes con diabetes mellitus, la presencia de
glucosuria importante puede no asociarse a cuadros hiperglicmicos, como lo son: tubulopatas,
alteraciones tiroideas y dao del S.N.C.
Cetonas
Su presencia en orina refleja una alteracin en el uso de hidratos de carbono como principal
fuente energtica, requirindose para ello de la utilizacin de grasas corporales. Las principales
causas de cetonuria se relacionan a cuadros con incapacidad para metabolizar (diabetes mellitus),
prdidas aumentadas (vmitos), o inadecuado consumo de carbohidratos (desnutricin, reduccin
de peso). La causa ms frecuente del hallazgo de escasa cantidad de cuerpos cetnicos en la orina,
es el ayuno. De los tres compuestos cetnicos presentes en la orina (hidroxibutirato 78%, cido
acetoactico 20% y acetona 2%), slo el cido acetoactico es adecuadamente detectado por la
cinta reactiva.
Bilirrubina
La bilirrubina que se detecta en la orina es la conjugada, y puede ser el primer indicador de una
enfermedad heptica no detectada. La exposicin a la luz puede degradar esta substancia y
hacerla indetectable.
Urobilingeno
Es un pigmento biliar producto de la degradacin de la bilirrubina conjugada en el intestino, y le da
la coloracin a las heces en forma de urobilina. Es normal que se encuentre en bajas cantidades en
la orina (< 1 mg/dl). Puede estar aumentado en enfermedades hepticas y hemolticas. Su
ausencia en orina puede verse en cuadros colestsicos.
Protenas
Normalmente existen en la orina pequeas cantidades de protenas, ya sea filtradas o secretadas
por la nefrona, no excediendo los 10 mg/ml o 4 mg/m2/hr. La presencia de proteinuria
significativa fuertemente sugiere enfermedad renal, aunque puede no serlo, como ocurre en la
proteinuria ortosttica, la asociada a fiebre, deshidratacin o ejercicios extenuantes, o la
secundaria a hiperproteinemias (proteinuria de Bence Jones). Esta parte de la cinta es altamente
sensible para albmina, pero no para globulinas, hemoglobina o cadenas livianas; cuando se
sospecha este tipo de proteinurias debe realizarse el test de precipitacin con cido sulfasaliclico.
Las equivalencias segn color estn expresadas en el envase comercial, y generalmente
corresponden como sigue: trazas, 5 a 20 mg/dl; 1+: 30 mg/dl; 2+: 100 mg/dl; 3+: 300 mg/dl; 4+: >2
g/dl.
Bilirrubina
La bilirrubina que se detecta en la orina es la conjugada, y puede ser el primer indicador de una
enfermedad heptica no detectada. La exposicin a la luz puede degradar esta substancia y
hacerla indetectable.
Material:
1 frasco de boca ancha
1 probeta de 100ml
1 tubo de ensaye
1 portaobjetos
1 cubreobjetos
1gradilla
Equipo:
Centrifuga
Microscpio.
Reactivos:
Muestra Biolgica de orina.
Tiras reactivasCOMBUR TEST. COBAS 100 FESTS 11374208 Urin/Orina LOT 23051243 IVD, CAD
2010-10 Roche.
Procedimiento
Se colecto la primera orina de la maana en un frasco limpio de boca ancha.
Examen fsico:
Se homogenizo la muestra dando vuelta en crculos y se observo turbidez, sedimento, color y pH.
Examen qumico:
Se aadi del frasco de orina homogenizado a un tubo de ensayo de 13x100 hasta llenarse dos
terceras partes, se introdujo la tira reactiva hasta que las almohadillas se mojaran, y se dejo que
ocurriera la reaccin por 3 minutos y se procedi a leer comparando con la escala de colores de
cada reaccin que viene en la etiqueta del frasco.
Examen microscpico:
De la muestra que se colecto en el tubo de ensayo se centrifugo a 2500 r.p.m durante 5 minutos,
el sobrenadante se decant en la tarja en agua corriente y del sedimento que qued se coloc en
portaobjetos, se coloc encima un cubreobjetos y se observ al microscopio a 10X y despus a
40X.


Resultados

LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
Nombre del Paciente: Edwin Antonio Reyes Oliva.
Sexo: Masculino Edad: 21 aos
Fecha:05 de Marzo del 2013.
Mdico: A quien corresponda.




Examen Fsico:
PARAMETRO RESULTADO VALOR DE
REFERENCIA
Aspecto Transparente Transparente
Sedimento Muy escaso Nulo-escaso
Color Amarillo oro Amarillo
pH 6.0 5-7


Examen qumico:
Parmetro Resultado Valor de Referencia
Glucosa Negativo <0.1%
Protenas Negativo <10 mg/ml
Cuerpos cetnicos Negativo --
Bilirrubinas Negativo --
Nitritos Positivo --
Leucocitos Trazas aprox. 5 por CMA
pH 6.0 5-7
Urobilinogeno 1 < 1 mg/dl
Gravedad especifica 1020gr/ml 1015-1020gr/ml

Examen microscpico:
No se encontr nada en ningn campo estaba completamente limpia.

Interpretacin:
Los nitratos presentes en la orina son convertidos a nitritos por la reduccin enzimtica de
bacterias, especialmente Gram negativas. Los nitritos, que normalmente no se encuentran en la
orina, son detectados por la cinta reactiva, sugiriendo as una probable infeccin urinaria. La
reaccin positiva a nitritos debe ser siempre confirmada con urocultivo, pues tiene falsos positivos
o negativos.
La presencia de urobilinogeno es un pigmento biliar producto de la degradacin de la bilirrubina
conjugada en el intestino, y le da la coloracin a las heces en forma de urobilina. Es normal que se
encuentre en bajas cantidades en la orina (< 1 mg/dl). Puede estar aumentado en enfermedades
hepticas y hemolticas.
En la tira reactiva parece presencia de Leucocitos en el examen microscpico no se observaron,
ambos exmenes son complementos si aparece en la tira se debera de observar en microscopio
cuando esto no ocurre se deber de volver a leer la tira para ver si no hubo interferencias, el
sedimento fue muy escaso as que era probable que no se observaran muchas formas en el
microscopio.
Conclusin:
El anlisis de orina proporciona informacin valiosa para la deteccin, diagnstico diferencial y
valoracin de alteraciones nefro-urolgicas, y, ocasionalmente, puede revelar elementos de
enfermedades sistmicas que transcurren silentes o asintomticas. Su interpretacin data desde
los albores de la medicina, y gracias al desarrollo de tcnicas bioqumicas aplicadas a la orina, la
informacin que aporta, as como su exactitud, estn en continuo crecimiento

Referencias:
http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/manualped/AnalOrina.html
Susan King Strasinger, Marjorie Schaub Di Lorenzo Analisis de orina y liquidos corporales Ed.
Panamericana pag- 115-117
Laurine Graff Analisis de Orina Atlas a color pag: 56-60





















Determinacin de Creatinina
(Mtodo colorimtrico)

Objetivo: Realizar la determinacin de creatinina en suero y orina por medio de una tcnica
colorimtrica, para valorar la depuracin de esta sustancia por los riones, como apoyo al
diagnostico de la insuficiencia renal.

Introduccin:
La creatinina es el producto de degradacin de la creatina. La creatina es un derivado de los
aminocidos arginina, glicina y metionina, el cuerpo la fabrica bsicamente en el hgado, los
riones y el pncreas, y tambin puede obtenerse a travs de una dieta rica en carne o pescado
(podemos encontrar unos 5 gr., de creatina por cada kilo de carne). Se acumula bsicamente en
los msculos esquelticos (aproximadamente un 98 %) en forma de creatina libre unida a una
molcula de fosfato (PCr o fosfocreatina). La PCr sirve como fuente inmediata de energa para la
contraccin muscular para lo que se degrada produciendo creatinina. Esta es llevada a la sangre a
travs riones los cuales la filtran del cuerpo en la orina (puede tambin ser medida en la orina).

Anlisis de creatinina
La creatinina es una molcula de desecho que se genera a partir del metabolismo muscular. La
creatinina proviene de la creatina, una molcula muy importante para la produccin de energa
muscular. Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se convierte en creatinina cada da. La
creatinina se transporta desde los msculos por medio de la sangre hacia el rin. Los riones
filtran la mayora de la creatinina y la eliminan en la orina. Aunque es una sustancia de desecho, la
creatinina es una prueba diagnstica esencial, ya que se ha observado que su concentracin en
sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la funcin renal. Si los riones no funcionan
bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto sta se acumula en la sangre. Por esto la
creatinina puede avisar de una posible disfuncin o insuficiencia renal, incluso antes de que se
presenten sntomas. Por eso la creatinina suele figurar en los anlisis de sangre que se realizan
comnmente. La cantidad de creatinina que aparece en la sangre de un individuo depende de su
masa muscular, por tanto, esta concentracin ser constante para cada individuo si no vara su
masa muscular.
Existen algunos Mtodos de anlisis como:
Reaccin de Jaff modificada (picrato en medio alcalino cintico)
Enzimtico colorimtrico (creatininasa-peroxidasa)
Enzimtico UV (creatininasa GLDH).

Material:
Material biolgico:
Suero
Orina

Reactivos:
Standard: solucin de creatinina 2mg/dl
Acido pcrico: solucin de acido pcrico 41.1
mmol/L
Buffer/PLE: solucin 0.4 % de
polioxietilenlauril ter
Stopper : cido actico al 20%

Material para el desarrollo de la prctica:
3 puntillas amarillas
Celdas para espectrofotmetro
3 tubos 12x 75
Gradilla

Equipo
Espectrofotmetro para lectura de 510nm
Micropipeta de 1 ml
Micropipeta de 10 L
Incubadora a 37C
Cronometro

Procedimiento realizado:
Las muestras biolgicas a analizar fueron obtenidas a partir de un paciente de sexo masculino de
aproximadamente 21 aos de edad. En el procedimiento realizado se analizaron dos muestras de
un mismo paciente la primera proveniente del suero del paciente y la segunda se obtuvo de la
orina del mismo paciente.

Muestra 1
La muestra 1 correspondiente a la orina fue vaciada en una probeta de 50ml esto con el objeto de
calcular su volumen total.

Muestra 2
Se extrajo sangre por medio de un vacutainer en un volumen de 3 ml, esta fue almacenada en un
tubo para posteriormente ser separada por medio de una centrifuga. Se etiquetaron tres tubos
con las siguientes leyendas: patrn, suero y orina. A cada uno de los tubos se le agrego lo
siguiente:

Patrn Muestra 1 (suero) Muestra 2 (orina)
Reactivo 1ml 1ml 1ml
Patrn 0.1ml -------------- ------------
Suero -------- 0.1ml --------------
Orina ------- -------------- 0.1ml
Tabla 1. Volumen dispensado a cada tubo.

A los tres tubos se les agrego 1ml de reactivo de trabajo con la micropipeta y estos fueron
incubados a 37C durante 5 minutos. Pasados los 5 minutos se saco el tubo con la leyenda patrn y
se le agrego 0.1ml de patrn, se ajito y se leyeron las absorbancias a los 30 segundos y a los 2
minutos. Esta metodologa fue utilizada para preparar los tubos suero y orina siguiendo la tabla 1.
El espectrofotmetro se ajusto a cero frente al aire. Despus se leyeron las absorbancias del
patrn y las muestras a 540 nm.



Clculos:

Absorbancias:
A 30 segundos A 2 minutos
Patrn 0.162 0.186
Orina 0.169 0.200
Suero 0.165 0.172


De la formula:

Sustitucin:

Concentracin de creatinina en suero:
De la formula:



Sustitucin:

Concentracin de creatinina en orina:
De la formula:



Sustitucin:

Aclaramiento de Creatinina:
De la formula:



= ml/min

Volumen de orina en 24 horas
463ml ------------8horas
X--------------------24horas
X= 1389ml
Sustitucin:

Resultados:
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA

Nombre del paciente: Edwin Antonio Reyes Oliva
Sexo: Masculino
Edad: 21 aos
Fecha: 12/03/2013
Mdico: A quien corresponda

Tabla 2. Datos generales del paciente.


Determinacin: Valor de la muestra: Valor de referencia:
Concentracin de creatinina en suero

0.6 1.1mg/dl
Concentracin de creatinina en orina

1-1.5g/24h

40 a 180 ml/min
Tabla 3. Resultado vs. Valores de referencia.

Interpretacin:
En base a los resultados obtenidos podemos referir que los valores de creatinina en suero
y en orina se encuentran por debajo de los valores de referencia establecidos

En cuanto al aclaramiento de creatinina sealamos que el paciente excede los valores de
referencia establecidos.
Consideraciones
Antes de realizar el examen se cuestiono al paciente para descarta algunos factores que puedan
interferir con la precisin de este examen. El paciente refiere un bajo consumo bajo de carnes
rojas y haber realizado una mala recoleccin de orina, ya que recolecto la primera de la maana y
esto influyo en los resultados, las indicacin fue que se recolectara solo la orina de 24 hotas.
Conclusiones:
La creatinina es una molcula de desecho que se genera a partir del metabolismo muscular. La
creatinina es una prueba diagnstica esencial, ya que se ha observado que su concentracin en
sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la funcin renal. Si los riones no funcionan
bien, no eliminan bien la creatinina y por lo tanto sta se acumula en la sangre. Por esto la
creatinina puede avisar de una posible disfuncin o insuficiencia renal, incluso antes de que se
presenten sntomas.

Bibliografa:

1. Gaw A. Cowan R.A. OReilly D. Bioquimica Clnica. Segunda edicin, Madrid
Espaa: Harcourt, 1998; 26-28.

2. James L. Bennington. Diccionario enciclopdico del laboratorio clnico. 1era
edicin. Mxico. Ed Medica panamericana. PP-650.


3. http://es.scribd.com/doc/22632492/2-Determinacion-Cuantitativa-de-Creatinina-
en-Suero- ultima consulta lunes 18 de marzo del 2013- 7:20am.


































CIDO RICO

Objetivo:
Realizar la cuantificacin del cido rico en sangre u orina por medio de una tcnica enzimtica
colorimtrica. Como apoyo al diagnstico y seguimiento de diferentes patologas.
Introduccin:
El cido rico es un qumico creado cuando el cuerpo descompone sustancias llamadas purinas, las
cuales se encuentran en algunos alimentos y bebidas, como el hgado, las anchoas, la caballa, las
judas y arvejas secas, y la cerveza.
La mayor parte del cido rico se disuelve en la sangre y viaja a los riones, donde sale a travs de
la orina. Si el cuerpo produce demasiado cido rico o no lo elimina lo suficiente, la persona se
puede enfermar. Los altos niveles de cido rico en el cuerpo se denominan hiperuricemia.
Este examen se hace para ver qu tanto cido rico la persona tiene en la sangre.
Los niveles altos de cido rico pueden deberse a:
Cnceres que se han diseminado (metastsicos)
Trastornos que afectan la mdula sea (trastorno mieloproliferativo)
Dieta rica en purinas
Sndrome de Fanconi
Gota
Rabdomilisis
Sndrome de Lesch-Nyhan
Los niveles bajos de cido rico en la orina pueden deberse a:
Consumo prolongado (crnico) de alcohol
Glomerulonefritis crnica
Intoxicacin con plomo

Investigaciones recientes han demostrado que los mismos cambios en la alimentacin que se
recomiendan para prevenir otras enfermedades crnicas (como diabetes, hipertensin arterial,
hipercolesterolemia, etc), son los mismos que le ayudarn a disminuir sus niveles de cido rico y
por lo tanto prevenir el desarrollo de gota.

De hecho, debido a que la hiperuricemia le puede llevar a estas otras condiciones, obtendr el
doble de beneficios, ya que no solo previene la gota, sino tambin la diabetes,
hipercolesterolemia, etc.

Los siguientes son los principales culpables de aumentar su cido rico:
Sobrepeso
Cerveza y otros licores
Carnes rojas, pescado y mariscos
Fructosa

Procedimiento realizado:
Se rotularon tres tubos de 12X75, uno como blanco, otro como patrn y el ltimo como muestra.
Luego se agregaron 25 l de agua destilada, 25 l de patrn y 25 l de muestra que es el suero del
paciente al tubo respectivo, seguido de esto se agreg 1ml de reactivo en cada uno de los tres
tubos. Se mezcl e incub durante 5 minutos a una temperatura de 37C , al trmino del tiempo se
ley la absorbancia del patrn y de la muestra frente al blanco en una longitud de onda de 520
nm. El color de la reaccin es estable durante 30 minutos.
Clculos:
Formula




Sustitucin

Resultados:
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA
Nombre del paciente: Edwin Antonio Reyes Oliva
Sexo: masculino
Edad: 21 aos
Fecha: 12-03-13
Mdico: A quien corresponda
RESULTADO VALOERS DE REFERENCIA
cido rico 6.057 mg/dl H 3.5- 7.2 mg/dl
M 2.6- 6.0 mg/dl

Interpretacin:
El cido rico y sus sales son el producto final del metabolismo de las purinas por lo tanto
concentraciones altas pueden diagnosticar patologas renales, en el caso de nuestro paciente los
niveles entran dentro de los valores normales lo que se traduce en que el paciente est sano.
Conclusin:
La determinacin de cido rico en orina nos puede proporcionar informacin para un adecuado
diagnstico en una patologa renal principalmente en la gota, este se determina en las
concentraciones en las que se encuentra presente en la orina, a concentraciones muy altas nos
dice que puede estar presente una patologa renal .
Bibliografa:
Landry DW, Bazari H. Approach to the patient with renal disease. In: Goldman L, Schafer AI, eds.
Cecil Medicine. 24th ed. Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2011:chap 116.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003616.htm
http://geosalud.com/Nutricion/dietaacidourico.htm











DETERMINACION DE ALBUMINA (Mtodo colorimtrico)

Objetivo:
Realizar la cuantificacin de albmina en suero, por medio de una tcnica colorimtrica. Para el
diagnstico de enfermedades hepticas.

Introduccin:
La albumina es la protena en mayor proporcin en la sangre, se encuentra en la parte plasmtica
de esta. Es tan importante en el plasma, que su fraccin corresponde entre el 50 y 65 % de las
protenas totales que circulan en l.

Es en consecuencia la presencia de la albmina en la sangre es el principal responsable de que se
mantenga la presin osmtica de sta. Por esta razn, si llega a disminuir por diversas razones, el
lquido que se encuentra en los vasos sanguneos, se desplaza fuera de este e invade el espacio
tisular, haciendo que las personas o los tejidos se vean hinchados, es decir, edematizados.

La albmina es esencial en todos los mecanismos de nutricin de las personas, interviene en el
transporte de lpidos en la sangre, y sirve como molcula transportadora de muchas sustancias.


Importancia de la albmina

La importancia de la albmina en la nutricin se debe a que es una protena que puede ser
fcilmente metabolizada, es decir, encontrndose en muchos alimentos, como puede ser el huevo,
es fcilmente digerida y asimilada.

Como toda protena, compuesta por una secuencia de aminocidos, tanto esenciales como no
esenciales, estos son aportados a la alimentacin del individuo. Por otro lado, si no hay una
ingesta apropiada de protenas, la albmina que se encuentra en los diferentes tejidos del cuerpo,
es catabolizada y sus componentes de construccin, es decir sus aminocidos, en particular los
esenciales, son usados all donde sean necesarios.

Es por tanto, entre otras cosas, una especie de almacn de aminocidos que pueden ser
movilizados desde el hgado, donde es sintetizada, hasta los tejidos perifricos donde su
degradacin o catabolismo puede facilitar materia prima para la sntesis de novo de protenas
necesarias.

La principal responsable de que se mantenga la presin onctica, es decir la presin osmtica
coloide, gracias a que retiene el agua dentro de los vasos sanguneos.

Cuando los valores de albmina descienden por debajo de lo que se entiende por sus valores
normales, disminuye la presin onctica del plasma, y el agua es trasvasada fuera de los vasos
sanguneos, formndose en consecuencia edemas.

Otra de las funciones importantes de la albmina como ya dijimos es la de transportar diferentes
molculas en el torrente sanguneo, tanto orgnicas como inorgnicas. Esto se debe a que posee
diferentes regiones que pueden usarse como "bolsillos" para transportar esas molculas. As, la
albmina resulta el vehculo por medio del cual pueden desplazarse por la sangre entre otras
sustancias o molculas, hormonas adrenales, tiroxina, bilirrubina, calcio, magnesio, grupos hemo,
cidos grasos libres y una variedad bastante grande de medicamentos, entre otros.

Valores normales de Albmina

Los valores normales de albmina en sangre (es comn que se use el trmino: albmina srica, ya
que es precisamente en el suero que resume de una sangre que se dej coagular en tubo de
recoleccin, que se realiza la determinacin de albmina, puede variar ligeramente entre
diferentes poblaciones, sin embargo, se considera que el rango de valores normales es de 3.5 a 5.2
g/dL.

Las causas para que haya hipoalbuminemia en el suero analizado. Entre las ms comunes, estan la
disminucin de la sntesis de albmina por parte del higado (insuficiencia heptica), por
desnutricin muy grave, por prdidas significativamente importantes de albmina, principalmente
en ciertas patologas del rin, como es el caso del sndrome nefrtico.

Tambin se observa en transtornos digestivos con prdida de protena (sangrados como
consecuencia de lceras, con la concomitante anemia), y en el caso de grandes quemaduras. Y
finalmente, tambin puede observarse disminucin de la albmina en la sangre
(hipoalbuminemia) en el caso de infecciones crnicas importantes o en caso de neoplasias.

Su aumento no tiene mayores consideraciones, ya que en el nico caso en que se observa una
elevacin es cuando la persona sufre de niveles variables de deshidratacin, ya sea como
consecuencia de una excesiva prdida de agua por razones ambientales o de ejercicio, o por el
simple hecho de que no haya una ingesta apropiada de lquidos, particularmente agua, en la dieta.
Sin embargo, esta elevacin no tiene ninguna significancia clnica.

Material:
Alcuota de suero congelada de la prctica de protenas totales.
Reactivos: Reactivo de color para albmina SPINREACT Cont: R: 2x250 ml CAL 1X5ml REF:1001291
LOT D206 CAD 2013-07.

Suero patrn de albumina concentracin.
2 puntillas amarillas
Celdas para espectrofotmetro.
3 tubos 13X100
Equipo:
Espectofotomtro para lectura 500nm.
Pipeta graduada de 5mL.
Micropipeta de 10l.
Cronmetro.

Procedimiento Realizado.
1.- Se etiquetaron tres tubos de 13X100 como blanco, muestra y patrn.
2.- Se adicionaron con una micropipeta 5l de patrn y 5l de suero de la muestra al tubo que
correspondan.
3.- Se aadieron 1.0ml de reactivo a cada tubo muestra, patrn y reactivos.
4.- Se mezclaron y se metieron a incubar a 37C por 10 min.
5.- Se calibraron con un blanco a 630nm y se leyeron las Absorbancias del patrn y de la muestra.

Clculos:
(A) Muestra: 270
(A) Patrn: 298
Formula Albmina:
()
()

Sustitucin:

Albumina en muestra
Formula relacin A/G:

(

)
(

) (

)

Prot. Totales: 6.5352g/dl.
Sustitucin:

(

)
(

) (

Resultados:
LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
Nombre del paciente: Gonzalo Ivan Zavala Alvarado
Sexo: Masculino
Fecha: 2-mayo-13 Edad: 22
Mdico: A quien corresponda.

PARAMETRO MUESTRA VALOR DE REFERENCIA
ALBUMINA 4.5302g/dl 3.5-4.8 g/dl
RELACION A/G 2.2594g/dl 1.2-2.2g/dl



Interpretacin:
La concentracin de albmina en sangre est dentro del valor de referencia y la relacin A/G
tambin se encuentra dentro de los valores normales esto indica que a la fecha no hay dao
heptico o algn dao tisular ya que si se encontraran elevadas seria por alguna anomala o dao
heptico.

Conclusiones:
Fisiolgicamente el papel ms claro de la albmina parece ser la capacidad de retener agua
(osmtica). Que el agua en vez de difundir del plasma hacia los tejidos, sea retenida en la corriente
sangunea manteniendo el volumen de sangre necesario.


Bibliografa consultada:
Remington Farmacia La ciencia y prctica de Farmacia 20 Edicin 2do volumen Editorial
Panamericana pp. 1465-1468.
Patio Restrepo J.F Metabolismo Nutricin y Shock 4ta edicin Ed. Panamericana pag. 163-
165.
Pgina visitada el da 06 de Mayo del 2013 disponible en: http://cuidar-su-
salud.blogspot.mx/2009/10/la-albumina.html



















Determinacin de ALT (mtodo de NADH, cintico UV)
Objetivo: Realizar la cuantificacin de la actividad cataltica de la enzima alanina aminotransferasa
(ALT) en suero, por medio de reacciones enzimticas acopladas como apoyo para el diagnostico
diferencial de enfermedades hepticas agudas.
Introduccin:
El anlisis de la enzima alanina aminotransferasa (ALT por sus siglas en ingls) suele formar parte
de los anlisis iniciales para detectar enfermedades hepticas.
El hgado desempea varias funciones importantes: almacena la energa de los alimentos, fabrica
protenas y ayuda a eliminar las toxinas del organismo. El hgado tambin fabrica la bilis, un lquido
que ayuda a hacer la digestin. Las protenas denominadas "enzimas" ayudan al hgado a crear y
descomponer las protenas. La enzima alanina aminotransferasa (o la transaminasa glutmico-
pirvica srica) es una de esas enzimas. Est presente en cantidades particularmente altas en el
hgado y desempea un papel importante en el metabolismo, el proceso por el cual la comida se
transforma en energa.
En general, la enzima alanina transaminasa se encuentra dentro de las clulas del hgado. Pero si el
hgado presenta una inflamacin o una lesin, libera la enzima en el torrente sanguneo. La
medicin de los niveles de ALT en la sangre les brinda a los mdicos informacin importante
acerca del funcionamiento del hgado y les permite saber si est siendo afectado por una
enfermedad, una droga u otro problema.
SIGNIFICADO CLINICO
Las aminotransferasas catalizan la formacin de cido glutmico a partir de 2-oxoglutarato
mediante la transferencia de grupos amino. La ALT se encuentra en diferentes tejidos aunque sus
mayores concentraciones se hallan en hgado y rin.
Se observan concentraciones sricas elevadas de ALT en hepatitis y otras enfermedades hepticas
asociadas con necrosis: mononucleosis infecciosa, colestasis, cirrosis, carcinoma metastsico del
hgado, delirium tremens, as como despus de la administracin de algunos medicamentos como
opiceos, salicilatos o ampicilina. Tambin pueden encontrarse concentraciones sricas elevadas
de ALT en enfermedades del msculo esqueltico o cardiaco.

Procedimiento realizado:
Se disolvi suavemente una tableta de R2 sustrato (NADH, lactato deshidrogenasa y -
Cetoglutarato) en tampn R1 (TRIS pH7.8 y L-Alanina), despus se coloco 1ml de reactivo
preparado en un tubo de 10x75 mm y se incubo por 5minutos a 37C. En el lapso de los 5 minutos
se preparo el espectrofotmetro a una longitud de onda de 340nm y fue ajustado a 0 frente a
agua destilada. Una vez pasados los 5 minutos de incubacin, a la mezcla se le adicionaron 100L
de suero, esta fue mezclada y incubada durante 1 minuto a 37C, pasado el tiempo de incubacin
se prosigui a leer la absorbancia, despus se tomo lectura cada minuto durante tres minutos,
incubando la muestra durante los intervalos de cada lectura.
Clculos:
TIEMPO
(minutos)
A
340nm
0.609
1 0.602
2 0.601
3 0.600
Tabla 2. Absorbancias obtenidas en el enasyo.

1. 0.609-0.600=0.009
2. 0.602-0.600=0.002
3. 0.601-0.600= 0.001
0.012/3=0.004
0.004x1750= 7U/L de ALT
Resultados:
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA

Nombre del paciente: Gwendolyne Mndez Frausto
Sexo: Femenino
Edad: 21 aos
Fecha: 9/04/2013
Mdico: A quien corresponda

Tabla 1. Datos del paciente.


Resultado Valores de referencia a 37c
Actividad cataltica de ALT
7 U/L
Varones: 40U/L
Mujeres: 32U/L
Tabla 3. Resultado vs. Valores de referencia.
Interpretacin: El resultado obtenido (7 U/L) se encuentra dentro de los valores de referencia para
mujeres (32U/L).
Conclusin: En base a los resultados obtenidos podemos asegurar que la paciente no presenta
ninguna afeccin hepatocelular por lo que descartamos alguna hepatopata.


Bibliografa:
1. James L. Bennington. Diccionario enciclopdico del laboratorio clnico. 1era edicin.
Mxico. Ed Medica panamericana. PP-650.
2. http://kidshealth.org/parent/en_espanol/medicos/test_alt_esp.html
3. http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/boletines/boletin-02-alt-gpt.pdf

DETERMINACIN DE AST (Mtodo NADH, Cintico UV)

Objetivo:
Realizar la cuantificacin de la actividad cataltica de la enzima aspartato-aminotransferasa (AST)
en suero, por medio de reacciones enzimticas acopladas. Como apoyo para el diagnstico
diferencial de enfermedades hepticas agudas, para monitorear el progreso y pronstico en
pacientes con enfermedades cardiacas.
Introduccin:
Las transferasas son enzimas que catalizan la transferencia de grupos amino o fosfato de un
compuesto a otro la aspartato aminotransferasa (AST) y la alanina aminotransferasa (ALT) son
importantes en el diagnstico clnico. Catalizan la transferencia del grupo amino del cido
glutmico a cetocidos (oxalactico o pirvico), para formar cidos asprtico y a-cetoglutrico con
AST y alanina y cido a-cetoglutrico con ALT.

Los mtodos colorimtricos se basan en una estimacin de los productos de la reaccin (cidos
oxalactico o pirvico) con dinitrofenilhidrazina, o la estimacin del sustrato (cido a-
cetoglutrico) mediante el acoplamiento con cloruro de 6-benzamido-4-metoxi-m-
toluidinadiazonio.
Los mtodos especrtomtricos se basan en la reaccin del producto piruvato con la
deshidrogenasa lctica y el NADH o del oxalacetao con deshidrogenasa mlica y NADH. La
velocidad de la utilizacin de NADH se mide por la disminucin en la absorbancia a 340 o 360 nm y
es directamente proporcional a la actividad de las transaminasas.

AST es una enzima que se encuentra en altas cantidades en las clulas del hgado, el corazn y los
msculos. Tambin se encuentra en menores cantidades en otros tejidos.

Procedimiento realizado:
Se comenz disolviendo mediante un mezclado suave una tableta de tampn (R2) en el vial del
substrato (R1), luego se obtuvo un mililitro del reactivo y fue colocado en un tubo de 10 x 75 mm
para incubarlo durante 5 minutos a 37C. Mientas estaba en la incubadora se prepar el
espectrofotmetro a una longitud de onda de 340 nm y ajustado a cero frente agua destilada.
Luego en el tubo que estaba en incubacin se adicion 100l se mezcl e inmediatamente se
incub 1 minuto a 35C. Transcurrido el tiempo se ley la absorbancia inicial y despus cada
minuto durante 3 minutos incubando la muestra durante los intervalos de tiempo.
Clculos:
Datos
TIEMPO ABSORBANCIA
Inicial 0.552
1 min 0.503
2 min 0.502
3 min 0.505

Formula
A/min X 1750 = U/L de AST
Sustitucin
0.0176 x 1750 = 30.91 U/L de AST

Resultados:
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA
Nombre del paciente: Gwendolyne Mndez Frausto
Sexo: femenino
Edad: 21 aos
Fecha: 09-04-13
Mdico: A quien corresponda
PARMETRO RESULTADO VALOERS DE REFERENCIA
AST Hombres
25C 30C 37C
Hasta 19 U/L 26 U/L 38 U/L
Mujeres
25C 30C 37C
Hasta 16 U/L 22 U/L 31 U/L


Interpretacin:
Los valores obtenidos en la elaboracin de la prctica fueron ligeramente elevados ya que se
comparo el valor de la muestra que es de 31.91 U/L con el valor de referencia que es de 31 U/L.
Valores con pequea variacin no tienen significancia clnica, los valores pueden variar de un
laboratorio a otro.
Conclusin:
El examen de la AST junto con otras pruebas como ALT, ALP y bilirrubina se realizan para
diagnosticar y vigilar algn tipo de enfermedad heptica.
Un aumento en los valores puede deberse a enfermedades tales como cirrosis, ataque cardiaco,
hemocromatosis, hepatitis, cncer o tumos del hgado, pancreatitis, entre otras.
Tambin es posible ver los niveles de AST elevados en quemaduras profundas, procedimientos
cardiacos, convulsiones o una ciruja.
Estos datos pueden ser ms precisos si se realizan otros anlisis que puedan demostrar algn
defecto o dao en el hgado.
Bibliografa:
R. Gennaro A. Remington farmacia/ Remington the science and practice of pharmacy. Volume 1.
Ed. Mdica Panamericana. 2003. 1388 pg.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003472.htm
Landry DW, Bazari H. In: Goldman L, Schafer AI, eds. Cecil Medicine. 24th ed. Philadelphia, Pa:
Saunders Elsevier; 2011:chap 116.














DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA

Objetivo: Realizar la cuantificacin de la actividad cataltica de la fosfatasa alcalina en suero, por
medio de una tcnica colorimtrica. Como apoyo en el diagnostico de enfermedades de los huesos
y para detectar lesiones que causan obstruccin biliar.
Introduccin:
SIGNIFICADO CLINICO: La fosfatasa alcalina es una enzima presente en casi todos los tejidos del
organismo, siendo particularmente alta en el hueso, el hgado, placenta, intestino y rin. Ambos
incrementos y disminuciones de ALP plasma son de importancia clnicamente.
Causas del aumento de ALP plasmtica: la enfermedad de Paget de los huesos, obstructiva
enfermedad heptica, hepatitis, hepatotoxicidad por frmacos o la osteomalacia.
Causas de la disminucin de plasma ALP: Cretinismo y vitamina C deficiente
El diagnstico clnico no debe realizarse en un nico ensayo, sino que debe integrar los datos
clnicos y de laboratorio.

Factores que influyen en las actividades de ALP en una poblacin normal incluyen ejercicios,
perodos del crecimiento pagado en nios y el embarazo.

PRINCIPIO DEL MTODO: La fosfatasa alcalina (ALP) cataliza la hidrlisis de p-nitrofenilfosfato a pH
10,4, liberador de p-nitrofenol y fosfato, de acuerdo con la siguiente reaccin:

p-nitrofenilfosfato + H2O

p-nitrofenol + Fosfato

La velocidad de formacin de p-nitrofenol, medido fotomtricamente, es proporcional a la
concentracin cataltica de fosfatasa alcalina presente

Procedimiento realizado:
Material biolgico: 3ml de sangre perifrica en un tubo sin anticoagulante (El suero fue separado
lo ms rpido posible esto con la finalidad de evitar hemlisis en nuestras clulas.)
Se disolvi suavemente una tableta de R2 sustrato (p-nitrofenil fosfato (pNPP) 10 mmol / l) en
tampn R1 (Dietanolamina (DEA) pH 10.4, 1 mmol/L, Cloruro de magnesio 0.5 mmol/L), despus
se coloco 1.2 ml de reactivo preparado en un tubo de 10x75 mm y fue incubado por 5minutos a
37C. En el lapso de los 5 minutos se preparo el espectrofotmetro a una longitud de onda de
405nm y fue ajustado a 0 frente a agua destilada. Una vez pasados los 5 minutos de incubacin, a
la mezcla se le adicionaron 20L de suero (muestra), esta fue mezclada y incubada durante 1
minuto a 37C, pasado el tiempo de incubacin se prosigui a leer la absorbancia en una celda de
1cm, despus se tomo lectura cada minuto durante tres minutos, incubando la muestra durante
los intervalos de cada lectura.
Clculos:
TIEMPO
(minutos)
A
405nm
1 0.386
2 0.410
3 0.421
Tabla 1. Absorbancias obtenidas en el enasyo.

1. 0.421-0.410=0.011
2. 0.410-0.386=0.024

(A / min)=0.011+0.024= 0.035/2 =0.0175
U/L=0.0175x3300=57.75 U/L de ALP

Resultados:
LABORATORIO DE BIOQUMICA CLNICA

Nombre del paciente: Marta Ruth Olmos Gmez
Sexo: Femenino
Edad: 21 aos
Fecha: 9/04/2013
Mdico: A quien corresponda

Tabla 2. Datos generales del paciente.


Resultado Valores de referencia a 37c

Actividad cataltica de ALP 57.75 U/L de ALP

Adultos 98-279 U / L

Tabla 3. Resultado vs. Valores de referencia.



Interpretacin:
En base a los resultados obtenidos (57.75 U/L de ALP) y comparndolos con los valores de
referencia (Adultos 98-279 U / L) podemos concluir que la paciente se encuentra por debajo del
rango de referencia establecido.
Conclusin:
La fosfatasa alcalina es una enzima presente en casi todos los tejidos del organismo, siendo
particularmente alta en hueso, hgado, placenta, intestino y rin. El aumento o disminucin de
ALP en plasma son de importancia clnica. En el estudio realizado se obtuvo 57.75 U/L de ALP
valor que se encuentra por debajo del rango establecido para adultos produciendo una sospecha
de una posible deficiencia en vitamina C o Cretinismo.

Sin embargo es necesario integrar los datos clnicos de la paciente y del laboratorio para
proporcionar el diagnostico concluyente.
Bibliografa:
4. James L. Bennington. Diccionario enciclopdico del laboratorio clnico. 1era edicin.
Mxico. Ed Medica panamericana. PP-650.
5. http://www.spinreact.com/files/Inserts/Bioquimica/BEIS44_ALP_LQ_2011.pdf----ltima
consulta 26 de abril del 2013 1:25pm.









CREATIN QUINASA
Objetivo:
Realizar la determinacin de Creatina quinasa en suero, mediante una determinacin cintica para
diagnosticar a un paciente con algn infarto al miocardio o alguna enfermedad cerebrovascular.

Introduccin:
La creatina quinasa (CK), tambin conocida como creatina fosfoquinasa (CPK) o fosfocreatn
quinasa, es una enzima expresada por varios tejidos y tipos celulares.
Funcin biolgica
La creatina quinasa cataliza la produccin de fosfocreatina a travs de la fosforilacin de una
molcula de creatina, consumiendo una molcula de ATP en el proceso. La molcula de ADP
formada para crear una molcula de fosfocreatina se convierte inmediatamente en ATP por las
mitocondrias.
En la miofibrilla, al inicio de la contraccin muscular, la concentracin de ADP aumenta a medida
que disminuye los niveles de ATP. En esta situacin la enzima cataliza la reaccin inversa,
transfiriendo un radical fosforilo al ADP, restaurando rpidamente la concentracin de ATP.
As, la fosfocreatina, por intermedio del ATP, constituye una reserva energtica rpidamente
utilizable por el msculo esqueltico y otros tejidos, como por ejemplo el del cerebro
(metabolismo anaerbico). Sin embargo, la reserva de fosfocreatina no permite este gasto por un
gran perodo de tiempo. Este proceso de obtencin de energa, pasados 10 segundos, da lugar a
otros mecanismos, como la gluclisis anaerobia y por ltimo la respiracin celular, que toma el
relevo despus de unos dos minutos hasta el final del ejercicio muscular.

Estructura qumica e isoformas:
La creatina quinasa (CK) es una enzima dimrica compuesta por dos tipos de subunidades
monomricas, M (muscular) y B (cerebral) que se combinan para formar tres isoenzimas creatina
quinasa distintas: CK-1 (BB), CK-2 (MB) y CK-3 (MM). La principal proporcin de la actividad total
de la CK se encuentra en los msculos esquelticos y sta es predominantemente la isoforma CK-
3. Otros tejidos con unos niveles de creatina quinasa relativamente elevados incluyen el
miocardio, del cual aproximadamente el 40% es la isoforma CK-2, el tracto gastrointestinal y el
cerebro, en el que predomina la isoforma CK-1.
Creatina quinasa cerebral:
La isoforma cerebral de la creatina quinasa (CKBB) es un dmero de las subunidades cerebrales.
Tiene como sustrato natural principal a la creatina, pero tambin a ciclocreatina, glicociamina y N-
etilglicociamina. Usa como cofactores al ADP, ATP, MgADP, MgATP2-, Mg2+, Mn2+ y NaCl.
Creatina fosfoquinasa MB:
La creatina quinasa MB (o CPK 2) es una enzima que se encuentra exclusivamente en el tejido
cardiaco y pertenece a la familia de las creatina quinasas, las cuales se caracterizan por catalizar la
fosforilacion de la creatina para producir fosfocreatina
La CPK 2 es considerada una enzima cardaca y permite la identificacin de una lesin en las fibras
del miocardio
Procedimiento:
Se aadieron a un tubo de ensaye 1ml de reactivo con 40l de muestra y se mezclaron por algunos
segundos, una vez mezclados se incubaron por 2 minutos, se ajust el espectrofotmetro con
agua destilada y se procedieron a leer las absorbancias a 340nm, despus de leer se incubo la
muestra y se procedi a leer la muestra cada minuto hasta que se obtuvieron tres lecturas.
Se calcularon la diferencia entre absorbancias y promediaron los resultados para obtener el
cambio promedio en absorbancia.
Resultados:
Tiempo Absorbancia
0 0.332
1 0.333
2 0.326

Clculos a 37C:
A=A2-A1
CK=AxF.D.
A=0.333-0.332=0.001x8095=8.095U/L

LABORATORIO DE BIOQUIMICA CLINICA
Nombre del paciente: Ruth Olmos Gmez
Sexo: Femenino Edad: 22aos
Fecha: 23 de Abril del 2013.
Mdico: A quien corresponda.
Se
elimina

Parmetro Resultado Valor de referencia
Creatina quinasa 8.095U/L Hasta 1950U/L

Discusin de Resultados:
En las absorbancias no hay mucha diferencia ya que se encontraron niveles basales ya que hay
recambio celular, son valores normales ya que indica la bibliografa que si hay un aumento
rebasando los 1950U/L ya podra presentarse por alguna patologa pero estos valores dieron bajos
pero an asi son normales.

Conclusin:
La CK puede fugarse del interior de las miofibrillas de un msculo deteriorado. Cuando se
encuentran niveles elevados de creatina quinasa en una muestra de sangre indica generalmente
que el msculo est siendo destruido por algn proceso anormal, tal como unadistrofia muscular o
una inflamacin. Sin embargo, existen ciertas condiciones como la fiebre o el esfuerzo muscular
que pueden arrojar altos niveles sanguneos de creatina quinasa sin patologa aparente.

Referencias:
Fuentes. R.X, Castieras. L. M, Queralt C.M en Bioqumica clnica y Patologa molecular Vol. II 2da.
Ed. Pp 828-830.
Voet. En Bioqumica 3era Ed. Panamerica pp 589-591.