PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR

SEDE IBARRA





TEMA:
DIAGNSTICO DE LA PRESENCIA DE MICROORGANISMOS
PATGENOS Y BENFICOS EN DIFERENTES ZONAS DE LA GRANJA
ECAA






AUTOR:
JUAN JOS SALTOS








RESUMEN
La presente investigacin consisti en la recoleccin, aislamiento e incubacin de
microorganismos patgenos y benficos, especialmente de los gneros Bacillus,
Trichoderma, Rhizoctonia y Fusarium, en la granja ECAA, la cual se llev a cabo en tres
fases. La primera, recoleccin y captura mediante trampas en diferentes zonas
estratgicas de la granja durante un periodo dos semanas. La segunda fase se lo llevo a
cabo en laboratorio en donde se prepararon los medios nutritivos adecuados para el
desarrollo de bacterias y para el desarrollo de hongos respectivamente y se procedi a
aislar las muestras en diferentes diluciones. La tercera y ltima fase de igual manera se la
llevo a cabo en laboratorio en donde se inoculo las muestras previamente diluidas para
determinar los resultados y conclusiones de la investigacin.










INTRODUCCIN
El suelo est formado por cinco
componentes principales: materia
mineral, agua, aire, materia orgnica y
seres vivos. La cantidad de estos
constituyentes no es la misma en todos
los suelos. Segn Carrillo (2003), el aire y
el agua juntos representan
aproximadamente la mitad del volumen
del suelo. Mientras que el resto de los
componentes representan una fraccin.
Entre estos componentes tenemos a los
microorganismos.
Se pueden destacar millones de tipos de
gneros dentro de la vida microbiana de
en el suelo, pero esta investigacin se
llev a cabo enfocndose en cuatro: los
hongos Trichoderma, Fusarium y
Rizhoctonia y las bacterias del gnero
Bacillus.
Cervantes (2011), manifiesta que el
gnero Tricoderma est compuesto por
hongos que se encuentran presentes en
forma natural, en casi todos los suelos y
hbitats del planeta.
Se caracteriza porque se desarrolla
rpidamente y emite gran cantidad de
esporas verdes.
Es un organismo dominante en los
suelos, debido a su naturaleza agresiva y
su capacidad metablica para competir
con la abundante microflora circundante.

En contraste a Tricoderma, que resulta
ser un hongo beneficioso para el suelo,
se encuentra Fusarium, de gran
importancia al ser un gnero de hongos
patgenos para los cultivos. Fusarium
tiene gran capacidad de ocasionar
enfermedades en distintos tipos de
plantas cultivadas. (Booth, 1971)
En cuanto a Rhizoctonia se pude recalcar
su importancia debido a que es un hongo
de gran importancia por su agresividad y
su amplia distribucin. Es un patgeno
de plantas, con un gran rango de
huspedes y de distribucin mundial ya
que es una de las causas de la
podredumbre damping off, que mata a
las plntulas en horticultura. (Wikipedia,
2013)
Otra rama de importancia para la
microbiologa del suelo son las bacterias.
Aunque son numerosas, debido a su
pequeo tamao, slo representan
menos de lamitad de la biomasa
microbiana total (Benintende &
Snchez). El gnero Bacillus es uno de los
de mayor importancia.

Los microorganismos del gnero Bacillus
son bacilos de gran tamao (4-10 m),
grampositivos, aerobios estrictos o
anaerobios facultativos encapsulados.
Una caracterstica importante es que
forman esporas extraordinariamente
resistentes a condiciones desfavorables.
(Bartram, 2003). Cabe recalcar que la
mayora de las especies de Bacillus son
inocuas.

Por todo lo anteriormente mencionado,
el objetivo de este trabajo es determinar
la presencia de microorganismos
patgenos y benficos en diferentes
zonas de la granja ECAA.
MATERIALES Y MTODOS
Captura
La presente prctica dio inicio con la
captura de los microorganismos
mediante trampas a base de arroz semi
cocido con o sin melaza, ubicadas
indistintamente en 10 zonas estratgicas
dentro de la granja ECAA.
En un periodo de dos semanas, se
permiti la colonizacin libre de las
trampas ya que los sustratos elegidos
facilitan la captura, establecimiento y
colonizacin de los microorganismos
deseados.
Mediante el mtodo visual, pudimos
constatar de presencia de Trichoderma
gracias a su coloracin verde
caracterstica, Fusarium, por la
coloracin anaranjada o roja que
presenta el patgeno, Rhizoctonia,
debido al color gris y Bacillus por su
coloracin blanquecina que lo
caracteriza.
Inoculacin
La inoculacin se la realizo en laboratorio
en donde se esteriliz el material
necesario para la prctica y se prepar el
medio nutritivo propicio para cada
agente. Agar sabouraud para el
establecimiento de hongos y agar
nutritivo para el establecimiento de
bacterias. Se coloc aproximadamente
12ml de agar en las cajas Petri para
posteriormente llevarlas a la estufa por
45 minutos.
Una vez culminado el proceso se
procedi a la dilucin de las muestras en
agua peptona. 10
-2
, 10
-3
y 10
0
para
hongos y 10
-2
y 10
-3
para bacterias, las
cuales mediante un asa esterilizada y
frotis (cuatro cuadrantes y total) para
bacterias y hongos respectivamente, se
inocul dentro de la cmara de flujo
laminar, para evitar posibles
contaminaciones externas.
Incubacin
La incubacin consiste en colocar las
muestras en la estufa por 48 horas a 37
grados centgrados con el objetivo de
proporcionar un ambiente adecuado al
microorganismo para facilitar su
proliferacin dentro de las cajas Petri y
as poder observarlo al microscopio.
RESULTADOS
Se registraron prdidas en algunas
muestras debidos a factores externos
como presencia de ratas en la granja, que
consumieron el sustrato y dejaron las
muestras descartadas. (Tabla 1)
Tabla 1. Nmero de muestra y ubicacin
Muestra Ubicacin
1 Estanque
2 Abejas
3 y 4 Entrada
caducifolios
5 y 6 Caducifolios
7 Compostera 1
8 Compostera 2 (x)
9 Pastizal (x)
10 Est. Meteorolgica
11 y 12 Vivero (x)
Podemos evidenciar que de las 12
muestras establecidas, 2 se encontraron
vacas por agujeros y 2 desaparecieron
por razones desconocidas.
Teniendo en cuenta el entrenamiento
visual que tuvimos por parte de un video
en el cual se estableca los colores de
cada organismo anteriormente
mencionado. Pudimos verificar su
presencia en la siguiente tabla. (Tabla 2)
Tabla 2. Presencia de microorganismos
por determinacin visual en la granja
ECAA.
Muestra
N Ubicacin
Gnero de
hongos
presente
Gnero de
bacterias
presente
1 Estanque Fusarium sp. -
2 Abejas Rhizoctonio sp. Bacillus sp.
3
Entrada de
caducifolios Trichoderma sp. -
4
Entrada de
caducifolios - Bacillus sp.
5
Asequia de
caducifolios Fusarium sp. -
6
Asequia de
caducifolios Trichoderma sp. -
7 Compostera Trichoderma sp. -
8
Compostera
(destruida) - -
9
Parcela de
Pastos
(destruida) - -
10
Estacin
meteorolgica - Bacillus sp.

Una vez terminado el periodo de
incubacin se procedi al anlisis en
microscopio en el laboratorio con los
lentes 10x, 40x y 100x en donde se
observaron las siguientes estructuras.
HONGOS
Muestra 1 (100x)

Foto web

Realizando una comparacin podemos
ver la posible presencia de Fusarium ya
que tiene un parecido en cuanto a
distribucin y forma, pero en cuanto a
estructuras no fue posible la
identificacin en laboratorio.
Muestra 2 (100x)

Foto web
Posible presencia de Rhizoctonia luego
de la foto comparativa.
Muestra 3 (100x)

Foto web

Posible presencia de Trichoderma luego
de la foto comparativa.
Muestra 5 (100x)

Posible presencia de Fusarium
Muestra 6

Posible presencia de Trichoderma
Muestra 7

Posible presencia de Trichoderma
BACTERIAS
Bacillus Foto web

Muestra 2

Muestra 4



Muestra 10


Podemos evidenciar en la Muestra 2,
Muestra 4 y Muestra 10 la posible
presencia de Bacillus gracias a una
muestra comparativa con una foto
obtenida de la web.
CONCLUSIONES
Determinar la presencia de
microorganismos benficos o
patgenos dentro de un predio
nos da una idea de cmo
interacta nuestra parcela con la
microflora y microfauna del suelo
el diagnstico y el umbral de
accin de nuestra parte.
El potencial de produccin de un
suelo est dado por su
bioestructura.
En la granja ECAA se determin
mayor presencia de Trichoderma
y Bacillus, microorganismos
potencialmente benficos
No es una investigacin 100%
fiable debido a que no tuvimos un
reconocimiento de estructuras
ptimo.
RECOMENDACIONES
Es importante realizar una
comparativa mejor guiada y ms
elaborada con el fin de obtener
mejores resultados, y no solo
enfocado a cuatro gneros de
microorganismos.
La asepsia es de vital importancia,
ya que podemos evitar posibles
contaminaciones por factores
externos y sesgar as la
investigacin.

BIBLIOGRAFA

Benintende, S., & Snchez, C.
(s.f.). Microorganismos del suelo.
Recuperado el 20 de Diciembre
de 2013, de
http://www.fca.uner.edu.ar/acad
emicas/deptos/catedras/microbio
logia/parte_de_unidades_10_y_1
1_microorganismos_del_suelo.pd
f
Booth. (1971). Recuperado el 20
de Diciembre de 2013, de
http://www.revistas.unal.edu.co/i
ndex.php/agrocol/article/viewFile
/21538/22543
Carrillo, L. (2003). Actividad
microbiana. Recuperado el 19 de
Diciembre de 2013, de
http://www.unsa.edu.ar/matbib/
micragri/micagricap3.pdf
Cervantes, M. (2011).
Microorganismos del suelo
beneficiosos para los cultivos.
Recuperado el 20 de Diciembre
de 2013, de
http://www.infoagro.com/hortali
zas/microorganismos_beneficioso
s_cultivos.htm
Wikipedia. (9 de Marzo de 2013).
Rhizoctonia solani. Recuperado el
20 de Diciembre de 2013, de
http://es.wikipedia.org/wiki/Rhiz
octonia_solani

NELSON, P.E. Taxonomy of fungi
in the genus Fusarium with
emphasis onFusarium oxysporum.
p. 27-35. In Re.
Ploetz(ed.).Fusarium wilt
ofbanana. American
Phytopathological SocietyPress.
St. Paul. 1990.

Bartram J et al. (eds.), 2003:
Heterotrophic plate counts and
drinking-water safety: the
significance of HPCs for water
quality and human health. Serie
de la OMS Emerging Issues in
Water and Infectious Disease.
Londres (Reino Unido), IWA
Publishing.

ANEXOS



Sustrato de arroz remojado y melaza Colocacin de las muestras






Muestras descartadas Recoleccin de las muestras para laboratorio






Agar nutritivo y agar sabouraud Muestra triturada









Dilucin delas muestras Esterilizacin del asa






Inoculacin de las muestras diluidas Retiro de las muestras despues de la incubacin






Reactivos para la tincin de Gramm Cristal violeta en la muestra