APOSTILA TREINAMENTO OPERACIONAL

CHROMELEON 6
CROMATOGRAFIA DE ONS DIONEX
DIONEX BRASIL INSTRUMENTOS CIENTFICOS LTDA.
Rua Grau, 389
05593-001 SO PAULO SP
FONE: (11) 3731-5140 FAX: (11) 3213-9530
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Cliente:________________________________________________________
Tcnico que realizou a instalao: __________________________________
Fone: _______________________________
e-mail: ______________________________
Preparado por: Departamento de Aplicaes DIONEX Brasil
Julho/2010
2 Treinamento Bsico
ndice
1. COMO LIGAR SEU CROMATGRAFO DE ONS?......................3
1.1. LIGANDO OS MDULOS.......................................................................................................................3
1.2. INICIANDO O COMPUTADOR..................................................................................................................4
2. PRIMEIROS PASSOS DO DIA ........................................................4
2.1. CHECK-IN, parece um avio mas no .......................................................................................4
2.2. VERIFICANDO SE O SERVER MONITOR EST ATIVO.......................................................................................5
2.3. PRIME OU PURGA............................................................................................................................7
3. CHROMELEON E SEUS SEGREDOS.............................................11
3.1. POR QUE O CHROMELEON 6?.................................................................................................................11
3.2. BROWSER, O PRINCIPAL NO FALTA.....................................................................................................12
3.3. PAINEL DE CONTROLE, LIBERDADE NA SUA REA DE TRABALHO..............................................................13
3.4. PROGRAMA, SEGUINDO O ROTEIRO.......................................................................................................16
3.4.1. Como Criar um Programa?..........................................................................................................16
3.4.2. Editando meu Programa............................................................................................................17
3.5. MTODO, PORQUE VOC VAI PRECISAR DE UM?........................................................................................19
3.5.1. Criando um mtodo....................................................................................................................19
3.6. SEQNCIA, ORGANIZOU USOU............................................................................................................23
3.6.1. Criando uma Seqncia................................................................................................................24
3.6.2. Salvando uma Seqncia...............................................................................................................29
3.7. BATCH: UMA SEQNCIA DE SEQNCIAS ..............................................................................................30
3.8. PROCESSANDO OS RESULTADOS ANALTICOS..............................................................................................33
3.9. REPORT, UM RELATRIO EM INGLS!....................................................................................................50
3.10. BACKUP DE DADOS REALIZANDO E RESTAURANDO.................................................................................51
4. E O DIA SEGUINTE?..........................................................................53
5. FIM DO DIA? ENTO, BOA NOITE!..............................................54
6. QUANDO A NOITE NO ACABA? ................................................54
7. CHECK-LIST.......................................................................................55
8. LOG DIRIO........................................................................................57
9. CONTROLE DE QUALIDADE DE INSTALAO.......................59
3 Treinamento Bsico
1. Como ligar seu Cromatgrafo de ons?
Ao adquirir seu Cromatgrafo de ons DIONEX necessrio alguns
procedimentos para efetuar-se o start-up.
Chamamos de start-up todo o procedimento prvio para preparar seu
equipamento para a corrida da anlise.
Desse modo, importante seguirmos sempre alguns passos ao
iniciarmos o uso do equipamento. So eles:
1.1. Ligando os Mdulos
O Cromatgrafo de ons DIONEX dividido em mdulos: Bomba,
Gerador de Eluentes, Compartimento Cromatogrfico, Injetor Automtico
I
.
Cada um desses tipos de mdulos possuem alimentao eltrica
(POWER), portanto temos que lig-los atravs deste boto padro que todos
os mdulos contm, que est localizado, normalmente, abaixo do display de
comando.
Figura 1
Pressionando POWER ligamos os mdulos. No caso dos mdulos do ICS3000
devemos pressionar e segurar por lguns instantes at que a luz verde se
acenda
I
mdulos acessrios, dependem da configurao do sistema
POWER
4 Treinamento Bsico
1.2. Iniciando o computador
Os sistemas DIONEX utilizam computadores
II
e softwares de ltima gerao
para melhor qualidade de gerenciamento e tratamento de dados. O procedimento de
ligao do computador depender da marca do fabricante, configurao e layout do
gabinete.
A comunicao entre os mdulos e o computador feita atravs de protocolos
de rede que utilizam placa DX-LAN e HUB ou nos sistemas da Srie ICS atravs de
comunicao USB
Depois de ligar os mdulos e o computador, o monitor do Chromeleon
executar o procedimento de reconhecimento dos endereos entre os protocolos,
autorizando assim, a comunicao entre eles.
2. Primeiros passos do Dia
Para iniciarmos a anlise, precisamos de alguns procedimentos prvios que
permitam uma operao segura com reprodutibilidade, representatividade e
repetibilidade.
Para tanto, teremos em mos uma lista de CHECK-IN.
2.1. CHECK-IN, parece um avio mas no
Seguindo estes procedimentos aumentaremos a vida til do seu equipamento,
diminuindo as possibilidades de problemas e complicaes antes, durante ou depois
das anlises.
Ao longo do treinamento iremos montar esta lista de CHECK-IN, encontrando-a
disponvel ao final da apostila.
Verificar de h eluentes nas garrafas
Abrir a vlvula de gs para pressurizao dos eluentes (se utilizada)
Abrir a vlvula de presso do gs N2 (5-9 psi) (se utilizada)
Ligar os mdulos
Ligar o computador
Verificar se o Server Monitor est ativo
II
computadores solicitados junto com o equipamento
5 Treinamento Bsico
2.2. Verificando se o Server monitor est ativo
O Server Monitor do Chromeleon deve estar ativo para que voc possa iniciar
o trabalho com o Chromeleon. O cone do server monitor est localizado
prximo ao relgio do Windows no canto inferior direita de sua tela:
possvel abrir o server monitor dando um duplo clique no seu cone.
Ele possui 4 estados e vai mudando de cor conforme a situao:
Quando o servidor no est rodando e ser necessrio inici-lo manualmente:
Quando o servidor est rodando e a licena (dongle + key code) foi
reconhecida pelo software, voc pode operar o Chromeleon
importante que o SerialNo. esteja aparecendo e os dizeres de cima sejam
exatamente os mesmos. Caso contrrio o software pode estar rodando em
evaluation mode (modo demonstrao)
6 Treinamento Bsico
Quando uma anlise est correndo ou uma linha de base o cone do
Chromeleon fica da seguinte forma.
possvel ligar e desligar o Chromeleon Server, manualmente ou indo em
Config... ajustar para que sempre que o Sistema Operacional iniciar o server
tambm se inicie. Geralmente durante a instalao os tcnicos habilitam essa
funo, porm possvel o usurio modificar posteriormente caso no utilize o
computador somente para operar o cromatgrafo.
De qualquer forma importante verificarmos antes de ligarmos o software para
que todos os mdulos se conectem normalmente.
7 Treinamento Bsico
2.3. PRIME ou PURGA
Antes de iniciarmos a estabilizao, precisamos eliminar as possveis
bolhas de ar geradas normalmente no sistema.
Este procedimento realizado no mdulo da bomba, que mede presso
e empurra a fase mvel por todo o sistema.
Vamos seguir os seguintes passos:
Abrir a vlvula de prime, que encontra-se na parte inferior do mdulo,
logo abaixo do display
Figura 2
- A vlvula de PRIME abre no sentido anti-horrio.
- Daremos 2 (duas) voltas at o boto estar solto.
Vlvula de Purga ou
Prime ICS3000
Purga no ICS1100; ICS1600 e ICS2100
Manual ou pelo Software (Pump Settings)
Purga no ICS1100; ICS1600 e ICS2100
Manual ou pelo Software (Pump Settings)
Purga no ICS900
8 Treinamento Bsico
2 - Aps a abertura da vlvula, teremos que pressionar o boto PRIME
no painel de controle do software Chromeleon, a tela depende da configurao
do sistema e do painel empregado. Pode ser necessrio entrar em Pump
Settings (Ajustes da Bomba) para realizar a purga desses sistemas.
3 - Aps a sada das bolhas desligamos a bomba em Motor = off ou
Prime = Off, dependendo da configurao do sistema fechamos a vlvula de
PRIME no sentido horrio.
Exemplos de telas do Software Chromeleon para realizao da purga:
9 Treinamento Bsico
Terminando este procedimento podemos acrescentar mais dois itens na nossa
lista de CHECK-IN.
Fazer o PRIME
Verificar se a vlvula do PRIME est fechada
Clicar nos botes BOM DIA ou START UP, verificar se a bomba liga e em
seguida verificar se a presso da bomba est aumentando. Confirmar a
corrente da supressora ou cela ligada e a concentrao do gerador de eluentes
que deve ser a mesma do incio do gradiente analtico. A CR-TC deve estar
ligada neste momento, caso se utilize o cartucho EG.
Se a inicializao for manual ligue na seguinte ordem para sistemas
condutimtricos:
1) Bomba na vazo analtica
2) Gerador de Eluente na concentrao inicial de corrida
3) CR-TC
4) Supressora

Se estiver operando com a supressora no modo de regenerao por
reciclagem verifique a sada de bolhas pela porta REGEN OUT
Se estiver empregando a regenerao qumica ou externa por gua confirme
se o regenerante est saindo atravs da posio regen out.
Aps algum tempo cheque o valor da presso e da condutividade total:
Determinao de ctions com eluentes H2SO4 e MSA: < 2uS
Determinao de nions com eluente KOH, gerador e CR-TC: < 2uS
Determinao de nions com eluente carbonato/ bicarbonato: Entre 15uS e
29uS
Determinao de nions com eluente carbonato/ bicarbonato + CRD300: <2uS
A inicializao manual de um detector amperomtrico envolve ligar a bomba e
a cela amperomtrica, nesse caso a ltima condio utilizado no detector
amperomtrico como Waveform ou Potencial prevalecer.
10 Treinamento Bsico
Confirme se o seu boto bom dia ou start up realiza todas essas tarefas
diretamente.
Estabilizando o equipamento:
Clicar no boto azul (acquisition on/off) para monitorar a linha base do sistema.
Aps estabilizado clicar no mesmo. Enquanto a estabilizao ocorrem, d
seqncia aos passos desta apostila.
11 Treinamento Bsico
3. Chromeleon e seus segredos
O Chromeleon um software desenvolvido pela DIONEX a fim de
facilitar as tarefas dos operadores, adquirindo, controlando e gerenciando
dados com uma interface simples e de fcil operao.
3.1. Por que o Chromeleon 6?
Aps anos de pesquisa, concluiu-se que a maioria dos softwares de
cromatografia tem grandes limitaes de operao e vrias falhas de controle e
gerenciamento, que implicam cada vez mais, em tempo perdido para o
operador.
A DIONEX, visando o aproveitamento deste tempo perdido, saiu na
frente no mercado com um software de ltima gerao, apresentando grande
versatilidade e liberdade que vo desde a anlise da integrao de um
cromatograma at relatrios impressos com o logotipo da empresa e
parmetros que representam a situao das suas variveis de controle, sejam
elas quais forem.
Aqui, abordaremos passos bsicos de operao afim de capacitar o
usurio a ter uma viso operacional que possibilite o desenvolvimento de
acordo com suas necessidades, adequando-o a realidade das rotinas de
anlise no laboratrio.
O Chromeleon opera seguindo o Parmetro Lgico abaixo:
AUTOMAO
Modo/Parmentros de
anlise e integrao
Ordem e Posio
das amostras para
anlise
Registro dos dados e situao
de integrao do
cromatograma
Acionamento de
Parmetros durante a
corrida
BATCH
PAINEL DE
CONTROLE
PROGRAMA MTODO SEQNCIA
REPORT
1
2 3
4
LINK DINMICO
5
12 Treinamento Bsico
Para que possamos efetuar uma corrida de anlise, necessrio
seguirmos esta seqncia. Se os mtodos e programas estiverem prontos
podemos iniciar a partir da etapa 3.
Agora abordaremos, de maneira simples, os itens da seqncia acima.
3.2. Browser, o principal no falta
Para navegarmos no Peaknet-Chromeleon utilizamos uma tela
principal onde encontra-se: pastas e arquivos, painis de controle, programas,
mtodos, seqncias e relatrios Esta tela chama-se Browser, onde temos
todos os acessos principais. Assemelha-se ao Windows Explorer afim de
facilitar a visualizao e acesso do operador. possvel criar diretrios e sub-
diretrios para melhor arquivar os dados cromatogrficos.
Pastas/
Arquivos
Programas e
Mtodos
Seqncias
13 Treinamento Bsico
A partir desta tela teremos:
acesso s pastas e diretrios criados;
criao e edio de PROGRAMAS;
criao e edio de MTODOS;
criao e edio de SEQNCIAS;
criao
III
, edioIII e impresso de RELATRIOS;
monitoramento da SEQNCIA da anlise;
Alterar Fator de Diluio
Alterar massa da amostra
Renomear amostras e padres (P1, P2, etc.)
Quando quisermos acessar o Browser de outras telas, basta darmos um
clique no cone , que est na barra de ferramentas.
3.3. Painel de Controle, liberdade na sua rea de trabalho
O Painel de Controle a nossa interface de automao, ou seja, nele
que efetuamos o controle (REMOTE) dos mdulos sem a necessidade de
utilizarmos, fisicamente, os displays e botes de comando.
O Layout do Painel de Controle totalmente flexvel, permitindo a
adio
IV
de novos indicadores, grficos de acompanhamento, botes de
comando direto, etc
Para acessarmos os painis j pr-definidos de fbrica que vm com
seu Peaknet-Chromeleon, basta clicar na pasta PANELS e selecionar o painel
de controle desejado. Selecionado o painel, clicar em control...Connect to
Timebase... Selecionar em My Computer a Timebase (equipamento) o qual se
quer conectar.
III
de acordo com a licena de software adquirida pelo usurio
IV
IMPORTANTE: antes de qualquer modificao consultar atentamente o manual do Usurio
Peaknet fornecido juntamente com o software
PASTA
14 Treinamento Bsico
Para sua maior comodidade nossos Tcnicos e Especialistas de
Produto, j configuraro o Painel de Controle mais recomendado para o seu
equipamento, no processo de instalao.
Caso voc no saiba qual painel esteja usando ou aonde ele est salvo, os
tcnicos da Dionex costumam deixar um workspace salvo que contempla o
painel atual e o Browser em segundo plano. Para acess-lo clique no menu
Workspace e selecione a opo 1 mostrado no exemplo abaixo:
Outra forma de abrir painis padres de acordo com a configurao do seu
sistema utilizar o boto PANEL TABSET.
PAINEL
15 Treinamento Bsico
A janela abaixo ir aparecer e voc deve clicar no sinal de mais ao lado de My
Computer e selecionar a opo Chromeleon Server
O painel gerado atravs dessa opo no pode ser editado, mas possui todas
as caractersticas e opes necessrias para a operao de seu cromatgrafo.
16 Treinamento Bsico
3.4. Programa, seguindo o roteiro
O Programa controla o comportamento dos mdulos durante o tempo
da corrida de anlise. nele que vamos programar:
O tempo e a forma do gradiente
V
;
Limites de presso do Sistema;
Fluxo da bomba;
O tempo de aquisio da corrida;
Estado e corrente do sistema de supresso (SRS);
Os canais de aquisio;
Parmetros de Deteco;
3.4.1. Como Criar um Programa?
Para criarmos um programa simples! Basta estarmos no Browser,
clicarmos em File New Program File. E, interativamente, em modo
Wizard, o PROGRAMA estar pronto em segundos.
V
Para bombas com vlvula quaternria ou com gerador de eluente
17 Treinamento Bsico
Para cada mdulo temos um Programa diferente que depende do seus
mdulos e acessrios. Por isso, siga sempre as recomendaes dos
nossos profissionais.
Aps a criao do Programa no modo wizard, aparecer uma tela com
a linguagem programada.
Podemos fazer alteraes do programa nesta tela de linguagem
programada, porm impreterivelmente o software ter que reconhecer a linha
alterada como comando de controle. Para maiores esclarecimentos consulte a
seo Editando meu Programa.
3.4.2. Editando meu Programa
Para fazermos alteraes na nossa programao j existente, fcil!
No Browser na seo da tela onde fica os Mtodos e Programas, d um
duplo clique no Programa existente e altere a linha de comando.
Caso a linha de programao no seja reconhecida, a linha do comando
apresentar a cor vermelha, e voc ser alertado com um aviso de erro
bloqueando a execuo do Programa.
18 Treinamento Bsico
Como uma opo mais simples, os cones esquerda permitem
restaurar e editar as condies analticas e instrumentais para rodar a anlise,
retornando ao Wizard de criao de programa.
Pode-se criar e editar programas para cada anlise, de acordo com as
necessidades e comodidades do usurio.
19 Treinamento Bsico
3.5. Mtodo, porque voc vai precisar de um?
O mtodo responsvel pela integrao de dados no cromatograma.
nele que dizemos o que queremos:
Unidade de medida (concentrao dos analitos: mg/L, g/L, ng/L, ng/
dose, etc.)
Parmetros de Deteco (rea mnima, Threshold, Tailing);
Tempo de Reteno para integrao;
Tipo de padronizao;
Quantidade para a validao do resultado;
Forma de aquisio dos pontos do cromatograma;
Tipo dos padres de Calibrao e seus respectivos pontos na curva
de calibrao;
Livraria de Espectros
VI
;
3.5.1. Criando um mtodo
Criar um mtodo no Peaknet-Chromeleon muito simples. Basta clicar
File New Method File
Na parte inferior da tela, temos um fichrio com os parmetros de
integrao.
VI
Somente para sistemas com modo de deteco UV-Vis
20 Treinamento Bsico
GENERAL: aqui ajustamos parmetros como: unidade de medida; como
tratar a Matriz e o Branco da anlise; volume padro de injeo; tipo de
tratamento dos dados de calibrao.
DETECTION: neste item ajustamos nossos parmetros de
deteco/integrao durante a corrida e seus respectivos limites de
tolerncia. Ajuste-o da melhor forma para suas amostras, utilizando
parmetros como: inhibit integration, minimum rea, valley to valley, tailing
sensitivity factor, fronting sensitivity factor, void volume treatment entre
vrios outros. Trabalhe estes parmetros com um cromatograma pronto
Unidade de Medida
Volume injetado
Tratamento dos
Dados da
Calibrao
Tratamento do
Branco e Matriz
Momento da
Corrida (Tr)
Parmetros de
Integrao
Valor dos
Limites de
Tolerncia
21 Treinamento Bsico
PEAK TABLE: nesta tabela colocamos, nas respectivas colunas, o nome
dos analitos da corrida, seus respectivos tempos de reteno, janela de
tolerncia, tipo de padro
VII
, tipo de integrao, tipo de calibraoVII, tipo
de pico, grupo, comentrios e quantidade.
AMOUNT TABLE: aqui informamos as concentraes dos pontos de
calibrao dos respectivos analitos.
VII
referncias para calibrao
Nome dos
analitos
Tr dos picos de
cada analito
Valores das concentraes
e os pontos de calibrao
Janela de (Tolerncia
do TR) ABS ou REL
Padronizao
Forma de Calibrao
Ajuste da Curva
22 Treinamento Bsico
Curva multi-nvel:
Somente possvel utilizarmos este recurso aps a criao da SEQNCIA
desta forma j teremos os NOMES dos padres definidos, teremos uma coluna
para cada padro com suas respectivas concentraes nominais.
Para criarmos estas colunas basta seguirmos os seguintes passos:
- Clique com o boto direito do mouse na tela AMOUNT TABLE;
- Selecione a opo Column e clique em Edit Amount Column;
- Selecione na caixa superior (Assign the standards on the basis of) a opo
name e em seguida Auto-Generate
- Selecione: uma coluna de concentrao separada para cada padro (P1,
P2, P3, etc)
- Clique em Apply e em OK
Aps a criao das respectivas colunas que aparecero nomeadas
conforme o nome dado ao padro, devemos preencher com as concentraes
reais de cada padro
23 Treinamento Bsico
CALIBRATION: esta tabela preenchida automaticamente quando
injetamos os padres e a partir dela poderemos retirar pontos da curva de
calibrao.
3.6. Seqncia, organizou usou
Na Seqncia colocamos em ordem as injees para anlise. De
maneira organizada, dizemos quando e como sero injetadas as amostras ou
os padres consecutivamente, alternada ou aleatoriamente.
Aqui informaremos:
Se a injeo ser de um Padro ou uma Amostra;
Nmero de injees que sero efetuadas;
Posio dos vials no carrinho
VIII
;
Volume de injeo por vialVIII;
Nmero de injees por vialVIII;
Posio inicial das injeesVIII;
VIII
Para sistemas com Amostrador Automtico
24 Treinamento Bsico
3.6.1. Criando uma Seqncia
O Peaknet/Chromeleon tem um jeito fcil e rpido para se criar
seqncias. Basta clicar em File New Sequence (Using
Wizard)
A partir daqui seguiremos, interativamente, passo-a-passo a criao da
seqncia. Nesta primeira tela teremos instrues sobre quais sero estes
passos durante sua criao.
1 Tela: TIMEBASE
Clique em Next, para continuar;
D um duplo clique no cone My Computer , em
seguida selecione a Timebase desejada ;
Clique em Next, para continuar.
2 Tela: Informaes sobre a amostra.
Clique em
25 Treinamento Bsico
, e selecione No unknowns , Use template, Paste via clipboard
ou Import from sequence.
No unknowns: desconhecida, no ir injetar nenhuma amostra
desconhecida
Use template: usar template, ele cria uma seqncia;
Paste via clipboard: colar via rea de transferncia do windows,
possibilita colar e recortar de outros programas como Excel, etc
Import from sequence: importa a seqncia de outra pr-existente.
Aqui colocaremos todas as informaes necessrias sobre a amostra:
Nome da Amostra (genrico);
Nmero do vial
IX
;
Injees por vial/ replicatas IX;
Posio inicial do primeiro vial IX;
Volume de injeoIX;
IX
Parmetros somente utilizados em equipamentos que utilizam Amostrador Automtico
26 Treinamento Bsico
Aps preencher todos os parmetros acima, clique em Apply>>, e ao lado
em SEQUENCE PREVIEW, onde teremos uma previso da sequncia de
amostras com suas posies
X
e seu volume.
Clique em Next, para continuar;
3 Tela: Informaes sobre o padro.
Teremos os mesmos parmetros de tratamento, vistos no 2 Tela:
Informaes sobre a amostra, para o padro. Desde nomeao, posio,
injees, volumes de injeo, etc O nico parmetro a mais ser o Variation.
O Variation servir para informarmos, proporcionalmente, as
seqncias de injeo entre os padres e as amostras. Para habilit-lo basta
marc-lo e alterar as propores das seqncias. Exemplo: injetar 1 padro a
cada 2 amostras:
X
Graficamente podemos visualizar as posies do vial atravs do fichrio RACK PREVIEW
Nome Genrico
Nmero de Frascos
N de injees numa amostra
Posio inicial
Volume do Loop
27 Treinamento Bsico
Aps organizados todos os parmetros, clique em Next para continuar.
4 Tela: Informaes sobre tipo de programa, tipo de mtodo e tipo de
relatrio.
Nesta 4 Tela definiremos qual programa, mtodo e relatrio (j criados),
que iremos utilizar.
Basta clicar em Browse e procurarmos a pasta e o nome do arquivo do
Programa, Mtodo e Report
XI
.
XI

*
Os relatrios default esto na pasta Dionex Templates/ Reports. possvel utiliz-los como esto ou
customiz-los
28 Treinamento Bsico

A pasta que contm
Caso voc no saiba qual relatrio utilizar, busque (em Preffered Report
Browse) o da pasta Dionex Templates/ Report conforme a figura abaixo
Clique em Next, para avanar.
Programa
Mtodo
Relatrio
29 Treinamento Bsico
3.6.2. Salvando uma Seqncia
Para salvarmos uma seqncia muito simples. Basta informar, na
ltima tela do Criando uma seqncia, o nome da seqncia, o ttulo
(opcional), o Local e o Diretrio onde ela ser salva.
Feito isso e cilcando-se em Next e Done voc retornar tela do Browser
mencionada na pgina 10 onde ser possvel renomear os padres e
amostras, ajustar os fatores de diluio, posio, volume de injeo, etc. Se
quiser copiar uma mesma entrada para todas as linhas abaixo basta dar um
clique direito na coluna original e em seguida selecionar a opo Fill Column.
Nesse momento qualquer alterao realizada na sequncia necessita ser salva
para passar a valer.
Status de amostra:
Single: Amostra ainda no lida
Finished: Amostra j finalizada e lida
Multiple: Amostra sempre fica no status multiple, caso se reinicie o batch da
mesma sequncia o novo cromatograma ir sobrescrever o anterior
Interrupted: Amostra interrompida pelo usurio ou por conta de qualquer tipo
de erro
Nome
Ttulo
Local
Diretrio
30 Treinamento Bsico
3.7. Batch: Uma seqncia de seqncias
Esta etapa importante para rodar a seqncia que acabou de ser criada.
Para tanto supe-se que a linha de base e esteja estvel bem como o background de
condutividade ou amperometria. Pare a linha de base se a estiver monitorando
Clicando Start/Stop Batch ou Edit Batch, adicione uma ou mais seqncias que deseja
rodar. Clique em ready check e confirme se vai ser bem sucedido. Em seguida clique
em start. O Batch pode ser alterado atravs do boto amarelo (Edit Batch) o boto
verde pode ser utilizado para interromper um batch que est em curso imediatamente,
aps a corrida atual ou aps a seqncia atual.
- EDIT BATCH
- START/ STOP BATCH
Outras telas e comandos do Edit Batch:
Aba Batch List:
SHUTDOWN
31 Treinamento Bsico
Cria programas de smart shutdown disponvel para alguns modelos de
equipamentos como HPLC Ultimate 3000.
SET DELAY
Programa incio do batch para qualquer horrio:
Aba Reporting:
Programa o sistema para imprimir relatrios ou exportar dados automaticamente aps
o trmino de cada amostra ou trmino do batch inteiro.
Aba Error Handling:
Emergency Program:
Ajusta o sistema para rodar um programa de emergncia caso ocorra algum erro do
tipo Abort durante a execuo da sequncia (Default None)
Power Failure Handling
Gerencia o sistema caso ocorra uma falha de energia durante execuo da sequncia.
possvel rodar um programa de estabilizao e continuar a injeo da onde parou,
reprocessar o batch inteiro ou realmente abortar a corrida
32 Treinamento Bsico
Aba Transfer:
Utilizada para automaticamente exportar os resultados para uma outra datasource.
Esse recurso utilizado quando o Chromeleon est operando em ambiente de rede,
atravs da ferramenta OTA (on-line transfer agent) ou quando isso empregado por
rotinas de backup.
33 Treinamento Bsico
3.8. Processando os resultados analticos
Nesse tpico verificaremos como processar e calcular os resultados analticos
utilizando as ferramentas do software Chromeleon. Operando a integrao do
Cromatograma de forma automtica e de forma manual verificando os cones do
Chromeleon e para que servem.
Vamos tomar como exemplo uma corrida de um padro de ctions para fazer a
integrao correta do cromatograma e aprender os cones dessa etapa de
processamento. Para abrir um cromatograma basta somente dar um duplo clique
sobre o mesmo. Uma janela como a abaixo ou parecida ir aparecer:
XII
Como pode-se observar na parte de cima aparece o cromatograma e na de baixo um
relatrio parecido com excel com vrias abas
XII
34 Treinamento Bsico
Essas abas podem variar de relatrio para relatrio, e podem ser editadas ou
adicionadas, mas via de regra temos as seguintes:
Aba Integration: Lista todos os picos encontrados no cromatograma, o nome dos
picos, rea, altura, e concentrao encontrada para cada analito. Caso o pico no
esteja na tabela de picos o resultado aparece como n.a. No nome do pico
Aba Calibration: Mostra os coeficientes de determinao (r-quadrado) para todos os
picos, bem como informaes sobre a curva como nmero de pontos, coeficientes da
curva analtica, etc
Aba Peak Analysis: Mostra informaes sobre a qualidade do cromatograma como
eficincia (pratos tericos), fator de cauda, resoluo, largura de pico, etc.
Aba SST: Mostra resultados de System Suitability caso os mesmos tenham sido
programados dentro do mtodo QNT como condio de Pass ou Fail e seu resultado.
Aba Summary: Mostra os resultados do pico (TR, rea, Concentrao, Altura, etc.)
selecionado no cromatograma, s que agora para todas as amostras da sequncia
sendo utilizada, na parte de baixo j calculada a mdia e o desvio padro.
Aba Audit Trail: Mostra o histrico auditado de tudo que ocorreu durante a injeo
daquela amostra, tal como condies do equipamento, alarmes, interrupes, etc.
Todas essas abas e as colunas de cada um desses relatrios podem ser editadas
bastando para isso dar um duplo clique em cada uma das colunas.
Todo esse ajuste e o ajuste do layout de impresso estaro vinculados ao relatrio
empregado naquela sequencia, para salvar uma alterao, aps faz-la voc deve dar
um clique direito e e escolher a opo Save Report Definition e escolher se quer
salvar o relatrio com o mesmo nome ou com nome diferente.
35 Treinamento Bsico
Quanto aos cones que aparecem na parte superior dessa tela temos as seguintes
opes:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
1) Integration - Visualiza ou no visualiza o cromatograma
2) PPA Peak Purity Analysis disponvel para detectores de arranjo de diodos
3) 3D Amperometry Disponvel para visualizao 3D de dados de detector
amperomtrico.
4) QNT Editor Edita e entra no mtodo de quantificao para ajustar a
integrao, renomear, picos, etc
5) Printer Layout Mostra como o cromatograma ser impresso de acordo com a
definio de relatrio.
6) Signed Results Disponvel para operao em conformidade com 21CFR
Parte 11
7) Show Report Mostra ou esconde o relatrio na parte inferior da visualizao
do cromatograma
8) Show Trend Carta Controle ou Grfico de Tendncia
9) Split Zoom Divide o cromatograma em dois um lado o cromatograma inteiro e
de outro o zoom que foi feito no cromatograma
10) Show Spectra Disponvel para detectores de UV-VIS arranjo de diodos
11) Show I-t Plots - Disponvel para detectores de amperometria pulsada
operando no modo 3D
12) Show Calibration Curve Mostra a curva de calibrao para o pico
selecionad0
13) Show Injection Tray Mostra a bandeja do amostrador automtico com as
amostras injetadas naquela sequncia
14) Show Fraction Tray Mostra a bandeja do coletor de fraes caso esteja
usando um.
15) Previous Sample Mostra o cromatograma da amostra seguinte
16) Next Sample Mostra o cromatograma da amostra anterior
17) Previous Channel Mostra o canal anterior (quando se emprega deteco em
srie ou detectores multicanal)
18) Next Channel Mostra o canal seguinte (idem)
36 Treinamento Bsico
No caso do cromatograma abaixo, precisamos edit-lo de forma que integre somente
os picos de interesse e no o rudo como est indicado, e reconhea o nome de cada
um.
Inicialmente precisamos entrar no mtodo QNT para editar as condies de integrao
para tanto clicamos no cone QNT-Editor (vide pgina anterior) e vamos na aba
detection.
Na aba detection onde programamos diversas condies de deteco de pico como
sensibilidade, rea mnima, threshold, integrao vale-a-vale, etc. Os parmetros mais
utilizados so:
Minimum Area rea mnima Picos com reas abaixo desse valor sero
descartados. Valores muito baixos consideram rudos como pico e valores muito altos
no integram picos menores de componentes. Sugerimos fazer esse ajuste para o
cromatograma de menor concentrao de sua curva.
Inhibit Integration (On, Off) Inicia e termina inibio nos tempos programados
Void Volume Treatmentv(on, off) Auxilia na integrao de picos que saem
prximos do volume morto
Valley-to-Valley (on, off) Possibilita diferentes formas de integrao para picos que
eluem muito prximos. O default ele estar em off.
37 Treinamento Bsico
Tailing Sensitivity Factor Fator de cauda do pico, quanto maior o valor mais longe
ficar o trmino da integrao para os picos que estiverem aps o tempo de reteno
programado.
Fronting Sensitivity Factor - Fator de frente de pico, quanto maior o valor mais longe
ficar o incio da integrao para os picos que estiverem aps o tempo de reteno
programado.
Sensitivity determina o nvel de rudo ao longo do eixo de sinal para que o software
passe a integrar a partir daquele nvel de rudo
Peak Slice - determina o nvel de rudo ao longo do eixo do tempo para que o
software passe a integrar a partir daquele nvel de rudo
Ao ir alterando-se os parmetros de deteco o seu reflexo imediatamento
percebido pelo cromatograma, e ser possvel ajustar a melhor condio para cada
um deles.
possvel inserir linhas de parmetros de deteco de dua formas, clicando na linha
ativa e clicando-se na seta para baixo do teclado, o software ir perguntar Append
New Line?
38 Treinamento Bsico
Outra opo clicar com o boto direito no momento do cromatograma em que se
quer inserir uma linha de comando e escolher a opo detection parametrs insert
ou escolher alguns dos parmetros listados.
Outros parmetros de deteco/ integrao existem basta dar um duplo clique na
clula Param. Name e escolher dentre as diversas opes. possvel obter um breve
descritivo do que aquele parmetro faz e para mais detalhes clicar em explain
parameteres.
39 Treinamento Bsico
Com o boto direito do mouse possvel integrar um cromatograma com poucos
cliques:
Com o boto direito faa uma seleo na regio inicial do cromatograma onde no se
encontram picos dos seus compostos. O menu abaixo ir aparecer:
40 Treinamento Bsico
Escolha a opo Set Mimimum Area, repita o procedimento selecionando at um
pouco depois do volume morto e selecione Set Inhibit Integration Range. Se ainda
houver necessidade de novos ajustes faa o mesmo agora no considerando o
volume morto e escolha a opo set Peak Slice & Sensitivity.
Em seguida teremos que colocar os tempos de reteno e nomes do pico para isso
acessamos a aba Peak Table e colocamos os tempos encontrados para cada pico.
Fazendo os ajustes de integrao e nomeando os picos corretamente o resultado
ficou da seguinte forma:
Aba Peak Table:
Aba Detection:
41 Treinamento Bsico
Abaixo seguem algumas condies normalmente empregadas para a cromatografia
de ons:
Cromatograma:
Todas as alteraes realizadas no Chromeleon ocasionam modificaes instantneas
e no necessrio reprocessar mtodos e cromatogramas para que elas passem a
valer.
Dessa forma a integrao e nomeao dos picos est correta e se clicarmos no cone
show calibration curve a curva de calibrao para cada pico selecionado mostrada.
42 Treinamento Bsico
No exemplo abaixo selecionamos o pico do potssio e a curva desse composto
aparece direita:
Na curva os pontos em azul so os pontos da curva e o ponto em violeta o
cromatograma que est sendo mostrado. Um duplo clique em um ponto da curva abre
o cromatograma direita.
43 Treinamento Bsico
Exemplo de atualizao automtica:
Calibrao no passa na especifica o Calibrao no passa na especifica o Calibrao no passa na especifica o
Ponto fora da curva.
Para investigar duplo clique no ponto e o
cromatograma associado ir aparecer
Ponto fora da curva.
Para investigar duplo clique no ponto e o
cromatograma associado ir aparecer
Ponto fora da curva.
Para investigar duplo clique no ponto e o
cromatograma associado ir aparecer
44 Treinamento Bsico
45 Treinamento Bsico
Integrao est incorreta Integrao est incorreta Integrao est incorreta
Integrao foi corrigida Integrao foi corrigida Integrao foi corrigida
46 Treinamento Bsico
Ponto de calibrao recalculado Ponto de calibrao recalculado Ponto de calibrao recalculado
Curva de calibrao recalculada
Calibrao passa na especifica o
Curva de calibrao recalculada Curva de calibrao recalculada
Calibrao passa na especifica o Calibrao passa na especifica o
47 Treinamento Bsico
Ajustes manuais de integrao e mudanas na decorao dos cromatogramas
tambm podem ser feitos, para tanto vamos conhecer as seguintes opes na
barra de ferramentas:
Da esquerda para direita:
1) Automatic Tool O cursor est no modo multi-tarefa e permite manipular os
picos de diferentes formas de acordo com sua posio no cromatograma.
2) Delimeter Tool Somente a ferramenta de zoom e a de mover o delimitador do
pico esquerda ou direita so habilitados
3) Baseline Tool - Somente a ferramenta de zoom e a movimentao da
integrao para cima ou para baixo so habilitadas
4) Detection Parameter Tool - Somente a ferramenta de zoom e a mudana do
tempo onde so empregados os comandos listados em detection podem ser
utilizados
5) Insert Peak Tool - Somente a ferramenta de zoom e a de inserir picos clicando
e arrastando com o mouse so habilitadas
6) Spectra Tool - Somente a ferramenta de zoom e a ferramenta de espectro
para detectores 3D so habilitadas
7) Zoom Tool - Somente a ferramenta de zoom habilitada
8) Full Size Coloca o cromatograma em auto-escala de tempo e sinal de acordo
com o maior pico do cromatograma
9) Autoscale D a auto-escala em sinal para a faixa de tempo de reteno
selecionada
10) Unzoom desfaz uma operao de zoom para o estado anterior
11) Decoration Permite decorar o cromatograma como mudar a orientao do
nome dos picos, colocar os Peak Calipers, mudar cores, rtulos dos picos, etc.
Caso faa uma alterao nessa opo o relatrio precisa ser salvo
48 Treinamento Bsico
Ao alterar qualquer integrao no cromatograma, o mesmo aparecer como
modificado por |usurio|, para apagar as manipulaes basta ir em Edit Delete
Manipulations. Ao fazer uma manipulao ser necessrio salvar aquele
cromatograma e o Chromeleon pergunta isso no momento em que se chama o
cromatograma seguinte ou se fecha o cromatograma.
Outros tipos de manipulao que podem ser realizadas so:
Selecionar um pico e mandar apag-lo: basta usar o boto del de seu
computados
Dar um duplo clique e forar aquele pico como sendo um devido componente
que aparecer na lista ou poder ser preenchido conforme figura abaixo
possvel digitar o nome do pico caso ele no esteja na tabela de picos ou selecion-
lo da lista em component. Duas opes so possveis com o primeiro cone onde se
nomea o pico somente para esse cromatograma ou o ltimo cone onde se adiciona o
componente digitado tabela de picos do mtodo.
49 Treinamento Bsico
Comparando cromatogramas da sequncia:
Selecione os cromatogramas que se deseja comparar, atravs da seta para direita ao
lado de cada um dos cromatogramas. possvel selecionar o cromatograma e
arrastar ou utilizar as teclas CTRL ou SHIFT. Selcione a opo compare e selecione o
canal que se quer comparar. Na tabela de summary agora possvel comparar os
resultados e RSD (%) somente das amostras selecionadas.
O passo seguinte imprimir as amostras, o que pode ser feito atravs do cone de
Printer Layout ou diretamente atravs da opo file print. Deve-se somente
escolher qual o relatrio deseja-se imprimir.
Ao imprimir diretamente atravs da tela de integration, possvel faz-lo com o
overlay dos cromatogramas e na escala em que se visualiza o cromatograma no
momento da impresso.
Para imprimir um batch inteiro selecione todas as amostras e clique em batch report,
fazendo a seleo dos relatrios que se quer imprimir ou exportar
50 Treinamento Bsico
3.9. Report, um relatrio em ingls!
No relatrio podemos guardar e monitorar os resultados da corrida, sendo
possvel utiliz-lo como referncia em processos de validao de mtodos,
certificao, relatrios da qualidade, etc
Aqui encontramos:
Cromatograma da corrida;
Concentrao do(s) Analito(s);
Numerao da corrida;
Nome dos Analito(s);
Tempo de reteno;
rea dos Picos;
Altura dos Picos;
Operador da corrida;
Os Relatrios Chromeleon tm alta flexibilidade podendo ser introduzidas
novas medidas, grandezas, frmulas de contagem, unidades, clculos, atravs de
uma interface amigvel semelhante ao Excel.
Os nossos tcnicos ajustaro o relatrio de acordo com a sua necessidade.
Para maiores informaes consulte o Manual do Operador
Peaknet/Chromeleon 6 que fornecido no CD de Manuais da DIONEX ou o tutorial
do Chromeleon.
51 Treinamento Bsico
3.10. Backup de dados realizando e restaurando
Em alguns casos para arquivar dados antigos ou para enviar sequncias para
o Departamento Tcnico da Dionex, pode ser necessrio o envio de arquivos de
backup (arquivos *.cmb), para tanto essa seo lhes ensinar a gerar e restaurar
arquivos de backup dentro do Chromeleon 6.
Gerando um arquivo de backup:
Na parte esquerda do browser selecione a datasource, diretrio ou sequencia que se
deseja realizar o backup e clique em FILE Export/ Backup Backup...
Para o backup ter sucesso garanta que no existe nenhuma amostra ou sequencia
rodando enquanto voc tenta realizar o backup
A tela abaixo ir abrir:
Em browse.. escolha para qual diretrio voc quer enviar o seu backup e d um nome
ao arquivo. Marque as outras opes conforme necessidade, sendo que se marcar
52 Treinamento Bsico
delete original, sua sequencia original ser apagada. Ao marcar a opo compress
data, o arquivo gerado ter menor tamanho em KB para poder ser enviado por e-mail.
Por default as trs primeiras opes so marcadas conforme a figura.
Com isso seu arquivo de backup (*.cmb) estar pronto para ser gravado ou enviado.
Para restaurar um arquivo de backup, v em FILE Import/ Restore Restore...
Escolha o arquivo cmb e a seguinte tela aparecer com as respectivas selees:
Na parte superior maruqe todas as opes, e em destination escoha se quer salvar o
backup no mesmo diretrio em que foi criado ou em outro. Para restaurar o backup
em outro diretrio marque a opo other e em Browse... escolha a pasta de destino.
53 Treinamento Bsico
4. E o dia seguinte?
Aps o trmino da seqncia, as amostras estaro em estado finished e
podem ser interpretadas ou impressas como j vimos. Caso queiram injetar mais
amostras dentro da mesma seqncia, basta adicionar aps a ltima e mandar rodar o
batch. Isso far com que a curva de calibrao desta seqncia seja aproveitada.
Caso uma nova curva de calibrao for construda pode-se criar uma nova seqncia
clicando na seqncia e indo em file save as, e renomeando. VOC DESCOBRIR
QUE A ROTINA SOMENTE ESTE ITEM 4 !!!
54 Treinamento Bsico
5. Fim do Dia? Ento, BOA NOITE!
Recomendamos a todos os usurios que, no final da rotina de operao,
executem, antes de desligar o cromatgrafo, um sistema
XIII
de limpeza recomendado
pelo fabricante a fim de prolongar a vida til do equipamento. Este sistemaXII o
Boa Noite!, que passa gua d/d (18M) por todo o sistema, limpando as
tubulaes, a cela e todo o resto do sistema. Assim diminumos a probabilidade de
cristalizao dentro do Cromatgrafo.
O Boa Noite! criado por nossos Tcnicos: basta seguir os procedimentos
normais de execuo de uma programao, para ativ-lo.
OBS IMPORTANTE: Caso o sistema permanea desligado por um longo perodo de
tempo, 5 dias ou mais, recomendamos:
1) Retirar e guardar a coluna com a soluo de estoque especificada no manual
2) Rinsar o sistema com gua DI por pelo menos 15 minutos
3) Acionar por diversas vezes a vlvula de injeo (Load/ Inject) durante o rinse
4) Retirar a supressora, fechar as sadas e guardar
5) Rinsar por 10 minutos a cela de condutividade com gua DI
6) Retirar o eletrodo de referncia e armazen-lo em soluo 3M KCl (detectores
amperomtricos)
7) Rinsar com gua todas as entradas da vlvula proporcional, colocando as
quatro linhas em uma garrafa com gua e acionando o comando de prime
6. Quando a NOITE no acaba?
Para usurios que possuem amostrador automtico a noite no
acaba!
Este mdulo permite ao usurio executar corridas continuamente Full
TIME, ou seja, 24 horas por dia obtendo a mesma confiabilidade dos
resultados para um grande nmero de amostras, poupando tempo.
XIII
Programa e mtodo
55 Treinamento Bsico
7. CHECK-LIST
Esta ser a nossa check list! Nela encontramos todas as informaes
necessrias para que nosso Suporte Tcnico resolva o mais rpido possvel, o seu
problema.
Ligar os mdulos
Verificar se h eluente nas garrafas
Abrir a vlvula de presso do N2
Abrir a vlvula de gs para pressurizao dos eluentes (5-9 psi)
Ligar o computador
Verificar se o Server Monitor do Chromeleon est ativo
Verificar se o HUB est ligado ou se o(s) mdulo USB esto conectado(s)
Fazer o PRIME e parar a bomba quando no estiverem saindo mais bolhas
Verificar se a vlvula do PRIME est fechada
Verificar se o Programa est criado
Verificar se o Mtodo est criado
Verificar se a Seqncia est criada
Iniciar o Batch e selecionar Ready Check e Start
Verificar se o Report foi selecionado
Coloque aqui:
Data da aquisio do equipamento ______/_____/______
A Presso de Trabalho: ______________ psi
Data de incio de operao da coluna ______/_____/______
Data de troca dos filtros da coluna ______/_____/______
Data da ltima manuteno preventiva ______/_____/______
56 Treinamento Bsico
57 Treinamento Bsico
8. LOG DIRIO
LOG DIRIO PARA MONITORAMENTO DAS CONDIES DO
SISTEMA
Aplicao:___________________________________________________________
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58 Treinamento Bsico
Log de Coluna
Data de
instalao
Coluna N. Srie Eluente Presso Aplicao Armazenada
em:
Log de Supressora
Data de
instalao
Modelo N. Srie Regenerao Backpressure Armazenada
em:
59 Treinamento Bsico
9. CONTROLE DE QUALIDADE DE INSTALAO
CLIENTE:__________________________________________________________
EMPRESA:_________________________________________________________
SISTEMA:____________________________ DATA:_____________________
TCNICO DE SUPORTE DIONEX BRASIL:________________________________
Para garantir operao com sucesso dos cromatgrafos de ons Dionex, reveja e
confirme os seguintes tens com seu cliente preenchendo esse check-list:
Explicado ao cliente o caminho de fluxo e as conexes do Cromatgrafo de ons
SIM NO
Qualidade da gua DI do cliente adequada aos requisitos de sua aplicao
SIM NO _____uS ou _____Mohms
Treinamento: O cliente compreendeu o treinamento coberto durante o perodo de
instalao:
Sabe realizar o prime da bomba
Sabe rodar o sistema em modo local
Consegue rodar uma amostra
Consegue desligar o sistema
Sabe como utilizar o CD-ROM para buscar manuais e aplicaes
Automao: se o cliente tiver instalado o software Chromeleon, devem conhecer as
seguintes funes
Iniciar o Server Monitor (servidor)
Abrir o Chromeleon
Localizar o browser
Identificar os diretrios em sua datasource
Acessar seu painel de controle customizado
Adquirir linha de base para equilbrio do sistema
Acessar e checar um programa realizando pequenas alteraes como vazo
Acessar um mtodo
Criar/ modificar uma sequencia
60 Treinamento Bsico
Fazer o setup, verificar (Ready Check) e rodar um batch
Realizar modificaes bsicas no editor QNT (TR, componentes)
Calibrar um mtodo
Verificar os relatrios das amostras no modo QNT
Verificar e selecionar reports para impresso
Carregar e salvar definies de relatrio
Colocar o sistema em shutdown atravs do painel de controle
Funes bsicas do Windows (clique direito, copiar/colar, arrastar/ soltar, F9)
Realizar backup da datasource ou das sequencias individuais
Cliente sabe como obter suporte tcnico SIM NO
Sistema instalado e testado com todos os componentes adquiridos SIM NO
Comentrios:__________________________________________________________
_____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
Formas de atendimento tcnico ps perodo de garantia (avulso e contrato) foram
compreendidos pelo cliente SIM NO
Cliente sabe como adquirir informaes sobre cursos e treinamentos acessando os
sites (www.dionex.com.br e www.dionex.com) SIM NO
Cliente acredita que a instalao foi bem sucedida SIM NO
Comentrios:__________________________________________________________
_____________________________________________________________________
De acordo:
Cliente:_______________________________ Data:________________________
Tcnico de Suporte:_____________________ Data:________________________
Comentrios: