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PRACTICA N 4

MEDIOS DE CULTIVO

1. OBJETIVOS

Explicar el concepto de medio de cultivo en microbiologa
Realizar el cultivo de microorganismos con diferentes muestras para su
multiplicacin e identificacin

2. MARCO TEORICO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. Puesto que la diversidad metablica de los microorganismos es enorme,
la variedad de medios de cultivo es tambin muy grande. La mayora de los medios de
cultivo se comercializan en forma de liofilizados que es preciso rehidratar.

La preparacin de un medio de cultivo se reduce en general a pesar la cantidad de medio y
redisolverla en agua destilada (libre de inhibidores del crecimiento) siguiendo las
instrucciones del fabricante. Las sustancias termolbiles se esterilizan por filtracin y se
aaden al resto de los componentes previamente esterilizados en el autoclave.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.

Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:

a) Agar : Se utiliza como agente solidificante. Es un polisacrido que se obtiene
de ciertas algas marinas. Las bacterias no son capaces de degradarlo.

b) Azcares: Son una fuente de carbono para los microorganismos. Los ms
empleados son la glucosa, la lactosa y la sacarosa.

c) Extractos: Son preparados de ciertos rganos o tejidos animales o vegetales
obtenidos con agua y calor. Ej.: extracto de carne, de levadura, de malta, etc.


d) Peptonas: Son protenas hidrolizadas, se obtienen por digestin qumica o
enzimtica de protenas animales o vegetales.

e) Fluidos corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos
microorganismos patgenos.

f) Sistemas amortiguadores: Son sales que se aaden al medio para mantener el
pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano. Ej.: fosfatos bisdicos
o bipotsicos.

g) Indicadores de pH: Son indicadores cido-base que se aaden para detectar
cambios de pH en el medio.

h) Agentes reductores: Sustancias que se aaden al medio para crear las
condiciones que permitan el desarrollo de los grmenes microaerfilos o
anaerobios. Ej.: cistena y tioglicolato.


2.1. Clasificacin

2.1.1. Segn sus cualidades fsicas

a) Lquidos
b) Semislidos
c) Solidos


2.1.2. Segn formulacin

a) Qumicamente definidos: Se conoce la cantidad exacta de cada uno
de los compuestos que hay en el medio

b) Complejos: Se realizan a partir de extractos naturales (extracto
de levadura, sangre, etc.); no se conoce exactamente cul es la
composicin del medio; sin embargo, presenta la ventaja de que ya
estn presentes todos o casi todos los elementos que una clula
puede requerir.





2.1.3. Segn su uso

a) Medio general: Medio en donde crecen todo tipo de
microorganismos, excepto los que necesitan condiciones especiales
(por ejemplo, agar CLED).

b) Medio selectivo: Permite seleccionar el crecimiento de una especie o
grupo determinado (hongos, bacterias entricas, protozoos...)

c) Medio diferencial: Permite identificar una especie con otra, ambas
en el mismo medio. Puede ser por su crecimiento, su metabolismo,su
respiracin, etc. (por ejemplo, medio de McConkey).

d) Medio de enriquecimiento: Contiene los nutrientes necesarios para
apoyar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se
utiliza para la cosecha de diferentes tipos de microorganismos en un
mismo medio.

e) Medio mnimo: Contiene la mnima cantidad de nutrientes posible
que permite el crecimiento de una especie.

f) Medio de transporte: Preparado para servir como almacenamiento
temporal a especmenes transportados o en transferencia; mantienen
su viabilidad y su concentracin























3. MATERIALES

Mechero de Bunsen
Placa Petri
Balanza analtica
Alcohol, algodn, pabilo
Vial
Gradilla
Medios de cultivo
Autoclave
































4. PROCEDIMIENTO

4.1. Preparacin y esterilizacin de medios de cultivo

a) Pesar cada uno de los componentes del medio de cultivo, llevarlos hacia un
matraz y adicionar la cantidad necesaria de agua destilada
b) Disolver en bao mara y dejar enfriar
c) Colocar un tapn de algodn en el extremo superior del matraz, cubrirlo con
papel y asegurarlo con pabilo.
d) Esterilizar en autoclave a 121 C, 15 libras de presin durante 15 minutos.





































4.2. Metodologa para servir los medios de cultivo

a) Se comienza a desinfectar la mesa donde se servir el cultivo
b) Se enciende el mechero para esterilizar la zona
c) Se comienza a servir en placas Petri, en viales previamente esterilizados y en
caso de los viales se deja en superficie inclinada
d) Dejamos solidificar
























4.3. Control de esterilidad de los medios de cultivo servidos

a) Acondicionar los medios de cultivo servidos e incubar durante 24 hrs a 30C
b) Observar y descartar los medios que presenten desarrollo de algn
microorganismo (contaminante)
























5. CONCLUCIONES

Aprendimos que los medios de cultivo son uno de los mtodos ms usados
para el anlisis de microorganismos con varios fines, como el de multiplicacin,
identificacin, antibiograma, entre otros, y puede ofrecer informacin valiosa
sobre los mismos si se realiza de manera adecuada e higinica para evitar la
contaminacin del medio y la alteracin de los resultados.

6. BIBLIOGRAFIA

http://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/manual.pdf