1.

Introduccin
Sarcocystis sp es un parasito perteneciente a phylum Apicomplexa,
conjuntamente con Toxoplasma gondii y Neospora caninum, tiene su ciclo de
vida indirecto, es decir de tipo predador-presa. Afecta a una amplia gama de
mamferos que actan como hospederos intermediarios, donde se lleva acabo
la fase asexual y se desarrollan los quistes que se ubican en la musculatura
esqueltica y cardiaca !egua et al, "#$#%. !os carnvoros gatos y perros%, en
su mayora actan como hospederos definitivos, desarrollando la fase sexual
del par&sito, liberando al medio ambiente esporoquistes u ooquistes infectivos.
'n el (er, se ha reportado la presencia de )arcocistiosis en diferentes
especies domsticas. 'n camlidos sudamericanos *)A%, se han reportado
tres especies+ Sarcocystis tilopodi sin Sarcocystis guanicoecanis%, ocasiona
quistes macrosc,picos en guanacos, mientras en alpacas y llamas se presenta
S. lamacanis que produce quistes de menor tama-o microquistes% son de
r&pido desarrollo y tienden a locali.arse en la musculatura cardiaca y S.
aucheniae produce quistes macrosc,picos de /." a " centmetro de largo, de
un color blanco con apariencia de un grano de arro. compacto, los que tiende
a crecer lentamente y se encuentra presente principalmente en el es,fago,
cuello, costillas, bra.uelo, lomo, pierna o cualquier lugar del msculo
esqueltico 0uerrero y 1ern&nde.., "#234 *astro, "#354 6hite, "##$%. 'stos
quistes se observan a simple vista, por tal motivo, ocasiona grandes perdidas
econ,micas por el decomiso por parte del inspector veterinario 7ilca, "##"%4
1
as como, al recha.o en su consumo debido a su mal aspecto de la carne,
limit&ndose su comerciali.aci,n, a pesar de los beneficios que presenta debido
a su alto valor proteico y bajo contenido de colesterol comparando con otras
carnes rojas !egua et al, "#$#%
'sta parasitosis se diagn,stica observando los quistes presentes en la
carcasa4 sin embargo una tcnica de diagn,stico de S. aucheniae en el animal
vivo, fue reali.ada por )am "#$$%, quien lleg, a caracteri.ar parcialmente los
componentes antignicos del quiste y estandari.ar la prueba de '!8)A, la cual
viene siendo utili.ada como tcnica est&ndar de diagn,stico. )in embargo,
esta tcnica muestra reacci,n cru.ada entre las especies de S. lamacanis y S.
aucheniae )am, "#$$%. A pesar que 1ung 9//:% mediante la tcnica de (*;,
remarca la diferencia antignica entre ambas especies y a partir de esa
premisa ha elaborado una vacuna, la cual se encuentra en fase experimental.
;ecientemente se han hallado diferencias biol,gicas significativas en
perros inoculados con macroquistes de Sarcocystis aucheniae de diferentes
tama-os grandes y peque-os *ornejo et al., 9//3%. <otivo por el cual, el
presente estudio tuvo como objetivo evaluar la respuesta inmune de
macroquistes peque-os y grandes de S aucheniae4 utili.ando tres protocolos
de inoculaci,n
2
II. Revisin Literaria
2.1 Sarcocistiosis:
!a sarcocistiosis es una infecci,n parasitaria causada por varias
especies de proto.oos del gnero )arcocystis4 de amplia distribuci,n mundial
*ordero del *ampillo et al., "###%. =ue reportada por primera ve. en )ui.a
"$5>% por <iesher, quien encontr, en el msculo esqueltico del rat,n Mus
musculus%, lo que llego a conocerse como tbulos de <iesher ?ubey, "#324
!evine, "#$2%.
'l genero )arcocystis esta compuesta por mas de ">/ especies @enter,
"##:%, los cuales se diferencian en el grado de patogenecidad, estructura y en
su ciclo de vida. !evine "#$2% hace referencia de los siguientes autores que
proponen la siguiente clasificaci,n taxon,mica+
(hylum A(8*A<(!'BA !evine, "#3/
*lase )(A;ACAA)8?A !eucDart, "$3#
)ubclase *A**8?8A)8EA !eucDart, "$3#
Arden 'F*A**8?8A;8EA !ger y ?iboscq, "#"/
)uborden '8<';8A;8EA !ger, "#""
=amilia )A;*A*G)@8?A' (oche, "#">
)ubfamilia )A;*A*G)@8EA' (oche, "#">
0nero )A;*A*G)@8), !anDester, "$$9
3
'n el caso de Sarcocystis aucheniae se describe en "#/> por Hrumpt
como nombre especifico de todos los sarcocystis de camlidos sudamericanos
@orres et al., "#$"%, posteriormente en "#$# !egua et al.4 proponen llamar S.
aucheniae a aquel que produce macroquistes en las fibras musculares
esquelticas y son de Imaduraci,n lentaJ y S. lamacanis a aquel que produce
microquistes en la musculatura cardiaca y son de maduraci,n r&pida. !a
terminologa se utili.a por ser observables a simple vista los macroquistes a
partir del a-o y medio 0uerrero y 1ern&nde., "#234 !egua y *lavo, "#$#4
!egua y Arvalo, "##/4 !a (erle et al., "###%.
2.2 Especies de Sarcocystis:
!a mayor parte de )arcocystis encontrados en animales domsticos son
especie-especfico para sus hospedadores intermediarios y familia-especfico
para hospedadores definitivos. )in embargo los hospedadores intermediarios
as como tambin los definitivos pueden ser infectados por diferentes
)arcocystis sp. Eo explic&ndose aun como diferentes )arcocystis infectan a un
mismo hospedador @enter, "##:%.
!a denominaci,n de las distintas especies del gnero, es por la
combinaci,n de los nombres genricos de los hospedadores intermediarios
con los definitivos, es decir, dicha denominaci,n indica la relaci,n biol,gica que
existe entre ambos. (or ejemplo, que un sarcosporidio que reali.a el ciclo entre
oveja y perro habra que denominarlo S. ovicanis *ordero del *ampillo et al.,
"###%. Eumerosas especies fueron llevadas a esta nueva denominaci,n
creando confusi,n entonces se dio prioridad al *,digo 8nternacional de
Eomenclatura Cool,gica, haciendo prevalecer el nombre original, invalidando
parte de las nuevas denominaciones que son transformadas en sin,nimos.
4
'n el caso de bovinos se han reportado tres especies de Sarcocystis:
Sarcocystis cruzi sin S. bovicanis. Sarcocystis hirsuta sin S. bovifelis, y el
Sarcocystis hominis sin S. bovihominis )oulsby, "#$3%. )iendo el mas
pat,geno Sarcocystis cruzi, el cual produce cuadros clnicos agudos tanto
naturalmente como experimentalmente )oulsby, "#$34 ?ubey, "#$#%.
!os ovinos pueden ser parasitados por cuatro especies de sarcocystis+
Sarcocystis tenella sin S. ovicanis, Sarcocystis gigantea sin S. ovifelis, S.
arieticanis y S. medusiformis. )iendo el Sarcocystis ovicanis el mas pat,geno,
que produce microquistes !evine, "#$24 ?ubey, "#$#% Sarcocystis tenella y
Sarcocystis gigantea son de distribuci,n mundial, Sarcocystis arieticanis ha
sido encontrado en 'uropa, Australia, Eueva Celanda y los 'stados Fnidos4 y
el Sarcocystis medusiformis ha sido encontrado en Australia y Eueva Celanda
?ubey et al, "#$#%
!os caprinos pueden ser parasitados por tres especies+ Sarcocystis
capracanis, Sarcocystis hircicanis y el Sarcocystis caprafelis S. movei%,
!evine, "#$2%.
!os porcinos pueden ser parasitados por tres especies+ Sarcocystis
miescheriana sin. S. suicanis% cuyo hospedador definitivo es el perro, lobo,
.orro y mapache4 mientras que para el4 S. porcifelis es el gato y S. suihominis,
que tiene al hombre chimpanc, mono rhesus como hospedador definitivo
!evine, "#$24 )oulsby, "#$3%.
'n los equinos se han reportado infecciones por Sarcocystis bertrami,
Sarcocystis equicanis y Sarcocystis fayeri, los cuales tienen como hospedero
definitivo al perro !evine, "#$24 )oulsby "#$34 ?ubey, "#$#%. )in embargo,
5
algunos autores consideran que los equinos son infectados por una sola
especie de )arcocystis y que el tama-o de los quistes as como su morfologa
no son suficiente para la diferenciaci,n del Sarcocystis sp. 'n equinos @enter,
"##:% tambin se ha descrito Sarcocystis neurona en donde los equinos
actan como hospederos aberrantes porque solo se han encontrado con ellos
esqui.ontes y mero.oitos no quiste% ?ubey et al., "##"4 ?ubey et al., 9//"%.
)arcocystis sp. ?etectados tambin en+ venados ?ubey et al, "#$#%,
quidos ?avis et al., "##"% ceb Adening et al., "##2%, bfalo de agua
1uong et al., "##3%, bisonte =isher y Adenning., "##$%, jirafa Hengins et al.,
"##$%, lagarto 7olf et al., "##$%, nutria marina !indsay et al., 9//"%, mapaches
1amir y ?ubey., 9//"%, periquitos ?ubey et al., 9//"%. Armadillo @amhauser
et al., 9//"% y en humanos AgarKal y )rivastava, "#$>%.
'l hombre es el hospedero definitivo de Sarcocystis bovihominis y
Sarcocystis suihominis. (ero al parecer acta tambin como hospedador
intermediario del Sarcocystis lindemanni, que desarrolla sarcoquistes en sus
msculos esquelticos. )e desconoce el hospedero definitivo del sarcocystis
lindemanni )oulsby, "#$34 @ello, 9///%.
'n el caso de camlidos sudamericanos se han reportado tres especies
de Sarcocystis+ en alpacas y llamas encontramos Sarcocystis aucheniae
@orres et al., "#$"% que produce quistes macrosc,picos y Sarcocystis
lamacanis, propuesta por !egua et al. "#$#%, la cual produce quistes
microsc,picos y el Sarcocystis tilopodi, sin Sarcocystis guanicoecanis%
reportados en guanacos en Argentina Luiroga et al., "#2#%. <ientras que
1ung. 9//:%, ;eali.o un an&lisis filogentico de las especies de )arcocystis
que afectan a las alpacas, basando el estudio en el gen de la subunidad
6
peque-a del ;EA ribosomal ))F r;EA%, y determin, que la especie
productora de microquistes designada como S. lamacanis% pertenece a otra
especie, diferente a la que produce macroquistes S. aucheniae%4 es decir que
ambas constituyen especies diferentes.
2.3 Caractersticas Morfolicas del !arasito:
Sarcocystis aucheniae dentro de su ciclo biol,gico tiene diferentes
formas parasitarias y estas son+
2.3.1 "o#uistes
!os ooquistes est&n esporulados cuando son eliminados en las heces y
contienen dos esporoquistes, cada uno con cuatro esporo.oitos Frquhart et
al., 9//"%. )e encuentran libres en las heces4 los cuales se pueden identificar
morfol,gicamente porque tienen un tama-o aproximado de "9-"2 x #-""um.
)on elipsoides, carecen de cuerpo de stidae y en su interior tienen aparte de
los esporo.oitos, contienen un residuo granular disperso en forma de m,rula,
ubicado lateralmente en cada uno de los polos *ordero del campillo et al.,
"###%. 'n el caso de Sarcocystis aucheniae las medidas de los esporoquistes
son ":,"2 -"2,"/ x "/,5$-"",9/ 6hite, "##$%
!os esqui.ontes que se encuentran en clulas endoteliales de los
hospederos intermediarios son de peque-o tama-o y mide de 9-$ um. ?e
di&metro Frquhart et al., 9//"%.
7
2. 3.2 $uistes
!os quistes que se encuentran en la musculatura esqueltica
generalmente se locali.an mayormente en el cuello, es,fago, muslo,
intercostales y diafragma 7alderrama, "###% del hospedero intermediario y
tiene forma de granos de arro. Harriga 9//9% llegando a medir de /," M "cm
de largo a mas !egua, "##"%. (resentan > tipos de bradi.oitos o cisto.oitos4
cisto.oito ameboideo, cisto.oito redondo o metro.oito y el cisto.oito en forma
de pl&tano, que presentaron diferencias en cuanto a forma, densidad
electr,nica y organelas <elo et al., "##9%. )on de forma ovoide o esferoidal,
contiene una estructura compleja4 posee una c&psula con digitaciones externas
citofanereas% las que varan en nmero largo y grosor4 de la misma c&psula se
desprende tabiques incompletos dirigidos al centro, entre los que se ubican los
paquetes de par&sitos, recibiendo aqu el nombre de mero.oitos, quisto.oitos o
bradi.oitos Atas, "##:%. )egn estudio reali.ado con microscopio electr,nico,
se ha podido determinar las ultraestructuras tanto externas como internas del
macroquiste de Sarcocystis aucheniae.
'n un estudio de la biologa celular de )arcocystis sp reali.ado por <elo
9//>% utili.ando microscopia ,ptica y electr,nica. 'n el msculo estriado de la
alpaca ama pacos% se determino la presencia de 5 tipos de pared qustica en
los quistes maduros aislados de msculo esqueltico. !os macroquistes tipo "
tienen profusiones ramificadas o de coliflor y los macroquistes tipo 9 tienen las
profusiones en forma de lengua4 ambos tipos de macroquistes presentaban
una capa estriada en al superficie de la protusion. !os microquistes maduros
presentaron 9 tipos de pared qustica, uno de ellos, el tipo > presento
protusiones cortas similar a dedos cortos regordetes con protuberancias
cilndricas delgadas que en cortes transversales le dan la apariencia de tim,n
de barco4 el tipo 5 presento profusiones delgadas y cortas.
8
2.% Ciclo &iolico:
!os miembros de este genero son proto.oo intracelulares obligatorios y
como toda coccdea, su ciclo de vida consiste en merogonia, gametogonia y
esperogonia @enter, "##:%. 'l sarcocystis sp es de ciclo indirecto, requiere de
dos hospedadores obligatorios donde se desarrollan el estadio sexual
predador, hospedador definitivo% y el estado asexual presa, hospedador
intermediario%, !egua, et al., "#$#%.
'l par&sito vive y se reproduce sexualmente en el intestino del perro y
elimina grandes cantidades de esporoquistes en las heces dependiendo del
sarcocystis de camlido y de la evoluci,n de infecci,n en el perro. !a
eliminaci,n continua por un periodo de 5-$ semanas, luego de la cual se
produce la reproducci,n espont&nea 6hite, "##$%.
'l hospedador definitivo se infecta al alimentarse de un animal presa% o
carne infectada con sarcocystis, los bradi.oitos son liberados por la digesti,n
en el estomago e intestino del predador, estos se mueven activamente e
ingresan a la pared intestinal donde se dividen en gametos femenino y
masculino%. !a gametogonia se produce durante las primeras "$ horas
*ordero del *ampillo et al., "###%. (roducindose luego la fecundaci,n y
dando como resultado los ooquistes .igotes%. !os cuales esporulan en la
lamina propia del intestino produciendo dos esporoquistes y cada uno con
cuatro esporo.oitos y al (oseer una membrana muy fr&gil esta se romper& en
el transito intestinal y dejaran libres a los esporoquistes los cuales se observan
en mayor proporci,n en las heces. 'l periodo prepatente es de 3-"9 das y el
pasaje de ooquistes dura entre ":-5: das !evine, "#$24 )oulsby, "#$34
?ubey, "#$#4 ;ojas, "##/4 <ehlorn, "##>4 Harriga, 9//9%. 'n el caso de
Sarcocystis aucheniae el periodo prepatente es de "" a 9/ das y el patente de
9/ a 5" das !egua et al., "#$#%.
'n el estudio reali.ado por *ornejo et al., 9//3%, clasific, a los
macroquistes de S. aucheniae en peque-os "->mm% y grandes N:mm% para
evaluar la relaci,n de estos con su viabilidad en caninos4 demostrando que los
9
de menor tama-o presentaban un perodo prepatente (((% mas corto ""-"9
das% que los que recibieron macroquistes de mayor tama-o ":-"$ das%.
Adem&s, que la carga de esporoquistes eliminados en las heces de perros
infectados con los macroquistes peque-os fue mayor en comparaci,n con los
macroquistes grandes y se encontr, una mayor mortalidad en caninos
infectados con macroquistes peque-os de S. aucheniae.
'l hospedador intermediario adquiere la infecci,n al ingerir alimento
pasturas% o agua contaminada con los esporoquistes, liber&ndose los
esporo.oitos en el intestino para luego entrar a la circulaci,n sangunea y
desarrollar la primera generaci,n de esqui.ontes en las clulas endoteliales o
subendoteliales de los vasos sanguneos de casi todos los ,rganos. !os
mero.oitos producidos en la primera generaci,n de esqui.ontes entran a
nuevas clulas endoteliales y subendoteliales donde se reali.a la segunda
generaci,n de esqui.ontes. !a segunda generaci,n de mero.oitos entran a la
clulas musculares esquelticas, cardacas y algunas veces tambin en las
clulas del sistema nervioso central donde se reali.a la tercera generaci,n de
esqui.ontes, la que finalmente termina conformado el quiste sarcoquiste% que
pueden ser microquistes yOo macroquistes, en cuyo interior se forma los
bradi.oitos o cisto.oitos. *on la ingesti,n del sarcoquiste por el predador, se
cierra el ciclo. ?e la ingesti,n de esporoquistes a la presencia de bradi.oitos
infectantes en los msculos de los hospederos intermediarios generalmente
son de 9-> meses pero pueden extenderse en "9 meses en algunas especies
!evine ,"#$24 )oulsby, "#$34 ;ojas ,"##/4 *ordero del *ampillo et al, "###
Frquhart et al., 9//"%. 'n alpacas los quistes de S. aucheniae alcan.an su
mayor tama-o y madure. entre "5-"$ meses aproximadamente y S. lamacanis
a partir de los 5-: meses !egua et al., "#$#%.
10
2.' !atoenia y sinos clnicos:
'ntre los factores relacionados a la patogenia. !a especie de
)arcocystis es el mas importante, de ella depende la capacidad de
multiplicaci,n, la locali.aci,n de las merogonias, la proliferaci,n de los
merontes y la posibilidad de alcan.ar el )E*, potencialidad que confieren a las
distintas especies un poder pat,geno mayor o menor *ordero del *ampillo et
al., "###% como en el caso de Sarcocytis neurona en caballos donde el
parasito afecta el )E* produciendo signos clinicos como caminar
tambaleando, incoordinaci,n del tren posterior, ataxia, par&lisis, decbito y
muerte. @ambin juegan un papel importante la dosis infectante, las
reinfestaciones en relaci,n con las especie de sarcocystis ;ojas, "##/%. 'ntre
los factores dependientes del hospedador definitivo est&n el estrs, la
gestaci,n, el estado nutricional, la lactaci,n como predisponentes que
favorecen la gravedad de la infecci,n.
2.'.1 (ospedero definitivo
'l consumo de carne cruda infectada con quistes de )arcocystis puede
ocasionar en perros una enfermedad grave. (resentando un cuadro con fiebre,
falta de apetito, anemia, diarrea sanguinolenta, debilidad, tembladera,
postraci,n y muerte !egua y *asas, "###%.
)e ha constatado que determinadas sustancias obtenidas a partir de
extractos acuosos de bradi.oitos lisados, a los que se les da el nombre de
)arcocistina sustancia proteica al cual posee una endotoxina con actividad
neurotoxina%. *uya acci,n se manifiesta a nivel del msculo cardiaco y tejido
nervioso gastrointestinal !egua et al., "#$#%
11
'xperimentalmente se ha demostrado, que los microquistes de
Sarcocystis lamacanis pueden ser altamente pat,genos en los perros.
*achorros infectados presentaron a los "/ das post infecci,n sntomas
clnicos caracteri.ados por anorexia, pirexia 5"P*.%, palide. de las membranas
mucosas, diarrea mucosanguinolenta, incoordinaci,n y postraci,n, muriendo
dos das despus. A la necroscopia se observo la mucosa del yeyuno e ileon
con contenido biliar, hiperemia, edematosa y congestionada, mucosa del colon
con hemorragia. !os otros cachorros del mismo estudio presentaron una ligera
diarrea mucosa entre los das #-"5 post infecci,n. (or otro lado perros
inoculados con macroquistes de Sarcocystis aucheniae presentaron una
diarrea mucosa !egua et al., "#$#%.
'studios reali.ados por *ornejo et al. 9//$% infectando cachorros con
macroquistes grandes N:mm% y macroquistes peque-os "->mm% obtuvieron
:$Q de mortalidad en cachorros infectados con macroquistes peque-os, frente
al grupo de macroquistes grandes, donde obtuvieron s,lo un >/Q. 'n el caso
de macroquistes peque-os los animales murieron entre "-2 das post infecci,n
y otro animal muri, en el octavo da. <ientras los individuos de macroquistes
grandes murieron a los 2 das post infecci,n y otro cachorro al cuarto da.
@odos mostraron signos clnicos caracteri.ados por prdida de peso, anorexia,
pirexia, palide. de las mucosas, incoordinaci,n y diarreas4 los animales
muertos del grupo de macroquistes grande mostraron diarrea mucosa,
mientras que los del grupo de macroquistes peque-os fueron del tipo diarrea
mucosanguinolenta.
'l consumo de carne infectada, cruda o insuficientemente cocida,
produce en el humano un cuadro de gastroenteritis con nauseas, diarrea,
c,licos y escalofros, sintomatologa aparentemente ocasionada por la acci,n
de una sustancia t,xica contenida en los quistes4 sin embargo, se sostiene que
12
en la carne de alpaca procesada como charqui se pierde la viabilidad del
par&sito y se inactiva la toxina )arcocistina !egua, "##"%. !a sarcocistosis
muscular tambin ocurre en el hombre. )e conocen unos 5/ casos,
distribuidos en diferentes partes del mundo. Eo ha podido determinarse la
especie o especies de )arcocystis causantes de esta infecci,n Heaver et al.,
"#3# citado por Acha y ).yfres, "#$2%.
2.'.2 (ospedero inter)ediario
'n el hospedero intermediario esta enfermedad ha sido considerada
tradicionalmente de escasa importancia patol,gica, sin embarg,, se ha
demostrado que causa destrucci,n masiva del endotelio vascular de capilares
y arteriolas de casi todos los ,rganos del animal, como consecuencia de la
reproducci,n asexual del par&sito !egua y *asas, "###%. @ambin la muerte
puede ser inducida natural o experimentalmente por especies patognicas de
)arcocystis cuando un gran numero de esporoquistes es ingerido en un corto
periodo de tiempo.
!a multiplicaci,n del par&sito las esqui.ogonias% en las clulas
endoteliales determina la rotura de las clulas hospedadoras radicadas en la
intima del vaso, causando endoarteritis y aumento de la permeabilidad capilar,
que favorece la salida de lquidos, sangre y clulas m,viles. 'n algunos casos,
se producen alteraciones morfol,gicas mas profundas que afectan a la capa
muscular, con vacuoli.aci,n e infiltraci,n leucocitaria en la tnica media, sobre
todo en los vasos de mediano calibre. !os restos de clulas rotas que
13
permanecen en la pared de las arterias, como los liberados a la corriente,
desencadenan en vasos peque-os y capilares un aumento de la presi,n
sangunea por obstrucci,n de su lu. y, consecuentemente, edemas y
hemorragias *ordero del *ampillo et al., "###%. !a fiebre acompa-a la
parasitemia y en la enfermedad experimental coincide con el momento de
maduraci,n de los esqui.ontes de primera y segunda generaci,n. !a lesi,n
vascular parece constituir una parte esencial de la patogenia de la
enfermedad. )e ha propuesto que el parasito induce un retraso del crecimiento
debido a las modificaciones en las concentraciones plasm&ticas de
somatostatina hormona que se libera en el hipotalamo y controla a la hormona
del crecimiento% y de hormona del crecimiento, as como a las alteraciones en
las interacciones de las citocinas con el sistema endocrino =ayer y 'lasser,
"##"%.
Fna respuesta restauradora de la endoarteritis de la activaci,n del
fen,meno de fijaci,n de los trombocitos y de los sistemas de coagulaci,n
sanguneos que estimulan la formaci,n de microtrombos y retardan el flujo
sanguneo, causantes de una coagulopata sistmica coagulaci,n
intravascular diseminada% con propensi,n a las hemorragias. ?urante el
proceso de coagulaci,n se producen sustancias, como el factor B88 de
1ageman, que aparte de provocar la producci,n de sustancias vasoactivas
que favorecen al aumento de permeabilidad capilar, activa el sistema de
fibrin,lisis y consecuentemente el inicio de la cascada del complemento, donde
algunos de sus componentes tiene tambin acciones quimiotacticas y
vasoactivas, coadyuvantes en la formaci,n e incremento de los edemas,
hemorragias y &reas de infiltraci,n leucocitaria cuadro 8%
Algunos autores han apuntado, adem&s, la participaci,n de fen,menos
inmunitarios, en los que los antgenos liberados por las formas parasitarias
intracelulares serian procesados por la clula hospedadora endotelial, que
14
actuara como clula presentadora de antgenos, que junto con los antgenos
de tipo 88 del complejo mayor de histocompatibilidad *<1% locali.ados en su
superficie, podran ser reconocidos por linfocitos @ sensibili.ados, con
capacidad para liberar linfocinas. 'l resultado es una respuesta inmunitaria
agresiva que tiene en el endotelio vascular, como la descrita en ri-,n, hgado y
pulm,n del ganado vacuno, caracteri.ada por una reacci,n inflamatoria local,
con acumulaci,n de mononucleares en los tejidos vasculares, semejante a una
reacci,n de hipersensibilidad tipo 87. *ordero del *ampillo et al., "###%
*uando la fase proliferativa de los sarcocystis se produce en hembras
gestantes, la multiplicaci,n asexual tiene lugar en los cotiledones de la
placenta, en las clulas mioepiteliales y raramente, en los anejos fetales. 'l
resultado es la aparici,n de amplias &reas de infiltraci,n de mononucleares y
necrosis titulares. Fna consecuencia de dichas lesiones son las muertes
fetales y los abortos, generalmente hacia la segunda mitad de la gestaci,n
Hottner et al, "#$3%.
!a fase qustica es caracteri.ada por dos tipos de lesiones+ la miositis
eosinofilica y la formaci,n de granulomas. !a primera ha sido descrita
frecuentemente en la vaca y espor&dicamente en oveja y cabra, y se ha
relacionado con la existencia de altos niveles de 8g' y altas intensidades de
parasitaci,n muscular. 's mas propia de animales infectados naturalmente,
sometidos a infecciones reiteradas, que de animales infectados
experimentalmente. 'l otro tipo de reacci,n, mas frecuente y constante, es la
infiltraci,n perivascular de mononucleares y en las .ona perifricas de las
fibras musculares parasitadas aparentemente sanas. !a reacci,n mas notable
se produce en las clulas musculares en proceso de degeneraci,n, con quistes
abiertos, donde abundan los neutr,filos y mononucleares, entre los que
15
destacan los macr,fagos. 'stos procesos evolucionan hacia la formaci,n de
granulomas de clulas gigantes, o hacia la fibrosis y calcificaciones que
dificultan la fisiologa de la contracci,n muscular *ordero del campillo et al.,
"##$%.
!a aparici,n de miodistrofias, m&s o menos generali.adas, conducen a
la aparici,n de trastornos relacionados con el lugar en que se asientan. ?e
esta manera se pueden detectar trastornos de la masticaci,n, insalivaci,n y
degluci,n, cuando las miodistrofias se locali.an en la musculatura de la cara,
lengua, faringe y es,fago4 trastornos de la micci,n, por ejemplo anuria, cuando
afectan el esfnter vesical4 de la locomoci,n, cuando afectan la musculatura
esqueltica, e incluso de al funcionalidad cardiaca ;adostis et al., 9//9%
!os sarcoquistes inmaduros en el msculo se pueden detectar a los 5:-
2/ das de la ingesti,n de esporoquistes, y son infectivos aproximadamente a
los 3/ das. =ayer y ?ubey, "#$2%.
!a locali.aci,n de los quistes en el )E* determina la aparici,n de una
meningoencefalitis no purulenta causante de las alteraciones neurol,gicas que
acompa-a, en muchos casos a las sarcocistiosis ;adostis et al., 9//9%
(or otra parte, se ha constatado que determinadas sustancias obtenidas
a partir de extractos acuosos de bradi.oitos lisados )am, "#$$% a las que se
les ha dado el nombre genrico de sarcocistina, cuando se administra
intravenoso a conejos, son capaces de producir hemorragias, par&lisis,
edemas e incluso la muerte. (osiblemente la ruptura de los quistes con
liberaci,n y muerte de los bradi.oitos, bastante frecuente tanto en infecciones
naturales como experimentales, podran tener una acci,n toxica semejante a la
descrita por 7on Hrand "#3#%.
16
!a gravedad de la enfermedad y el grado de infecci,n de los tejidos que
se observa en la necropsia en los casos inducidos experimentalmente
aumentan en relaci,n con el tama-o de la dosis infectiva. 'l numero de
infecciones asintom&ticas probablemente refleja la ingesti,n inicial de unos
pocos esporoquistes que provocan un fuerte estado de inmunidad frente a los
estmulos posteriores. !os brotes de la enfermedad clnica son probables
cuando los grupos de los animales que no han presentado exposici,n previa a
la infecci,n son puestos sbitamente en contacto con una contaminaci,n
intensa, especialmente la producida por perros y gatos !eguia et al., 9//"%
'studios reali.ados para conocer los signos clnicos de esta enfermedad,
concluyen que se pueden dividir en sobreaguda, aguda y cr,nica ?ubey,
"#$#%.
!os signos clnicos de la enfermedad sobreaguda no son muy
evidentes, caracteri.ados principalmente por fiebre recurrente que coinciden
con la parasitemia y leve lesi,n org&nica ;adostis et al., 9//9%.
!a fase aguda de la enfermedad es la mas peligrosa, dependiendo de la
cantidad de esporoquistes ingeridos !egua y *lavo, "#$#% y la edad del
animal *astro et al., 9//5%, presentando fiebre, salivaci,n, anemia, anorexia,
disminuci,n de la producci,n, disminuci,n de la ganancia de peso, perdida de
peso, aborto, postraci,n y muerte generalmente 9/ a >/ das despus de la
infecci,n. 'stos sntomas se producen cuando el parasito en su fase de
segunda generaci,n de esqui.ontes sale al torrente sanguneo, destruyendo
muchas clulas del epitelio vascular arterias% provocando mltiples
hemorragias en diferentes ,rganos del cuerpo )am, "#$$4 ?ubey, "#$#4
!egua y *lavo, "#$#%.
17
!a fase cr,nica no tiene signos clnicos visibles, se manifiesta cuando la
alpaca consume peque-as cantidades de esporoquistes durante largo tiempo,
produciendo peque-as hemorragias internas no detectables y se manifiestan
con retardo en su desarrollo, poca ganancia de peso, fatiga, dificultad para
respirar despus de caminatas normales ;amre. et al., "##$4 !egua y *lavo,
"#$#%. 'sta fase se relaciona con la presencia de quistes como grano de arro.,
blanquecinos, en la musculatura esqueltica y cardiaca, continuando
dividindose con un metabolismo bastante alto !egua y *asas, "###%. )e
presume que los signos de la fase cr,nica se deben a la presencia de la toxina
)arcocistina% en la sangre, toxina que es mortal para conejos )am et al.,
"#$$%.
18
Cuadro I: Mecanis)os pato*nicos de la sarcocistiosis
=uente+ *ordero del *ampillo et al., "###%
2.+ Epide)ioloa:
!a )arcocistiosis constituye la principal causa de decomiso de carnes de
camlidos, al igual que en otras especies Alva et al., "#$/4 7ilca, "##"%.
Alva et al., "#$/% se-ala a la )arcocistiosis en segundo lugar como causal de
decomiso de carnes de alpaca infectada con Sarcocystis aucheniae, se
decomiso en esa fecha $3$,9/$ Dilos en un a-o en el camal de )anta ;osa
(uno%, a consecuencia de la alta prevalencia $#Q-"//Q% visto en alpacas
!egua y *lavo, "#$#4 *astro et al., 9//5% y #$.5Q en llamas *astro, "#35%.
19
(revalencia que en algunos casos llega al "//Q de los animales mayores de 9
a-os de edad <ostajo, "#$>% todo esto revela los altos niveles de
contaminaci,n de los pasti.ales con esta coccdea.
2.+.1 ,rans)isin:
!a estrecha convivencia que hay entre las alpacas, llama con los perros,
y la alimentaci,n de estos con carne infectada favorece la transmisi,n
hori.ontal% de este par&sito a esto se le adiciona la excesiva poblaci,n de
perros en las .onas ganaderas y la acci,n predadora de .orros4 los cuales no
desarrollan inmunidad, debido a la ausencia de reproducci,n asexual, siendo
reinfectados continuamente, eliminando millones de ooquistes por periodos
prolongados !egua y *asas., "###%.
'xisten grandes niveles de contaminaci,n del medio ambiente con este
par&sito, ya que los perros despus de la ingesti,n de microquistes y
macroquistes eliminan millones de esporoquistes que son inmediatamente
infectivos y por un largo periodo de tiempo !egua et al., "#$#%.
2.+.2 -actores de rieso:
2.+.2.1 Cli)a
;esistentes a las formas ambientales, en condiciones experimentales se
demostr, que pueden sobrevivir a la congelaci,n mas no a la desecaci,n
;adostis et al., 9//9%. 'n consecuencia los esporoquistes pueden sobrevivir
20
por largo tiempo en .onas hmedas, superar el invierno, mas no en climas
secos y calurosos <oro et al., "#$3%.
'stacionalidad este se encuentra en toda las estaciones del a-o, sin
embargo los pastos se contaminan con mayor cantidad de esporoquistes
durante la poca lluviosa, ya que estos lavan el material fecal favoreciendo el
esparcimiento de estos par&sitos <oro et al., "#$34 !egua y *lavo, "#$#%.
2.+.2.2 Edad de los .ni)ales
)e ha comprobado que al edad representa un factor de riesgo de la
infecci,n *astro et al., 9//5%. !a alpaca puede contraer la enfermedad desde
el nacimiento, al recibir muy poca protecci,n a travs del calostro !egua y
*lavo, "#$#%
Sarcocystis aucheniae es no pat,geno sin embargo a la hora de beneficiar los
animales se encuentran infecciones masivas en la carne del camlido,
reflejadas por gran cantidad de quistes que suscitan perdidas econ,micas en
la inspecci,n y muchas veces el decomiso de las carnes, perdiendo su valor
comercial 0uerrero, "#3"4 Alva et al., "#$/4 !egua y *lavo, "#$#%.
2.+.3. El siste)a de )ane/o
'n *)A se especula la posibilidad de la crian.a conjunta de alpacas,
llamas, perros sirva de determnate de la alta prevalencia de la infecci,n4 pero
no se descarta la participaci,n de canidos silvestres !egua et al., "#$#%.
21
'n el hospedero definitivo adquiere principalmente la infecci,n en ambientes
rurales por la practica frecuente de alimentar con restos de camales, tro.os de
huesos, despojos, recortes de pie.as c&rnicas y vsceras crudas conteniendo
quistes Atas, "##:%. !a falta de mataderos o camales en algunas .onas
altoandinas. 1ace que se practique la matan.a clandestina o domiciliaria, as
como tambin los camales dentro de los centros urbanos donde los perros
vagabundos roban la carne y vsceras enfermas decomisadas !egua y *lavo,
"#$#4 !egua y *asas, "###%.
!os perros no desarrollan inmunidad protectora, as que pueden
infectarse cada ve. que comen carne cruda con quistes, es decir se pueden
reinfectar continuamente, resultando una nueva onda de ooquistes que
contamina el ambiente resultando en un excelente difusor del parasito !egua
y *lavo, "#$#4 ;ojas, "##/%. 'l hombre, gato, felinos silvestres, hasta donde se
conocen no intervienen en el ciclo de los )arcocystis de *)A. !egua et al.,
"#$#%.
2.0 In)unolia.
2.0.1 Estructura .nti*nica
!os componentes antignicos del Sarcocystis aucheniae fueron
caracteri.ados parcialmente mediante la separaci,n electrofortica en el gel
)?) poliacrilamida al "/Q que revelo la existencia # polipptidos en el rango
de "> R?a a "95 R?a de peso molecular para el lisado de macroquistes y 3
polipptidos entre "9 R?a a ">/ R?a para el lisado de microquistes. 'stas
protenas transferidas a la membrana de nitrocelulosa reaccionaron frente a los
sueros anti-sarcocystis. (or otro lado, con el an&lisis inmunol,gico de estos
22
antgenos mediante la prueba de inmunodifusi,n doble en gel agar contra
sueros inmuni.ados de conejo, se mostraron tres bandas de precipitaci,n para
el lisado de macroquiste y dos para el microquiste, siendo una de ellas comn
para los dos extractos )am, "#$$%.
'n otro estudio, )am et al "##2% encuentran ": bandas proteicas entre
9: a "93 R?a para lisados de macroquiste de Sarcocystis aucheniae, en gel
)?) (A0' al ":Q. )in embargo, *abrera "##2% encuentra 3 bandas
proteicas de importancia locali.adas entre "#/ a >>.: R?a de peso molecular.
)e ha observado que los )arcocystis son resistentes a la respuesta
inmune del husped y no hay evidencia de una respuesta inmune capa. de
proteger Luiro., 9///%.
!a diversas formas evolutivas que se desarrollan en el transcurso de la
infecci,n, contienen distintos tipos de protenas antignicas, cuyos pesos
moleculares difieren tanto en funci,n de la especie, como en la forma
parasitaria por eso, la detecci,n de anticuerpos circulantes as como su
concentraci,n y evoluci,n, tambin son valores variables, dependiente de las
tcnica empleada como tambin de la fuente de antgeno *ordero del
*ampillo et al., "###%.
's poco conocido los procesos de respuesta inmune especfica contra
infecciones por sarcocystis. 8nvestigaciones han demostrado que se produce
respuesta tanto de linfocitos H como linfocitos @, siendo la respuesta celular
muy importante Fggla y Huxton, "##/%. 'l endotelio infectado por sarcocystis
puede funcionar como clulas presentadoras de antgeno durante la fase
vascular de la proliferaci,n del par&sito.
23
2.0.2.1 Respuesta in)une 1u)oral
!a respuesta inmune humoral se relaciona tambin con el ciclo del parasito. Eo
obstante se han podido comprobar en bovinos la existencia de 8g0 e 8g<. !a
primera se puede detectar a partir de las 5-: semanas, el pico m&ximo se
produce durante el proceso de maduraci,n de los quistes, luego tienden a
descender, aunque manteniendo niveles positivos, para desaparecer a las :-2
meses. !a 8g< es de aparici,n mas preco., sobre las >-5 semanas y su
cintica de producci,n es muy semejante a la de la 8g0, aunque tienden a
desaparecer un poco antes, alrededor de los 9-> meses 0asbarre et al.,
"#$5%. 'n el caso de cerdos se observo que hubo un incremento de 8g< a
partir de los 9" das pi post-infecci,n% y posteriormente un descenso paulatino
hasta el da $/ pi, en que los valores son ya insignificantes. !as 8g0 presentan
valores positivos a partir de los >5 das pi y se mantienen como mnimo hasta
los "2/ das 6eyreter et al., "#$5%. !a reducci,n en el titulo de anticuerpos,
esta posiblemente relacionado con la calcificaci,n de los quistes Luiro.,
9///%.
Fna inmunidad protectora se ha encontrado en cerdos infectados con
dosis subclnicas ",/// esporocistos%. (or lo que son capaces de resistir el
embate de infecciones letales reali.adas a los 5/ das post infecci,n de la
primera. ?icha inmunidad viene definida por la protecci,n del hospedador
frente a la intensidad de las manifestaciones morbosas, pero nunca sobre la
instalaci,n y desarrollo de quistes musculares. *ordero del *ampillo et al.,
"###%.
24
2.0.2.2 Respuesta in)une celular
'n cuanto al inmunidad celular fen,menos de movili.aci,n celular,
principalmente mononucleares, que participan en la resoluci,n del proceso
mediante una inmunidad mediada por clulas, que se produce en los tejidos
parasitados. @ambin se ha comprobado la existencia en la sangre perifrica
de una inmunidad celular especfica, caracteri.ada por una estimulaci,n de la
transformaci,n linfobl&stica, frente a antgenos especficos de sarcocystis que
se mantiene durante un a-o *ordero del *ampillo et al., "###%.
!a intensidad de la respuesta celular vista en animales que
sobrevivieron a desafos letales indica inmunidad mediada por clulas contra
sarcocystis. ?ubey, "#$#%. )e ha estudiado, adem&s4 que en ratones
inoculados con Sarcocystis cruzi, activan a los macr,fagos y producen =E@
alfa y esto tambin puede liberarse por los !() que produce el par&sito
EaDamura et al., "###%.
's evidente que existe una inmunidad humoral y celular detectable in
vitro. )in embargo, cuando se reali.an pruebas in vivo, de transferencia o
administraci,n de sueros hom,logos inmunes, no existe ningn tipo de
inmunidad adquirida y los animales, cuando son infectados, desarrollan un
proceso patol,gico semejante al de los animales no inmuni.ados. 'xiste una
inmunidad protectora, como la que se produce en animales que han sufrido un
proceso subclnico experimental, y por el cual cuando son infectados con dosis
de recuerdo te,ricamente letales, son capaces de resistir el embate de esta
segunda dosis. !a duraci,n de esta inmunidad protectora vara entre >-5
meses segn la especie y es independiente de la existencia de quistes en la
musculatura. !a forma parasitaria responsable de este fen,meno parece ser
25
los merotes de "era generaci,n, pero no se sabe con exactitud, como tampoco
los mecanismos conductuales a la instauraci,n de un estado inmunitario
*ordero del *ampillo et al., "###%.
'n el caso de los camlidos sudamericanos no se han reali.ado
estudios sobre la inmunidad celular. )olamente se anali.o la respuesta de
anticuerpos 8g0 anti )arcocystis en alpacas, con resultados positivos donde se
enfrento por los mtodos de 'lectroinmunotransferencia )am et al., "##2% y
'!8)A *astro et al., 9//5%, sueros colectados de animales vivos contra un
antgeno soluble a partir de macroquistes de Sarcocystis aucheniae.
2.% !*rdidas Econ)icas:
!a sarcocistiosis produce grandes prdidas econ,micas ya sea en la
salud de los animales o en la reducci,n en la calidad y cantidad de la carne,
lana, fibra !egua y Arevalo "##/%. @ambin produce perdidas en el valor
comercial de la carne por el decomiso de la carcasa Alva et al., "#$/%.
!as prdidas anuales estimuladas por el decomiso de carcasas infectadas con
macroquistes de )arcocystis se encuentran bordeando los S>//,/// d,lares
americanos !egua, "##"%. 'n un $/Q se observa la presencia de
macroquistes en alpacas mayores de 9 a-os siendo menor en alpacas
menores del a-o !egua y *asas, "###%.
)e demostr, en un estudio reali.ado en el camal de )anta ;osa lugar
(uno% que una de las causas principales de decomiso de carcasa es por
debido a la presencia de quistes de Sarcocystis aucheniae. Alva et al., "#$/%.
)egn el <inisterio Eacional de Agricultura 9//5% alrededor de :// mil
familias campesinas de la regi,n andina se benefician directamente de la
26
actividad productiva de los camlidos sudamericanos y los ingresos generados
por estos productores fluctan entre >// a :// d,lares por familia al a-o.
2.2 I)portancia en La Salud !34lica:
!a sarcocistiosis esta incluida dentro de las enfermedades trasmitidas
por alimentos '@A% y esta considerado como una .oonosis toxica debido a
que se han reportado evidencia de trastornos gastroentericos en personas que
consumieron carne insuficientemente cocida, infectada con Sarcocystis
aucheniae !egua , "#$#%. ?entro del genero )arcocystis otras especies que
tambin causan cuadros gastrointestinales en los humanos son+ Sarcocystis
suihominis, Sarcocystis bovihominis Atas ,"##:%.
'l humano se infecta por consumir carne poco cocida de res, de cerdo
infectado con Sarcocystis bovihominis y S. suihominis respectivamente Atas,
"##:%. 'n el caso de los individuos que ingieren carne de alpaca, llama
infectada, principalmente ni-os, presentan dolores estomacales, a la ve.
escalofros, nauseas y v,mitos, lo que generalmente los pobladores atribuyen
a la frescura de la carne de la alpaca o llama !egua y *lavo ,"#$#%.
'l hombre al parecer acta como hospedador intermediario del
Sarcocystis lindemanni, que desarrolla sarcoquistes en sus msculos
esquelticos. )e desconoce el hospedero definitivo del sarcocystis lindemanni
)oulsby, "#$34 @ello, 9///%. )arcocistiosis muscular en el hombre ha sido
notificada en 'gipto, 8ndia, <alasia y @ailandia generalmente la presencia es
fortuita y obedece al examen de tejido muscular que se reali.a para investigar
otras causas. )i bien la infecci,n es casi asintom&tica, en algunos casos se ha
27
observado debilidad muscular, dolores musculares, miositis, pericarditis y
tumefacci,n subcut&nea. )in embarg,, en ninguno de los casos hubo pruebas
concluyentes para se-alar a los quistes musculares como causa cierta de
manifestaciones clnicas Acha y )yfres, "#$2%
2.15. 6ianstico:
2.15.1 En el 1ospedero definitivo:
)e reali.a a travs del examen coproparasitologico de los canidos. Alva
et al., "#$"4 *ordero del *ampillo et al., "###% mediante el mtodo de
concentraci,n por flotaci,n con soluci,n a.ucarada ;ojas, "##/%.
(ara diagnosticarse se debe buscar en las deposiciones los ooquistes
maduros de tipo isospora de unos "9-": x "2-9/ yOo los esporoquistes de unos
"9-"/ x ": um con cuatro esporo.oitos en su interior Harriga, 9//9%.
2.15.2 En el 1ospedero inter)ediario:
'l diagnostico in vivo de la )arcocistiosis aguda es difcil toda ve. que
los sntomas no son muy especficos y por tanto, f&cilmente confundibles con
otros procesos patol,gicos. Eo obstante, algunos datos clnicos como la
anemia, fiebre, sialorrea, alopecia e incremento de los niveles de las en.imas
plasm&ticas 0A@, *(R y !?1% pueden ofrecer un valor orientativo ;ojas,
"##/% <as efica. resulta la utili.aci,n conjunta de estos con criterios
epidemiol,gicos donde la existencia de antecedentes de sarcocistiosis
musculares en determinados animales, as como informaci,n obtenida por
an&lisis coprol,gico de los hospedadores definitivos, preferentemente del
perro, son de especial inters para el establecimiento del diagnostico.
28
!as necesidades de diagnosticar la enfermedad en vivo, hi.o que las
investigaciones se dirigieran a desarrollar y estandari.ar pruebas de
diagnostico para detectar anticuerpos contra )arcocystis en animales vivos.
Actualmente se han desarrollado diversas pruebas para la detecci,n de
anticuerpos contra sarcocystis. 'ntre ellas est&n la 1A8, la prueba de 8=8, la
prueba de '!8)A, la prueba de '8@H, y la prueba de Aglutinaci,n ?irecta.
2.15.2.1 ,*cnicas Serolicas:
2.15.2.1.1. !rue4a de .lutinacin Indirecta 7(.I8.
'n un estudio empleando la prueba 1A8 se detecto anticuerpos en
vacas experimentalmente infectadas con sarcocystis. )e empleo antgeno
soluble preparado de bradi.oitos obtenido de cora.,n de bovino infectado
experimentalmente. !os ttulos de 1A8 aumentaron a los >/ das despus de la
infecci,n y tuvieron un m&ximo a los #/ das. )e considero que ttulos de 1A8
"+ "5:$ a mas podran ser considerados como diagnostico significativo de
sarcocistiosis aguda en bovinos. Asimismo, esta prueba no reacciona
positivamente a la presencia de anticuerpos contra @oxoplasma en sueros
positivos en 1A8 para @oxoplasmosis !unde y =ayer, "#33%. 'stos resultados
son similares a los hallados en un brote de )arcocistiosis en bovinos lecheros
en Australia *arrigan ,"#$2%.
2.15.2.1.2 In)unodifusin do4le
@cnica utili.ada para determinar una reacci,n de antgeno y
anticuerpo. )e conocen tres patrones b&sicos de reacci,n+ 8dentidad, no
identidad e identidad parcial. (ara esta prueba se utili.a a.arosa, la cual se
prepara hirviendo lentamente los gr&nulos en un ba-o de agua. !a mayora de
29
los tipos de a.arosa se disuelven a un poco m&s de #/ T* y melifican a 5:T*.
'n el soporte de a.arosa se colocan el antgeno y el anticuerpo siempre es
necesario conocer uno de ellos, pues el desconocido ser& el que se trata de
identificar%4 ambos migran en todas direcciones y cuando encuentran a su
contrario presentan una banda de precipitaci,n f&cilmente observable. 'sta
tcnica constituye la base comn de una gran variedad de tcnicas que
permiten reali.ar desde un an&lisis cualitativo hasta una estimaci,n cuantitativa
de un antgeno Arlando y Ruby, 9//>%.
2.15.2.1.3. !rue4a de ELIS..
!a prueba serol,gica mas utili.ada para el diagnostico de )arcocystis es
la prueba de '!8)A. 'n *hina, se evalu, la prueba de '!8)A para detectar
anticuerpos contra )arcocystis en bovinos infectados naturalmente. !os
resultados de la prueba se compararon con los resultados de la inspecci,n
macrosc,pica y microsc,pica de las carcasas. )e detectaron anticuerpos
especficos en el 3#,9:Q, mientras que bradi.oitos fueron detectados en el
33,>2Q y quistes en el 25.3$Q de los bovinos. !a sensibilidad y especificidad
fueron ##Q y #"Q respectivamente. Eo se detecto reacci,n cru.ada con
anticuerpos contra Toxoplasma gondii )hi et al., "#$3%. (or otro lado en el
(er se desarrollo una prueba de '!8)A con alta sensibilidad para la detecci,n
de anticuerpos contra Sarcocystis aucheniae de alpacas. !a prueba se
estandari.o con antgeno de Sarcocystis aucheniae y suero de conejos
antimacroquistes de Sarcocystis aucheniae )am "#$$, ;amre. et al., "##$%
con al finalidad de mejorar la especificidad en al detecci,n de anticuerpos de
alpacas con la tcnica de '!8)A se estandari.o un mtodo utili.ando (rotena
A conjugada con peroxidada, resultando ser una opci,n confiable ya que fue
capa. de detectar anticuerpos en peque-as cantidades y con buena
especificidad. !,pe. y 0on.&le.., "##9%.
30
)e han comparado dos tipos de antgeno de Sarcocystis cruzi, uno
aislado de mero.oitos y el otro aislado de bradi.oitos, mediante la prueba de
'!8)A en bovinos infectados naturalmente. Ambos antgenos detectaron
anticuerpos pero se obtuvieron mejores resultados para detectar animales
infectados y no infectados con el antgeno de mero.oitos )avini et al., "##2%.
*uando se emplea antgeno de mero.oitos se detecta incrementos en los
niveles de 8g0 mas temprano que cuando se emplea antgenos de bradi.oitos,
que coincide con la presencia de signos clnicos, lo cual hace suponer que 8g0
'lisa usando antgenos de mero.oitos es el adecuado para el diagnostico de
)arcocystis aguda en bovinos )avini et al .,"##2%
'l '!8)A estandari.ado por 1ung 9//:% en un estudio de diagnostico
en alpacas menores de 9 a-os de vida. =ue basado en protenas antignicas
de macroquistes de S. aucheniae y fue capa. de detectar anticuerpos tanto de
S. aucheniae como de S. lamacanis. 'sto es de gran utilidad debido a lo
dificultosa que resulta la obtenci,n de antgeno de S. lamacanis microquistes%.
?onde se concluye tambin que era la prueba de elecci,n en el diagnostico
temprano.
2.15.2.1.%. !rue4a de in)unofluorescencia indirecta 7I-I8
!a prueba de 8=8 resulta mas sensible que la prueba de '!8)A para
periodos mas tempranos en la infecci,n con Sarcocystis muris, entre los "" y
9: das despus de la infecci,n, frente a los "$ a 5# das del '!8)A @enter,
"##:%. 'n otro estudio, donde se empleo como antgeno los cisto.oitos de S.
gigantea para la prueba de '!8)A e 8=8, no mostraron reacci,n cru.ado con
Toxoplasma gondii.
31
2.15.2.1.2. 9estern &lot
!a prueba de '8@H se utili.o para la detecci,n de 8g0 anti Sarcocystis
aucheniae en conejos. )e encontraron tres pptidos con movilidad relativa
entre :$-:/ Dd que fueron reconocidos por las 8g0 de conejos
hiperinmuni.ados )am et al., "##2%. (osteriormente se desarrollo y
estandari.o una prueba de '8@H para la detecci,n de anticuerpos anti
)arcocystis. )e utili.aron sueros hiperinmunes de conejo anti S aucheniae y
suero de alpacas infectadas naturalmente confirmadas mediante necropsia
como sueros positivos. (ara los testigos negativos se emplearon sueros de
alpacas negativas confirmadas mediante necropsia y procedentes de .onas
libres de )arcocistiosis. Asimismo se utili.aron sueros de alpacas neonatas
que no ingirieron calostro. !os sueros de alpacas positivas para los testigos
negativos se emplearon sueros de alpacas negativas confirmadas mediante
necropsia y procedentes de .onas libres de )arcocistiosis. Asimismo se
utili.aron sueros de alpacas neonatas que no ingirieron calostro. !os sueros de
las alpacas positivas a Sarcocystis aucheniae tuvieron una reacci,n fuerte con
bandas comprendidas entre :$ a :/ R?a, mientras que los sueros negativos y
los sueros de los animales neonatos no mostraron ninguna reacci,n )am et
al., "##$%.
Actualmente la prueba de '8@H es la prueba est&ndar para el
diagnostico serol,gico de la <ieloencefalitis 'quina por proto.oarios
producida por S. neurona%. )e ha estimado que tiene un $# Q de sensibilidad
y $#Q de especificidad ?ubey et al., 9//"%. A diferencia que la prueba de
aglutinaci,n directa para la detecci,n de anticuerpos a Sarcocystis neurona
tiene una sensibilidad de "//Q y una especificidad de #/Q en animales
infectados experimentalmente ratones%. Adem&s esta prueba no requiere
equipamiento especial !indsay et al4 9//"%.
32
!as pruebas inmunol,gicas tradicionales basadas en la detecci,n de
anticuerpos especficos a )arcocystis solo pueden llegar al diagnostico de
genero mas no pueden diferenciar entre especies de )arcocystis que infectan
a la misma especie animal 0asbarre et al., "#$5%. )in embarg, algunos
trabajos de investigaci,n han determinado que utili.ando antgeno
recombinarte de Sarcocystis tenella en la tcnica de '!8)A se puede llegar a
diferenciar infecciones de Sarcocystis tenella con infecciones de Sarcocystis
arieticanis o Toxoplasma gondii. 'ste antgeno podra ser til para la
estandari.aci,n de una prueba serol,gica de diagnostico de Sarcocystis
tenella en ovinos <ertens et al., "##2%.
2.15.2.1.:. Reaccin en Cadena de la !oli)erasa 7!CR8
A pesar de la importancia de la sarcocistiosis para la industria ganadera
y la medicina veterinaria, aun no se cuenta con una prueba de diagnostico de
rutina que nos permita diferenciar entre las especies de )arcocystis que
pueden infectar un animal. )in embargo, con la tcnica de (*; se pueden
reali.ar el diagnostico de especies de sarcocystis @enter et al., "##: Uoachin
et al., "##2%. 'sta tcnica ha sido desarrollada como una herramienta para la
diferenciaci,n gentica de distintos organismos y se basa en la amplificaci,n
genomica del A?E de esta manera se pueden obtener Vhuellas digitalesV de
casi cualquier organismo Uoachim et al., "##2%. )e sabe que los ovinos
pueden ser infectados por cuatro especies de )arcocystis de los cuales
Sarcocystis tenella y Sarcocystis arieticanis son pat,genas produciendo
abortos y enfermedad aguda, o enfermedad cr,nica%, y las pruebas
tradicionales de diagnostico no pueden diferenciar entre estas especies y las
especies no pat,genas. )in embarg, se identifico un fragmento de A?E pstf
"/ hibridi.ado% con (*; que puede ser usado como marcador gentico que se
enla.a con el A?E especifico para especies patognicas de ovinos Sarcocystis
tenella y Sarcosystis arieticanis Uoachin et al., "##2%.
33
!a prueba de (*; basados en una peque-a subunidad de secuencia
de gen de A;E ribosomal de Sarcocystis tenella y Sarcocystis arieticanis%.
'specficamente detecto A?E de especies homologas en muestras de sangre
de ovinos, y no mostr, reacci,n cru.ada con especies heter,logas
Sarcocystis gigantea%, ni con especies cercamente relacionadas como
Toxoplasma gondii y Neospora caninum 1ecDeroth et al., "###%.
'n un estudio reali.ado por 1ung, 9//:% mediante el an&lisis del gen ))F
r;EA de las especies de )arcocystis que infectan a las alpacas del (er. (ara
un diagnostico temprano en animales menores de 9 a-os. 'l (*;
estandari.ado en el presente estudio fue capa. de detectar la infecci,n activa
de )arcocystis en sangre de animales infectados cuando el par&sito se
encuentra en sangre perifrica. )in embargo, el (*; carecera de utilidad para
detectarlo en fechas posteriores de la infecci,n. (or tanto, el '!8)A sera la
tcnica de elecci,n para la detecci,n temprana en sangre por tener un rango
de tiempo mayor de detecci,n.
2.11 !revencin y Control:
'n la actualidad no existen medidas destinadas a mejorar la resistencia
inmune de los reba-os, teniendo en conocimiento esto, la nica forma de evitar
la enfermedades es interrumpiendo el ciclo biol,gico del par&sito, lo cual se
lograra evitando a travs de la mala costumbre de alimentar a los perros
pastores con carne, vsceras crudas e infectadas con este par&sito !egua y
*lavo., "#$#4 ;amre. et al., "##$4 !egua y *asas "###%.
*on respecto a los planes de lucha, estos se basan en intentar cortar el
ciclo evolutivo de los par&sitos en aquellos puntos de la cadena epidemiol,gica
mas condicionada por la acci,n del hombre y, por lo tanto, mas susceptibles de
ser atacados4 para ello habra que atender a los siguientes apartados.
34
'ducaci,n sanitaria sostenida que logre instalarse valorativa y actitudinalmente
en el intelecto de las personas.
". 'nse-ando a los productores la forma como se contagia o transmite
la enfermedad y los prejuicios que ocasionan a los animales y al
hombre.
9. Eo alimentar perros con carne, vsceras crudas o mal cocidas que
presentan triquina, arrocillo, bolsa de agua, los cuales tambin
pueden desarrollarse en el hombre.
>. (rohibir la matan.a clandestina o domiciliaria de alpacas
construyendo camales en .onas urbanas y rurales donde se realice
la inspecci,n sanitaria por el <edico 7eterinario.
5. <ejorar las condiciones higinico sanitarias de los camales urbanos,
evitando el ingreso de perros a los camales
:. Eo debe sacarse del camal carne o vsceras infectadas sin
autori.aci,n del <dico 7eterinario.
2. Eo dejar abandonado en el campo las alpacas o llamas muertas por
diversos motivos, los cuales pueden ser comidos por perros, .orros o
lobos.
3. 'nterrar o quemar animales muertos cuyas carnes no se ven. Eo se
entiende este
$. !imitar la poblaci,n de perros a 9 por familia en las .onas rurales y
&reas urbanas. !as acciones deben entenderse como actividades en
pro de tales mascotas, no en contra de ellos.
#. ;eali.ar campa-as para reducir la poblaci,n de perros vagabundos,
.orros, lobos.
"/. !a carne de alpacas o llamas con sarcocystis puede ser sometida a
tratamientos a fin de evitar su decomiso+ utili.&ndolo como charqui

35
'n un estudio reali.ado para establecer la frecuencia de esporoquistes u
ooquistes de )arcocystis sp eliminados por los perros pastores de alpacas en
<arangani, *u.co *hoque et al., 9//3% encontr, que el :2Q de perros
pastores elimino esporoquistes reafirmando el rol importante que juega la
poblaci,n canina en la difusi,n de esta enfermedad.
'vitar que el hospedero definitivo difunda al sarcocystis con sus heces es la
llave para eliminar la expansi,n de la infecci,n de sarcocystis !egua y *lavo.,
"#$#4 ;amre. et al., "##$4 !egua y *asas, "###%.
@ambin se reali.aron experimentos , donde los perros alimentados con carne
congelada-"/x"/dias%, cocida por : minutos y deshidratada charqui%, no
eliminaron esporoquistes, lo cual evidencia que la cocci,n, congelaci,n y
deshidrataci,n de carne infectada con micro y macro quistes de sarcocystis
constituyen medios efectivos para la destrucci,n e inactivaci,n de este par&sito4
en cambio, la refrigeraci,n 5P* x >/ das% no tuvo ningn efecto sobre la
viabilidad de los quistes ya que los perros inoculados de este grupo eliminaron
esporoquistes entre "/ y "9 das post infecci,n !egua y Arevalo, "##/%.
2.12 ,rata)iento:
'n el hospedero intermediario no se dispone de un tratamiento efica.,
pero el Amprolio y la )alinomicina pueden aliviar los sntomas. )e ha
demostrado que el amprolio a dosis de "// mg por Rg. de peso por da desde
36
el momento de la inoculaci,n reduce la gravedad de la infecci,n en terneros y
corderos infectados experimentalmente y tambin se ha usado para el control
de un brote en ovejas. 'l tratamiento de los terneros infectados
experimentalmente con )alinomicina 5 mg por Rg en >/ das redujo la
gravedad de la enfermedad ;adostis, 9//9%.
'n los caballos con mieloencefalitis se le recomienda (irimetamina
/,9:mg por Rg. una ve. al da con @rimetropin-)ulfadia.ina ":mg por Rg. cada
"9 horas por 2 -"9 semanas.
'n el caso de los *)A se viene estudiando la utili.aci,n como el
(ona.uril !indsay et al, 9//"%.
'n el caso de los hospederos definitivos se est&n usando drogas para
controlar la sarcocistiosis intestinal utili.ando la combinaci,n de drogas
)ulfadoxina y (iretamina, as como (rimaquina, donde obtuvieron "//Q
eficacia luego por el tratamiento por 3 das )aravia, 9//>4 Luispe, 9//5%.
@oltra.ul tiene efecto con solo una aplicaci,n, as como lo demostr, ?augsches
et al. 9//"% lograron inhibir la eliminaci,n de esporoquistes en perros
infectados experimentalmente y naturalmente con dosis "/, 9/, >/ mgORg al
:Q.
'l toltra.uril al 9.:Q en dosis de "/ , 9/ mgODg de peso vivo, aplicado al :T ,
3T da post-infecci,n no fue efectivo para el control de la sarcocistiosis
intestinal en perros infectados experimentalmente con microquistes 7ilca et
al., 9//3%
)in embargo en otro estudio utili.ando el @oltra.uril 9.:Q a dosis de ":mgODg y
la combinaci,n de (iretamina y )ulfadoxina a dosis de 9/mgODg y "mgODg
encontrandose que el @oltra.uril al utili.ar por : das consecutivos un "//Q de
eficacia en el control de la sarcocytiosos canina en comparaci,n con las otras
drogas utili.adas Harrientos et al., 9//3%. !os resultados obtenidos son muy
37
alentadores pero su uso por das consecutivos no es pr&ctico para nuestra
realidad.
38
III. Materiales y M*todos
3.1 Luar de Estudio:
!a obtenci,n de muestras se reali.o en el camal de (ilpichaca en el
departamento de 1uancavelica.
(ara el procesamiento de las muestras fueron llevadas al laboratorio de
(arasitologa-FE<)<, departamento de !ima.
3.2 Material de estudio.
a. Carne de .lpacas. 'n el camal de 1uancavelica se obtuvieron cuellos
infectados con macroquistes, visibles a simple vista, las mismas que fueron
transportadas en recipientes hermticos a baja temperatura y mantenidas
en bolsas estriles.
b. .ni)ales de la4oratorio. )e usaron >/ conejos con edades variaban de
9,: a > meses de vida y cuyos pesos oscilaban entre 9.9 a >./ Dilos, todos
ellos procedentes del bioterio de la =<7-FE<)<. Antes de ser utili.ados en
los experimentos, fueron examinados mediante tcnicas
coproparasitol,gicas, para descartar la presencia de formas parasitarias
gastrointestinales, siendo seleccionados s,lo los animales que se hallaban
negativos. !os conejos fueron colocados en jaulas individuales de /.:m
9
y
recibieron alimentaci,n comercial y agua ad libitum.
39
3.3 ,a)a;o Muestral
Al ser un estudio donde se va a determinar si existe diferencia inmunol,gica
entre dos macroquistes de Sarcocystis aucheniae. 'nfrentando antgenos de
los dos macroquistes con suero de conejos inmuni.ados. ?ebido a esto la
cantidad de conejos requeridos para la obtenci,n de sueros hperinmunes, se
baso en otro estudio similar, donde se utili.aron >/ animales para identificar las
protenas de la membrana glicosomal de eishmania <exicana4 y observar las
diferencias inmunogenicas enfrentando con suero de ratones inmuni.ados ?e
Uess et al., "###%.
3.% 6istri4ucin de los ani)ales de la4oratorio
!a medici,n de las respuestas inmunes, se reali., dos grupos de ":
animales cOu, tratados con in,culos de protenas provenientes de macroquistes
de S. aucheniae grande y peque-o respectivamente. (osteriormente cada
grupo fue dividido en > sub grupos de : conejos cOu, para seguir un protocolo
de inoculaci,n.
3.2. !rocedi)iento e<peri)ental
3.2.1 "4tencin del anteno proteico crudo y preparacin de los
inculos.
3.2.1 .1 "4tencin de los )acro#uistes.
!os macroquistes de S. aucheniae, fueron recolectados de la musculatura
esqueltica de las alpacas. !os macroquistes colectados, fueron depositados
en (H) )oluci,n Huffer =osfato% y a una temperatura baja 9->T*% para su
posterior procesamiento+
40
"% )e recolecto de la musculatura esqueltica de alpacas, principalmente
de la regi,n del cuello, quistes intactos de S. aucheniae, con la ayuda de
un equipo de disecci,n b&sico.
9% )e lavo los macroquistes liberados con (H) soluci,n buffer fosfato% W
antibi,tico penicilina "// F8 W estreptomicina "// mg%, posteriormente
fueron clasificados segn su tama-o, en quistes grande N:mm% y
quistes peque-os "->mm%, mediante una regla esterili.ada.
>% <ediante una canaleta, pin.a plana y jeringa de tuberculina se
rompieron cuidadosamente los macroquistes, para obtener los
bradi.oitos y una baja proporci,n de capas del quiste, que fueron
usados como antgeno. (osteriormente los bradi.oitos% fueron
destilados utili.ando un embudo conteniendo una gasa estril. 'l filtrado
fue llevado a un tubo falc,n conteniendo (H) y antibi,tico penicilina
"// F8 W "//mg estreptomicina%, siendo centrifugado en tres
oportunidades, a :// ;(< por ": minutos, logr&ndose un sedimento
inicial.
5% )e coloco el sedimento en un beaDer de "/ ml y llevado a sonicaci,n a
2/ ciclos por un promedio de 9 minutos. Abtenido el sonicado solo si se
obtuvo un soluci,n consistente se agrego (H)%, nuevamente fue
centrifugado a ",5/// ;(< por media hora y se obtuvo un
sobrenadante, que finalmente fue filtrado a travs de un filtro /.99um. 'l
filtrado tanto de los macroquistes grandes y peque-os, debidamente
identificados fueron envasados en viales de ".: a 9 ml y conservados en
congelaci,n.
:% )e midieron los niveles de protena de cada lote de antgeno mediante el
mtodo de biuret y se reali.o un cultivo bacteriol,gico garanti.ando su
esterilidad.
41
=ig". *arne de alpaca infestada con macroquistes de Sarcocystis aucheniae.
=ig. 9. ;ecolecci,n de macroquistes.
42
=ig.>. !avado de los macroquistes con (H) y antibi,tico.
=ig. 5. *lasificaci,n de los macroquistes
43
3.2.1.1. Medicin de protenas )ediante el )*todo de &iuret
'l mtodo de Hiuret, fue usada para determinar la cantidad de protenas la
misma que es directamente proporcional a la intensidad de color, la reacci,n es
bastante especfica, de tal manera que pocas sustancias interfieren, en su
procesamiento, dando lugar a un complejo de color prpura al reaccionar con
una soluci,n de sulfato de cobre en medio alcalino. !as protenas reaccionan
de un modo semejante. !os iones cobre forman un complejo de coordinaci,n
con cuatro cuerpos E1 nucleofilos del biuret, que en el caso de las protenas
provienen de los enlaces peptdico de los amino&cidos. !a sensibilidad del
mtodo es muy baja y s,lo se recomienda para la cuantificaci,n de protenas
en preparados muy concentrados Hradford, "#324 Arce et al., 9//3%.
!rocedi)iento.
!a tcnica utili.ada fue la descrita por 0ormall et al "#5#4 donde se utili.aron
sulfato de cobre pentahidratado ".:g% y tartrato s,dico-potasico tetrahidratado
2g%. Ambos reactivos fueron disueltos en :// ml de agua destilada,
a-adindose posteriormente >// ml de EaA1 al "/Q, luego se agreg, agua
destilada hasta un litro en un matra.. Adem&s, se adicion, "g de ioduro potasio
para prevenir la formaci,n y precipitaci,n de acido de cobre. 'n " ml de
muestra, con un contenido de protena entre /.:M"/ mg, se a-adi, 5 ml del
reactivo anterior, tras su agitaci,n se dejo reposar a temperatura ambiente
durante >/ minutos y se ley, el incremento de la absorbancia a ::/nm frente a
un blanco sin protena.
!os resultados se extrapolan a una gr&fica patr,n confeccionada con
concentraci,n conocida de seroalbumina bovina. )iendo los resultados
obtenidos nicamente indicativos, ya que esta tcnica solo es absolutamente
fiable en las protenas cuya soluci,n al "Q presenta una extensi,n de $.# a
9$/nm y una relaci,n entre las extensiones a 9$/nm y 92/nm de ".3:nm.
44
3.2.1.3. !rue4a de esterilidad
'sta prueba tiene como objetivo indicar la presencia de vida microbiana dentro
del preparado de los macroquistes de Sarcocystis aucheniae para que no
produ.ca alteraciones en la antigenicidad del preparado e 8nterferir con los
resultados del estudio. ?entro de los medios de cultivos utili.ados para la
identificaci,n de diferentes agentes bacterianos. 'st&n los cultivos aerobios
como+ Agar @rypticasa de soya @)A%, caldo @rypticasa de soya, Agar <ac
*onDey, *aldo verde brillante, *aldo @etrationato y entre los medios para el
aislamiento, identificaci,n y conservaci,n de hongos pat,genos, saprofitos y
levaduras se hayan los cultivos anaerobios como+ *aldo @ryoglicolato, Agar
)aboraud glucosado.
3.2.2. =tili>acin de for)alde1do y trata)iento t*r)ico para la
Inactivacin del anteno de S. aucheniae.
!os mtodos de 8nactivaci,n mas usados son formaldehdo, hidr,xido de
aluminio y efecto trmico, mayormente su uso para inactivar vacunas
bacteriol,gicas.
'l tratamiento trmico es usado en los procesos de aislamiento y
purificaci,n de componentes celulares termoestables, como el !()
!ipopolisacaridos% pueden verse beneficiados con este mtodo empleado,
porque las altas temperaturas pueden provocar la desnaturali.aci,n de
componentes celulares como las protenas termolabiles, contribuyendo a la
eliminaci,n de estas como posibles contaminantes y dejando intactas las
protenas termoestables responsables de la antigenicidad !ebeque et al,
9//>%. 'n el caso de Sarcocystis cruzi se demostr, que la fracci,n protena
termol&bil del extracto protenico qustico de )arcocystis es responsable de
la toxicidad EaDamura et al., "###%
45
'l adyuvante segn estudios aumenta la respuesta inmunol,gica este
incremento en la inmunogenicidad se debe a una mejor captura de
antgeno, a una prolongada presencia del mismo in situ en consecuencia
una m&s prolongada respuesta inmunol,gica Arce et al., 9//3%. )u funci,n
es retardar la liberaci,n del antigeno y favorecer su captaci,n por los
macr,fagos, ayudando de esta forma a presentar el antigeno a los linfocitos
@ Arce et al., 9//3%.
o 'l adyuvante completo de =reund A*=% es una emulsi,n agua-
aceite compuesto de un antigeno en una emulsi,n salina en aceite
mineral con micobacterias Mycobacterium tuberculosis% muertas por
el calor la cual potencia mas la producci,n de anticuerpos. )u
presencia incrementa la formaci,n de anticuerpos, pero produce la
formaci,n de granulomas en el sitio de inyecci,n Arce et al., 9//3%.
o Adyuvante incompleto de =reund A8=%. !a cual es similar a la
anterior produciendo un aumento de la producci,n de anticuerpos,
pero sin micobacterias en consecuencia no produce la formaci,n de
granulomas.
3.:. !reparacin del inoculo inactivados con for)ol y )ane/o de
protocolos de 2 y 1 )es de duracin.
!os protocolos de inmuni.aci,n se basaron en la inactivaci,n de la protena
antignica cruda a travs de una diluci,n de formol hallada en el estudio, la
cual tiene por ventaja su bajo costo y como limitante su poder corrosivo al
producir lesiones granulomatosas. !a concentraci,n de formol hallada fue
aplicada en los protocolos de un mes Honilla y Cavaleta, "##3% y de dos meses
)am, "#$$%.
!a cantidad de antgeno para preparar el inoculo se calcul, inicialmente segn
el mtodo establecido por )am "#$$%, la cual indic, una concentraci,n de
46
/,/:mg por Dilogramo de peso vivo del conejo, agreg&ndose luego la diluci,n
de formol /.5Q, la cual fue modificada como se indicar& posteriormente.
)eguidamente, se agreg, (H) 9x y adyuvante en la proporci,n del #/Q en
base a la cantidad de antXgeno. @oda esta emulsi,n se homogeni., con una
jeringa de tuberculina y aguja de 9" x Y.
3.'. !reparacin del inoculo? inactivado con trata)iento t*r)ico: para
protocolo de 2 )eses de duracin.
!os protocolos de inmuni.aci,n se basaron en la inactivaci,n de la protena
antignica cruda a travs del tratamiento trmico y la aplicaci,n del protocolo
de dos meses <arn, "##>%, y la cantidad de antgeno se obtuvo inicialmente,
segn el mtodo descrito por )am "#$$%
!os antgenos de macroquistes <arn, "##>% fueron diluidos en tamp,n de ph3
y envasados en viales de 9//ul, siendo calentados, en agitaci,n constante de
3/T* hasta llegar a "//T* durante ": minutos en ba-os termoestables de agua
o glicerina4 posteriormente las soluciones se enfriaron r&pidamente en un ba-o
de agua de hielo 9->T*%, homogeni.ando a centrifugaci,n :// rpm por ":J
segundo%, seguidamente se agrego (H) 9x "//ml y en el ltimo paso se
a-adi, el adyuvante en un :/Q de la emulsi,n para luego ser inoculado al
animal, en dosis decrecientes de antgeno.
3.+. Mane/o de !rotocolos de inoculacin
)e utili.aron tres protocolos de inoculaci,n de protenas antignicas
crudas para la obtenci,n de anticuerpos, el momento y la va de inoculaci,n
dependi, del protocolo establecido. !os conejos fueron observados
constantemente una hora antes y "9 horas post inoculaci,n. As tambin se
monitore, la temperatura rectal una hora antes y " hora post inoculaci,n.
47
!rotocolo I:
(erodo de inmuni.aci,n de un mes. 8nactivaci,n de la protena antignica con
formol Honilla y Cavaleta, "##3%
6as de
In)uni>acin
!rocedi)iento
"
)angra
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
completo W formol "/Q. 78A 8E@;A<F)*F!A;
5 )angra
:
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
incompleto W formol "/Q. 78A )FH*F@AE'A
$ )angra
#
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
completo W formol "/Q. 78A 8E@;A<F)*F!A;
"9 )angra
">
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Ea*l /.$:Q. va
8E@;A<F)*F!A;
99 )angra
!rotocolo II
(erodo de inmuni.aci,n de dos meses. 8nactivaci,n de la protena antignica
con formol )am, "#$$%.
6as de
In)uni>acin
!rocedi)iento
"
)angra
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
completo W formol "/Q. 78A 8E@;A?';<8*A.
": )angra.
"2
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
incompleto W formol "/Q. 78A 8E@;A<F)*F!A; y 78A
)FH*F@AE'A
>/ )angra
>"
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
incompleto W formol "/Q. 78A 8E@;A<F)*F!A; y 78A
)FH*F@AE'A
52 )angra
48
53 8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
completo W formol "/Q. 78A 8E@;A<F)*F!A; y 78A
)FH*F@AE'A
29 )angra
!rotocolo III:
(erodo de inmuni.aci,n de dos meses, con inactivaci,n de la protena
antignica mediante un tratamiento trmico <arn, "##>%. 'l momento de la
inoculaci,n y el momento de la sangra estas estipuladas dentro del protocolo.
6as de
In)uni>acin
!rocedi)iento
"
)angra
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
completo 78A 8E@;A?';<8*A
":
)angra.
"2
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
incompleto 78A 8E@;A<F)*F!A; y 78A )FH*F@AE'A
>/
)angra
>"
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
incompleto 78A 8E@;A<F)*F!A; y 78A )FH*F@AE'A
52
)angra
53
8noculaci,n =racci,n de antgeno y Adyuvante de =reund
*ompleto 78A 8E@;A<F)*F!A; y 78A )FH*F@AE'A
29
)angra
3.0. "4tencin del suero:
49
(reviamente a las inoculaciones y en fechas de programadas, se obtuvo
sangre de los animales inoculados a partir de las venas marginal yOo safena o
por punci,n cardiaca. !a sangre fue centrifugada a ":// rpm x : minutos.
3.15 6eteccin de anticuerpos y ,*cnicas usadas:
=ueron colectados sueros de cada grupo y posteriormente se detect, la
presencia de anticuerpos, a partir del da ":4 mediante la tcnica de
inmunodifusi,n doble en gel agar Autchterlony, "#:$%.
3.11 .n@lisis estadstico
)e usar& la prueba exacta de =isher que permite anali.ar si dos variables
dicot,micas est&n asociadas cuando la muestra a estudiar es demasiado
peque-a y no se cumplen las condiciones necesarias para que la aplicaci,n del
test
2

sea adecuada. 'stas condiciones exigen que los valores esperados de

50
al menos el $/Q de las celdas en una tabla de contingencia sean mayores de
:. As, en una tabla 9x9 ser& necesario que todas las celdas verifiquen esta
condici,n.
@abla " @abla de contingencia para la comparaci,n de dos variables
dicot,micas, en el caso de grupos independientes.
Caracterstica .
Caracterstica & !resente .usente ,otal
(resente a b a W b
Ausente c d c W d
@otal A W c b W d E
!a probabilidad exacta de observar un conjunto concreto de frecuencias a, b, c
y d en una tabla 9 x 9 cuando se asume independencia y los totales de filas y
columnas se consideran fijas viene dada por la distribuci,n hipergeomtrica+
( ) ( ) ( ) ( )
! ! ! ! !
! ! ! !
d c b a n
d b c a d c b a
p
+ + + +
=
'sta f,rmula se obtiene calculando todas las posibles formas en las que
podemos disponer n sujetos en una tabla 9 x 9 de modo que los totales de filas
y columnas sean siempre los mismos, aWb%, cWd%, aWc% y bWd%.
!a probabilidad anterior deber& calcularse para todas las tablas de
contingencia que puedan formarse con los mismos totales marginales que la
tabla observada. (osteriormente, estas probabilidades se usan para calcular
valor de la p asociado al test exacto de =isher. 'ste valor de p indicar& la
probabilidad de obtener una diferencia entre los grupos mayor o igual a la
observada, bajo la hip,tesis nula de independencia. )i esta probabilidad es
peque-a pZ/./:% se deber& recha.ar la hip,tesis de partida y deberemos
51
asumir que las dos variables no son independientes, sino que est&n asociadas.
'n caso contrario, se dir& que no existe evidencia estadstica de asociaci,n
entre ambas variables.
52
IA. Resultados
!os pesos de protena obtenidas por el mtodo de Hiuret, han dado
como resultado >,99# mgOml para macroquistes grandes y 9,55: mgOml para
macroquistes peque-os.
!a dosis mnima de antgeno a usar fue de /./: mgODg, dicha dosis fue
hallada en base a un estudio paralelo, donde se inocul, cantidades
decrecientes de antgeno en que variaron de 9: a /./9: mgODg, observ&ndose
el tiempo de sobrevivencia o mortalidad a la dosis administrada <. *hileno,
9//#, comunicaci,n personal%
'n el cuadro 1 se observa la reacci,n Ag-Ac en un "//Q de los
animales evaluados. <ediante la prueba de inmunodifusi,n doble en quistes
grandes N :mm% de Sarcocystis aucheniae, en los dos primeros protocolos 8 y
88%4 mientras que con el tercer protocolo present, un 2/Q
'n el cuadro 2 se observan la reacciones Ag-Ac mediante la prueba de
inmunodifusi,n doble en macroquistes peque-os "->mm% de Sarcocystis
aucheniae, en el primer, segundo y tercer protocolo de "//Q, 2/Q y 5/Q
respectivamente.
53
Cuadro 1 Respuesta especifica .B.c en #uistes
randes 7C 2))8 de Sarcocystis aucheniae
)ediante In)unodifusin 255+.
!rotocolos
de
inoculacin
.ni)ales de
la4oratorio
Resultado 7D8
8 : :O: "//
88 : :O: "//
888 : >O: 2/
E8 protena antignica inactivado con formol, " mes de inmuni.aci,n
[88 protena antignica inactivado con formol, 9 meses de inmuni.aci,n.
[888 protena antignica inactivada con tratamiento trmico, 9 meses de inmuni.aci,n.
Cuadro 2 Respuesta especifica .B.c en #uistes
pe#ue;os 71B3))8 de Sarcocystis
aucheniae )ediante In)unodifusin 255+.
!rotocolo
de
inoculacin
.ni)ales de
la4oratorio
Resultado 7D8
8 : :O: "//
88 : >O: 2/
888 : 9O: 5/
[8 protena antignica inactivado con formol, " mes de inmuni.aci,n
[88 protena antignica inactivado con formol, 9 meses de inmuni.aci,n
[888 protena antignica inactivado con tratamiento trmico, 9 meses de inmuni.aci,n.
'n el cuadro 3 se demuestra que hay un $2,2Q de respuesta en los
macroquistes grandes en comparaci,n con los macroquistes peque-os que
solo se observo 22,2Q.
Cuadro 3 Respuesta especifica .B.c en )acro#uistes randes y
pe#ue;os de S. aucheniae )ediante In)unodifusin
e)pleando tres tipos de protocolo de in)uni>acin 255+.
54
Macro#uiste
FG
Cone/os
!rotocolo
Resultado 7D8
I II III
0randeN:mm% ": : : : ">O": $2.2
(eque-o"->mm% ": : : : "/O": 22.2
55
A. 6ISC=SIHF
'n el presente estudio se evalu, la respuesta inmune de dos tama-os
de macroquistes de Sarcocystis aucheniae mediante el empleo de tres
protocolos de inoculaci,n.
8nicialmente se determin, el peso de la protena antignica utili.ando el
mtodo de Hiuret, para los macroquistes grandes y peque-os, obtenindose los
pesos de >,99#mgOml y 9,55: mgOml respectivamente. (or otro lado, estudios
similares reali.ados por <ansilla, "##>% y )am et al., "###% trabajando s,lo
con pool de macroquites sin diferenciar tama-os, hallaron pesos moleculares
de :,2 mgOml y 2,5 mgOml respectivamente. <ientras que F.uriaga et al., 9//$%
quienes trabajando de forma similar encontraron una concentraci,n de protena
de >9mgOml, a travs del mtodo de !oKry. !a diferencia de pesos hallados en
los diferentes estudios, pudo deberse a los mtodos empleados en su
detecci,n, as como a las variaciones en los tama-os de quistes usados.
!a dosis de antgeno administrada a conejos fue de /,/: mgORg. 'sta
cantidad se baso en un estudio paralelo <. *hileno, 9//# comunicaci,n
personal%, donde se utili.aron concentraciones de protenas antignicas que
variaron de 9:, "/, :, /.9:, :, /./:, /./9: mgORg4 encontr&ndose un :/Q de
supervivencia a las dosis de /./9: y /./: mgORg4 opt&ndose por la dosis mayor
debido a que, la respuesta inmunol,gica es dependiente de la dosis, forma y
va de administraci,n, adem&s el uso de concentraciones muy peque-as
podran producir tolerancia Arce et al., 9//3%.
(aralelamente, para reali.ar la inactivaci,n del antgeno, utili.ada en la
obtenci,n de suero hiperinmune se sigui, la tcnica descrita por )am, "###%,
donde se recomendaba utili.ar la concentraci,n de formol al /,5Q. )in
56
embargo, se observ,, una elevada mortalidad de los conejos "/ animales%, los
cuales mostraban signos clnicos como postraci,n, disnea, pupila contrada,
etc4 compatibles con la intoxicaci,n de la sarcocistina )am, "##$%. ?ebido a
esto se tuvo que variar inicialmente la concentraci,n de formol al 5Q !abeque
et al., 9//>%, sin resultados favorables, por lo que se opto en incrementar la
concentraci,n del formol hasta "/Q, logr&ndose la sobrevivencia de los
animales inoculados y consecuentemente la inactivaci,n de la sarcocistina. !a
concentraci,n de formol al "/Q fue usada en los protocolos donde se us, al
formol como inactivador de protenas4 mientras que el protocolo de inactivaci,n
por efecto trmico, sigui, los par&metros de !abeque et al., 9//>%.
(ara la inmuni.aci,n de los conejos, se utili., simult&neamente la va de
inoculaci,n subcut&nea e intramuscular en los protocolos 88 y 888 no as, en la
primera fase de inoculaci,n de ambos protocolos. 'ste manejo tiene la ventaja
al presentar el antgeno por dos vas, siendo m&s probable obtener una
respuesta inmune optima. (or otro lado, para incrementar la fagocitosis de las
protenas y consecuentemente la respuesta inmune4 los antgenos fueron
me.clados con adyuvantes, los cuales actan de dos maneras4 inicialmente
protegiendo al antgeno de una dispersi,n r&pida atrap&ndolos en un dep,sito
local y en segundo lugar al contener substancias que estimulan la respuesta
inmune del husped, logrando reclutar macr,fagos al sitio donde se halla
depositado el antgeno, incrementando la proporci,n local de fagocitosis Arce
et al.,9//3%.
'l uso del adyuvante =reund completo A*=% e incompleto A8=%. 'n el
caso de A*= produce granulomas debido a la presencia de mycobacterias por
este motivo y para evitar efectos indeseados en los animales inoculados, s,lo
se aplico A*= en la primera y ltima fase de los protocolos. <ientras que en los
refuer.os se uso generalmente A8=.
?e otro lado la tcnica utili.ada para detectar reacciones inmunes en
nuestro estudio fue inmunodifusi,n doble que constituye una tcnica de f&cil
57
manejo, al no requerir un equipo especial y no depende de manera importante
a las condiciones ambientales 0arca et al, 9///%.
'n los cuadros " y 9 se observa que los extractos de macroquistes de
Sarcocystis aucheniae, de dos tama-os IgrandeJ N :mm y Ipeque-oJ "->mm%4
evaluados con tres protocolos de inoculaci,n, mostraron que al menos dos
conejos de cada protocolo presentaron una respuesta inmune especfica, frente
al antgeno crudo, usando la prueba de 8nmunodifusion doble.
Adem&s, se mostr, que el protocolo de un mes de inoculaci,n,
inactivado con formol al "/Q protocolo 8%, produjo una respuesta del "//Q
tanto para los antgenos provenientes de macroquistes grandes como de
peque-os, garanti.ando la producci,n de anticuerpos al comparar con los otros
protocolos que no ofrecen igual respuesta. )in embargo, durante el proceso de
inmuni.aci,n, se observ, la muerte de seis animales en el da "> anexo "% al
dejar de usar formol c,mo inactivador de la protena antignica, esto se debi,,
probablemente a la insuficiente producci,n de anticuerpos que mostraban en
esa fecha los animales, la cual no garanti., la protecci,n ante el efecto de las
toxinas de sarcocystis. *omprob&ndose que la producci,n de anticuerpos no
se producen adecuadamente antes del da ">, al dejarse de usar formol como
inactivador de antgeno. 'stos animales fueron reempla.ados para completar el
grupo inmuni.ado.
'n el protocolo 88, de dos meses de inoculaci,n inactivado con formol al "/Q,
se observo que el "//Q de los conejos presentaron una respuesta inmune ante
los antgenos de macroquistes grandes y solo un 2/Q, respondi, con los
antgenos de macroquiste peque-os. <ientras que en el protocolo 888,
inactivado con calor, se observaron respuesta del 2/Q en el caso de
macroquiste grande y 5/Q en macroquiste peque-o. !a diferencia en la
respuesta inmune puede deberse a diversos factores entre ellos al nmero de
desafos con el antgeno, siendo el mejor protocolo de inmuni.aci,n aquel que
logra la inactivaci,n de las protenas antignica y presenta mayor nmero de
inoculaciones en el tiempo establecido. 'l efecto trmico segn otros autores
58
es considerado uno de los mtodos de elecci,n frente al de formol debido a
que el tratamiento trmico contribuye a la eliminaci,n de posibles
contaminantes y adem&s se deja de utili.ar sustancias que son da-inas para el
humano !abeque et al., 9//>4 <arin 9//5%. 'mpero en el proyecto no se pudo
corroborar. (or lo tanto en el estudio se demostr, que el uso de los tres
protocolos son efectivos para producir anticuerpos.
'n el cuadro > se puede apreciar que en el caso de los macroquistes
grandes de Sarcocytis aucheniae se obtuvo $2,2Q de respuesta en
comparaci,n con los macroquistes peque-os donde se obtuvo 22,2Q utili.ando
los tres protocolos de inmuni.aci,n. Al comparar los resultados de los
diferentes protocolos mediante la prueba estadstica exacta de =isher,
aparentemente no existe diferencia significativa. )in embargo, la limitante se
presenta por la cantidad de conejos utili.ados4 sin embargo, otros estudios
basados en la calidad de un protocolo emplean como mnimo tres animales
!abeque et al, 9//>%.
(or otro lado, !abeque et al 9//>%, mencionan que el mejor protocolo
para la inactivaci,n de antgeno es la aplicaci,n del tratamiento trmico,
demostrando que la inactivaci,n en ba-o <ara a "//P* es un mtodo comn
usado en laboratorios, aunque la limitante de este tratamiento, resultara ser el
tiempo que deberan de mantenerse las protenas en temperaturas altas,
debido a que un exceso podra provocar la desnaturali.aci,n de los
componentes celulares termol&biles como las protenas y tambin los
termoestables !() responsables de la respuesta inmunol,gica. (or lo tanto, el
factor de manipulaci,n de la temperatura en este estudio pudo influir en el
resultado al presentarse respuesta inmunol,gica no muy eficiente, donde las
muestras procesadas eran dependientes del tiempo utili.ado en la inactivaci,n
trmica <arin, 9//>%.
'l estudio evidencia que el uso de formaldehdo es un mtodo confiable
para los diferentes protocolos y que el uso del tratamiento termino logra la
inactivaci,n de las protenas evaluadas, sin embarg, se recomienda seguir
probando esta posibilidad utili.ando otros tiempos, debido al bajo porcentaje de
respuesta obtenida.
59
!os antgenos de macroquistes grandes obtuvieron mayor reacci,n Ag-
Ac y presentaron durante el procedimiento de los tres protocolos menos
mortalidad determin&ndose que los antgenos de macroquistes grandes son
m&s antignicos y menos virulentos que los macroquistes peque-os.
60
AI C"FCL=SI"F
!os extractos de protenas antignicas provenientes de macroquistes
grandes N:mm% de S. aucheniae presentaron una mayor respuesta
inmune que los provenientes de macroquistes peque-os "->mm%4 al
usar tres protocolos de inmuni.aci,n. )in embargo, no se observ,
asociaci,n entre protocolos y reacci,n Ag-Ac al an&lisis de =isher.
61

AII REC"MEF6.CI"FES
;eali.ar la titulaci,n de anticuerpos en los protocolos de inmuni.aci,n
que hayan logrado, respuestas antgeno anticuerpo del "//Q tanto
donde se utili.o macroquistes peque-os y grandes.
!a inactivaci,n de los antgenos de S. aucheniae con tratamiento
trmico protocolo 888%, deber&n ser reevaluadas usando menor tiempo de
exposici,n al calor o menor temperatura.
62
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la detecci,n de anticuerpos contra Sarcosystis aucheniae. @eorema. 2+ 25-
70
2:.
$>. )am ;. "#$$. Sarcocystis aucheniae+ caracteri.aci,n parcial de
componentes antignicos y patologa clnica experimental en alpacas. @esis
de doctorado en ciencias biol,gicas !ima+ Fniv. Eac. <ayor de )an <arcos.
""$ p.
$5. )am ;, <ansilla 8, <orales *, ;amre. A. "##$. 'fecto t,xico de
macroquistes de Sarcocystis aucheniae en ratones, coballos y conejos.
;ev. 8nv. (ec, 878@A. #9%+""-"$.
$:. )am ;, 7erastegui <, <allqui 7, ;amre. A. "##2. ?etecci,n de
anticuerpos contra Sarcocystis aucheniae en alpacas mediante
electroinmunotransferencia. *ajamarca+ 8 *ongreso <undial sobre
*amlidos.
$2. )am ;, 0on.&les A, !,pe. @, 7erastegui (. "###. ?esarrollo de un
mtodo de electroinmunotransferencia para la detecci,n de anticuerpos anti
Sarcocystis aucheniae en alpacas. ;ev 8nv 7et, (er. "/+ $9-$:.
$3. )aravia C. 9//>. Anticoccidiales en el tratamiento de la sarcocistiosis en
perros infectados con microquistes de alpacas. @esis de <edico 7eterinario
y Cootecnista. (uno+ Fniv. Eac. ?el altiplano. 5#p.
$$. )avini 0, ?unsmore U?, ;obertson 8?. "##5. 'valuation of a serological
test system for the diagnosis of Sarcocystis cruzi infection in cattle using S.
cruzi mero.oite antigen. 7et (arasitol. :"+"#"-"$#.
$#. )avini 0, ;obertson 8?, ?unsmore U?. "##3. *lass-specific antibody
responses in cattle folloKing experimental challenge Kith sporocystis or
mero.oites of Sarcocystis cruzi. 7et (arasitol. 39+ "9"-"93.
#/. )hi !C, Chao 1G. "#$3. 'valuation of an en.yme immunoassay for the
detection of antibodes against Sarcocystis sp. 8n naturally infected cattle in
china. 7et (arasitol. 95+ "$:-"#5.
#". )oulsby 'U. "#$3. (arasitologa y enfermedades parasitarias en los
71
animales domsticos. 3 ed. <xico+ 8nteramericana.$9>p.
#9. )obel ;A, *olvin ;H. "#$2. ;esponder strain-specific enhancement of
endothelial and mononuclear cell la in delayed hypersensitivity reactions in
strain9xstrain">% =, guinea pigs, U. 8mmunol. ":#+ ">2-":3.
#>.@anhauser ), *headle <, <assey ', <ayer H, )chroedter U, ?ome ',
0reiner, <acDay ;. 9//". @he nine-banded armadillo dasipus
novemcinctus% is naturally infected Kith Sarcosystis neurona. 8nternational
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#5. @ello ;. 9///.*occidiosis. ;ev ?iagnostico ?e !a Fniv. *ayetano
1eredia (er. >#+""2-""#.
#:. @enter A<. "#$$. *omparison of ?ot-'!8)A and 8=A@ for the detection of
8g0 antibodes to Sarcocystis muris in experimentally infected and inmuni.ad
mice. 7et (arasitol. 9#+$#-"/5.
#2. @enter A, !uton R, Uohnson A. "##5. Appl (arasitol. >:+ "3>-"$$.
#3. @enter A<."##:. *urrent research on )arcocystis species of domestic
animals. 8nt. U. (arasitol. 9:+ ">""-">>/.
#$. @orres U, Hover <, 0arca U. "#$". Avance en el estudio del ciclo
biol,gico del Sarcocystis aucheniae. Avance 7eterinario FE8*A, *hincha.
""%+>3-5/.
##. Fggla A, Huxton ?. "##/. 8nmune responses against @oxoplasma and
)arcocystis infection in rumiants+ diagnosis and prospect for vaccination.
;ev. )ci. @ech. Uun # 9%+ 55"-2"#.
"//. F.uriaga <, )am ;, <anchego A, Alvarado A. 9//$. ?esarrollo de
estadios asexuales de sarcocystis aucheniae en cultivo de clulas. ;ev 8nv
7et, (er. "#"%+ 5#-:>
"/". Frquhart 0, Armour U, ?uncan U, Uenmings =. 9//". (arasitologa
7eterinaria. 9 ed. Carago.a+ Acribia. >::p
72
"/9. 7alderrama (A. "###. ;elaci,n de la sarcocystiosis macrosc,pica en
carne de alpaca con la presencia de lesiones bucales. (uno-(er. 5:p.
"/>. 7ilca U, 7ilca =, *have. A, Frviola <, !eyva 7. 9//3. 'fecto del
toltra.uril al 9,:Q durante el periodo prepotente de la )arcocystiosis
intestinal canina. ;ev 8nv 7et, (er. "$+ 25-2$.
"/5. 7ilca <. "##". (roducci,n, tecnologa e higiene de la carne. 'n+
Avances y perspectivas del conocimiento de los camlidos sudamericanos.
)antiago+ =AA. 59#p.
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of Sarcocystis lac(rate Habudieri, "#>9Apicomplexa+ )arcocystidae%. @he
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"/3. 6eyreter 1, ?onoghue (U, 6eber <, ;ommel <. "#$5. *lass specific
antibody responses in pings folloKing inmuni.ation and challenge Kith
sporocystis of Sarcocystis miesheriana. 7et. (arasitol. "2>%+9/"-9/:.
"/$. 6hite ). "##$. )arcocystis+ A parasite 'ndemic to Andean Alpacas. 7ol
888. ET". @he Alpaca registry Uournal ]8nternet^, ]"9setiembre
9//#^.?isponible en+ http+OKKK.alpacaregistry.netOjournalOKin#$j-"9.html
73
ANEXO I
Mortalidad o4servada en cone/os durante el protocolo de inoculacin I
Daz de
inmunizacin Procedimiento CONEJOS
MP MP MP MP MG
1 2 3 4 5 6
1
8noculaci,n
=racci,n de
AgWA=*Wformol
"/Q
78A 8<
4 an!ra
5
8noculaci,n
=racci,n de
AgWA=8Wformol
"/Q.
78A )*
8 an!ra
9
8noculaci,n
=racci,n de
AgWA=* Wformol
"/Q. 78A 8<
12 an!ra
13
8noculaci,n
=racci,n de
AgWA=* WEacl
/.$:Q
78A 8<
anima"
muri 8
#ora$
de$%u&$
de
inocu"ar
anima" muri
12 #ora$
de$%u&$ de
inocu"ar
anima"
muri 9
#ora$
de$%u&$
de
inocu"ar
anima"
muri
12
#ora$
de$%u&
$ de
inocu"a
r
anima"
muri 22
#ora$
de$%u&$
de
inocu"ar
anima"
muri 24
#ora$
de$%u&$
de
inocu"ar
[ A=* Adyuvante =reund *ompleto
[ A=8 Adyuvante =reund 8ncompleto
[ <0 <acroquistes grandes
[ <( <acroquistes peque-os
Eota+ @odos los animales que murieron fueron reempla.ados por otros para completar
el tama-o experimental requerido.
74