Manual de Procedimientos Apa

Hospital Dr. Mauricio Heyermann T.
Unidad de Anatoma Patolgica

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL
LABORATORIO DE ANATOMA
PATOLGICA Y CITOPATOLOGA
Cdigo : UAPA
Versin:1.0
Pginas: 1 de 17
Fecha de elaboracin: Junio 2012
Vigencia: 3 aos

Este documento es propiedad del Hospital Dr. Mauricio Heyermann de T. Angol. Cualquier copia parcial o
total no es vlida sin la debida autorizacin de la Direccin del establecimiento.

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
PARA EL LABORATORIO DE
ANATOMA PATOLGICA Y
CITOPATOLOGA

Preparado por: Revisado por: Aprobado por:
T.M Susana Garcs Olave
Tecnlogo Mdico Anatoma
Patolgica
EU. Claudia Navarro
Encargada Oficina de Calidad y
Seguridad del Paciente
D. Ren Lopetegui Carrasco
Director Hospital Angol

ndice
Seccin Pgina
Introduccin 2
Objetivo 2
Alcance 2
Responsabilidades 3
Desarrollo 3
Evaluacin 15
Actualizacin 16
Anexos 17


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I. INTRODUCCIN

La Unidad de Anatoma Patolgica (UAP) es una Unidad de Apoyo Clnico
fundamental en el proceso de diagnstico de pacientes que han sido sometidos a
cirugas, por este motivo, resulta de mxima importancia la calidad de los procesos que
en l se realizan. El presente documento es complementario a todos los manuales y
protocolos vigentes en el servicio.

II. OBJETIVOS

Generar una poltica de calidad continua de los procesos en el Servicio de Anatoma
Patolgica.

III. ALCANCE

Este manual ser aplicado por el Anatomopatlogo, Tecnlogo Mdico y Secretaria, cada
vez que se procesen muestras, se valide su resultado y se proceda realizar resguardo de
la informacin obtenida en la Unidad de Anatoma Patolgica del Hospital Dr. Mauricio
Heyermann Torres de Angol.


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IV. RESPONSABILIDADES

Para dar cumplimiento al presente manual, es necesario indicar los niveles de
responsabilidad asociados al desarrollo del programa:
Jefe de Servicio Supervisar el cumplimiento de las medidas indicadas en el presente
manual por parte de sus funcionarios.
Informar e indicar a cada funcionario bajo su dependencia, sobre los
procedimientos correctos a desarrollar en cada intervencin.

Tecnlogo
Mdico
Cumplir con lo establecido en el Instructivo de Procedimientos para
Laboratorio de Anatoma patolgica.
Realizar medicin de calidad de los procesos a travs de
indicadores.

Tcnico
Paramdi co
Cumplir con lo establecido en todos los manuales y protocolos del
Servicio de Anatoma Patolgica.
Cumplir con lo establecido en el Protocolo.

V. RESPONSABLES DE LOS PROCEDIMIENTOS REALIZADOS

Patlogo: Encargado del anlisis macroscpico y microscpico de las muestras,
validacin de informes emitidos.
Tecnlogo Mdico: Responsable de la correcta realizacin de las tcnicas,
actualizacin de la estadstica mensual y velar por el correcto uso y mantencin de
la calidad de los reactivos presentes en los equipos de la Unidad de Anatoma
Patolgica.
Secretaria: Responsable de la Recepcin de muestras y de la correcta aplicacin
de los criterios de rechazo de muestras con el fin de reducir al mnimo los eventos
adversos relacionados con la mala identificacin de pacientes.


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VI. PROCEDIMIENTO DE RESPALDO DE DOCUMENTACIN
Y MATERIAL DE ESTUDIO

La responsabilidad de entregar toda la informacin tcnica para implementacin,
desarrollo y funcionamiento de los archivos del Laboratorio de Anatoma Patolgica es del
J efe de la Unidad de Anatoma Patolgica (UAP)

En la UAP existen dos tipos de archivos:

1) Archivos Permanentes:
Lminas histolgicas
Inclusiones o tacos
Respaldo de informes

2) Archivos Transitorios.
Restos de material macroscpico de tejido no ingresado a proceso de biopsia
diferida.

Archi vos permanentes

Procedimiento de Respaldo de Informes
Responsable: Secretaria.

Los informes generados por el Patlogo, durante el ao en curso, sern guardados en
archivadores disponibles para su consulta en secretara de la UAP.
Las copias de Informes de Biopsias Privadas sern almacenadas de igual forma en
Secretara de la Unidad.
Los informes de aos anteriores sern guardados en un closet destinado al
almacenamiento de documentacin por un periodo de 10 aos, en cajas rotuladas con su
contenido, ao de emisin y rango de nmero entre el que se encuentran los documentos
contenidos.


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Procedimiento de Respaldo de Solicitudes de Examen Histopatolgico y/o
Citolgico
Responsable: Secretaria.

Las Solicitudes de Examen Histopatolgico y/o Citolgico del ao en curso sern
guardadas en archivadores disponibles para su consulta en secretara de la UAP. Las
solicitudes de aos anteriores sern almacenadas en oficina de patlogo. Esta
informacin es resguardada por un periodo de 10 aos.

Procedimiento de Respaldo de Lminas histolgicas
Responsable: Tcnico Paramdico supervisado por Tecnlogo Mdico.

Una vez que las lminas son informadas, el Patlogo las devolver al Tcnico
Paramdico para su archivo.
Las lminas son archivadas en las dependencias de UAP por un lapso de 15 aos para su
consulta en caso de ser requeridas. Las lminas del ao en curso son almacenadas en
cajas de madera en el laboratorio de Anatoma Patolgica.
El archivo de lminas de aos anteriores se realiza en cajas de madera que indican entre
qu rangos de nmeros identificatorios de lmina se encuentra el material contenido en su
interior y el ao en el que fueron procesadas.

Procedimiento de Respaldo de Tacos
Responsable: Tcnicos Paramdicos supervisados por Tecnlogo Mdico.

Los tacos o cassette de inclusin son archivados en las dependencias de anatoma
patolgica por un lapso de 30 aos.
Los tacos correspondientes al mes anterior y al mes en curso son almacenados en cajas
en la sala de corte de la UAP y el resto en un closet destinado al almacenamiento de
documentacin y tacos. Estas cajas son identificadas con mes y ao de procesamiento.
Nota: Se deben almacenar lejos de aparatos que generen calor.


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Archi vos Transitorios

Procedimiento de respaldo de material macroscpico de tejido no ingresado a
proceso de biopsia diferida
Responsable: Tcnico Paramdico supervisado por Tecnlogo Mdico.

El material de biopsia no elegido para representar la lesin se guarda en la misma bolsa
que lo contena incluyendo su rtulo y nmero identificatorio, sin formalina. Las biopsias
con dictado macroscpico realizado diariamente deben ser almacenadas en una bolsa
negra, la que debe ser rotulada con da, mes y ao de toma de muestra. Estas a su vez
son almacenadas en Bolsas Amarillas destinadas para el almacenamiento de material
orgnico, se encuentran identificadas con el smbolo de Riesgo Biolgico, y con el mes y
ao en que fueron analizadas.

El material de biopsia es almacenado en contenedor debidamente rotulado.

Las biopsias son almacenadas por un mes o hasta emitido el informe de biopsia. Luego
de lo cual sigue el procedimiento de eliminacin de producto biolgico orgnico segn
norma.

VII. TCNICAS DE PROCESAMIENTO DE MUESTRAS

a) Procedimientos de tcnicas histoqumicas comnmente solicitadas

AZUL ALCIAN, PH 2,5

Propsito: La demostracin de mucopolisacridos cidos.
Fijador: Formalina tamponada 10%.
Cortes: En parafina, de 4-5 m.
Tejido control: cortes de intestino grueso, cartlago hialino.


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Soluciones:
1. Solucin de cido actico 3% acuoso.

2. Solucin de azul alcin:
Azul alcin, 8gx_________________________1 gr.
Solucin de cido actico 3%________________100 ml.
3. Hematoxilina de Harris

Procedimiento:
1. Cortes desparafinados e hidratados.
2. Poner en sol. de cido actico al 3% por 3 min.
3. Teir en solucin de Alcian Blue por 10 min. a temperatura ambiente.
4. Lavar con agua corriente, por 8 min.
5. Contrastar con Hematoxilina, por 20 seg.
6. Lavar con agua corriente por 8 min.
7. Deshidratar, aclarar y montar.
Resultados:
Mucinas cidas, mucinas sulfatadas cidas___________________calipso.
Ncleos_________________________________________________azul.
DIFF

Propsito: La demostracin del microorganismo Helicobacter pylori.
Fijador: Formalina al 10% neutra. (Necesaria)
Cortes: En parafina, de 4-5 m.
Control: Helicobacter pylori


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Soluciones:
1. Azul de metileno solucin madre :
Azul de metileno..1.4 grs.
Alcohol de 95.100 ml.
2. Solucin de trabajo:
Solucin madre10 ml.
Agua destilada.90 ml.
3. Eosina
Procedimiento:
1. Corte histolgico desparafinado e hidratado.
2. Teir en eosina por 5 min.
3. Lavar hasta sacar la capa impermeable de eosina.
4. Teir con solucin de trabajo de azul de metileno por 8 min.
5. Sacar el exceso de colorante con agua corriente.
6. Dejar secar las placas.
7. Deshidratar desde alcohol de 100, xilol y montar.

Resultados:
Helicobacter pilory_______________________________azul intenso.
Fondo__________________________________________azul.


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PAS, CIDO PERIDICO DE SCHIFF
Propsito: identificacin de glucgeno, mucinas y algunas membranas basales.
Fijador: Formalina al 10%
Cortes: En parafina, de 4-5 .
Tejido Control: Hgado.

Soluciones:
1. Sol. de acido perydico al 0.5 %, acuoso

2. Sol. de HCl 1N :

HCl:______________________________83.5 ml.
Agua destilada______________________916.5 ml.

3. Reactivo Schiff de Coleman :

Fucsina bsica______________________1 gr.
Agua dest. en ebullicin_______________200 ml.
Agitar por 5 min , enfriar a 50C y filtrar.
HCl 1N____________________________20 ml.
Enfriar a 25C
Metabisulfito de Na___________________1 gr.
Dejar aclarar durante 18 24 hrs.
Carbn activado...2 gr.
Agitar por 1 min., filtrar y guardar en frasco mbar en refrigerador.


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4. Hematoxilina de Harris
Procedimiento:
1. Desparafinar e hidratar los cortes hasta agua destilada.
2. Oxidar en solucin de Acido Perydico durante 5 min.
3. Lavar en 2 cambios de agua destilada.
4. Incubar en reactivo Schiff de Coleman por 15 18 min.
6. Contrastar con hematoxilina de Harris por 20 seg.
8. Deshidratar, aclarar y montar.

Resultados:
Glucgeno, mucina, algunas membranas basales.___________rojo a prpura.
Hongos_______________________________________________rojo a prpura.
Ncleos_______________________________________________azul.

b) Citologas ginecolgicas y miscelneas

El citodiagnstico tiene por objeto interpretar las lesiones presentes sobre clulas
descamadas libremente de las superficies epiteliales; su principal ventaja sobre la biopsia
es la posibilidad de realizar un muestreo de la lesin mucho ms amplio y reiterado, de
manera que permite dar un seguimiento dinmico de la conducta biolgica de las
lesiones. Desde el punto de vista tcnico el diagnstico citolgico es simple, rpido,
poco agresivo y de bajo costo, por lo que permite detectar en poco tiempo la mayor
parte de las lesiones, sobre todo las de carcter tumoral o pre-neoplsicas.

La UAP recibe Citologas Miscelneas, las que corresponden a Punciones de rganos
como Tiroides, cavidad Peritoneal o Pleural, etc. Estas pueden venir con el extendido
listo y fijado con citospray o bien se recibe el fluido correspondiente, sin fijar. Adems se
reciben Citologas Ginecolgicas correspondientes a Papanicolaou.


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CITOLOGA MISCELNEA
Encargado: Tecnlogo Mdico

Extendido de clulas
1.- Una vez recibidas las lminas con el extendido fijado, se procede a la rotulacin de
stas con el nmero identificatorio.
2.- Al reverso de su solicitud se debe indicar el nmero de lminas que se recibieron.
3.- Las lminas son colocadas en el Teidor Automtico para realizar Tincin de
Papapanicolaou.
4.- Montaje
5.- Entrega de lminas al Patlogo.

Fluidos
Procesamiento en Citocentrfuga

1.- Al momento de recibir el frasco con la muestra, se debe medir el volumen de fluido
recibido y registrarlo al reverso de la solicitud, es ideal que el volumen de la muestra
no supere los 20 ml.
2.- Rotular la lmina a utilizar
3.- Realizar centrifugacin en Cytospin.
4.- Una vez obtenida la lmina con la muestra, fijar con citospray y proceder a la tincin
con Papanicolaou.
5.- Montaje
6.- Entrega de lminas.

Tcnica de Bloque celular

1.- Al momento de recibir el frasco con la muestra, se debe medir el volumen de fluido
recibido y registrarlo al reverso de la solicitud, es ideal que el volumen de la muestra
no supere los 20 ml.
2.- La muestra debe ser fijada inmediatamente con Formalina 10% Tamponada con un
volumen igual al de la muestra.
3.- Centrifugar a 2000 rpm por 10 minutos.
4.- Eliminar el sobrenadante, tomar el pellet con cuidado, ste debe ser colocado sobre un
papel filtro y su vez debe ser envuelto en gasa. Procesarlo igual que una biopsia.


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CITOLOGA GINECOLGICA
Encargado: Tecnlogo Mdico

Extendido de clulas
1.- Una vez recibidas las lminas con el extendido fijado se procede a la rotulacin de la
lmina con el nmero identificatorio correspondiente.
2.- Tincin con Papanicolaou.
3.- Montaje.
4.- Entrega de lminas.

c) Procedimientos para inmunohistoqumica

En el laboratorio de Anatoma Patolgica el procedimiento para realizar Tcnicas
Inmunohistoqumicas es manual y se realiza segn el siguiente protocolo:

1.- Desparafinacin de cortes.
2.- Lavar en agua destilada por 5 minutos.
3.- Recuperacin Antignica con calor en vaporera:
- Cargar vaporera con agua destilada hasta la lnea FULL.
- Colocar en su interior los recipientes con el Buffer de recuperacin VECTOR
ANTIGEN UNMASKING SOLUCION.
- Para preparar la solucin recuperadora se debe tomar 1,9 ml de la solucin VECTOR
ANTIGEN UNMASKING SOLUCION y diluirla en 200 ml de agua destilada.
- Poner la cubierta de la vaporera lo mas hermtica posible, encender la vaporera y
calentar por 20 minutos o hasta alcanzar una temperatura mnima de 85 C. Luego
cargar cada recipiente con las lminas respectivas a recuperar. Las muestras a
estudio debern permanecer por un mnimo de 20 minutos expuestas a la
temperatura de la cmara de vapor. Cumplido el tiempo de recuperacin, la vaporera
se cortar automticamente. All los cortes permanecern por 15 minutos con la
cmara descubierta, luego de lo cual se proceder a cambiar el buffer por agua
destilada.
4.- Bloqueo de Peroxidasa endgena durante 15 minutos a temperatura ambiente, con
Perxido de Hidrgeno.
5.- Lavado en agua destilada.
6.- Lavado en PBS, lavar 3 veces por 1 minuto cada uno.
7.- Bloqueo de uniones inespecficas durante 10 minutos a temperatura ambiente, con
NORMAL HORSE SERUM listo para usar.
8.- Incubacin con Anticuerpo Primario, dejar incubando toda noche a 4C.
9.- Lavado en PBS, 3 por 2 minutos cada uno.


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10.- Incubar con polmero Peroxidasa IMPRESS listo para usar, durante 30 minutos a
temperatura ambiente (20-25 C).
11.- Lavado en PBS, 3 veces por 2 minutos cada uno.
12.- Revelar con cromgeno DAB durante 2 a 5 minutos. Este se prepara diluyendo 1 gota
de CROMGENO DAB en 1 ml de DILUYENTE.
13.- Lavar en agua destilada.
Tincin de contraste con Hematoxilina por 3 minutos.
14.- Deshidratar y montar.

VIII. PROTOCOLO DE CONTROL DE CALIDAD

Control de Calidad de la Tcnica de rutina

El Tecnlogo Mdico de la UAP ser el responsable de analizar previamente la calidad
de las lminas que sern entregadas al Patlogo para su posterior diagnstico, eligiendo
al azar el 10% de stas para luego observarlas al microscopio, verificando:

Calidad del corte: El corte de tejido contenido en la lmina debe estar
completo, incluyendo todos sus bordes.
Calidad de tincin: En el caso de la tincin de rutina (hematoxilina-eosina) la
coloracin con Hematoxilina debe permitir observar claramente las
caractersticas nucleares en tanto que, la coloracin con eosina debe permitir
diferenciar claramente entre el ncleo y el citoplasma.

Control de Calidad de la Tcnica Especial

As como en el anlisis qumico y/o bioqumico se requiere de elementos de juicio que nos
permitan darle garanta a los resultados que se obtienen, as tambin los mtodos
histolgicos e histoqumicos, requieren de estos elementos, por esta razn es de vital
importancia la utilizacin de controles para cada Tcnica a realizar.

a) Cada tanda de THQ deber ir acompaada de los respectivos controles positivos
externos o internos.
b) Los controles positivos son responsabilidad del Tecnlogo Mdico que realiza la
tcnica especial.


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c) Las lminas control deben ser marcadas con el nmero de paciente y la palabra
Control positivo, Caso o Control Negativo, escrita debajo de la tcnica identificatoria en la
etiqueta. Estas lminas control deben ser archivadas con las lminas del paciente para
una rpida consulta y referencia.

d) El Tecnlogo Mdico revisar al microscopio cada control positivo, para validar la
correcta ejecucin de la tcnica.

e) El Tecnlogo Mdico, deber garantizar el stock y correcto estado de los reactivos
necesarios para todas las THQ realizadas.

f) La Unidad de Anatoma Patolgica (UAP) del Hospital de Angol se guiar por las
tcnicas histoqumicas descritas en documento de Procedimiento de tcnicas
histoqumicas.
Nota: Todas las lminas deben ser sometidas a las mismas condiciones.

IX. PLAZOS DE ENTREGA DE RESULTADOS DE EXMENES

Biopsias diferidas, citolgicos y Papanicolaou: 7 das hbiles a partir de la
recepcin de la muestra.

Biopsias diferidas, citolgicos y Papanicolaou solicitados en forma urgente
por mdico clnico: 24 a 48 hrs a partir de la recepcin de la muestra.

Biopsias de piezas quirrgicas con diagnstico de cncer clnico: 14 das
hbiles.

Biopsias de piezas quirrgicas con diagnstico de cncer clnico con
solicitud de urgente por mdico clnico: 7 das hbiles.

Biopsias intraoperatorias: 10 a 15 minutos.

Autopsia: 25 das hbiles.


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X. EVALUACIN

Denominacin del
Indicador
Porcentaje de lminas sin artefacto
de la tcnica
Responsable Tecnlogo
Mdico AP
Objetivo Lograr que la calidad del corte y tincin del tejido sea optima.
Excepciones No hay
Frmula
N de l minas sin artefacto de la tcnica en el periodo x 100
N de l minas entregadas para di agnstico en el periodo

Umbral de cumplimiento 95% Umbral SIS-Q Optimo: 95%-100%
Aceptable: 90%- 95%
Crtico: 90%
Fuente de Datos Hoja de evaluacin de
corte y tincin.
Frecuencia Mensual
Niveles de Aplicacin Unidad de Anatoma
Patolgica
Usuarios
Tecnlogo Mdico


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XI. ACTUALIZACIN
La vigencia del presente Protocolo corresponder al perodo de 3 aos, sin perjuicio de
ello, ser el responsable del indicador en conjunto con sus pares clnicos el encargado de
realizar modificaciones, si producto de la dinmica de las operaciones o de nuevas formas
de trabajo implementadas, el documento requiere de una actualizacin. Para ese efecto,
las modificaciones propuestas debern ser remitidas a la Oficina de Calidad para revisin
y publicacin.
El proceso de actualizacin del Protocolo debe ser registrado en documento que
especifique los respectivos cambios, segn se especifica en el anexo


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