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PRACTICA N 7

RECONOCIMIENTO DE MICROORGANISMOS

NATALIA GARCA GONZLEZ
CRISTIAN ANDRES GONZLEZ TAPIERO

UNIVERSIDAD DEL QUINDO

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS
PROGRAMA DE QUMICA
E. A. BIOLOGA

RESUMEN
PALABRAS CLAVES

INTRODUCCION

Un microorganismo, tambin llamado
microbio u organismo microscpico,
es un ser vivo que slo puede
visualizarse con el microscopio. Son
organismos dotados de individualidad
que presentan, a diferencia de las
plantas y los animales, una
organizacin biolgica elemental. En
su mayora son unicelulares, aunque
en algunos casos se trate de
organismos centicos compuestos
por clulas multinucleadas, o incluso
multicelulares. Dentro de los
microorganismos se encuentran
organismos unicelulares procariotas,
como las bacterias que tienen un
tamao medio de 10 m; y
eucariotas, como los protozoos, una
parte de las algas y los hongos, que
tienen un tamao medio mayor de
250 m.
1


Los microorganismos tienen la
capacidad de adaptarse fcilmente a

1
INGRAHAM. J. L., INGRAHAM. C. A. Introduccin a la
Microbiologa. Reverte S.A., 1998. [Consulta: 03 de
mayo 2014]
cualquier medio debido a que son
muy bsicos y tienen metabolismos
muy rpidos y pueden obtener
fuentes de alimentacin constantes,
ya que pueden alimentarse de
sustancias por lo general orgnicas
como restos vivos o muertos, plantas
o animales. Por ejemplo para las
bacterias, las superficies suaves y
hmedas son idneas para su
supervivencia pudiendo vivir desde
horas hasta incluso meses; los
hongos encuentran un hbitat
propicio en zonas hmedas o sobre
vegetales en descomposicin; los
protozoos, la mayora crece en
colonias, dependiendo el uno del otro
para sobrevivir. Son asexuales y se
reproducen rpidamente a travs de
la fragmentacin o mitosis, se
encuentran las algas que como las
plantas adquieren los nutrientes a
travs de la fotosntesis.
2


Debido a todo esto los
microorganismos fcilmente

2
KIMBALL. J. W. "The Protists"; 2011. [Consulta: 03 de
mayo 2014]

representan riesgos para la salud de
organismos multicelulares como lo
son los mamferos, siendo
protagonistas de infecciones
bacterianas, alergias por las esporas
de los hongos, incluso muertes. Es
necesario entonces reconocer e
identificar estos microorganismos,
para saber de qu clase son y cmo
tratarlos e incluso como saber
aprovechar su actividad; por ello
surgen tcnicas, como: 1. la Tincin
de Gram, que es una tcnica
diferencial empleada en bacteriologa
para la visualizacin entre estructuras
de las bacteria Gram+ (pared ms
gruesa, y una sola capa de
peptidoglucano) y de las bacterias
Gram- (pared ms delgada y dividida
en dos partes), las bacterias Gram-
estarn teidas de un color rosceo,
y las Gram+ de un color violeta.
Y 2. La Tincin de Esporas Wirtz-
Conklin, las endosporas se producen
cuando las condiciones ambientales
son desfavorables (agotamiento de
los nutrientes, temperaturas
extremas, radiaciones, compuestos
txicos, etc.) formndose una espora
por cada forma vegetativa. Al finalizar
el proceso de esporognesis, la
clula vegetativa se lisa y libera la
espora al exterior. Cuando el
ambiente es favorable, la espora
germina generando una nueva forma
vegetativa. Las endosporas, tras la
primera tincin, no perdern el
colorante en el lavado con agua, y s
lo harn las formas vegetativas, que
quedarn teidas con el segundo
colorante.
3



3
VALENCIA, J. C. Bacterias-Protozoos, Hongos, Gua
de laboratorio N 6. 2014. [Consulta: 03 de mayo 2014]

PARTE EXPERIMENTAL

Materiales y Reactivos

Vaso lavador
Asa de siembra
Microorganismos en medio
slido
Parrilla
Portaobjetos
Cubreobjetos
Violeta Genciana
Safranina
Alcohol Acetona
Lugol
Fuscina
Alcohol cido
Azul de Metileno
Verde malaquita (5%)
Safranina (0,5%)
Goteros
Microscopio
Mecheros
Pinzas de madera
Aceite de inmersin.
Muestras de aguas estancadas
Procedimiento
1. Bacterias
Se tomo una muestra de la colonia
dentro del campo estril y se ubico en
el portaobjetos, luego se tio con azul
de metileno, se dejo en reposo
durante un minuto y se lavo con
agua, para despus teir con Lugol
durante un minuto y lavar con
alcohol-acetona. A continuacin se
tio por ltima vez con safranina por
un minuto, se lavo nuevamente con
agua y se observo al microscopio.
2. Hongos
Se esparci una muestra de hongos a
partir de una fresa en
descomposicin, se tio con verde de
malaquita y se flameo durante 5
minutos sin dejar secar el colorante,
despus se lavo con agua destilada,
y luego se tio con safranina durante
1 minuto, se lavo nuevamente con
agua destilada y se observo al
microscopio.
3. Protozoos
Se tomo una muestra de agua en
descomposicin, se tio con Lugol y
se observo al microscopio.

RESULTADOS Y ANALISIS
1. Bacterias.

En la tincin de gram, el azul de
metileno que se agrego tio las
bacterias Gram+ y Gram-, y luego de
adicionar el Lugol (compuesto
formado por I
2
yodo) se formo el
complejo I
2
/azul de metileno que fue
insoluble en agua, pero soluble en la
solucin alcohol-acetona con que se
lavo despus y cuya funcin crucial
fue realizar la decoloracin, donde
las bacterias Gram- se decoloraron y
las Gram+ no, es decir, estas ltimas
se veran de color azul violeta. Las
bacterias Gram- que se decoloraron
debieron quedar de un color rosceo
pero como se agrego safranina como
colorante de contraste activo
nicamente para estas, se vieron de
un color rojo (Fig. 1) mientras que las
Gram+ debieron permanecer violetas
(Fig. 2).
4
Sin embargo no fue posible
observarlas.
Solo se pudo observar las bacterias
Gram- que por las caractersticas de
su constitucin permitieron una
excelente fijacin de la safranina;
estas bacterias poseen una pared
celular ms delgada y dividida en dos
partes con una sola capa de
pptidoglucanos sobre la que se
dispone una membrana externa
constituida por una capa de
fosfolpidos y otra de glicolpidos
asociados, estos ltimos, a
polisacridos que se proyectan hacia
el exterior
5
.

No fue posible observar las bacterias
Gram+, las cuales poseen una
envoltura celular compuesta por una
membrana citoplasmtica y una
pared celular compuesta por una
gruesa capa de peptidoglucano que
confiere una gran resistencia a estas
bacterias y es la responsable de
retener el tinte durante la tincin de
Gram. sin embargo el tinte no se
retuvo impidiendo la observacin de
este tipo de bacterias, lo cual pudo
ocurrir por diferentes causas, bien se
que el cultivo de muestra estuviera
contaminado de alguna manera, que
la colora concentracin de los
reactivos de tincin no fuera
adecuada, que los tiempos de tincin
no fueran correctos, o que la muestra

4
Tincin De Gram, [En lnea].
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_
Gram [Consulta: 03 de mayo 2014]

5
VALENCIA, J. C. Bacterias-Protozoos, Hongos, Gua
de laboratorio N 6. 2014. [Consulta: 03 de mayo 2014]

se hubiera trabajado inicialmente
fuera del campo estril.




Fig 1. Bacterias Gram- vistas en objetivo 10x.



Fig 2. Bacterias Gram+ y Gram- [En lnea].
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_o
dontologia/unidades/labv/LabMicro/Diag_dire
cto.html [Consulta: 03 de mayo 2014]


2. Hongos.

En la prctica se observaron los
hongos producidos por la fresa en
descomposicin por medio de la
tincin de esporas de Wirtz-Conklin,
en la cual se produjeron endosporas,
las cuales se producen cuando las
condiciones ambientales son
desfavorables, formndose una
espora por cada forma vegetativa.
Finalizado el proceso de
esporognesis, la clula vegetativa se
lisa y libera la espora al exterior.
Cuando el ambiente es favorable, la
espora germina generando una
nueva forma vegetativa.

La envuelta de la endosporas es ms
compleja e impermeable que la
envuelta de las clulas vegetativas en
las que se forma. Slo se puede teir
el contenido de la espora alterando
su envuelta. La impermeabilidad de
las cubiertas dificulto que las
endosporas se decoloraran una vez
teidas. El verde de malaquita es un
colorante dbilmente bsico y por
tanto, se une dbilmente a la
bacteria. Penetrndose en la clula
vegetativa. Adems cuando se
calent la preparacin tambin hubo
penetracin en las endosporas.
Durante el lavado con agua, el verde
de malaquita se elimino de las clulas
vegetativas, pero no de la
endosporas. La safranina, que es el
colorante de contraste solo pudo teir
a las clulas vegetativas. Ambas; las
endosporas, teidas de color verde, y
las clulas vegetativas, teidas de un
rosceo, se indican en la Fig. 3 y 4.
En esta se puede observar la bacteria
llamada Bacillus subtilis, la cual es
una bacteria Gram+, que posee
endosporas capaces de sobrevivir en
tiempos de tensin ambiental.
6



6
Tincin de esporas. [En lnea].
http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologi
a/tinciones/endosporas. [Consulta: 03 de mayo
2014]



Fig. 3. Bacteria Bacillus subtilis observada en
objetivo 10x.



Fig. 4. Bacteria Bacillus subtilis observada en
objetivo 40x.


3. Protozoos

La cantidad de microorganismos
vistos en el agua fue mnima puesto
que la muestra no estaba tan
contaminada como para obtener
varios microorganismos, sin embargo
se pudo identificar un spirostomum
(Fig. 5) que es un protozoo ciliado
bastante comn en aguas poco
oxigenadas y cargadas de materia
orgnica. y un alga (Fig. 6), gracias
al Lugol, el cual ayuda a detener el
movimiento de los protozoos pues
mata las formas mviles.

Fig. 5. Spirosfomum observados con objetivo
10x.


Fig. 6. Algas observadas con objetivo 10x.

CONCLUSIONES

En la tincin de esporas se observo la
bacteria Bacillus subtilis gracias a los
colorantes utilizados, que ayudaron a
debilitar los compuestos de los
hongos.




CUESTIONARIO

1. Que otros grupos de animales
diferentes a protozoos podramos
encontrar en una muestra de agua
estancada?

En el agua estancada por lo general
se pueden encontrar
microorganismos del tipo bacterias y
protistas. Estos ltimos se clasifican
por una parte en el grupo de las algas
como clorofceas, rodofceas,
feofceas, y crisofceas; y por otra
parte se clasifican en protozoarios
como los sarcodinos, ciliados,
sporozoarios y mastigoforos.
7


2. Porque son importantes los
foraminferos?
Los Foraminiferos suelen
considerarse como la ms importante
de los grupos de microfsiles marinos
debido a que son organismos muy
abundantes en los sedimentos

7
Reino protista. [En lnea].
http://cmapspublic2.ihmc.us/rid=1349629945521_91419
8533_46482/REINO%20PROTISTA.cmap [Consulta: 03
de mayo 2014]
marinos y presentan una gran
diversidad de especies, y su gran
utilidad en los estudios de tipo
bioestratigrfico, paleoecolgico,
paleoceanogrficoetc.
8


3. Que enfermedades producen en
el hombre los hemoparasitos
vistos en el laboratorio? Cuales en
nuestro pas?

Los hemoparasitos pueden causar
patologas como miocarditis,
vsceromegalias, insuficiencia
cardiaca congestiva, hipertrofia
ventricular izquierda con aneurisma
apical, bloqueo auriculoventricular,
sndrome de Stokes-Adams,
alteraciones electrocardiogrficas,
bloqueo de rama derecha, arritmias;
enfermedad de Chagas, sndrome de
Romaa. La enfermedad de Chagas
es una de las causadas por
hemoparasitos en Colombia la causa
el tripanosoma cruzi, que adems es
predominante en zonas tropicales.
9

4. En que otros grupos de protozoos
encontramos parsitos en el
hombre?
Tenia o Solitaria
Duela del Hgado
Anisakis
Ascaris

8
Molina, E. (2002, 2004). Micropaleontologa. Prensas
Universitarias de Zaragoza, Coleccin Textos Docentes,
93. 634 pp. ISBN 84-7733-619-9 [Consulta: 03 de mayo
2014]
9
Dra. Diez Albares T. Hemoparcitos, [En lnea].
http://www.slideshare.net/tatiana_10/hemoparsi
tos [Consulta: 03 de mayo 2014]
Trhichinella Spiralis
Garrapatas
Piojos
Ladillas
Pulgas
Plasmodium
Trypanosoma

5. Algunos protozoos de vida libre,
como el paramecio, poseen
vacuolas contrctiles. Cul es la
funcin de ellas? Qu les
sucedera a estos
microorganismos si las vacuolas
contrctiles dejaran de funcionar?
Las Vacuolas CONTRCTILES o
Pulstiles cumplen la funcin de
acumular agua en los seres
unicelulares como los protozoos que
acumulan el agua excesiva en una o
varias Vacuolas Pulstiles, las que se
encargan de expulsarla conservando
constante la concentracin del medio
intracelular.
En las vacuolas pulstiles o
contrctiles se observan pequeos
conductos. Los conductos formados
en el interior del protoplasma, extraen
lquidos, y el que se abre en la
superficie de la ameba, los expulsa
cuando la vacuola se contrae. La
ameba incorpora alimentos por el
proceso de fagocitosis, es decir
incorpora a travs de sus
pseudpodos, partculas slidas que
encuentra al desplazarse.

Los pseudpodos de la ameba
engloban a las partculas hasta que
quedan dentro de la masa
protoplasmtica, rodeados por una
gota de agua, lo que da origen a una
vacuola alimenticia. Esta vacuola se
desplaza dentro de la ameba
impulsada por los movimientos
internos del protoplasma.

Mientras la vacuola se traslada, el
alimento que contiene es digerido
mediante los jugos segregados por el
protoplasma, una vez que ha sido
asimilada la parte nutritiva, queda
dentro de la vacuola lo que no se
digiere, o sea, el excremento. la
vacuola toma entonces el nombre de
vacuola excretora, que se acerca a la
periferia y cuando expulsa su
contenido al exterior recibe el nombre
de vacuola contrctil.
6. Por qu las algas son
importantes? Cite tres razones
para ello.
Las algas son hogares naturales para
muchas especies marinas en sus
primeros estadios
son fuente de alimento primario para
los quelonios
evitan la erosin de los ocanos
son fuente de alimento para el ser
humano
se utilizan como frmacos en el
tratamiento del cncer
etc.

7. Qu diferencias encuentran
entre las algas y los protozoarios
que estn observando? (Apyese
en revisin bibliogrfica)

Algas


Protozoos

Microorganismos
procariotas que

Microorganismos
eucariotas que
contienen
clorofila que
llevan a cabo la
fotosntesis
oxignica
carecen de pared
celular

Auttrofas Hetertrofos
Tienen al menos
un cloroplasto

Se clasifican de
acuerdo a su tipo
de movilidad
Se parecen a las
plantas
Se parecen a los
animales
Unicelulares

Carecen de
clorofila
10


10
LEGGETT, R. Diferencias entre protozoos y algas.
[En lnea]. http://www.ehowenespanol.com/diferencias-
protozoos-algas-info_176868/ [Consulta: 03 de mayo
2014]