MARCHA TOXICOLGICA

DE URGENCIA


PARA LABORATORIOS DE BAJA COMPLEJIDAD


Las tcnicas citadas han sido recopiladas de libros, apuntes personales e internet, o bien
cedidas por colegas bioqumicos de diferentes laboratorios del pas.
Ninguna de las tcnicas es de produccin personal, pero se les dio el ordenamiento de
MARCHA TOXICOLGICA que aplico en mis lugares de trabajo.






RAQUEL FERNNDEZ DE CATTANEO
BIOQUMICA - TOXICLOGA - CRIMINLOGA
Laboratorio de Toxicologa del Cuerpo Mdico Forense.
Poder Judicial de Mendoza.
Adjunta de Ctedra de Qumica Toxicolgica y Legal.
Facultad de Bioqumica - Universidad Juan Agustn Maza.
Responsable del rea de Criminologa. Post Grado de Medicina Legal.
Facultad de Ciencias Mdicas - Universidad Nacional de Cuyo.
Docente de la Ctedra de Toxicologa, Maestra en Criminologa.
Facultad de Psicologa - Universidad del Aconcagua.
Mendoza - Argentina
Ao 2007

Tel: 261 - 4445871
e-mail: raquelcattaneo@millic.com.ar
2
MARCHA TOXICOLGICA DE URGENCIA

I- OBJETO: realizar una marcha toxicolgica sencilla, de manera de poder descartar
o confirmar grandes grupos de txicos.
II- INFORMACIN PREVIA AL ANLISIS: antes de comenzar un anlisis es
importante obtener tanta informacin sobre el paciente como sea posible: mdica,
social, la historia ocupacional, tratamiento dado, y de resultados de laboratorio o de
otras investigaciones previas. Indagar acerca del tiempo que transcurri entre la
ingestin o exposicin y la coleccin de muestras.. Toda la informacin relevante sobre
un paciente se debe registrar en el laboratorio.
III- POOL BSICO DE MATERIALES PARA LABORATORIOS DE
URGENCIAS TOXICOLGICAS
A) SANGRE.
B) ORINA.
C) CONTENIDO GSTRICO.

IV- RECOLECCIN , CONSERVACIN Y TRANSPORTE
A) SANGRE: tratar de no dejar cmara de aire.
1. Sangre heparinizada: 10ml, como mnimo.
2. Sangre con FlNa u oxalato : 2ml.
B) ORINA. En lo posible 50ml, en envase estril, hermtico y sin
conservantes. La muestra se debe obtener cuanto antes, idealmente
antes de que se inicie cualquier terapia de droga.
C) CONTENIDO GSTRICO: como mnimo 20ml, en envase estril,
hermtico y sin conservantes.
1. Vmito.
2. Aspirado gstrico.
3. Primer lavado gstrico.
D) RESIDUOS DEL LUGAR DEL HECHO: Es importante que todas las
botellas u otros envases y otros materiales sospechosos encontrados con
o cerca del paciente (residuos de la escena) se recojan y conserven para
el anlisis en caso de necesidad puesto que pueden estar relacionados
con el episodio de la intoxicacin.
V- RECOLECCIN, TRANSPORTE Y ALMACENAMIENTO de MUESTRAS
A) IDENTIFICACIN: Las muestras enviados para el anlisis se deben
etiquetar claramente con el nombre completo del paciente, la fecha y la
hora de la recoleccin, aclarando la naturaleza del espcimen (sangre,
orina, etc.).
B) RECEPCIN: La fecha y la hora de la recepcin de las muestras si no
han sido obtenidas en el mismo nosocomio.
C) REGISTRO: todas las muestras deben ser registradas con un nmero
nico para su identificacin.
D) ALMACENAMIENTO: todos las muestras biolgicas se deben
almacenar en 4C antes y despus del anlisis. Tambin debe disponerse
de freezer para la conservacin de las muestras cuando deban
resguardarse por ms tiempo.

VI- PROCESAMIENTO DE LOS MATERIALES: esquema general


Marcha Toxicolgica de Urgencia

3
A. TXICOS VOLTILES

1. ETANOL

I. Reacciones de ORIENTACIN: en orina, sangre, en contenido
gstrico, lquidos varios.

1) REACCION DEL BICROMATO DE POTASIO en cmara de Conwey
Materiales: sangre 1ml, orina 1ml, humor vtreo 1ml, tejidos 4ml, cualquier lquido a
investigar.
En compartimento externo se coloca el material a investigar + agente liberador: CO
3
K
2

solucin saturada 1ml, en el compartimento interno el agente captador 2ml de Solucin
sulfocrmica 0.1 N
Se deja en reposo a T ambiente por tres horas.
POSITIVO: Se observa el cambio de color de naranja a verdoso.

II. Reaccin de CERTEZA

1) REACCION DE LIEBEN MODIFICADA: para diferenciar etanol de aldehdo
etlico y acetona

2ml del destilado + 0.5ml NH
4
(OH) + gota a gota solucin yodo yodurada hasta tinte
oscuro

En presencia de alcohol etlico se produce un precipitado negro, que desaparece por
calentamiento y reaparece por agregado de reactivo. En las mismas condiciones el aldehdo
etlico y la acetona producen yodoformo.

III. CUANTIFICACIN

1) COLORIMETRA en cmara de CONWEY: en SANGRE ENTERA (el valor lo
da la curva o los testigos), en ORINA (en esta matriz, al resultado se le debe agregar
un 10%), en contenido gstrico no es representativo ya que all se encuentra lo que
no se absorbi.
Reaccin INESPECFICA, basada en las propiedades reductoras del alcohol, la dan
tambin otros alcoholes, aldehdos, etc.
Se basa en la lectura en espectrofotmetro de la aparicin del color verde del Cr
+++
(lectura
a 600nm) debido a la reduccin del bicromato por la accin del etanol, o la desaparicin
del color amarillo del bicromato (lectura a 450nm).
Se trabaja con
Cmara problema,
Cmara blanco (en lugar de muestra, agua destilada),
Cmara testigo (con solucin de concentracin conocida de etanol).

a. Colocar vaselina en el borde de la cmara, preparar el vidrio
esmerilado
b. En el interior de la cmara: 1ml de Solucin sulfocrmica 0.1 N
c. En el exterior de la cmara: 100l de la muestra + 0.5ml de CO
3
K
2

solucin saturada.
Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
4
d. Cerrar hermticamente la cmara.
e. Dejar a temperatura ambiente una hora ms menos.
f. Se deja enfriar y se transfiere el lquido colector a tubos de ensayo, se
lava la cmara con agua se vuelca en el tubo y se enrasa a 4ml con
agua destilada.
Se hace la lectura en espectrofotmetro a 450nm del blanco, del problema y del testigo (en
lugar de testigo, se puede realizar una curva de calibracin con varias cmaras con
soluciones de concentraciones conocidas).

Cp Ct Cp = Ct . DOp
DOp DOt DOt

SE DEBE REALIZAR CURVA DE CALIBRACIN PREVIA, O TRABAJAR CON
TESTIGO DE CONCENTRACIN CONOCIDA.


2. METANOL

1) Reaccin del cido cromotrpico para diferenciar de etanol. Reaccin
ESPECFICA. Se realiza en sangre, orina, contenido gstrico. Se puede
cuantificar, en realidad el solo hecho de encontrarlo ya es diagnstico de
intoxicacin, NUNCA debe encontrarse en estos materiales.


Muestra + carbonato potasio sol sat



30 /TA
2ml sulfrico 10%
Reactivos
a. cido sulfrico al 10% (fijador)
b. solucin saturada de carbonato de potasio
c. solucin acuosa de permanganato de potasio
d. solucin acuosa saturada de bisulfito de sodio de preparacin reciente
e. cido cromotrpico al 0,5%
f. cido sulfrico concentrado
Tcnica
Se coloca en el compartimiento interno 2ml de cido sulfrico al 10 %, en el externo
2ml de solucin saturada de carbonato de potasio ms 1ml de sangre (o la muestra a
analizar). Se mezcla por rotacin suave y se deja difundir 2 horas a temperatura ambiente.
Luego se toman 2ml de la solucin del compartimiento central, repartindose por partes
iguales en dos tubos rotulados 1 y 2.
En el tubo 1 se agrega 0.15ml de la solucin acuosa de permanganato de potasio, y en
el 2 un volumen similar de agua destilada. Luego ambos tubos se procesan del mismo
modo, comenzando por dejarlos reposar 10 minutos para que el metanol se oxide a formol,
luego de los cuales se debe agregarles 0.2ml de la solucin acuosa saturada de bisulfito de
Marcha Toxicolgica de Urgencia

5
sodio y agitar hasta decoloracin total, despus de la cual se debe agregar 0.2ml del cido
cromotrpico al 0.5% y mezclar bien colocando ambos tubos en un bao de hielo y sal.
Posteriormente se agregan 2.5ml de cido sulfrico concentrado y se lleva a bao mara
hirviente durante 15 minutos. Se deja enfriar y se mezcla, y se lee a 570 manmetros.
Abs. del metanol = Abs tubo 1 Abs tubo 2
Abs. del formol = Abs tubo 2 Abs del blanco
Para estimar la concentracin del formol y del formaldehdo debe hacerse una curva
de calibracin, con una solucin madre de metanol (790mg/l) que se prepara diluyendo
1ml de metanol absoluto en c.s.p. para 1.000ml con cido sulfrico al 10% v/v. En la tabla
inferior se detallan los puntos tentativos de la curva.
Blanco Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4
Metanol mg/l - 197.5 395 592 790
ml metanol
(sol. madre)
- 0.25 0.5 0.75 1
ml de H
2
SO
4

10% v/v
1 0.75 0.5 0.25 -
La curva se realiza agregando a todos los tubos la solucin acuosa de permanganato
de potasio y realizando todos los pasos de la reaccin descripta. El resultado anterior
deber multiplicarse por 1.21 en el caso de muestras de sangre u orina pues la tensin del
metanol no se reduce a cero en l lquido absorbente (H
2
SO
4
10% v/v) del compartimiento
central de la cmara, alcanzndose el equilibrio de difusin cuando la absorcin adquiere
un valor aproximado al 82.5%. El color obtenido con el ensayo cromotrpico sigue la ley
de Beer dentro de los lmites de la curva de calibracin. Si las lecturas fueran muy altas se
puede diluir (B, T y D) a 10ml con H
2
SO
4
48% v/v.

3. MONXIDO DE CARBONO

Todas estas reacciones se realizan en SANGRE ENTERA.

I- Reacciones de ORIENTACIN

1) ENSAYO DE DILUCIN

Se diluye en dos tubos rotulados, una muestra de sangre normal como testigo y la
muestra problema, al 1% en agua destilada (+-).

Agua destilada 10ml + unas gotas de sangre entera de la muestra observar la
diferencia de color entre el problema y el testigo.

La sangre normal es de color rojo naranja, y la del intoxicado con CO es de color
carmn.


Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
6
2) ENSAYO ALCALINO:

(Reaccin de Hoppe Seyler).. Se les agrega unas gotas de Na(OH) 0,1N a cada tubo y se
observa la diferencia y la velocidad de cambio de coloracin.

Agua destilada 10ml + unas gotas de sangre entera de la muestra + Na(OH)
observar la diferencia de cambio de color entre el problema y el testigo.

La sangre normal inmediatamente comienza a ponerse de un color verde castao desde el
fondo del tubo hacia arriba, la sangre de un intoxicado se acenta el color carmn y demora
en cambiar de color o no cambia.

II- REACCIONES DE CERTEZA

1) Difusin en cmara de CONWAY: - aislamiento - identificacion - cuantificacion

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN; con cloruro de paladio (Cl2Pd); en esta
tcnica los dos pasos se realizan conjuntamente.

El CO es liberado de su combinacin con la hemoglobina por cidos diluidos (agente
liberador en cmara externa con la muestra problema: SO4H2 al 10%) y difundido a una
solucin captadora de cloruro de paladio (Cl2Pd 0.01: 0.088gr%ml de agua) que se coloca
en la cmara interna. Se deja aproximadamente 2 horas.

a. En el interior de la cmara: 2 ml de Cl
2
Pd 0.001N.
b. Colocar vaselina en el borde de la cmara, preparar el vidrio
esmerilado
c. En el exterior de la cmara: 1ml de la muestra + 1 ml de sulfrico al
10%
d. Cerrar hermticamente
e. Dejar a temperatura ambiente 2hs.
Si la reaccin es slo cualitativa, es suficiente esperar a que se forme el Pd como pelcula
negra.
SIEMPRE realizar una prueba en paralelo con sangre normal, a veces el Cl
2
Pd se
autoreduce y dar un falso positivo, si esto sucede se debe preparar nuevamente la solucin
de paladio. La concentracin del reactivo de paladio es la que indica Gisbert Calabuig para
realizar luego la cuantificacin, en nuestro laboratorio como es forense no cuantificamos,
por lo que la solucin del reactivo la hago un poco ms concentrada para ver mejor la
pelcula de Pd.

III- CUANTIFICACIN
CARBOXIHEMOGLOBINA.
Mtodo facilitado por la Red de Toxicologa RETOXLAB
DEFINICIONES-ABREVITURAS: Carboxihemoglobina (COHb), Oxihemoglobina
(OHb), solucin (sol), minutos (min).



Marcha Toxicolgica de Urgencia

7
DESARROLLO
MUESTRA:
Sangre obtenida por puncin venosa o arterial y recolectada sobre Heparina en un tubo lo
ms hermtico y lleno posible (para evitar prdidas por evaporacin). Se puede conservar
hasta 48 hs en heladera. En lo posible remitir lo antes posible al laboratorio.
FUNDAMENTO:
Las distintas formas de la Hemoglobina tienen la particularidad de presentar bandas de
absorcin en la regin del espectro visible.
En solucin alcalina y en presencia de hidrosulfito la oxiHb y la metaHb se transforman
en deoxiHb con un mximo de absorcin a 555 nm.
La COHb no es afectada en estas condiciones y su mximo ocurre a 541 nm.
El empleo de la solucin amoniacal es para formar hematina alcalina que posee una curva
de absorbancia distinta a la COHb y OHb.
REACTIVOS:
Solucin de hidrxido de amonio 0.12M (1.6 ml de amonaco en 100 ml de agua
destilada), es estable en heladera por un ao. Hidrosulfito de sodio slido (ditionito), cido
sulfrico, formiato de sodio, hidrxido de sodio 10 %(P/V).

INSTRUMENTAL:
Espectrofotmetro que posea un ancho de banda de 3nm. Celdas de lectura de 10 mm de
paso de luz. Centrfuga. Equipo generador de monxido de carbono.

TCNICA:
1.- Realizar una dilucin de la sangre 1/10 en agua (0.5 ml + 4.5ml). Homogeneizar. Dejar
en reposo 5 min. Y centrifugar 10 min a 3000 rpm.
2.- Tomar 0.5 ml de la sol anterior y colocar en 4.0 ml de sol amoniacal y agregar una
pizca (aproximadamente 10 mg) de ditionito. Homogeneizar y dejar reposar 5 min.
3.- Leer las absorbancias a 541 y 555 nm.
4.- Obtener el cociente de absorbancias Ab 541/Ab 555.
Clculo:
Empleando la relacin obtenida en el punto 4 anterior, entrar en la curva de calibracin (o
empleando la ecuacin de regresin lineal) y hallar el % de COHb.
Construccin de una curva de calibrado:
A una muestra de sangre fresca obtenida con heparina (o pool de muestras) de pacientes
normales, no fumadores y sin patologas respiratorias, efectuar dos diluciones 1/10 por
separado en agua.
A una fraccin hacer burbujear Oxgeno de 99.5% de pureza por 15 min para eliminar el
posible monxido de carbono presente.
A una segunda fraccin hacer burbujear monxido de carbono durante 20 min obtenido a
partir de cido sulfrico y formiato de sodio (como se describe en el diagrama); si se
dispone de un tubo de monxido de 99.5% de pureza, burbujear 5 min. De esta manera se
obtendr una sangre con 100% de saturacin.
Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
8
Empleando la 1 fraccin no contaminada realizar diluciones de manera de obtener 75, 50,
25, 12.5 y 6.25 y 0 % de saturacin.
Procesar como se indica en la tcnica a partir del punto 2.
Construir la curva de calibracin, representando en el eje Y la relacin de Abs y en X el %
de saturacin de COHb.
Generador de Monxido de Carbono:
(1) Acido sulfrico. (2) Formiato de sodio o cido Frmico. (3) Solucin de Hidrxido de
Sodio al 10% (P/V). (4) sangre a saturar.

Sobre 1 gr de Formiato o 10 ml de c. frmico hacer caer de 5 a 10 ml de sulfrico
concentrado gota a gota (lentamente y de a poco segn la intensidad del burbujeo en la
solucin sangunea). El calentamiento del baln debe ser suave y transitorio (cuando el
burbujeo disminuye francamente).














4. CIANUROS

I. REACCIN DE IDENTIFICACIN

1) Investigacin de CIANURO por difusin en cmara de Conway: en
CONTENIDO GSTRICO.
a. En el interior de la cmara: 2 ml de Na(OH) 0.1N
b. Colocar vaselina en el borde de la cmara, preparar el vidrio
esmerilado
c. En el exterior de la cmara: 2 ml de la muestra + 1 ml de sulfrico al
10
d. Cerrar hermticamente
e. Colocar en estufa 40C 1 hora
f. Trasvasar el lquido colector a un tubo de ensayo y verificar la
presencia de CN-.


Marcha Toxicolgica de Urgencia

9
Formacin del Azul de Prusia: especfica para cianuros.
Se recoge 1ml mililitros del centro de la cmara + 1ml de sulfato ferroso al 10% recin
preparado, se calienta suavemente, enfriar, y se agregan unas gotas de cido clorhdrico.
En caso de haber cianuros en la muestra aparecer el color azul caracterstico.

2) Investigacin de CIANURO por difusin en erlenmeyer con tapa hermtica y
papel alcalino: en SANGRE, PULMN, para investigar CN en casos de
incendio
En erlenmeyer colocar como mnimo 5ml de sangre, diluir con 10 ml de agua
destilada (10gr de pulmn molido con 10 a 15ml de agua (d)) y agregar ClH 20% hasta pH
cido, colocar
a. Papel alcalino (tira de papel de filtro embebida en hidrxido de sodio
al 20%) en la boca del frasco sin que toque la muestra y cerrar
hermticamente. Dejar en BM a 70C 60 minutos. Retirar el papel y
sobre l realizar la reaccin de Azul de Prusia.
b. Papel de cido pcrico (tira embebida en sol saturada de cido
pcrico), formacin de furfural (reaccin ms sensible pero menos
especfica) de color rojo.

II. CUANTIFICACION:

1) METODO VOLUMETRICO DE DENIGES

IAg + 2 CN- [Ag(CN)2] + I-

2ml del destilado o de cmara de Conway en medio amoniacal (NH3, 6N) + IK , se titula
con NO3Ag 0,1 N hasta turbidez amarilla de IAg ( se basa en la accin disolvente del
anin ciangeno sobre el IAg coloidal, mientras haya CN- se forma el complejo
ARGENTICIANOGENO soluble, cuando se acaba el CN- se forma la turbidez del IAg)

1ml de nitrato de plata = 0,0054gr. de CNH


5. TOLUENO

I. REACCIN DE ORIENTACIN

1) REACCION DE LA ROSEN Para ORINA o SANGRE
Con Reactivo de Marqus
Se debe realizar en medio anhidro.
En cmara de Conway: 2ml de muestra en compartimento externo y 2ml de tetracloruro de
carbono en el interno se agita suavemente, se espera durante 2 horas. Se retira el
tetracloruro se coloca en tubo y se realiza la reaccin con el reactivo de Marqus.
Rvo de Marqus: sol de formol al 10% en SO4H2 (c), preparar en recipiente con hielo en
el momento de usar.

2ml del tetracloruro de carbono + 2 3gtts. de Rvo. de Marqus



Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
10
II. CUANTIFICACIN

1) METABOLITO: cido hiprico. Ver BENCENO



6. CLORADOS

I. REACCIN DE ORIENTACIN

1) Test de Fujiwara para clorados: para ORINA O SANGRE
DESPROTEINIZADA. Para tricloro compuestos (hidrato de cloral, cloroformo,
tricloroetileno, dicloralfenazona)Esta reaccin se realiza con blanco y testigo de
cido tricloroactico
a. En tres tubos agregar respectivamente
(i) 0.5ml de muestra
(ii) 0.5ml de agua (muy importante hacerlo!!
(iii) 0.5ml de cido tricloroactico (10mg/l)
b. Agregar A CADA TUBO 1ml de Na(OH) (5molar) + 1ml de piridina
c. Agitar suavemente y colocar en BM hirviente por 2 minutos.
POSITIVO: color rojo/prpura en la capa piridnica (superior) de los tubos a y c, el
blanco b no debe cambiar de color.


7. BENCENO

I. CUANTIFICACIN

1) Investigacin de Acido HIPRICO en ORINA.
Reactivos
a. cido clorhdrico (0.05mol/l).
b. Rvo. Dimetilaminobenzaldehido: p-Dimetilaminobenzaldehido (40
g/l) en anhdrido actico que contiene algunos cristales (cerca de 0.5g)
de acetato anhidro del sodio.
c. Cloruro de sodio (slido).
d. Silicona precipitada.
e. Estndares
(i) Orina como blanco
(ii) Orina a la cual se ha agregado cido hiprico en las
siguientes concentraciones 0.2, 0.5, 1.0 y 2.0 g/l. Todas las muestras se deben preparar a
partir de un espcimen de la orina. Estas soluciones son estables para 1 mes si estn
almacenadas en 4C en la oscuridad.
Mtodo
a. Ajustar el pH de 1.0ml de muestra o del estndar a 2 con el cido
clorhdrico 0.05mol/l, y agregar el cloruro de sodio hasta saturacin.
Marcha Toxicolgica de Urgencia

11
b. Agregar 2ml de ter dietilico: metanol (9: 1), se agita en vortex 1
minuto y luego se centrifuga por 5 minutos.
c. Pasar la capa etrea a un tubo limpio y re extraer la fase acuosa con
2ml ms de ter dietlico: metanol (9: 1).
d. Combinar los extractos etreos y agregar 1ml a 0.5 g de la silicona
precipitada en un tubo limpio.
e. Dejar evaporar el solvente debajo de una corriente del aire o del
nitrgeno comprimido.
f. Agregar 3ml de reactivo de dimetilaminobenzaldeido, y calentar en un
bloque de la calefaccin a 135C por 5 minutos.
g. Enfriar, agregar 4ml de metanol, agitar con vortex 1 minuto y
centrifugar por 5 minutos.
h. Recuperar el extracto metanlico y pasar a un tubo limpio y re extraer
la silicona con 4ml ms de metanol.
i. Combinar los extractos metanlicos y medir la absorbencia en 460
nanmetro contra el extracto en blanco de la orina.
Resultados
Preparar un grfico de calibracin con las lecturas de las soluciones de cido
hiprico estndares y calcular la concentracin cido hiprico en la muestra.
Es importante utilizar una porcin de la misma orina para preparar los
estndares y el blanco, puesto que la excrecin del hipurato vara con el consumo
de productos que utilicen benzoato, segn lo indicado arriba.
Sensibilidad
Hipurato, 0.1 g/l.


8. NITRO DERIVADOS, Determinacin de METAHEMOGLOBINA

I. REACCIN DE ORIENTACIN

1) Reaccin de DILUCIN
Con niveles importantes se ve sangre color chocolate que no cambia a rojo rosa
incluso luego de 10 minutos de contacto con el aire.

2) Con CIANURO DE POTASIO
El cambio inmediato del color chocolate de una dilucin 1/100 de sangre por el
agregado de un cristal de cianuro de potasio es un indicio de metahemoglobinemia.

II. CUANTIFICACIN

1) Mtodo ESPECTROFOTOMTRICO
Los mtodos de cuantificacin se basan en que lla hemoglobina presenta un mximo
de absorcin a 522nm y la metahemoglobina a 578nm. Se realizan lecturas a ambas
longitudes de onda de un hemolizado desconocido y un control al que se le agrega
ferricianuro de potasio para llevar toda la hemoglobina a metahemoglobina.

Materiales

a. Sangre heparinizada (5ml) del paciente y normal para control
b. Solucin fisiolgica
Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
12
c. Buffer fosfato 0.01 M pH 6.5
d. Tubos de hemlisis
e. Ferricianuro de potasio (en cristales)
Tcnica

Lavar los hemates (paciente y control) 3 veces con solucin fisiolgica.
Suspender 20l de hemates lavados en 3ml de buffer fosfato
Agitar vigorosamente y luego de 5 minutos colocar 10 minutos en heladera 10 minutos.
Retirar y centrifugar 10 minutos a 3000rpm
Separar 1ml del sobrenadante y diluir con 2ml de buffer fosfato
Leer absorbancia de ambos hemolizados (paciente y control) a 522 y 578 usando como
blanco el buffer
Aadir al hemolizado control 1 2 microcristales de ferricianuro de potasio y leer a 522 y
578nm. Esta lectura corresponde al 100 % de metahemoglobina
Tanto para la muestra del paciente como la del control (antes y despus de aadir
ferricianuro de potasio) calcular la relacin A578/A522.

Interpretacin de los resultados

1. El valor R correspondiente al control sin ferricianuro de potasio se le asigna un valor
de metahemoglobina 0 % y se representa en el eje de las ordenadas (Y) de una hoja de
papel milimetrado. El valor R del control con ferricianuro se representa en el eje de las
abscisas (X) asignndole un valor de 100 % de metahemoglobina. Se traza una recta que
una ambos puntos.
2. Si el R de la muestra es igual o superior al control sin agregado de ferricianuro
significa que la muestra carece de metahemoglobina
3. Si el R de la muestra es inferior se calcula el % de metahemoglobina de la muestra
trazando una paralela al eje de abscisas desde el valor situado en el eje de ordenadas hasta
la recta patrn y de ah una perpendicular al eje de abscisas que dar el resultado.
2) PARAAMINOFENOL: metabolito.
Determinacin de paraaminofenol en orina Se utiliza cido tricloroactico
para precipitar las protenas y se determina la cantidad de paraaminofenol en
una alcuota de sobrenadante mediante el agregado de fenol para formar el
complejo fenol-indofenol de color azul que se mide espectrofotomtricamente a
640nm.
B. TXICOS METLICOS

EXTRACCIN Y REACCION DE ORIENTACIN GENERAL Ensayo de Reinsch:
para arsnico, antimonio, bismuto y mercurio

Esta tcnica fundamentada en la electrlisis, proporciona un mtodo de rpida
deteccin y separacin, para posterior identificacin y determinacin de los elementos:
arsnico, antimonio, bismuto y mercurio, con una sensibilidad del orden de los 10g.
Pueden interferir: selenio, teluro y azufre, por lo que insistimos solo debe aprovecharse
para la SEPARACIN , debiendo realizarse despus ensayos especficos de
identificacin.

Marcha Toxicolgica de Urgencia

13
Este mtodo es importante porque
Permite revelar pequeas cantidades de los txicos ms
comunes e importantes en toxicologa.

Puede ser aplicable a materia orgnica como vsceras, pero
tambin a orina, contenido gstrico, vmitos, bebidas,
alimentos, etc., ANTES de realizar la destruccin de los
mismos y as orientar las operaciones analticas a seguir.
TCNICA:

a. el material se desmenuza si es slido, y se coloca en erlenmeyer, se
agrega ClH al 10% (V/V) en cantidad suficiente.
b. Se incorpora en el recipiente, una laminilla de cobre electroltico de
1cm
2
, o un alambre grueso de cobre de 2 3mm de dimetro y 150m
de longitud que se enrolla sobre un lpiz para obtener una espiral, que
se ha tratado previamente con cido ntrico 2N puro hasta que quede
limpio y brillante, para eliminar impurezas y xidos superficiales, se
enjuaga con agua destilada, se pasa por alcohol para desgrasar y se
seca con toalla de papel.
c. Se cuelga la laminilla o la espiral desde la boca del material de vidrio
y se coloca a BM hirviente una hora, se saca la laminilla y se observa
si ha sufrido alguna modificacin en su color y aspecto.
d. El depsito obtenido se disuelve en cido ntrico y se somete la
dilucin a anlisis de cationes.
e. Existen tambin reacciones que se realizan directamente con la lmina
o el espiral de cobre que son rpidas pero menos seguras como es el
ensayo de Gutzeit para arsnico.

RESULTADO:

a. Si el cobre mantiene su brillo y color primitivo puede deducirse que
no hay txicos, o los hay en tan pequea proporcin que no puede
revelarse con esta tcnica. No obstante aunque no se observe a simple
vista se puede seguir con la investigacin analtica, hay txicos como
el As, puede no verse nada e igual presentarse rastros.
b. Si el cobre toma aspecto plateado, se debe a mercurio; si la
coloracin es negra puede deberse a: arsnico, antimonio,
bismuto, selenio, teluro o azufre (que puede proceder de la
descomposicin de la materia orgnica). Por diferencia de pesadas
podramos tener el resultado cuantitativo (electro gravimetra).



1. ARSNICO

I. REACCIONES DE ORIENTACIN

1) Reaccin de Bougault: Se puede realizar disolviendo una parte de las cenizas
obtenidas en la mineralizacin con destruccin orgnica por va seca, con ClH puro
y filtrar por algodn de vidrio.
Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
14

REACTIVO
Hipofosfito de Na 10gr
Agua destilada 10ml
ClH puro 100ml

La reaccin se basa en la accin fuertemente reductora del cido hipofosforoso en medio
clorhdrico que separa As, se visualiza como precipitado negro.

2) Reaccin de Bettendorf: es una reaccin semejante a la anterior pero usa como
reductor el Cl
2
Sn en medio clorhdrico.

REACTIVO: se debe preparar en el momento de usar.
Cl
2
Sn 10gr
ClH puro 100ml


II. REACCIONES DE CERTEZA

1) Mtodo de Gutzeit
Se puede realizar en la laminilla usada para la reaccin de Reinsch o en la solucin
proveniente de la mineralizacin sulfo- nitro perclrica. FORMACIN DE
ARSENAMINA.
Reactivos:
- ClH pursimo
- Cl
2
Sn al 40 % en ClH al 60 % en vol.
- Zn puro
- NO
3
Ag puro
- Papel impregnado y seco en sol. Alcohlica de Cl o Br- mercrico al 5% cortar en
franjas para adaptar al tubo C


C



B: algodn impregnado de acetato de Pb



A: Erlenmeyer

Procedimiento: en el erlenmeyer A colocar 25 ml de agua destilada y 10 12 ml de ClH,
incorporar 0.5 ml de Cl
2
Sn y mezclar bien; agregar 10 a 12 granallas de Zn y adaptar la
columna de vidrio B que contiene algodn impregnado en acetato de Pb. Cubrir la abertura
superior del tubo B con un trozo de papel de filtro sobre el que se colocan unos cristales de
nitrato de Ag y dejar desprender H durante 5 minutos como mnimo; los cristales no
deben presentar color amarillo ( ensayo blanco)
Introducir rpidamente la laminilla de Cu y despus de unos minutos se observar, de
existir As que el nitrato de Ag adquiere color amarillo que se intensifica progresivamente
hasta hacerse amarillo canario. Retirar el papel con los cristales y adaptar rpidamente el
tubito que contiene el papel de Br
2
Hg para captar la arsenamina restante y disponer as de
Marcha Toxicolgica de Urgencia

15
otro ensayo de identificacin. Depositar 1 gota de agua sobre los cristales y se observar de
inmediato que el color amarillo desaparece y se hace negro (Ag)

Interpretacin del proceso de separacin del As mediante el ensayo de Reinsh y su
identificacin con la tcnica de Gutzeit.

El elemento de As puede hallarse en el material parcialmente disuelto como Ac arsenioso o
en fina suspensin como trixido.
As
2
O
3
+ 3 H
2
O 2 As O
3
H
2

-
+ 2 H
+


Depsito sobre Cu
2AsO
3
H
2
-
+ 6 Cu + 8 H
+
As
2
Cu
3
+ 6 H
2
O + 3 C u
++
As
2
O
3
+ 6 Cu + 6 H
+
As
2
Cu
3
+ 3 H
2
O + 3 C u
++

Al introducir la laminilla con el depsito de arseniuro en el dispositivo de Gutzeit se
desprende AsH
3
que es arrastrada mecnicamente por el H, e incide sobre el nitrato de Ag.
As
2
Cu
3
+6 H
+
2 As H3 + 3 Cu+
2 H
+
+ Zn Zn
++
+ H
2

AsH
3
+ 6 NO
3
Ag As Ag
3
. 3 NO
3
Ag
(amarillo)
+ 3 NO
3
-
+ 3 H
+


El complejo amarillo se descompone por hidrlisis y aparece color negro (xido
reduccin interna)
As Ag
3
. 3 NO
3
Ag
(amarillo)
+ 3 H
2
O AsO
3
H
2
-
+ 3 NO
3
-
+ 3 H
+
+ 6 Ag


2. TALIO

I. REACCIONES DE ORIENTACIN

1) TECNICA DE KOVARIN-MOUCKA
Puede realizarse en forma directa (orina) o sobre el producto de la mineralizacin.
A 2 ml de la solucin acuosa sulfrica del mineralizado obtenido por va hmeda, o bien,
a 2ml de orina, agregar 2 gotas de ClH puro y 5 gotas de agua de Br a saturacin. Agitar
bien y dejar reposar durante 2 minutos. Reducir el exceso de Br por agregado de 5 gotas
de solucin acuosa de cido sulfosaliclico al 20 % agitando enrgicamente despus del
agregado de cada gota (no debe percibirse olor a Br). Agregar 2 3 ml de benceno y luego
2 gotas de violeta de metilo en solucin acuosa al 0.2 %. Agitar enrgicamente y dejar
separar: en presencia de Tl la capa bencnica superior adquiere color azul violeta a
violeta de intensidad variable. Es importante ensayar el benceno (blanco) usando una
solucin acuosa sulfrica al 10 % en volumen. LA capa inferior acuosa adquiere color
verde o amarillo de acuerdo con la acidez del medio, ya que el colorante se comporta como
un indicador.
Ensayo negativo: capa orgnica superior incolora, mientras el colorante queda en la fase
inferir o acuosa.
Ensayo positivo:
El Tl es oxidado por el Br:

Tl
+
+ Br
2
Tl
+3
+ 2 Br
-


El Tl oxidado se compleja con el Cl

(agregado en forma de ClH)

Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
16

Tl
+3
+ 4 Cl
-
Cl
4
Tl
-


El cido sulfosaliclico reduce el exceso de Br.

HO. O C C
6
H
3
. OH SO
3
H + 2 Br
2
HO. O C C
6
H Br
2
. OH SO
3
H + 2
BrH

El complejo (Cl
4
Tl
-
) origina el derivado que sigue, con el violeta de metilo, de color azul a
azul violeta.
El violeta de metilo es una mezcla de los clorhidratos tetra, penta y hexametil p
rosanilina. Algunos autores recomiendan usar el violeta cristal como colorante, ya que es
un compuesto puro (clorhidrato de exametilrosanilina). Este ensayo puede realizarse con
otros colorantes derivados del trifenilmetano como el verde brillante y verde malaquita. Se
ha visto que en las condiciones de mineralizacin el Au interfiere notoriamente, no as los
elementos normales y otros que pueden estar presentes.

2) ENSAYO MICROCRISTALOSCPICO DE FAZIO

Se puede realizar sobre mineralizacin previa o sobre orina directa.
Tcnica:
Llevar 1 gota de solucin mineralizada a portaobjetos y evaporar a sequedad a baja
temperatura, repetir el agregado si fuera necesario y al residuo obtenido se le incorpora 1
gota de solucin acuosa de tiosulfato da Na al 25 %, agitar con fina varilla de vidrio. Sin
retirar la varilla hacer deslizar por la misma una gota de etanol de 96 que al difundirse
provoca la aparicin de un precipitado microcristalino en forma de finas agujas (tiosulfato
de Tl, insoluble en etanol de 50 o de mayor graduacin; efecto salino asociado imputable
al exceso de reactivo).
Los cristales son aciculares, birrefringentes, incoloros, aislados o en haces.


II. CUANTIFICACIN

1) METODO DE LA DITIZONA: Aplicable a la orina.

Reactivo
a. Reactivo del cianuro. Disolver 1.6 g de hidrxido del sodio, 1.2 g de
tartrato de sodio de potasio y 1.36g de cianuro del potasio en 10 ml de
agua.
b. Solucin del Ditizona (250mg/l) en el cloroformo (recin preparado)

Estndares
a. Orina como blanco.
b. Orina a la cual se ha agregado una solucin del acetato del talio en el
agua purificada (1.0-g/l) para dar concentraciones de ion talio de 0.1,
1.0, 5.0 y 10.0mg/l.
Mtodo
a. Agregar 1 ml de reactivo de cianuro a 5 ml de muestra o al estndar
en un tubo de vidrio de 10ml tapado agitar en vortex por 10 segundos.
Marcha Toxicolgica de Urgencia

17
b. Agregar 2 ml de solucin del ditizona, agitar con vortex por 1 minuto,
y centrifugarlos por 5 minutos.
c. Desechar la capa superior, acuosa y filtrar el extracto del cloroformo a
travs del papel de filtro en tubo limpio.
d. Medir la absorbencia del extracto en 480 nanmetro contra un extracto
en blanco de la orina.
Resultados
Un color rosado/rojo en la capa ms baja del cloroformo indica la presencia
del talio en las concentraciones de 1mg/l o ms.
Construir un grfico de la calibracin de absorbancia contra la
concentracin del talio en los estndares y medir la concentracin del talio en la
muestra.
Un nmero de iones del metal pueden interferir en este anlisis.
El espectrofotmetro de absorcin atmica es necesario para medir el talio
definitivo.
Sensibilidad
Talio, 0.1mg/l.
Interpretacin clnica
La intoxicacin aguda con las sales de talio puede conducir a la estasis
gastrointestinal, mientras que la intermedia y los ltimos efectos pueden incluir
disturbios de los sistemas nerviosos perifricos y centrales, del sistema
cardiorrespiratorio, de ojos y de la piel. El cuero cabelludo y la prdida facial del
pelo es una muestra tpica del envenenamiento del talio.
Los pacientes con concentraciones urinarias de talio que exceden 0.5mg/l
deben ser tratados con potasio ferrohexacyanoferrate (azul prusiano; ver la tabla 6)
hasta que la excrecin urinaria del talio est debajo de 0.5mg/da.

C. TXICOS ORGNICOS FIJOS

I. REACCIONES DE ORIENTACIN

Todas estas reacciones son en ORINA SIN EXTRACCIN PREVIA

1) ANALGSICOS

a. ACETAMINOFENO (PARACETAMOL) directo en ORINA.
Hacer orina normal en paralelo.
(i) 1ml de orina problema + 3gtts. ClH concentrado colocar en BM
a ebullicin 10 minutos y enfriar.
(ii) 200l del hidrolizado del paso anterior + 1ml H2O
(iii) Agregar 0.5ml de O-Cresol (al 5% en agua) + 1gtt. Na(OH) al 10%; agitar

RESULTADO: POSITIVO (sobredosis): azul
NEGATIVO: celeste.





Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
18
b. SALICILATOS

(i) Reaccin Cualitativa directo en ORINA

1/2ml de orina + Cl3Fe al 5% en H2O se agrega gota a gota agitar

RESULTADO: POSITIVO para compuestos fenlicos cuando da violeta fugaz al
agregado de cada gtt. (Novalgina da negativo).

(ii) Reaccin Cuantitativa: se realiza en ORINA, SUERO O
PLASMA. MTODO DE TRINDER: precipita las protenas
con HgCl
2
y ClH y dosa el color que aparece cuando el salicilato
es acomplejado por el in Fe
3+
como nitrato frrico.
Reactivo de Trinder:

Disolver 40gr de cloruro mercrico en 840 ml de agua destilada por calentamiento
adecuado; enfriar y luego agregar 120 ml. de cido clorhdrico 1N; incorporar 40 gr. de
nitrato frrico cristalizado y despus de su disolucin llevar a 1 litro.

Solucin Stock de Salicilato de Sodio :

100 mg, de in Salicilato por 100 ml
Disolver 580 mg. de la sal en agua destilada y se completa luego a 500 ml. Conservar por
el agregado de unas gotas de cloroformo y mantener a 4C.

Soluciones testigos de in Salicilato: 25, 50, y 75 mg. por 100 ml

T25 : Tomar 25 ml de la solucin Stock y llevar a 100 ml con agua destilada
T50 : Tomar 50 ml de la solucin Stock y llevar a 100 ml con agua destilada
T75 : Tomar 75 ml de la solucin Stock y llevar a 100 ml con agua destilada

Estas soluciones se conservan de la misma manera que la solucin Stock.

TCNICA

En 5 tubos de centrfuga colocar respectivamente 0.5 ml de agua destilada, T25,
T50, T75 y sangre. Agregar 5 ml de reactivo de Trinder. Mezclar por agitacin y
centrifugar para separar el precipitado en el tubo de sangre.
Determinar la densidad ptica a 540nm. Llevar a cero con blanco de reactivos.
Con los valores obtenidos construir el grfico de calibracin. Por interpolacin se obtiene
el valor de la salicilemia.
Otra forma de determinarlo es directamente con los testigos ms prximos al valor del
problema, sacando un factor.

FACTOR APROXIMADO = 116

INTERPRETACIN

Por este mtodo se consideran valores dentro de los niveles
teraputicos concentraciones de salicilatos de hasta 25mg/ 100 ml
Marcha Toxicolgica de Urgencia

19
Concentraciones : entre 30 y 50mg % se considera salicilismo suave
de 50 a 80mg % intoxicacin moderada
ms de 80mg % intoxicacin severa.
Existe una susceptibilidad individual que sita la dosis mortal de los salicilatos entre 3 y
10 gr. dependiendo lgicamente de la edad.
La salicilemia suele alcanzar un valor crtico en sangre con 30mg % pero es necesario
extrapolar esta cifra en el momento de la ingestin, pues a medida que pasa el tiempo hay
una curva exponencial que disminuye la salicilemia en un 50 % durante las 24 primeras
horas. Quiere decir que 30mg % de Salicilato a la hora de ingerido, tendr un mejor
pronstico que la misma cantidad 4 horas despus.


1. ANTISICTICOS y ANTIDEPRESIVOS Tricclicos

ANTISICTICOS (Clorpromazina, Fluoperazina), y ANTIDEPRESIVOS Tricclicos (Triptilina,
Nortriptilina, Amitriptilina).

1) Se realiza con Reactivo De FORREST:
Solucin acuosa de Bicromato de potasio (2g/l): 25ml.
Solucin de cido sulfrico en agua (300ml/l): 25ml.
Solucin de cido perclrico acuosa (200g/Kg.): 25ml.
Solucin acuosa de cido ntrico (500ml/l): 25ml

TCNICA: Muestra de orina 0.5ml + 1ml de reactivo de Forrest agitar unos
segundos.
RESULTADOS: POSITIVO: De color amarillo verdoso que pasa a VERDE
OSCURO O AZUL


2. HERBICIDAS

(Paraquat y Dicuat) en ORINA, o en lquidos que enven al laboratorio.

1) Reactivo: Ditionito alcalino, preparacin en el momento, siempre usar un testigo.
Solucin acuosa de NH4 (OH) (2mol/l) 0.5ml
Ditionito sdico al 1% en la solucin alcalina de amonio.

TCNICA: 1ml de orina + 1ml de reactivo de DITIONITO ALCALINO agitar

RESULTADOS: PARAQUAT POSITIVO: color azul celeste, azul oscuro.

DIQUAT POSITIVO: amarillo verdoso, es insignificante al lado del
positivo de paraquat.






Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
20
3. Compuestos NITROGENADOS en general y ALCALOIDES

1) Test de Marquis
El reactivo de Marquis se prepara mezclando 1 volumen de formol con 9 volmenes
de sulfrico concentrado y un gran nmero de compuestos reaccionan con l para dar una
escala de colores que prcticamente cubren el espectro.
Se trabaja en tubo o placa de toque.
Resultados:
rojo: fenilefrina, tranilcipromina
naranja: adrenalina, anfetamina, tetraciclina
amarillo: clordiazepxido (librium), lorazepam, colchicina
azul: clofibrato
violeta: codena, morfina, nalorfina, promazina
marrn: doxepina, ergotamina, LSD, naproxeno
2) Con Reactivo de Mayer (solucin de yodomercuriato de potasio):
Reaccin de precipitacin, se realiza en placa de toque.
Reactivo: Cloruro mercrico 1.35g.
Yoduro de potasio 4.98g.
Agua destilada csp 100ml

En placa de toque_________Una pizca de polvo ms dos tres gotas de reactivo
Resultado: hacer testigos de cada uno.

3) Con Reactivo de Dragendorff (solucin de yodobismutato de potasio):

En placa de toque_________Una pizca de polvo ms dos tres gotas de reactivo
Resultado: hacer testigos de cada uno.

4) Con solucin saturada de cido pcrico:
En portaobjeto_________Una pizca de polvo ms dos tres gotas de reactivo
Resultado: hacer testigos de cada uno. Cristales caractersticos.




6. METABOLITOS URINARIOS de DROGAS DIVERSAS

Muestra biolgica usada: ORINA.
Se investigan generalmente los METABOLITOS de drogas de abuso:
cocana, marihuana, opioides, metadona, anfetaminas, benzodiazepinas, barbitricos, etc.
Los mtodos ms usados son: enzimoinmunoanlisis, inmunoensayo de polarizacin
fluorescente (FPIA). Son excelentes mtodos, muy rpidos, que no requieren extraccin ni
ningn tratamiento previo, ideal para los ingresos en las guardias de hospitales y se quiere
descartar intoxicacin por drogas.

Marcha Toxicolgica de Urgencia

21
1) INMUNOENSAYO DE POLARIZACIN FLUORESCENTE (FPIA):
existen diferentes aparatos comerciales, nosotros tenemos el TDX de
Laboratorio ABBOT, es excelente y permite dosar semicuantitativamente
drogas de abuso (las habituales como cocana, marihuana, opioides,
anfetaminas y tambin psicofrmacos como benzodiazepinas y barbitricos)
en ORINA.
Tambin permite el seguimiento de tratamientos con los psicofrmacos nombrados y otros
como carbamazepina, antidepresivos tricclicos, etc TODOS stos en SUERO.

2) ENZIMOINMUNOANLISIS: el ms conocido en nuestro medio es el
TRIAGE, pero hay muchas marcas, adems vienen para mltiples drogas, o
para investigar una sola, eso se maneja segn las necesidades de cada
laboratorio. Son cajitas o tiritas semejantes a las que se usan para los tests de
embarazo.

7. DROGAS DIVERSAS

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Esta tcnica, cuando no tenemos otro mtodos con tecnologa de ltima generacin
para realizar exmenes de certeza, se puede transformar en tal cuando realizamos una
corrida general para cidos bsicos tipo screening primero y luego una corrida
especfica para cada sustancia, SIEMPRE con TESTIGOS, y si se puede en dos solventes
diferentes para tener dos rf cada uno con su testigo.

1) EXTRACTO CIDO

a. DROGAS: barbitricos, aspirina.

MUESTRA: Llevar la orina, el contenido gstrico, el suero o el material a estudiar a pH
cido con cido tartrico solucin saturada, centrifugar, colocar 3ml en columna extrelut
rotulada, una vez absorbida esperar 15 minutos y eluir con ter etlico, ter de petrleo
(50:50), llevar a sequedad y retomar con 100l de etanol.
Siembra aspirina
SOLVENTE DE CORRIDA: cloroformo - acetona (4:1)

REVELADORES:
Para aspirina: Cl3Fe al 5%.
Para barbitricos: El ms sencillo sol. acuosa de MnO4K2.
Secuencial:
Siembra barbitricos
Acetato de cobalto en metanol una pizca.
Li(OH) en metanol.
A estufa: barbitricos: color violeta.







Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
22
b. PESTICIDAS

1) Reaccin de orientacin:

EN SUERO: REACCIN DE PSEUDOCOLINESTERASA, con kits comerciales.
EN GLBULOS ROJOS: COLINESTERASA ERITROCITARIA

2) Reacciones de certeza: CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.

Se debe realizar un EXTRACTO CIDO, los fosforados y clorados se recuperan en
extracto neutro, pero se extraen perfectos en medio cido junto a los carbamatos.
.
MUESTRA: orina, contenido gstrico, o cualquier lquido que llegue al laboratorio.
Llevar la muestra a pH cido con cido tartrico solucin saturada, centrifugar, colocar
3ml en columna extrelut rotulada, una vez absorbida esperar 15 minutos y eluir con ter
etlico, ter de petrleo (50:50), llevar a sequedad y se retoma con acetona 100l.
En el caso de sangre y bilis cuando se agrega el cido se hace una pasta por lo que primero
debe agregarse agua a una cantidad de muestra medida, llevar a 15ml para usar una de las
extrelut grandes y recin dar el pH, luego centrifugar y usar el sobrenadante para colocar
en la columna de 15 ml, rotulada, esperar 15 minutos y eluir con ter etlico, ter de
petrleo (50:50), llevar a sequedad y se retoma con acetona 100l.

SOLVENTE DE CORRIDA (Fase Mvil): solvente cudruple hexano
ciclohexano cloroformo acetona (40:40:10:10)

REVELADORES: secuencial
Observar con luz UV.
Solucin de Cl de Pd al 5% en ClH al . (fosforados amarillos)
Na(OH) al 10%: fosforados amarillos y marrones. Este paso ES OBLIGATORIO.
Para nitro benceno/tetra/fluoroborato una pizca en etanol dietilnglicol (9:1).
Carbamatos, violetas o azules.

2) EXTRACTO ALCALINO

Para benzodiazepinas, cocana, marihuana, anfetaminas, antidepresivos, antisicticos
y cualquier droga alcalina., tambin ESTRICNINA. TRABAJAR CON TESTIGOS.

MUESTRAS: orina, contenido gstrico (tener en cuenta que es lo NO absorbido),
sangre, lquido pericrdico, soluciones del lugar del hecho, etc.
Los comprimidos y polvos (ej: ravioles) no hace falta llevar el pH a alcalino, se
pulverizan, se disuelven en un poco de acetona y se siembran.
Llevar a pH 10 u 11 con NH4(OH), centrifugar, colocar 3ml en columna extrelut rotulada,
una vez absorbida esperar 15 minutos y eluir con cloroformo. Llevar a sequedad y retomar
con 100l de acetona.

SOLVENTE DE CORRIDA (Fase Mvil): metanol amonaco (100+1.5).

REVELADORES: secuencial
1- Observacin con UV: se observa con UV. Las benzodiazepinas se ven celestes
fluorescentes en la parte superior de la placa, van casi con el solvente de corrida.
Marcha Toxicolgica de Urgencia


Bioq. Raquel Fernndez de Cattaneo
23

2- Acidificar con ClH: Secar la placa y observar al UV.
Si se corri con METANOL-AMONACO se acidifica rociando con ClH al 10%.

3- Con NQS (Nafto Quinn Sulfonato de Sodio): se prepara con un poquito de droga y
agua.

4- Con IODOPLATINATO:
Solucin 1: iodoplatinato 1gr
Agua 20ml

Solucin 2: yoduro de potasio 18gr
Agua csp 180ml
Se mezclan las soluciones 1 y 2, agregar 400ml de agua destilada y guardar en frasco
color caramelo.

5- Con CLORURO FRRICO:

6- Con reactivo de DRAGENDORFF:
Suspender 5gr de oxicarbonato de bismuto en 50ml de agua destilada
Agregar 10ml de ClH concentrado
Luego 25gr de yoduro de potasio