AVANCES EN LA INVESTIGACIN DE

LA FUSARIOSIS DE LA ESPIGA DEL

TRIGO (FET) EN PARAGUAY
Ing. Agr. MSc. PhD. Andrea A. Arra A.
Docente Investigador
Centro Multidisciplinario de Investigaciones Tecnolgicas
Direccin General de Investigacin Ciencia y Tecnologa
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales - FACEN
Universidad Nacional de Asuncin

Qu es la Fusariosis de la Espiga?
Enfermedad causada principalmente por hongos del
complejo Fusarium graminearum / Giberella zeae
(Ackermann et. al. 2002)

15 ESPECIES

F. graminearum, F. gerlachii, F. louisianense, F. asiaticum, F.
ussurianum, F. nepalense, F. mesoamericanum, F.
austroamericanum, F. vorosii, F. acaciae mearsii, F. boothii,
F. cortaderiae, F. brasilicum y F. meridionale (Sarver et al.,
2011).

OTRAS ESPECIES

F. culmorum, F. avenaceum, F.poae entre otras


Cul es la fuente de la enfermedad?
Semillas
Malezas
Restos de cultivo
COSMOPOLITA HEMIBIOTROFICO - POLFAGO
SISTEMA DE
SIEMBRA
DIRECTA
Fusarium
INIA, 2002
Cules son las condiciones para le
desarrollo de la enfermedad?
Lluvia constante
18-30 C
Infeccin ocurre a travs de
las anteras en la antesis

(Ackermann et. al. 2002)
Sntomas
Blanqueamiento de espigas y espiguillas
Color rosa
Puntos negros
Aborto de flores
Granos chuzos, chupados, de bajo peso
Granos blancos a gris claro
(Ackermann et. al. 2002)
IMPACTO DE LA ENFERMEDAD
Variedad
Manejo
poca de
siembra
Clima
Variables
Prdidas
Directas
Productor
Rendimiento
Industrial
Menor
rendimiento
de harina
Harina
obscura
Destruccin
de almidn y
protenas
Indirectas
Costos
Manejo
Investigacin
Salud
Cabaes et al 2007; Soriano et al 2007
Deoxinivalenol
El deoxinivalenol (DON), produce exclusivamente
toxicidad aguda y no se acumula en el organismo.

Produce vmitos, anorexia, prdida de peso y
diarreas, en concentraciones altas necrosis del tracto
gastrointestinal, mdula sea y tejidos linfoides.

Al parecer estos metabolitos actuaran disminuyendo
la sntesis proteica de la planta y podran suprimir o
retrasar la respuesta de defensa al ataque fngico.
Medidas de control
Control de la Fusariosis de la Espiga
Gentico
Tolerancia
Resistencia
Cultural
Manejo de
cultivo
Qumico
Fitosanitarios
Biolgico
Manejo
Post
Cosecha
C
o
n
t
r
o
l

B
i
o
l

g
i
c
o

Hongos
Bacterias
NO HAY PATGENOS
RESISTENTES A ESTOS
BIOPRODUCTOS
C
o
n
t
r
o
l

G
e
n

t
i
c
o

Resistencia
Resistencia I
INFECCIN
Resistencia II
INVASIN
Resistencia III
ACUMULACIN DON
FUENTES DE RESISTENCIA : CHINA, MXICO, BRASIL, ARGENTINA
ANTECEDENTES
1972 Reduccin de superficie y
rendimiento y 70% de prdidas

1975 Prdidas, Itapua 1, prdidas
menores

1976 Promocin de uso de fungicidas

1982 Incremento gracias a fertilizantes
y fungicidas

1986 Autosuficiencia
ANTECEDENTES
Quintana, en 1998, concluy que DON es la micotoxina de mayor
relevancia en el cultivo del trigo en Paraguay, encontrando en
100% de las muestras analizadas de 0.247 a 10.13 ppm (Quintana,
2004; Quintana y Morel, 2004).

F. avenaceum, F. equiseti y F. culmorum, en semillas de trigo
estudiadas por Quintana y Morel en 2004, siendo Fusarium
graminearum la especie predominante con una frecuencia de
90%.

Programa de Fortalecimiento a la Investigacin y Difusin del
Cultivo de Trigo, 2003


ESPECIES DE FUSARIUM Y
MICOTOXINAS ASOCIADAS AL CULTIVO
DEL TRIGO EN ZONAS PRODUCTORAS DE
LA REGIN ORIENTAL DEL PARAGUAY
2012 - 2015
Muestreo
Septiembre de 2012
Julio de 2013
Julio 2014
144 lneas
140 lneas
ITAPA
CANINDEY
SAN PEDRO
Coordinacin: Ing. Agr. MSc. PhD. Andrea Alejandra Arra
Investigadores
Farm. Bioq. MSc. Juliana
Moura Mendes
Lic. Biol. MSc. Danilo
Fernndez Ros
Asesores
Dr. Mohan Kohli
Dra. Rosa Oviedo de
Cristaldo
Dr. Lider Ayala Aguilera
Miembros de Equipo:
Estudiantes de Postgrado: Ing. Agr. Cinthia Cazal
Ing. Agr. Lourdes Romero
Lic. Biol. Christian Dujak
Colaborador: Ing. Agr. Pablo Arra
Estudiantes de Grado:
Biologa: Sara, Karina, Natalia, Cecilia
Biotecnologa: Lourdes, Sebastin, Miguel, Csar, Alba, Magali, Nyade.
ESTUDIO DE LOS PATGENOS PRESENTES Y BSQUEDA DE NUEVAS
FUENTES DE RESISTENCIA
FUSARIOSIS
ESPIGA
SELECCIN DE
GERMOPLASMA
DE TRIGO
TOLERANTE A LA
FUSARIOSIS DE LA
ESPIGA
Cinthia Cazal
SELECCIN DE
GERMOPLASMA
DE TRIGO
TOLERANTE A LA
ACUMULACIN
DE DON
Lourdes Romero
EXPRESIN
DIFERENCIAL DE
GENES ASOCIADOS A
LA DEFENSA EN EL
PATOSISTEMA TRIGO-
Complejo Fusarium
graminearum
Christian Dujak
Caracterizacin
del patgeno
MAESTRA EN CIENCIAS
EN BIOTECNOLOGA
Trillado Desinfeccin Micobiotas Purificacin
IDENTIFICACIN DE HONGOS PRESENTES
Barnett y Hunter, 1999
Alcohol
70%
Hipoclorito
de sodio
3%
Papel de filtro
PDA
25C 2
7 das
Purificados y por medio de diluciones seriadas se realizaron
cultivos monospricos
PDA
SNA
Morfologa
colonias:
crecimiento y
pigmentacin
Produccin de
clamidspora
Macroconidias:
Forma, tamao
Microconidias:
Forma, tamao, Formacin
CLA
(Leslie y Summerell, 2006)
...IDENTIFICACIN DE ESPECIES DE FUSARIUM
...IDENTIFICACIN DE ESPECIES DE FUSARIUM
Cultivos monoconidiales
SNA (Spezieller Nhrstoffarmer Agar)
Carnation Leaf-Piece Agar (CLA)

Leslie y Summerell 2008
600 aislamientos
de Fusarium
Incidencia in vitro Seleccin de lneas
Altamente susceptibles
Susceptibles
Moderadamente tolerantes
Tolerantes
Resistentes
INCIDENCIA DE Fusarium graminearum, CAPITN MIRANDA, ITAPA,
2012 ACEPTADO PARA PUBLICACIN
IDENTIFICACION MOLECULAR DE ESPECIES Fusarium ASOCIADAS A
FUSARIOSIS DE LA ESPIGA EN ITAPA, PARAGUAY
INCIDENCIA DE HONGOS DEL COMPLEJO Fusarium graminearum Y
ACUMULACIN DE DEOXINIVALENOL EN LNEAS DE TRIGO
EN ARBITRAJE ACTUALMENTE

0%
1% 2%
3%
2%
2%
4%
9%
77%
Incidencia de especies de Fusarium en Trigo In Vitro, Capitn
Miranda, Itapa, 2012
Fusarium sp.
Fusarium equiseti
Fusarium verticilloides
Fusarium oxysporum
Fusarium avenaceum
Fusarium poae
Fusarium culmorum
Fusarium semitectum
Fusarium graminearum
SELECCIN Y CARACTERIZACIN DE AISLADOS
Dinmica de crecimiento PDA
Esporulacin SNA y CLA


Seleccin de Cepas

Altamente esporulante
Medianamente esporulante
Poco esporulante
No esporulante

RECONFIRMACIN DE IDENTIDAD
ANLISIS MOLECULARES
AJUSTE DE TCNICAS MOLECULARES
EXTRACCION DNA
CTAB
DELLAPORTA
130 64
M
64 82 130 82
AMPLIFICACIN

Regin de elongacin Alfa
Beta tubulina
Fgram Fusarium
graminearum
Deoxinivalenol
Nivalenol
3 acetil DON

Primer Secuencia
TrI 5F AGC GAC TAC AGG CTT CCC TC
TrI 5R AAA CCA TCC AGT TCT CAA TCT G
3NA GTG CAC AGA ATA TAC GAG C
3CON TGG CAA AGA CTG GTT CAC
3D15A ACT GAC CCA AGC TGC CAT C
3D3A CGC ATT GGC TAA CAC ATG
60,5C 58,5C 56,5C 60,5C 58,5C 56,5C
60,5C
58,5C 56,5C
Tri5F/Tri5R
3NA/3CON
3D15A/3D3A
CEPAS

64
82
117
130
CRECIMIENTO EN DIFERENTES
CONDICIONES DE :
TEMPERATURA 5 a 40C
ACTIVIDAD DEL AGUA - 0,82
pH 3,5 a 13
AJUSTE DE MEDIOS PARA
ESPORULACIN E INCULO
SELECCIN DE GERMOPLASMA DE TRIGO TOLERANTE A LA FUSARIOSIS
DE LA ESPIGA
SELECCIN DE GERMOPLASMA DE TRIGO TOLERANTE A LA
ACUMULACIN DE DON
Seleccin de Lneas

5 Altamente susceptibles
5 Susceptibles
5 Moderadamente tolerantes
5 Tolerantes
5 Resistentes
40 Resistentes
ENSAYO PREVIO DE VIRULENCIA
1. Mtodo de Infeccin
2. Cepa
3. Combinaciones de cepas
ENSAYO SOBRE SUCEPTIBLE
E
n
s
a
y
o
s

d
e

c
a
m
p
o

Experimento I 25 lneas Resistencia I y II Pool de Cepas
Inyeccin
Aspersin
Algodn
Experimento II 25 lneas Resistencia III
Cepa pura Aspersin
Pool de cepas Aspersin
Experimento III 40 lneas R Resistencia II y III Pool de cepas Aspersin
INFECCIN
INCULO
Parmetros
Evaluados
Severidad
2 semanas
3 semanas
Acumulacin
DON
Cosecha
Respuesta
Defensa

0 horas
4 horas
8 horas
12 horas
24 horas

TRILLADO
CUANTIFICACIN
DON
ANLISIS
RESULTADOS
2DA
SELECCIN
LINEAS
ANLISIS
EXPRESIN
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
M 150 M 217 M 65 B 8 D 118
m

1
5
0

MODERADAMENTE RESISTENTE
RESISTENTES
MODERADAMENTE SUCEPTIBLE
SUCEPTIBLE
ALTAMENTE SUCEPTIBLE
Interaccin temprana Trigo-
Fusarium
1
2
3
4
Determinar la respuesta de defensa a travs de la expresin
diferencial de genes en el patosistema Trigo-Fusarium.

METODOLOGIA
SELECCIN DE
CEPAS (Fusarium
graminearum)
SELECCIN DE
LINEAS DE TRIGO
Susceptible y
Resistente
Inoculacin Local
Etapa de Floracin (cepas #130
F. graminearum)
1 x 10 conidias/ml por Aspersin
Ensayo Experimental
Invernadero
Muestreos :
0 hdi, 4 hdi, 8 hdi, 12 hdi y 24 hdi.
Foroud et al., 2012
Sntesis
a cDNA
-80C
-20C
FIGURA 1. Expresin de genes NPR1 y PR-1 a las 24 hdi (horas despus de inoculacin)
en las lneas 14FHB23, Misc. 104, Misc. 248 y Caninde11, (Fg) tratamiento 24 hs con
Fusarium graminearum, (T) testigo sin inoculacin. Las amplificaciones generadas
fueron en PR-1 aprox. 805 pb y NPR1 aprox. 750 pb.
EXPRESION DE LOS GENES NPR1 Y PR1 ASOCIADOS AL AC.
SALICLICO EN RESPUESTA DEFENSA
RESPUESTA DE DEFENSA 24 hdi
(horas despus de inoculacin)
ACEPTADO
Aporte cientfico



EVENTOS
AUGM - PY 1 TRABAJO
REUNION TRIGO - BR 3 TRABAJOS
REDBIO-ARG 2 TRABAJOS
LAT. FITOPATOLOGIA - PE 2 TRABAJOS
SEMINARIO TRIGO - PY 12 TRABAJOS Y PONENCIA
LAT. MICOTOXINAS - ARG 2 TRABAJOS
2013 23 TRABAJOS
PUBLICACIONES CIENTFICAS
Publicados 1
Aceptados 2
En arbitraje 3
PRONII 2 PRONII I, 2 CANDIDATOS
POSIBILIDADES
ESTUDIO DE MECANISMOS DE RESPUESTA HOSPEDERO PATGENO
ANLISIS CUANTITATIVO DE FACTORES DE RESPUESTA
ESTUDIO DE PROTENAS RELACIONADAS A RESPUESTA DE DEFENSA
SOBRE EXPRESIN DE GENES DE RESPUESTA DE DEFENSA
ESTUDIOS DE CEPAS ATOXIGNICAS
ESTUDIOS SOBRE SILENCIAMIENTO DE GENES DE PATOGENICIDAD
ESTUDIOS DE EPIDEMIOLOGA Y MODELOS PREDICTIVOS
GRACIAS