4th International Symposium on Environmental

Biotechnology and Engineering

September 9-12, 2014
Cinvestav, Mexico City, Mexico
AISLAMIENTO Y ANLISIS !"ALITATI#O $E BIOMASA MI!%OBIANA &'N(I!A
$E(%A$A$O%A $E )I$%O!A%B"%OS $E "N !ENOTE $E *"INTANA %OO
Manuel Ale+andro Li,ardi-.im/ne, (1)*; Ricaro !"me#-Reyes (2); $n%&'ica (im&ne#
!on#)'e# (1); Ser%io $'e*anro Meina Moreno (1)
(1) +niversia ,o'it&cnica e ,ac-.ca, /iotec-no'o%y en%ineerin%, ,ac-.ca, M&xico0
(2) +niversia ,o'it&cnica e 1.intana Roo, /iotec-no'o%y en%ineerin%, Canc2n, 1.intana Roo
ABST%A!T
3-ere -as escribe a re'evance bet4een -i%- si%-tseein% season (5SS) an
-yrocarbon po''.tion osci''ation in sin6-o'es 7rom 1.intana Roo state, t-is arise .e to
7'.x o7 ve-ic'es 7'eet .rin% 5SS an -is 7.e' 'ea6s over t-e roas, 7.rt-ermore t-e 4ear
an tear o7 p.b'ic roas ca.ses t-e 7ix o7 c-ronic pot-o'es a7ter 5SS0 Exitu in Airlift
bioreactors microbia' root consorti.m -as %re40 8t 4as obtaine in Canc.n city
(2199:41;< - =>9?2:2@;A) 7rom one po''.te sin6-o'e 4it- <ap-t-a'ene an
,-enant-rene0 $in% Biese' 7.e' prove t-e -yrocarbonoc'astic abi'ity o7 microbia'
consorti.m0 ,re'iminary essays -as ienti7ie severa' bacteria' species 'i6eC
Pseudomonas, Diplococcus y Enterobacter, nevert-e'ess t-ere -asn:t s-o4e t-e
presence o7 7.n%a' biomass0 3-e iss.e t-ro.%- t-is 4or6 4as prove t-an microbia' root
consorti.m are compo.n bot- 7.n%a' as bacteria' species0 Dn t-e ot-er -an, 4as
.se Bynamics moe's to preict mat-ematica''y biomass 7.n%a' %ro4t- (Gompertz
moe', e Von Bertalanffy moe' y 'o%istic moe'); a'' cases, Von Bertalanffy 4as t-e
moe' t-at best 7itte t-e experimenta' ata (EF 004)0 $ s-ort morp-o'o%y experiment
s.%%ests t-at 7.n%a' biomass compose o7 at 'east 7i'amento.s 7.n%i o7 t-e %en.s
Cladosporium0 $s 4e'', stereomicroscopy ana'ysis by %ives a brie7 G.a'itative ans4er o7
t-e mec-anisms o7 -yrocarbon .pta6e in 7.n%a' biomass; in aition HMC testin%
mei.m so'ii7ie 4it- ,B$ in petri is-es coate 4it- Maya Cr.e con7irm t-e 7.n%a'
biomass pro.ce -yrop-obins (yet .ne7ine c'ass), a''o4in% t-e -yrop-i'icI
-yrop-obic inter7ace to constant contact 4it- bot- 7ossi' 7.e's .se0
0ey1ordsC air'i7t bioreactor, 7.n%a' biomass, -yrocarbon-e%rain% consorti.m,
po''.tant p'.me, 1.intana Roo sin6-o'es, to.rist ant-ropo%enic 7actor0
1
1*
$.t-or 7or corresponenceC c-amarripasJya-oo0com0mx
%ES"MEN
Hn traba*os previos se escribi" .na corre'aci"n entre 'a a'ta temporaas e t.rismo y
e' a.mento e contaminantes -irocarbonaos en 'os cenotes contaminaos e' Hstao
e 1.intana Roo, ebio posib'emente a' a7'.ente e' parG.e ve-ic.'ar .rante 'as
temporaas e t.rismo a'to y 'as 7.%as e comb.stib'e e 'os transportes terrestres y e'
es%aste e 'as vKas p2b'icas e transito G.e ocasionan .n reencarpetamiento
permanente .rante 'os posteriores meses a 'as temporaas a'tas; e .n cenote
contaminao por Lenantreno y <a7ta'eno, .bicao en Canc2n, 1.intana Roo
((2199:41;< - =>9?2:2@;A), se ais'" exitu en biorreactores airlift .n consorcio
microbiano, 'a aici"n e i&se' emostr" 'a capacia -irocarbonoc'asta e'
consorcio, asK mismo se 'o%r" ienti7icar istintas especies e bacterias en e' consorcio
microbiano (Pseudomonas, Diplococcus y Enterobacter), sin embar%o no se 'o%raron
re.nir res.'taos sobre biomasa 72n%ica0 Mos es7.er#os .rante este experimento
emostraron G.e e' consorcio microbiano est) comp.esto tanto por -on%os como
bacterias, sieno .n c.'tivo mixto Nno e7inio0 ,or otra parte, 'a cin&tica e crecimiento
e biomasa 72n%ica se ana'i#" .ti'i#ano tres moe'osC Gompertz, e Von Bertalanffy y
'o%Kstico0 ,ara toos 'os casos, Von Bertalanffy 7.e e' moe'o G.e se a*.st" me*or a 'os
va'ores experimenta'es (EF 004)0 +n breve an)'isis a 'a mor7o'o%Ka e 'a biomasa
microbiana 72n%ica propone G.e e' consorcio est) constit.io a' menos por -on%os
7i'amentosos e' %enero Cladosporium0 H' an)'isis por estereomicroscopKa contrib.yo a
ar .na breve exp'icaci"n c.a'itativa e 'os mecanismos e asimi'aci"n e -irocarb.ro
en biomasa 72n%ica; aem)s 'as pr.ebas e meio HMC so'ii7icao con ,B$ en ca*as
,etri rec.biertas con cr.o maya corroboran G.e 'a biomasa 72n%ica obtenia pro.ce
-iro7obinas (a2n no e7inia s. c'ase), G.e permiten 'a inter7ase -iro7K'icaI-iro7"bica
a' contacto permanente con ambos comb.stib'es 7"si'es .saos0
2ala3ras claves4 /iomasa 72n%ica, /iorreactor airlift, Cenotes e 1.intana Roo,
Consorcio mixto e%raaor e -irocarb.ros, Lactor antropo%&nico t.rKstico, ,'.ma
contaminante0
Introducci5n
Hn M&xico, 'os cenotes e' Hstao e 1.intana Roo son visitao por s. atractivo
t.rKstico por mi'es e personas G.e arriban -acia e' s.r e' paKs, sieno Canc2n y 'a
Riviera maya (inc'.ye ,'aya e' Carmen) 'as in7raestr.ct.ras -ote'eras m)s %ranes e'
estao (SHBH3+R, 2014)0 H' 7actor antropo%&nico, in7'.enciao por e' esarro''o
t.rKstico y .rbano, -a eteriorao 'a ca'ia e estos centros recreativos nat.ra'es a
trav&s e 'os aOos0 Se -a c.anti7icao cenotes contaminaos por -irocarb.ros e
ori%en a'i7)tico y ,o'icKc'icos arom)ticos (Mi#ari et a', 2014)0 $mbos %r.pos e
-irocarb.ros, sin consierar e' e7ecto a 'a bioiversia e' manto ac.K7ero, son
contaminantes con a'to %rao toxico-onco'"%ico (Cerni%'ia, 19=?); ($%ency 7or toxic
s.bstances, (199?)0 para toa 'a pob'aci"n G.e se abastece e 'os po#os e a%.a G.e
conectan irecto con e' a7'.ente s.bterr)neo0
Ma piera 6)rstica G.e con7orma e' s.e'o e 'a penKns.'a e P.cat)n es, por s.s
caracterKsticas, intrKnsecamente v.'nerab'e a 'a contaminaci"n; esto se ebe a 'a
excesiva porosia y i7.sivia e' materia'0 ,or esta ra#"n, e' a%.a e ori%en
mete"rico se in7i'tra y ac.m.'a en e' s.bs.e'o, 7ormano .na 'ente e a%.a .'ce
e'%aa G.e 7'ota sobre .na masa e a%.a sa'ina, m)s ensa, c.yo ori%en es e 'a
intr.si"n marina nat.ra' (/eo4s et a', 2002; M.rat, 199=)0 Se -an prop.esto t&cnicas
e biorremeiaci"n exitu como resp.esta a 'a contaminaci"n por -irocarb.ros en
cenotes e' Hstao0 $'%.nos microor%anismos marinos poseen capacia e .ti'i#ar
-irocarb.ros como 7.ente e carbono y son 'a me*or opci"n en 'os errames e
petr"'eo en #onas costeras (5ea et a', 1999) y mantos ac.K7eros0
Hsto -a permitio e' esarro''o e 'a micorremeiaci"n como .na estrate%ia viab'e para
e' saneamiento e c.erpos e a%.a y s.e'os contaminaos con -irocarb.ros
(C-ai''an, 2004; Moreno, 2004), estos procesos p.een ser ''evaos a cabo por 'a
microbiota a.t"ctona e 'a #ona contaminaa o por microor%anismos aicionaos0 Hn 'o
re7erente a' emp'eo e micror%anismos 72n%icos es escasa 'a in7ormaci"n, sin embar%o
a'%.nos est.ios reconocen venta*as en e' .so e este tipo e microbiota, ta'es como
.na pronta aaptaci"n a ambientes contaminaos, metabo'ismo e meta'es pesaos e
-irocarb.ros G.e otras especies no 'o consi%.en, 'o G.e %aranti#a 'a sobrevivencia e'
in"c.'o y e7ectivi#a s. acci"n escontaminante (Cerni%'ia et a', 19=?)0 $simismo, 'a
7aci'ia e extensi"n e s.s -i7as 72n%icas, 7avorece s. acceso a 'os xenobi"ticos y
c.entan con .na baterKa en#im)tica me*or provista G.e bacterias G.e, inc'.sive,
7avorece e' ambiente e crecimiento e otros micror%anismos (Ra7in et a', 2012)
Materiales y m/todos
Biorreactor madre. +n cenote con .bicaci"n en Canc2n 10Roo, $venia 3a''eres,
coorenaas Matit.C 219 9: 4101@; < y Mon%it.C =>9 ?2: 2@0QQ; A se ienti7ic" como
contaminao por 'os -irocarb.ros Lenantreno y <a7ta'eno G.e corresponen a
5irocarb.ros e' %r.po $rom)ticos ,o'icKc'icos0 Se tom" .na m.estra e a%.a e
ic-o Cenote con e' ob*etivo e aG.irir .n e*emp'ar e 'a microbiota a.t"ctona, ba*o e'
c.mp'imiento e 'a <MR-$$-11Q-SCL8-20010 ,osteriormente se e*" crecer en
biorreactores airlift co'.mna e b.rb.*a (Li%.ra 1), .sano 1 Mitro e HM/ (Senney et
a', 19Q?) (3$/M$ 1), mantenieno coniciones experimenta'es eC 3TCU2=, a%itaci"n
constante U 2VVM, y a*.stano e' p5U>0? con 5C' 200 < y aOaieno
comb.stib'e i&se' (re'aci"n CI<U>I1) como 7.ente e carbono0 Hste biorreactor era
n.evamente activao en 'otes sec.encia'es e os semanas con .n 10W e 'a biomasa
crecia en e' 'ote anterior0 Ma composici"n %enera' e' consorcio e' /iorreactor mare
se -a i7erenciao istintas especies e bacterias comoC Pseudomonas, Diplococcus y
Enterobacter (Mi#ari et a', 2014).
Biorreactor semilla de biomasa fngica6 ,or trip'icao, se centri7.%" .na m.estra en
vo'.men e' biorreactor mare -asta retirar 'a 7ase ac.osa; se verti" 'a pasti''a e
biomasa, en 10 m' e .na so'.ci"n e a%.a esti'aa est&ri' X c'oran7enico' (?00 m%IM)
para trans7erir Ipso facto por estriao en ca*as ,etri, con meio e c.'tivo ,B$ e 'a
marca bd bioxon, y BS$ e 'a marca !CD "ab0 $mbos meios 7.eron a'macenaos
para .n pre-crecimiento .rante 120 -oras a @0 TC en .n inc.baor tipo inno#a $%&'
(B)0 Mos meios e c.'tivos G.e presentaron me*or crecimiento raia' y e pro7.nia
7.eron resembraos en meio ,B$ trans7irieno 'as esporas irecto con e' asa -acia e'
centro e 'as ca*as ,etri0 Besp.&s e 120 -oras, 'os n.evos c.'tivos mostraron
crecimientos e 2x10
>
esporasIm' por 'o G.e se i7.ni" a trav&s e' asa .na m.estra,
en meio HM$ (Ve'asco, 2011) (3$/M$ 1), p5U? con <aD5 a' 2< X > m'IM e .na
so'.ci"n e o'i%oe'ementos (3$/M$ 2), en .n matra# e vo'.men e operaci"n U 100
m', por trip'icao0 Hste tratamiento 7.e p.esto a 3TCU @0Y2, y a%itaos mec)nicamente
a 1=0 rpm en .n inc.baor tipo inno#a $%&' (B) .rante 120 -oras.
&I("%A 76 Biorreactor- a3i5tico tipo airlift columna de 3ur3u+a para el
crecimiento de 3iomasa nativa de cenotes6
TABLA 76 6 Tipos de medios minerales usados para cada etapa del e8perimento9
Est/ril : Medio Mineral B;sico <EMB=9 Est/ril : Medio Mineral Aislamiento <EMA=9
Est/ril : Medio Mineral !recimiento <EM!=
Estril - Medio Mineral (gL-1)
reactive
Bsico
(Kennedy et al,
1975)
Aislamiento
(Velasco,
2011 )
Crecimie
nto
(Volke,
2006)
NaNO
3
675 51 !
K2HPO
4
215 06 1
KCl 11! 0"5 5
MgO
4
-
!H
2
O
06!1 0! 015
E"# $e
levad%ra
# ! #
acarosa # 20 #
Cloran&enic
ol
# 05 05
TABLA >6 Soluci5n de oligoelementos usado en el medio mineral a+ustado durante
el crecimiento de 3iomasa ?@ngica
$ol%ci&n de
'li(oelement
os
)e$'"*7+2
' 01
(
,
#
1
C%$'"*5
+2' 0015
-n$'"*7
+2' 0161
.n$'"*7+
2' 000/
Crecimiento de biomasa fngica6 Se extra*o 10W e m.estra e 'os biorreactores
semi''a, para .n n.evo 'ote en operaci"n e @00 m' en meio HMC (Vo'6e, 200>) X 2 m'
e 'a so'.ci"n e o'i%oe'ementos y 1@ %M-1 e i&se' y cr.o maya inepenientemente
y por tetrap'icao0 Hstos ensayos 7.eron a'macenano a 3TCU @0Y2, y a%itaos
contin.amente a 1=0 rpm por 120 -oras en inc.baci"n0 Bic-os ensayos 7.eron
est.iaos contin.amente por estereomicroscopKa, para observar e' comportamiento
especi7ico e 'a biomasa 72n%ica0
Evaluacin de los mecanismos de contacto celular al hidrocarburo0 +n meio HMC
7.e so'ii7icao con a%ar ,B$ en ca*as ,etri, aOaieno inepenientemente, sobre 'os
meios en7riaos, .na c.bierta e Z?0 e comb.stib'e (Bi&se' y cr.o maya)
(Mori6a4a et a', 1992) preca'entao a 3TCU=0 .rante @0 min.tos; posteriormente se
%ote" istrib.iamente, .n inoc.'o en i'.si"n 1C100 e' crecimiento obtenio en meio
HMC y a'macen" a 3TCU@0 en .n inc.baor .rante Q2 -oras0
%esultados y discusi5n
Con .n espectro7ot"metro tipo *asco *en+ay modelo ,$'-, se c.anti7ic" caa 24
-oras, 'as variaciones e absorbancia a 40@ nm, .nicamente 'os tratamientos con
meio HMC X i&se'. (3$/M$ @)0 ,or s.s componentes as7a'ticos, 'os ensayos con
cr.o maya so'o 7.eron ana'i#aos por microscopKa0
TABLA A6 A3sor3ancia a 4BA nm durante las primeras 7>B horas de los
tratamientos en medio EM! C di/sel6 Ensayo I <E6I=9 Ensayo II <E6II=9 Ensayo III <E6III=9
Ensayo I# <E6I#=
Tratamiento
E6I E6II E6III E6I# D
Tiempo <horas= $'& nm
B
10@? 1040 10@9 10@2 0004
>4
1042 104= 10?0 10?1 0004
4E
10?2 10?0 10>1 10?0 000?
F>
104? 10?@ 104= 10?2 0004
GH
1049 10>0 10?? 10>> 000Q
7>B
104= 10?9 10?> 10?2 000?
A 10?2 10>0 10>1 10>>
S(0) 10@? 1040 10@9 10@2
Mos atos experimenta'es obtenios .rante e' crecimiento e biomasa 72n%ica en
meio HMCX i&se', emostraron poca i7erencia entre caa ensayo (EF 000Q)0
So'amente e' ensayo H088 presento .na tenencia 'o%arKtmica con 0
,or otro 'ao, 'os tratamientos H08, H0888, y H08V ecayeron en 'as 2'timas Q2 -oras ()0
,.esto G.e estos atos 7.eron inicia'es, so'o se p.ee atrib.ir G.e e' ecaimiento
oc.rri" a 7a'ta e 'as 7ormas asimi'ab'es e' i&se' como 7.ente e carbono para 'a
biomasa 72n%ica en meio HMC0 Sin embar%o, 'a preicci"n meiante e' moe'amiento
matem)tico permiti" corroborar G.e 'os atos experimenta'es se ape%an a 'as 7ases e
esarro''o .rante .na cin&tica e crecimiento0 Gompertz (HC+$C8[< 1), e Von
Bertalanffy (HC+$C8[< 2) y e' moe'o 'o%Kstico (HC+$C8[< @) 7.eron .saos para e'
an)'isis e 'a in)mica e crecimiento
0
!ompert#:
E!"A!IIN 76 (ompert, <M6 J1ietering et al6 7GGB=
E!"A!IIN >6 Modelo #on Bertalan??y <.6 I6 L5pe, S;nche, et al6 >BBK=
Moe'o Mo%KsticoC
E!"A!IIN A6 Modelo LogLstico <%icMer9 7GFG=
Mas c.rvas obtenias por sim.'aci"n presentan co-erencia con 'as c.rvas obtenias
experimenta'mente0 Hn 'as c.rvas e 'os moe'os p.een observarse ese 'a 7ase e
crecimiento -asta 7ase estacionaria e 'a biomasa 72n%ica ()0 ,ara toos 'os casos, Von
Bertalanffy (\) 7.e e' moe'o G.e se a*.st" me*or a 'os va'ores rea'es (EF 004) e 'a
cin&tica e crecimiento e 'a biomasa 72n%ica en meio HMC X Bi&se'0
Von /erta'an77yC
&I("%A >6 2redicci5n de cin/tica de crecimiento con tres modelos matem;ticoN
Gompert (]=9 de von bertalanff! <O= y el modelo logLstico <P= para +usti?icar Que
los datos e8perimentales <'= se apegan a las ?ases de desarrollo durante una
cin/tica de crecimiento din;mica6
+n breve an)'isis a 'a mor7o'o%Ka e 'a biomasa 72n%ica propone G.e e' consorcio est)
constit.io a' menos por -on%os 7i'amentosos e' %enero C'adosporium (L8!+R$ 4);
varios a.tores (,arbery, 19Q1); (Co7one et a', 199>) -an escrito G.e C'adosporium
presenta .na a'ta tasa e evo'.ci"n para aaptarse a sitios contaminaos
(principa'mente s.e'os) por -irocarb.ros, e one se esprene G.e e' consorcio
microbiano no so'o est) comp.esto por bacterias, ano como consec.encia .n c.'tivo
mixto
Mas venta*as e emp'ear c.'tivos mixtos en '.%ar e c.'tivos p.ros para 'a e%raaci"n
e -irocarb.ros -an sio emostraas, y 'os bene7icios son atrib.ios a 'os e7ectos
sin&r%icos G.e se estab'ecen entre 'os i7erentes miembros e 'os consorcios
microbianos0 Hn 'a interacci"n pob'aciona' G.e se estab'ece en .n consorcio
microbiano mixto es posib'e G.e a'%.nas especies rem.evan . oxien parcia'mente 'os
metabo'itos pro.cios por otros microor%anismos -irocarbonoc'astas (!-a#a'i, 2004);
(Bia# et0a', 200=)0
Evaluacin de los mecanismos de contacto celular al hidrocarburo. Hn ic-os
experimentos se m.estra crecimiento raia' e 'a biomasa 72n%ica y se etectan os
7ormas i7erentes e aaptaci"n a' cr.o mayaC $) -a'o transparente a'reeor e' raio
e 'a biomasa y /) -a'o obsc.ro a'reeor e' raio e 'a biomasa (L8!+R$ @)0
Mori6a4a et0 a'0 2000; Po.sse7 et a'0 2004, asocian e' i)metro e' -a'o transparente
con 'a pro.cci"n e bios.'7actantes en bacterias ais'aas, e%raaoras e
-irocarb.ros, sin embar%o, para e' caso e -on%os, so'o se -a reportao 'a pro.cci"n
e proteKnas e ba*o peso mo'ec.'ar, ''amaas -iro7obinas (Cox et a',0 2009)0 Ma
a-esi"n e 'as c&'.'as a 'as %otas e -irocarb.ros p.ee minimi#ar 'a istancia e
i7.si"n y 7aci'itar 'a i7.si"n e 'os s.stratos -iro7"bicos a' interior e 'as c&'.'as
microbianas ($bbasne#-a, 2011; /o.c-e#, 2001; van 5amme, 2001; D'ivia, 2012)0
H' ana'isis por estereomicroscopKa .rante e' crecimiento e biomasa 72n%ica en
matraces con meio HMC, reve'a G.e parte e 'a biomasa 'ibre se esp'a#a
contin.amente -acia %otas ais'aas e 'os -irocarb.ros .saos (L8!+R$ ?),
a-irienose entre e' contorno e 'as 7racciones apartaas0 Hn otro 7enomeno
observao, resa'ta G.e %ran parte e 'a biomasa se aapta con mayor 7aci'ia a
7racciones e menor tamaOo e 'os -irocarb.ros .saos, por 'o G.e es importante
mantener .na a%itaci"n constante G.e me#c'e 'o mas posib'e 'a 7ase o'eosa con 'a
ac.osa; por otra parte esp.es e .n perioo ^ 120 -oras, se 'o%ro observar G.e parte
'a biomasa era capa# e penetrar -acia e' interior e 'as %otas e -irocarb.ro; p.esto
G.e se trata e .na ima%en biimensiona', no se p.ee aseverar G.e 'a biomasa este
penetrano irectamente en 'as 7racciones e -irocarb.ro, no obstante, esta .'tima
premisa p.ee ar si%ni7icao a 'a -ipotesis acerca e 'a pro.cci"n e -iro7obinas en
'a pare ce'.'ar e 'a biomasa 72n%ica0
&I("%A 46 An;lisis mor?ol5gico de la 3iomasa ?@ngicaN NOTA4 $urante todas las
o3servaciones por microscopLa se visuali,a3an hi?as ta3icadas y septadas Que
corresponden al grupo !ladosporium6
&I("%A K6 EstereomicroscopLa durante el crecimiento de 3iomasa ?@ngica en
matraces con medio EM!N NOTA4 2ara el contorno in?erior de la &I("%A E la
&I("%A A6 2rue3as del medio EM! solidi?icado
recu3ierto con crudo maya6 NOTA4 2ara los casos
A= y B=9 el crudo maya se superpuso en la 3iomasa
?@ngica6
3iomasa ?@ngica se adhiere hacia el contorno de una gota aislada de di/sel6 2ara
el contorno superior de la &I("%A E9 diversas ?racciones de crudo maya son
aprovechadas por esporas li3res en el sistema6
!onclusi5n
H' crecimiento 72n%ico en meio HMCX Bi&se' em.estra G.e e' consorcio e'
/iorreactor mare es .n c.'tivo mixtoN no e7inio, esto permite s.poner G.e e'
consorcio e' /iorreactor mare es capa# e e%raar i7erentes 7racciones e 'os
-irocarb.ros G.e 7.eron .ti'i#aos como 7.ente e carbono0 $em)s, 'a comparaci"n
mor7o'"%ica res.e've G.e parte e' consorcio 72n%ico est) comp.esto por e' %&nero
Cladosporium 'a c.a' se -a reportao como e%raaor e -irocarb.ros; asimismo e'
an)'isis esteremicrosc"pico y 'as pr.ebas e' meio HMC so'ii7icao rec.bierto con
cr.o maya ieron .na primera impresi"n e G.e 'a biomasa microbiana 72n%ica
pro.ce proteKnas e ba*o peso mo'ec.'ar enominaas -iro7obinas (a2n no e7inia
s. c'ase)0
Agradecimientos6
Ricaro !"me#-Reyes esea a%raecer a' Br0 Man.e' Mi#ari-(im&ne# por s. extenso
apoyo para 'a e'aboraci"n e esta investi%aci"n, y a 'a +niversia ,o'it&cnica e
,ac-.ca por permitir .sar s.s insta'aciones para ic-o prop"sito0 $ 'os 8n%enieros
Bec'e-Carrasco y 3ec-Caama', por e' apoyo t&cnico .rante e' esarro''o e 'os
experimentos0 C</HS en e' marco e becas e movi'ia naciona' (7o'io >20440) por e'
apoyo 7inanciero0 ,ro7esores e 'a +niversia ,o'it&cnica e 1.intana Roo 2011-2014
por 'a catera e.cativa0
%e?erencias4
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Notaci5n
BS$ $%ar Bextrosa Sabo.ra.
,B$ ,apa Bextrosa Sabo.ra.
E Besviaci"n Hst)nar 3Kpico