Objetivo. Hacer una preparacin microscpica de clulas meristemticas de la raz de cebolla Materiales: pices de cebolla. HCl diluido. Colorante aceto - orcena. Portaobjetos. Cubreobjetos. Papel toalla Aguja de diseccin. Introduccin La divisin celular es el fenmeno citolgico por el que una clula origina dos clulas hijas, cada una de las cuales recibe idntica informacin gentica. Dentro de las funciones que realiza la clula eucarionte, dos de las ms importantes: la regulacin y la reproduccin celular descansan en el ncleo. El ncleo contiene la mayor parte de la informacin hereditaria de la clula, es decir, las instrucciones necesarias para el desarrollo y el metabolismo de las especies. Este organlo es el encargado de duplicar su informacin gentica para transmitirla a las nuevas generaciones cuando la clula se reproduzca.
Los procesos que se manifiestan desde la formacin de una clula hasta su propia divisin en dos hijas, son lo que se denomina ciclo celular. Este ciclo se divide en dos etapas principales: la interfase y la divisin celular, de acuerdo con los sucesos que se presentan en la clula. La interfase se caracteriza por una serie de procesos que implican la fabricacin activa de molculas tales como las protenas y la duplicacin del DNA. Mientras que la divisin celular consta de la mitosis o cariocinesis en la que ocurre la condensacin y separacin de los cromosomas y de la citocinesis o divisin citoplsmica. La mitosis se subdivide segn los cambios que presente el ncleo y la morfologa que presenten los cromosomas en: profase, metafase, anafase y telofase. El significado biolgico de la mitosis es asegurar la conservacin del patrimonio hereditario nuclear en el proceso de formacin de un individuo adulto a partir de una clula inicial o cigoto.
Preparacin previa. Tres o cuatro das antes de hacer la prctica se pone un bulbo de cebolla en un vaso de precipitados lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del mismo est en contacto con el agua. no permita que la cebolla caiga dentro del recipiente sino que quede suspendida sobre el agua (si es necesario, inserte unos palillos de dientes en los lados de la cebolla para que la sostengan). Al cabo de esos tres o cuatro das se habrn formado numerosas raicillas, cuyos pices se utilizarn en esta prctica. Conviene realizar la prctica cuando las raicillas todava no han crecido demasiado. Se debe cambiar el agua del frasco por agua limpia, al menos dos veces, a los 3 y 4 das. La raz de la cebolla debe de estar sumergida en agua hasta el momento de realizar la prctica
Procedimiento:
1. Con una tijera se corta el extremo de varias raicillas, procurando que su longitud sea de unos 2 a 3 mm., ya que es en esta zona de la raz donde se encuentran las clulas en divisin.
2. Enjuague los pices de cebolla (fijados) en agua destilada por 30 segundos.
3. Coloque las races en un plato Petri que contenga unos 3mL de HCl 1% por 7-8 min. (esto se hace para romper la pared celular).
4. Mientras transcurre el tiempo anterior, corte y conserve la porcin del pice de raz que posea un tejido blanquecino (casi 2-3 mm del extremo de la raz) y deseche el resto.
5. Transferir los pices a agua destilada y dejarlos all 30 segundos (enjuague).
6. Coloque el tejido sobre un portaobjetos e inmediatamente agregue dos gotas de aceto-orcena sobre ste.
7. Coloque un cubreobjetos sobre el tejido y caliente la muestra suavemente por 1 minuto, por medio de toques intermitentes sobre la superficie de un plato de calentamiento o "hot plate" (durante este tiempo vigile que el tejido permanece humedecido con el colorante, no permita que hierva ni que se seque; agregue ms colorante si es necesario). Esta etapa es opcional (el calentamiento intensifica la tincin).
8. Coloque un trozo de papel toalla sobre el cubreobjetos; presione fuerte y cuidadosamente por medio de un borrador de lpiz (esta tcnica se llama "extendido por aplastamiento" o "squach). Recuerde que mientras est ms aplastado, las clulas se separarn ms unas de las otras y se encontrarn en el mismo plano, distinguindose mejor las distintas etapas de mitosis.
9. Despus del aplastamiento, si es necesario, levante el cubreobjetos con la ayuda de una aguja de diseccin y agregue una gota adicional de aceto- orcena; coloque nuevamente el cubreobjetos sobre la muestra.
10. Observe al microscopio (primero con el objetivo 10x localice el rea adecuada, luego pase a 40x para observar con detalles).
11. Encuentre las cuatro etapas de la mitosis, adems observe la apariencia de las clulas que se encuentran en interface (aquellas que no estn en mitosis). Realiza un conteo de campo.
RESULTADOS
Profase
Profase- Metafase
Metafase- Anafase
Telofase
ANLISIS DE RESULTADOS 1. Describe las etapas del ciclo celular. Profase
Metafase Anafase Telofase 2. Explica las caractersticas de la mitosis. proceso caracterstico de clulas diploides, que van a producir nuevas clulas diploides.
Se presenta en clulas vegetales y animales Se produce una duplicacin cromosmica y una divisin nuclear y citoplasmtica en cada ciclo. En cada ciclo se produce dos clulas hijas. Cada una de las clulas hijas contiene el mismo nmero de cromosomas que posee la clula madre.
3. Explica en que etapa del ciclo celular se encontraban la mayora de las clulas observadas. La mayora de las clulas se encontr en la Telofase. 4. Que etapas de la mitosis lograste observar? Se logro observar la anafase 5. Por qu crees que se utilicen las partes en crecimiento de la cebolla para observar la mitosis? En un corte fino, tincionado correctamente, se puede observar este proceso ya que por la presencia de pared celular, matriz intracelular y el ncleo, que en las clulas de raz es, relativamente grande, se puede observar mejor este proceso. 6. Para qu se utiliza la acetorcena, que funcin cumple en la preparacin?
la acetorceina es un colorante bsico, y por lo tanto tiene afinidad por los componentes cidos.
CONCLUSIONES Si se cumplieron los objetos porque se pudo observar etapas de clula en las pices de la cebolla, lo mas importante se pudo ver lo que se quera en el experimento.