Software : Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam
Metodologa : Trabajo en mesa de laboratorio.
Procedimiento :
Se procede a pesar y marcar 06 ratones. Administrar por va intraperitoneal, a un ratn (animal control previamente recibe 0.1 ml de solucin fisiolgica por cada 10 g/pc), cido actico al 2 %, en volumen de 0,2 ml por cada 10 gramos de peso. Observar, el comportamiento del animal, el nmero de contracciones (El cido actico produce una respuesta caracterstica de contorsin, que se manifiesta por contracciones abdominales, retorcimiento del tronco y extensin de las patas posteriores), considerando el perodo de latencia y el nmero total de contracciones durante 20 minutos. A los 5 ratones restantes, administrar por va IP, segn el esquema propuesto, las siguientes sustancias protectoras: Ratn A, cola, Diclofenaco sdico, 10 mg por Kg de peso. Ratn B, cabeza, Metamizol sdico, 30 mg /Kg de peso. Ratn C, lomo, morfina clorhidrato, 10 mg /Kg de peso. Ratn D, pata, Tramadol clorhidrato, 20 mg /Kg de peso. Ratn E, oreja, Parecoxib sdico, 20 mg/kg de peso. Esperar 20 minutos y luego administrar, a todos los animales, cido actico, va IP, a la dosis de 0.2 ml por cada 10 gramos de peso corporal ratn. Contar el nmero de contracciones y estiramientos durante 20 minutos. Este experimento, segn necesidad, podr ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodologa demostrativa.
RESUMEN
Se observo el efecto de distintos frmacos para el manejo del dolor. Se trabaj con 7 ratones albinos con un peso promedio de 27.5 gr. que fueron marcados e identificados como: cabeza, oreja, pata, cola y lomo. Se utiliz cido actico que produce una respuesta caracterstica de contorsin, que se manifiesta por contracciones abdominales, retorcimiento del tronco y extensin de las patas posteriores por va intraperitoraneal. Al ratn cabeza se le administr cido actico y se evalu el periodo de latencia y el nmero de contracciones durante 20 minutos luego de los cuales se le administr la dosis correspondiente de metamizol y tramadol, volvindose a evaluar los parmetros de periodo de latencia y nmero de contracciones. Al resto de ratones se les administr un nico analgsico y a los 10 minutos la dosis correspondiente de cido actico por la misma va. Se evalu el periodo de latencia y el nmero de contracciones durante 20 minutos. Solo morfina fue administrada por va subcutnea. Luego de obtener los datos se organizaron en una tabla y se hall el porcentaje de PPL y el porcentaje de inhibicin de dolor de cada frmaco.
RESULTADOS
DISCUSIN CONCLUSIONES
EXPERIMENTO N 2: Efecto analgsico de frmacos analgsicos por el mtodo de la placa caliente en roedor.
Frmacos : Morfina / Fenilbutazona / NaCl.
Especie : Ratn.
Software : Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam
Metodologa : Trabajo en mesa de laboratorio, mediante prctica simulada en Software
Procedimiento :
La placa caliente consiste en una superficie calentada, encima de un bao de agua. La temperatura es controlada, entre 56 a 57C. Los animales son colocados en la superficie caliente, y se toma el tiempo de latencia con un cronmetro, en que el animal reacciona lamindose las patas delanteras o hacer saltos. Se registra el periodo de latencia, antes, y despus de 20, 30 o 60 minutos luego de la administracin oral o subcutnea de las drogas a probar. Si el tiempo de latencia excede 30 o 60 segundos, se retira el animal de la placa caliente.
RESULTADOS
DISCUSIN CONCLUSIONES
TAREA DE LA DCIMA PRCTICA FRMACOS QUE AFECTAN LA MOTILIDAD INTESTINAL EXPERIMENTO N2: Evaluacin de la motilidad intestinal in vitro en leon de rata.
Especie : leon de rata. Software : Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam
Metodologa : Tarea y trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulacin en Software.
Procedimiento :
Sacrificar una rata por dislocacin cervical. Seguidamente, realizar diseccin tipo laparotoma, y extraer un segmento de intestino delgado, de aproximadamente 3 cm. Realizar lavado de la luz intestinal, e instalarlo en el aparato de rganos aislados. Utilizar como lquido nutricio una solucin de Ringer Locke, aireacin continua, y temperatura de 37C. Registrar la actividad espontnea, y agregar los frmacos al recipiente, en la siguiente secuencia (Grafico N1): Instilar 0.2 ml de Acetlcolina, y observar las contracciones y anotar. Encontrndose el segmento contrado, instilar 0.2 ml de Hioscina y anotar. Cambiar el segmento intestinal, e instilar 0.2 ml. de Acetlcolina, y anotar. Encontrndose el segmento contrado, instilar 0.6 ml de Loperamida y anotar. Cambiar el segmento intestinal, e instilar 0.2 ml. de Acetlcolina y anotar. Encontrndose el segmento contrado, instilar 0.2 ml. de Pargeverina. Cambiar el segmento intestinal, e instilar 0.2 ml. Acetlcolina y anotar. Encontrndose el segmento contrado, instilar 1 ml. de Atropina y anotar. Este experimento, ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, y los resultados del experimentos, pueden ser revisados en el grfico N1. Las variaciones en las contracciones del segmento de intestino, se catalogan en intensidad de efectos, bajo la siguiente forma: Leve +. Moderado ++. Intensa +++. Muy intensa ++++.
Grafico N1: EXPERIMENTO N2, Evaluacin de la motilidad intestinal in vitro en leon de rata.
RESULTADOS
Intensidad del efecto: Leve + Moderada ++ Intensa +++ Muy intensa ++++ INTENSIDAD DE CONTRACCIONES Acetilcolina +++ Contraccin Hioscina +++ Relajacin Acetilcolina +++ Contraccin Loperamida ++ Relajacin Acetilcolina ++ Contraccin Pargeverina +++ Relajacin Acetilcolina +++ Contraccin Atropina ++++ Relajacin Efecto de los farmacos sobre el Tono y la Amplitud:
Efecto en la frecuencia de las contracciones por tiempo definido:
DISCUSIN Los fenmenos de mezcla, propulsin y absorcin de nutrientes en las vas gastrointestinales (GI) son controladas localmente por el sistema nervioso entrico (SNE). Este sistema interviene en el control sensorimotor y consiste en neuronas organizadas en dos plexos: mientrico (de Auerbach) y submucoso (de Meissner). Plexo mientrico interviene en la contraccin y relajacin de los msculos lisos del tracto gastrointestinal. Plexo submucoso se encarga de la funcin secretora y absortiva del epitelio.
En el experimento se aplic ACETILCOLINA al segmento de intestino y lo que ocurri fue que este neurotransmisor actu sobre los receptores M3 del msculo liso intestinal y por intermedio de protena G se activa a la fosfolipasa C, la cual cataliza la reaccin de formacin de IP2 a partir de IP3. Este IP3 acta en los receptores de IP3 ubicados en el retculo sarcoplsmico y ocasiona que los canales de Ca++ se abran y los iones Ca++ salgan al citoplasma, reaccionen con la actina y de esta forma produzcan la contraccin del msculo liso la cual fue muy intensa
Aqu observamos que la Acetilcolina provocara contracciones intensas, ya que la Acetilcolina ir hacia los receptores M3 que predominan en el musculo liso del TGI produciendo efectos excitatorios, desarrollan un incremento del tono y del peristaltismo gastrointestinal. Adems se incrementan las secreciones de todos los jugos intestinales produciendo un incremento del tono, la amplitud de las contracciones y la actividad 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 Amplitud Tono 0 20 40 60 80 100 Frecuencia Contracciones Frecuencia peristltica del estomago e intestino; ello puede causar dolor tipo clico, defecacin, diarrea, nauseas, eructo y vmitos.
Al agregarle la HIOSCINA que es un inhibidor de los receptores muscarnicos y es por este motivo que al aplicarla sobre el segmento de intestino origina una relajacin muy intensa. Se inhibe la accin de la Ach sobre el receptor M3. La hioscina ejerce efecto espasmoltico a travs de su accin anticolinrgica. Acta a nivel de los receptores colinrgicos perifricos, en las clulas efectoras autonmicas del msculo liso, msculo cardaco, ndulo sinoatrial, ndulo aurculo-ventricular y glndulas exocrinas. Inhibe la motilidad gastrointestinal, reduce las secreciones gstricas, as como las secreciones de faringe, trquea y bronquios. Dilata las pupilas, disminuye las secreciones glandulares, aumenta el ritmo cardaco de forma transitoria, Posee una accin sedante, ocasionalmente con amnesia parcial.
Luego se aplico nuevamente acetilcolina ocurriendo las contracciones previstas. Se le agrega esta vez LOPERAMIDA Cuando se administra Loperamidase ste es un agonista opiceo que ejerce efecto antidiarreico mediante una serie de acciones tanto perifricas en el tubo digestivo, como centrales. Su accin gastrointestinal se ejerce mediante su accin sobre receptores MOR y DOR de la pared del tubo digestivo, alterando tanto la motilidad como la secrecin, dando lugar una contraccin directa de las fibras musculares de la capa circular que produce un incremento de la presin luminal, antagonizando el tono inhibidor motor mediado por ciertos neuropeptidos, inhiben la liberacin de acetilcolina en las uniones neuromusculares de la capa longitudinal. Su efecto inhibidor sobre la motilidad digestiva se lleva a cabo sobre todo el aparato gastrointesitnal, incrementando el tono y reduciendo la motilidad.
Se aprecia en la grfica un leve descenso (10 mm.) y esto demuestra que este frmaco no es un antimuscarnico potente. Lo que hace la loperamida es actuar sobre el msculo liso intestinal inhibiendo a la calmodulina para que esta no interacte con el Ca++. La finalidad es disminuir la motilidad intestinal, lo que permite la mayor absorcin de agua y electrolitos. Es usado como antidiarreico.
Se vuelve a cambiar el pedazo de intestino y se le aplica nuevamente acetilcolina por con efectos no tan potentes como al inicio, esta vez fueron moderadas. Despus de tener los efectos con acetilcolina se le administro PARGEVERINA. Este frmaco es un espasmoltico de accin antimuscarnica no selectivo y musculotrpica que acta sobre la miofibrilla contracturada, produciendo relajacin directa e inespecfica del musculo liso, reduciendo su tono y movilidad es un potente inhibidor de la liberacin de acetilcolina en las terminaciones nerviosas.
El efecto ms importante es el musculotropo, el cual se debe probablemente a un bloqueo del ingreso de calcio al interior de la clula muscular, de manera que esta accin pargeverina clorhidrato la ejerce como relajante directa inespecfica sobre la musculatura lisa. La pargeverina clorhidrato posee una suave accin antimuscarnica, llamada neurotrpica, al competir con acetilcolina por su receptor muscarnico, pero con una potencia menor al compararla con atropina, por lo cual a dosis efectivas ejerce menos efectos secundarios asociados a esta accin
Por ltimo, se le agrega nuevamente acetilcolina aprecindose efectos moderados. Cuando se administra ATROPINA, la grfica tuvo una curva con una cada notoria. La accin principal de la atropina es competir por el receptor M3 del musculo liso con la Ach e inhibir la sealizacin interna de contraccin. La atropina ejerce su accin a travs de un antagonismo competitivo con la acetilcolina y otros antagonistas colinrgicos, por los receptores muscarnicos. Con dosis teraputicas (1 mg de atropina) y an mayores, se bloquean todos los receptores muscarnicos. Los receptores nicotnicos del ganglio autnomo y de la placa neuromuscular son respetados con dicha dosis.
La atropina no distingue los receptores muscarnicos selectivos M1, M2 o M3, los bloquea a todos por igual. La motilidad y el tono G-I son inhibidos por atropina y los agentes antimuscarnicos. El msculo liso se relaja y los movimientos propulsivos disminuyen o se anulan. El tiempo de vaciamiento gstrico se prolonga y el trnsito intestinal disminuye. Las secreciones digestivas son tambin inhibidas o anuladas por la atropina. Con altas dosis, la secrecin (cido clorhdrico, pepsina y mucina) es eficientemente reducida, principalmente la secrecin basal y menos la secrecin inducida por el estmulo alimenticio, alcohol o la nicotina. Sin embargo las dosis de atropina dan inevitablemente una serie importante de efectos adversos: sequedad de boca, taquicardia, palpitaciones y ciclopleja.
CONCLUSIONES
Los frmacos utilizados mostraron tener buen efecto antiespasmdico.Por el mecanismo de accin y su efecto sobre la motilidad intestinal, estos frmacos son de utilidad dependiendo del trastorno del intestino.
Acetilcolina en el tracto gastrointestinal provoca aumento del tono muscular del mismo, aumenta las secreciones endocrinas gastrointestinales, estos efectos pueden producir nusea, vmito y diarrea. Hioscina es un frmaco anticolinrgico ejerce una accin espasmoltica sobre la musculatura lisa del tracto gastrointestinal. Loperamida es un frmaco que provoca relajacin del tracto gastrointestinal y es utilizado para el tratamiento de la diarrea. Pargeverina es un antiespasmdico antagonista moderado y no selectivo de los receptores muscarnicos y con accin directa sobre el msculo liso visceral. Atropina es una droga anticolinrgica, antagonista competitivo del receptor muscarnico de acetilcolina se utiliza para disminuir la motilidad gastrointestinal.
EXPERIMENTO N3: Efecto de Acetlcolina en dosis escalonada, en leon aislado de rata.
Frmacos : Acetilcolina.
Especie : leon aislado de rata.
Software : Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam.
Metodologa : Tarea y trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulacin en Software.
Procedimiento :
Un sistema de rganos aislados, permite la evaluacin de los efectos de una sustancia en una porcin especfica de tejido. Esto se logra aislando el rgano de una especie animal; en esta prctica se utiliza una rata, y se obtiene de ella una porcin de leon de aproximadamente 3 cm, que es llevada a la copa del sistema de rganos aislados, en la que existe una sustancia nutricia especifica, solucin de Ringer Locke, con aireacin continua con carbgeno y oxigeno, mantenida a una temperatura constante de 37 C. En estas condiciones, uno de los extremos del leon es sujetado a la base de la copa que lo hospeda, y el otro es conectado a un transductor, que convierte los movimientos de contraccin y relajacin del intestino aislado, en fuerza, que a su vez es conectada a un computador, que automticamente la convierte en porcentajes. En este sistema simulado en el Software Microlabs, procedemos a someter al leon de rata, a dosis escalonada de Acetilcolina, la secuencia y los resultados podemos observarlos en el grfico N2. En base a los resultados observados, analizarlos, segn los mecanismos farmacolgicos implicados en este efecto farmacolgico.
RESULTADOS Grafico N2: EXPERIMENTO N3, Efecto de Acetlcolina en dosis escalonada, en leon asilado de rata.
DISCUSIN En el intestino delgado se distinguen tres porciones: duodeno, yeyuno e leon. Constituidas por una capa serosa, muscular, plexos nerviosos, submucosa y mucosa. Las clulas de musculatura lisa, de la capa muscular, van a contraerse en respuesta a diversos estmulos y por tanto las responsables de la respuesta que vamos a registrar.
Entre los neurotransmisores con capacidad de producir contraccin del leon, que posee sus respectivos receptores, tenemos: ACh, histamina, noradrenalina, etc. La ACh es un agonista de receptores muscarnicos y nicotnicos. El nicotnico es un receptor preganglionar, y no se encuentra en el leon, sino en el ganglio donde sinaptan las neuronas que inervan el intestino. Esto quiere decir que mientras que el rgano aislado (sin inervacin) no responde a la estimulacin del receptor nicotnico, en el animal entero, esta estimulacin s provocara respuesta. El leon presenta una contraccin bifsica, con un componente fsico (un pico de contraccin) seguido de otro tnico (una meseta mantenida). El pico de contraccin se asocia con la liberacin de Ca2+ de los depsitos intracelulares y la contraccin tnica con la entrada de Ca2+ a travs de canales. Ya sabemos que la Ach produce contraccin del leon, por lo que se puede ver en l grfico del experimento como este efecto depende de la concentracin de Ach en contacto con los receptores.
CONCLUSIONES
La ACh interacciona con receptores muscarnicos, concretamente M3. Tras su estimulacin se desencadenan una serie de procesos que conducen a un incremento de [Ca2+] intracelular, provocando la contraccin del msculo liso (receptor M3 est asociado auna proteina G cuya activacin estimula la actividad de la fosfolipasa C ). Es por ello que al aumentar las dosis escalonadas de Ach, aumentan la intensidad de los efectos, los movimientos de contraccin y relajacin del intestino aislado.
BIBLIOGRAFA
P. Loredo, et all. VELAZQUEZ, FARMACOLOGIA BASICA Y CLINICA. Editorial medica panamericana. Edicin 2008.