Los medios de cultivo en

microbiologa
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es
el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo
diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn
otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin
de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del
agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas
excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no
es atacado por aquellas que crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos
ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden
para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y
no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y
amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

Condiciones generales para el cultivo de
microorganismos
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.
1- disponibilidad de nutrientes adecuados
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos
casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones qumicas que tengan lugar.
Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de
carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de
estas sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la prdida de
los factores nutritivos lbiles.
Actualmente, la forma ms extendida de aportar estas sustancias a los medios es
utilizar peptona que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno
y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no suelen utilizar
directamente las protenas naturales, tienen capacidad de atacar los aminocidos y
otros compuestos ms simples de nitrgeno presentes en la peptona.
Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas especficas por lo que se aade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, lquido asctico, etc. Igualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturaleza vitamnica.
Muy a menudo se aaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores
de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores
selectivos de ciertos microorganismos.
2- consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos
como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendramos medios en estado semislido
o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto
de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay tambin gran cantidad de medios lquidos cuyo uso est ampliamente
extendido en el laboratorio.
3- presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases
Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de oxgeno
normal. Algunas pueden obtener el oxgeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollarn adecuadamente en una
atmsfera sin oxgeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias
(tensin de oxgeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
4- condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las clulas vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las estufas
de cultivo a 35-37C proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la
humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar as que se deseque el
medio.
5- Luz ambiental
La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sera el caso de los
microorganismos fotosintticos.
6- pH
La concentracin de iones hidrgeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayora de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios ms o menos cidos. No se debe olvidar
que la presencia de cidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento
bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metablicos
normales.
7- Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y
43C. Otros como los psicrfilos crecen a 0C y los temfilos a 80C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemfilos). En lneas generales, los patgenos humanos
crecen en rangos de temperatura mucho ms cortos, alrededor de 37C, y los
saproftos tienen rangos ms amplios.
8- Esterilidad del medio
Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles para evitar la
aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios.
El sistema clsico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza
vapor de agua a presin como agente esterilizante)
La evolucin de los medios de cultivo
Podemos decir que la microbiologa empieza su verdadero desarrollo como ciencia en
el momento en que se descubre el microscopio y comienza la observacin de los
primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de
cultivo y la utilizacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de
inflexin en su evolucin.
La primera noticia de la utilizacin de medios de cultivo nos llega del miclogo Brefeld,
que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos realizados a base
de gelatina.
Sin embargo este sistema no era adecuado para las bacterias (por su menor tamao) y
no fue hasta el ao 1878 cuando Lister populariz un mtodo enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio lquido.
Koch realiz sus investigaciones utilizando en un primer momento rodajas de patata
como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne lquido,
diseado por Loeffler, al que, en 1881, aadi gelatina, logrando un medio slido
transparente ideal para la observacin de la morfologa macroscpica de las colonias
microbianas.
En el ao 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiologa en relacin
con los medios de cultivo: el mdico alemn Walter Hesse introduce el agar-agar
(polisacrido extrado de algas rojas) como solidificante.
En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal
planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clsicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.
Beijerinck y Winogradsky, que desde de 1888 realizaron sus investigaciones sobre las
bacterias quimioauttrofas (utilizacin de nitrgeno y azufre sobre todo) tuvieron gran
importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. Disearon
este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qumica favoreca el
crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos
metablicos, eran los nicos capaces de utilizar para su desarrollo ciertos nutrientes
del medio.
En 1892 Wrtz impuls el uso de los medios diferenciales, incorporando indicadores de
pH a la composicin de ciertos medios con lo cual se poda observar la produccin de
cidos en la fermentacin en ciertos microorganismos.
Tipos bsicos de medios de cultivo
atendiendo a su estado fsico:
lquidos
semislidos
slidos
atendiendo a su utilidad prctica:
Medios para aislamientos primarios:
Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia
variedad de organismos difciles de hacer crecer. A menudo estn
enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV,
glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las
bacterias (Agar Sangre, Schaeadler, etc)
selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se aaden
sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias,
permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia
aadidas, se vara el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey,
Kanamicina-Vancomicina)
enriquecidos: ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora
competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado
(Selenito, medio con Vitamina K).
Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales
que satisfacen requerimientos de grupos especficos de bacterias,
ayudando a su identificacin (Lowenstein).
Medios para identificacin:
diferenciales: formulaciones especiales en las que se estudian las
peculiaridades fisiolgicas (nutricin y respiracin sobre todo) especficas
de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a
la identificacin de casi cualquier bacteria (Oxidacin-Fermentacin)

Bibliografa

http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html


Tcnicas microbiolgicas para el diagnstico de las
infecciones.
Editar 0 18
Tema 9. Tcnicas microbiolgicas para el diagnstico de las infecciones.


El diagnstico microbiolgico es el conjunto de procedimientos y tcnicas
complementarias empleadas para establecer la etiologa del agente responsable de una
enfermedad infecciosa y poder as proceder a su tratamiento y a tomar, en caso de
que fuera necesario, las medidas correspondientes para evitar la diseminacin del
patgeno.

Para llevarlo a cabo, se parte de la informacin acumulada por el mdico y que se
recoge en la historia clnica del paciente en forma de sntomas, signos y diagnstico
clnico ms probable a su entender.

El diagnstico microbiolgico en bacteriologa puede clasificarse en distintos tipos:
Directos: Implican la demostracin del agente patgeno, sus metabolitos o alguno de
sus componentes antignicos en los fluidos orgnicos del paciente.

Indirectos: Implican la demostracin de la huella que el agente patgeno ha dejado
en su contacto con el sistema inmunocompetente del paciente.

A la hora de llevar a cabo la identificacin es imprescindible la labor del laboratorio,
que nos aportar datos preliminares o definitivos sobre los agentes patolgicos
causantes de la afeccin. Para ello, se lleva a trmino un procedimiento ordenado que
comprende:

1.- Toma de muestras (esputo, sangre, heces, tejidos) que dependern de la
sospecha de procedencia de la afeccin.
2.- Observacin al microscopio, si procede, de la muestra
3.- Obtencin de colonias aisladas, cultivo.
4.- Identificacin del gnero y de la especie mediante test bioqumicos, genticos,
inmunolgicos.
5.- Test de sensibilidad a los antibiticos (punto de corte, antibiograma, MIC)
6.- Informe al clnico, quien proceder a establecer el tratamiento fundamentado en el
diagnstico microbiolgico o a modificar un tratamiento emprico administrado debido
a la gravedad de la infeccin.

A la hora de tomar las muestras microbiolgicas, debemos de hacerlo con el mayor
rigor posible, sien do para ello muy importante el cumplimiento de los siguientes
requisitos que permitirn garantizar el resultado correcto del estudio:

1. Elegir el material que refleje el proceso patolgico.
2. Evitar contaminacin con la flora del paciente.
3. Obtener volumen suficiente para observacin microscpica y cultivo.
4. Obtener la muestra, si es posible, antes de iniciar la terapia antimicrobiana.
5. Transportar la muestra rpidamente al laboratorio.


Una vez tenemos las muestras adecuadas, podemos comenzar a realizar las tcnicas
diagnsticas correspondientes. Dentro del diagnstico microbiolgico incluiremos:

1.- Examen microscpico
2.- Crecimientos en cultivos
3.- Evidencia indirecta del crecimiento
4.- Tcnicas inmunitarias

Cada una de estas tcnicas tiene sus ventajas y sus inconvenientes, pero son todas
ellas muy necesarias para un buen resultado final.

EXAMEN MICROSCPICO:

La visualizacin de los microorganismos patgenos es la tcnica ms evidente. Sin
embargo, debido a su pequeo tamao y a la similitud estructural existente entre
algunos de ellos, se generan numerosas complicaciones. Para evitar el problema del
tamao, se utilizan sistemas de ampliacin de imagen como lupas o microscopios. Las
tinciones diferenciales y especficas, nos permitirn paliar el problema de la similitud.

Habitualmente, la visin microscpica de los agentes patgenos no nos ofrecer un
diagnstico definitivo, sino una orientacin diagnstica. Sin embargo, la visualizacin
de estructuras especficas puede ser un hecho que nos garantizar una determinacin
garantizada. Los microscopios pticos permiten ver bacterias, hongos y protozoos.
Para ver virus es necesaria una resolucin mucho mayor que slo alcanza el
microscopio electrnico, mientras que las tenias y trematodos no requieren tcnicas de
ampliacin de imagen.

Los exmenes en fresco dejan visualizar los microorganismos sin necesidad de fijarlos
ni teirlos, y por tanto vivos. stos, son especialmente importantes en las infecciones
producidas por parsitos intestinales puesto que pueden detectar huevos, quistes y
trofozoitos que por sus caractersticas morfolgicas pueden generar por si solas un
diagnstico definitivo. Las muestras de heces deben pretratarse antes de realizar la
preparacin en fresco con el fin de aclarar y concentrar los parsitos. Tambin las
infecciones producidas por Tricomonas vaginalis se diagnostican de este modo en el
exudado uretral.

En ocasiones la visualizacin en fresco es insuficiente para diferenciar los
microorganismos y es necesario aumentar el contraste respecto al medio en que se
encuentran. Para ello se utilizan las tinciones, que posibilitan la observacin de la
cantidad, tamao, morfologa y disposicin relativa de los microorganismos. Las
tinciones suponen la muerte de los microorganismos ya que todas tienen un paso
previo de fijacin al portaobjetos que se realiza con calor o con lavado en alcoholes. A
continuacin, se aplican sustancias coloreadas que tien la superficie de los
microorganismos.

Se denominan simples cuando utilizan un solo colorante, o bien diferenciales cuando
usan ms de uno y tien de forma especfica distintas estructuras bacterianas. Las
tinciones diferenciales son las ms utilizadas ya que ofrecen ms informacin
diagnstica. Algunas de las ms importantes son:

a) Tincin de gram

A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tincin de gram es la ms utilizada
en el diagnstico microbiolgico. De tal modo que la informacin que ofrece de la
composicin de la pared bacteriana es la base de todas las clasificaciones en este
reino. Se trata de una tincin diferencial que distingue entre bacterias con pared
gruesa (gram positivas) y bacterias con pared fina y membrana externa (gram
negativas).

Esta prueba utiliza violeta de genciana como colorante primario. Tras su aplicacin
todos los microorganismos se tien de violeta. Despus el lugol acta como mordiente,
acentuando la penetracin del colorante primario. El tercer paso consiste en la
aplicacin de una mezcla de alcohol y acetona que elimina el violeta excepto en las
bacterias con pared gruesa. Por ltimo el colorante secundario o de contraste, la
safranina, tie de rojo las bacterias decoloradas, es decir las de pared fina. En
resumen las bacterias gram positivas quedan teidas de violeta y las gram negativas
de rojo. Sin embargo, no todas las bacterias se tien mediante esta tcnica, ya que
hay algunas que son resistentes a ella, como las que se nombran a continuacin:-
Mycobacterias, ya que estn encapsuladas- Mycoplasmas, porque no tienen pared
- Formas L, por la prdida ocasional de la pared


b) Tincin de Ziehl-Neelsen

Tambin es una tincin diferencial. Se denomina tincin cido-alcohol resistente y es
especfica para unas bacterias con estructura de pared nica, las micobacterias. La
pared de las micobacterias no est basada en peptidoglicano como las bacterias gram
positivas y gram negativas, sino en cidos miclicos. Esta particularidad las hace
resistentes a la decoloracin con cido y alcohol que no se produce en casi ningn otro
tipo bacteriano.

La tincin de Ziehl-Neelsen utiliza tres reactivos. El colorante primario es la fucsina que
tie toda la preparacin de rojo brillante. Como mordiente se utiliza flameado de la
preparacin con el colorante. La solucin decolorante elimina el colorante primario
excepto el los bacilos cido alcohol resistentes. (BAAR). Por ltimo el azul de metileno
tie de azul el resto de la preparacin.

Esta tincin es til en la deteccin de bacterias del gnero Micobacterium en muestras
de esputo. La presencia de bacilos rojos sobre fondo azul constituye un diagnstico
casi definitivo de tuberculosis.



c) Tincin de auramina.

La auramina es un compuesto que se une especficamente a las bacterias cido-alcohol
resistentes y que emite luz verde brillante cuando es excitado con luz ultravioleta. Se
utiliza en el diagnstico de tuberculosis. En las muestras de esputo de pacientes con
esta enfermedad pueden aparecer bacilos que emiten luz verde manzana en el
microscopio de fluorescencia cuando se tien con auramina.

Esta tcnica es la ms utilizada el diagnstico de tuberculosis, pero tambin es til
para la deteccin de otros patgenos como los quistes de Cryptosporidium, protozoo
parsito intestinal causante de diarreas en individuos inmunocomprometidos.

CRECIMIENTOS EN CULTIVOS

Denominamos cultivo al proceso de laboratorio por el que se induce el crecimiento
cuantitativo de los agentes patgenos. Para conseguir su crecimiento de manera
artificial es necesario un aporte nutritivo suficiente as como las condiciones fsicas
adecuadas para su desarrollo. Para ello se utilizan los medios de cultivo.

Por lo general, todos los microorganismos necesitan unos elementos imprescindibles
que incluyen fuentes de energa, de carbono, algunas sales y elementos y por supuesto
agua. Algunos requieren adems otras sustancias adicionales como vitaminas o
aminocidos esenciales para cada especie.

Al igual que ocurre con su nutricin, no todos necesitan las mismas condiciones fsicas
para crecer, por lo que hay que individualizar la temperatura, la humerdad, el pH y
otras caractersticas si queremos que nuestros cultivos salgan adelante.

En los laboratorios de microbiologa podemos encontrar medios de cultivo lquidos y
slidos. En los medios lquidos las sustancias nutritivas se encuentran disueltas
mientras que los slidos llevan habitualmente una base de agar que es lquido a altas
temperaturas y solidifica al enfriarse. Este medio mantiene la humedad y conserva los
nutrientes necesarios, permitiendo que los organismos formen colonias sobre l.

Es por esto que los cultivos slidos tienen una serie de ventajas que se resumen en la
posibilidad de cuantificar el nmero de unidades formadoras de colonias (previa
dilucin) y en la capacidad para identificar preliminarmente un microorganismo
basndonos en las caractersticas de la colonia formada (tanto color como morfologa).

Hay muchos medios diferentes desarrollados para abarcar el mximo nmero posible
de agentes patgenos. Segn su capacidad para soportar el crecimiento microbiano se
clasifican en medios generales (para el crecimiento de la mayora), de enriquecimiento
(para bacterias y hongos sobretodo), selectivos (fomentan el crecimiento de
determinados agentes mientras que evitan la aparicin de otros) y diferenciales
(distinguen entre distintos agentes casi siempre en funcin de las colonias).

Algunos de los medios de cultivo ms utilizados en el laboratorio son:

a) El agar sangre y el agar chocolate

Son los medios ms frecuentemente empleados y entran dentro de la categora de
medios generales. Estn formados por nutrientes, agar y sangre de caballo o carnero
que constituye un suplemento. La nica diferencia entre ambos es que en el agar
chocolate la sangre est hemolizada (los nutrientes quedan a disposicin de los
microorganismos).

b) Agar de Sabouraud.

Es un medio de cultivo para hongos ms cido y que contiene ms hidratos de carbono
que los usados para las bacterias. Se siembra utilizando la tcnica de aislamiento
(levaduras) y se cultiva (28-34C) para observar las caractersticas de las colonias
(forma, color, bordes, brillo, textura). Los hongos filamentosos (o miceliales) crecen
ms lentamente 7-15 das

c) Otros medios

El agar McConkey es un medio selectivo para gram negativos. Tambin existen los
medios de manitol salado, caldo selenito, agar Campylosel (para Campylobacter) o el
medio CIN (para Yersinia).

El medio de Schaedler es un medio slido que se utiliza para el cultivo de
microorganismos anaerobios mientras que los medios de Mueller-Hinton con y sin
sangre son los estandarizados en la realizacin de pruebas de antibiograma.


EVIDENCIA INDIRECTA DEL CULTIVO

Siendo el ms evidente el efecto citoptico de algunos virus. Este efecto consiste en los
cambios bioqumicos y moleculares, morfolgicos y de viabilidad celular, causados
durante el ciclo de replicacin viral y visibles mediante la microscopa ptica.

La mayor parte de las visiones del efecto citoptico se han dado en clulas infectadas
en cultivo, en las que se puede llegar a observar una prdida de adherencia al
sustrato, una inhibicin por contacto, agregacin celular, redondeamiento celular,
formacin de sincitios, transformacin celular, etc. Aunque todos los virus lticos
producen este tipo de efectos, pueden observarse una gran cantidad de
manifestaciones distintas.

TCNICAS INMUNOLGICAS

Se pueden realizar llevando a cabo una deteccin de antgenos especficos del
patgeno o por la deteccin de secuencias especficas en los cidos nucleicos del
microorganismo. En cualquier caso requiere la utilizacin de tcnicas especficas como
la realizacin de sondas de ADN/ARN o la amplificacin gnica.

Adems de estas tcnicas diagnsticas, se pueden realizar una serie de pruebas de
sensibilidad a los antibiticos que sern francamente tiles a la hora de pautar un
tratamiento contra la afectacin.
Respecto a estas pruebas, debemos de tener en cuenta que las bacterias pueden
adquirir genes de resistencia o experimentar mutaciones en su ADN que les confieran
inmunidad frente a uno o ms antibiticos. Para determinar si una cepa microbiana es
sensible a los antibiticos se utilizan estas pruebas:

a) Tcnica de difusin en agar (mtodo de Kirby-Bauer).

Es una prueba estndar internacional. Se utiliza un inculo bacteriano que incluye un
nmero conocido de bacterias para sembrar un medio de cultivo (placa de Petri).
Posteriormente, se depositan unos discos de papel impregnados con una concentracin
determinada de antibitico.

Despus, la placa es incubada durante unas 24 horas para permitir el crecimiento
bacteriano confluente. Alrededor del disco donde se difundi el antibitico, la bacteria
no crecer (zona de no crecimiento), denominndose esta zona "halo de inhibicin".

A continuacin se mide el dimetro y se compara las medidas
estndar dadas para ese antibitico. El tamao del halo de inhibicin permite
determinar si el aislado clnico es sensible o resistente a un antibitico.

b) Determinacin del punto de corte (breakpoint )

Se determina si la especie bacteriana puede crecer o no en presencia de una
concentracin nica de antibitico considerada crtica para la multiplicacin de esa
especie bacteriana. Es la utilizada habitualmente en hospitales en los test
automatizados.

c) Determinacin de la Concentracin Mnima Inhibitoria (CIM)

Es la mnima concentracin de antibitico que impide el crecimiento bacteriano visible
a las 24 horas de cultivo.

Por ltimo, una pequea resea sobre el diagnstico de las infecciones causadas por
hongos o virus.

a) Diagnstico de las infecciones causadas por hongos:

Adems del cultivo en Agar de Sabouraud (ya comentado anteriormente) se puede
realizar una observacin al microscopio, que se da sobre todo cuando se realiza la
inspeccin de hongos filamentosos, vindose hifas (en las que miraremos el grosor,
tabiques, ngulo de las ramificaciones) y cuerpos fructferos (lugar de formacin de
esporas del hongo).

Tambin se pueden realizar test bioqumicos, utilizando sobretodo hidratos de carbono
o compuestos nitrogenados para identificar levaduras, test inmunolgicos, que
detectarn antgenos especficos de algunas especies de hongos, e identificaciones
genticas mediante reacciones en cadena de la polimerasa.

b) Diagnstico de las infecciones virales

Se realiza mediante la deteccin de antgenos en sangre y cultivos celulares, aunque
tambin por la serologa con deteccin de anticuerpos (teniendo en cuenta que una
persona infectada va a sintetizar anticuerpos frente al virus que le ataca).

En los posibles cultivos, observaremos los ya conocidos efectos citopticos y no
debemos olvidar las identificaciones genticas mediante reacciones en cadena de la
polimerasa y las identificaciones por microscopa electrnica, aunque sean raramente
usadas en la clnica.