Dr. Eugenio Prez Molphe Balch Unidad de Biotecnologa Vegetal Dpto. de Qumica C. C. Bsicas Universidad Autnoma de Aguascalientes eperezmb@correo.uaa.mx
INTRODUCCIN
Las plantas carnvoras representan uno de los ejemplos ms interesantes de la evolucin de los seres vivos. Si bien son vegetales, han desarrollado la capacidad de atraer, capturar y digerir animales pequeos, usualmente insectos. A partir de sus presas, las plantas carnvoras pueden absorber nutrientes, por ejemplo Nitrgeno y Fsforo, que son escasos en los hbitats en los que estas especies han evolucionado. En todos los casos, los nutrientes tomados de sus presas son slo un complemento de los que la planta toma del suelo, o bien produce ella misma a travs de la fotosntesis. Uno de los primeros cientficos que se apasion por el estudio de estas plantas fue el propio Charles Darwin, quien public el libro Insectivorous Plants en julio de 1875.
Las plantas carnvoras son raras, ya que de los varios cientos de miles de especies vegetales que se conocen, slo unas 650 han desarrollado esta adaptacin. Estas especies pertenecen a 15-18 gneros, incluidos en 8-9 familias vegetales diferentes. Los mecanismos mediante los cuales estas plantas capturan a sus presas se dividen en activos y pasivos. Los primeros son los ms raros, e implican el desarrollo de trampas con capacidad de movimiento que atrapan a la presa al ser activadas por la presencia de la misma. Este mecanismo activo lo tienen las plantas de los gneros Aldrovanda y Dionaea. La segunda es la conocida como Atrapamoscas o Venus atrapamoscas, y es quiz la planta carnvora ms conocida. El segundo tipo de mecanismo es el pasivo. En este caso no hay movimiento y las presas se ven atrapadas por trampas pegajosas, por trampas llenas de lquido o con estructuras que les permiten ingresar, ms no salir de la planta. Las plantas carnvoras de los gneros Drosera, Pinguicola, Byblis y Drosophyllum producen un muclago pegajoso sobre estructuras similares a tentculos, o directamente sobre las hojas. Las presas que se posas sobre la planta quedan adheridas a este muclago sin posibilidades de escapar. Por su parte, las plantas de los gneros Darlingtonia, Nephentes y Sarracenia, desarrollan hojas modificadas en forma de recipientes cilndricos cuyo fondo tiene un lquido que contiene las enzimas digestivas. Las presas que entran a la trampa y caen en el lquido ya no tienen la posibilidad de salir. Finalmente, en el gnero Genlisea, las trampas poseen estructuras con pelos rgidos orientados de forma tal que permiten el ingreso de la presa, ms no su salida (Pietropalo y Pietropalo, 1986).
Adems de su importancia ecolgica, y del inters cientfico que despiertan, las plantas carnvoras son muy apreciadas por los coleccionistas, lo que causa que sean saqueadas de su ambiente natural. Esto, junto con la deforestacin, cambios en el uso del suelo y cambio climtico, han colocado en situacin de amenaza a muchas de estas especies. De hecho, ms de la mitad de las especies de plantas carnvoras estn catalogadas como especies amenazadas por la Lista Roja de la UICN (Jennings y Rohr, 2010).
Por otro lado, recientemente se ha descubierto que la mayora de las especies de plantas carnvoras producen compuestos qumicos, como naftoquinonas, flavonoides, antocianinas y
2 compuestos fenlicos, que tienen un gran inters desde el punto de vista mdico. Siendo esta una razn ms para que se tomen las medidas necesarias para asegurar la conservacin de estas especies (Egan y van der Kooy, 2013).
La propagacin de la gran mayora de las especies de plantas carnvoras suele ser complicada y poco eficiente. Esto hace que estas plantas sean en general difciles de obtener por los aficionados o coleccionistas. Sin embargo, las tcnicas de propagacin masiva de plantas a travs de mtodos biotecnolgicos, que se han desarrollado en tiempos recientes, han resultado muy eficientes para este tipo de plantas. Gracias a estas tcnicas, la disponibilidad de muchas de las especies de plantas carnvoras se est incrementando de manera notable. La propagacin de plantas por mtodos biotecnolgicos, conocida tambin como propagacin in vitro o micropropagacin, consiste en la produccin masiva de plantas utilizando sistemas de cultivo de tejidos en medios artificiales, y en condiciones controladas. Las etapas que se siguen son: a) Establecimiento de cultivos in vitro. Para esto es indispensable la desinfeccin de tejidos viables que luego son inoculados en los medios artificiales; b) Multiplicacin del tejido: Consiste en la produccin de nuevos brotes en los cultivos, normalmente para esto se utilizan reguladores del crecimiento (fitohormonas) del grupo de las citocininas; c) Desarrollo y enraizamiento de los brotes producidos. Esta etapa permite que los brotes adquieran vigor y formen un sistema radical para que sean capaces de sobrevivir a la ltima etapa del proceso, que es; d) Adaptacin y transferencia a suelo. En esta etapa las plantas generadas in vitro son transferidas a condiciones naturales y se desarrollan ya como plantas normales (Prez-Molphe-Balch et al. 1999).
Egan, P.A., van der Kooy, F. 2013. Phytochemistry of the Carnivorous Sundew Genus Drosera (Droseraceae)- Future Perspectives and Ethnopharmacological Relevance. Chemistry & Biodiversity 10:1774-1790. Jennings, D.E., Rohr, J.R. 2010. A review of the conservation threats to carnivorous plants. Biological Conservation 144: 1356-1363. Prez-Molphe-Balch, E., Ramrez-Malagn, R., Nuez- Palenius, H.G., Ochoa-Alejo, N. 1999. Introduccin al Cultivo de Tejidos Vegetales. Universidad Autnoma de Aguascalientes. ISBN 968-6259-62-7. Pietropalo, J., Pietropalo, P. 1986. Carnivorous Plants of the World. Timber Press, Portland. 206 pp.
Objetivos del Taller
El alumno conocer algunos aspectos importantes de la biologa de las plantas carnvoras. Entender tambin el papel de la Biotecnologa Vegetal como herramienta para la conservacin y uso racional de estas plantas. Practicar la propagacin masiva de algunas especies a travs de esta disciplina.
Programa del Taller
FECHA HORARIO ACTIVIDAD LUGAR 0 8 / 0 9 / 1 4
15:00-17:00 Introduccin al tema (Sesin Terica) Aula por designar 0 9 / 0 9 / 1 4
15:00-18:00 Prctica 1. Multiplicacin in vitro de plantas carnvoras. Unidad de Biotecnologa Vegetal (Edificio 207) 1 0 / 0 9 / 1 4
15:00-18:00 Prctica 2. Desarrollo y enraizamiento y de brotes de plantas carnvoras generados in vitro. Unidad de Biotecnologa Vegetal (Edificio 207) 1 1 / 0 9 / 1 4
15:00-18:00 Prctica 3. Transferencia a suelo de plantas carnvoras propagadas in vitro. Unidad de Biotecnologa Vegetal (Edificio 207)
Prcticas
Material Vegetal a emplearse en el Taller [Cultivos in vitro de]: Byblis liniflora (Norte de Australia y Nueva Guinea) Dionaea muscipula (Carolina, E.U.A.)
PRCTICA 1. Multiplicacin in vitro de plantas carnvoras.
Medio de Cultivo: Medio de Murashige y Skoog al 50%, pH 5.7, con 1.5 % de sacarosa, 3 g L -1 de Phytagel y 2 mg L -1 de 2iP. [Tres frascos por persona]
Procedimiento: Todo el trabajo se realiza en la campana de flujo laminar con instrumentos estriles (pinzas y bistur). Atender las indicaciones del instructor.
1. Tomar una masa de plantas de la especie seleccionada y colocarla en una caja de Petri estril. 2. Separar cuidadosamente la masa en porciones ms pequeas (aprox. 1 cm de dimetro). Hacer esto con ayuda de pinzas y bistur estriles. 3. Inocular una porcin de tejido por recipiente de cultivo. 4. Sellar y marcar los frascos de cultivo. Colocar los recipientes en el cuarto de incubacin. 5. A los 5-6 das revisar los recipientes y desechar los contaminados. 6. A los 35-40 das observar los resultados definitivos.
Resultados esperados: Deber observarse la multiplicacin de la planta original hasta obtener masas de plantas similares a las usadas para montar esta prctica, esto por efecto de la citocinina (2iP) agregada al medio de cultivo.
PRCTICA 2. Desarrollo y Enraizamiento de brotes de plantas carnvoras generados in vitro.
Medio de Cultivo: Medio de Murashige y Skoog al 50%, pH 5.7, con 1.5% de sacarosa, 3 g L-1 de Phytagel como gelificante. [Tres frascos por persona]
Procedimiento: Todo el trabajo se realiza en la campana de flujo laminar con instrumentos estriles. Atender las indicaciones del instructor.
1. Tomar una masa de plantas de la especie seleccionada y colocarla en una caja de Petri estril. 2. Separar cuidadosamente la masa para obtener plantas individuales. Hacer esto con ayuda de pinzas y bistur estriles, cuidando no daar los tejidos. 3. Inocular dos plantas por recipiente de cultivo. Presionar un poco la base de la planta contra el medio de cultivo para que se introduzca en el mismo y la planta se mantenga erguida. 4. Sellar y marcar los frascos de cultivo. Colocar los recipientes en el cuarto de incubacin. 5. A los 5-6 das revisar los recipientes y desechar los contaminados. 6. A los 25-35 das observar los resultados definitivos.
Resultados esperados: Deber observarse la formacin de races en cada una de las plantas inoculadas, esto por efecto de la ausencia de citocinina en el medio. Al mismo tiempo la planta crecer y sus hojas se diferenciarn. Una vez formado un sistema radical vigoroso, las plantas estn listas para su adaptacin y transferencia a suelo.
Prctica 3. Transferencia a suelo de plantas carnvoras propagadas in vitro.
Materiales: Recipientes de cultivo (macetas o terrarios, consultar al instructor acerca de los tipos de recipientes y sistemas de cultivo apropiados para este tipo de plantas). Los recipientes deben tener uno o ms orificios para el drenaje en la parte inferior.
4
Substrato para la siembra: Se recomienda una mezcla de turba (peatmoss) con arena (1:1).
Plantas carnvoras producidas in vitro, ya enraizadas y preadaptadas al medio externo*.
* 1 semana antes de la prctica se elimina el sello del recipiente de cultivo y se afloja la tapa. Esto permitir que la humedad relativa dentro y fuera del recipiente se equilibre de manera paulatina, dndole a la planta oportunidad de adaptarse a esta diferencia.
Procedimiento:
1. Sacar cuidadosamente las plantas de los recipientes de cultivo. Lavarlas muy suavemente con agua destilada para eliminar todo resto de medio de cultivo. En el caso de las especies que producen compuestos pegajosos, no tocar ni humedecer estas reas. 2. Sembrar las plantas en las macetas o recipientes con el substrato previamente hidratado. 3. Cubrir las plantas con una bolsa de plstico transparente u otro tipo de estructura transparente que sirva para retener la humedad. Paulatinamente hay que hacer orificios o abrir parcialmente esta cubierta. 4. Colocar el recipiente con las plantas en un sitio bien iluminado, pero sin que reciban sol directo.
Resultados esperados: Cuando las plantas muestren seales de haber reiniciado su crecimiento ya en suelo (cuando se observe la aparicin de nuevas hojas), puede considerarse que han sobrevivido al proceso de adaptacin. En este momento pueden ser transferidas a un sitio con mayor iluminacin, incluso algunas horas de sol directo, con el fin de que alcancen su desarrollo ptimo y adquieran todo su colorido.
Recomendaciones:
Riego: El sistema de riego ms adecuado para estas plantas es el que reciben desde abajo. Para esto, los recipientes o macetas debern colocarse en un recipiente de un dimetro un poco mayor, el cual debe contener unos centmetros de agua. El objetivo es que el agua suba por capilaridad a travs de los orificios de drenaje y de esta forma se mantenga el substrato siempre hmedo. El riego debe hacerse siempre con agua potable de garrafn, nunca con agua de la llave. Esto debido a que todas las plantas carnvoras requieren de un medio ligeramente cido para su desarrollo ptimo, y el agua corriente lo har alcalino.
Fertilizacin: Las plantas carnvoras han evolucionado en suelos muy pobres en nutrientes. Por este motivo son muy sensibles a la fertilizacin. Hay que evitarla o hacerla con un fertilizante foliar muy diluido. No es necesario alimentarlas con insectos. Estas plantas cuentan con mecanismos muy eficientes para atraerlos por s mismas.
Perodos de reposo: Muchas de las especies de plantas carnvoras dejan de crecer en ciertas pocas del ao, entrando en un perodo de reposo. En algunas incluso muere o se marchita la parte area. Sin embargo, pasada la poca de reposo vuelven a brotar. Por lo anterior es recomendable asegurarse de que las plantas estn realmente muertas, y no en reposo, antes de eliminar algn cultivo.