DETERMINACIN DE CIDO ASCRBICO EN UN JUGO

COMERCIAL POR ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA

Andrs Felipe chamorro cd. 0637962, Jefferson rubio cd. 0638954. Lizeth Fernanda
Holgun. cd. 0626607

DEPARTAMENTO DE QUMICA, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y
EXACTAS, UNIVERSIDAD DEL VALLE,
Campus Melndez, Santiago de Cali, Valle del Cauca.
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Resumen
Se determino la concentracin de cido ascrbico en una muestra de jugo comercial, por
medio de espectroscopia ultravioleta, para ello se emplearon dos mtodos de calibracin;
una curva de calibracin regular y una curva de adicin estndar, utilizando una longitud de
onda mxima de (242.4nm) y (239.8nm) respectivamente, para realizar las correspondientes
medidas de absorbancia. La concentracin obtenida de la muestra es [ ]
y [ ] correspondientemente a cada curva.
_________________________________________________________________________________

DATOS, CLCULOS Y RESULTADOS


Grfica 1. Espectro de absorcin de cido ascrbico

Curva de calibracin


Tabla1. Datos de absorbancia de la curva
de calibracin
Concentracin
(ppm)
Absorbancia (uA)
0.001
5 0.216
10 0.510
15 0.736
20 1.059
25 1.289
muestra 1.269





Concentracin de cido ascrbico en 25 ml

[ ]
[ ] [ ]
[ ]


[ ] [ ]


Concentracin de cido ascrbico en la
muestra.

[ ] [ ]
[ ]
[ ]


A = (0,053 0.002)L/mg (Ac.A) - (0,046 0.027)
R =0.999
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
5 10 15 20 25
A
b
s
o
r
v
a
n
c
i
a

(
u
A
)

Concentracin (ppm)
Grfica 2.curva de calibracin de cido ascrbico
[ ] [ ]

Curva de adicin estndar

Tabla 2. Datos de absorbancia de la curva
de adicin estndar

Concentracin
(ppm)
Absorbancia (uA)
0.001
0 1.246
5.2 1.487
10.2 1.744
15.2 2.022
20.2 2.205




[ ]
[ ]
[ ]


[ ]

Concentracin de cido ascrbico en la
muestra.

[ ][ ]
[ ]
[ ]


[ ] [ ]

Prueba t

Para determinar si hay efectos de matriz en
los mtodos de calibracin, se realiza una
prueba t. Donde:

(Ho) = No hay efectos de matriz

Realizando los clculos correspondientes se
encuentra:

tcal =2.3 tcrit = 2.45 (f=6 , 95%)

tcal < tcrit

(Ho) = la hiptesis no se rechaza, y no hay
efecto de matriz.


ANLISIS Y DISCUSIN DE LOS
RESULTADOS

La espectroscopia de uv-vis es utilizada
tanto en el anlisis cuantitativo como
cualitativo de especies orgnicas e
inorgnicas. A pesar de su escasa
informacin estructural, es aplicada para la
determinacin de la estructura e
identificacin de sustancias por medio de
mecanismos de reacciones qumicas,
control de pureza, concentracin y la
medicin exacta de la constante de
disociacin de cidos y bases.
(1)


La regin espectral que comprende el uv
cercano, se encuentra entre longitudes de
onda de 185-400 nm.

Cuando una molcula orgnica absorbe
radiacin, ocurren unas transiciones
electrnicas ( *, n , n *,
) entre sus orbitales. Las transiciones se
deben a los electrones implicados en
enlaces de tipo o y en pares no
enlazantes n de tomos de H, C, N, O.
(2)


Para absorber radiacin en el ultravioleta, la
molcula (analito) tiene que tener un sistema
cromofrico, que est compuesto por partes
estructurales de la molcula responsable de
una determinada absorcin de radiacin
electromagntica, como los enlaces (C=C,
C=N, N=N).
(3)


Cuando se determina la concentracin de
acido ascrbico en un jugo comercial, por
medio de espectroscopia de absorcin
molecular uv, se debe tener una inexorable
preparacin de la muestra; como la
eliminacin de compuestos interferentes
(CO
2
) y la adicin de HCl.

La industria utiliza CO
2
como saborizante
en los jugos comerciales y gaseosas. El
CO
2
debe ser eliminado de la muestra, por
que posee enlaces dobles (O=C=O)
A =(0,048 0.002)L/mg (Ac. A) + (1,2460.020)
R = 0.999
1.2
1.4
1.6
1.8
2
2.2
0 5 10 15 20
A
b
s
o
r
v
a
n
c
i
a

(
u
A
)

Concentracin (ppm)
Grfica 3. curva de adicin estandar de cido
ascrbico
carbono-oxigeno, comportndose como un
sistema cromofrico. Por tanto los
electrones no enlazantes del oxigeno
cuando reciben radiacin en el rango
ultravioleta, produce una transicin de n
. Interfiriendo en la seal de la
absorbancia del acido ascrbico, y por lo
general se provoca un solapamiento de las
bandas de absorcin.
(2)


La adicin de HCl a las soluciones
utilizadas para los mtodos de calibracin,
se realiza con el fin de evitar la
descomposicin del analito (Ac. A). como
el acido ascrbico es un acido dbil se
disocia parcialmente, por lo tanto es
necesario un exceso de concentracin de
iones H
+
, para disminuir su desprotonacin
(figura 1) y reaccin de la muestra, si la
solucin se encuentra alcalina. El acido
ascrbico reacciona y se obtendr una
prdida de analito (Ac.A), lo que produce
una disminucin en la intensidad de la
seal error en las medidas de absorcin,
Por lo tanto la adicin de HCl garantiza un
mximo de absorcin a una misma longitud
de onda para todas las soluciones.


Figura 1. Desprotonacin del acido ascrbico

Para cuantificar el acido ascrbico presente
en la muestra, se utiliz un
espectrofotmetro de doble haz, que utiliza
una fuente de descarga de deuterio y una
fuente de wolframio. La fuente emite una
radiacin continua, que pasa por un
monocromador, el cual selecciona una
longitud de onda especifica (la energa
proveniente de la fuente debe realizar
primero el paso por el monocromador antes
de atravesar la muestra para que no se
produzca una fotodescomposicin de la
misma).

Las celdas que contiene la muestra y el
disolvente, debe estar compuesta de un
material que deje pasar la radiacin en la
regin ultravioleta. El material utilizado para
las celdas es cuarzo, ya que no absorbe en
la regin ultravioleta.
(1)


El haz de radiacin monocromtica se divide
en dos componentes con potencias
radiantes similares. Un haz pasa a travs de
la muestra y el otro haz de radiacin pasa a
travs del blanco. Dos espejos giratorios,
los cuales se encuentran sincronizados con
el sistema, permiten el paso de la radiacin
hacia el detector, el cual compara
exactamente para la misma longitud de onda
las intensidades transmitidas por los dos
haces
(2)
.

El cido ascrbico (figura 2) al recibir
radiacin ultravioleta, produce transiciones
electrnicas de n debido a que
presenta enlace doble (C=O). Esta
transicin es poco intensa, y es el resultado
del salto de un electrn de un orbital
molecular no enlazante del oxigeno a un
orbital molecular antienlazante . Tambin
presenta transiciones de , para que
suceda esta transicin, se requiere una
cantidad mayor de energa o menor longitud
de onda.
(1)







Figura 2. Estructura del cido ascrbico

Para el doble enlace (C=C), se produce
transiciones de esto se debe a la
excitacin de los electrones que se
encuentran en el orbital molecular del
doble enlace, produciendo un salto al orbital
molecular . La banda de baja intensidad
(transicin de n ) no se puede observar
debido a que es cubierta por el pico de
mayor absorcin (transicin de )
Normalmente una transicin de este tipo
proporciona una seal de longitud de onda
en el rango de 200-700nm.
(1)


La longitud de onda de mxima absorcin
del cido ascrbico (terico) puede variar
entre 243-267 nm. En la prctica se
encontr un rango de absorcin entre 220-
300 nm (grafico 1) con un mximo de
absorcin en 242,4 nm en la curva de
calibracin regular y 239.8 nm en la curva de
adicin estndar.
Como se puede observar en su estructura
este presenta un sistema conjugado, por lo
cual la nube electrnica se distribuye por
lo menos en cuatro centros atmicos (figura
3) Ocasionando un desplazamiento
batocromicro.
(4)



Figura 3. cido ascrbico

En una transicin electrnica de tipo
, el
max
se encuentra en 217 nm. Pero
para un sistemas conjugado como el Acido
Ascrbico, se da un desplazamiento de la
longitud de onda de absorcin entre 15 y 45
nm hacia el rojo. Por lo tanto el mximo de
absorcin de un sistema conjugado de
acuerdo al desplazamiento producido por los
enlaces conjugados del sistema est en el
rango de 232 262 nm.
(4)


Debido a los estados electrnicos
vibracionales y rotacionales que presentan
el cido ascrbico, produce mltiples
transiciones vibracionales y rotacionales
ocasionando que las bandas discretas se
derrumben por las cercanas de las seales
que producen la transiciones ya
mencionadas, Formando un espectro de
banda contina, Como se observa en la
grfica1.
(4)


Para hallar la concentracin de cido
ascrbico en una muestra de jugo comercial,
se realizo una curva de calibracin la cual se
obtuvo una concentracin de (1240.50
33.48) ppm y se realizo una curva de adicin
estndar en la cual se obtuvo una
concentracin de (1298.00 0.027) ppm.

La curva de calibracin se realiz con el fin
de determinar la cantidad de analito (Ac.A)
presente en una muestra. Los patrones
(concentracin conocida) de calibracin se
miden bajo las mismas condiciones que se
utiliza en la solucin que contienen la
muestra (concentracin desconocida) donde
por interpolacin se puede obtener la
concentracin del analito.
(5)


Si y solo si se tiene indicios de efecto de
matriz, se debe realizar una curva de adicin
estndar, Porque es un mtodo de
calibracin menos preciso debido que es un
mtodo de extrapolacin y se necesita
mayor cantidad de muestra.
(5)


Para comprobar que no hay efecto de matriz
se realiz una prueba t, la cual demostr
que la absorcin de la muestra no est
interferida por la matriz. Esto seala que la
concentracin encontrada por el mtodo de
interpolacin es ms precisa.

La concentracin de la muestra (1240.50
33.48) ppm, es muy grande comparada con
la reportada en la etiqueta del jugo comercial
(240 ppm), este exceso de muestra no
puede ser explicado por los analista, por que
el mtodo de preparacin de los patrones
se realizo correctamente y es respaldado
por los mtodos de calibracin, donde se
observa una buena linealidad de las curvas
y la prueba t realizada demuestra que no
hay efecto de matriz en la absorbancia.

Solo hay un indicio de error en el
procedimiento debido a los analistas, al
realizar un espectro con la solucin que
tiene una concentracin intermedia de acido
ascrbico de la curva de calibracin, y otro
espectro con la solucin intermedia de acido
ascrbico para la curva de adicin estndar,
presentado dos longitudes de onda de
mxima absorcin. pero solo se debe
realizar el primer espectro y con esa longitud
de onda donde se encontr la mxima
absorbancia se realizan todas la mediciones
de absorbancia.

El primer espectro presento un mximo de
absorcin de 242.4 nm y el segundo mtodo
239.8 nm. Pero como se observa los valores
de longitud de onda donde se presento la
mxima absorcin no difieren en ms de 3
unidades de nm, y no pone en peligro el
anlisis de la muestra.

Por lo tanto se puede presentar un engao
de la concentracin de cido ascrbico en el
jugo comercial por parte de los fabricantes
pero esto no se puede afirmar si no se hace
una reproducibilidad del anlisis con la
misma muestra utilizada en la prctica.
Un aumento en la concentracin de la
muestra da una interpretacin de la curva
de calibracin y la curva de adicin
estndar, ya que no se obtuvo la seal de
absorcin en el rango esperado de a cuerdo
a los clculos realizados antes de la
prctica, para poder realizar una
comparacin ideal y especifica entre las dos
curvas. Si no que se produjo un rango de
absorcin encima del otro, por que la curva
de adicin estndar necesita mayor cantidad
de muestra y la misma aumenta la
concentracin del analito y por lo tanto la
seal de la absorbancia.

PREGUNTAS

1. Describa de manera concreta y suficiente
los componentes del espectrofotmetro.

Un espectrofotmetro de uv-vis est
constituido de:
1. Fuente de radiacin
2. Selector de longitudes de onda.
3. Fotodetector.

Fuente de radiacin
La fuente de radiacin consta de dos
condiciones bsicas, la primera es
proporcionar suficiente energa radiante en
un rango de longitud de onda en la que se
medir la absorcin y segundo debe
mantener una intensidad constante.
(6)


La fuente que usa el espectrofotmetro
(Uv-1700 Pharmaspec) de absorcin en la
regin uv-vis, es una Lmpara de
wolframio de 20W y lmpara de deuterio
con cambio automtico.
La lmpara de descarga de deuterio
trabaja a baja presin (aproximadas de 0,2
a 0,5 torr) y bajo voltaje (aproximado a de
40 V).
(6)(8)

La lmpara de descarga de deuterio
consiste de dos electrodos. Un nodo que
generalmente es una placa de molibdeno,
y un ctodo, que es un filamento de xidos
metlicos que emite electrones. Los
electrodos se encuentran Inmersos en una
atmsfera de D
2
que se encuentra cubierta
en una pantalla de cuarzo, ya que el vidrio
presenta absorcin en longitudes de onda
menores a 320 nm.
(1)


Al hacer pasar corriente entre los
electrodos, se produce una descarga, que
crea un arco intenso en el orificio situado
cerca al nodo liberando electrones. Las
molculas de D
2
al ser bombardeadas por
los electrones, se disocian con emisin de
fotones.
(1)

Donde

es la molcula de deuterio
excitada, que produce fotones con
longitudes de onda que emiten
continuamente en un rango espectral de
160 a 500 nm.
(1)

La lmpara de filamento de wolframio es
bastante eficaz, dependiendo de la
temperatura, por que la distribucin de la
energa de esta fuente se aproxima a la del
cuerpo negro, la cual es til para la regin
de longitud de onda comprendida entre
350 y 2.500 nm.
La lmpara de wolframio contiene una
pequea cantidad de yodo en la envoltura
de cuarzo que rodea al filamento de
wolframio. El uso del cuarzo es necesario
debido a la alta temperatura de trabajo
(3500 k), el tiempo de vida media de la
lmpara de wolframio es el doble
comparada con una lmpara normal, esto
se debe a la reaccin del yodo con el
wolframio gaseoso que se forma por
sublimacin limitando la vida del
Filamento.
(1)



Selector de longitudes de onda

Para seleccionar la longitud de onda
deseada se usan filtros o monocromadores
como selectores de longitudes de onda.
(6)


Un monocromador consiste generalmente
de una rendija de entrada, un colimador de
la radiacin procedente de la rendija de
entrada, una red o prisma para dispersar la
radiacin, un colimador para enviar la
radiacin hacia la rendija de salida y una
rendija de salida.
(6)


La funcin principal del monocromador es
proporcionar un haz de energa radiante
con una longitud de onda nominal y una
anchura de banda dada.
(6)

El monocromador debe tener un diseo
simple, buena resolucin, gama espectral,
pureza de radiacin de salida y dispersin.
Las rendijas tanto de entrada como de
salida son orificios por el cual pasa la
radiacin. Los colimadores son espejos
cncavos que reflejan la radiacin hacia la
red de dispersin y el otro hacia la rendija
de salida.
(6)



Una red de dispersin consiste en un gran
nmero de estras paralelas y
equidistantes que se marcan con una
herramienta rayadora de diamante sobre
una superficie perfectamente pulida.
(6)


Las estras deben de tener la misma forma
y dimensin desde la primera hasta la
ltima. Todas las rejillas son duplicados de
una rejilla maestra que por lo general llega
a tener hasta 3600 estras/mm o ms para
las regiones del uv-vis.
(6)


La radiacin que proviene de la muestra
entra por una rendija al monocromador y
es reflejada por un espejo cncavo hacia la
red de dispersin. Cuando la radiacin
incide sobre la red es difractada en varias
longitudes de onda, que se dirigen a un
segundo espejo que est ubicado de tal
forma que refleje la longitud de onda
seleccionada sobre la rendija de salida.
(6)



Detector


El detector es un dispositivo que convierte
la radiacin electromagntica en un flujo de
electrones y posteriormente en una
corriente o voltaje. El detector ms
utilizado es el tubo fotomultiplicador.

Es un dispositivo que combina un ctodo
fotoemisivo, dinodos (recubiertos de una
sustancia que expulsa electrones como
resultado del impacto de un electrn de
alta energa) y un nodo
. (6)

La radiacin que llega al detector viene en
fotones los cuales inciden sobre el ctodo
que desprende electrones. Estos
electrones que se desprenden del ctodo
se dirigen hacia el primer dinodo que lo
impactan desprendiendo una relacin de
aproximadamente 4 veces ms electrones
que los que incidieron sobre el dinodo. El
dinodo tiene un potencial 90 V ms positivo
que el ctodo para asegurar que los
electrones se dirijan hacia l.
. (6)



Los electrones que se desprenden del
primer dinodo se dirigen hacia el segundo
dinodo que tiene la diferencia de potencial
90 V ms positiva que el dinodo anterior y
desprendiendo mas electrones y as
sucesivamente hasta el noveno dinodo y
luego al nodo llega una cascada de
electrones y esta es la seal que se mide.
.
(6)


El espectrofotmetro (Uv-1700
Pharmaspec) utiliza un detector de
fotodiodo de silicio, el cual est situado en
el plano focal del monocromador, y el
espectro se puede obtener mediante un
barrido electrnico, tomado en simultaneo
todos los datos puntuales y necesarios
para definir el espectro.
(1)(8)


El detector es una serie de diodos de
silicio, como el sistema no contiene partes
en movimiento, la reproducibilidad de la
longitud de onda es alta.
(1)


La excitacin trmica de un electrn origina
una regin cargada positivamente, llamada
hueco, que, como el electrn, es tambin
mvil. El mecanismo del movimiento del
hueco es a saltos, y se produce al mismo
tiempo que un electrn de un tomo de
silicio vecino salta a una regin deficiente
de electrones (el hueco), creando as otro
hueco positivo a su paso. La conduccin
en un semiconductor implica el movimiento
de electrones y huecos en direcciones
opuestas.
(7)



Un diodo de silicio polarizado de forma
inversa puede servir como detector de
radiacin, porque los fotones de la regin
ultravioleta y visible tienen suficiente
energa para crear electrones y huecos
adicionales cuando incides sobre la capa
vaca de la unin pn. Un detector de diodo
de silicio es ms sensible que un simple
fototubo de vaco, pero menos sensible
que un fotomultiplicador.
(7)

CONCLUSIONES

La curva de adicin de estndar se realiza
con el fin de observar si hay efectos de
matriz en la absorbancia de la muestra.

La curva de calibracin es un mtodo mucho
ms preciso que el de adicin de estndar s
se ha comprobado que no hay efecto de
matriz por medio de una prueba t.

Los sistemas cromofrico son los grupos
responsable de la absorcin de la radiacin
electromagntica en la regin ultravioleta.

Un sistema conjugado al absorber radiacin
electromagntica, presenta un
desplazamiento batocromico.

BIBLIOGRAFA


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instrumental. 4ed. Madrid: McGraw Hill,
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