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Caso prctico N 3 Volver al Blog: http://tideca-bioquimica.blogspot.com/

Sensibilidad de las tcnicas analticas

Generalidades

La sensibilidad de un mtodo analtico se ha definido como la capacidad, para una
metodologa dada, de discernir o diferenciar pequeas variaciones en la concentracin de un
analito.

En el caso de ensayos analticos cuantitativos para reacciones qumicas o enzimticas
colorimtricas, donde se han utilizado uno (ms la concentracin cero como primer punto) o
ms estndares o calibradores de concentraciones conocidas, la respuesta de la DO
(Densidad ptica) o Absorbancia para una longitud de onda determinada, deber tener un
comportamiento lineal en el rango de las concentraciones de inters, es decir que en dicho
rango deber cumplirse la Ley de Lambert y Beer.
1 y 2


La medida de la sensibilidad del ensayo ser la pendiente de la recta en la representacin
grfica D-R (Dosis-Respuesta), se denominar sensibilidad de la calibracin y deber
mantenerse constante en todo el intervalo de la linealidad.

El tema de ensayos analticos cualitativos y la sensibilidad los mismos, basados en un punto
de corte o cut-off ser tratado en un caso prctico aparte.

De lo citado anteriormente podemos inferir que la pendiente de la representacin grfica ser
la ptima cuando ella tiende a 1. Si obtenemos representaciones grficas, en las mismas
unidades de abscisas y ordenadas, las rectas obtenidas con bajas pendientes generan
grandes variaciones de concentracin con mnimas variaciones de respuesta (Ej. DO), esto
llevar a una disminucin de la capacidad para diferenciar pequeas variaciones de la
concentracin.

En el caso de obtener una recta en la representacin D-R con pendiente muy alta, tendremos
una muy alta sensibilidad, podremos discriminar mnimas variaciones de concentraciones con
grandes variaciones de respuesta pero, posiblemente esas respuestas pueden limitarnos su
utilidad para ciertos analitos, especialmente cuando se desea cubrir un amplio rango de
inters clnico. En ese caso tendremos problemas en la calidad del resultado de
concentraciones debido a la estadstica de las mediciones de las respuestas en los niveles de
dosis bajas y altas, por ejemplo, una mala relacin de seal/ruido a dosis bajas o respuestas
que no se ajusten a la Ley de Lambert y Beer a dosis altas.

Las situaciones anteriores pueden deberse a la eleccin de filtros de longitudes de onda
inadecuados pero en algunas tcnicas inmunoanalticas, se suele efectuar la medicin con
diferentes filtros para abarcar un mayor rango de concentraciones.

Adems, se ha definido la sensibilidad analtica como la relacin entre la pendiente
(sensibilidad de la calibracin) y la desviacin estndar de las respuestas de cada una de las
concentraciones de los estndares.

Este clculo requiere que se realicen por lo menos 2 replicados de cada punto y a diferencia
de la sensibilidad de la calibracin, sta no es constante a lo largo de toda la recta ya que las
mayores imprecisiones de las respuestas las encontraremos en los extremos, a bajas y a altas
respuestas siendo la zona ms sensible analticamente hablando, la zona media de la recta.

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Por ello, para 2 tcnicas o 2 ensayos de la misma tcnica de igual sensibilidad de calibracin,
la que tiene mayor sensibilidad analtica ser la ms precisa. Podemos aumentar la precisin
aumentando el nmero de replicados de cada punto ya que, cuanto mayor sea el nmero de
replicados, menor ser el error estndar y obtendremos una mayor precisin en cada punto de
la recta.

Todo lo explicado en los prrafos anteriores son definiciones tericas que se analizaron en
condiciones ideales y es muy difcil reproducir en la prctica, tanto intra o inter-laboratorio, sin
tener en cuenta todos los factores que afectan el alejamiento de la condicin ideal.

A diferencia de los ensayos como glucosa, urea, enzimas, etc., los ensayos de tcnicas
inmunoanalticas en cuyas respuestas se mide color (EIA o ELISA), la mediciones del
instrumento en DO, debe cumplir con la Ley de Lambert y Beer, o sea una respuesta lineal del
color para una longitud de onda determinada pero, es muy importante tener presente que las
representaciones grficas de las curvan D-R de estas tcnicas siguen sus funciones propias y
caractersticas: una curva de decaimiento hiperblico* para los SIC (Sistema inmunoanaltico
competitivo) y una curva de incremento sigmoidal** para los SIM (Sistemas inmunomtricos o
inmunoanalticos no competitivos) aunque, en algunos ensayos la curva aparenta tener un
incremento hiperblico.

* En otro caso prctico se explicar cuales son las condiciones para que la curva de
decaimiento hiperblico pueda ser definida como una hiprbola perfecta.
** Tambin explicaremos el porqu en las representaciones grficas de las curvas D-R en
determinados ensayos SIM, podemos visualizar una funcin similar a un incremento
hiperblico partiendo del cero de concentracin hasta el estndar de mayor concentracin,
mientras que la verdadera funcin del SIM es una sigmoidea.

Bibliografa:
1. Captulo 13 - Principios de Anlisis Instrumental - Skoog 5 Edicin
2. Artculo - Dra. Silvia Porro Ctedra de Qumica II - UNQ

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