ASESOR Prof. Lzaro de Jess Morejn Aldama Managua, Nicaragua Marzo, 2013 UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA Facultad de Ciencia Animal Departamento de Medicina Veterinaria MICOLOGA VETERINARIA Por un Desarrollo Agrario Integral y Sostenible Por un Desarrollo Agrario Integral y Sostenible Manual de Micologa Veterinaria Todos los derechos reservados 2013 Universidad Nacional Agraria Centro Nacional de Informacin y Documentacin Agropecuaria Km. 12 Carretera Norte, Managua, Nicaragua Telfonos: 2233-1501. 2233-1899, 2233-1871 Fax: 22331619 Dr. Jos Manuel Aparicio Medina PhD Profesor Titular Universidad de La Habana Cuba La UNA propicia la amplia diseminacin de sus publicaciones impresas y electr- nicas para que el pblico y la sociedad en general obtenga el mximo benefcio. Por tanto en la mayora de los casos, los colegas que trabajan en docencia, inves- tigacin y desarrollo no deben sentirse limitados en el uso de los materiales de la UNA para fnes acadmicos y no comerciales. Sin embargo, la UNA prohbe la modifcacin parcial o total de este material y espera recibir los crditos mereci- dos por ellos. N 589.2 N322Navarro Reyes, Omar Enrique Micologa veterinaria / Omar Enrique Navarro Reyes; asesor Lzaro De Jess Morejn Aldama. -- 1a ed. Managua : UNA,2013 186 p. ISBN 978-99924-1-024-0 1.MICOLOGIA VETERINARIA 2.TESIS Y DISERTACIONES ACADEMICAS 3.EDUCACION SUPERIOR 1 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes DEDICATORIA Esta obra tene como n la culminacin de mis estudios profesionales como Licenciado en Medicina Veterinaria. La dedico a Dios, a mi esposa Dania Matus de Navarro, a la familia Navarro Reyes, a mi gran amigo y asesor Lzaro Morejn Aldama, a aquellos que decidieron dar de su tempo y a todos los que deseen ampliar sus conocimiento en el campo de la Micologa Veterinaria. Me disculpo personalmente si no incluyo en esta obra a algunos autores que gracias a sus aportes me aclararon y permiteron que este conocimiento sea ms enriquece- dor. Presento este texto en resttucin a los esfuerzos, los nimos, conocimien- tos y gua que todos ellos me brindaron.
2 Manual de Micologa Veterinaria 3 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes CONTENIDO INTRODUCCIN....................9 CAPTULO 1 GENERALIDADES..............................11 1.1 Historia de la Micologa............................12 1.2 Filogenia y clasicacin de los hongos...................18 1.3 Clasicacin clsica de los hongos.........................19 1.4 Clasicacin actual del Reino Fungi.......................20 1.5 Morfologa de los hongos.........................21 1.6 Utlizacin de los hongos no patgenos (Hongos Saprotos)...........22 1.7 Morfologa de las levaduras o Saccharomycetos.................27 1.8 Morfologa de los mohos o Hyphomycetos.................29 1.9 Ecologa de los hongos...........................30 1.10 Fisiologa y nutricin de los hongos....................31 1.11 Reproduccin.............................35 1.11.1Reproduccin de las levaduras o Saccharomycetos............................35 1.11.2 Reproduccin de los mohos o Hyphomycetos........................36 1.12 Clases Oomicetos y Zigomicetos (caracteres generales)................39 1.13 Clase Ascomicetos (caracteres generales)................42 1.14 Clase Basidiomicetos (caracteres generales).................46 CAPTULO 2 HONGOS PATGENOS.....................47 2.1 Divisin del reino Fungi.........................50 2.2 Clasicacin de los hongos patgenos.....................51 2.3 Ficomicetos................................52 2.3.1 Gnero Mucor.....................................53 2.3.2 Gnero Absidia......................................55 2.3.3 Gnero Rhizopus...................................55 4 Manual de Micologa Veterinaria 2.4 Blastomicetos..................................56 2.4.1 Gnero Cryptococcus....................................60 2.4.1.1Cryptococcus neoformans...................................61 2.4.2 Gnero Candida.......................................65 2.4.2.1 Candida albicans......................................68 2.4.2.1.1 Sndrome del buche cido.....................................69 2.4.2.1.2 Candidiasis Psitcida.....................................70 2.4.2.1.3 Infeccin de las vas urinarias por Candida sp............................71 2.4.2.1.4 Estomatts mictca por Candida albicans...............................71 2.4.3 Gnero Zymonema..................................72 2.4.3.1 Zymonema Farciminosum..................................73 2.5 Dermatotos...........................73 2.5.1 Medios nutritvos para dermatotos..........................76 2.5.2 Gnero Trichophyton.....................................78 2.5.2.1 Trichophyton mentagrophytes.................................79 2.5.2.2 Trichophyton gallinae.......................................80 2.5.2.3 Trichophyton equinum....................................80 2.5.2.4 Trichophyton schoenleini...................................81 2.5.2.5 Trichophyton quickeanum..................................81 2.5.2.6 Trichophyton verrucosum................................81 2.5.3 Gnero Microsporum.................................85 2.5.3.1 Microsporum felineum.................................86 2.5.3.2 Microsporum canis.....................................87 2.5.3.3 Microsporum nanum....................................88 2.5.3.4 Microsporum gypseum.................................89 2.5.3.5 Microsporum andouini.................................89 2.5.4 Gnero Aspergillus...................................90 2.5.4.1 Aspergillus fumigatus...................................91 2.6 Hongos Imperfectos (fase de levadura y fase de moho)................99 2.6.1 Gnero Sporotrichum....................................99 2.6.1.1 Sporothix schenkii.....................................101 5 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 2.6.2 Gnero Blastomyces...............................103 2.6.2.1 Blastomyces dermattdis..................................104 2.6.3 Gnero Histoplasma..................................105 2.6.3.1Histoplasma capsulatum....................................106 2.6.3.2 Histoplasma farciminosum................................109 2.6.4 Gnero Coccidioides...............................110 2.6.4.1 Coccidioides immits.................................111 2.6.5 Gnero Penicillium................................113 CAPTULO 3 DIAGNSTICO GENERAL DE LAS MICOSIS..........116 3.1 La toma de muestra..........................116 3.2 Lmpara de Wood o luz de Wood.................125 3.3 Antfngigrama........................128 3.4 Antfngicos...........................129 3.5 Examen microscpico directo de las muestras clnicas...........133 CAPITULO 4 MICOTOXICOSIS......................137 4.1 Generalidades de las micotoxicosis...........................137 4.1.1 Aatoxinas.....................................143 4.1.2 Zearalenona (vulvovaginits porcina)..........................152 4.1.3 Trichotecenos..................................155 4.1.4 Ochratoxina A-Citrinina y cido oxlico........................160 4.1.5 Eslaframina.................................164 4.1.6 Claviceps paspalis..............................166 4.1.7 Claviceps purpurea (Ergotsmo)............................169 4.1.8 Fusarium moniliforme(Leucoencefalomalacia Equina).................173 4.1.9 Iponema.................................175 4.1.10 Dicumarina (intoxicacin por trbol blanco)....................176 GLOSARIO ................182 BIBLIOGRAFA .....................185 6 Manual de Micologa Veterinaria 7 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes PREFACIO A pesar de que las micosis y las micotoxicosis suelen ser un problema muy co- mn y difcil de diagnostcar para el ojo inexperto por la complejidad de su es- tudio. Para orientar de una forma sencilla, pero cientca, al profundizar en esta obra se podr prevenir, comprender y tratar estas afectaciones, al brindarle no solo conocimiento bsico, sino profundo hasta donde se puede abarcar. El presente trabajo realizado por mi amigo, colega y compaero, presenta de forma clara los captulos con sus temas, despus de analizar la necesidad de una obra de este tpo en las aulas de clases y en el campo propiamente dicho. Dicho autor, a quien conozco, se ha desempeado en el trabajo de aumentar el conocimiento de la materia y mejorar el nivel de la enseanza. Invito a quien acuda a esta obra para adquirir conocimientos, sobre la Micologa Veterinaria, que no subestme su contenido. Lzaro Morejn Aldama Microbiologa veterinaria FACA/ UNA 8 Manual de Micologa Veterinaria 9 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes INTRODUCCIN La Micologa Veterinaria tene su importancia en las patologas de sus sntomas y signos. Comprende aquellas enfermedades producidas por los hongos direc- tamente (Micosis) y a las enfermedades producidas por los metabolitos de estos (hongos), despus de la ingesta de alimentos contaminados (Micotoxicosis). Esta ciencia tene sus orgenes en el periodo de los primeros microscopistas, en el siglo XVI, con personajes importantes como los doctores, Leeuwenhoek, Pas- teur, Koch, Sabouraud entre otras guras renombradas. Los aportes que dieron a esta ciencia fueron: enmarcarlos en su propio reino, y clasicar la taxonoma, hbitos nutricionales, reproduccin y sus diagnstcos. Los hongos patgenos, como le llamaremos a estos microorganismos causantes de enfermedad, se les atribuye la mayor importancia, sin obviar la accin de sus metabolitos y las tcnicas de recoleccin de muestras y diagnstco. Para entender las patologas es necesario comprender y aanzarse en el mundo de las micosis, es por ello que el diseo de este texto se estructur para orientar al lector, ya que se describe a los agentes lo ms detallado posible, se abordan los gneros y su forma de reproduccin, las lesiones que provocan, rganos que afectan y especies susceptbles (incluyendo al ser humano), se presentan las tcnicas de recoleccin de muestras y diagnstco de laboratorio; como medios nutritvos, tnciones, y otros para contribuir a un diagnstco ms exacto, ade- ms se abordan los antmictcos ms efectvos, incluyendo aquellos que dejan residuos en los productos y subproductos que son perjudiciales para la salud humana. 10 Manual de Micologa Veterinaria 11 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Captulo 1. GENERALIDADES El trmino de micologa proviene del griego Mykes que signica seta, teniendo como sinnimos sombrero, hongo, y Logos que nos hace referencia aun discurso o tratado. La etmologa de la palabra hongo es variada ya que depende de los diferentes idiomas, pero en general se acepta su derivacin del griego Mykes y de su derivado en latn, Fungi. Es por eso que al referirnos al organismo se de- nomina con una palabra de origen latno: HONGO y al referirnos a la ciencia que los estudia se utliza el trmino de raz griega: MICOLOGA. (Morejn, Navarro, 2011). El trmino Hongos, es un concepto general que incluye a mohos y a levaduras. Se hallan distribuidos ampliamente en el suelo, las plantas, el agua y en el aire. La mayora son saprotos y la minora son patgenos que parasitan organismos vegetales y animales; por esa causa, en estos ltmos (animales), se afecta toda la escala zoolgica (protozoarios, insectos, crustceos, peces, reptles, aves y mamferos). De acuerdo con el predominio en su hbitat, los hongos que se hallan en el hom- bre, son llamados hongos antropolicos; los que se encuentran en los animales domstcos, hongos zoolicos y los hongos del suelo, hongos geolicos. Los hongos patgenos, salvo algunas excepciones, son de lento crecimiento, es por esto que existe el riesgo de que sus colonias sean contaminadas por bac- terias u otros hongos saprotos, los cuales son de un crecimiento rpido. La mayora de los hongos patgenos son oportunistas y hacen su vida saprota en el suelo, se consideran oportunistas o de vida libre ya que crecen en cualquier medio natural que les proporcione nutrientes. Los hongos son microorganismos vegetales inferiores, por lo que estn despro- vistos de clorola, por lo tanto son incapaces de sintetzar sus propios alimentos. Son organismos hetertrofos, ya que pueden obtener sus nutrientes de mate- rias muertas, como los saprotos o se nutren como parsitos de los huspedes vivos. 12 Manual de Micologa Veterinaria Los mohos son diminutos hongos lamentosos saprotos o parsitos que se reproducen mediante esporas asexuales y esporas sexuales. Las levaduras o fermentos son hongos esfricos, ovoides o bacilares, en las que predominan la forma de desarrollo unicelular; bajo ciertas condiciones crecen en forma de lamento o micelio, mientras que en otras por fases de levadura. Su reproduccin es por gemacin o por sin binaria, similar a lo que ocurre en las bacterias. La transmisin de estos organismos, al igual que la de los otros, puede ser por va oral (alimentos contaminados); por va aergena o por contacto directo con animales u objetos infectados, as como por otras vas. 1.1 Historia de la micologa Existen ms de 72,000 especies que componen lo que llamamos el Reino Fungi, solo unas 300 se han demostrado patgenas y de esta cifra la mayora son hon- gos oportunistas, capaces solo de atacar los organismos debilitados o inmuno- deprimidos. El nmero de aquellos que son parsitos obligados es extraordina- riamente reducido. (Crespo et. al., 2004). Existen referencias al micetoma del pie (descrito como pie hormiguero) en los libros del Athava Veda, en la India, en el segundo milenio a.C. y son igualmente clsicas las descripciones del muguet bucal por el griego Hipcrates (437-377 a.C) y por mdicos romanos del siglo I de nuestra era, Galeno y Celso; quien dio nombre a la dermatocia inamatoria o querion. (Crespo et. al.2004) La evolucin de la historia de la micologa mdica se ha comparado al desarrollo de las antguas vas o calzadas que comunicaron el imperio Romano, las cuales estaban jalonadas por grandes piedras miliares que marcaban y numeraban las millas terrestres. 13 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Siguiendo este smil sugestvo, podramos distnguir tres de estas, siendo un pri- mer trecho del camino el lento desarrollo de las lentes microscpicas a lo largo de los siglos XVI y XVII, lo que permit que se realizaran en la segunda mitad de esta centuria, las primeras descripciones rudimentarias de ciertos micromicetos dotados de estructuras de gran tamao, como los del gnero Mucor. La segunda piedra miliar de nuestra historia (de hecho, la primera en el camino de la micologa mdica), el mrito corresponde al polifactco investgador ita- liano Agostno Bassi (1773-1856), quien en 1807, tras haber repartdo su inters entre la fsica, la qumica, las matemtcas, la historia natural e incluso algunas ramas de la medicina, centr sus esfuerzos en el estudio de una enfermedad, la Muscardina, que estaba llevando a la ruina a los criadores de gusanos de seda del norte de Italia. Bassi logr demostrar que dicha enfermedad estaba causada por un hongo microscpico, que desde entonces lleva el apellido de su descubri- dor: Beauveriabassiana. Ilustracin 1 Microscopio de Leeuwenhoek Ilustracin 2 Beauveriabassiana afectando larva de Spodopterafrugiperda b f d l d d 14 Manual de Micologa Veterinaria El descubrimiento del agente de favus humano por Remak y Schnlein en 1837 representa nuestra tercera piedra miliar. Robert Remak era un profesor judo de origen polaco, adscrito a la ctedra del Prof. Lucas Schnlein en la Facultad de Medicina de la Universidad de Berln. Fue el primero en observar estructuras fngicas, hifas y esporas, en el material obtenido de las costras de un paciente afectado de favus pero, en lugar de publicar l mismo su hallazgo, lo comunic a su amigo y compatriota, Xavier Hube, y permit que este lo publicara en su tesis doctoral, De Morbo Scrophuloso, nueve aos despus. Aunque el mrito del descubrimiento del primer microorganismo causante de una enfermedad humana corresponde sin duda a Remak (y tal vez tambin a Schnlein), los estudios de David Gruby, presentados en la Academia de Cien- cias de Pars entre 1841 y 1844, tuvieron un impacto mucho mayor entre los clnicos de la poca. De hecho, Gruby, un judo de origen hngaro que ejerca de ofalmlogo en Pars, logr, adems de la observacin microscpica del hongo, obtener este en cultvo e inocularlo con xito en el brazo de su ayudante y en su propio cuerpo, cumpliendo as los postulados de Koch para la etologa de las enfermedades infecciosas 40 aos antes de que el propio Koch los formulara. Adems, Gruby describi el principal agente de nea capis en aquella poca, y lo bautz como Microsporum audouinii en honor del gran naturalista Vctor Audouin (1797-1841), conservador del Museo de Historia Natural de Pars y muy conocido por sus trabajos en la enfermedad de la muscardina. Por ltmo, en 1841 Gruby describi tambin la levadura causante del Muguet o candidiasis oral, a la que 6 aos ms tarde Robn denominara Oidium albicans. El debate de los fermentos fue un factor contribuyente, para el estudio de las levaduras, aunque se conoce que este es un proceso, que contribuy aun antes de conocer que eran microorganismos los causantes de esta (fermentacin), al economa de muchos pases en la fabricacin de bebidas alcohlicas, un proceso qumico que se da en las infusiones con el crecimiento de los grmenes en ellas existentes. 15 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Cangiard Latour en 1836 y los cientcos Schwann y Ktzing en 1837 sugirieron que las levaduras eran las responsables de la fermentacin alcohlica, que es el proceso que pasan los azucares para producir alcohol etlico y dixido de car- bono, pero ellos se encontraron con las crtcas de los grandes qumicos de la poca, quienes presentaron la teora mineral sobre la nutricin de las plantas y la teora del humus, ya que las levaduras eran consideradas plantas micros- cpicas, se supona que los procesos de fermentacin y putrefaccin se deban a fenmenos qumicos de descomposicin y muerte encuadrables en el marco de la teora mineral de la siologa vegetal. Su convencimiento de que toda ac- tvidad vital se poda explicar en trminos de qumica y fsica retras por algn tempo la adscripcin de estos fenmenos a clulas vivas. Pasteur intervino en el debate de forma decisiva por su experiencia con las pro- piedades ptcas con los cristales de tartrato. En 1857 demostr que los agentes de la fermentacin lctca eran microorganismos, mientras trabajaba en un pro- blema que haba surgido entre los destladores de Lille en las cubas, cuandola fermentacin alcohlica se vio susttuida por una indeseable fermentacin lc- tca. Este fue el inicio de una larga serie de estudios que habra de durar hasta 1876. Trabajando en los agentes de la fermentacin butrica, Pasteur descubri tam- bin la presencia de microorganismos que se desarrollaban en ausencia de ox- geno, los cual desmenta que todas las formas de vida necesitaban de oxigeno para crecer, us el trmino de aerobiosis y anaerobiosis, para denominar, respectvamente a la vida en presencia y en ausencia de oxigeno. Tras el descubrimiento de la anaerobiosis, el mismo Pasteur comprendi las dis- tntas implicaciones energtcas subyacentes a la utlizacin de sustratos orgni- cos en presencia y en la ausencia de oxgeno, demostrando que, en el segundo caso el rendimiento (crecimiento microbiano) era siempre menor, al no poder realizarse la degradacin total de las correspondientes sustancias. Una profundizacin en los fenmenos de fermentacin lleg cuando en 1897 el cientco Buchner obtuvo, a partr de las levaduras, una preparacin enzimtca que era capaz de realizar la misma transformacin de fermentacin que las c- lulas vivas. 16 Manual de Micologa Veterinaria Este descubrimiento, que evocaba las propuestas de Berzelius y Liebig, supuso en realidad la conuencia de los enfoques qumico y biolgico; las fermentacio- nes eran procesos qumicos catalizados por las enzimas presentes dentro de las clulas vivas, que podan ser estudiados extracelularmente. De esta forma, la bioqumica, nacida como una rama de la qumica siolgica, que se vena espe- cializando en la enzimologa, encontr una alianza fructfera y duradera con el estudio de los microorganismos. Aos ms tarde, el mismo Pasteur (1822-1895), unnimemente reconocido como el fundador de la microbiologa, no prest poca atencin al campo de la micologa y a los hongos microscpicos en su famosa memoria sobre los cor- psculos organizados presentes en la atmsfera, escrita cuando todava lucha- ba por imponer sus teoras sobre los partdarios de la generacin espontnea. Antes de Sabouraud, haban trabajado en la clnica de las micosis cutneas gu- ras tan insignes como W. Wilson (1817-1884), J. Hoog (1817-1899), Tilbury Fox (1836-1879), F. von Hebra (1816-1889) y E. Bazin (1807-1878). Raymond Sabouraud, era un joven dermatlogo del Hospital Saint Louis de Pars cuando inici sus estudios sobre los dermatotos a partr de 1890, ao en que asist al famoso primer Grand Cours de Microbiologie, organizado por Roux dos aos despus de la fundacin del Insttuto Pasteur (1888), al nal de la carrera histrica del maestro. Uno de los mritos de Sabouraud, junto con su ayudante Duclaux, en el terreno sistemtco, fue rebatr la teora de algunos de sus predecesores, para los cua- les todas las tas estaran causadas por una sola especie de hongo, una cepa mutante de Aspergillus o Penicillium. Esto se logr gracias a un prolongado y exhaustvo trabajo basado en la utlizacin de cultvos puros y, condujo nalmen- te la publicacin de Les Teignes, verdadera biblia de la dermomicologa, cuyas lneas fundamentales conservan an hoy su plena validez. 17 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Muy pocos avances tuvieron lugar a lo largo de la primera mitad del siglo XX en el terreno de la teraputca antmictca. Ya en la dcada de 1950 se inicia un cambio revolucionario en el tratamiento de las micosis, tanto superciales como profundas, con el descubrimiento de los primeros antbitcos antfngicos, los polienos, tales como la anfotericina B y la nistatna. Esta ltma fue obtenida por la micloga Elizabeth L. Hazen y la bioqumica Rachel F. Brown a partr de cepas de Streptomyces nursei que haban aislado, durante las vacaciones, en la granja de W.J. Nourse, en Virginia. Este antbitco (que llev primeramente el nombre de fungicidina, susttuido ms tarde por el actual, en honor del estado de Nueva York, en cuyo Departamento de Sanidad trabajaba Hazen, mientras Brown lo ha- ca en el Laboratorio Central, era muy actvo frente a ciertas levaduras (como las del gnero Candida), pero presentaba el inconveniente de su espectro reducido (no era actvo en dermatotos ni en otros hongos lamentosos), y de su prct- camente nula absorcin por va digestva, lo que limitaba su uso al tratamiento tpico. La actvidad antfngica invivo del otro gran antbitco del grupo de los polie- nos, la anfotericina B, obtenida a partr de Streptomycesnodosus, fue reconoci- da por vez primera por Goldet al en 1956. A lo largo de los aos, esta sustancia ha mostrado su enorme valor en el tratamiento de las micosis sistmicas. El mrito del hallazgo de la griseofulvina deben compartrlo los investgadores bri- tnicos Gentles y Martn, quienes por vez primera publicaron la ecacia de este antbitco (que se haba obtenido de cepas de Penicillium griseofulvumveinte Ilustracin 3 Raymond Sabouraud 18 Manual de Micologa Veterinaria aos atrs y se haba empleado bsicamente en agricultura), en animales de laboratorio infectados con Microsporum canis y Trichophytummentagrophytes, por Lauder y Sullivan, quienes casi simultneamente, en Estados Unidos, demos- traron los mismos resultados en vacunos infectados por Trichophytum verru- cosum. La importancia de este descubrimiento lo hace merecedor de nuestra ltma piedra miliar, pues este antbitco, desterr en muy poco tempo todos los procederes depilatorios que haban venido utlizndose, con riesgo consi- derable para los pacientes, a lo largo de ms de cinco dcadas, y se erigi en el tratamiento de eleccin en la tnea capits prepuberal. La dcada de 1960 asist al desarrollo de los nuevos antfngicos imidazlicos (el miconazol y el clotrimazol, seguidos de muchos otros en los aos siguientes), con la introduccin a mediados de los aos setenta del ketoconazol, el primer actvo por va oral y dotado de un amplio espectro que cubra tanto levaduras como dermatotos. A las dos ltmas dcadas del pasado siglo se atribuye la aparicin de los triazoles, las alilaminas y las morfolinas. 1.2 Filogenia y clasicacin de los hongos A los hongos se los clasic primeramente como plantas, porque carecan de movilidad y presencia de pared celular, lo que nos indica que son incapaces de jar carbono a travs de la fotosntesis, pero usan el carbono jado por otros or- ganismos para su metabolismo. Actualmente se cree que los hongos estn ms emparentados a los animales que a las plantas, es por eso que se encuentran en el grupo de los Monoltcos, dentro del grupo de los Opiscontos. Los hongos forman un grupo monoltco, lo que signica que todas las varieda- des de hongos provienen de un ancestro comn. El origen monoltcos de los hongos se ha conrmado mediante experimentos de logentca molecular; los rasgos ancestrales que comparten incluyen la pared celular quitnosa y la hete- rotroa por absorcin, as como otras caracterstcas compartdas. 19 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La taxonoma de los hongos esta en un estado de rpida modicacin, espe- cialmente debido a artculos recientes basados en comparaciones de ADN, que traslocan las asunciones de los antguos sistemas de clasicacin. No hay un sistema nico plenamente aceptado en los niveles taxonmicos ms elevados y hay cambios de nombres constantes en cada nivel, desde el nivel de especie hacia arriba y segn el grupo, tambin a nivel de especie y niveles inferiores. Pese al carcter monoltcos o de un ancestro comn, los hongos presentan una sorprendente variabilidad morfolgica, dada no solo por el aspecto sino por las dimensiones y caracterstcas. As son los hongos protaxites de seis metros de altura y tambin son los mohos y levaduras, las setas (nombre que se da a los hongos macroscpicos comestbles que crecen sobre el suelo), las subterrneas trufas, o los casi microscpicos como el odio, tas u otras micosis), la roya etc. 1.3 Clasicacin clsica de los hongos Flammulina velutpes. Hongos ameboides o mucilaginosos: Mixomicotes (divisin Myxomycota). Ascomicetes (divisinAscomycota). Plasmodioforomicotes (divisin Plasmodiophoromycota). Hongos lisotrcos o absorbotrcos: Pseudohongos u oomicotes (divisin Oomycota). Quitridios (divisin Chytridiomycota). 20 Manual de Micologa Veterinaria Hongos verdaderos o eumicotes (divisin Eumycota): Zigomicetes (clase Zygomycetes). Ascomicetes (clase Ascomycetes). Hongos imperfectos (clase Deuteromycetes): Basidiomicetes (claseBasidiomycetes). Los grupos de la enumeracin anterior hasta Oomycota, no son verdaderos hon- gos, sino protstas con distntos parentescos, cuyas adaptaciones hicieron con- fundirlos con hongos. 1.4 Clasicacin actual del reino Fungi Quitridiomicetes (divisin Chytridiomycota). Zigomicetes (divisin Zygomycota). Glomeromicetes (divisin Glomeromycota). Basidiomicetes (divisin Basidiomycota). Ascomycetes (divisin Ascomycota). Caracteres diferenciales Nivel celular: Eucariotas. Nutricin: Osmtrofa (absorcin). Metabolismo del oxgeno (respiracin): aerobiosoanaerobios facultatvos. Reproduccin y desarrollo: reproduccin sexual, con gametos generalmente iguales, y multplicacin asexual por esporas resistentes. Organizacin: los ms conocidos son pluricelulares, con clulas en lamentos llamados hifas, cuyo conjunto forma un micelio. Carecen de fases mviles, tales como formas ageladas, con la excepcin de los gametos masculinos y las espo- ras de algunas formas logentcamente primitvas (losChytridiomycota). 21 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Estructura y funciones: sin plasmodesmos (puentes de citoplasma entre c- lulas), unicelulares como la levadura de la cerveza (Saccharomycescerevisiae) o con micelio pluricelular consttuido por hifas. Con movimientos intracelulares. En las paredes hay poros y pared celular con quitna. Caracteres morfolgicos: los principales caracteres macroscpicos de los hon- gos, son los de su cuerpo fructfero o seta. 1.5 Morfologa de los hongos Los hongos estn formados por dos estructuras principales: el micelio y las esporas. Micelio: consta de una masa de lamentos llamadas hifas que se entrecruzan las cuales le dan un aspecto algodonoso, lanoso o aterciopelado del moho. Las hifas segn la funcin que realizan, pueden ser: vegetatvas cuando son las en- cargadas de suministrar el alimento del medio) y frtles (cuando tenen nes reproductvos o sea, producen conidios o esporas). Las hifas pueden presentar tabiques transversales llamados septos. Existen especies de mohos que no son tabicados. Esporas: son los rganos que proporcionan color a la colonia y pueden ser: ne- gros, verdes, azules, marrn, etc. Adems son los rganos encargados de la re- produccin ya sea sexual (en los cuales intervienen rganos masculinos y rga- nos femeninos) o asexual (se producen a partr de una parte del hongo, el tallo, o de sus esporas). Las esporas presentan diferentes formas: de huso, ovalada, granada y otras. Ilustracin 4 Los cuerpos fructferos o esporangio se muestran en forma de puntos de color oscuro. erpos ffffffructtttttfffffferos o esporangiiiio se muest p 22 Manual de Micologa Veterinaria 1.6 Utlizacin de los hongos no patgenos (Hongos saprotos) El hongo saproto produce enzimas para digerir la materia orgnica que existe a su alrededor a partr de la que se nutre. Algunas especies estn presentes de forma pasiva en plantas vivas, e iniciarn su actvidad cuando la planta muera. Este grupo es muy importante en los ciclos de la mayora de los macroelementos sustancias indispensables para la vida. En este grupo encontramos a todos los hongos que degradan el complejo lignocelulsico que forma parte de la pared de los vegetales. Bsicamente existen dos subgrupos de Hongos Saprtos: los Degradores Primarios que corresponde a los hongos colonizadores y que inician el proceso de degradacin y los Degradadores Secundarios que slo pueden acceder a sustancias orgnicas ms simples y que han sido pre-degradadas por los Degradadores Primarios. De los tres grandes grupos, slo los ltmos pueden ser cultvados bajo ambiente controlado ya que al ser independientes de otros seres vivos slo basta desarro- llar un sustrato lignocelulsico determinado y entregar las condiciones de tem- peratura, ventlacin, humedad y luz adecuadas para lograr que estos hongos crezcan y fructque. Ilustracin 5 Diferentes tpos de esporas. str tt ac i i i i in 55555 i Di Di Di Di Diffffffere ttt ntes ttttttpos dddddde esporas Ilustracin 6. Agaricus bisporus Championes. 23 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Si es un DegradadorPrimario slo basta como sustrato varios tpos de desechos agroforestales frescos como pajas de cereales o aserrines y virutas, si se trata de un DegradadorSecundario, el sustrato pueden ser los mismos tpos de desechos anteriormente indicados, pero con un proceso de composteo previo. Las clulas de los hongos saprotos son extremadamente ricas en enzimas, tan- to en exoenzimas como en endoenzimas, las cuales son muy importantes en ciertos procesos industriales. Los hongos son empleados en la fermentacin al- cohlica, ctrica, fumrica y en la obtencin de ciertos cidos orgnicos Tambin se emplean en los procesos de maduracin y preparacin de los quesos y su ms importante utlizacin es la produccin de antbitcos, como la penici- lina, producida por el Penicillium notatum. Hongos comestbles Los hongos comestbles se clasican como organismos hetertrofos. Algunos como el huitlacoche son parsitos otros como el champin y el shiitake son saprotos o como las trufas que forman asociaciones con las plantas. Los hongos se utlizan como complemento en las comidas, el que ms se con- sume a escala mundial es el Agaricus bisporus (champin), este hongo segn porta leal (1993,553) contene de un 82 a un 85% de humedad y un 7.75% de protenas en base seca, sus protenas poseen todos los aminocidos esenciales y algunos minerales como el potasio, hierro, fosforo, y manganeso, adems es rico en vitaminas del complejo B. El ciclo de vida de los championes se divide bsicamente en dos etapas. (Microbiologa industrial. AliciaHernndez,2003). Nombre cientco Nombre comn Agaricus bisporus Champin Lentinus edodes Shiitake Volvariella volvacea Hongo chino Flamulina velutipes Hongo de invierno Pleurotus ostreatus Hongo ostin Pholiota nameko Nameco Auricularia sp. Auricularia Amanita silvaticus Hongo de basura Helvea crispa Orejitas de ratn Ustilago maydis Huitlacoche Tuber melanosporum Trufas 24 Manual de Micologa Veterinaria Fase vegetatva Fase generatva Durante la fase vegetatva se lleva a cabo la germinacin de las esporas y el de- sarrollo del micelio formado por gran cantdad de hifas, luego el micelio se con- vierte en el hongo durante la fase generatva. La fase vegetatva se desarrolla ptmamente a una temperatura de 24 a 26 C y a una humedad del 90 al 95% mientras que las condiciones de la fase generatva son entre los 16 y 18C y el 80 al 85% de humedad, el Ph en el que crece adecuadamente este hongo (Agaricus bisporus) debe ser cercano a la neutralidad. El micelio alcanza su desarrollo en- tre los 10 a 14 das si se mantene a condiciones ambientales sugeridas, el cam- bio de fase ocurre cuando se varan las condiciones ambientales y los brotes se logran entre siete y diez das. (Microbiologa industrial. AliciaHernndez,2003) La levadura En el rea de la cervecera de acuerdo con el comportamiento de oculacin se han clasicado las levaduras en cuatro clases: Clase I: las que no oculan. Clase II; las que oculan al nal de la fermentacin en aglomerados no muy com- pactos asociados a las burbujas de dixido de carbono. Los aglomerados otan en el lquido formando una nata, son levaduras de oculacin alta. Clase III: las que oculan al nal de la fermentacin en aglomerados muy com- pactos no asociados a las burbujas de gas, los aglomerados se hunden en el lquido, son levaduras de oculacin baja. Clase IV; las que oculan desde etapas tempranas de la fermentacin por su capacidad de formar ramicaciones, son tambin levaduras de oculacin alta. (Microbiologa industrial. AliciaHernndez,2003). 25 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Las levaduras son los microorganismos ms importantes desde el punto de vista industrial porque muchas de las especies pueden convertr los azucares en al- cohol etlico y dixido de carbono partcipan en la produccin de cerveza, vino, alcohol industrial, glicerol y vinagre. Las clulas de la levadura que se utlizan tambin en la industria de la panica- cin y como alimento animal y humano. Algunos tpos de levaduras utlizados industrialmente (Microbiologa industrial. AliciaHernndez,2003). En la elaboracin de kr y kumis que son leches fermentadas acido alcohli- cas adems de bacterias lctcas intervienen levaduras: Saccharomyceskr Candidakluyveromices Candidakr Kluyveromyceslacs Kluyveromycesmarxianusvar.fragilis Saccharomyces Caracterstcas macroscpicas: Las colonias que aparecen en el transcurso de 36 a 48 hrs son blanco grisceas y pastosas con pliegues irregulares Levadura Producto Saccharomyces ellipsoideus Vino Saccharomyces cerevisiae Cerveza, pan y queso Torulopsis utilis Fuente de protena Shizosaccharomyces sp. Alcohol industrial 26 Manual de Micologa Veterinaria Caracterstcas microscpicas: Se observan racimos laxos de levadura grandes ovales con brotes en las prepara- ciones de agar harina de maz. Despus de la incubacin durante 7-10 das de una placa inoculada puede hacer- se en frots de una de las colonias aisladas y teirlo para acido alcohol resisten- cia, con esta tcnica se observan ascosporas que aparecen como clulas grandes de paredes gruesas y esfricas con un pigmento rojo caracterstco. S.cerevisiae:suele colonizar las mucosas de los seres humanos pero por lo gene- ral no se le considera patgena. Importancia de las levaduras en la nutricin Las levaduras son utlizadas por el hombre en la alimentacin y en la nutricin, desde hace muchos siglos, en la fermentacin de zumo de frutas, para esponjar el pan y para hacer nutritvos ciertos productos alimentcios. Hoy tenen mayor importancia porque se usan en procesos fermentatvos en diversos productos, adems se emplea para sintetzar ciertas vitaminas, grasa y protena partendo de azucares sencillos y de nitrgeno amoniacal, tambin las levaduras se encuentran en granos, frutas y otras materias nutritvas que conte- nen azcares. Estos microorganismos son claves en procesos nutricionales, sin embargo; es necesario el control de aquellos hongos de vida oportunistas que provocan pa- tologas en este caso grandes prdidas en los animales y el ser humano. Ilustracin 7 Maduracin del queso artesanalmente 27 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 1.7 Morfologa de las Levaduras o Saccharomycetos Las levaduras se caracterizan, generalmente por su morfologa y por la repro- duccin por gemacin. Representan un tpo de vegetal ms perfecto que las bacterias, aunque algunas de ellas se parecen a stas. Las levaduras o Saccha- romycetos se dividen en dos grupos: levaduras verdaderas y levaduras falsas. Las levaduras verdaderas se reconocen porque forman un esporangio en el que se desarrollan las esporas, llamadas corrientemente ascas de donde deriva el nombre de Ascomycetos que ha recibido este grupo de microorganismos. Las levaduras falsas no producen esporas, pero en lo dems son similares a las ver- daderas. (Garca, 1985). Forma, tamao y agrupacin Las levaduras son organismos unicelulares de forma esfrica, elptca o cilndri- ca, el tamao varan segn los distntos tpos morfolgicos. En general, son ma- yores que las bacterias, aunque las ms grandes de estas, pueden alcanzar el tamao de las clulas de lavadura, es decir 4-5m de dimetro. La mayor parte de las levaduras verdaderas se muestran como individuos aislados; sin embar- go, las clulas hijas recientemente formadas por gemacin, pueden permanecer unidas a la clula materna durante algn tempo. Algunas especies de levaduras producen formas lamentosas alargadas que, al entrecruzarse unas con otras, dan origen al micelio. Se parecen mucho en estos a los mohos. Las levaduras originan varios tpos de colonias; las formas patgenas, las producen opacas y viscosas. Estructura de la clula de la levadura En las levaduras podemos encontrar las mismas estructuras halladas en las c- lulas de plantas y animales. El ectoplasma, o parte externa limitante del proto- plasma celular, forma la membrana, que en las clulas viejas es muy evidente. La pared celular se compone de una sustancia carbohidratonitrogenada a la que se ha dado el nombre de celulosadelevadura. Algunas especies forman cpsulas, no poseen agelos. El ncleo de las levaduras es relatvamente grande, y junto con la vacuola nuclear ocupa bastante espacio en la clula (Garca, 1985). 28 Manual de Micologa Veterinaria Durante el proceso de gemacin el ncleo se divide y parte de l va a la yema recin formada, y luego a la nueva clula hija. Son frecuentemente las vacuo- las, que pueden reconocerse como corpsculos muy refringentes. Aumentan de tamao y nmero cuando las reservas alimentcias de la levadura disminuyen. En el citoplasma se encuentran tambin grnulos de glucgeno, que as mismo han sido hallados en las vacuolas. En ciertos tpos de levaduras se han apreciado gottas de grasa, se sabe que tales clulas son capaces de convertr sustancias elementales en grasa. El glucgeno y la grasa son materiales nutritvos de reser- va de las levaduras. Ilustracin 8. Clula de una levadura Ilustracin 9 Colonias de Penicilliumexpansum(A) yBotryscinerea(B) 29 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 1.8 Morfologa de los Mohos o Hyphomycetos Reciben el nombre de mohos, todos los hongos que crecen dando colonias com- puestas de lamentos algodonosos ojos, agrupndose juntos bajo el trmino de Hyphomycetos. Algunas de estas formas estn relacionadas con las algas cia- nofceas y se incluyen en los Phycomycetos; otros se agrupan con los Ascomyce- tos; algunos estn relacionados con los tzones y setas o Basidiomycetos; otros no tenen morfologa denida y se encuadran con las formas imperfectas, es decir, los Fungiimperfec. (Garca, 1985). Los mohos son seres pluricelulares y en consecuencia, se distnguen fcilmente de las bacterias y levaduras. El moho consta de una masa de lamentos entre- cruzados que consttuyen el micelio. Cada lamento recibe el nombre de la- mento miceliano o hypha (plural hyphae, en castellano hifas). Las hifas como se mencion anteriormente realizan dos misiones: las vegetatvas suministran alimentos al moho y las frtles se diferencian con nes reproductvos para la formacin de esporas. Las hifas de los mohos ms comunes poseen numero- sos tabiques transversales denominados septas (septos, tabiques), que sepa- ran unas clulas de otras. Algunas especies, sin embargo, no son tabicadas, de acuerdo con esto, los mohos se clasican en tabicados y no tabicados. Las clulas de los mohos se parecen mucho a las de las plantas superiores. La membrana es de naturaleza quitnosa. El protoplasma contene uno o ms n- cleos, segn las hifas sean tabicadas o no. En la primera, cada clula est bien denida por los septos de separacin y contene un solo ncleo. En los mohos no tabicados, a lo largo de la hifa aparecen numerosos ncleos sumergidos en una masa protoplasmtca comn. El protoplasma de los mohos tene aspecto granuloso, probablemente por la presencia de grnulos y vacuolas similares a los que poseen las levaduras. 30 Manual de Micologa Veterinaria 1.9 Ecologa de los hongos Formas de desarrollo de un hongo Gran cantdad de hongos se pueden propagar, transriendo cualquiera de sus partes miceliares a un medio de cultvo o sustrato adecuado y fresco, pero el desarrollo tpico, normal del tallo fungoso se originan a partr de la germinacin de un esporo. El esporo se puede considerar como una unidad citolgica dest- nada a la diseminacin y multplicacin de los hongos. Estos pueden estar pig- mentados por varios colores como negro, marrn, verde, azulado, amarillo etc. (Ministerio de educacin de la Habana 1992). Los esporos son extremadamente resistentes a las condiciones desfavorables como son temperatura, presin osmtca, desecacin y accin de diferentes agentes qumicos. La germinacin de un esporo puede esquematzarse de la si- guiente forma: 1. Un esporo que sea trasladado por el aire o el agua, se adhiere a un medio adecuado, con temperatura y humedad ptma. 2. Comienza a hincharse y a emitr uno o varios tubos germinatvos de una forma similar a un grano de polen. 3. Los tubos germinatvos se alargan y ramican hasta formar una red de hifas y micelio (vegetatvos). Ilustracin 10 Esporos de levadura vistos en microscopia electrnica 31 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 4. Ms tarde comienza a desarrollarse, las hifas frtles que darn lugar a los rganos reproductores, con posterior produccin de esporas que reiniciaran el ciclo, al ser trasladados a un medio adecuado. Esta ltma fase, en la cual se desarrollan los rganos reproductores y esporos es de suma importancia, para la adopcin de una base de clasicacin para los hongos. Morejn, Navarro, 2011). 1.10 Fisiologa y nutricin de los hongos Los hongos son organismos que requieren oxigeno molecular (aerobios) para su desarrollo, adems carecen de clorola como antes se menciono denominn- dolos hetertrofos y requieren de la presencia de ciertas sustancias que reciben el nombre de probitcos o estmulantes del crecimiento, como son vestgios de ciertos metales pesados. Los hongos son capaces de sintetzar todas las combi- naciones nitrogenadas y otras sustancias necesarias para la vida. Los componentes fundamentales de los medios de cultvos son: a) Sustancias minerales b) Sustancias hidrocarbonadas orgnicas (azucares simples) c) Combinaciones nitrogenadas orgnicas o inorgnicas d) Sustancias estmulantes El cultvo de microorganismos en el laboratorio involucra muchos factores. Es necesario tener amplio surtdo de medios de cultvos que deben contener las sustancias qumicas precisas y la correcta concentracin de hidrogeniones que los organismos precisan para su crecimiento y reproduccin, los requerimientos de temperatura, oxigeno y humedad deben obtenerse cuidadosamente. Algu- nos organismos son capaces de crecer fcilmente en un medio simple que no cumpla con rigor las condiciones habituales requeridas, pero otros son ms exi- gentes y necesitan factores adicionales de crecimiento y condiciones ptmas. Actualmente muchos laboratorios preparan sus medios de cultvos con produc- 32 Manual de Micologa Veterinaria tos secos o deshidratados, que pueden obtenerse de rmas comerciales, estos productos dan resultados excelentes y son empleados ampliamente. En la mico- loga veterinaria se usan diferentes medios de cultvos con el n de poder aislar y facilitar el estudio de los hongos, stos se clasican en medios de aislamiento primarios y medios de aislamientos especiales.(Baker.F.J y Breach. M.R, 1995). Medios de aislamiento primarios: Medio Sabouraud dextrosa (SAB) El Agar Sabouraud dextrosa, modicado por Emmons, contene un 2% de glu- cosa y es ligeramente cido (pH=6.9), se considera el medio estndar para recu- perar y mantener una amplia variedad de hongos que pueden aislarse en el la- boratorio de micologa clnica. Es el medio estndar para observar la morfologa tpica de los hongos, pero no es el medio ideal de crecimiento o para estudiar la esporulacin. Este medio permite el crecimiento de actnomicetos aerobios, pero el SAB origi- nal (4% de glucosa), diculta la recuperacin de algunos hongos, sobre todo de Blastomycesdermadis. Se utliza indistntamente en tubo o en placa. Glucosa agar de Sabouraud Glucosa.. 40 gr Peptona.. 10 gr Agar... 15 gr Agua.. 1ooo ml Fundir en autoclave y en tubo, autoclave a 10 lb durante 15 minutos y en plano inclinado, pH alrededor de 5,4. El caldo de Sabouraud se prepara de modo an- logo, pero omitendo el agar. Ilustracin 11 AgarSabouraud t ll 10 lb lb dd t 33 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Medio Sabouraud con Cloranfenicol y Gentamicina (SAB G+C / SABHI G+C) Es el medio Sabouraud clsico con la incorporacin de los antbitcos Genta- micina y Cloranfenicol, que permiten el crecimiento de casi todos los hongos lamentosos y levaduras al mismo tempo que inhiben a una gran mayora de bacterias.Se utliza en tubo o en placa. Frmulas por litro de agua destlada Sabouraud Agar con Gentamicina y Cloranfenicol CHROMagar Cndida medium Digerido pancretco de casena.5,0 gr Cromopeptona.10,0 gr Digerido pptco de tejido animal.5,0 gr Glucosa.......20,0 gr Glucosa............40,0gr Mezcla cromgena......2,0gr Agar..............15,0gr Cloranfenicol....0,5gr Gentamicina.........0,04gr Agar..15,0gr Cloranfenicol...0,4gr pH 6,0 0,3 pH 5,6 0,2 Ajustada y/o suplementada para satsfacer los criterios de rendimiento. Medio infusin cerebro corazn y 10% de sangre de carnero (ICC sangre) El Agar ICC (infusin cerebro corazn) es un medio enriquecido que facilita la recuperacin de Cryptococcus neoformans (sobre todo en muestras estriles como LCR) y que se utliza para la conversin hongo-levadura de hongos como Sporothrixsp. y Paracoccidioidessp. Ilustracin 12 Preparacin el medio Sabouraud 34 Manual de Micologa Veterinaria Formula (gramos por litro) Infusin de cerebro de ternera..200gr Infusin corazn vacuno......250gr Peptona......10gr Cloruro de sodio......5gr Glucosa......2gr Fosfato disdico...2.5gr Agar.........15gr Disolver 52 gr de polvo en un litro de agua destlada, calentar a ebullicin hasta su disolucin total. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121 C. Medio BHI con Cloranfenicol, Gentamicina, Cicloheximida y 10% de sangre de carnero (BHI sangre C+G+C) Los antbitcos aadidos inhiben el crecimiento de la mayora de las bacterias y hongos saprotos (aunque tambin de algunos hongos patgenos). La incorpo- racin de sangre de carnero mejora el crecimiento de hongos dimrcos. Medios de aislamientos especiales: Medio de patata Se prepara con pulpa de patata como base y, al ser un medio muy pobre, se utli- za para estmular el desarrollo in vitro de las estructuras de reproduccin sexual de la mayor parte de los hongos. Tambin estmula la produccin de pigmentos en hongos como por ejemplo, T.rubrum. Se puede aadir zanahoria y bilis (para favorecer la obtencin de clamidosporas de Candidaalbicans) o glucosa/dextro- sa (para diferenciar Trichophytonrubrum). Medio de arroz Medio a base de granos de arroz blanco que se utliza para diferenciar Microspo- rumauduinii(que no se desarrolla en este medio) de otras especies de Micros- porum. Ilustracin 13 Preparacin de medios con celulas vivas 35 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Medio de Czapek Se utliza para estmular las caracterstcas diferenciales de Aspergillusspp. y para estmular la lamentacin de Sporothrix schenckii. Medio de Alpiste Es el medio indicado para deteccin deCryptococcusneoformans. Esta levadura es la nica conocida actualmente, de inters clnico, que produce la enzima fenoloxidasa. El agar de Alpiste contene sustratos para esta enzima por lo que el crecimiento de Criptocco se detecta por la formacin de colonias de color pardo. Medio Chromagar Candida Es un medio diferencial que permite la identcacin presuntva de algunas especies habitualesde Cndida en funcin del color y morfologa que adoptan cuando crecen en este medio. Puede utlizarse como medio para aislamiento primario. El agar papa dextrosa (APD) Es un medio de cultvo microbiolgico comn que se realiza a partr de la infu- sin de patata y dextrosa. Es el medio ms utlizado para los hongos que crecen y las bacterias que atacan a las plantas vivas o materia en descomposicin de plantas muertas. 1.11 Reproduccin 1.11.1 Reproduccin de las levaduras o Saccharomycetos La mayora de las levaduras se multplican por gemacin. Por este pequeo pro- cedimiento se desarrolla una pequea yema en la pared de la clula madre, con- teniendo todas las estructuras fundamentales de ellas; gradualmente, aumenta su tamao, se desarrolla una membrana y se estrangula por el punto de unin 36 Manual de Micologa Veterinaria de ambas clulas para quedar convertda en un nuevo ser independiente. Cuan- do las circunstancias del medio y las disponibilidades de principios nutritvos son favorables, las levaduras maduras pueden producir numerosas yemas. La produccin de ascosporas es distnta de la formacin de endosporos que rea- lizan las bacterias. Una levadura tpica produce ocho esporas, mientras que cada bacteria solo produce un esporo. Parece ser que la formacin de las ascosporas de las levaduras no est inuenciada por los factores que estmulan la produc- cin de esporos bacterianos, por lo que parecen representar un proceso repro- ductvo, ms que una fase de descanso en la vida celular. Las ascosporas se forman solamente en presencia de agua, cuando la clula est bien nutrida y la temperatura oscila en torno de 25C. El asca resulta de la fusin de dos levaduras que actan como gametos. El contenido de una clula pasa a la otra a travs de un minsculo tubo o canal de copulacin. El ncleo de la nueva clula formada se divide en el nmero preciso de partes para formar ascosporas, cada una de las cuales, junto con el protoplasma circundante, se rodea de una membrana. 1.11.2 Reproduccin de los Mohos o Hyphomycetos En los mohos la reproduccin consiste simplemente en la formacin de esporas, que germinan y dan origen a lamentos ramicados. Las esporas pueden ser de origen sexual o asexual, siendo ms frecuente lo primer.La morfologa de las par- tes en que habrn de originarse las esporas es diferente en los distntos mohos. En las formas asexuadas hay tres tpos: los que forman un receptculo o spo- rangium (esporangio); los que originan esporas no capsuladas, conidias; las re- sultantes de la fragmentacin de la hifa en segmentos: oidios y clamidosporas. Ilustracin 12 Esporangio Ilustracin 13 Conidias Ilustracin14 Clamidosporas Ilustracin 15 Hifas 37 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes El esporangio se forma en el extremo de una rama, el esporangiforo, a partr de un lamento hifal diferenciado con nes reproductvos. El extremo aumenta gradualmente de tamao, formando una columnilla (columnilla) y las esporas estn contenidas en el receptculo hasta su madurez. Cuando la han alcanzado se rompe el esporangio como lo hace una vaina de legumbre, y las esporas se liberan. En la formacin de conidias las hifas portadoras de las mismas se llaman coni- diforos y llevan aquellas en sus extremos. Hay dos tpos de conidiforos en los mohos ms frecuentes. En el gnero Penicillium el conidiforo se ramica en sus extremos y al nal de cada rama se desarrollan las conidias formando largas cadenas. Las ramas de cada conidiforo se mantenen estrechamente unidas de modo que ellas y las cadenas de conidias formadas dan la apariencia de brocha. El termino Penicillium es una palabra latna que signica brocha pequea, pin- celito. En el gnero Aspergillus aparece un abultamiento bulboso, el basidio, en el ex- tremo del conidiforo; cubriendo completamente el basidio se forman peque- as proyecciones (esterigmas) y de ellas nacen las conidias. Estas esporas, como en el caso anterior, se unen unas a otras y forman largas cadenas que cubren totalmente la parte distal del conidiforo. Por cualquiera de estos dos procedi- mientos se forman gran nmero de esporas o conidias. Esto explica porque los mohos son tan prolcos. Los oidios se forman al romperse las hifas en segmentos de apariencia espo- rular. Algunos creen que tales fragmentos representan fases de descanso de la clula aunque, al parecer, poseen todas las propiedades de las esporas. Algunos hongos, partcularmente el del tzan de los cereales, forma unas esporas llama- das clamidosporas. No hay una distncin precisa entre oidios y clamidosporas. No obstante, estas dos ltmas son de color marrn oscuro y de pared engrosada. Se forman en puntos irregulares a lo largo de las hifas y no parecen ser el resultado de un proceso de fragmentacin. 38 Manual de Micologa Veterinaria La reproduccin sexual de los mohos solamente se presenta en las especies de micelio no tabicado, de las cuales es un buen ejemplo Mucor mucedo. Es este modo de reproduccin se forman esporas sexuales, las zygosporas, como resul- tado de la fusin de dos hifas sexualmente diferenciadas. Despus de esta fusin tene lugar la artculacin de dos gametos y dos suspensores. Luego se desarrolla la pared celular y se engruesa formando la Zygospora toda- va sostenida, por las partes suspensoras del moho. Al madurar, la Zygospora se libera de la clula madre y puede funcionar como cualquier otro tpo de moho. En medios favorables puede germinar formando un tronco esporngico. Las colonias de los distntos tpos de mohos son diferentes. Algunos crecen en forma de masas algodonosas resueltas que cubren rpidamente el objeto sobre el que el moho crece. Otros dan lugar a colonias algodonosas pequeas. Otras forman colonias bajas, planas y aterciopeladas. Unos pocos producen colonias cretceas, todas las colonias de mohos tenen colores, que deben a las esporas, entre ellos el negro, azul, verde y marn. El color es un elemento de clasicacin. Los mohos no tenen mucha importancia como productores de enfermedad. As- pergillusfumigatusse halla en numerosas especies de mamferos y aves produ- ciendo pulmonas que reciben el nombre de aspergilosis. Unas pocas especies de las claramente patgenas son parasitas de la piel del hombre y de los anima- les, en los que producen las tas. 39 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes En la clasicacin se establece una gran divisin de los hongos Eumicetos en dos grupos principales, teniendo en cuenta el carcter morfolgico estudiado ya, o sea, si es septado su micelio o no es septado. Los Ficomicetos son aquellos en el que micelio no es septado y unicelular y Micomicetos aquellos en que el micelio es septado y pluricelular. 1.12 Clases Oomicetos y Zigomicetos (Caracteres generales) Pertenecen a este grupo, los hongos que sus micelios no presentan septas, y por lo cual las sustancias citoplasmtcas son capaces de moverse a todo lo largo de las hifas por un fenmeno de evaporacin. En cultvo viejos suelen aparecer septas, pero de una forma muy poco frecuente, por lo cual, no se tene en cuen- ta de manera preponderante para la clasicacin. Las hifas suelen tener varios ncleos por lo que se les ha llamado hifa cenoctca, y son lamentosas. (Garca, 1985). Su reproduccin puede efectuarse mediante procesos sexuales o asexuales, y cuyos esporos reciben diferentes nombres de acuerdo a sus orgenes. En los procesos sexuales las clulas poseen una cierta diferenciacin. Los gneros pertenecientes a las clases Oomicetos y Zigomicetos son de gran in- ters como contaminantes de los alimentos; ejemplo: Mucor, Rhizopus y otros. Oomicetos: Reproduccin sexual y asexual En esta clase, la presencia del micelio es constante, abundante y contnua, pero no es raro encontrar algunas septas, las cuales con frecuencia tenden a des- orientar al identcar sobre todo cuando son cultvos viejos sin esporulacin. Se reproducen por zooporos o ciliosporas, conidios o esporangiosporos de forma asexual y por gametos heterogmicos llamados oogonios y anteridios.(Garca, 1985). 40 Manual de Micologa Veterinaria Oomicetos: Reproduccin sexual En este grupo se presenta la reproduccin sexual por copulacin de dos clu- las desiguales (heterogamia). En la misma, encontramos un rgano femenino llamado oogonio, en cuyo interior est presente una o varias clulas gruesas e inmviles que se denominan oosfera. Otro rgano se presenta, el masculino, ste recibe el nombre de anteridio, el cual en el momento de la copulacin se aproxima o inclina sobre el oogonio y desarrolla un tubo por el que se vierte todo el contenido en el oogonio, efectundose la fusin de dos ncleos, origi- nado una clula diploide de gran tamao y de doble membrana, muy resistente llamada oospora. Oomicetos: Reproduccin asexual La reproduccin asexual se efecta en unas cavidades globosas que reciben el nombre de esporangios y en su interior se encuentran los esporos o esporan- giosporos. El nmero de stos es variable pero casi siempre aparecen en grandes cantdades originndose por divisiones sucesivas del ncleo. Cuando los espo- rangios se desgarran rompindose su membrana, dejan en libertad los esporan- giosporos, cuando son mviles reciben el nombre de zoospora o ciliosporae. Clase Zigomicetos: Reproduccin sexual o asexual La clase Zigomicetos se caracteriza por tener un micelio bien desarrollado, sin una diferenciacin muy clara entre las clulas sexuales. (Garca, 1985). Presentan un micelio copiosamente ramicado, sin tabiques en la fase juvenil, pero pueden formarse en las fases adultas (etapa reproductva). Las membranas estn formadas de quitna. Se reproducen asexualmente, yema- sin o clamidosporas y esporangiosporas. Sexualmente por clulas del mismo micelio (homotalicas) o de micelios diferentes (heterotalicas) con produccin de clulas que reciben el nombre de zigosporas, carcter sumamente importan- te para distnguir y clasicar esta clase. 41 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Estos hongos pueden ser saprotos y parsitos y se encuentran sumamente dis- tribuidos en la naturaleza. Zigomicetos: Reproduccin sexual La reproduccin sexual en los Zigomicetos se efecta por medio de dos clulas iguales (isogametos), siendo este tpo de reproduccin isogmica (Garcia, 1985). En la fecundacin se puede observar la aparicin de dos hifas sexuales idntcos cada una con una prolongacin con el n de aproximarse y poderse tocar, para que se pueda dar la migracin de los ncleos a estas nuevas prolongaciones, las membranas se absorben, los ncleos se funden (diplodia) y se aslan con una fuerte cutcula membranosa formando un cuerpo ms o menos cilndrico de color oscuro que recibe el nombre de zigospora la cual no queda libre sino adherida a los dos pednculos formados. Zigomicetos: Reproduccin asexual La reproduccin asexual tambin se realiza en los sigomicetos y se da por me- dio de esporangiosporos contenidos dentro de clulas especializadas llamadas esporangios al igual que en los Oomicetos las cuales son sostenidas por otras clulas llamadas esporangioforos que ms tarde se separarn por medio de un tabique, se invagina formndose una estructura denominada columnella por su forma. Los esporangiosporos se originan a partr del plasma que existe entre la colum- nella y la membrana del esporangio, el cual se granula y transforma en espora uninucleadas que en esta clase no son mviles diseminndose por medio del aire o agua cuando la pared del esporangio que los contene se rompe. 1.13 Clase Ascomicetos (Caracteres generales) 42 Manual de Micologa Veterinaria Los Ascomicetos, tenen el micelio constantemente tabicado con clulas uninu- cleadas y raramente polinucleadas. La membrana celular es extremadamente na y de naturaleza quitnosa. Son hongos que se reproducen por medio de ascas, por ello se les otorga ese nombre. stos son rganos en forma de bolsa, los cuales contenen por regla general de cuatro a ocho esporas llamadas ascos- poras de origen endgeno, o sea, que se forman dentro del asca. (Garca, 1985). El ciclo de desarrollo de los Ascomicetos en ocasiones es extremadamente com- plejo porque adems de reproducirse por ascas como producto de un proceso sexual, se reproducen tambin por vas asexuales vegetatvas como yemas, coni- dios, picnidios, ceremios, etc. El micelio vegetatvo tene crecimiento apical y puede alcanzar un gran desarro- llo. En condiciones especiales, puede adoptar formas o estadios de vida latente o amortguadas, y un gran nmero se hifas se entrecruzan y revisten de sustancias protectores formando un pequeo corpsculo duro y parecido a la cabeza de un aller de color oscuro, en algunos casos, llamado esclerocio. Este es uno de los recursos en que el hongo se vale para resistr perodos desfa- vorables y acumular sustancias de reservas y grasas. Tras un periodo de descan- so el esclerocio puede germinar de nuevo, dando lugar a un nuevo individuo. Estos organismos se han adaptado a una vida saproftca o simbitca como los de micorrizas o parasitaria y extrayendo de las sustancias nutritvas de otros or- ganismos. Estudiaremos tres formas de reproduccin sexual de las cuales pasaremos a des- cribir a contnuacin. Reproduccin sexual A) Por conjugacin de dos clulas aparentemente idntcas Esta forma de reproduccin se origina al intervenir dos clulas, las cuales se aproximan y emiten una pequea prolongacin a la que emigran y penetran los 43 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes ncleos disolvindose las membranas en la zona de contacto y unindose los ncleos, formndose un zigoto. El zigoto se subdivide en 2, 4 y 8 ncleos que originan otras tantas ascosporas. Esta forma de reproduccin sexual es muy sim- ple, en el cual dos clulas o gametos son capaces de formar un asca. Es el proceso tpico de reproduccin sexual de las levaduras en el cual se forma un asca con ocho arcosporas en su interior, por lo cual se clasican en esta clase: Dos individuos antes de la copulacin. 1. Fases sucesivas de la copulacin apareamiento horizontal 2. Fases sucesivas de la copulacin fusin de los ncleos 3. Divisin del ncleo en 8 ncleos hijos 4. Formacin de 8 ascosporas 5. Ncleo B) Por fusin de dos clulas miclicas Este tpo de reproduccin sexual se presenta en la levadura Eremascusfertlis en la cual las hifas sexuales del micelio no dieren de las hifas vegetatvas. La copu- lacin se realiza con la siguiente secuencia: Dos lamentos se aproximan, forman un pequeo pico o prominencia, los n- cleos de las mismas se dividen en dos, mientras las membranas se disuelven, los ncleos pasan al divertculo y se unen, se tabica, quedando los otros dos en las respectvas clulas basales. Realizada la copulacin, siguen varias divisiones nucleares y se producen de 4 a 8 ascosporas. La copulacin puede ser de hifas iguales como en este caso o de hifas distntas. . C) Por fusin de rganos denidos: Ascogonios y Anteridios con formacin de un ascas En esta reproduccin sexual existe cierta analoga con los Oomicetos y se efec- ta mediante rganos de copulacin isogmicos y heterogmicos. En las formas 44 Manual de Micologa Veterinaria superiores, existe una diferenciacin morfolgica de hifas copuladoras llamadas Ascogonios o carpogoneos (femeninas) e hifas masculinas llamadas anteridios. La copulacin se lleva a cabo de la siguiente forma: Hifas del micelio comienzan a agrandarse e hincharse convirtndose en Asco- gonios los cuales poseen un apndice llamado tricogina, siendo ambos polinu- cleados . Al mismo tempo, junto al ascogonio se desarrolla una gruesa hifa, llamada anteridio, tambin polinucleada. Inmediatamente la tricogina se pone en contacto con el anteridio, tambin polinucleada, y el contenido nuclear del anteridio pasa a la tricogina. El tabique que separa al ascogonio y la tricogina se disuelve y penetran los ncleos en el ascogonio, situndose todos en la periferia sin unirse (dicarin). El ascogonio, desarrolla una serie de prominencias que se ramican y forman hifas ascgenas, hacia las cuales emigran los ncleos sin unirse. Estas hifas son binucleadas y a partr de ellas se formarn las ascas por repetdas divisiones. Ms tarde comienzan sucesivas divisiones nucleares de dos, cuatro y ocho n- cleos hasta la posterior formacin de las ascosporas. Cuerpos fructferos En los ascomicetos de organizacin ms elevada, las ascas se mantenen en cuer- pos fructferos o esporofrutos especiales, en forma de pequea copa abierta en lo alto, llamados apotecios (apo: separacin y theca: casa) en cuya supercie se disponen alineados, como en una empalizada las ascas (clulas frtles) y los parsos (hifas estriles) cuya funcin es la de proteger las ascas y a veces pro- vocar la salida de las ascosporas. (Garca, 1985). La supercie del aparato reproductor se llama himenio y da lugar a las ascas. 45 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Por el contrario si el cuerpo esporfero est rodeado completamente de hifas estriles, de forma que el himenio se halle en una cavidad cerrada o con un poro que la pone en comunicacin con el exterior, entonces se llame peritecio. Cuando es completamente cerrado se llama cleistotecio. Reproduccin asexual La reproduccin asexual en los ascomicetos se efecta principalmente por co- nidios y por clamidosporas siendo el gnero Aspergillu es un ejemplo claro de este tpo de reproduccin. Los conidios se forman sobre clulas especiales llamadas conidiforos y perfec- tamente distnguibles del micelio comn fungoso. La formacin condica tpica se puede estudiar en uno de los gneros, ms descritas de los ascomicetos, el Aspergillus. Las clulas especializadas o conidiforos se pueden modicar dando lugar a unas estructuras llamadas esterigmas en algunas familias y alides en otras y la formacin de conidios sobre ellas se puede realizar de dos formas: por fragmen- tacin o empuje. En el primer caso, el conidio o alospora como suele observarse, en lugar de desprenderse en segmenta, dando lugar a una nueva espora en cuyo caso la espora terminal es la ms joven y la ms pequea. Por otro lado, en el segundo caso, el conidio se desprende al ser empujado por otro conidio de formacin posterior y en cuyo caso la espora terminal es la mayor y ms vieja. Tambin en los ascomicetos se pueden formar clamidosporas aunque de una forma poco frecuente y no es ms que una diferenciacin de una clula de una hifa ya sea central o terminal que aumenta su tamao se redondea, engruesa y recubre de una gruesa membrana. 46 Manual de Micologa Veterinaria 1.14 Clase Basidiomicetos (Caracteres generales) Los hongos pertenecientes a esta clase, presentan un micelio binucleado, con crecimiento terminal y membranas celulares muy quitnizadas. Poseen clulas especializadas llamadas basidios, que generalmente son redondos y mazudos donde se desarrollan pequeos pednculos denominados esterigmas, cuya fun- cin es sostener a las esporas y basidiosporas. El basidio es muy similar al asca en cuanto se reere a su papel como clula ma- dre y procesos citolgicos que en ella se producen, pero la gran diferencia entre ellos es la disposicin de las esporas internas en las ascas, y externas en los ba- sidios. Las esporas o basidiosporas, son clulas redondeadas, elptcas, globosas o alargadas, aunque puede ser constante para cada especie, y normalmente es de cuatro. (Garca, 1985). Al germinar dan un micelio vegetatvo uninucleado, llamado micelio primario (haploide) y un micelio secundario binucleado, que se origina por la fusin de dos micelios primarios sexualmente diferenciados (diploide). En los basidiomicetos, no existe una diferenciacin muy denida de los rganos sexuales como en los ascomicetos. 47 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Capitulo 2. HONGOS PATGENOS Las enfermedades mictcas sern clasicadas segn donde ellas causen pato- logas y localizacin en: Superciales o cutneas y Profundas o viscerales. (Morejn y Navarro 2011). Micosis superciales o cutneas Son adquiridas por contacto directo de las personas o animales afectados con los hongos, los dermatotos son los principales productores de estas micosis, ejemplo: la ta, causada por Tricophitom verrucosum, Microsporium Haemi- dendrum, etc. Los dermatotos se clasican en: a) Gelos, aquellos que se hallan en el suelo y pueden afectar a los animales y al hombre, por ejemplo, Microsporumgypseum. b) Zooflicos, aquellos que parasitan en los animales y pueden contagiar al ser humano, por ejemplo, Microsporumcanis. c) Antropoflicos, los que viven exclusivamente sobre el humano o sea, son hus- ped permanente. Los animales son resistente a contraer la infeccin. Ejemplo el contagio con Epidermophytonocasum. Micosis profundas o viscerales Se adquieren en lugares contaminados donde las esporas son inhaladas por el hombre o por los animales, o a travs de heridas originadas por fragmentos vegetales que contengan el hongo. Una vez en el organismo; este se transforma para asentarse en los tejidos y adquiere formas redondas, estrelladas levaduri- formes, de cigarro, etc. Despus, invaden y pueden llegar a vencer las barreras de defensa que el husped presenta con el n de eliminarlo, por esta cuestn es muy difcil que ocurra. 48 Manual de Micologa Veterinaria Los mohos toxignicos producen intoxicaciones alimentarias, las que ocurren cuando se ingieren alimentos contaminados con metabolitos txicos produci- dos por los mohos de la ora de campo o del deterioro avanzado a este tpo de presentacin se le conoce con Micotoxicosis y no es considerada una micosis. (Ministerio de educacin de la Habana, 1992). Entre las enfermedades mictcas ms importantes se hallan: la tricotosis bo- vina (ta), causada por Trichophytum verrucosum; la candidiasis, producida por Candida ssp; la histoplasmosis, ocasionada por Histoplasmacapsulatum; la as- pergilosis, provocada por AspergillusFumigatus, y la criptococosis, originada por Cryptococeusneoformans. Los factores ecolgicos desempean un papel destacado en el crecimiento de los mohos y levaduras, y en la produccin de sus toxinas. De todos estos, los facto- res fsicos son los ms importantes e incluyen: la humedad, la temperatura y la luz y sin obviar la accin del PH. Los hongos se cultvan en condiciones aerobias, a temperatura de 22-37C, en medios que contengan sustancias nitrogenadas y carbonadas. Crecen en un pH que oscila entre 3 y 10, el valor ptco es de 6-6,5. El oxigeno y el dixido de car- bono, de los factores qumicos, son los que ms intervienen en su desarrollo. En general, los factores nutricionales son de gran importancia, al igual que los bio- lgicos, entre los cuales desempea un papel fundamental la ora compettva. rganos que afectan y patologas provocadas Entre los hongos que producen lesiones superciales se destacan los dermato- tos, los cuales afectan la piel, las uas y el cabello, y tene gran anidad con la queratna de estas regiones; adems perforan el cabello o adelgazan ciertas partes de este. En el caso de la piel, esta puede presentar costras internas, in- amacin frecuente, prurito; en ocasiones las lesiones estn acompaadas por ppulas, vesculas y pstulas. Un ejemplo de esto se tene en las tas y en las candidiasis. (Ministerio de educacin de la Habana, 1992) 49 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Las mucosas tambin se afectan con la formacin de manchas cremosas hme- das, la irritacin, los eccemas, las vesculas, las pstulas e incluso las lceras. Entre las enfermedades de este tpo estn las siguientes: maquet o sapillo, que se caracteriza por lesiones en los labios, encas, lengua y faringe; boquera, con lesiones o suras rojas, resultantes de sustancias blanquecinas en la comisura de los labios; vulvovaginits, con formacin de eccema, vesculas y lceras; y la balanopostts, con enrojecimiento del glande con descamacin y prurito, etc- tera. En cuanto a las enfermedades profundas o viscerales se observan lesiones en pulmones con presencia de briosis, como: en la histoplasmosis, granuloma y las aspergilosis, estas hacen metstasis y producen meningits y sinusits. Otros rganos afectados son los msculos y los huesos, por la presencia de fstulas y grnulos, como ocurre en la maduromicosis o pie de madera. El numeroso grupo de plantas que carecen de clorola, se agrupa bajo el tr- mino general hongos. En la mayora de las especies colocadas en este grupo, los lamentos vegetatvos individuales se llaman hifas. La planta en conjunto suele formar una masa enmaraada llamada micelio. En condiciones optmas de crecimiento, las hifas producen yemas y ramas, algunas de las cuales se sepa- ran de la clula madre, formando clulas hijas. En la levadura este es el mtodo habitual de divisin. En la mayora de los hongos las partes recientemente for- madas permanecen unidas, aunque las clulas aparezcan individualizadas por un tabique o septo. Esta morfologa es corriente entre los mohos septados o tabicados. Sin embargo, algunos de estos no forman tabiques separadores en las hifas vegetatvas; se llaman mohos no tabicados. La clasicacin de este grupo de plantas est sujeta a revisin, como ocurre tambin con las bacterias. La mayora de las especies de hongos, se han aislado de la naturaleza. Muchos de ellos son patgenos para plantas, pero la mayora se consideran de vida libre, es decir, que carecen en cualquier medio natural que les proporcione alimentos.Un cierto nmero de hongos se ha hecho parasito de los tejidos animales, produciendo variadas enfermedades. En la mayora de los casos, estos procesos permanecen localizados en el lugar afectado. 50 Manual de Micologa Veterinaria 2.1 Divisin del reino Fungi La clasicacin del reino vegetal divide al reino Fungi en seis grupos 1. Schizomycetos, o bacterias; no necesitamos describirlo ms. El otro grupo incluye las plantas llamadas corrientemente hongos o ms comnmente levadu- ras, mohos, setas, tzones, etc. 2. Basidiomycetos, estas plantas se conocen popularmente como setas, yescas y tzones. Se reproducen por medio de basidiosporos, que se forman en deter- minadas estructuras reproductoras. Los miembros de este grupo viven saprotamente sobre la vegetacin en vas de putrefaccin, pero algunos de ellos, como los tzones, son parsitos de plantas. Ninguna de las enfermedades de los animales es producida por hongos de este grupo. 3. Ascomicetos, estn representados por el tpico moho de las plantas. Los cuer- pos vegetatvos o hifas, consttuyen un micelio y producen un rgano caracters- tco reproductor, el asco, en el cual se desarrollan las esporas. Estos hongos son muy numerosos, pero la mayor parte son saprotos o parsitos de las hojas y corteza de las plantas. 4. Mixomicetos, se llaman corrientemente mohos mucilaginosos. En ciertos es- tadios se parecen a los protozoos, mientras que en otros son ms parecidos a las plantas. En consideracin a su ciclo vital total se clasican se clasican entre las plantas. Varios miembros del grupo producen enfermedades en las plantas, pero no est demostrado que puedan causarla en los animales. 5. Ficomicetos, la mayora de los miembros de este grupo forman un micelio vegetatvo. La mayor parte de ellos se reproduce por medio de un cuerpo agea- do y algunas de las formas ms primitvas recuerdan a los protozoos ageados. Muchas de las especies de este grupo son saprotas o parasitas de plantas, pero unas pocas se encuentran en peces e invertebrados. Solamente un grupo, es de las Mucorales, contene especies de inters para la salud animal. 51 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Hongos Imperfectos (Fungi Imperfect); en este grupo se sitan un gran nmero de hongos que todava no estn completamente estudiados y para los que no se ha adoptado una clasicacin satsfactoria. Muchas de las especies patgenas de hongos que afectan a los animales, son hongos imperfectos. (Merchant y Packer, 1980). 2.2 Clasicacin de los hongos patgenos La clasicacin de los hongos para el hombre y los animales sigue dos mtodos. Uno se basa en la morfologa y el otro en el tpo de enfermedad producida (su- percial o profunda). Toda clasicacin de un agente infeccioso, excepto la de los virus ltrables, que se base en la especie animal afectada o en el tpo de tejido infectado, puede conducir a fusionismo. Adems, existe el peligro de hacer creer al estudiante que el agente infeccioso solamente se encuentra en un tpo de tejido. Se admite que, por lo que respecta a los hongos patgenos, esta clasicacin puede ser admisible desde el punto de vista mdico. Las variaciones morfolgicas de estos microorganismos son tan complejas, que la clasicacin sistemtca es suma- mente difcil, y los clnicos patlogos, en general, no estn interesados primor- dialmente por la taxonoma. (Merchant y Packer, Tercera Edicin, 1980). La edicin bsica empleada en 1949, de la Medical Mycology (Micologa Mdica) de Swartz, es valiosa. Una clasicacin basada en la morfologa es la siguiente: I. Levaduras y hongos levaduriformes. a. Perfectos. b. Imperfectos. II. Hongos productores de tas. III. Otros hongos imperfectos patgenos. 52 Manual de Micologa Veterinaria La segunda clasicacin divide a los hongos en dos categoras: I. Superciales. II. Profundos. Una tercera clasicacin o lista se basa en el papel patgeno de los hongos: teji- dos atacados y enfermedad producida. En este captulo adoptaremos la siguiente clasicacin: I. Ficomicetos Blastomicetos (levaduras). II. Dermatotos (hongos de las tas). III. Hongos imperfectos (microorganismos dimrcos que tenen fase de levadu- ra y fase de hongo). Esta clasicacin u orden de exposicin, solamente se emplea por considerarla conveniente con nes expositvos y no tene base morfolgica. 2.3 Ficomicetos Los mohos de este grupo no se sabe que produzcan en los animales enfermeda- des especicas, pero en algunos procesos morbosos se han encontrado especies de los gneros Mucor, Absidia y Rhizopus. La enfermedad provocada por estos gneros se denomina mucormicosis ya que son considerados hongos del or- den mucorales. Las cepas ms termorresistentes ms patgenas MucorSpp. Que se clasica en un nuevo gnero denominado Rhizomucor. Estos hongos monomrcos ubicuos son habitantes comunes del suelo, estrcol y material en descomposicin. Las infecciones son a menudo oportunistas y secundarias a trastornos como la acidosis metablica o la inmunodepresin. 53 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Los hongos causan ppulas cutneas en las tortugas y lesiones granulomatosas en varios rganos de distntas especies, bovina, porcina, ovina, equina, cani- na, felina y algunos animales salvajes por ejemplo primates, roedores y aves. Las lesiones pueden ser locales que afectan la supercie corporal, los ganglios linftcos y parte del aparato gastrointestnal y tambin de manera de manera diseminada, con las lesiones en los diversos rganos. La mucormicosis es espe- cialmente importante como causa de placentts y abortos en los bovinos. 2.3.1 Gnero Mucor Los mohos del genero Mucorhan sido aislados de tejidos animales infectados. En 1880. Bollinger encontr Mucorracemosus en el aparato respiratorio de aves, un microorganismo similar fue aislado de las fosas nasales de ovejas por Zurn y de un tumor del caballo por Frank Gilman y Frank aislaron un Mucor del tejido placentario de una vaca, Bendixen y Plum, en Dinamarca, tambin lo encontra- ron examinando placentas bovinas. Jungherr. En Connectcut, hallo una especie de este gnero, MucorPusillus, en infecciones mictcas de la placenta bovina (Merchant y Packer, 1980). Los mohos de gnero Mucor estn muy difundidos en la naturaleza. Se recono- cen por el micelio algodonoso que forman en medios apropiados. El micelio no produce estolones o rizoides. Los esporangioforos producidos por estos hongos son nicos, erectos y generalmente simples, aunque a veces se observan rami- caciones. Cada rama termina en un esporangio que contene un elevado nme- ro de esporangiosporas. (Ministerio de educacin de la Habana, 1992). Clnica y lesiones Los signos generalmente no son especcos y varan de acuerdo a los rganos que afectan. Algunos animales con lesiones focales o diseminadas pueden mos- trarse asintomtcos; otros, en cambio pueden presentar neumona con respira- cin estertrea, supercial y rpida; secrecin nasal, derrame pleural y pleurits. La mucormicosis puede causar anorexia, pirexia y diarrea persistente, en caso de afeccin cerebral se han observado trastornos neurolgicos. 54 Manual de Micologa Veterinaria Las lesiones nodulares presentes en los ganglios linftcos, hgado, pulmones y riones (en cerdos y el ganado bovino), pueden ser slidas o cavitadas y su color puede variar del blanco al amarrillo, los ganglios linftcos afectados en el ganado bovino viejo, presentan ndulos tuberculosos amarillentos, de gran ta- mao, aspecto caseocalsicado y broso. En otra forma de la enfermedad se aprecian lceras circulares u ovaladas en los preestmagos y en el abomaso del ganado bovino y en el tracto gastrointestnal de los cerdos (Aiello, 2000.). Diagnstco Es poco habitual establecer el diagnstco antes de la muerte, muchos casos son asintomtcos o los signos son inespeccos. La mucormicosis puede diagnost- carse microscpicamente si se visualizan hifas irregulares anchas, ramicadas, sin tabicar (de 10 a 20 m de ancho) y la reaccin tsular esperada con invasin vascular, trombosis, necrosis. Los hongos pueden identcarse en cortes de tejido mediante las tcnicas de inmunouorescencia utlizando antcuerpos marcados con uorescena espe- ccos para cada uno de los gneros Mucor. Es necesario hacer cultvos para identcar la especie del hongo infectante y para conrmar el diagnstco debe recobrarse el mismo hongo en varias muestras tomadas del animal muerto. La serologa es tl para el diagnstco de aborto en bovinos causados por More- rellawoli(Aiello, 2000). Ilustracin 16 Cultvo en placa con agar PDA del hongo del gnero Mucor 55 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Tratamiento La aplicacin tpica de verde malaquita ha resultado efectva en el tratamien- to de la mucormicosis cutnea en animales marinos como la tortuga. En otras especies en las que se encuentran estas mismas lesiones ha funcionado muy bien la escisin de las lesiones superciales focales y la administracin local de la anfotericina B, obtenindose de este modo resultado variable (Aiello, 2000). 2.3.2 Gnero Absidia Una especie, Absidiaramosaha sido sealada en los animales. Villemin encontr este hongo en las lesiones nasales y adenits submaxilares del caballo. Chris- tansen lo aisl de una enfermedad pseudotumoral generalizada del cerdo, y Bendixen y Plum lo encontraron en membranas placentarias bovinas infectadas. Los miembros del generoAbsidia son similares a los del Mucor, pero el micelio forma estolones y rizoides. Los esporangioforos son erectos, pero aparecen en grupos de dos a cinco, naciendo de un estoln. Los esporangios son piriformes. (Merchant y Packer). 2.3.3 Genero Rhizopus En 1920, Theobald Smith aisl a un moho de las membranas fetales de un feto bovino. Este hongo fue denominado RhizopusEquinusrhizopodiformis, pero Do- dge la considera como Rhizopus rhizopodiformis (R. cohnni) fue hallado en el tejido placentario bovino por Jungherr. Ilustracin 17 Cigospora madura de A.coerulea 56 Manual de Micologa Veterinaria El gnero Rhizopus produce un micelio que se parece al de los otros dos gneros. Los estolones del micelio areo se unen al medio en los nudos. De estos nacen los esporangios en grupos o aislados. 2.4 Blastomicetos Los blastomicetos o levaduras son clulas ovales o redondas que se multplican mediante un proceso de gemacin. Las yemas recientemente formadas perma- necen unidas a la clula madre hasta alcanzar la madurez, en cuyo momento forman, a su vez, nuevas yemas. En algunos casos, las clulas maduras se se- paran de la materna, pero en otros, cierto nmero de ellas permanecen unidas formando largas cadenas. (Merchant y Packer) La enfermedad conocida como Blastomicosis es provocada por la especieBlas- tomycesdermadis, se caracteriza por la existencia de lesiones piogranuloma- tosas en varios tejidos. Pero esta enfermedad es ms comn en el humano y se observa en los perros y los gatos, se ha descritos en especies como el caballo y otros animales silvestres, parece no causar ninguna afeccin al ganado bovino, ovino ni porcino, esta es una enfermedad muy restringida a cuencas y ros de Norteamrica y a algunos lugares donde los suelos son hmedos, cidos y ricos en vegetacin en estado de descomposicin. Ilustracin 18 Cultvo de R.cohnni 57 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Este microorganismo se ha podido aislar en el guano de murcilagos y de palo- mas, es por eso que es necesario la descripcin de este hongo. El conidio infect- vo es liberado por el ambiente, principalmente por las lluvias, el roco o la niebla que logran aerolizar al agente y de este modo es inhalado. Cuando las defensas respiratorias estn disminuidas o anuladas, se produce la diseminacin de la enfermedad por va hematgena. Las lesiones cutneas pueden ser el resultado de una entrada primaria a travs de la piel o, ms comnmente como un foco pulmonar. * Clnica y lesiones La clnica de esta enfermedad van a variar de acuerdo al rgano que afecta y los signos no son inespeccos, la prdida de peso puede acompaarse de tos, anorexia, disnea, trastornos oculares, cojeras, lesiones cutneas y ebre. La pre- sentacin de la blastomicosis en perros son frecuentes los sonidos pulmonares secos y speros. En la blastomicosis torcica, la radiografa de trax muestra predominante densidades interstciales nodulares difusas y un patrn pulmonar mixto. Es comn que los ganglios linftcos bronquiales estn muy agrandados y aparezcan como masas densas en las radiografas. Las lesiones de la piel pueden consistr en granulomas proliferatvos y abscesos subcutneos que tenden a ul- cerase y a drenar una secrecin serosanguinolenta. (Aiello, 2000). A menudo se ven involucrados el plano nasal, la cara y el lecho ungueal, son las zo- nas afectadas ms frecuentemente. Los signos clnicos de la blastomicosis ocular pueden consistr en ceguera, uvets, glaucoma y desprendimiento de la retna. Los signos del SNC; Se presentan en convulsiones y dcit neurolgico, y pueden apreciarse en la forma diseminada de la enfermedad. En los casos de blasto- micosis urogenital puede haber hematuria, nocturia y disuria con tenesmo. (Aiello, 2000). . 58 Manual de Micologa Veterinaria Las lesiones macroscpicas comprende pocas o numerosas reas de consolida- cin pulmonar, de tamao variable y forma irregular, rmes al tacto y de color gris a amarillo y ndulos en los pulmones y ganglios linftcos torcicos. La di- seminacin puede dar lugar a lesiones nodulares en varios rganos, pero espe- cialmente en la piel, ojos y huesos. Las lesiones cutneas son ppulas nicas y mltples o piogranulomas nodulares supurantes, crnicos. (Aiello, 2000). * Diagnstco En los perros se debe sospechar que se trata de una blastomicosis si se observan ndulos cutneos supurantes y signos de enfermedad respiratoria. En los gatos, el tracto respiratorio es el aparato ms frecuentemente afectado, seguido del sistema nervioso central, los ganglios linftcos regionales, la piel, los ojos y los tractos digestvo y urinario. Los hallazgos radiogrcos en los pulmones consis- ten en ndulos no calcicados o consolidacin pulmonar, as como en agranda- miento de los ganglios bronquiales y mediastnicos. El diagnstco puede esta- blecerse basndose en las muestras tsulares obtenidas por biopsias o aspiracin en las lesiones cutneas, y en el momento de la necropsia, por la presencia del hongo en forma de levadura. Estas blastosporas redondas u ovaladas, de color rosado plido (eosina-hema- toxilina), miden de 8 a 25 m y presentan una pared refractva, de doble contor- no. Pueden estar vacas o contener material nuclear baslo y presentar yemas nicas de base ancha. Generalmente se produce una respuesta inmunitaria con antcuerpos, que puede detectarse mediante la prueba de inmunodifusin en agar gel. La prueba de la inmunodifusin en agar gel presenta una sensibilidad y especicidad (del 90% en los perros, pero pueden encontrarse resultados ne- gatvos) en los DTL gatos con enfermedad diseminada. El microorganismo puede identcarse mediante tcnicas de inmunouorescencia. 59 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes * Tratamiento La enfermedad cutnea primaria, raramente puede persistr durante meses es- taslesiones deben extrparse quirrgicamente. En las fases tempranas de las blastomicosis canina y felina, el tratamiento con ketoconazol a dosis de 10mg/ kg dos veces al da durante dos meses aproximadamente, puede resultar efect- vo. En los casos fulminantes de blastomicosis, se recomienda una terapia com- binada con anfotericina B y ketoconazol. El itraconazol a dosis de 5-10mg/kg/da durante dos mese, resulta efectvo en un aproximado del 54% de los perros con blastomicosis. El pronstco es ms favorable cuando los perros no presentan afectacin pulmonar o esta es leve; es reservado en el caso de los perros con la enfermedad pulmonar moderada a grave; y por ltmo el peor pronstco corresponde a los casos que existen afectaciones del sistema nervioso central. Ilustracin 19 Ndulo supurante, en un perro por B.dermadis 60 Manual de Micologa Veterinaria 2.4.1 Gnero Cryptococcus La criptococosis es una enfermedad mictca sistmica que puede afectar el trac- to respiratorio, SNC, ojos y piel (partcularmente en la cara y cuello de los perros y gatos). El agente etolgico, Cryptococcusneoformans (telemorph: lobasidiella neoformans), se encuentra en el medio ambiente y en los tejidos en forma de le- vadura. Aunque la infeccin presenta una distribucin mundial, no existen reas endmicas conocidas. El hongo se encuentra en el suelo y en los excrementos de las aves, especialmente en las heces de paloma. La transmisin se realiza por la inhalacin de esporas o por la contaminacin de heridas. En los excrementos aviares puede presentarse en forma no encapsulada, de solo 1m de tamao, que pueden inhalarse y llegar hasta lo ms profundo de los pulmones. La cripto- cocosis se puede presentar ms comnmente en perros y gatos, pero tambin ocurre en el ganado bovino caballos, ovejas, cabras, aves y en animales salvajes. En el hombre muchos casos se asocian a un defecto de la respuesta inmunita- ria de tpo celular; probablemente esto puede suceder en animales domstcos. (Ministerio de educacin de la Habana, 1992). * Clnica y lesiones La criptococosis bovina solo se ha descrito en casos de mastts pudiendo afectar muchas de las vacas de un rebao. Las vacas afectadas presentan anorexia, dis- minucin de la produccin de leche, tumefaccin y endurecimiento de los cuar- tos afectados e hipertroa de los ganglios linftco supramamarios. La leche se torna viscosa, mucoide y de color blanco grisceo. Por el contrario, puede ser un lquido acuoso con culos. En los caballos, la enfermedad afecta, casi invaria- blemente, al tracto respiratorio; los hongos proliferan en los conductos nasales, provocando su obstruccin. (Aiello Susan, 2000). En los gatos los signos ms frecuentes corresponden a las vas respiratorias y consisten en estornudos; secrecin nasal unilateral o bilateral mucopurulenta, serosa o hemorrgica; presencia de plipos en los ollares; y una inamacin sub- cutnea de consistencia rme, localizada sobre el dorso de la nariz. Las lesiones cutneas son igualmente comunes y se caracterizan por la presencia de ppulas y ndulos, cuya consistencia vara de uctuante a rme. Las lesiones mayores tenden a ulcerarse, mostrando una supercie desnuda con un exudado seroso. 61 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Los signos neurolgicos asociados a la criptococosis del SNC pueden incluir de- presin, cambios de comportamiento, agresividad, movimientos en crculos, pa- resia y ceguera. Tambin pueden ocurrir anomalas oculares, como pupilas di- latadas sin capacidad de respuesta y ceguera por desprendimiento de retna de tpo exudatvo, coriorrentnits granulomatosa, panofalmits y neurits ptca. Al contrario que los gatos los perros tenden a sufrir una enfermedad disemi- nada grave y la mayora presenta sintomatologa nerviosa central o afectacin ocular. Los signos clnicos suelen corresponder a la meningoencefalits, neuri- ts ptca y coriorrentnits granulomatosa. En algunos perros se ha descrito le- siones en el tracto respiratorio, generalmente en los pulmones, y la mayora presentan granulomas distribuido por todo el cuerpo. Los rganos involucrados ms frecuentemente, en orden decreciente, son los riones, ganglios linftcos, bazo, hgado, troides, glndulas adrenales, pncreas, huesos, tracto digestvo, msculos, miocardio, prstata, vlvulas cardacas y amgdalas. Las lesiones aso- ciadas al criptococosis varan desde una masa de consistencia gelatnosa, const- tuida por numerosos microorganismos, que apenas producen inamacin, has- ta la formacin de un granuloma. Generalmente, la lesin est consttuida por agregados de microorganismos encapsulados dentro de un retculo de tejido conectvo. La respuesta de tpo clulas consiste inicialmente en la presencia de macrfagos y clulas gigante, acompaados por clulas plasmtcas y linfocitos en escasa proporcin. La presencia de clulas gigante epitelioides y de reas de necrosis caseosas es menos frecuente que en el resto de las micosis sistmicas. 2.4.1.1 Cryptococcus neoformans Es la causa de la criptococosis humana y de los animales. La enfermedad suele llamarse blastomicosis europea, designacin incorrecta, puesto que la infec- cin est distribuida por todo el mundo. La criptococosis del hombre se caracteriza por el desarrollo de lesiones en el cerebro y meninges, que parecen tumores cerebrales, abscesos o tuberculosis. Tambin se encuentran en el hombre lesiones pseudotumorales localizadas. En los animales la enfermedad aparece ms frecuentemente en las fosas nasales y pulmonares en forma de lesiones granulomatosas y abscesos. Se han observa- do meningits y lesiones generalizadas. (Aiello, 2000). 62 Manual de Micologa Veterinaria El germen fue estudiado por primera vez por Busse en una infeccin generaliza- da del hombre (1894-1895). Un agente levaduriformes similar fue aislado de un tumor de la cadera de un hombre, por Curts en 1896. San Felice en 1895 y 1898, encontr grmenes levaduriformes encapsulados en los pulmones del cerdo y en los ganglios linftcos de un buey. Un germen levaduriforme fue aislado de una lesin mixomatosa del pulmn de un caballo, por Frothingham en 1912, en Massachusets, Meyer, en 1912, tambin aisl el germen a partr de una lesin de la cavidad nasal del caballo. Otras comunicaciones de la enfermedad en la vaca, leopardo indio (chita), caballo y cerdo han sido resumidas por Saunders (1948). En 1952, Pounden y sus colaboradores han comunicado que Cryptococcusneo- formans, produce mastts bovina. Esta observacin fue conrmada por Innes y otros como Simn, Nochols y Morce. Lesiones en las meninges y en el sistema ventricular del perro debido a C. Neoformans, han sido halladas (Seibold, Ro- berts y Jordan 1953). La relacin entre el germen y lesiones del sistema ner- vioso, as como la difusin mundial de la enfermedad han sido destacadas por Barron 1955. * Diagnstco El mtodo ms rpido de diagnstco consiste en la citologa de los exudados cutneos o de la cavidad nasal, del LCR o de muestras obtenidas mediante pa- racentesis de las cmaras acuosas o vtreas del ojo o mediante el frots de im- Ilustracin 20 Lesin causada por C.neoformans. 63 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes pronta de las fosas nasales o cutneas. La tncin de Gram es de gran utlidad, el microorganismo se te de color violeta, mientras que la capsula se te de color rojo claro por la safranina. La tnta china tambin se utliza para visualizar el microorganismo, que aparece sin teir y muestra su silueta recortada contra el fondo negro. Este mtodo no es tan denitvo como la tncin de Gram, a me- nos que puedan visualizarse yemas, pues los linfocitos, las gotas lipdicas y las partculas de tnta china agregadas pueden confundirse con el microorganismo. (Aiello, 2000). La tncin de Wright se ha utlizado ms frecuentemente en el diagnstco de los casos declarados en gatos y perros, pero este mtodo puede hacer que el mi- croorganismo se encoja y que su capsula se distorsione. Por esta razn las nue- vas tnciones con azul de metleno y cido perydico-Schi (PAS) se consideran mejores que la tncin de Wright. Debido a la rapidez de las tcnicas diagnst- cas citolgicas, siempre que se sospeche que las lesiones estn producidas por criptococos deben realizarse frots de impronta o preparaciones de hidrxido potsico. En el caso de no observarse microorganismos, deben tomarse una biopsia de la lesin; parte de la muestra se utlizar para realizar cultvos y el resto se proce- sar para realizar un estudio histopatolgico rutnario. El microorganismo pue- de teirse con eosina-hematoxilina, pero la capsula no. El microorganismo se visualiza ms con la tncin de PAS y la tncin de metenamina y plata de gomori aunque la cpsula tampoco se te con ninguno de estos colorantes. El mejor mtodo para la tncin del k es la tncin de Meyer con mucicarmina, dada su capacidad de teir tambin la capsula. Tambin pueden utlizarse la tncin de inmunouorescencia. La capsula de gran tamao y la pared de reducido grosor del Cryptococcus, lo diferencian del Blastomyces. Cryptococcus, por su gema- cin y carencia de endosporas, puede distnguirse de Coccidioidesinmis. El microorganismo puede cultvarse fcilmente a partr de exudados, liquido cefalorraqudeo, orina, liquido sinovial y muestras histolgicas, siempre que se disponga de un volumen suciente de muestra. Si existe la posibilidad de una contaminacin bacteriana, se utliza agar Sabouraud con antbitcos. No debe usarse un medio que contenga cicloheximida, ya que el Cryptococcus es sensi- ble al mismo. 64 Manual de Micologa Veterinaria Tanto en los tejidos como en los cultvos, es una clula de levadura de gruesa pared, oval o esfrica, de 5 a 15m de dimetro. En los tejidos parecen rodea- das de una capsula gelatnosa que puede ser tan ancha como la propia clula, y cuya presencia sirve para diferenciar este microorganismo de otras especies levaduriformes. La gemacin se produce en los tejidos y en los cultvos. Las yemas recientemente formadas forman una capsula y permanecen unidas a la clula madre. El microorganismo crece fcilmente en los medios de laboratorio empleados para el cultvo de bacterias patgenas. Su crecimiento en tales medios es lento, e invisible hasta los diez y catorce das en algunos casos. En agar Sabouraud man- tenido a la temperatura del laboratorio, se forman colonias blancas, mucoides, brillantes que, a medida que pasa el tempo, toman color marrn. No resiste a los desinfectantes ordinarios. Por ejemplo, Simon ha comprobado que muere por contacto durante quince minutos con agua oxigenada al 3%; al- cohol etlico 70-95%; solucin de hidrxido sdico. Ratones, cobayos y conejos puede infectarse artcialmente con este germen. La inoculacin intraperitoneal de una suspensin densa de cultvos de ratn, determina soluciones menngeas y cerebrales a los 10-20 das. El diagnstco de la infeccin producida por este germen se conrma por la presencia de una an- cha capsula rodeando a las clulas levaduriforme, cuando se examinan tejidos y mediante aislamiento e identcacin del germen en los medios de laboratorio. Ilustracin 21 Colonia de C.neoformans. 65 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 2.4.2 Gnero Candida En torno a este gnero ha existdo mucha confusin en la literatura cientca, por la descripcin de multtud de especies diferentes. Como patgena para los animales, solamente se considera una especie, Candidaalbicans.La candidiasis es una enfermedad mucocutnea localizada, distribuida de forma mundial en gran variedad de animales, causadas por especies del hongo levaduriforme Can- dida, ms frecuente Candidaalbicans. Es un habitante habitual de la nasofaringe, tracto gastrointestnal y genitales externos en gran variedad de especies animales y en determinadas circunstan- cias se comporta oportunista, provocando enfermedad, los factores asociados a la infeccin por Candidaalbicans son la prdida de la integridad de la mucosa; los caracteres intravenosos o sondas urinarias permanentes; la administracin de antbitcos; los frmacos inmunodepresores y la existencia de otras enfer- medades, el microorganismo infecta ms frecuentemente a la aves, afectando a la mucosa oral, esfago y buche. En los cerdos y los potros se han descritos in- fecciones superciales limitadas a las membranas mucosas del tracto digestvo. La candidiasis sistmica tambin se ha observado en bovinos, terneros, ovinos y potros, secundariamente a un tratamiento prolongado con antbitcos o cor- tcosteroides. En los gatos, la candidiasis es poco comn aunque se ha descri- to asociadas con afecciones orales, enfermedades de las vas respiratoria altas, piotrax, lesiones oculares, enfermedades digestvas y urocistts. Las infecciones por Candida son raras en los perros y los caballos. No obstante, la CandidaSpp ha sido considerada como agente etolgico de la artrits equina y de mastts y abortos en vacunos (Merchant y Packer, 1980). * Clnica y lesiones Los signos son variables y no especcos y pueden estar ms relacionados con las afecciones primarias o predisponentes, que con la propia candidiasis. Los terneros con esta afeccin en el estomago anterior presentan diarrea acuosa, anorexia y deshidratacin, sufren una evolucin gradual a la postracin y muer- 66 Manual de Micologa Veterinaria te. Las aves jvenes con candidiasis se muestran aptcos una disminucin de ingesta y el ritmo de crecimiento es menor. En los porcinos la candidiasis afecta la mucosa oral, esofgica y gstrica, siendo sus signos ms constantes la diarrea y la emaciacin. (Aiello, 2000). Las lesiones macroscpicas de la piel y las mucosas consisten generalmente en masas blancas, simples y mltples circulares y cubiertas de costras que se ele- van. El microorganismo puede penetrar el epitelio queratnizado y causar un no- table engrosamiento queratnoso de las mucosas de la lengua, esfago y rumen. En las aves las lesiones en el buche y el esfago son ulceras blancas y circulares con costras superciales elevadas que producen un engrosamiento de la muco- sa. Es comn la existencia de una pseudomembrana que se puede desprender fcilmente. * Diagnstcos Los microorganismos fungosos son numerosos en el epitelial proliferante y el diagnostco puede hacerse examinando los raspados o muestras de biopsias to- madas de las lesiones mucocutneas. Ilustracin 22 lceras blancas por C.albicans 67 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Candida albicans es una levadura de forma oval (de 2 a 4 micras de dimetro) y paredes nas que se reproducen por yemas (tambin denominadas blastos- poras); en ocasiones despus de la divisin por gemacin, las levaduras y las blastosporas quedan adheras, formando cadenas o pseudohifas. Tambin pue- den existr verdaderas hifas normales de tpo lamentoso. Las clulas fungosas generalmente se limitan al tejido epitelial y rara vez se extenden ms profun- damente. * Caracterstcas macroscpicas Los cultvos a 25 C y 37 C en 1-3 das dan colonias blancas, blancas cremas, lisas y brillantes con bordes enteros y consistencia cremosa y olor a levadura, ms tarde la colonia emite lamentos hacia la profundidad, transformndose en la forma R o membranosa. Los lamentos aparecen ms fcilmente en mi- croaerolia. * Caracterstcas microscpicas En agar Sabouraud se ve una simple levadura gemante inespecca, observn- dose colonias de color blancas, blancas cremas, lisas y brillantes con bordes en- teros. Ilustracin 23 Colonias de C.albicans. 68 Manual de Micologa Veterinaria En los medios especiales para clamidosporas se forma el pseudomicelios con pseudohifas y vertcilos de blastosporas y especialmente las clamidosporas que la identcan. En el suero a las 2 horas se forman un tubo germinal si es la C.albicans. Tambin se forma tubo germinal en agar eosina azul de metleno de Levine en microaerolia a 37 Cpero a las 24 horas se incubacin. * Tratamiento El tratamiento tpico con nistatna o con anfoteracina B o de solucin de yodo al 1% puede ser tl en el tratamiento de la candidiasis oral o cutnea. En un caso de artrits inducida por C.fumata en un caballo, se administro anfoteracina B por va intravenosa cada 48 horas durante 24 horas y posteriormente cada 72 horas durante 15 das ms logrando una resolucin satsfactoria de la enfermedad. El uconazol se utliza con resultados satsfactorios en el tratamiento de candidia- sis diseminada en potros administrando oral una dosis de 5mg/kg una vez al da durante 4 a 6 semanas. 2.4.2.1 Candida albicans Candidaalbicans,frecuentemente llamadaMoniliaalbicans, es causa de la moni- liasis del hombre y los animales, enfermedad caracterizada por lesiones erosivas persistentes en la piel y mucosas, lesiones pulmonares, meningits e infeccin generalizada. Ilustracin 24 C.albicansalmicroscopio 69 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La moniliasis se considera corrientemente como enfermedad humana, pero se han publicado numerosas comunicaciones de casos en los animales, especial- mente en las aves (Saunders, 1948). En estos casos la enfermedad suele limitarse en la boca, buche, proventrculo y molleja. Las lesiones consisten en erosiones circulares o alargadas y, a veces, conuentes, que afectan a la mucosa. Puede invadir tejidos ms profundos produciendo amplias ulceraciones. La estomatts mictca o muguet ha sido observada en terneras, cerdos, potros, pero gene- ralmente no se ha descrito adecuadamente el agente etolgico. Los casos que se estudien en el futuro en animales, deberan ir acompaados de aislamiento y descripcin del germen. (Aiello, 2000). Candida.albicans, tal y como lo observa en los tejidos, es un pequeo microor- ganismo levaduriforme, de 3-6m de tamao, que forman yemas. Puede cult- varse fcilmente en agar-glucosa de Sabouraud a 37 C. y a la temperatura de la habitacin. Las colonias son lisas y viscosas, dando el olor caracterstco de las levaduras. A medida que las colonias aumentan de tamao se hacen rugosas y estriadas, con un centro que recuerda un panal de abeja. Fermenta glucosa y maltosa con formacin de acido y gas. Forma acido en la sacarosa, pero no fermenta la lactosa. El conejo es muy susceptble a C. albicans. La inoculacin intravenosa de 1c.c de suspensin del germen produce la muerte en 4-5 das con formacin de abscesos en los riones. 2.4.2.1.1 Sndrome del buche cido La candidiasis es una enfermedad mictca muy comn en el tracto digestvo de los pollos y de los pavos, que est originada por Candidaalbicans(Moniliao- dium), las lesiones se encuentran con mayor frecuencia en el buche y consisten en una mucosa engrosada y la presencia de ulceras blanquecinas, elevadas y cir- culares. Pueden observarse lesiones idntcas en la boca y el esfago. No son ra- ros las manchas hemorrgicas, los restos necrtcos y las pseudomembranas. La depresin y demacracin pueden ser los nicos sntomas clnicos. El diagnstco puede establecerse mediante la demostracin histolgica de invasin tsular y el cultvo del microorganismo responsables. Los pollos y pavipollos jvenes son los ms sensibles, y en los mismos produce una mala absorcin de los alimentos, 70 Manual de Micologa Veterinaria que da lugar a una variedad de problemas nutricionales secundarios. La candi- diasis es comn despus del uso de dosis teraputcas de diferentes antbitcos o por instalaciones de agua insalubres. (Aiello, 2000). La disminucin mxima del uso de antbitco en los animales de las aves de corral ayuda a reducir la incidencia de candidiasis, sin embargo, 110 ppm de nis- tatna en la comida proporciona una proteccin signicatva. Las aves afectadas pueden tratarse con xito utlizando sulfato de cobre, a una dilucin de 1: 2.000 en el agua de bebida o con la adicin de 200 ppm, de nistatna en los alimentos. 2.4.2.1.2 Candidiasis psitcida La levadura causante de esta enfermedad es la C. albicans. Los pichones son ms susceptbles, aunque los adultos de algunas especies (en partcular los loros nincushollandicusy los loritos del gnero Agapornis), tambin se afectan con frecuencia. Los factores predisponentes son un tratamiento antbitco prolon- gado, la deciencia de vitamina A y la ingestn de alimentos en mal estado. Algunas personas consideran que la levadura es parte de la ora normal, pero la enfermedad se produce al producirse su proliferacin. Generalmente la infeccin afecta la mucosa del buche que, con la infeccin bac- teriana secundaria, es una causa comn de estasis del buche y de muerte en las psitcidas recin nacidas. Las aves afectadas no crecen, tenen un peso inferior al normal y se pueden observar vmitos; los adultos presentan un incremento notable del apetto con una prdida concurrente de peso. El buche se observa abultado y se vaca lentamente en las aves recin nacidas; tambin se puede producir regurgitacin. Existen lesiones blancas elevadas en las mucosas ora- les. Si la levadura invade la mucosa intestnal, se puede desarrollar un sndrome de mala absorcin. Tambin pueden estar afectados los ojos y los pulmones. El diagnstco en el cultvo y la identcacin de la levadura. La nistatna, el ketoconazol el yodo tpico y los suplementos de vitamina A son tratamientos frecuentes. Probablemente es mejor reservar la nistatna para su utlizacin como medicacin preventva (al igual que durante la administracin concurrente de antbitco), mientras que los antfngicos del grupo del azol, 71 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes como el uconazol, son agentes de accin rpida que se utlizan para la enfer- medad clnica. Sin embargo, estas medicaciones pueden tener serios efectos secundarios, incluyendo anorexia y vmitos. 2.4.2.1.3 Infeccin de las vas urinarias por Candida sp. Aunque no son frecuentes, la mayora de las IVU por hongos en perros y gatos estn producidas por CandidaSp. El hallazgo de Candida en la orina puede indi- car contaminacin de la muestra; no obstante, el hecho de encontrar Candida en dos muestras de orinas seriadas, obtenidas mediante funcin vesical, apoya la existencia de infeccin y obliga a realizar un cultvo e identcarla de forma de- nitva. El tratamiento implica eliminar los factores predisponentes potenciales o sea el exceso de cortcosteroides endgenos o exgenos, catteres urinarios y administracin de frmacos antfngicos que alcalinicen o no la orina. La dosis en los gastos es de 50 mg/por animal, por va oral 1 a 2 veces al da mientras en el perro la dosis es de 2,5 a 5,0 mg/kg/da, por va oral divida en 2 tomas se desconoce la duracin del tratamiento necesario para erradicar la infeccin, aunque puede bastar con 7 das. (Aiello, 2000). 2.4.2.1.4 Estomatts mictca por Candida albicans En perros y gatos la estomatts mictca est causada por el sobre crecimiento de Candidaalbicans, que se caracteriza por la aparicin de placas de color blan- co cremoso en la lengua o en las membranas mucosas. Normalmente se cree que est relacionada con otras enfermedades orales, con antbioterapia de larga duracin y con la inmunosupresin. El tejido subyacente a menudo esta enroje- cido y ulcerado. Puede haber placas ms pequeas que rodean a una principal ms grande. La periferia de las lesiones suele estar enrojecido, estas pueden coalecer a medida que la enfermedad progresa y pueden a parecer lesiones similares en la orofaringe y en otras uniones mucocutnea. El diagnostco puede conrmarse mediante el cultvo del microorganismo a partr de la lesin o por visualizacin histolgica de la invasin tsular. El diagnstco histolgico puede ser conrmatorio en ausencia de un cultvo positvo. 72 Manual de Micologa Veterinaria Se debe tratar cualquier enfermedad primaria existente, local o sistmica, que afecte a la cavidad oral. Debe administrarte ketoconazol o un bencinidazol rela- cionado hasta que las lesiones se resuelvan, despus de lo cual el tratamiento antbitco ha de suspenderse. Debe mantenerse un nivel adecuado de nutri- cin. El pronstco es reservado si las enfermedades predisponentes no pueden tratarse o controlarse de manera adecuada. 2.4.3 Gnero Zymonema Rivolta, en 1873, fue el primero en demostrar este microorganismo en el exu- dado de ganglios linftcos, en la linfangits epizotca del caballo. Marcone, en 1895, logro cultvarlo y reproducir con l la enfermedad. En 1897, Tokoshige, en Japn, cultvo el germen puro. Desde entonces la enfermedad ha sido estudiada en muchos pases. Se presenta en Francia, Italia, Egipto, frica del sur, India, Ja- pn y lipinas. La linfagits epizotca, no es frecuente en los EE. UU., aunque se observan casos espordicos (1). En las extensiones de exudados de tejidos, Zymonema farciminosum aparece en forma de clulas esfricas u ovoides de 2, 5 a 3,5 m de dimetro y 3,5 de lon- gitud. Pueden verse en ocasiones clulas alargadas en fase de gemacin. En los cultvos forma hifas irregulares de 2 m de dimetro y tabiques cada 10-20 m de distancia. La clula es namente granulosa u homognea.El microorganismo puede estudiarse en preparaciones sin teir o teidas, indistntamente. Un buen mtodo de tncin es calentar fucsina fenicada diluida o Gram, segn Kelser. Ilustracin 25 lesin causadas porC.albicans. 73 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Es germen aerobio y crece ptmamente a 25 o 30C. Se desarrolla lentamente en medios artciales. En agar Sabouraud las colonias recientes son pequeas, redondas, gris-blanquecinas y ligeramente aterciopeladas; las viejas tenen plie- gues, y son de color amarillo-blanquecino y arenoso. El crecimiento en los me- dios artciales es ms rpido de sucesivas resiembras. En zanahoria y patata, las colonias son hmedas, lisas, elevadas, ligeramente plegadas, de color marrn- grisceo y se obscurecen con la edad. En medios lquidos crecen lentamente, pero si se aade un 5,0% de agar para aumentar la viscosidad, se forma una pelcula gruesa, con pliegues de color blanco nveo, compuesta de clulas leva- duriformes e hifas de gruesa pared. El germen crece lentamente e leche, que coagula. No fermenta ninguno de los carbohidratos corrientemente empleados en el estudio de las bacterias. Licua la gelatna. 2.4.3.1 Zymonema farciminosum Es patgeno, principalmente para caballos, pero tambin son susceptbles las mulas y asnos. La enfermedad se caracteriza por inamacin supurada de los va- sos linftcos superciales en las regiones donde pueden producirse heridas por la silla y arneses. Los vasos linftcos se engruesan y hacen tortuosos, aparecien- do frecuentemente ndulos en su trayecto. La piel que recubre estos ndulos a veces se rompe, liberando un exudado purulento y amarillento. Estas lesiones se ulceran y curan lentamente. Los ganglios linftcos regionales suelen estar afectados en la linfangits epizotca. Se engruesan, forman abscesos y, cuando esto se abscedan o rompen, liberan un pus espeso blanco-amarillento. En el co- bayo y conejo se forman abscesos tras la inoculacin subcutnea. El hombre se considera resistente a la infeccin, pero se han descrito algunos casos. 2.5 Dermatotos La dermatotosis es una infeccin de los tejidos queratnizados (piel, pelo, ga- rras)por uno de los tres gneros de hongos llamados colectvamente derma- totos: Epidermotos, Microsporum y Trichophyton. Estos hongos distribuidos mundialmente y todos los animales domstcos son susceptbles. En los pases desarrollados, las mayores consecuencias para la economa y la salud humana provienen de las dermatotosis de los gatos domstcos y del ganado bovino. 74 Manual de Micologa Veterinaria Unas pocas especies de dermatotos habitan en el suelo (geoflicas), por ejem- plo el M.gypseum y T. terrestre y causan enfermedad a los animales que estn expuestos al escarbar la terra o arrancar plantas de la raz, otras especies son hospedadores especcos del hombre (antropoflicas), por ejemplo, M.audouinii yT.rubrumy raramente infectan a otros animales.sim embargo los agentes pat- genos ms importantes que afectan ms a los animales en todo el mundo son: M.canis,M.gypseum,T.mentagrophytes,T.equinum,T.verrucosumyM.nanum. Estas especien tenen la capacidad de contagiar al humano y causarles ta, es- pecialmente a partr de las infecciones por gatos domstcos por M.canis y por T.verrucosum. Las especies zooflicas se transmiten principalmente por contacto con los indi- viduos y fmites contaminados sin embargo el contacto con un dermatoto no siempre causa infeccin. (Merchant y Packer, 1980). El establecimiento de una infeccin depender de la especie y de factores en el animal, entre estos factores tenemos la edad, inmunocompetencia, estado de la supercie cutnea expuesta, comportamiento de acicalado del animal y el estado nutricional, la infeccin tene como resultado una inmunidad especica, tanto humoral como celular, que conere una resistencia incompleta y de corta vida a la infeccin o enfermedad subsiguiente. Los dermatotos por lo general crecen en el tejido queratnizado y el avance de la infeccin se detene al llegar a las clulas vivas o al tejido edematzado. La infeccin comienza en un pelo en crecimiento o en el estrato corneo, donde se desarrollan las hifas lamentosas a partr de las artrosporas infectantes de los elementos hifales fngicos. Las hifas pueden penetrar en el tallo del pelo y debilitarlo, lo que, junto a la inamacin folicular, lleva a una prdida de pelo en forma de parches, segn madura la infeccin, se desarrollan grupos de artrosporas en la supercie exter- na de los tallos de los pelos infectados. Los pelos rotos con esporas asociadas son una fuente importante de difusin de la enfermedad. Segn se desarrolla la inamacin y la inmunidad del hospedador, se inhibe la posterior difusin de la infeccin, aunque este proceso puede necesitar varias semanas, por eso en la 75 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes mayora de los huspedes adultos sanos, las infecciones por dermatotos son en son autolimitantes. Animales jvenes o debilitados y hasta cierto punto en razas de gatos domstcos con pelo largo, la infeccin puede ser persistente y estar muy difundida. La dermatotosis se diagnostca por cultvo fngico, examen con la lmpara de Wood o examen microscpico directo del pelo o de las escaras de piel. El cul- tvo fngico es el medio ms correcto de diagnostco. Puede hacerse la prueba usando medio de cultvo para dermatotos (DTM). Las lesiones seleccionadas deben tener el pelo cortado a una longitud de ms o menos 0,3 cm. El rea debe frotarse suavemente con una esponja humedecida en alcohol y luego secarse para reducir la contaminacin con hongos saprotos.los trozos de pelos y las escaras de piel se recogen para su colocacin en el agar. Que luego es cubierto para evitar la desecacin. La incubacin debe hacerse a temperatura ambiente, que por lo general es suciente para la mayora de las especies excepto cuando se cultva T.verrucosum a partr de la comida y de animales febriles, en cuyo caso es necesario hacer una incubacin a 37C. El crecimiento dermatoftco es generalmente aparente de los 3 a 7 das des- pus, pero puede necesitar hasta tres semanas. Los dermatotos que crecen en DTM producen un cambio de color en el medio, que se torna rojo cuando se forma la primera colonia visible. Los hongos dermatotos poseen micelios blan- cos o parduscos, suaves o granulados. Las colonias contaminantes saprotas son blancas y pigmentadas y casi nunca producen un cambio inicial del color en DTM. El diagnostco denitvo y la identcacin de la especie exige extraer las hifas y macroconidios de la supercie de la colonia usando una cinta de acetato y examinarlos al microscopio con tncin de azul de lactofenol. La lmpara de Wood es tl para exploraciones de cribado buscando infecciones por M.canisen los gatos y perros. Los pelos infectados presentan una uores- cencia color verde amarrillo; sin embargo, solo el 80% de las infecciones por M. canis dan uorescencia y otras especies fngicas en los animales no la dan. Por ello, los exmenes negatvo a la lmpara de Wood no tenen signicado. 76 Manual de Micologa Veterinaria Los exmenes pueden dar como resultados falsos positvos, lo cual es especial- mente posible en estados oleosos y seborreicos de la piel. Los pelos que dan uorescencia deben ser cultvados siempre para conrmar el diagnstco. El examen microscpico directo de los pelos o del raspado cutneo, puede per- mitr un diagnostco precoz por demostracin de las hifas y artrosporas caracte- rstcas en el espcimen. La tcnica es ms tl en el diagnostco de dermatotos en los animales grandes que en los animales pequeos. Los pelos que preferi- blemente sean blancos y los raspados que sean de la periferia de las lesiones se examinan en busca de elementos fngicos en una preparacin de hidrxido de potasio al 20% que se ha calentado suavemente o incubado en una cmara de humedad por la noche. 2.5.1 Medios nutritvos para dermatotos Medio de arroz Es muy tl para la diferenciacin entre M.canisyM.audouinii. M.audouiniicre- ce de forma escasa sobre los granos produciendo un pigmento marronceo. M. caniscrece abundantemente y suele secretar un pigmento amarillento. Existen distntas formas de prepararlo y dispensarlo. Medio de agar glucosado de patata Es un medio que estmula la produccin del pigmento rojizo caracterstco de T. rubrum, siendo muy tl para diferenciarlo de T.mentagrophytes. En este medio M.audouini produce un reverso de la colonia de color asalmona- do y M.canis de color amarillento. Adems, su utlizacin es altamente recomen- dada por favorecer la esporulacin de todos los dermatotos. Otras tcnicas siolgicas Se ha descrito la utlizacin de otros medios como el agar glucosa-slidos lc- teos-prpura de bromocresol (BCP-milk solids-glucose agar BCPMSG) y algunas variaciones con extracto de levadura (BCP-milk solids-yeast extract agar) entre otros medios, en lo que se denomina el sistema de identcacin de Kane/Fisher 77 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes [4]. La utlizacin del BCPMSG es especialmente tl para la diferenciacin de T. mentagrophytes (crecimiento abundante y alcalinizacin del medio: color pr- pura) y T.rubrum (crecimiento limitado sin reaccin alcalina). Conservacin de las cepas de los dermatotos Para la identcacin de dermatotos puede ser de utlidad disponer de una coleccin de cepas de las especies ms representatvas. Para mantener una co- leccin de dermatotos hay que tener presente que no todas las especies so- portan las tcnicas de conservacin y mantenimiento habituales. La resiembra contnuada de estos hongos en un medio de mantenimiento como el SDA tende a degenerar los cultvos observndose un fenmeno frecuente en estos hongos denominado pleomorsmo. El mantenimiento de cepas a temperatura de refri- geracin (4 C) tampoco est recomendado para algunas especies ya que acaban siendo no viables (E.occosum,T.verrucosum). Lo mismo ocurre con los proce- sos de congelacin y/o liolizacin. Una de las tcnicas ms recomendadas para la conservacin de estos hongos consiste en mantener una densa suspensin del hongo en agua destlada estril a temperatura ambiente (Tcnica de Castellani) recogen fragmentos de las colo- nias (intentando no arrastrar mucho medio de cultvo) y se introducen en tubos conteniendo agua destlada estril. Es conveniente que el tubo cierre hermt- camente para evitar la desecacin. Tambin suele recomendarse su conservacin en medios de cultvo sin glucosa, o con baja concentracin de glucosa, y mantenerlos mediante subcultvo. Otros medios que adems aportan fuentes de carbono distntas, como el PDA o el agar Oatmeal, tambin pueden ser tles. 78 Manual de Micologa Veterinaria 2.5.2 Gnero Trichophyton Los Trichophyton, son parsitos de la epidermis y otros tejidos queratnizados de los mamferos. La enfermedad que producen se llama ta y se caracteriza por una lesin concntrica tpica. El antguo nombre griego de herpes se aplica con frecuencia a esta enfermedad, pero no debe confundirse con el herpes de origen vrico, como el herpes febrilis. Los romanos relacionaron estas enfermedades con las producidas por piojos y les dieron el nombre de tnea (ta). Este es el termino con que se designa frecuentemente como nombre comn, aun en los pases sajones, que emplean nombre como ringworm (ring: anillo, worm: gu- sano) alusivos a l aspecto anular de las lesiones (Merchant y Packer, 1980). La tricotosis producida por los hongos del gnero Trichophyton consttuye un problema serio en varios pases del mundo, tanto por la afectacin econmica como por su conocido carcter zoonsico. Trichophyton verrucosum es el agente causal de la tricotosis bovina. Los miembros de este gnero producen micelios dimorcos que contenen espi- rales, closterosporas, clamidosporas y aleurosporas. Producen colonias gigantes pulverulentas, raramente aterciopeladas. Dan lugar a lesiones supuratvas en la epidermis de los mamferos, invadiendo los folculos pilosos y rodeando el pelo con una envoltura de micelio y pequeas esporas. No penetran en el pelo. Ilustracin 26 Dermatoto con un sector donde se detecta Pleomorsmo (micelio blanquecino) 79 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Se ha denido que la viabilidad de este germen es de 5 a 7 aos en el ambiente, las instalaciones, etc., por esta razn es una fuente constante de infeccin. Esta micosis la padecen los animales jvenes fundamentalmente, debido a que los adultos ya la han padecido cuando jvenes y por tanto, son inmunes a esta. Clnicamente las lesiones son circulares, discretas, costosas; es usual que se en- cuentre en la cabeza, el cuello, la regin pelviana, la espalda y la cola; los anima- les se comportan inquietos e irritados, debido al escozor y prurito. Los signos de infeccin comienzo con un ndulo oculto entre los pelos, que lue- go se cubre de una escama que forma una costra de color gris. Generalmente se usa la vacuna LTF 130 para los ternero de 1 a 8 mese de edad, la cual se tene que realizar con una serie de requisitos para asegurar su accin teraputca, que consttuye una solucin denitva a la enfermedad. 2.5.2.1 Trichophyton mentagrophytes Esta es la especie ms frecuente de todos los hongos de la ta, habiendo sido encontrada en el caballo, gato, bovinos, perro, Chinchilla, zorra, cobayo, ratn, mono, rata, almizclera, zorra mochilera, ardilla y canguro. Tambin afecta al hombre. La especie produce una lesin concntrica tpica en la piel, que aumen- ta de tamao y se extende a una amplia zona, difundindose a otras partes del cuerpo si no se trata (Merchant y Packer, 1980). Por lo general, las lesiones aparecen primero en la cabeza y se pueden extender a cualquier parte de la piel. Las zonas afectadas son circulares, elevadas, enroje- cidas y cubiertas de un material blancuzco y escamoso parecido al salvado, esta especie afecta tambin al hombre por lo que los animales contagiados deben ser aislados, tratados y eliminados, se puede tener un cierto grado de control mediante la aplicacin de azufre en polvo en los nidales antes del parto o me- diante el empleo de agentes tpicos, como los que contenen los esteres salicli- cos y benzoicos de glicol de propileno, soluciones acuosas de caprilato sdico y tnturas que contenen cidos tnicos, benzoico y saliclico. 80 Manual de Micologa Veterinaria 2.5.2.2 Trichophyton gallinae Los pavos y las gallinas son afectados con frecuencia por este germen. La enfer- medad producida, conocida con el nombre de favus, se limita a la cabeza, don- de se producen lesiones tpicas en la cresta y barbillas. En infecciones graves el microorganismo puede diseminarse por la supercie del cuerpo, provocando prdidas de las plumas y dejando en los folculos de las mismas pequeas ma- sas costrosas granulares. El microorganismo ha sido observado en el hombre y en el perro. Pueden infec- tarse artcialmente cobayos y ratones (Merchant y Packer, 1980). 2.5.2.3 Trichophyton equinum Este hongo es causa de las tas del caballo y del hombre. En el caballo las lesio- nes aparecen en la espalda, dorso y coxis, y se caracterizan por reas pequeas, brillante, depiladas, sin reaccin inamatoria. Estas reas generalmente estn diseminadas, aunque algunas de ellas pueden conuir formando otras mayores. Aunque este es el causante primario de la ta en el caballo, se ha podido aislar el T.mentagrophytes y en otros casos con menos frecuencia se ha podido aislar otras especies como el T.verrucosum y algunos Microsporum. Sus principales sntomas son los focos de alopecias pero junto con estas se pue- de observar eritema, descamacin y formacin de costras en diferentes grados. Las primeras lesiones pueden ser semejantes a la urtcaria papular, pero luego progresan en la formacin de costras y prdida de pelo a los pocos das. Ilustracin 27 T.gallinae formando masas costrosas en la cresta de un ave. forma ddd ndo masas co t strosas en lllla cre s. 81 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes El diagnostco se conrma por cultvo. El diagnostco diferencial debe estable- cerse con dermatolosis, pngo foliceo y foliculits bacteriana. La transmisin se produce por contacto directo. La mayora de las lesiones se aprecian el rea de la silla y de la cincha picor de la cincha. El tratamiento generalmente es tpico porque la terapia sistmica es cara y de ecacia no probada. Los baos de cuerpo entero, pueden ser recomendados y las lesiones individuales deben ser tratadas con preparaciones de clotrimazol o de miconazol. Los instrumentos de aseo y los aperos, deben ser desinfectados y los caballos afectados debern ser apartados hasta controlar la infestacin. (Merchant y Packer, 1980). 2.5.2.4 Trichophyton schoenleini En el hombre esta especie es la que produce con mayor frecuencia el favus. Ha sido hallada en la rata, ratn, gato, perro y conejo, pero no se cree que produzca infeccin natural en estos animales (Merchant y Packer, 1980). 2.5.2.5 Trichophyton quickeanum Esta especie se encuentra en ratones y gatos, produciendo generalmente le- siones en la cabeza. En los ratones puede estar atada la cornea, producindose ceguera con muerte por inanicin consecutva. El germen produce lesiones en el hombre (Merchant y Packer, 1980). 2.5.2.6 Trichophyton verrucosum Son atacados por este microorganismo el ganado bovino, perros, caballos y ove- jas. Tambin el hombre (Merchant y Packer, 1980). Ilustracin 28 Lesin causada por T.verrucosum en un ternero. ca aaaaaaaaauus us us us us us uus uus us us us usad ad ad ad ad ad ad ad ad ad ad ad adaaaaaaaaaaaa po po po po po po po po po po po porrrrrrrrrrrr TTTTTTTTTTTTT.v v v v v v v v v v v ver er er er er er er er er er er erru ru ru ru ru ru ru ru ru ru ru ruco co co co co co co co co co co cosu su su su su su su su su su su summmmmmmmmmmmeeeeeeeeeeeeeennnnnnnnnnnnn yy ,, )) n ccca aaaaaaaauuus ddddd ada por TTTTTT err cos meennnn 82 Manual de Micologa Veterinaria Distribucin No todos los dermatotos se aslan con la misma frecuencia en las distntas lo- calizaciones que pueden presentar las dermatotosis (Morejn y Navarro 2011). Animal Dermatotos Gatos y perros M.canis Otras: T.mentagrophytes M.gypseum M.persicolor Caballos T.equinum Otras: M.canis M.equinum M.gypseum T.mentagrophytes T.verrucosum Vacas, cabras y ovejas T.verrucosum Otras: M.canis M.gypseum T.mentagrophytes T.equinum Conejos T.mentagrophytes Otras: M.canis Cerdos M.nanum Otras: M.canis M.gypseum T.mentagrophytes T.verrucosum Aves de corral M.gallinae Otras: T.simii 83 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La tricotosis esta descrita principalmente en terneros, en las que las lesiones no pruriginosas son ms caracterstcas, aunque se puede desarrollar una lesin epitelial generalizada. Las vacas y las novillas desarrollan lesiones en la cabeza y en la patas con mayor frecuencia, mientras que en los toros en la papada y en la piel intermaxilar. Las lesiones son caracterstcamente zonas en forma de parches discretos y escaricantes de prdida de pelo con formacin de costras gris blanquecinas, aunque algunos se encostran muy intensamente y supuran. La tricotosis es un problema ms comn en los meses hmedos y climas tem- plados y son raras en las razas cebuinas. Muchos tratamientos tpicos han resultado ecaces en los bovinos, pero gene- ralmente las lesiones se sanan de manera espontanea, es ms difcil saber si el tratamiento es realmente ecaz. Sin embargo, se debe tratar a los animales de valor individualmente, con el n de limitar la progresin de las lesiones existen- tes y la propagacin de las lesiones existentes y la propagacin a otros animales del hato. Las costras gordas deben eliminarse suavemente con un cepillo y el material debe quemarse o desinfectar con una solucin que contenga hipoclorito. Las opciones del tratamiento dependen de las limitaciones del uso de algunos agen- tes en animales destnados al matadero. Entre los agentes que se consideran de utlidad estn los lavados o rociados con sulfuro clcico al 4%, hipoclorito sdico al 0,5%, yodo povidona al 1%, natamicina y enilconazol. Las lesiones individua- les pueden ser tratadas con soluciones de miconazol o de clotrimazol, se usan vacunas sin embargo no hay vacunas vivas disponibles y los animales vacunados siguen eliminando esporas durante un tempo despus la vacunacin. La ta causada por el T.verrucosum afecta a las ovejas, cabras y cerdos lo que causa un problema frecuente y preocupante en ovejas de exposicin pero es poco frecuente en rebaos de cabras y ovejas de produccin. En los corderos, las lesiones se aprecian sobre todo en la cabeza, pero en los corderos esquilados se hacen evidentes las lesiones que se encuentran ampliamente difundidos bajo la lana, hay pocas evidencia de que los corderos con un rumen funcional absor- ban la griseofulvina. El tratamiento tpico se realiza mejor al tratarlas con hipo- clorito sdico, en los corderos sanos como en otras especies son autolimitantes. 84 Manual de Micologa Veterinaria Caracterstcas macroscpicas A partr de los cultvos realizados en medios selectvos para el aislamiento de dermatotos (medios tpo SDA+ antbitco+ cicloheximida, o DTM) se pueden identcar las especies ms frecuentes. Los dermatotos son hongos hialinos que forman colonias que presentan en general colores claros, con gamas de color restringidas a tonos blanquecinos, amarillentos y marronceos. En pocas ocasiones se observan colonias con colores oscuros u otras tonalidades (azules, verdosas, negras, etc.). Si bien la coloracin de las colonias y su textura pueden ayudar a identcar estas especies, las caracterstcas microscpicas son las que determinan su identcacin en la mayora de los casos. Caracterstcas microscpicas Existen diferentes estructuras microscpicas a tener en cuenta para la identca- cin de estos hongos (clamidosporas, distntos tpos de hifas, etc.). No obstante, la forma y distribucin de macroconidios y microconidios es funda- mental a la hora de denir los gneros y especies. Por este motvo, para utlizar la clave de identcacin que se adjunta, es precisa la caracterizacin de estas estructuras en la cepa que se pretende identcar. Ilustracin 29 Colonias de T.mentagrophytes en cultvo puro 85 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Para determinar la presencia de estas estructuras a partr del cultvo, se realiza una preparacin entre porta y cubre con un pequeo fragmento de una de las colonias con el n de observarla al microscopio. Se aconsejan lquidos de mon- taje tpo lactofenol de Amman, lactofenol azul de algodn o lacto fucsina. En algunos casos, especialmente en el primo cultvo y en caso de utlizar medios de cultvo con actdiona (incorporada en la mayora de medios selectvos para der- matotos), es difcil observar la formacin de estos conidios. O bien no presen- tan la forma caracterstca, o simplemente no se han formado. En este caso se deber realizar paralelamente un subcultvo en un medio carente de inhibidores (tpo SDA, PDA) y/o un microcultvo con el n de observar ms adecuadamente la conidiognesis. Existen especies que no forman, o lo hacen raramente, macroconidios y/o mi- croconidios (ej. T. violaceum). Por otra parte, algunas cepas pertenecientes a determinadas especies identcables morfolgicamente por producir algn tpo de estas estructuras, no las suelen producir. As, por ejemplo, aislamientos de T. mentagrophytesoT.rubrum pueden no formar macroconidios. 2.5.3 Gnero Microsporum Este gnero se caracteriza por la formacin de closteroporas y clamidosporas, pero por la ausencia de aleurosporas en la mayora de las especies. Casi todas producen ta en el hombre y unas pocas en los animales. En las lesiones natu- Ilustracin 30 Colonias amarrillas (dermatotos) colonias oscuras (contaminantes). 86 Manual de Micologa Veterinaria rales la base del pelo aparece cubierta por una vaina de pequeas artrosporas, no dispuestas en cadena, sino irregularmente. En los perros ms o menos el 70% de los casos de ta son provocados por M.canis, el 20% por M.gypseum y el 10% al gnero Trichophyton, en los gatos 98% de las tas son causadas por M.canis. La lmpara de Wood es tl para establecer el diagnostco presuntvo de dermatotosis en perros y gatos, pero no se puede usar para descartar a este tpo de infeccin. El diagnostco denitvo se establece por el cultvo de DTM. El descubrimiento de infeccin en animales portadores asintomtcos se facilita cepillando la capa con un cepillo de dientes nuevo, e inoculndolo en una placa de cultvo haciendo presin con las cerdas del cepillo sobre la supercie del medio de cultvo. 2.5.3.1 Microsporum felineum El gato es el animal ms susceptble a este germen. Se forman grandes zonas de- nudadas cubiertas de un exudado costroso. La infeccin produce intenso prurito y el microorganismo se difunde por los araazos, sin embargo el aspecto clnico de la ta en los gatos suele ser muy variable Ha sido encontrado tambin en el hombre y puede transmitrse experimentalmente al perro y cobayo. Los gattos se afectan ms a menudo. Las lesiones tpicas consisten en alope- cia focal, descamacin y formacin de costras; la mayora estn localizadas en las orejas, en la cara y en las extremidades. Los gatos con una infeccin clnica inaparente aun pueden servir como fuente de infeccin para otros gatos o aun para el humano. A veces la dermatotosis felina provocada por esta especie cau- sa dermatts miliar y es pruriginosa. Los gatos con dermatotosis generalizadas desarrollan ndulos cutneos ulcerados (pseudomicetomas) (Merchant y Pac- ker, 1980). 00) 0) 0) ))))))).... Ilustracin 31 Lesin causada por M.felineum. 87 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 2.5.3.2 Microsporum Canis Se encuentra en el perro y gato, animales en los que se produce lesiones secas y escamosas, sin vesculas ni pstulas. Se transmite fcilmente al cobayo por medio de los pelos infectados. En el hombre produce ta tonsurante micros- prica y herpes circinatus (Merchant y Packer, 1980). Las lesiones de los perros son clsicamente placas alopcicas escamosas, con pelos quebrados. Los perros tambin pueden desarrollar foliculits regional o generalizada con ppulas o pstulas. Una forma de dermatotosis nodular focal en perros adultos y normalmente se acompaa de inmunodeciencia, especial- mente hiperadrenocortcalismo endgeno y atrognico. El diagnstco diferen- cial en perros para las lesiones clsicas de la ta debe establecerse con respecto a la demodicosis, foliculits bacteriana y dermatts seborreica. La dermatotosis en perros y gatos de pelo corto, normalmente es autolimitan- te, pero la curacin se puede acelerar con el tratamiento. Otro objetvo primario de la terapia es prevenir la propagacin de la infeccin a otros animales y a las personas. Sin embargo el realizar una terapia tpica en todo el cuerpo es intro- vertdo y no se ha demostrado que los baos tpicos o el champ sean real- mente efectvos. Las lesiones locales pueden ser tratadas con miconazol tpico o clotrimazol. Para casos crnicos o graves en razas de pelo largo est indicado el tratamiento sistmico. Ilustracin 32 Lesin causada por M.canis. t i 32 L i d M i 88 Manual de Micologa Veterinaria Los perros pueden ser tratados con griseofulvina micronizada a 25-100mg/kg peso vivo una vez al da o puede ser dividida, con una comida rica en grasa. La irritacin del tracto intestnal es muy comn en perros a los que se les administro griseofulvina. Los tratamientos alternatvos efectvos consisten en la administracin de keto- conazol, 10mg/kg o itraconazol, 5mg/kg. El tratamiento sistmico y tpico para M.canis debe contnuarse durante 2-4 semanas tras la curacin clnica o hasta que se obtenga un cultvo negatvo con el cepillo. Esto puede recurrir a un trata- miento desde un mes a tres meses con griseofulvina o ms o menos 1 mes con los antfngicos amidazlicos. 2.5.3.3 Microsporum nanum La dermatotosis en los cerdos normalmente est causada por esta especie. Las lesiones son anillos de inamacin o de coloracin anormal marrn que avanza de forma centrifuga hasta alcanzar un dimetro de 6cm. Las lesiones son bastan- te asintomtcas en los adultos y la ta en el porcino tenen generalmente pocas consecuencias econmicas, las contaminaciones zoontcas en los trabajadores son poco frecuentes. (Merchant y Packer, 1980). Ilustracin 33 M.canisal microscopio. 89 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 2.5.3.4 Microsporum gypseum Se encuentra en numerosos animales, entre ellos el gato, gallina, perro, caballo, ratn, mono y tgre. Tambin en el hombre. (Merchant y Packer, 1980). 2.5.3.5 Microsporum andouini Se considera al hombre ms frecuente infectado por este hongo, que los ani- males; no obstante, ha sido sealado en el perro y mono. (Merchant y Packer, 1980). Examen directo 1. Se escaricar la piel afectada con un bistur estril, se extraer los pelos del borde de la lesin depilada, con pinzas estriles y se depositan en placa de Petri estril. 2. Se examina su uorescencia en un cuarto oscuro a la luz ultravioleta de la Lmpara de Wood. El nico zooflico que orece es M. canis en verde amarillen- to. 3. Los pelos que muestren uorescencia se escogen con pinzas estriles para examinarlos microscpicamente en NaOH al 10%, bajo cubre objetos. Se obser- van primero a pequeo aumento, y despus de localizados los pelos afectados, con gran aumento seco. Si no hay uorescencia se sigue el mismo procedimien- to. 4. En los raspados cutneos e inguinales se observan hifas, septas de 2-4 m de dimetro que a menudo se segmentan para dar lugar a cadenas rectangulares de artrosporas u odos. 5. En los pelos afectados es posible hacer un diagnostco presuntvo, no sola- mente de dermatotosis o ta sino a veces se puede sospechar el gnero y hasta la especie, orientndose por el tamao y la localizacin y ordenamiento de las artrosporas en el pelo. 90 Manual de Micologa Veterinaria Medios nutritvos especiales para dermatotos Dermatote Test mdium (DTM). Pruebas Bioqumicas. Casena hidrolizada. Tiamina..T.Verrucosum. Inositol..T.Verrucosum Acido nicotnico..T.equinum. Agar nitrato de amonio.T.Gallinae,Megninino lo necesitan. 2.5.4 Gnero Aspergillus El gnero Aspergillus comprende numerosas especies que estn muy difundidas en la naturaleza, partcularmente en el suelo y vegetacin en putrefaccin. Cada moho produce innumerables esporas, que se diseminan rpidamente por medio de aire y polvo. Este hongo es uno de los contaminantes ms frecuentes de los medios de laboratorio. Los Aspergillus tenen dos tpos de reproduccin: sexual y asexual. En la repro- duccin sexual dos lamentos del hongo se unen formando una estructura se- mejante a un sacacorchos, los contenidos celulares de cada lamento se unen entre si y se efecta la fertlizacin. Esta clula recientemente formada se cubre entonces de una densa casa de lamentos que forman un cuerpo irregular es- frico denominado perithecium. La clula se desarrolla rpidamente, formando ocho ascosporas. Cuando se liberan, estas ascosporas germinan y dan lugar a un nuevo hongo. En la reproduccin asexual se forma un conidiforo a partr de una hifa diferen- ciada para este n. Los conidiforos se alargan en su extremo y se cubren de un gran nmero de papilas, que se transforman en esterigmas. En el Aspergillus tpico los esterigmas permanecen aislados. Los esporos o conidias nacen de los esterigmas y se unen formando largas cadenas. Las esporas son esfricas u ova- les, y pueden ser de color verde, negro, marrn o amarillo. El hongo debe su color al de las esporas. 91 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Todos los mohos de este gnero son saprotos, excepto uno: Aspergillus Fumigatus. La aspergilosis se trata principalmente de una infeccin respiratoria que puede hacerse generalizada; sin embargo, la predileccin por los tejidos vara entre las distntas especies. Las infecciones ms frecuentes se presentan como pulmona- res en aves de corral y otras aves, el aborto mictco en los bovinos. La micosis de la bolsa gutural en los equinos y la infeccin de los tejidos nasales y paranasales en los perros, en los gatos domstcos se han descrito las infec- ciones pulmonares e intestnales y en la mayora de los casos se encuentran afectando de los intestnos y se encuentran acompaando la enterits infecciosa felina. 2.5.4.1 Aspergillus Fumigatus Este hongo fue considerado por primera vez como agente de infecciones pul- monares, en 1815 por Mayer y Emmet, quienes los observaron en el pulmn de un gallo. Desde entonces se ha visto que es un microbio bastante frecuente en varias aves y mamferos. La enfermedad producida por AspergillusFumigatus se denomina aspergilosis o neumomicosis. Se ha estudiado en gallina, pavo, pato, ganso, palomo, canario, papagayo, cigea, cuervo, amenco, halcn, pinzn, avefra, faisn, avestruz y cisne. En los mamferos ha sido observado en caballo, vaca, oveja, perro y mofeta. Tambin ha sido hallado en el hombre. Las esporas de Aspergillus Fumigatus estn muy difundidas, siendo especial- mente numerosas en los alimentos enmohecidos. Este moho no diere de las caracterstcas generales que hemos descrito para el grupo. Produce esporas de color azul-verdoso que dan a los micelios maduros el color tpico. Si se examina al microscopio una parte de la colonia del hongo colocada sobre un portaobjetos, y cubierta con cubreobjetos, se puede apre- ciar hifas entrelazadas y numerosos conidiforos. Las esporas o conidias, se des- prenden muy fcilmente de la cabeza del conidiforo y se aprecian diseminadas por todo el campo. 92 Manual de Micologa Veterinaria Clnica y lesiones La aspergilosis en las aves se localiza principalmente en la regin broncopulmo- nar y se acompaa de disnea, jadeo y polipnea, conjuntamente con somnolencia, anorexia y emaciacin . tambin se han descritos casos de traquets mictca. La tortcolis y los trastornos del equilibrio se presentan cuando la infeccin invade el cerebro. En las vas respiratorias, los pulmones, los alveolos y la membrana de las cavidades corporales, se observan ndulos amarrillos de tamao consistencia variables o lesiones en placas. En las paredes engrosadas de los alvolos pueden observarse proliferacin mictca con aspec- to piloso. Otras especies con aspergilosis broncopulmonar pueden presentar lesiones nodulares en los pulmones o neumona aguda acompaada de colec- cin liquida serosanguinolenta en la cavidad pleural y pleurits brinosa. (Aielllo, 2000). La aspergilosis es frecuente en las aves rapaces y en las aves acutcas, pero no en la psitceas. Cuando se produce en estas ltmas, generalmente est asocia- do a un cuidado deciente, el estrs, una enfermedad concomitante o previa o la inmunodeciencia. Los ambientes polvorientos, hmedos o la exposicin a alimentos o materiales de anidar mohosos pueden aumentar la incidencia de la enfermedad. La transmisin es por inhalacin de esporas. En las psitceas se puede producir disnea con principio agudo o se puede desa- rrollar una enfermedad crnica y debilitante complicada por una o ms bacterias patgenas. En los casos agudos los hallazgos se pueden limitar a pequeos ta- Ilustracin 34 Colonia de tpica de A.fumigatus l d t d f 93 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes pones caseosos dentro de la trquea distal o pequeas placas en uno o ms de los sacos areos, los cuales tambin pueden presentar un aspecto engrosado, en los casos crnicos, generalmente existe un crecimiento fngico visible en los sacos areos y a menudo se extenden a las zonas superciales serosas de los rganos adyacentes. Otros rganos tambin pueden estar afectados. El lavado transtraqueal con un cultvo y una citologa y la laparoscopa propor- cionan el diagnstco. La radiografa puede ayudar a realizar una tentatva de diagnstco. La serologa no es dedigna. Se debe considerar la aspergilosis cuando una enfermedad respiratoria se ha mostrado resistente al tratamiento basado en el cultvo y un antfungigrama. El tratamiento de los casos agudos puede ser tl, pero frecuentemente no te- ne xito en los casos crnicos. La obstruccin de la siringa o la trquea distal se debe eliminar inmediatamente, por lo general despus de la colocacin de un tubo de respiracin en el saco areo abdominal. Se han descrito tcnicas de as- piracin .tambin se ha descrito el desbridamiento de los sacos areos, aunque el pronstco de los casos avanzados siempre es precario, en el tratamiento se puede usar anfoteracina B por va intravenosa o intraperitoneal combinada con ucitosina oral y/o itraconazol u otro azol es tl. Tambin se pueden usar la nebulizacin. Las aspergilosis de las aves afecta a los pulmones y sacos areos, pudiendo pe- netrar las hifas en cualquiera de los rganos de la cavidad abdominal. La infec- cin se encuentra ms frecuentemente en pollitos recin nacidos, lo que indica que el germen ha penetrado a travs de la cascara antes del nacimiento. Los Ilustracin 35 A.fumigatus, lesin en los sacos areos. 94 Manual de Micologa Veterinaria pulmones aparecen edematosos, y si se examina con cuidado puede apreciar- se fcilmente la presencia manchas de color azul-verdoso, correspondiente a la multplicacin del hongo. La aspergilosis Aviar consttuye la ms comn de las micosis en animales de pro- duccin esto se debe a varios factores, entre ellos el hecho de que A. fumiga- tus es un hongo que crece en un rango de temperatura muy amplio y que se ve favorecido por la temperatura corporal de las aves para desarrollarse, otro factor es el hbitat en el cual se desarrolla este miceto y aunque es cosmopolita se sabe que las mayores cantdades de esporas de A.fumigatus se encuentran en ambientes pecuarios como son: Pajas, alimentos concentrados, cama para animales, piensos, etc. Pero sin lugar a dudas el principal factor que predispone a la presentacin de la aspergilosis aviar es la falta de cuidado al momento de llevar a cabo la limpieza y desinfeccin de las incubadoras, la seleccin de huevo para incubacin y la seleccin y compra de insumo para la cama de las criadoras (una mala calidad de cama signica problemas por aspergilosis), se ha comprobado que el llevar a cabo practcas elementales de higiene reduce considerablemente el problema de aspergilosis. Para efectuar un diagnostco adecuado de esta enfermedad es necesario sacri- car u obtener una de las aves afectadas y llevar a cabo la necropsia buscando so- bretodo en los sacos areos las lesiones caracterstcas de tpo tela de terciopelo donde con una observacin directa pueden observarse las cabezas conidiales de los aspergillus, se puede fcilmente tomar de estas lesiones y efectuar un cultvo en SDA + cloranfenicol y despus efectuar microcultvos seriados para caracteri- zar la especie En los mamferos la infeccin se limita a los pulmones Las micosis que afectan a los animales de compaa, de las mencionadas la que ms se ha observado es la rinits mictca en caninos producida por A.fumigatus, donde el hongo se localiza en las conchas o cornetes nasales y puede invadir los senos ocasionan- do daos en el animal que van desde una leve secrecin nasal serosa hasta una secrecin nuco sanguinolenta hasta franca epistaxis, el diagnostco incluye el 95 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes uso de rinoscopio para observar placas blanquecinas en la mucosa nasal, radio- grafas que muestren opacidad en la zona afectada, cultvo por medio de toma de hisopos y el uso de pruebas serolgicas tales como doble difusin o contra- inmunoelectroforesis. El aborto mictco es sin lugar a dudas una de las micosis ms costosas para el ganadero ya que no solo se pierde el producto, sino tambin todo lo invertdo en alimentar a la madre durante el tempo de gestacin, desafortunadamente el aborto por hongos se presenta generalmente en el ltmo tercio de la preez y por ello en nuestro pas seguramente pasa como un evento mas producido por Brucella sp., existen reportes en nuestro medio que nos indican que esta ent- dad de aborto por hongos no es rara en nuestros animales, evidentemente no solo esta enmascarada por los problemas bacterianos, tambin inuyen otros factores, como el hecho de que estos abortos no son estudiados en laboratorios de diagnostco donde se incluyan los agentes mictcos, la rutna diagnostca para ello consistra en remitr muestras de cotledn y placenta, as como r- ganos fetales en especial contenido abomasal, se deber efectuar una observa- cin directa de los tejidos utlizando KOH al 10% y la mezcla KOH 10% mas tnta Quick-Parker (los hongos cenoctcos toman el colorante y se observan mejor) y siembra de lo las muestras en medios de cultvo como SDA con cloranfenicol o el medio de SDA + rosa de Bengala para inhibir el crecimiento bacteriano, es importante en este caso efectuar el estudio histopatolgico para corroborar la presencia de hifas o levaduras invadiendo los tejidos. La lista de agentes reportados como causantes de aborto mictco es bastante amplia pero por mucho el hongo que se reporta con mayor frecuencia es As- pergillusfumigatus. Si se inyecta intratorcicamente en el palomo o gallina, se produce la muerte a los pocos das. Los conejos y cobayos son muy susceptbles a la inoculacin experimental. Ilustracin 36 Aborto micotco por A.fumigatus. j 96 Manual de Micologa Veterinaria Dentro de las patologas provocadas por Aspergillus fumigatus se encuentra la mastts mictca causadas muy comnmente por esta especie, por ser un mi- croorganismo muy oportunista, generalmente se adquiere por contacto directo y traumas provocados en el ordeo, si es el caso de animales productores de leche y por la contaminacin de las instalaciones, se pueden observar lesiones muy similares a las encontradas en los pulmones. En muchos de los casos la aspergilosis en los rumiantes puede transcurrir de manera asintomtca, presentar una forma broncopulmonar, la neumona mic- tca puede ser rpidamente mortal. Entre los signos puede presentarse pirexia, respiracin rpida, supercial y estertrea, secrecin nasal y tos hmeda. En la neumona mictca subaguda o crnica, los pulmones contenen mltples granulomas y la enfermedad se asemeja macroscpicamente a la tuberculosis. En ausencia de neumona, las vacas infectadas no suelen manifestar ms signos clnicos que el aborto entre el sexto y noveno mes de gestacin y las membranas fetales quedan retenidas. Se observan lesiones en el tero, en las membranas fetales y con frecuencia en la piel del feto. En el tero, las reas intercaruncu- lares estn muy engrosadas, tene apariencia de cuero, de color rojo a tostado y contenen focos elevados o erosionados cubiertos de una pseudomembrana adherente de color gris amarillento. La carnculas maternas son de color rojo oscuro o pardo y los cotledones fetales se encuentran muy engrosados. Las le- siones cutneas observadas en los fetos abortados comprenden focos discretos, elevados, blandos de color rojo a gris, que se asemejan a la culebrilla. Ilustracin 37 Glndula mamaria afectada por A.Fumigatus. 97 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes En los caballos, la epistaxis y la disfagia son complicaciones habituales de la micosis del saco gutural. Las bolsas guturales infectadas se caracterizan por una inamacin necrotzante, estn engrosadas, hemorrgicas y cubiertas de una pseudomembrana friables. Tambin se ha descrito una rinits mictca caracte- rizada por disnea y secrecin nasal. La aspergilosis puede ser una enfermedad rpidamente mortal, cuando se asocia a una invasin pulmonar. En estos casos, el factor predisponente es frecuentemente una enterits aguda. La colits surge como una consecuencia de una neutropenia grave que disminuye la inmuno- competencia del hospedador, a la que sigue la invasin de Aspergillus a travs de la mucosa intestnal daada. Pueden desarrollarse trastornos locomotores y ofalmolgicos, e incluso, ceguera, si la infeccin mictca se extende al cerebro y al nervio ptco. En los perros, la aspergilosis se localiza tpicamente en la cavidad nasal o en los senos paranasales y generalmente est causada por una infeccin con A. Fumigatus. La aspergilosis nasal se desarrolla principalmente en los animales dolicocfalos; comienza en la regin posterior del cornete maxilar ventral con signos de letargo, dolor nasal, ulceracin de las ventanas nasales, estornudos, secrecin nasal sanguinopurulenta uni o bilateral, osteomielits de los senos frontales y epistaxis. Las lesiones pueden afectar a los ojos. En los perros con aspergilosis ocular, el fondo del ojo presenta signos sugerentes de endofalmits. Las lesiones macros- cpicas varan considerablemente segn el lugar de infeccin, pero la mucosa se los senos nasales y paranasales puede estar cubierta por una capa de material necrtco negro grisceo y por proliferacin mictca.la mucosa puede estar ne- crtca, as como el hueso subyacente, el cual muestra una prdida de denicin sea en las radiografa. Cada vez se comunican ms casos de la forma diseminada de la enfermedad, en perros que no presentan signos evidentes de afectacin del tracto respiratorio. La mayora de estos casos se han producido en perros de raza pastor alemn y en ellos se ha observado la implicacin de aspergilos poco comunes, como por ejemplo A.terreusyA.deectus. Pueden consistr en letargo, cojera, anorexia, prdida de peso, ebre, hematuria, incontnencia urinaria, linfadenopata gene- ralizada y dcits neurolgicos. 98 Manual de Micologa Veterinaria Las lesiones se encuentran frecuentemente en los riones, bazo y vertebras. A. deectus produce unos signos clnicos similares, a excepcin de que no presenta los dcits neurolgicos tpicos de A.terreus. Diagnstco Las radiografas de los perros con aspergilosis nasal pueden mostrar una apa- riencia global radiotransparente de los senos nasales secundaria a una destruc- cin de los tejidos de los cornetes nasales. Hasta en un 80% de los perros puede observarse osteomielits del seno frontal. La visualizacin de las placas mictcas mediante rinoscopia, junto con los resultados obtenidos en pruebas serolgi- cas y mictcas o radiogrcas, permite establecer un diagnostco. Un diagnos- tco basado exclusivamente en los resultados de los cultvos no es apropiado, ya que Aspergillus es un microorganismo ubicuo y con frecuencia se lesiones no causadas por Aspergillus. La positvidad del cultvo debe estar respaldada por la observacin de nas hifas hialinas, ramicadas y septadas, situadas dentro de las lesiones o mediante pruebas serolgicas. La prueba de doble difusin en el gel-agar para antcuerpos sricos es una tcnica diagnstca able; puede ser posible mejorar la sensibilidad con tcnicas como ELISA. La tcnica de la inmu- nouorescencia puede utlizarse para identcar hifas en cortes de tejido. Tratamiento En los perros se utlizan varias tcnicas quirrgicas y tratamientos farmacolgi- cos con resultados variables. En los casos de aspergilosis canina nasal crnica se realiza exposicin quirrgica de la cavidad nasal y el raspado, junto con irrigacio- nes de yodo al 10%. Tambin se han utlizado, con una tasa de xito del 90%, las instlaciones de enilconazol 10mg/kg, dos veces al da durante 7 a 14 das, a travs de los tubos implantados quirrgicamente en los senos frontales. Entre los antfngicos ad- ministrados sistmicamente se encuentran el tabendazole, ketoconazol, itraco- nazol y uconazol. 99 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes En los caballos, las micosis guturales se tratan mediante la exposicin y el raspa- do quirrgicos. La natamicina tpica y el yoduro potsico administrado por va oral han resultado ecaces en casos de infeccin por Aspergillus. Se ha descrito la ecacia del itraconazol, 3mg/kg dos veces al da, administrado durante 84 y los 120 das, en casos de rinits equina por Aspergillus. La mastts bovina se ha tratado ecazmente combinando inyecciones intraarte- riales e intramamarias de miconazol. 2.6 Hongos imperfectos (fase de levadura y fase de moho) Pertenecen a este grupo todos los hongos cuyo ciclo vital no se conoce total- mente. A medida que pasan los aos, este grupo va hacindose menos numero- so y es muy probable que en el futuro todos los miembros del mismo se revisen. Dodge clasica a los Acnomyces como hongos imperfectos. Estudiaremos los hongos que tenen una fase de levadura y otra de moho, como parte de un com- plejo ciclo morfolgico. 2.6.1 Gnero Sporotrichum Este gnero se caracteriza por sus hifas irregularmente ramicadas; los conidi- foros no estn diferenciados, o pueden tener solamente un conidio sobre un corto lamento terminal o lateral. Se presenta en dos formas; la forma diseminada que solamente se ha reportado en el perro y la infeccin limitada a los tejido subcutneos y linftcos ambas se diagnostcan por la presencia de ndulos, la primera presentan ndulos esfri- cos duros en el sito de la herida por puncin en el tejido tegumentario. Que por ltmo se ulcera y drena. En el segundo caso los ndulos se presentan y pos- teriormente, se desarrollan ulceras a lo largo de los vasos linftcos del tpo de linfangits ulceratva. Esta ltma se reporta en el caballo y el perro. 100 Manual de Micologa Veterinaria Los miembros del gnero hallados en los animales, solamente atacan al caballo. La identdad exacta de estos hongos es desconocida. Han sido considerados va- riablemente como Sporotrichum beurmanni, SporotrichumequiySporotrichum schencki. Las especies de estos hongos que afectan a los quidos, evidentemen- te no han sido estudiadas comparatvamente de un modo completo. Parecen ser similares, si no idntcas, a las especie humana denominada Sporotrichum schenckivar,S.beurmanni. Este esporotrico es causa de una linfangits del caballo, que puede confundirse clnicamente con la epizotca producida por Zymonemafarciminosum(Blastomy- cesfarciminosus). En los tejidos, el esporotrico produce clulas levaduriformes ms pequeas que las Blastomyces. En medio adecuado, como el agar-maltosa de Sabouraud, se forma una colonia pequea, gris-blanquecina y ribeteada. A medida que envejece se torna de color marrn oscuro, arrugada y con el centro elevado. Al examen microscpico se comprueba que la colonia est compuesta de lamentos micelianos. Las conidias estn unidas a los lados y extremos de las hifas por cortos esterigmas. La esporotricosis es una enfermedad granulomatosa crnica, espordica y poco comn en las personas y varios animales domstcos y de laboratorios. Causada por la especie Sporothrixschenkii. El microorganismo es dimrco y forma mice- lios en la vegetacin y en el agar dextrosa Sabouraud a 25 y 30C, pero aparece en forma de levadura en los tejidos y medios a 37C. Es ubicuo en el suelo, la vegetacin y la madera. Ilustracin 38 S.beurmannivisto al microscopio. acccc i i i i i i i i innnn 38 38 38 38 38 38 38 38 38 SSSSSSSSS b b b b b b b b b beu eu eu eurm rm rm rman an an an iiiii ni ni ni ni iiiii vi vi vi vi ttt st st st stoooo llllll al al al al mmmmiiiiiic ic ic icro ro ro rosc sc sc scoop op op 101 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 2.6.1.1 Sporothrix schenkii La infeccin suele resultar de la inoculacin de directa del microorganismo en la lesin de la piel, mediante el contacto con plantas, el suelo o por penetracin de cuerpos extraos. La enfermedad diseminada por la inhalacin de esporas es poco comn. La esporotricosis ha sido descrita en perros, gatos, caballos, va- cas, mulas, aves, cerdos y el hombre aunque ha sido descrita tambin en otros animales como los camellos, armadillos y animales de laboratorios. Puede pro- ducirse infeccin zoontca. El gato, es probablemente, la especie con mayor potencial zoontco y se ha descrito la transmisin del gato a las personas. Mien- tras que la infeccin desde otras especies necesita la inoculacin de piel previa- mente lesionada (Merchant y Packer, 1980). Clnica y lesiones La esporotricosis puede clasicarse en tres formas: linfocutnea, cutnea y di- seminada. La forma linfocutnea es la ms frecuente. En ella se desarrollan pe- queos ndulos drmicos o subcutneos de consistencia rme de 1 a 3 cm de dimetro, en el punto de inoculacin. A medida que la infeccin asciende por va linftca, se propaga y se desarrollan nuevos ndulos. Las lesiones se ulceran y eliminan un exudado serohemorrgico. Aunque la enfermedad sistmica est ausente en un principio, la forma crnica de la enfermedad puede originar e- bre, apata y depresin. Ilustracin 43 Colonia de S.schenckii. 102 Manual de Micologa Veterinaria La forma cutnea persiste localizada en el punto de inoculacin, aunque las lesiones pueden ser multcntricas. La esporotricosis diseminada es poco fre- cuente, pero potencialmente mortal y puede desarrollarse por falta de atencin de las formas cutnea y linfocutnea. La infeccin se propaga por va hematge- na o por diseminacin tsular desde el punto inicial de inoculacin a los huesos, pulmones, hgado, bazo, testculos, tracto gastrointestnal y sistema nervioso central (Aielllo, 2000). Diagnstco Este puede establecerse por examen de cultvo (muestras obtenidas de lesiones que no han reventados) o examen microscpico de los exudados o de muestras de biopsia. En los tejidos y exudados, el microorganismo est presente en nme- ro de escaso a elevado, presentndose como clulas aisladas en forma de ciga- rro, dentro de los macrfagos. Las clulas fngicas son pequeas y pleomrcas. Puede haber papilas con formas de paletas de pingpong. Se ha utlizado la tc- nica de inmunouorescencia indirecta para detectar antcuerpos de las clulas levaduriformes en los tejidos. En especies distntas a los gatos, el Sporothrix se encuentra frecuentemente en escasa concentracin en exudados y tejidos in- fectados, de modo que para alcanzar un diagnstco es preciso, generalmente, realizar un cultvo de microorganismo. En los cultvos se forma un micelio verda- dero con hifas delgadas, ramicadas y septadas que contenen delgados conidi- foros con conidios en forma de pera. Tratamiento Se ha utlizado con buenos resultados una solucin saturada de yoduro potsico, por va oral; el tratamiento se prolonga por 30 das ms despus de haber logra- do una aparente cura clnica. Durante el tratamiento, el animal debe ser con- trolado para detectar posibles signos de intoxicacin por yodo, como anorexia vmitos, depresin, espasmos musculares, hipotermia, cardiomiopata, colapso cardiovascular y muerte. Los gatos son especialmente sensibles a los compues- tos yodados y al desarrollo del yodismo. 103 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La esporotricosis debera ser considerada una zoonosis debido a que los casos de transmisin de animales a seres humanos estn perfectamente descritos. Debe mantenerse una higiene estricta en la manipulacin de animales sospe- chosos o diagnostcados de esporotricosis. 2.6.2 Gnero Blastomyces Este germen produce la blastomicosis americana, enfermedad del hombre y ani- males caracterizada por afeccin pulmonar y lesiones tuberculoides, formacin de abscesos cutneos y, en algunos casos, infeccin generalizada con la forma- cin de abscesos en varios tejidos. La enfermedad fue observada por primera vez en el hombre por Gilchrist, en 1896, y el hongo fue aislado y denominado por Gilchrist y Stokes en 1898. Meyer ha sido el primero describi un caso na- tural de blastomicosis canina en 1912. Saunders ha recogido numerosas comu- nicaciones sobre la enfermedad en el perro. La primera notcia del hallazgo del hongo en lesiones blastomictcas equinas, se debe a Benbrook, Bryant y Saun- ders en 1948. Ramsey y Carter, en 1952, publicaron un resumen de diecisis casos de la en- fermedad en perro, que coincidan con sus propias observaciones, en que las granulomatosis supuradas son las ms corrientes observadas en los pulmones y la piel. Ilustracin 44 Esporotricosis felina 104 Manual de Micologa Veterinaria El origen de la infeccin humana se desconoce, pero se cree que el hongo sapro- ftcamente en el suelo y que la infeccin del hombre y los animales es accidental y bastante rara. No existe ningn trabajo que mencione la transmisin entre los animales, o de estos al hombre. La naturaleza de la enfermedad, no obstante, indica que deben tener cuidado quienes manipulan tejidos infectados, sean ani- males o humanos. 2.6.2.1 Blastomyces dermadis Aparece en los tejidos infectados en forma de clulas grandes, redondeadas, de 5 a15 de dimetro, con la llamada pared doble. Pueden observarse yemas similares a las de las levaduras, encontrndose a veces dispuestas formando cor- tas cadenas. El hongo puede cultvarse en agar de Sabouraud a la temperatu- ra de la habitacin, creciendo lentamente formando una colonia blanca que se vuelve de color marrn a medida que pasa el tempo. Al examen microscpico se aprecian hifas ramicadas y tabicadas, y conidias laterales y ocales de 2 a 8 de tamao. La reversin al tpo levaduriforme se consigue resembrando a medios recientemente preparados e incubados a 37 C. (Aiello, 2000). Los conejos, cobayos y ratones pueden infectarse artcialmente. Los ratones son los animales de experimentacin de eleccin. Ilustracin 39 Perro con lesiones cutneas por .B.dermadis. 105 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La blastomicosis se diagnostca por la comprobacin de clulas de doble pa- red en las lesiones. El hongo se diferencia de Cryptococcus neoformans por la presencia de una capsula bien marcada en torno a este ultmo. Las clulas de Coccidioides immis, que pueden confundirse con B. dermadis, no muestra gemacin. La reaccin de jacin del complemento y la prueba cutnea han sido empleadas en el diagnostco de la enfermedad en el hombre, pero no se conoce su aplicacin a los animales. El diagnostco positvo puede hacerse cultvando e identcando el germen. 2.6.3 Gnero Histoplasma Este hongo produce la histoplasmosis, enfermedad humana y de los animales, caracterizados por las manifestaciones clnicas muy variadas, es una micosis intracelular que daa el sistema retculo endotelial y a todos los rganos. Las lesiones internas producen leucopenia, anemia, hepatomegalia, esplenomega- lia, endocardits vegetante y enterits ulceratva. Tambin se han observado en la enfermedad, lesiones drmicas papulares y ulcerosas, pero generalmente se considera que se trata de un proceso sistmico que afecta al retculoendotelio. Estudios recientes de histoplasmosis han demostrado que existe en el hombre un tpo leve de enfermedad que produce ndulos pulmonares. Estas lesiones se calcican y naturalmente pueden confundirse con la tuberculosis en el diagnos- tco con rayos X. (Aiello, 2000). La histoplasmosis es en general una enfermedad granulomatosa crnica, no con- tagiosa, diseminada y que est causada por el hongo Histoplasmacapsulatum. Este microorganismo se encuentra en los suelos que contenen excremento de aves y murcilagos. Crece en forma de micelio en el medio y en el cultvo a tem- peratura ambiente y en forma de levadura en tejidos y cultvos a 37C. El primer caso de histoplasmosis fue descrito por Darling en 1906. Crey que el agente era un protozoario y le dio el nombre de Histoplasmacapsulatum. La na- turaleza mictca del agente fue advertda por Da Rocha-Lima (1912-1913), pero la prueba denitva de que se trataba de un hongo fue aportada por Hausmann y Schenken en 1933-1934 y por De Monbreum en 1934. De Monbreum fue el 106 Manual de Micologa Veterinaria primer investgador que consigui el aislamiento del germen, a partr de un caso de infeccin natural en el perro, en 1939. Desde esta fecha ha sido aislado de perros y otras especies de animales, como ratas, ratones, mofetas, vacas, ovejas, cerdos, gallinas, pavos, palomas, geomes, zorra mochilera, conejos, coates, ar- dillas, gatos y caballos. Experimentalmente se considera al ratn blanco como el animal ms adecuado. Las fuentes de infeccin generalmente son la terra, las cuevas, las casa abando- nadas, el guano de murcilago y los propios murcilagos que eliminan las espo- ras, tambin en las excretas de las gallinas, en los gallineros, ya que le propor- ciona a este microorganismo alto grado de humedad, temperatura y materia orgnica. La trasmisin probable del animal al hombre aun no se ha vericado. El microor- ganismo penetra por va respiratoria, llegando las esporas al pulmn y se produ- ce entonces un foco de bronconeumona. Para su diagnostco es importante el cuadro clnico y los antecedentes epidemio- lgicos, (si han estado expuestos a material contaminado), adems se orientan la radiografa del trax y la prueba serolgica. Para el diagnostco micolgico se envan muestras de secreciones nasales, contenido gstrico, lavado bronquial, sangre y una biopsia de ganglio y de piel. La fase de levadura de este microorganismo es ms patgena que la fase mice- lial, la cual no produce lesin fatal alguna. 2.6.3.1 Histoplasma capsulatum Es un ejemplo tpico de hongo dimrco, que aparece en forma de levadura y tambin de moho. En las lesiones de la enfermedad natural se forman por gema- cin corpsculos ovales, levaduriformes, de 2 a 4 m de tamao, dispuestos en el citoplasma de las clulas endoteliales y mononucleares. El tpo levaduriforme del germen se cultva en agar-sangre inclinado y bien cerrado, incubado a 37C, donde forman colonias semejantes a las de los estalococos. 107 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes En agar-glucosa de Sabouraud a la temperatura del laboratorio se producen co- lonias algodonosas que se obscurecen a medida que envejecen. En los cultvos jvenes se observan hifas tabicadas ramicadas, provistas de pequeas conidias (2-5 m) redondas, denominadas microconidias. En los cultvos ms viejos se notan conidias grandes (8-12 m), de gruesa pared (macroconidias). Estas co- nidias mayores estn rodeadas de proyecciones digitformes que se consideran de valor diagnostco del hongo. Todava no se ha explicado el ciclo completo por el que el hongo pasa desde la forma de levadura a la de moho, o viceversa. La histoplasmosis se considera distribuida por todo el mundo. En la actualidad se sabe que existe en reas denidas, probablemente porque estas hayan sido centros de investgacin. El descubrimiento de H.capsulatum en el perro llevo a la hiptesis de que este animal fuera el reservorio de la infeccin, o que se transmitra del perro al hombre. Las encuestas para determinar la frecuencia de la histoplasmosis del hombre y perro no indican que exista relacin entre una y otra. La presencia del hongo en los exudados cutneos supurados y en el esputo, indica que los animales infectados no deben estar en contacto con personas. Es muy probable que el hbitat natural de este hongo sea el suelo y las plantas, pero que se haya hecho parasito de las clulas animales. (Aiello, 2000). Clnica y lesiones Los signos varan y no son especcos, reejando los diferentes rganos afec- tados. En muchos casos, los perros presentan un curso prolongado de prdida de peso hasta la emaciacin, tos crnica, diarrea persistente, ebre, anemia, hepatomegalia, esplenomegalia, linfadenopata y ulceras nasofarngeas y gas- trointestnales. En los perros tambin se ha observado dicultad respiratoria obstructva causada por la linfadenopata traqueobronquial, la diseminacin como se ha mencionado suele afectar la piel, donde se forman lesiones nodula- res, ulceradas, supurantes. En la histoplasmosis generalizada del perro tambin se han descrito poliartro- pata, coriorretnits y desprendimiento de la retna. La histoplasmosis aguda 108 Manual de Micologa Veterinaria puede ser mortal despus de un curso clnico de 2 a 5 semanas de duracin. En los gatos, la infeccin diseminada es frecuente. Los signos clnicos pueden ser no especcos, pero a menudo consisten en dicultad respiratoria, ebre, depresin, anorexia y prdida de peso. Tambin pueden presentarse linfoade- nopatas, hepatomegalia, trastornos oculares como; conjuntvits, coriorretnits granulomatosa, desprendimiento de la retna y neurits ptca, adems otros sig- nos clnicos son la cojera, ndulos o ulceras cutneas. Las lesiones macroscpicas pueden consistr en hipertroas del hgado, bazo y de los ganglios linftcos mesentricos, ascits, ndulos pulmonares de color blanco amarillento de color variable e hipertroa de los ganglios linftcos bronquiales. El hgado hipertroado puede presentar mltples o diversos focos de inama- cin granulomatosa. De forma irregular y color amarillo plido. Los focos plidos pueden existr tambin en el miocardio, mientras que el intestno delgado puede presentar paredes gruesas de color gris y ulceras en la mucosa. Diagnstco No es posible diagnostcar la enfermedad clnicamente; ya hemos mencionado que su semejanza con la tuberculosis puede inducir a confusiones. El mtodo diagnostco ms satsfactorio es la demostracin del hongo en los tejidos, pero debe conrmarse por el aislamiento e identcacin del microorganismo. Los histoplasmas suelen ser numerosos en los tejidos afectados y con frecuencia puede alcanzarse un diagnstco denitvo mediante aspiracin con aguja na y una citologa exfoliatva. Si la citologa no permite establecer un diagnstco, Ilustracin 40 H.capsulatum con tncion del PAS. 0 l t i d l 109 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes es necesario realizar una biopsia tsular. Los histoplasmas son difcil de detectar mediante la tncin rutnaria con eosina-hematoxilina pero se te bien con las tnciones para hongos del PAS., de la metenamina y plata de Gomori y de Gri- dley.Las levaduras presentes en los macrfagos y clulas gigantes son estructu- ras redondas u ovaladas de 1 a 4 m con una pared celular delgada y una zona na y clara entre la pared celular y el citoplasma. El H.capsulatum puede cult- varse tambin a partr de muestras tsulares, aspirados con aguja na y lquidos corporales. (Aielllo, 2000). La histoplasmina, producto anlogo a la tuberculina, administrada intradrmi- camente es tl para determinar el porcentaje de infecciones humanas. El em- pleo de este producto diagnostco en el perro ha sido muy limitado, pero en las encuestas en que se uso se ha considerado tan tl como en el hombre. (Cole, Prior y Saslaw). Para la reaccin de aglutnacin se ha empleado un antgeno a base de partculas de colodin sensibilizadas con histoplasmina. La reaccin de jacin del complemento ha demostrado ser un mtodo adecuado para deter- minar los animales infectados en encuestas de campo. Tratamiento El ketoconazol es usado para el tratamiento de la histoplasmosis canina a dosis de 10 a 15 mg/kg dos veces al da, durante 4 a 6 meses, cuando la enfermedad se ha detectado de manera precoz o es de carcter moderado. En casos gra- ves, se recomienda un tratamiento concomitante con anfoteracina B, a dosis de 0,25 a 0,5 mg/kg I.V tres veces a la semana durante las primeras dos semanas de tratamiento con ketoconazol, o itraconazol, a dosis de 5mg/kg, dos veces al da, esta misma se ha utlizado con xito en los gatos con histoplasmosis felina diseminada. 2.6.3.2 Histoplasma farciminosum Esta especie produce la Linfangits epizotca. El hongo forma micelios en la na- turaleza, levaduras en los tejidos y presenta una fase saprota en el suelo. La in- feccin probablemente se adquiere por contaminacin de heridas o transmisin realizada por insectos hematfagos (Merchant y Packer, 1980). 110 Manual de Micologa Veterinaria Clnica y lesiones El curso clnico de la enfermedad se caracteriza por la presencia de ndulos cu- tneos no adheridos a planos profundos, que tenen su origen en los vasos y ndulos linftcos superciales infectados y que tenden a ulcerarse y a liberar una secrecin, alternando con periodos en que la lesin est cerrada. Los gan- glios linftcos estn hipertroados y endurecidos. La piel que cubre los ndulos se puede engrosar, endurecer y fusionar con el tejido adyacente. Las lesiones tambin pueden tener lugar en los pulmones, conjuntva, cornea, mucosa nasal y otros rganos. Los ndulos son piogranulomas una capsula broso gruesa y contenen un exudado espeso y cremoso y los microorganismos causantes. (Aie- lllo, 2000). Diagnstco Los signos clnicos son altamente sugerentes. El diagnstco puede conrmarse por examen microscpico de la biopsia. Las formas de levaduras de los orga- nismos distenden el citoplasma de los macrfagos y aparecen en las secciones teidas con eosina-hematoxilina como cuerpos globosos u ovalados, de 3 a 4 m, con un cuerpo baslo central rodeado por una zona no teida. El microor- ganismo es muy semejante al H.capsulatum. Tratamiento No se conoce ningn tratamiento que sea completamente satsfactorio. Puede recurrirse a extrpacin quirrgica de las lesiones, combinada con los frmacos antfngicos. 2.6.4 Gnero Coccidioides Wernicke, en Sudamrica, fue el primero en descubrir un caso de granuloma coccidioide en el hombre, en 1892. Rixford descubri un caso humano en Cali- fornia en 1894. Giltner fue el primero que observ un caso bovino, tambin en California, en 1918. Dickson y Giord demostraron en 1936 la relacin existente entre el granuloma coccidioide y la ebre del valle de San Joaqun (San Joaqun Valley Fever), al comprobar que ambas enfermedades eran producidas por Coc- cidioidesimmis. (Merchant y Packer, 1980). 111 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Se crey durante cierto tempo que este germen estaba localizado exclusiva- mente en California, sobre todo en el Valle de San Joaqun. Sin embargo, han sido sealados como humanos en Arizona, Colorado, Illinois, Kansas, Louisiana, Missouri, Nebraska, Nuevo Mjico, Pennsylvania, Carolina del Sur, Tennessee, Tejas, Washington, Alaska y Hawaii. La enfermedad ha sido comprobada tam- bin en Amrica del Sur, Mjico e Italia. Este hongo ha sido encontrado en el ganado bovino ms que en ninguna otra especie animal. Han sido descritos casos bovinos en Arizona, California, Colorado, Nuevo Mjico, Mjico y Tejas. Maddy ha observado que la infeccin es muy diferente en el SO. De los EE. UU., en ganado de cebo que vive en zonas polvorientas. Se ha cultvado el hongo a partr de muestras caninas en Arizona y Canad, y de la oveja en Arizona. En roedores salvajes cazados con trampa en las proximida- des de San Carlos, Arizona, comprob Emmons la existencia del germen hongo. La presencia de Coccidioides immits en tantos hospedadores ha puesto en el primer plano las relaciones de los mismos con la enfermedad humana. Stles y Davis llegan a la conclusin de que no existen pruebas de que el hongo se transmita de un animal a otro, de estos al hombre, o de una persona a otra, en condiciones naturales. Sin embargo, se la comprobado la transmisin del hongo a los animales de laboratorio a partr de tejidos afectados, por lo que deben tomarse precauciones al manipular tejidos procedentes de animales enfermos. Igualmente, los cultvos de laboratorio deben manejarse con precauciones. Se cree que la mayora de los casos de enfermedad se producen por contacto con el suelo o polvo, en los que abunda mucho las esporas durante el periodo de lluvias. El agente puede entrar a travs de lesiones cutneas y en casos raros por el tubo gastrointestnal. 2.6.4.1 Coccidioides immis Coccidioides immis aparece en los tejidos infectados en forma de clulas es- fricas, con pared doble, gruesa, llenas de numerosas esporas elipsoides. Estas clulas o esferioles pueden alcanzar tamaos de hasta 30 , o ms. En los cultvos en medios slidos, tales como agar-extracto de cebada germinada, el hongo forma colonias algodonosas blancas. El examen en gota pendiente de- 112 Manual de Micologa Veterinaria muestra un micelio grande, compuesto de hifas entrecruzadas. Las hifas son ta- bicadas, pero cada clula tene ms de un ncleo. En las hifas se forman nume- rosas artrosporas, que se fragmentan y liberan cuando el cultvo envejece. Estas artrosporas son muy infectantes, produciendo la enfermedad cuando se inhalan con partculas de polvo. En el hombre, este microorganismo produce una enfermedad designada con dos nombres. La ebre del Valle (de San Joaqun, se entende), enfermedad aguda, parecida a la inuenza o gripe, generalmente no complicada y que raramente causa la muerte. Y el granuloma coccidioide, forma crnica de la enfermedad, muy mortfera, que afecta a los pulmones, piel, ganglios linftcos, huesos, me- ninges y vsceras torcicas. En los bovinos el germen produce abscesos en los pulmones, cavidad pleural y ganglios linftcos cervicales. Estas lesiones pueden confundirse con las de la tu- berculosis, actnomicosis, actbacilosis y abscesos por C.pyogenes. En realidad, el nico medio cierto de diagnstcos y diferenciacin es el aislamiento e ident- cacin del agente causal. Traum y Schalm han observado en torno a la esferiola coccidioide radiaciones claviformes, en cuatro casos de lesiones actnomictcas tpicas del ganado. Esto pone en evidencia que, como ya hemos indicado antes, la actnomicosis no puede diagnostcarse por el simple hallazgo de colonias estelares en el exudado purulento. Ilustracin 41 C.immis al microscopio. 113 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes El hongo produce abscesos en los ganglios linftcos de la oveja. Estas lesiones son similares a las de la linfadenits caseosa, La descripcin de la enfermedad en perros es limitada. Diagnstco En reas endmicas, la coccidiomicosis debe sospecharse en perros que presen- tan una enfermedad broncopulmonar crnica y cuando se descubren ndulos pulmonares y ganglios linftcos hipertroados en las radiografas del trax. Las lesiones son piogranulomas que contenen C.immis libre en el exudado y en las clulas gigantes multnucleadas y epitelioides. El diagnstco se establece demostrando la presencia de las esfrulas en los teji- dos. El suero tambin puede examinarse mediante la prueba de inmunodifusin en agar gel para la deteccin de precipitnas y antcuerpos jadores del comple- mento. Los intentos del cultvo del hongo deben restringirse a los laboratorios que cuentan con el equipo necesario para manejar estos cultvos infecciosos tan peligrosos. Tratamiento Es preciso instaurar un tratamiento antmictco a largo plazo. En el caso de una infeccin diseminada, el tratamiento se prolonga a mas o menos un ao. El ketoconazol a dosis de 10 a 30 mg/kg/da. Se administra para el tratamiento de la coccidiomicosis en el perro. Mientras que la anfoteracina B se administra en aquellos pacientes que son intolerantes al ketoconazol o que no presentan me- jora cuando son tratados exclusivamente con ketoconazol. El uconazol tam- bin puede ser utlizado a largo plazo con dosis de 2 a 3mg/kg/da. La osteomie- lits coccidiomictca de los equinos ha sido tratada con xito con itraconazol con dosis de 2,6 mg/kg dos veces al da, por un perodo de 6 meses. 2.6.5 Gnero Penicillium Este gnero es poco frecuente en los animales domstcos, sin embargo, este se ha aislado en casos de dermatotosis felina, tambin en casos de celulits orbital, sinusits y neumona en gatos. Mientras que en los perros se ha logrado 114 Manual de Micologa Veterinaria aislar en los casos de la enfermada invasiva de los tejidos nasales, en lesiones invasivas de los pulmones, y en los sacos areos de las aves. Penicillium spp. Esta ampliamente distribuido en la naturaleza y se encuentra en los suelos, granos y distntos alimentos y forrajes. Clnica y lesiones Los perros con peniciliosis nasal, presentan estornudos crnicos y secrecin na- sal aguda o crnica, que vara desde hemorrgica intermitente a mucosa o mu- copurulenta intermitente o contnua. En las radiografas se observan reas de destruccin en los cornetes, con aumento de la radiotransparencia. Macrosc- picamente, la mucosa nasal presenta focos de necrosis y ulceracin; microsc- picamente, las hifas fngicas pueden formar un tejido grueso sobre una mucosa intacta adyacente a estos focos. Diagnstco El diagnstco se basa en el cultvo de los hongos, las caracterstcas de las lesio- nes y la presencia de hifas fngicas, as como el resultado positvo en las pruebas de difusin doble en agar gel. Para conrmar la presencia del hongo, el aisla- miento y cultvo del Penicillium debe acompaarse de la demostracin de que el hongo ha invadido al tejido. En los tejidos Penicillium marnaeei se asemeja mucho a la fase de levadura del Histoplasmacapsulatum. Ilustracin 42PenicilliumSp. visto con microscopia electrnica 115 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Tratamiento Se usa un tratamiento combinado consistente en turbinectoma y raspado qui- rrgico lavado de la cavidad nasal con tntura de yodo al 1% o con povidona yodada y tabendazol oral. En algunos perros con peniciliosis nasal ha resultado efectvo el tratamiento con uconazol a dosis de 2,5 a 5,0 mg/kg/da durante 2 meses. 116 Manual de Micologa Veterinaria Captulo 3. DIAGNSTICO GENERAL DE LAS MICOSIS El diagnstco de los hongos se realiza en los laboratorios especializados. Las muestras representatvas de las lesiones mictcas son varias. Para las micosis superciales se tenen las uas, la piel y el pelo, y en el caso de las micosis pro- fundas, los exudados, el pus, la biopsia, los esputos, y el liquido cefalorraqudeo. En el ao de 1840 Henle propuso un medio para diagnostcar la presencia de un agente patgeno, siguiendo este mismo modelo Robert Koch completo la teora de lo que hoy se conoce como los postulados de Koch, estos criterios para el diagnstco de una enfermedad son los siguientes: 1. El microorganismo (gnero y especie) patgeno debe estar presente en todos los individuos enfermos. 2. El microorganismo se debe poder aislar del hospedador y sembrado en un cultvo puro y crecer. 3. El microorganismo crecido en cultvo puro al inocularse en animales sanos debe provocar la sintomatologa especca de la enfermedad. 4. El microorganismo debe poder ser reaislado del hospedador infectado de for- ma experimental. (Pardo y Morejn, 2008) 3.1 La toma de muestra Exige una serie de requisitos, que dependen del material que se analice, estos son: a) Pelos. Se arrancan con pinzas, se procura coger los que estn enfermos que son los ms cortos y delgados; es fundamental que quede la parte inferior en contacto con el bulbo; se deben tomar tambin escamas, que se arrancan de la piel y se colocan en una placa de Petri que contenga papel blanco en su interior (todo esterilizado) la muestra se conserva hasta su anlisis y siembra, en un me- dio adecuado. 117 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes b) Uas. Iguales condiciones se hacen raspadas de las lesiones con un bistur y se cortan partes de la uas enfermas. c) Pus. De existr pus en la lesiones se toma ste con el asa estril y se realizan retenciones sobre un portaobjeto para realizar la colocacin de Gram. d) Esputos. Deben recoger, en frascos estriles, los primeros de la maana, estos son los ms concentrados. e) Abscesos: punzan con jeringa o aguja estril en seco, y el contenido se vierte en un frasco estril. f) Orina. Debe obtenerse por cateterismo y verter en frascos estriles. g) Heces fecales. Se recogen en frascos estriles. h) Exudado farngeo, nasal y vaginal. Se recoge con un vstago metlico que se introduce en un tubo, donde se conserva hasta el momento del examen y siembra. i) Sangre. La extraccin de sangre es una tcnica muy compleja y se necesita una mejordescripcin. (Baker.F.J y Breach. M.R, 1995). Los sitos de extraccin de sangre y tcnica son los siguientes: Vena yugular: ste es el sito que se usa con ms frecuentemente en el equino, bovinos, ovinos, caprinos y grandes mamferos salvajes, en ocasiones se usa en perros, gatos, aves, conejos, ratas y otros animales de laboratorio. Se recomienda la vena yugular para perros muy pequeos o cuando se necesi- tan grandes cantdades de sangre. Con el perro sentado, un ayudante detene la mandbula con una mano y con la otra voltea la cabeza hacia arriba y ligeramen- te de lado. El operador coloca el pulgar de la mano izquierda en el surco yugular para ocluir y anclar la vena yugular, mientras manipula la jeringa y la aguja con la mano derecha. (Baker.F.J y Breach. M.R , 1995). 118 Manual de Micologa Veterinaria El perro puede tambin sujetarse en inclinacin dorsal o lateral con la cabeza extendida. En caso de cachorritos, puede ser ms conveniente sostener al animal bajo el brazo derecho del ayudante, sujetando los miembros anteriores con la mano derecha. En el conejo y la rata, puede ser necesaria la anestesia y la incisin en la piel. Se recomienda limpiar el sito donde se va a tomar la muestra, sobre todo en los animales de pelo largo. Las venas se localizan ms fcilmente cuando se fricciona el sito de la puncin con alcohol. Vena ceflica: este es el sito que se utliza ms frecuentemente para la extrac- cin de sangre de pequeas cantdades en el perro y gato. Ilustracin 45 Extraccin de sangre de la V. yugular Ilustracin 46 Extraccin de sangre de la V. ceflica 46 66 EExtracc i i in ddde sangre ddde llla V e as cantdades en el pe p rro y y ga ga g 119 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Al constreir el rea del aspecto dorsal de la extremidad anterior a nivel del codo, se puede elevar la vena ceflica, empezando justo por encima de la art- culacin carpiana. Otra manera es hacer presin con la mano u alguna banda para hacer un puen- te y se de la acumulacin de la sangre, se puede usar catteres especiales o con una jeringuilla. Vena auricular, este sito puede usarse en el gato, perro pequeo, cerdo, conejo. Por lo general se selecciona una vena auricular marginal en el rea dorsal de la oreja, el pelo se corta, se rasura o se le aplica un agente depilatorio. Se frota la piel con alcohol, yodo o ter. Se coloca el dedo ndice de la mano izquierda al momento de aplicar una navaja con lo, un estlete o una jeringa. Con eso se proporciona un apoyo y se asegura una incisin solamente a nivel de la piel y en la vena y no a travs del cartlago subyacente, porque debe evitarse hacer cortes en las orejas y que sangre los dedos. Cuando se usa jeringa en un animal grande como el conejo, deber usarse una aspiracin suave para evitar que la vena colapse, adems que esta es una tcni- ca para extraer pocas cantdades de sangre. Dedo del pie o ua, se puede usar en perros pequeos, cachorros y pequeos animales. Al cortar una ua, se iniciar un goteo uniforme, ste disminuye gradualmente despus de 20 a 40 gotas, pero se pueden obtener con facilidad hasta 80 gotas (4ml). Primero se corta el pelo porque la presencia aunque sea de unos cuantos pelos acelera la coagulacin. Despus de desinfectar, se corta el lecho capilar de la ua en una porcin cercana a su base. Cuando el sangrado se detene prema- turamente, puede ser necesario el cogulo con una gaza o cortar ms cerca de la ua, en las aves es una de las formas ms fcil de extraer sangre. En la rata o ratn se puede extrpar un dedo con tjeras o pinzas y obtener la sangre de ese sito. 120 Manual de Micologa Veterinaria Cola: se puede usar en el cerdo, oveja, bovino, rata, ratn y peces. Se puede hacer por 2 tcnicas. Venipuncin: se realiza en la vena coccgea en la porcin ventral de la cola del bovino, se hace posible cuando se exiona la cola hacia arriba. El sito de venipuncin es aproximadamente a 10 cm del perineo. Este sito, as como los cuernos, es deseable cuando se obtene sangre de ganado de exposicin, ya que se evitan daos. En las especies pequeas se puede observar por medio de la luz brillante o por medio de la transiluminacin y se pueden dilatar para facilitar la maniobra de masaje con xilol o sumergiendo la cola en agua caliente. Amputacin: es el mtodo de uso ms comn en la rata y ratn. La amputacin de un pedazo de la cola o una incisin transversa con una navaja losa, producir el goteo de sangre. Si el animal est acostumbrado a que se le maneje, se puede hacer sosteniendo al animal con la mano, si no, se coloca en un tubo de tamao adecuado con la cola colgando a travs de la abertura, para facilitar la tcnica se debe masajear desde el cuerpo hasta la punta de la cola y se puede obtener como 3ml de sangre o se pone la cola en agua a 45C durante 1 minuto. Corazn: se puede usar en cualquier animal, pez, reptl o ave. En todos los ani- males la sangre se obtene con ms facilidad usando anestesia, pero no es obli- gatorio usarla. Vasos femorales, safenos, tbiales: se usa en perros, gatos, primates, mamferos pequeos y ratas. Ilustracin 47 Puncin de la V. coccgea 121 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes En los gatos la vena femoral se localiza con facilidad. Se pueden obtener mayores cantdades de sangre en la vena femoral a lo largo del aspecto medial de la pierna entre rodilla y abdomen. Vena mamaria: se usa en vacas lecheras. La vena se encuentra en el borde an- terior de la glndula mamaria, aproximadamente 5 7 cm lateral a la lnea alba y corre hacia adelante, desvindose lateralmente y pasando por un foramen en la pared abdominal, posterior a las costllas. La venipuncin se hace similar a la extraccin de sangre yugular; sin embargo, es ms difcil de lograr la distencin de la vena mamaria. Vena cava anterior: se usa en el cerdo. Se inserta una aguja en la parte inmediatamente anterior y ligeramente al car- tlago cariniforme y en lnea del cartlago a la base de la oreja. Se dirige la aguja hacia arriba, ligeramente hacia atrs y medialmente. En los machos grandes y en las hembras que estn criando se necesita una aguja de 4 a 6 pulgadas, para los lechones se necesita una de un calibre 17 a 20 cm con un largo de 1 a 2 pulgadas. Plexo venoso retroorbital: se usa en ratas, ratones, conejillos de indias y hm- steres. Ilustracin 48 Vena mamaria 122 Manual de Micologa Veterinaria El plexo se comunica con los vasos sanguneos del cerebro y se ha reportado que esta tcnica es menos traumtca que ningn otro procedimiento. Se puede repetr las veces que sea necesario y es el mejor mtodo para extraer grandes cantdades de sangre. Vena alar o de la cresta: despus de desplumar la regin axilar, se ve la vena alar, que corre por debajo del msculo pectoral y luego a lo largo de la supercie ventral del hmero. La vena del tejido que se encuentra entre los dedos del cojinete plantar: se usa en pequeos mamferos silvestres. Errores que se cometen con frecuencia en la extraccin de sangre A. Hemlisis 1. El uso de una jeringa hmeda o el no retrar la aguja antes de llenar los tubos de extraccin hemolizan a los eritrocitos. 2. Para la mayora de los anlisis qumicos se preere el suero al plasma por las posibles interferencias de los posibles antcoagulantes. Sin embargo, el plasma que se ha preparado con cuidado de la masa celular tendr menos hemoglobina que el suero; donde los antcoagulantes no intereren, el plasma es el espci- men de eleccin. 3. Cuando la concentracin de hemoglobina es mayor de 0.02 gr/dl, el suero se apreciar hemolizado macroscpicamente, aunque en el suero ictrico pueden no detectarse niveles mucho mayores 4. Los componentes qumicos de la sangre con frecuencia se encuentran pre- sentes con concentraciones variables entre el plasma y los eritrocitos. Si la con- centracin de los eritrocitos es menor que el plasma, la hemolisis producir un efecto de dilucin. 123 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes B. Puede aparecer lipemia si el paciente no se encuentra ayunando por un tem- po adecuado antes de la extraccin de sangre. C. Cuando se desea obtener suero, no debe colocarse la sangre en el refrigera- dor inmediatamente o antes de la formacin de un buen cogulo y de que ocu- rra la retraccin, ya que con esto se retarda la recoleccin del suero. D. Se forma un cogulo de brina cuando se centrifuga la sangre despus de que se toma la muestra, o cuando la velocidad de la centrfuga es muy rpida. E. La sangre debe obtenerse cuando el animal est en reposo y sin que este excitado para evitar alteraciones en el hemograma y en algunos valores de la qumica sangunea. F. Entre ms tempo se deje la sangre antes de examinarla, mayor ser su dete- rioro. 1. La temperatura y el tpo de antcoagulante determinar el tempo mximo de almacenamiento satsfactorio. 2. Para la mayor parte de las pruebas es mejor almacenar en refrigeracin toda la sangre o el suero. 3. Los frots sanguneos se deben hacer dentro de los 15 minutos siguientes a la recoleccin de sangre pero los mejores frots se hacen inmediatamente con sangre recin extrada. No deben almacenarse los frots sanguneos en refrige- racin. G. La coagulacin de la muestra de sangre puede suceder por una variedad de causas. 1. Cuando se toma mucho tempo para obtener la sangre, de manera que la muestra empieza a coagular antes de mezclarla con el antcoagulante. 124 Manual de Micologa Veterinaria 2. Cuando no se agita la muestra de sangre inmediatamente despus de colocar- la en el tubo y cuando el tubo se llena demasiado, se produce la coagulacin, ya que el antcoagulante no se mezcla bien con la sangre. H. Cuando los tubos contenen solucin antcoagulante concentrada, debe te- nerse cuidado de agregar una cantdad adecuada de sangre para minimizar el factor dilucin. Cantdad de sangre necesaria A. La cantdad de sangre necesaria depende de la prueba o pruebas que se solici- tan y de los mtodos que se usan en el laboratorio donde se realizan las pruebas. 1. Para los perles de la clnica automatzada, es necesario tener un mnimo de sangre de 2.5 ml de suero. Cuando es necesario diluir el suero o el plasma, se ven resultados anormalmente bajos en los valores de sodio y cloruro, y anormalmen- te altos en los de creatnina. 2. Para la ayuda en el diagnstco de una enfermedad, la cantdad mxima que se toma debe ser la ms pequea necesaria para las pruebas que se van a realizar, sin escatmar. B. Por regla general se considera seguro tomar aproximadamente 0.5 ml de san- gre/kg de peso corporal en todas la especies. C. Solo aproximadamente la mitad de la sangre circulante puede recuperarse cuando un animal se desangra. Durante el diagnstco se realiza el examen directo de las muestras, para lo que se utliza soluciones aclarantes como hidrxido de sodio al 10%, lo que permite la observacin de las esporas. El uso de la luz ultravioleta con lmpara de Wood permite observar uorescen- cias de color verde o blanco en caso de tas producidas por el gnero Microspo- rum o Trichophyton, respectvamente. 125 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La siembra se realiza en medios de cultvos de Sabouraud ms Cloranfenicol o en medio de DTM formado por actdione, gentamicida, sabarand ms rojo fenol y tetraciclina. En estos medios el diagnstco tene una duracin de cuatro se- manas. El microcultvo de Lydel favorece la esporulacin. Tambin se realizan otras pruebas como: la hidrlisis de la urea para el diagnostco del Trichophytum y la prueba de pigmento. Es muy importante, durante el anlisis visual de las colonias crecidas en el medio Sabouraud observar las caracterstcas de stas como son: el aspecto, el color, el reverso de la colonia, etctera. 3.2 Lmpara de Wood o luz de Wood Esta lmpara, emite una luz ultravioleta y se utliza en un cuarto oscuro para examinar los pelos, ya que ciertos dermatotos uorescen con esta luz. M.ca- nisyM. equinummuestran una uorescencia verde amarillenta debido a la pte- ridina que secretan estos hongos cuando estn creciendo. (Baker.F.J y Breach. M.R, 1995). El uso de la lmpara de Wood es una herramienta tl en la clnica para pequeas especies; aunque tene ciertas limitaciones tales como que solo la mitad de las infecciones de M.canisuorescen bajo la luz, pero no lo hacen otros dermatotos felinos y caninos. Algunas pomadas y lociones pueden en- mascararla y si la piel de la lesin se desinfecta con alcohol la uorescencia pue- de ser mucho menos intensa habr una uorescencia muy difusa. Cuando se utlice la lmpara de Wood si se observa una uorescencia verde amarillenta en el lugar de la lesin, puede indicar una dermatotosis, pero si no se presenta no puede decirse que no exista infeccin por dermatotos. Ilustracin 49 Lmpara de Wood 126 Manual de Micologa Veterinaria Razones por las que se realiza el examen El mdico veterinario puede llevar a cabo este examen para detectar algunas afecciones que afectan la piel como: Infecciones bacterianas Infecciones mictcas Porria Cambios en el color de la piel La lmpara de Wood produce una luz ultravioleta de longitud de onda de 365 nm (340-450), a travs de un ltro de Wood opaco (xido de fsforo y nquel). Cuando las ondas emitdas por la lmpara impactan con la piel, se produce una uorescencia visible. 1. Amarillo oro: Malasseziafurfur. 2. Amarillo verdoso: Pseudomona. 3. Rojo-anaranjado: Propionibacteriumacnes. 4. Rojo brillante: tumores como el carcinoma espinocelular y en lceras no ma- lignas de miembros inferiores. 5. Rojo coral: Corynebacteriumminussimum. 6. Rosada o anaranjada-rojiza: se aplica la luz a sangre, materia fecal, orina, ui- dos, dientes para visualizar las porrinas en la porria cutnea tarda eritropoy- tca y protoporria. Si se adiciona cido clorhdrico diluido a la orina, se intensi- ca la coloracin. 7. Verde brillante: M.audouinioM.canis. No debe confundirse con una colora- cin azul tenue que puede mostrar la seborrea o el cido saliclico. 8. Verde plido: T.schoenleinii. 127 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes 9. reas blanquecinas evidentes: zonas hipomelantcas o amelantcas. 10. Pigmentacin drmica tenue: marrn o negro. 11. Pigmentacin epidrmica prominente: ms aparente bajo la luz de Wood.
12. Drogas: tetraciclinas, fotosensibilizantes, sensibilizantes de contacto en piel, o en productos industriales por la presencia de furocumarinas, eosina, alqui- trn, salicilanilidas halogenadas, etc. 13. Tiempo de circulacin sangunea con uorescena endovenosa, control de agentes teraputcos tpicos incorporando elementos uorescentes, o invest- gar penetracin cutnea. Todos estos hallazgos diagnstcos se interpretan en funcin de las diferentes formas de penetracin de la luz, segn las longitudes de onda, los fenmenos de uorescencia y la melanina que actan como absorbentes. Preparacin para el examen No se requiere preparacin especial para este examen. Si el animal est siendo tratado con un medicamento tpico, es posible que deba omitr una aplicacin antes del examen. Lo que se siente durante el examen El animal no sentr nada durante el examen. Valores normales Normalmente, la piel no brilla ni despide rayos bajo la luz ultravioleta. Signicado de los resultados anormales Un examen con lmpara de Wood le puede ayudar al mdico a conrmar una infeccin mictcao bacteriana. El mdico tambin puede comprender lo que est causando cualquier mancha de color oscuro o claro en la piel. 128 Manual de Micologa Veterinaria Cules son los riesgos No existen riesgos. Evite que el animal vea directamente a la luz ultravioleta. Consideraciones especiales No baar al animal antes del examen, debido a que esto puede causar un re- sultado falso negatvo. Igualmente, un cuarto que no est lo sucientemente oscuro puede alterar los resultados. Otros materiales tambin pueden brillar, los jabones e incluso las pelusas pueden ser visibles con la lmpara de Wood. No todos los tpos de bacterias y hongos se pueden detectar con la luz. Nombres alternatvos Examen de luz negra; Examen de luz ultravioleta. 3.3 Antfngigrama Utlidad del Antfngigrama Cepas procedentes de pacientes con un fracaso teraputco. Pacientes que han recibido prolaxis antfngica previa. Aislamientos de especies poco frecuente, se desconoce su patrn de sensibilidad Elegir la mejor alternatva teraputca. Informacin para cambiar tratamiento. Pruebas de susceptbilidad in vitro. Clasicacin de la Resistencia Resistencia intrnseca (insensibilidad). Cuando ningn miembro de una especie es sensible a un antfngico. Ej. C.kruseiyuconazol 129 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Resistencia primaria Un aislamiento de una especie normalmente sensible a un antfngico, ad- quiere resistencia natural al mismo. Nunca tuvo contacto previo con la misma (mutaciones espontneas. C.albicans y 5FCCandidaglabrata). Resistencia secundaria Cuando un aislamiento previamente sensible adquiere resistencia al antfngi- co despus de entrar en contacto con l. Ej. C.albicansy5FC;C.albicansyuconazol. 3.4 Antfngicos Los dermatotos que ms afectan a los animales son Microsporum y Tricho- phyton, sin embargo Candida y MalasseziaPityrosporum pueden causar tambin micosis superciales. La lesin del estrato corneo parece ser determinante en la invasin de los folculos pilosos por los hongos Microsporum y Trichophyton. Estos microorganismos necesitan pelos en crecimiento actvo para sobrevivir, y el crecimiento del hongo se enlentece o se detene cuando el pelo entra en la telofase; sin embargo, las artrosporas infecciosas permanecen en el tallo piloso. (Aiello, 2000). Aunque los dermatotos invaden nicamente tejidos queratnizados, sintetzan metabolitos que difunden a otras clulas, produciendo reacciones inamatorias y de hipersensibilidad que son las responsables del desarrollo de las lesiones. Aunque la ta suele responder rpidamente al tratamiento, puede ser difcil de erradicar cuando se disemina en el ganado o en el rebao. Ilustracin 50 Prueba de sensibilidad antfngica 50 P b d ibilid d t y 130 Manual de Micologa Veterinaria Las infecciones por Cndidas son ms frecuentes en las membranas mucosas, en las uniones mucocutneas o zonas hmedas en las que se interrumpe la barrera epitelial, como el conducto auditvo externo y las garras, y en reas interdigi- tales. Los estados de inmunosupresin, como la diabetes mellitus, el cncer, la hiperfuncin de la corteza adrenal, las infecciones vricas y las alteraciones inmu- nolgicas congnitas, predisponen a las infecciones por Candida en los animales. Las infecciones por Malassezia suelen ser ms frecuentes que las Candidiasis, y siempre se acompaan de prurito. Entre los factores que predisponen a la infec- cin por Malassezia estn la seborrea, las alergias, el pioderma bacteriano y la raza (West Highland White terrier, Jack Russell terrier, Maltes, Silky terrier, Te- rrier australiano, Chiguagua, Caniche, Perro Pastor Shetland, Collie, Pastor Ale- mn, perro Salchicha, Cocker Spaniel y Springer Spaniel). (Aiello, 2000). La dermatts por Malassezia es menos frecuente en el gato; sin embargo pue- den aparecer recurrencias en gatos infectados por el virus de la inmunode- ciencia felina. Infecciones subcutneas por hongos, entre las que estn los micetomas eumicotcos, las feohifomicosis, las cigomicosis, la esporotricosis y las alternariosis, aparecen con frecuencia por la contaminacin de las heridas con microorganismos oportunistas. Micosis sistmicas, como la blastomicosis, la coccidiomicosis, las criptococosis, la histoplasmosis, y la aspergilosis, tambin pueden aparecer en forma de infecciones cutneas. Los perros y gatos que no responden al tratamiento tpico de la dermatoto- sis tras 2-4 semanas de tratamiento deben recibir tratamiento sistmico. La gri- seofulvina se deposita en las clulas precursoras de la queratna; permanece fuertemente unida durante la diferenciacin celular e inhibe la sntesis de la ci- dos nuclecos y la mitosis. Las dosis aprobadas para la formulacin de cristales micromtricos son 11,0-22,5 mg/kg, una vez al da; sin embargo con frecuencia se requiere una dosis de 25-60 mg/kg, la dermatotosis en perros y gatos. Del mismo modo, la dosis indicada en el prospecto de la formulacin ultra mi- cromtrica es de 5-10 mg/kg, una vez al da, aunque suelen ser necesarias dosis de hasta 15 mg/kg, dos veces al da, para eliminar los dermatotos. La griseoful- vina debe administrarse con dietas ricas en grasas durante un mnimo de cuatro semanas o hasta que las lesiones remitan y los cultvos se vuelvan negatvos. 131 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Dados sus potenciales efectos txicos, entre los que estn la supresin medular, los trastornos gastrointestnales, la ataxia y el prurito, estas formulaciones de- ben dosicarse adecuadamente y no deben intercambiarse. Durante el tratamiento deben realizarse recuentos linfocitarios cada dos sema- nas. Los efectos secundarios son ms graves en los gatos (especialmente en el gato persa, himalayo, siams y abisinio) que en el perro. La griseofulvina es un potente teratgeno y no debe emplearse en animales gestantes. Debe rasurar- se la capa de pelo, porque el tratamiento sistmico no elimina los elementos fngicos contagiosos del tallo piloso maduro. Aunque la griseofulvina ha sido histricamente el frmaco de eleccin para el tratamiento de la dermatomicosis en los animales, debido a sus efectos txicos, cada vez se utlizan ms otros dos frmacos aprobados para su uso en humanos, el ketoconazol y el itraconazol que inhiben la transformacin del langosterol en ergosterol, un componente de la membrana celular del hongo. El ketoconazol y el itraconazol son tambin ecaces frente a las candidiasis, der- matts por malassezia, blastomicosis, coccidiodomicosis, histoplasmosis y crip- tococosis. Estos frmacos son ecaces en algunos casos de micetoma, feohifo- micosis, esporotricosis, alternariosis, prototecosis y cigomicosis. En la mayora de los casos, es necesario escindir quirrgicamente o desbridar las heridas con- taminadas para curar las infecciones subcutneas por hongos. En las micosis sistmicas o que supongan una amenaza para la vida, el ketoco- nazol se administra generalmente en dosis de 40 mg/kg, una vez al da; sin em- bargo, en las micosis de localizacin cutnea suele ser suciente con una dosis menor (10 mg/kg, una vez al da). El itraconazol se administra generalmente en dosis de 10-20 mg/kg, cada 28-48 h. Debido al xito del tratamiento intermiten- te de las dermatomicosis en humanos, se estn evaluando varios protocolos con administraciones en semanas o meses alternos en los animales. 132 Manual de Micologa Veterinaria El itraconazol y el ketoconazol deben administrarse con la comida para facilitar su absorcin. Ambos frmacos se toleran bien, aunque pueden causar anorexia, vmitos, diarrea o hepatotoxicidad. El ketoconazol puede suprimir la testostero- na y las concentraciones basales de cortsol, as como la respuesta a la hormona adrenocortcotropa. La nistatna se encuentra disponible en combinacin con antbitcos y cortcos- teroides, en cremas y pomadas de uso dermatolgico para perros y gatos. Tam- bin se ha aprobado el uso de la premezcla de nistatna para el tratamiento de la micosis del pienso y la diarrea del pienso en los pavos (50g/kg). El tratamiento con nistatna suele ser ecaz en la candidiasis localizada; sin embargo, el keto- conazol (5-10 mg/kg, dos veces al da) o el itraconazol (5 mg/kg, una vez al da) son los frmacos de eleccin en las lesiones extendidas. En las infecciones por malassezia tambin se preere el tratamiento sistmico, que debe mantenerse durante 1-2 semanas tras la aparente curacin clnica. En la esporotricosis es muy ecaz una solucin sobresaturada de yoduro pot- sico. Debe administrarse con la comida, en una dosis de 40 mg/kg dos veces al da en el perro, y 20 mg/kg cada 12-24 h en el gato, durante un periodo adicio- nal de 30 das tras la curacin aparente de la enfermedad. En el perro y el gato puede producir nuseas, vomito, depresin, lagrimeo y moqueo, descamacin o sequedad de la capa de pelo. En los gatos se han descrito efectos neurolgicos, insuciencia cardiovascular e hipotermia como secuelas del tratamiento. Cuando se trate con animales infectados deben llevarse guantes y manga larga, porque la esporotricosis puede transmitrse por contacto directo a personas in- munocompetentes. Se ha autorizado el uso de yoduro sdico (70 mg/kg) en el actnobacilosis en el ganado bovino. Una dosis mayor (1g/14kg de peso corporal, por va intravenosa, administrada semanalmente en solucin al 10 %) es ecaz en el tratamiento de los dermatotos en animales destnados al consumo. En estos animales no se ha aprobado el uso de otros frmacos antfngicos sist- micos. 133 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes El yoduro sdico no debe emplearse en el ganado bovino gestante o lactante. Tambin se recomienda el yoduro potsico oral (20 g/ da) para el tratamiento de micetomas y cigomicosis en el caballo. Sporotrichumschenckii en el caballo se trata con yoduro sdico (40mg/kg, por va intravenosa, en solucin al 20%, durante 2-5 das) seguida de yoduro potsico (2mg/kg, por va oral, durante 60 das). Adems de otros signos de intoxicacin por yodo, los yoduros administra- dos por vas sistmicas pueden causar por ejemplo abortos en yeguas y vacas gestantes. Los yoduros sistmicos no deben emplearse en animales lactantes. Otros frmacos autorizados en el hombre que pueden emplearse en las derma- tomicosis de los animales son el uconazol (2,5-5mg7kg, una vez al da) para el tratamiento de la candidiasis mucocutneas; la anfotericina B (0,5 mg/kg, cada 48 h en perros, y 0,15 mg/kg, cada 48h en gatos) para tratamiento de la blas- tomicosis, histoplasmosis, coccidiomicosis, criptococosis, y candidiasis; o la u- citosina (60 mg/kg, 3 veces al da) en combinacin con la anfotericina B para la candidiasis, criptococosis, aspergilosis y algunas feohifomicosis. 3.5 Examen microscpico directo de las muestras clnicas En micologa se emplean muy pocos colorantes, puesto que casi siempre es su- ciente una preparacin hmeda para identcar diferentes esporos de hongos, aparte del colorante de Gram, el PAS, la retculina de plata, verde Alcian, Grocot y Gridley son colorantes usados para cortes. Preparacin hmeda 1. Despedazar una porcin del cultvo de micelio en una gota de azul de lacto- fenol sobre un porta. 2. Colocar encima un cubre y apretar suavemente. Secar con secante el exceso de lquido. Cerrar con barniz de uas. 134 Manual de Micologa Veterinaria Sin colorante: es el montaje directo hmedo o examen en fresco: las muestras se extenden directamente sobre la supercie de un portaobjetos para su observa- cin. El material que es demasiado espeso para permitr la diferenciacin de sus elementos puede diluirse con igual volumen de solucin salina siolgica estril. Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la supercie del material. Este tpo de preparacin se emplea para detectar trofozotos mviles de parsi- tos intestnales como Giardia, Entamoeba, huevos y quistes de otros parsitos, larvas y gusanos adultos, Trichomonas, hifas de hongos, etc. Tincin Simple se utliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras ce- lulares se ten con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metleno de Loe er, Azul de lactofenol). El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la clula husped, pero no acta sobre los polisacridos de las pare- des celulares de los hongos. Ilustracin 51 Candidasp. en un examen en fresco. Ilustracin 52 C.neoformans en una tncin con tnta china. os. s. 135 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La tnta china o Nigrosina permite observar clulas levaduriformes capsuladas (Cryptococcus), sobre todo en LCR. Los polisacridos capsulares rechazan la tnta china y la cpsula aparece como un halo claro alrededor de los microorganis- mos. Azul de metleno de Loe er puede agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia de leucocitos. Tincin Diferencial: se utlizan varios colorantes combinados. Las estructuras ce- lulares se diferencian en funcin de los diferentes colorantes que jan de acuer- do con su propia consttucin qumica. Los ejemplos clsicos seran las tnciones de Gram o la de Ziehl-Neelsen. Tcnica del cido perydico e Schi 1. Desparanar con xileno, alcohol y agua. 2. Lavar en agua destlada y tratar con acido per idico durante 5 minutos. 3. Lavar en agua corriente durante 15 minutos. 4. Aclarar en agua destlada. 5. Colocarlo en el reactvo de Schi durante 15 minutos. 6. Tratar con acido sulfuroso en dos tempos de 5 minutos cada uno. 7. Lavar en agua corriente durante 10 minutos. 8. Aclarar en agua destlada y secar con papel toalla. 9. Contrastar con verde luminoso durante 30 segundos. Deshidratar rpida- mente, aclarar en xileno y montar. Ilustracin 53 Levaduras en una tncion de Gram. 136 Manual de Micologa Veterinaria Tincin azul de lactofenol El azul de lactofenol es el medio ms comn para hacer tnciones en los hongos y uno de los reactvos ms fciles de realizar para la identcacin de estructuras de hongos y el diagnostco solamente se requiere de: Cristales de fenol.....20gr Acido lctco.....20ml Glicerol........40ml Azul de metleno.. 0,05gr Agua destlada.... 20ml Por lo general se deja en la incubadora por 12 horas, para evitar que el fenol se cristalice. Ilustracin 54 Micrografa de candidiasis esofgica, usando acido perydico de Schi n 54 54 54 MMMiiiicrogr ffff afa dddde ca ddd ndid id id idiiiia iii sis eso Ilustracin 55 Preparado de azul de lactofenol. usttrac i i i in 55 55 55 55 PPPPreparadddddo ddddde az llll ul ddddde 137 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Capitulo 4. MICOTOXICOSIS 4.1 Generalidades Las micotoxicosis son enfermedades que se presentan en animales y el hombre, producidas por micotoxinas, elementos txicos elaborados por distntos tpos de hongos que crecen en plantas, henos, silos, granos, subproductos y otros alimentos almacenados. Este captulo menciona algunos de las micotoxicosis ms importantes y sus agentes etolgicos Estos se presentan para profundizar el amplio mundo de las patologas causadas por los hongos. (Revista Iberoamericana de Micologa, 2001). Son caracterstcas generales de las micotoxicosis: El veterinario interviene con frecuencia sin que identque rpidamente la causa del problema. Los trastornos no son transmisibles entre animales. No dan resultados los tratamientos con antbitcos la enfermedad es poco antgnica. Los brotes de micotoxicosis de pastos son estacionalesy estn asociados con caracterstcas climtcas especiales. La enfermedad est relacionada con un alimento en partcular. El examen cuidadoso del alimento sospechoso puede revelar signos de desarrollo fngico. No son txicos acumulatvos. 138 Manual de Micologa Veterinaria Tipos de hongos productores de micotoxinas Hongos de campo Fusarium F.moniliforme F.roseum F.tricinctum F.nivale Alternariasp. Helminthosporiumsp. Cladosporiumsp. Penicilium P.oxalicum P.Funiculosum P.oylopium P.variables P.oydrinum Hongos de almacenaje: Aspergillus A.avus A.parasicus Penicillium Hongos del deterioro avanzado: Chaetomiunsp. Aspergillus A.clavatus A.fumigatus Scopulariopsissp. Rhizopussp. Mucorsp. Absidiasp. 139 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Los hongos de los alimentos almacenados necesitan de las siguientes condicio- nes: Substrato fcilmente utlizable (carbohidratos). Humedad en los granos (10-18%) y humedad relatva ambiente del 70% o ms. Adecuada temperatura. sta vara con el hongo (Ej.: Aspergillus avuspuede elaborar toxinas entre 12 y 47C, y algunosFusarium pueden producirla a tem- peraturas de congelacin, pudiendo ser entonces meso-termo-psicrlos). Suciente O2(no indispensable) y CO2. La acidez es un elemento negatvo para eldesarrollo mictco y formacin de esporas. Es necesario un pH alcalino. El tempo de almacenamiento es importante yaque a mayor tempo se tene mayor posibilidad de condiciones adversas o favorables para su desarrollo. Puntos calientes en la masa de alimentos producidos por el desarrollo de mi- crorganismos. Los insectos alteran los granos y abren el camino para el desarrollo fngico. En general hay una detoxicacin de las micotoxinas por los microorganismos ruminales. A menudo este proceso altera la hidrosolubilidad y la polaridad de las micotoxinas los cuales van a inuir sobre la depuracin intestnal. Este meta- bolismo ruminal puede potencialmente aumentar o disminuir la toxicidad para el hospedador. 140 Manual de Micologa Veterinaria Son claras las diferencias biolgicas entre el rumen bovino y el rumen ovino. A modo de ejemplo sabemos que las bacterias y los protozoarios ruminales de ovejas son capaces de degradar las aatoxinas B1 y G1 y la toxina T-2, con una marcada disminucin de las actvidades metablicas de la microora y microfau- na endorrumial, pero consiguiendo la detoxicacin de las micotoxinas mencio- nadas. (Gimeno y Martns, 2011). Efecto de las micotoxinas Las micotoxinas pueden causar efectos agudos y crnicos en una gran variedad deespecies animales en sus distntos rganos, aparatos y/o sistemas. Dichos efectos los resumimos as: Hepatotoxinas Producen degeneracin grasa, hemorragia y necrosis del parnquima heptco. En algunos casos hay tamao anormal del hepatocito y su ncleo (megalocitosis: prdida de la relacin tamao del citoplasma tamao del ncleo). Hiperplasia de conductos biliares puede ocurrir en algunas micotoxinas y pue- den inducir al hepatoma. En las toxicosis agudas hay ictericia, anemia hemoltca y elevacin de los niveles plasmtcos de las enzimas heptcas; fotosensibilizacin secundaria. En las toxicosis crnicas hay hipoproteinemia, hipoprotrombinemia, brosis he- ptca y cirrosis. Puede haber fotosensibilizacin secundaria (rara). Nefrotoxinas El cido oxlico y otros agentes nefrotxicos pueden ser producto de Aspergillus y Penicillium. Producen daostubulares y ocasionan signos y lesiones caracters- tcas de nefrosis txica tubular. 141 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Cambios en mdula sea, eritrocitos y endotelio vascular. Los signos clnicos vistosincluyen hemorragias difusas, hematomas, debilitamiento, anemia, leuco- penia y aumento de la susceptbilidad a las infecciones. Tambin aqu se inclu- yen los alcaloides del Claviceps purpurea y los de la Festuca arundinacea que provocan gangrena de las extremidades. Irritacin directa Efectos dermonecrtcos con ulceracin y necrosis oral. Las hemorragias gas- troentricas son signos caracterstcos. Muchas de estas toxinas son producidas por Fusarium. Disturbios reproductvos y endocrinos Se produce un hiperestrogenismo, preferentemente en la hembra porcina y des- censo de la fertlidad y la libido en el macho de la misma especie. Hipo o agalac- ta, abortos, partos prematuros, etc. Se puede reproducir la enfermedad con la aplicacin de estrgenos. Funcin respiratoria Por la accin del hongo Fusarium solani se produce en lasbatatas daadas la transformacin de una de sus sustancias en la toxinaIpomerona la cual ha sido asociada a la formacin de membrana hialina y produccinde adenomatosis pulmonar. Sistema nervioso central Efectos agudos de tembladeras han producido los hongos Penicillium y Clavi- ceps a travs de sus toxinas que afectan el sistema nervioso central; las mismas contenen cido lisrgico (LSD). Otros casos de toxinas que actan sobre el sistema nervioso central producen hiperexcitabilidad, incoordinacin y/o temblores. 142 Manual de Micologa Veterinaria En equinos la intoxicacin con granos parasitados con Fusarium produce leu- coencefalomalacia, lesin destructva que cursa con somnolencia y muerte. Sistema inmunitario Hay aatoxinas y rubratoxinas que disminuyen la ecacia del sistema inmunita- rio, produciendo as gran susceptbilidad a las enfermedades infecciosas. Teratognesis Aatoxina, Ochratoxinay citochalosina B. Diagnstco de las micotoxicosis Es importante hacer un anlisis detallado y metculoso de los alimentos sospe- chosos. Los efectos txicos con bajos niveles de contaminacin pueden tardar varias semanasen aparecer. El curso de la enfermedad y el tpo de lesiones pueden estar relacionadas con la clase de micotoxinas y la predisposicin de cada animal. La muestra a analizar debe ser representatvaya que slo una parte del alimentopuede estar contami- nado. Los alimentos enmohecidos por lo general son parcialmente rechazados por los animales y, esta disminucin de la ingesta, tambin contribuye a la pr- dida de peso que ocurre en algunos casos de micotoxicosis. El calor en exceso, cambios qumicos (acidez) y la luz solar son los elementos que pueden alterar la estructura y actvidad de dichos hongos. El laboratorio es sumamente dependiente de una muestra representatva bien conservada y de una exacta y detallada historia clnica. El nmero de toxinas existentes son mayores que las pruebas rutnariamente empleadas. 143 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La presencia de hongos en el alimento no necesariamente indica presencia de micotoxinas, ya que la produccin de stas depende de la temperatura, hume- dad, tpo de substrato, cantdad de alimento contaminado, etc. Algunos componentes naturales de alimentos y forrajes pueden producir resul- tados falsos positvos en el anlisis qumico del laboratorio. Las mezclas alimentcias (raciones, pellet) son complejas y dicultan el anlisis. Ensayos biolgicos de los alimentos problemas sobre grandes especies (bovinos, equinos) no son aplicables por ser muy costosos, aunque la utlizacin de espe- cies menores similares es adecuada. Efectos crnicos (a los 2 3 meses) pueden ocurrir y son muy difciles de diagnostcar. Un mtodo qumico muy empleado para la deteccin de micotoxinas es la cro- matografa en capa na. Para llevar a cabo esta prueba primero se debe realizar una extraccin qumica del alimento problema. Para la mayora de las toxinas se debe observar la cromatografa en capa na con luz ultravioleta, las cuales ree- jan distntas uorescencia segn cual micotoxina se trate. Posteriormente sobre la misma placa se realizan pruebas conrmatorias para asegurar el diagnstco 4.1.1 Aatoxinas Las aatoxinas son un grupo de metabolitos txicos producidos por Aspergillus avus,AspergillusparasicusyPenicilliumpuberulum. Las mismas se hallan con- taminando los granos almacenados, sobre todo cuando stos estn en rea de excesiva humedad durante un largo tempo. Ilustracin 56 Maz contaminado por A.fumigatus. 144 Manual de Micologa Veterinaria Los granos ms frecuentemente contaminados son el sorgo, maz, algodn y man. Otros substratos donde han sido aislados estas micotoxinas son el arroz, mijo, soja, girasol, ssamo, olivo, nueces, almendras, avellanas, legumbres, caf, cacao, leche, pescados, subproductos derivados de ellos (harina, afrecho, afre- chillos), trigo. Los efectos txicos de las aatoxinas dependen de las dosis y del tempo de in- gestn. Tambin la especie y la edad son importantes. Est establecida la dosis letal 50 (DL 50) en la intoxicacin aguda para patos y perros que es, aproximada- mente, 1 mg/kg. En general las aves son ms sensibles a las aatoxinas que los mamferos. El or- den de susceptbilidad en aves es patos, pavos, pollitos y pollos; y en mamferos es perros, cerditos, cerdas, terneros, cerdos de engorde, bovinos adultos, ove- jas; tambin los caballos son sensibles. La DL 50 en el cerdo vara de 0.3-0.6 mg/kg de aatoxina B1 por va oral en una sola toma. Interesante es que la DL 50 para el conejo es semejante a la anterior. Dosis de 4 mg/kg en bovinos producen la muerte en 15 horas por insuciencia heptca aguda. No hay explicacin exacta de la gran resistencia en ovejas (500 mg/kg), pero se piensa que los microorganismos ruminales de esta especie modicaran las aa- toxinas hacindoles perder gran parte de su toxicidad. Se admiten los siguientes niveles en los respectvos productos (La agencia de Medicamentos administrados en los alimentos): Comida para aves 20-200 p.p.b. Comida para bovinos 20 p.p.b. Leche entera para consumo 0.5 p.p.b. 145 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Patogenia Las aatoxinas actualmente reconocidas son B1, B2, G1, G2, M1, M2, B2a, G2a y P1. Las letras B y G reeren a que dichas toxinas tenen uorescencia azul (B: Blue) o verde (G: Green) en la cromatografa en capa na irradindolas con luz ultravioleta. La letra M indica leche (Milk), reriendo al lugar de eliminacin de esta toxina. Qumicamente las aatoxinas son derivados difuranocumarnicos. Son estables al calorpor lo que se las puede encontrar en alimentos completamente proce- sados. La ms comn en la contaminacin natural es la B1. Las aatoxinas suprimen el mensaje de sntesis del RNA. Tambin como efecto adicional, inhibe la sntesis de DNA. En forma esquemtca, las aatoxinas intereren en el metabolismo de: a) Sntesis de las protenas y cidos nuclecos: la accin ejercida sobre las prime- ras es debida a la modicacin que ocurre tanto en el ADN patrn y RNA polime- rasa en la fase de translacin. Ello determina que se inhiba la sntesis proteica a nivel del hepatocito con su cortejo patolgico habitual. Referido a los cido nuclecos existen dos tpos de interaccin: no covalente, dbil y reversible; el otro, en cambio, es covalenteirreversible y requiere ser act- vado metablicamente por un sistema enzimtco. Muchos de los efectos carci- nognicos mutagnicos de las aatoxinas otros estructuralmente similares, han sido relacionados con micotoxinasactvadas metablicamente. La unin covalente en el enlace C2-C3 (el cual es insaturado) es lo que determina quelas aatoxinas B1 y G1 sean ms actvas quelas B2 y G2. Es precisamente en este punto donde sucede la actvacin de las aatoxinas B1 y G1 por un sistema enzimtcos de tpo oxidatvo, llevado a cabo en el sistema retculo endoplasm- tco de los hepatocitos, catalizando la formacin de 2,3 epxido de aatoxina B1. 146 Manual de Micologa Veterinaria Este epxido formado puede unirse con los cidos nuclecos y protenas hacin- dolos biolgicamente inactvos. La guanina del DNA es el blanco principal ataca- do por las aatoxinas actvadas. Esta unin covalente induce mutaciones que a la larga terminan en neoplasias. b) Hidratos de carbono: las aatoxinas disminuyen los niveles de glucgeno he- ptco debido a la inhibicin de enzimas biosinttcas como la glucgeno-sintet- tasa; adems producen un aumento de la actvidad de las enzimas metablicas de los precursores del glucgeno, como por ejemplo la NADP que reduce la en- zima 6-fosfato deshidrogenasa. c) Lpidos: las aatoxinas causan un aumento citoslico de los niveles necesarios para la sntesis de cidos grasos, pero al inhibir el transporte de triglicridos, causan el hgado graso, como as tambin afectan el transporte de fosfolpidos y colesterol. A nivel de las mitocondrias la aatoxina B1 inhibe el transporte de electronesen- tre citocromo b-citocromo c. Tambin lo hace a nivel de la citocromo oxidasa. Adems impide que se complete la fosforilacin oxidatva. El dao en la sntesis proteica y la disminucin de facilidad del organismo para movilizar las grasas est relacionado aparentemente con la lesin heptca (ne- crosis y cambios grasos) que presentan los animales afectados de aatoxicosis en forma precoz. En el interior de los hepatocitos, las aatoxinas se unen a macromolculas tales como DNA, puntos endoplasmtcos para jacin de esteroides, y diversas en- zimas. El primer cambio producido por la aatoxina B1 es la modicacin de la estructura del nuclolo del hepatocito (por lo menos en la rata); la lesin en ste es compatble con la unin observada de las aatoxinasa l DNA nuclear. Entre los cambios ultra estructurales posteriores se incluyen la disgregacin y re- duccin en el nmero de ribosomas, la proliferacin del retculo endoplasmtco liso, la prdida del glucgeno y la degeneracin de las mitocondrias. 147 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Las Aatoxinas tambin reducen la resistencia orgnica a ciertas enfermedades infecciosas. Est demostrado que alimentos con 0.25-0.50 ppm reducen en po- llos la resistencia a algunas bacterias, protozoarios y hongos (Salmonella, cocci- dios, candidiasis). Hay reduccin de la resistencia de los pavos (vacunados) a Pasteurellamultocida con un no aparente descenso de sus antcuerpos; pero la exposicin a la aa- toxina debe ser simultnea o anterior a la vacunacin. Este efecto inmunolgico de las aatoxinas parece ser una depresin humoral no especca y en parte produce una alteracin en los antcuerpos tsulares. En el cobayo las aatoxinas producen un aumento de las gamma-globulinas y un descenso de las Alfa-2-globulinas, y un descenso de la concentracin total de las protenas. En ratas y cerdos las aatoxinas inducen al carcinoma heptco y al hepatoma. Tambin hay otras micotoxinas tumorgenas y cancergenas. Por trabajos experimentales se determin que las aatoxinas incrementan los re- querimientos de vitamina D en pollos. Las aatoxinas atraviesan la barrera placentaria provocando cirrosis heptca; esto se ha comprobado en terneros nacidos de vacas que consuman durante su gestacin silo de maz contaminado. Tambin, las aatoxinas producen cambios en la coagulacin sangunea por alteracionesde la protrombina, Factor VII y X, y posiblemente tambin el Factor IX. Las aatoxinas ingeridas son transformadas en conjugados hidrosolubles por la orar minaldel bovino, evitando as su degradacin. Estos conjugados son luego hidrolizados a nivel del cuajar, regenerando las toxinas originales, absorbindo- se en el intestno delgado y siendo transportados al hgado por una albmina plasmtca donde se metabolizan. Los metabolitos pueden ser conjugados hidrosolubles o formas liposolubles y son excretados en algunos casos por la bilis y se produce un ciclo entero-hept- co de excrecin-absorcin de algunos metabolitos. 148 Manual de Micologa Veterinaria Las aatoxinas son eliminadas por la leche, orina y materia fecal. Su eliminacin completa puede precisar de varios das, no obstante que estas micotoxinas no se almacenan en ningn tejido en partcular. Signos Clnicos Aguda: puede sobrevenir la muerte sin signos clnicosdespus de una situacin de estrs(partos, viajes, etc.). Otras veces se presenta anafagia, depresin, ata- xia, disnea, anemia, epistaxis y melena. Ocasionalmente, se pueden presentar convulsiones. Esto se ha visto en terneros donde el cuadro clnico nervioso se present con ceguera, ambulacin en crculos, cadas frecuentes, contracturas espasmdicas de las orejas y odontoforesis. En vacas se produjo aborto. Subaguda: estos animales presentanictericia, hipoprotrombinemia, hematomas (principalmente subserosos y subcutneos), enterits hemorrgicas con prolap- so rectal y ascits. Puede sobrevenir fotosensibilizacin secundaria. La fotosen- sibilizacin en bovinos puede llegar a dominar el cuadro signo lgico con altera- cin en ojos, ollares y punta de la lengua. Crnica: esta forma posiblemente es la que msimportancia tene en la econo- ma de los animales de granja. El comienzo de la aatoxicosis crnica es insidiosa. Puede haber reduccin del consumo de alimentos, disminucin de la produccin lctea, pelo spero, anemia, abdomen abultado, ictericia leve y eventualmente depresin y anafagia. En este estado de la enfermedad es muy difcil su diagnstco. Animales con die- tas decientes en protenas pueden ser ms severamente afectados. La alimen- tacin contnuada con bajos niveles de aatoxinas puedecausar desarrollode he- patomas benignos, carcinoma de conductos biliares y carcinomahepatocelular. Otros signos de aatoxicosis crnica es la susceptbilidad aumentada a varias en- fermedades infecciosas. La aatoxina M se elimina por la leche y puede provocar la enfermedad en los terneros lactantes. Esto tambin representa un peligro para la salud pblica, pues se han detectado concentraciones en leche de 0.33 mg/L. Tambin se han observado lesiones caracterstcas de cirrosis heptca en terneros recin nacidos y se debe al paso de la toxina a travs de la placenta. 149 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes En cerdos la forma crnica produce menor conversin alimentcia. Los signos en esta especie son bastantes indenidos. Puede haber diarrea, ictericia, ascits y depresin inmunitaria. Los perros son muy sensibles a las aatoxinas y el hgado es el rgano ms atacado. La toxicosis crnica produce disminucin del apetto y heces blandas. A medida que avanza la enfermedad hay evidencias de insu- ciencia heptca. Las ovejas son muy resistentes a las aatoxinasy necesitan recibir 2 ppm durante aos para desarrollar carcinomas y tumores nasales. Pollos y partcularmente pollitos pueden intoxicarse recibiendo 1-1.5 ppm de aatoxinas B1. Los efectos en pollos son similares a los ocurridos en mamferos con brosis heptca y pro- liferacin de conductos biliares. Tambin en las aves pueden aumentar notable- mente el tempo de protrombina y el tempo de coagulacin. En el ganado porcino se presentan falla respiratoria (disnea mixta, de tpo ins- piratoria y espiratoria; arrojamiento seroespumoso por nariz; decbito lateral abandonado y permanente). A la necropsia se observaba un evidente edema interstcial pulmonarcon leve ensema alveolar (trastorno tambin descrito en bovinos). Los cerdos demostraron una sintomatologa muy llamatva; caminar en crculos, parestesia enforma de prurito idioptco, paresia del trenposterior, cadas, hi- perestesia al tacto, polaquiuria, anafagia, constpacin y muerte brusca. Ilustracin 57 Paresia del tren posterior 150 Manual de Micologa Veterinaria A la necropsia se constat degeneracin grasa de hgado e inamacin de las mucosas gstricas y del intestno delgado (trastornos tambin descritos en bo- vinos por este hongo).Los hongos del gnero Aspergillus son capacesde formar, tambin, micotoxinas tremorgnicas, por ejemplo, A. clavatus: Cytochalisin E, Trytoquivaline, Tryptoquivalone, Nortryptoquivaline, deoxitrytoquivaline, deoxi- nortryptoquivaline, nortrytoquivalone, deoxinortryptoquivalone, Patulina, y A. avus:aatremyaavinina. Pruebas complementarias de diagnstco Los animales afectados estn anmicos y tenen bajos valores de protenas sri- cas. Hay aumento de la transaminasa glutmico oxalactca, fosfatasa alcalina, lctco deshidrogenasa, deshidrogenasa glutmica, gamma-glutamil transpept- dasa, elevacin del ndice ictrico, descenso del tempo de excrecin de la bro- mosulfalena, elevacin de bilirrubina directa e indirecta, disminucin de la des- hidrogenasa isoctrica. Todo esto evidencia enfermedad aguda o crnica del hgado. En bovinos afecta- dos se han observado alteraciones urinarias como proteinuria, cetonuria, gluco- suria y hematuria. As tambin anemia microctca y relatva neutrolia (30-40%). Lesiones Los cambios patolgicos incluyen ictericia, petequias y equimosis difusas, gas- troenterits hemorrgica o catarral, edema de mesenterio. Tambin se observan hemorragias subcutneas y subserosas. Hgado: macroscpicamente se observa necrosis hemorrgica focal y cambios grasos. En la forma aguda hay hepatomegalia. Ena crnica, cirrosis con hgado plido y duro, ascits, hidrotrax y edema de la pared de la vesculabiliar. Ilustracin 58 Necrosis hemorrgica focal en el hgado 151 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Las alteraciones microscpicas estn centradas en el hgado: Necrosis hemorr- gica heptca. Cambios grasos son comunes en casos agudos. Hiperplasia de los conductos biliares con mnima necrosis de hepatocitos es caracterstca en la subaguda o crnica (cuadro muy semejante al producido por alcaloides pirroli- zidnicos). Una lesin constante para el caso de laaatoxina B1 es la proliferacin de los pequeos conductllos biliares hacia la periferia del lobulillo heptco. En casos prolongados hay extensas brosis interlobular y esto puede progresar hasta ci- rrosis. Los riones de los bovinos afectados de aatoxicosis son amarillentos, con su- grasa perirrenal, muy blanda (degeneracin nutricional de la grasa). En los casos deaatoxicosis equina, comunicados (S.Angsubhakornetal1981) se menciona cambiosdegeneratvos difusos en las bras miocrdicas y malacia focal en he- misferios cerebrales; tambin aumento del colesterol plasmtco. Diagnstco Una historia de contaminacin por hongos de los alimentos puede ser una va- liosa ayuda. Muchas veces bajos niveles de contaminacin mictca no son ob- servados. En el caso de la aatoxina M, si la ingestn es reciente se la puede detectar en orina y leche. La presentacin de uorescencia azul o verde azulado del alimento bajo luz ul- travioleta, es presuntva pero no conrmatoria de aatoxinas. Ilustracin 59 Riones bovinos amarillentos. 152 Manual de Micologa Veterinaria Diagnstco diferencial Las intoxicaciones por aatoxinas poseen sintomatologa similar con las siguien- tes enfermedades: Seneciosis: tener en cuenta historia clnica. Intoxicacin por Cu: hemoglobinuria y hematuria. Leptospirosis: hemoglobinuria. Dicumarina: Signos y lesiones hemorrgicas ms intensas. Salmonelosis aguda en terneros: cultvos a partr de bilis. Sndrome por muerte brusca: lesiones especcas. Tratamiento No hay tratamiento especco. Se deben administrar dietas bajas en grasas y ricas en protenas. Agentes lipotrpicos. Evitar el estrs. Segn trabajos experimentales en cabras pretratadas con cistena, metonina y tosulfato de sodio (solos o combinados) resisteron bastante bien las descargas de aatoxinas. Segn trabajos experimentales en conejos, la administracin de oxitetraciclina en dieta con aatoxinas tendra una accin hepatoprotectora a travs de un mecanismo de competencia. 4.1.2 Zearalenona (Vulvovaginits porcina) La toxina producida por Fusarium graminearum, Fusarium roseum y otros, es denominada Zearalenona o F-2, de actvidad estrognica, causando en cerdas y otras especies, aumento de la actvidad y del peso uterino. Al actuar sobre la glucosa de los granos determina la formacin de una beta lactona del cido resorclico, con marcada anidad para los receptores celulares estrognico. En- tonces se puede armar que acta con una clara anidad estrognica por su comportamiento fsico-qumico, pero no biolgico. En las cerdas produce una enfermedad conocida como vulvovaginits porcina. 153 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Este hongo puede crecer en granos almacenados durante largo tempo, prin- cipalmente en el maz. Tambin hay casos comunicados con granos de avena, sorgo, cebada y trigo. Este hongo tambin se desarrolla en la hojarasca. En reiteradas oportunidades se ha constatadosu presencia, aunque en propor- ciones vestgiales, en fardos y rollos de alfalfa. Para la produccin de toxina se necesita humedad en el grano superior al 25%, un perodo inicial de temperatu- ra elevada, seguido por una temperatura baja constante o intermitente. Patogenia Es conocida que la actvidad de las hormonas esteroideas es medida por la unin no covalente de stas al receptor especco que poseen las clulas en su inte- rior. Esta unin (zearalenona +receptor) es transportada a los ncleos celulares en donde interactan con receptores reservados para la cromatna e inducir la transcripcin selectva del ARN. Esta hiptesis es la base para las dems interpretaciones de la accin de la zea- ralenona. Launin de la zearalenona a los receptores especcose estrgenos, est relacionado a la estructura qumica de stos. Esta unin permite la formacin de derivados (6 cetonas y 6 hidroxil) que com- piten con los receptores del 17 betaestradiol; en otras palabras, existe una inhi- bicin compettva entre la zearalenona y el 17-betaestradiol por los receptores especcos, estos receptores se hallan localizados en los ncleos de las clulas uterinas y heptcas. Esto determina una accin mimtca de la micotoxina con respecto a los estrgenos dentro del organismo animal. Signos clnicos Afecta ms frecuentemente al ganado porcino, partcularmente a hembras de 6 a 7 meses de edad. Los signos se notan luego de 3 a 6 das postngestn del grano contaminado. 154 Manual de Micologa Veterinaria En cerdas, el cuadro tpico de la vulvovaginits incluye una clara tumefaccin de la vulva, aumento del tamao de las glndulas mamarias y crecimiento y au- mento del tamao del tero. La lesin bsica es la ingurgitacin de la mucosa genital. Algunas veces est abierto al crvix y entonces se puede observar la existencia de un exudado catarral por los labios vulvares; metrorragias copiosas. En muchos casos la vagina sufre un prolapso parcial (>30%) y en algunos tambin es dable observar prolapso de recto (> 10%). Esta especie es partcularmente susceptble al prolapso de este ltmo rgano por la falta de tejido de sostn adecuado para el mismo en la regin plvica. Algunas veces se maniesta con estros persistentes. En cerdas preadas puede ocurrir la reabsorcin de los fetos y entrada ulterior en celo. Pueden llegar a parir una lechigada escasa pero normal o bien con algunos lechones muertos; otras veces el nmero de animales paridos es normal pero todos muertos; en otros casos existen malformaciones fetales, patas abiertas, paresia de los miembros posteriores; alta mortalidad neonatal. Algunas veces la tasa de mortalidad puede ser elevada debida a cistts secun- daria, sndrome urmico y septcemia. Esta micotoxina se elimina por la leche siendo capaz de producir fenmenos de feminizacin en lechones machos (con cambios degeneratvos en los tubos seminferos) e hiperestrogenismo en lecho- nes hembras (igual fenmeno es descrito en vacas y ovejas lactantes). Ilustracin 60 Aborto provocado por zearalenona Il i 60 Ab d 155 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes En cerdos machos se puede observar aumento del tamao del prepucio e incre- mento de la irrigacin de los pezones y las glndulas mamarias primitvas. En vaquillas alimentadas con altas cantdades de esta micotoxina se presenta prdida de peso, exudado vaginal, ninfomana, hipertroa uterina con hiperpla- sia endometrial, desarrollo mamario exuberante, falta de concepcin, muertes embrionarias y abortos. Lesiones Las lesiones estn connadas al aparato reproductor. Edema e hiperplasia del tero con el endometrio engrosado y atroa de ovario. Hay hiperplasia de los conductos de la glndula mamaria. Tambin hay metaplasia escamosa del crvix. Pruebas complementarias de diagnstco Se puede utlizar bioanlisis (alimentacin en ratas) y mtodo qumico para de- tectar la zearalenona F-2 en alimentos. Diagnstco diferencial Fitoestrgenos (Flavonas o isoavonas) naturales Plantas atacadas por hongos o virus forman ms toestrgenos. Tratamiento Supresin de la ingesta. Sintomtco 4.1.3 Trichotecenos Los trichotecenos son toxinas producidas por muchas especies de Fusarium es- pecialmente Fusarium tricintum, siendo la ms conocida de ellas la toxina T-2. Esta micotoxina ha sido aislada de granos de maz, trigo, cebada, arroz, avena y subproductos de ellos, pastos en pie y heno. 156 Manual de Micologa Veterinaria Otras micotoxinas reconocidas son: DON (desoxinivalenol o vomitoxina) en trigo, maz, cebada, centeno y subpro- ductos de ellos. Tambin en el arroz, papa y diversos alimentos. NIV (nivalenol) junto con la DON en trigo, cebada centeno, avena, arroz y varios subproductos derivados. DAS (diacetoxiescirpenol) en maz, trigo, cebada, avena, mijo, arroz y subpro- ductos de ellos. Dichas toxinas son estables por largo tempo en almacenamiento, no destruyn- dose por los procedimientos normales de coccin. Estos son hongos muy comunes en los granos y pastos, que bajo determinadas condiciones elaboran sus toxinas. As muchos trichotecenos son producidos a temperatura altas o bajas; Fusaritoxina T-2 puede ser producida a 8-15C y en algunos casos se puede producir a temperatura bajo OC. El crecimiento micelio ptmo se tene entre 20 a 24C para F. moniliforme y entre 25 a 30C para F. solani. Para incrementar la produccin al mximo de sus micotoxinas es necesario oscu- ridad total. El grado de esporulacin mxima se realiza a los 8C. El Fusarium es un contaminante comn de pastos en pie y almacenados. El tri- choteceno T-2 o fusariotoxina T-2 causa toxicosis en aves, bovinos y porcinos. Va- rios gneros de hongos imperfectos son productores de estas micotoxinas; en- tre ellos guran los gneros Trichoderma, Trichotecium, Fusarium,Stachibotrys, Gliocadium, Myrothecium, Nigrospora, Epicoccum, Alternaria, Penicillium, Caphalos porium y Calonectria. La DL 50 en porcinos y ratas de T-2es aproximadamente 4 mg/kg. Dietas con ni-veles de 16 ppm de T-2 causa retardo del crecimiento en pollos parrilleros y produccin de lesiones en cavidad oral con aumento del tempo de protrombina. Ratas albinas son severamente afectadas con dietas de 5-15 ppm. 157 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Vacas lecheras bajo alimentacin de campo con pastos que contenen 2 ppm de T-2 sufren toxicosis subaguda o crnica con un 20% de muertes. Los bovinos son los ms sensibles a la micotoxina T-2 y dosis de 0.1 mg/kg son letales des- pus de 65 das. Aunque no son completos los datos de esta micotoxicosis, en su forma crnica se ha visto que no tenen efectos carcingenos en animales de experimentacin. Tambin son micotoxinas producidas por Fusarium el Factor Emtco (deoxyni- valenol) y el diacetoxycirpenol. (D.A.S.). La primera provoca vmitos y la segun- da diarrea, dermatonecrosis y hemorragias. Patogenia Su accin txica es producida por varios mecanismos. a) Tienen accin sobre la sntesis proteica, actuando en forma directa sobre la fase de transcripcin y translacin. Esta inhibicin de la sntesis proteica se pro- duce a travs de una potente accin inhibitoriade la peptl-transferasa que im- pide la incorporacin de los aminocidosal comienzo de la cadena polipeptdica. b) Accin citotxica ejercindola, principalmente, en aquellos tejidos de rpido crecimientoy con un muy rpido recambiocomo por ejemplo mdula sea, epi- telio intestnal, gnadas y tejidos linftco. c) La toxina T-2 acta sobre las clulas linfoideas a nivel del ADN (esto ocurre en menor proporcin en las clulas heptcas puesto que ellas tenen en su interior la glutaton-transferasa, la cual es capaz de catalizar la conjugacin de los tri- chotecenos); por otra parte, la proliferacin de lisosomas aumenta la actvidad de las enzimas hidroltcas (ADNasas) en las clulas linfoides, aumentndose la sensibilidad de stas, la micotoxina, por lo tanto actan como agentes inmuno- supresores. 158 Manual de Micologa Veterinaria d) Son teratgenas, embriotxicas y en los animalesde laboratorio, inmunosu- presoras. Los efectos patolgicos son similares en muchas especies. Hay alteracin drmica con inamacin y necrosis. Comnmente hay alteracio- nes digestvas, como vmitos, ulceracin, necrosis oral y diarrea sanguinolenta. Hay tambin un efecto radiomtco con granulacitopenia, anemia y descenso de las protenas inmunitarias. Signos clnicos Los signos son variables pero predominan sobre el tracto digestvo, el sistema vascular y de coagulacin. En la forma aguda presentan gran depresin e intensos vmitos. Esto puede pro- gresar a diarreas, en muchos casos sanguinolentas. Los efectos necrtcos epite- liales de la T-2 son salivacin, estomatts, lceras y necrosis de boca y esfago. La elevacin del tempo de protrombina se traduce con hemorragias como he- matemesis, melenas, hematomas subcutneos e intraartculares. Fiebre, anemia e incremento de las enfermedades infecciosas son el resultado de los efectos radiomimtcos de la T-2. Ilustracin 61 Necrosis de la boca en una oveja l i i d l b 159 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Lesiones Las lesiones del contacto directo de la toxina con la boca y el esfago son ina- macin, exudacin y necrosis. Se forman lceras orales, sobre todo en las aves. Hay tambin gastrits, enterits, contenido intestnal sanguinolento y hemorra- gias de la subserosa intestnal. Puede haber hemorragias en varios rganos in- cluidos pulmn, corazn, vejiga urinaria, riones, subcutneo y artculaciones. Pruebas complementarias de diagnstco -Tiempo de protrombina aumentado. -Aumento del cido lctco en sangre. -Disminucin del tempo de excrecin de la bromo sulfalena. -Aumento de la lcto deshidrogenasa. -Aumento de triglicridos totales y colesterolemia. -Aumento de actvidad de aspartco -Aminotransferasa, Alanina-amino-transferasa. -Aumento de fosfatasa-alcalina. El diagnstco exacto se hace por cromatografa. El bioanlisis tambin es muy sensible con pequeas cantdades de toxina T-2 (0.05ug). As el Test para los tri- chotecenos consiste en lo siguiente. Se hace la extraccin qumica de la toxina sobre el alimento sospechoso. Se depila el dorso de un conejo, cobayo o rata. Con una micropipeta se depositan 10 ug de la muestra extrada en un lugar del dorso previamente marcado. Estaoperacin se debe repetr a las 24hs. Se realiza la lectura 5 das despus. Si hay trichotecenos se llega a la descama- cin, eritema o necrosis de la piel. Hay molculas vegetales que pueden enroje- cer la piel; en general estas inamaciones son pasajeras. 160 Manual de Micologa Veterinaria * La inyeccin intradrmica puede dar falsos positvos. Diagnstco diferencial Bovinos: -Dicamarol: signologa y lesiones hemorrgicas ms intensas. -Diarrea viral bovina: Tpicas lesiones erosivas circunscriptas del aparato diges- tvo. -Intoxicacin por helechos (Pteridium aquilinun): restringida a la regin geogr- ca de stos. -Salmonelosis aguda en terneros. Porcinos: -Dicumarol y antcoagulantes similares. -Salmonellosis aguda. Lesiones orales en pollos: -Candidiasis -New Castle -Viruela Tratamiento Sintomtco. Transfusiones y vitamina K. Antbitcos. 4.1.4 Ochratoxina A - Citrinina y cido oxlico La Ochratoxina A y citrinina son producidas por AspergillusochraceusyPenici- lliumviridicatum respectvamente. Crecen en granos y alimentos comerciales y la OchratoxinaA tambin puede estar en leguminosas. 161 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Entre los substratos ms corrientemente afectados, podemos citar: maz, ce- bada, centeno, trigo, avena, arroz, soja, legumbres y productos elaborados con estas materias primas. En nuestra regin ha sido detectada en rollos y fardos de alfalfa en cantdades vestgiales o importantes (hasta 1.000 microgramos por kg de alimento problema). La Ocratoxina A concentraciones moderadas es neurotxica, pero a altas con- centraciones, es tambin, he atxica. La primera afecta especialmente a porci- nos y ratas. Muchos casos de estas nefrotoxinas fueron registrados en Dinamar- ca, Suecia, USA e Irlanda. La citrinina afecta a porcinos, equinos y ovinos. Tambin se han descripto casos en bovinos con ambas toxinas y en pollos. El hongo Fusariumnigerproduce ci- do oxlico en henos y granos afectando bsicamente a porcinos. Patogenia La ocratoxina A es capaz de actuar mediante: Alteracin de las actvidades fundamentales delas mitocondrias, partcular- mente del tubo contorneado proximal del rin, lo cual es capaz de desencade- nar cambios ultraestructurales y siopatolgicos, desembocando en severas y mortales nefropatas. Inhibicin de la glucgenolisis heptca lo cualacarrea acumulacin de glucge- no. Tambin a travs de su accin sobre las mitocondrias del hepatocito. Inhibicin de la respuesta inmune humoraly celular. Es teratognica y mutagnica y, posiblemente embriotxica. En forma anloga a las aatoxinas, laocratoxina A, tene un efecto inhibitorio sobre la sntesis proteica, actuando en la fase de translacin. Este se puede ver en las clulas renales principalmente, mientras que en caso de las aatoxinas se observa a nivel heptco. 162 Manual de Micologa Veterinaria La ocratoxina A acta sobre la enzima fosfoenolpiruvatocarboxiquinasa a nivel renal, degradando el RNAm codicado; de igual manera la ocratoxina A inhibe en forma compettva a la fenil-alanil-tRNA sintettasa, impidiendo la formacin de la fenil-alanil-tRNA (compuesto vital para todos los organismos vivientes en la sntesis proteica a nivel celular). Sobre el metabolismo de los hidratos de carbono la ocratoxina A se tene: -Efecto inhibidor en la formacin de glucgeno heptco. -Inhibicin a nivel renal de la fosfoenolpiruvatocarboxiquinasa, produciendo una disminucin de la gluconeognesis. Sobre el metabolismo de los lpidos su accin es semejante a las aatoxinas. Tambin acta en el estado III de la cadena respiratoria (fosforilacin), mediante un mecanismo compettvo de la ocratoxina A por la captacin del cido dicarb- nico, para el funcionamiento mitocondrial. Es bien sabido que la ocratoxina A esnefrotxica muy poco hepatotxica puesto que el rin posee un mayor nmero de linfocitos que el hgado, siendo stos considerados ms sensibles a la micotoxina en relacin a la inhibicin de la sn- tesis proteica. Adems el hepatocito tene la capacidad de metabolizar a la Ocratoxina A, con- virtndola en compuestos menos txicos. Signos clnicos Altos niveles de ocratoxina A y citrinina son primariamente nefrotxicas. Clnica- mente cursa con diarrea, polidipsia y poliurea para terminar con anuria. La ocratoxina A es eliminada por heces y orina. En esta ltma, las concentracio- nes son mximas a las 6-8 hs. despus de la ingesta y descienden luego de 72 hs. Tambin podemos agregar que el hongo Fusarium niger produce cido oxlico en fardos y granos produciendo en porcinos signos semejantes a los descritos. 163 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Lesiones Riones amarillos-grisceos, con o sin edema perirrenal. Puede ocurrir desca- macin de las clulas tubulares que cursa con proteinuria. Los cambios incluyen rpida degeneracin hialina, principalmente en los tbu- los contorneadosproximales. Puede llegar a presentarse un edema perirrenal. Tambin hay deshidratacin, edema generalizado, enterits, necrosis y atroa del epitelio tubular, brosis interstcial, esclerosis y brosis glomerular. Hay inhi- bicin de la glucgenolisis heptca y tambin puede llegar a necrosis y degene- racin del mismo rgano. Algunas limitadas experiencias indican que la ocratoxi- na A puede ser embriotxica, provocando abortos en vacas lecheras. Pruebas complementarias de diagnstco -Someter a cromatografa el alimento sospechoso. -La uremia se halla elevada en los enfermos (normal 20-40 mg/100ml). -Tambin est elevada la creatnina (normal 1-2 mg/100 ml). Diagnstco diferencial -Intoxicacin por Yuyo colorado (Amaranthus quitensis). -Vegetales que contenen oxalatos. -Bloqueos urinarios por otras causas. Ilustracin 62 Necrosis tubular 164 Manual de Micologa Veterinaria 4.1.5 Eslaframina La Eslaframina o Factor de Salivacin es una toxina producida por el hongo Rhizotocnialegumincola, que crece en los tallos y hojas del trbol, sobre todo el rojo (Trifoliumpratense), en pie y henicado, enforma de manchitas negras. El mismo necesita para su desarrollo humedad ambiente elevada y temperatura entre 25-29 C. Su principio txico, la eslaframina, es un indol-alcaloide, que es convertble por la accin enzimtca de las clulas heptcas en un compuesto actvo, similar far- macolgicamente a la acetl colina. Esta molcula actva (indol susttuido) ejerce efectos histaminrgicos: a) Directos b) Liberador de histamina Su singular signo clnico est determinado por la existencia de receptores coli- nrgicos, en las glndulas salivales y los msculos lisos del rumen del bovino. Signos Clnicos Ha sido descrita en bovinos. Presentan salivacin abundante como primer signo, sobreviene tambin lagrimeo, anafagia, diarrea, poliuria; pueden producirse tu- mefacciones de prpados y otras zonas de la cara. Produce espasmo de la mus- culatura lisa del esfago y, consecuentemente, tmpanismo gaseoso, no grave. Ilustracin 63 Bovino con sialorrea. y, y, ,, pp 165 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Los signos aparecen 5 6 horas despus de ingerido el alimento problema, des- apareciendo unas 24 h ms tarde. En cobayos los signos aparecen rpidamente, 30 minutos despus de administrada la toxina; posiblemente su sistema enzi- mtco heptco la actve ms rpidamente. En el leucograma se encontr un aumento marcado de eosinlos (15-30%). Lesiones No han sido descritas Diagnstco Es fundamental observar las manchitas negras en las hojas y/o tallos del tr- bol. Aislamiento del hongo. El cobayo es muy sensible a la eslaframina por lo tanto la reproduccin expe- rimental en l es importante. Diagnstco diferencial -Intoxicacin por compuesto rganos fosforados: signos para simpatcomimt- cos. -Afosa: vesculas en boca, ubre y espacio interdigital. -BO-CO-PA: lesiones gangrenosas en extremidades. Tratamiento Atropina y anthistamnicos. Aplicacin farmacolgica: se la utliza actualmente en los novillos de feed-lot en dosis de 10, 15 20 microgramos/kg/, en dietas con ms del 60% de concentrados como un estmulante de salivacin. 166 Manual de Micologa Veterinaria Nota: Trifolium sp. Puede ocasionar: -Babeo (eslaframina). -Hiperestrogenismo (toestrgenos). -Meteorismo, partcularmente espumoso. -cido cianihdrico en bajas proporciones. 4.1.6 Claviceps paspalis El Clavicepspaspalis es un hongo que parasitalos vegetales del gnero Paspalum, entre ellos el Paspalum notatum (Gramilln, Gramilla dulce o Pasto miel), Pas- palumdilatatum (Pasto de Dallas en EEUU) y Paspalumdischum(sp. africana). La esclerota de Cl.paspalis es mucho ms pequea que la del Cl.Purpurea;el- tamao es semejante a la semilla del Pastomiel (2-4 mm), es esfrico, duro y oscuro. Tienetambin al igual que el Cl.Purpureaun ciclo asexual durante el cual segrega su miel y los insectos favorecen la dispersin aotras ores. Tiene tam- bin un ciclo sexual dentro de la esclerota. Esta pasa el invierno en el suelo esperando la oracin de Paspalum. El ciclo es el siguiente: La esclerotapasa todo el invierno en la supercie de la terra y a nes de noviembre o principio de diciembre germina en el suelo y fructca dando peritecios que encierran esporos sexuados (ascosporos); stos son llevados por el viento o insectos (escarabajos) hasta las ores. Los esporos germinan en las ores dando un micelio lamentoso que fructca a su vez en esporos asexua- dos (conidios), se forma la miel y los insectos diseminan los conidios. De los conidios germina un micelio lamentoso, que en determinados momen- tos forman los rganos de resistencia o esclerotos. Hay veces que la esclero- ta est contaminada en su supercie con hongos del gnero Fusarium dndole los mismos un color rosado naranja. El Clavicepspaspalis contene como agente txico un alcaloide, el LSD y derivados qumico de estas micotoxinas tremorgni- cas se las ha denominado: paspalis y paspalitrenos. 167 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Las altas temperaturas y humedad favorecen el desarrollo del hongo. El LSD (alfa oxietlamida) lo contene la esclerota y en mayor cantdad, cuando est el hon- go en estado de micelio con toda su miel. Especies afectadas El bovino es la especie ms afectada. Ms resistentes, pero tambin sensibles son los ovinos y equinos. Patogenia Las manifestaciones clnicas dependen de los ndoles y de los derivados del LSD, los cuales estmulan el S.N.C. al interferir la funcin neurotransmisora en el en- cfalo, partcularmente cerebelo. La serotonina es el transmisor ms afectado por su semejanza en la estructura qumica con los estmulantes tpo indol, aunque otras aminas (dopamina, no- repinefrina) pueden tambin verse afectadas en el desequilibrio central. Algu- nas de estas micotoxinas disminuyen selectvamente los niveles enceflicos del GABA. Signos clnicos El tempo de ingestn para la presentacin clnica depende de la carga de Claviceps paspalis que posee el Paspalum, pero por lo general tardan 10-15 das en aparecer los signos. La morbilidad es de un 5-35%. La mortalidad es nma y slo se produce por accidentes secundarios debido a la sintomatologa nervio- sa (fracturas, cadas en bebederos, tmpanismo gaseoso por decbitos laterales prolongados, etc.). 168 Manual de Micologa Veterinaria Los signos comienzan con movimientos pendulares de la cabeza, leves temblo- res de los msculos del cuello, tronco yextremidades. Acercndose a los anima- les se observa hiperexcitabilidad al ruido (hiperacusia) y movimiento, pero no al contacto, caracterizada por orejas erguidas y aumento de los temblores. Incluso cuando la sintomatologa es muy leve, los temblores slo aparecen al excitar al animal. Animales ms afectados presentan marcha rgida, con sus miembros se- parados y al excitarlos corren en forma caracterstca, cayendo a raz de la rigidez de sus miembros, quedando los posteriores extendidos hacia atrs. Hay enton- ces astasia y ataxia cerebelosa con dismetra, hipermetra, etc. En la marcha los miembros anteriores se elevan ms de lo normal mantenindose en extensin haciendo el paso de ganso. En el decbito los animales presentan convulsiones tnicas con sus miembros rgidos y con movimientos de pedaleo y natatorios. Dejando tranquilo a los animales, a los pocos minutos se levantan persistendo los temblores. Algunas veces aparecen leves perodos diarreicos, salivacin, nistagmus y lagri- meo en el transcurso de la enfermedad. El apetto no se modica. Lesiones Lo nico ms o menos constante es el aumento de la cantdad del lquido cefa- lorraqudeo. Diagnstco diferencial -Ttano: hipertonicidad muscular contna. Signos ms graves. -Tetania hipomagnesmica: convulsiones tnico-clnices graves. -Intoxicacin por compuestos organofosforados: signos para simpatcomimt cos. -Tembladeras por otras micotoxinas. 169 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Tratamiento En casos muy severos se pueden utlizar los derivados de las promacinas como tranquilizantes, pero a la sola retrada de los animales del pasto problema, so- breviene la recuperacin en pocos das. 4.1.7 Claviceps purpurea (Ergosmo) Es una enfermedad que puede manifestarse con gangrena seca de las extremi- dades y estmulacin a nivel central del sistema nervioso. El ergotsmo como enfermedad del hombre y de los animales es conocido desde hace siglos. Es producido por un hongo, Clavicepspurpurea, que contene alca- loides causantes de la intoxicacin. Dichos alcaloides se denominan ergoalcaloides por prevenir del ergot, nombre comn con que se denominan las esclerotas del hongo. Los ergoalcaloides te- nen como caracterstcas una estructura tetracclica llamada ergolina, derivada del indol. De esta estructura general provienen los dos grandes grupos de ergoalcaloides: los derivados del LSD y los derivados de la clavina. Es de tener en cuenta que la actvidad biolgica est relacionada con la presen- cia del LSD en la molcula del ergoalcaloide, aunque ste no se encuentre nunca libre en grandes cantdades. Los tres grupos de alcaloides se denominan: ergo- toxina, ergotamina y ergonovina. Los derivados del LSD pueden sufrir un cambio en la ubicacin del tomo de H del Carbono 8 de la molcula por diversas causas, cambio que recibe el nombre de epimerizacin. Es decir que normalmente el tomo de H del C.8 que se ubica hacia atrs del plano de la molcula, pasara adelante, produciendo el llamado epmero de la molcula que se denomina con el sujo imina en vez de ina. Ej: Ergotamina->Epimerizacin->Ergotaminina. La epimerizacin produce la pr- dida casi total de la actvidad biolgica de estos alcaloides. 170 Manual de Micologa Veterinaria La mayor actvidad del Claviceps purpurea se debe a los derivados del LSD. Cereales que parasita Centeno, de all su denominacin cornezuelo de centeno, pero tambin puede parasitar trigo, avena, cebada, moha, pasto ovillo, Ray grass, mijo. La enferme- dad no solo se da en pastoreo sino en animales alimentados con raciones com- puestas por granos contaminados. Especies susceptbles La enfermedad se puede presentar en cualquier especie, pero es en bovinos donde aparece con ms frecuencia. Ciclo de Claviceps purpurea En la poca de oracin de las gramneas susceptbles germinan las esclerotas que han permanecido durante el invierno en el suelo. Esta germinacin produce estromas oscuros en las cuales se produce el ciclo sexual del hongo. All se forman peritecios que contenen ascos en forma de cilindros alargados que contenen ascosporas, las cuales son expulsadas al exterior y pueden llegar a las ores de los huspedes donde invaden el ovario, destruyendo sus tejidos. Estos son reemplazados por un micelio que produce una secrecin siruposa mez- clada con conidias originada tambin en el micelio. Los insectos son atrados por esta secrecin y se transforman en agentes de dis- persin a otras ores sanas. El micelio contna su desarrollo transformndose en un escleroto duro de color rosado o purprea oscuro, de forma curvada que puede medir de 0.5 hasta 3 cm de longitud y que ocupa el lugar donde se hubie- ra desarrollado el grano. 171 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Patogenia Estos alcaloides ingeridos en grandes cantdades son estmulantes del sistema nervioso central. Son las ergotoxinas las que predominan en esta accin. Ab- sorbido en pequeas cantdades durante un perodo prudencial, sobre todo la ergotamina, produce vasoconstriccin de las arteriolas y lesin del endotelio capilar con la consecuencia de gangrena seca. La ergonovina es la causante del efecto oxitcico de los alcaloides, pero en la prctca este efecto se ve poco. Posiblemente se deba a que la ergonovina se produce en poca cantdad o se epimeriza fcilmente. Signos clnicos Ergotsmo agudo o convulsivo: afecta principalmente a carnvoros, caballos, ovejas y en menor frecuencia a bovinos. En ovinos se han observado que los animales inician violentas corridas, muy rpidas, dando saltos hasta caer extenuados, con los miembros rgidos y con opisttono. En bovinos comienza con temblores musculares, vrtgo, incoordinacin, enva- ramiento e hipersensibilidad, seguido de perodos de depresin. Los signos apa- recen 24 h despus de ingerirel txico. Ilustracin 64 lesiones por C.purpurea. 172 Manual de Micologa Veterinaria Ergotsmo crnico o gangrenoso: En bovinos: se maniesta este sndrome 10- 30 das despus de comenzado a ingerir el txico. La accin de estos alcaloides afecta principalmente las extremidades de cola, oreja y miembros, especialmen- te los posteriores. En estas hay aumento leve de la temperatura, y alopecia. Lo primero en llamar la atencin son las rengueras. Al principio hay inamacin con enrojecimiento y tumefaccin de las partes afectadas luego sobreviene frial- dad, sequedad, insensibilidad y color azulado de la zona que luego se esfacela (necrosis por gangrena seca). La lesin por lo general nunca supera la lnea me- tatarsiana o metacarpiana. En cerdos: se produce necrosis de la punta de las orejas y cola, pero lo ms inte- resante y grave es la hipogalacta en cerdas lactantes, con muertes secundaria de cerditos lactantes, nacimiento de cras pequeas y/o muertas; y gran mortalidad neonatal. Si algunos de los lechones sobreviven, sufren posteriormente gangre- na de los bordes de los pabellones auriculares y punta de la cola. En ovinos adems de las lesiones en miembros, cola y orejas se producen lceras y necrosis en lengua, faringe, rumen, abomaso e intestno delgado. Diagnstco diferencial -La forma aguda es difcil diferenciarla de otros episodios convulsivos; debemos conrmar la presencia de la esclerota para hacer el diagnstco. -En la forma crnica puede darse algo semejante en las zonas fras o de nieve (gangrena por congelacin). -Pie de Festuca: relacionada con la ingesta de festuca. -BO-CO-PA (Enfermedad de los eucaliptos): presencia del hongo Clavaria en bos- ques de eucaliptos. -Enfermedad de Deg-Nala: relacionada a la paja de arroz. 173 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes -Infecciones pdales crnicas: lesiones limitadas a pezuas y espacio interdigi- tal. -Laminits: afeccin aguda. -Selenosis crnica: deformaciones exageradas de pezuas. -Leptospirosis y salmonelosis crnicas: ambas pueden llegar a provocar lesiones gangrenosas muy semejantes. -Fotosensibilizacin: afecta piel blanca. Tratamiento Consiste en retrar los animales de la ingestn del txico. La forma aguda cede en 48 h al igual que la crnica siempre y cuando no se haya instalado la gangre- na. 4.1.8 Fusarium moniliforme (Leucoencefalomalacia Equina) La ingesta de granos de maz enmohecido por Fusariummoniliforme (F.verciloides) provoca en caballos una enfermedad con signos nerviosos deno- minada leucoencefalomalacia. Bajo adecuada condiciones de temperatura y humedad, crece sobre los granos de maz (en planta o almacenada). El mismo produce una toxina con accin da- ina sobre la sustancia blanca del cerebro. Tambin se describen casos donde junto con las alteraciones nerviosas ocurre dao heptco e ictericia. El bicho taladrador del maz, con los daos que provoca sobre este, ayudara al desarro- llo del hongo. Son los caballos y mulos las especies donde se producen la enfermedad; tam- bin son sensibles los conejos. 174 Manual de Micologa Veterinaria Signos clnicos Pueden producirse muertes bruscas, pero por lo general va precedida de los siguientes signos: Aparente ceguera, con corridas de los animales en el potrero. Parlisis facial con cada del labio, protusin lingual y, no siempre, parlisis farn- gea con disfagia. Algunas veces gran somnolencia e indiferencia al medio. Otras veces los anima- les se presentan hipersensibles, realizando rotaciones en crculos, con temblores musculares de los muslos, ataxia y pueden caer en decbito lateral con movi- mientos de pedaleo y natatorio. Al ltmo sobreviene depresin. Se describen algunos casos en que a los signos nerviosos lo acompaan un sn- drome hepatotxico con ictericia, edema subcutneo y patolgicamente cirrosis heptca. Lesiones Macroscpicas: hay reas focales de leucoencefalomalacia que se sitan fre- cuentemente en los polos frontales de los hemisferios cerebrales. Hay cavitaciones de unos pocos centmetros de dimetro hasta de gran tamao, con sus bordes irregulares y reas de reblandecimiento. Numerosas hemorra- gias rodean a las lesiones de encefalomalacia. Ilustracin 65 Protusin lingual en un equino 175 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Mdula espinal: poliomalacia. Microscpicas: hay desintegracin marcada de la sustancia blanca del cerebro, desapareciendo los elementos tsulares y quedando residuos celulares en las cavitaciones vacas. Estas cavitaciones estn rodeadas por edema y hemorra- gias. Estas mismas lesiones se observan en las sustancias gris medular. Los vasos sanguneos vecinos a la lesin tenen inltraciones perivasculares, consistentes en eosinlos y clulas plasmtcas. Diagnstco diferencial Leucoencefalomalacia con lesin negro plida (Cordy) (cerebro-globo plido- substancia negra). Se presentan en equinos alimentados con Cardo estrellado o abrepuo (Centaurasolsalis). Tambin hay descritos casos de intoxicaciones por Helechos (Pteridium aquili- num) el que producira una carencia secundaria de vitamina B1, con su consi- guiente encefalomalacia. -Encefalomielits equina, forma letrgica. -Botulismo. -Rabia pareciente. Tratamiento Las lesiones son irreversibles por lo tanto no existe tratamiento especco. 4.1.9 Ipomerona Es una toxina producida por Fusariumsolani, hongo que parasita las batatas. Afecta a los bovinos. Dicho hongo produce la transformacin de una sustancia de las batatas que termina en ipomerona, sustancia que tene toxicidad pulmo- nar produciendo edema pulmonar, membrana hialina, neumonits, etc. 176 Manual de Micologa Veterinaria 4.1.10 Dicumarina. Intoxicacin por trbol blanco (Melillotus alba) Se caracteriza esta intoxicacin por producir una alteracin en el sistema de coa- gulacin (hemostasia) con la consecuencia de hemorragias generalizadas inter- nas y externas, determinando un sndrome purprico. El trbol blanco o dulce (Melillotus alba) y en menor cantdad el trbol amari- llo (Melillotus ocinalis) poseen como consttuyente normal una sustancia de- nominada cumarina o cumarol. La misma bajo la accin de ciertos hongos que desarrollan por efecto de la humedad se transforma endicumarina o dicumarol, sustancia con accin antcoagulante y altamente txica; tal es as que un deriva- do de la misma, la warfarina, se utliza como rodentcida. Esta transformacin de cumarina en dicumarina tene lugar en el trbol heni- cado hmedo, ya que esta condicin predispone al ataque de mohos de los gneros: Mucor, Penicillium, Fusarium y Aspergillus (todos requieren O2 para el desarrollo); por esta razn se la considera una micotoxina. En el trbol en planta puede producirse una nma transformacin que no llega a producir alteraciones en el animal. Las diversas variedades del trbol blanco dieren en su contenido en cumarina, as la variedad Cuminoposee poca y la rtca es muy rica en el mismo. Especies susceptbles La enfermedad se da ms frecuentemente en bovinos y dentro de stos en los jvenes. Adems de ser sensibles, es la especie que ms en contacto est con este tpo de forraje. Tambin son sensibles los ovinos, porcinos y conejos (como animales de experimentacin). Los equinos son bastante resistentes. 177 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Patogenia La dicumarina realiza su accin txica impidiendo la formacin de protrombina o Factor II en el hgado; esta accin se debe a su competencia con la vitamina K la cual interviene en la sntesis de la protrombina. La falta de sta, hace que no se realice normalmente la coagulacin sangunea, adems, se produce una de- presin de los factores VII, IX y X, disminuye la capacidad conglomerante de las plaquetas y ocasiona dilatacin de los capilares con aumento de su permeabi- lidad. Todo esto hace que ante cualquier traumatsmo por simple que sea, se produzcan hemorragias que en algunos casos llegan a ser fatales. Esta micotoxina se elimina por la leche y posee la capacidad de atravesar la placenta. Los terneros recin nacidos provenientes de una madre con una ges- tacin normal adolecen de una hipoprotrombinemia natural y transitoria cl- nicamente no maniesta. Esta circunstancia normal es agravada en estos casos partculares de micotoxicosis. La interferencia en la sntesis de los factores de coagulacin resulta de la acumu- lacin de un metabolito natural inhibidor de la vitamina. K (una nafoquinona vitamina .K- 2,3 epxido). Normalmente este epxido es reducido a vitamina. K, pero en presencia de dicumarol, este inhibe la reductasa y por ende su reduccin. Signos clnicos Los signos son muy variados ya que dependen del lugar de asentamiento de las lesiones. Para la aparicin de los primeros signos debe pasar un tempo que va de 7 a 30 das desde el comienzo de la ingestn del txico. Esto depende del porcentaje de dicumarina contenido en el forraje y la cantdad que ingieren los animales. En el heno la cantdad de 0.0026% ya es nocivo, al igual que la inges- tn de 2 mg/kg/da. 178 Manual de Micologa Veterinaria Las manifestaciones ms comunes, sobre todo en terneros, son prdida del es- tado general, melenas en materia fecal, rengueras y manqueras, stas ltmas por la ubicacin de los hematomas en los miembros. Las muertes sin signos pre- monitorios son muy frecuentes. Pueden aparecer rinorragia y/o epistaxis, he- moptsis, hematuria, gastrorragia y enterorragia, con aparicin de melena y/o disentera. La temperatura rectal est dentro de los lmites normales. Hay taquicardia y polipnea debido a la intensa anemia. A causa de esto las mu- cosas presentan un color blanco porcelana. Se producen hemorragias copiosas en tejido subcutneo y planos intermusculares, sobre todo en los lugares ms expuestos a golpes. Estos hematomas producen dolores y molestas que en caso de estar ubicados en los miembros producen claudicaciones. Estos por lo general son visibles de forma tal que aumenta el tamao del lugar que toman, a la palpa- cin son fros, casi indoloros y hay ausencia decrepitacin. En terneros que se alimentan a travs de enrejados los hematomas aparecen en cabeza y cuello. En vacas de ordee suelen ser comunes los hematomas en tarsos (por efecto del maneado) y costllares (roces con bretes de ordee). Si dichos hematomas son superciales se pueden hacer una puncin exploratoria de la que uir sangre muy plida, de este modo se conrmara su diagnstco. Se pueden producir hemorragias alrededor de las vsceras provocando compre- sin y tmpanismo. Las hemorragias tambin pueden producirse en cerebro con la consecuencia de signos nerviosos como paresia, ataxias, convulsiones y muer- tes. Las heridas accidentales o quirrgicas producen hemorragias que pueden ser mortales. En vacas en lactancia la leche puede ser sanguinolenta (hemolacta por lactorragia). Ilustracin 66 Protusin lingual en un equino. 179 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes La dicumarina atraviesa la barrera placentaria, presentndose nacimientos de animales con hemorragias fatales en encas y ombligos. Los terneros pueden morir asintomtcamente en los primeros das de vida o pueden presentar cual- quiera de los variados signos descritos. Se ha comprobado que los recin naci- dos son los ms sensibles a la enfermedad y la misma puede ser causa impor- tante de muertes perinatales. Lesiones Olor dulzn del cadver. Intensa anemia, sangre muy acuosa, plida que no coagula. Se comprueban hemorragias en cualquier parte del cuerpo, sobre todo en tejido subcutneo, intermusculares, peritoneo, pericardio, cerebro, conteni- do intestnal, subcapsular en riones. Los rganos que no estn afectados por hemorragias se presentan sumamente plidos y exanges, especialmente los pulmones. El hgado tene color ocre p- lido. Los terneros de pocos das pueden presentar cualquiera de las lesiones mencio- nadas; adems en el ombligo muchas veces hay un hematoma globoso de 7-8 cm de dimetro. Pruebas complementarias de diagnstco El recuento de glbulos rojos suele llegar a 1.2 millones/ml. Es tl la determi- nacin de los tempos de sangra, de coagulacin y de protrombina los que se hallan aumentados. Ilustracin 67 Hgado color ocre plido. 180 Manual de Micologa Veterinaria Tiempo de sangra normal: 2-4 minutos. Tiempo de coagulacin normal: 3-10 minutos a 20C. El tempo de protrombina precede al de coagulacin por lo tanto es una buena prueba pronstca; el mismo se mide en segundos y los normales son: 28 en bo- vinos, 18 en equinos 16 en cerdos, gatos, ovinos y 10 en perros. El tempo de protrombina est dado por el tempo de coagulacin del plasma oxalatado tras agregarle una cantdad ptma de calcio (recalcicacin) y trom- boquinasa. Cuanta menos protrombina hay en el plasma ms lento es la coagu- lacin. La sangre para esta prueba debe ser recolectada en tubos que contengan 1 parte de citrato de sodio y 9 partes de sangre. La prueba debe hacerse rpi- damente o bien guardarse la sangre refrigerada. El tempo de protrombina est aumentado antes que aparezcan los signos clnicos. Es bueno utlizar conejos para probarla inocuidad o no de un heno, alimentn- dolos exclusivamente con ste e ir vericando diariamente el tempo de sangra (normal 2-4 minutos). Diagnstco diferencial -Mancha en terneros: Esta cursa con hipertermia al comienzo, las tumefacciones son calientes, crepitantes; hay intensa toxemia. Lesiones oscuras con gas. -Parasitosis gastrointestnales y coccidiosis en terneros: se pueden descartar por anlisis coprolgico, pero la mayora de las veces suelen coexistr noxas y debe- mos evaluar quin es la causante de enfermedad. -Lesiones traumtcas primarias se deben descartar cuando ocurren en un solo animal. -Aatoxinas, rubratoxinas, trichotecenos y stachybotris pueden producir sndro- mes hemorrgicos pero nunca de tanta magnitud. 181 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes -Intoxicacin por rodentcidas a base de antcoagulantes (warfarinas y pindo- nas). -Seneciosise bovinos excepcionalmente puede provocar alteraciones hemorr- gicas leves. -Sndrome purprico tromboptco. -Sndrome purprico capilarioptco. Tratamiento Como primera medida se debe suspender el heno txico. Los animales se deben manejar suavemente, sin golpes y evitando los traumatsmos. El tratamiento adecuado es la administracin de vitamina K en dosis masivas; no se justca la administracin de otro tpo de coagulantes debido a la falta de protrombina. La administracin de vitamina K se debe realizar en dosis nica de 400 mg en terneros, preferentemente por va intravenosa y con aguja muy na evitando traumas. La vitamina K1 es superior a la menadiona (vitamina K3 sinttca). La vitamina K comienza a invertr la hipoprotrombinemia rpidamente. Adems se deben realizar transfusiones de sangre entera a razn de 10 ml/kg, debiendo repetr- se si fueran necesarios. Las transfusiones tenen un resultado espectacular no slo en la reversin de los signos sino tambin en la reabsorcin de los hema- tomas; las mismas son prioritarias en el tratamiento ya que reponen protrom- bina en forma inmediata y directa. 182 Manual de Micologa Veterinaria GLOSARIO Aerobiosis: es un proceso conocido como respiracin celular, usa el oxgeno para oxidacin del sustrato (por ejemplo azcares y grasas para obtener energa). Ascospora: es una espora (meiospora) contenida en un asca. Esta clase de espo- ra es especca a los hongos clasicados como ascomycetes (Ascomycota). Tpicamente, un asca contene ocho ascosporas. Las ocho esporas son produ- cidas por la combinacin de una divisin reductora (meiosis), seguida por una divisin normal (mitosis). La meiosis transforma el ncleodiploide original del cigoto, con carga gentca 2n, en cuatro clulas haploides con carga gentca n. Como consecuencia de la meiosis, todo el ADN de ambos sistemas se duplica, para hacer un total de cuatro sistemas. El ncleo que contene los cuatro siste- mas se divide en dos etapas, separndose en cuatro nuevos ncleos. Despus de este proceso, cada uno de los cuatro duplicados experimenta una divisin por mitosis. Consecuentemente, el asca contendr cuatro pares de esporas. Coriorretnits: es una enfermedad ocular que se caracteriza por la inamacin delcoroides y la retna. La coriorretnits es causada con frecuencia por diferentes procesos infecciosos, como la toxoplasmosis y el citomegalovirus. Afecta princi- palmene a jvenes y pacientes inmunodeprimidos por presentar Sida o encon- trarse en tratamiento inmunosupresor. Monoletcos: se dice que un grupo de organismos es mono letco cuando incluye a un antepasado comn con todos y cada uno de sus descendientes. Un ejemplo es el de los mamferos: todos descienden de un nico antepasado comn (un reptl sinptco, por si a alguien le interesa), y ninguno de esos des- cendientes se incluye en otro grupo diferente. Ms ejemplos de taxones mono letcos: las aves, los insectos, los mildius, etc. Muguet: Es una infeccin muy comn provocada por un hongo llamado candi- da albicans (por eso, tambin se la llama candidiasis oral) que se maniesta en forma de manchas blancas en el interior de las mejillas, el paladar, la lengua y los labios. 183 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes Opisconto: (Opisthokonta) son organismos eucariontes que forman un clado (una rama evolutva) en el que coexisten algunas formas unicelulares ageladas junto a los hongos verdaderos (Fungi) y los animales verdaderos (Animalia). El nombre alude a que el agelo, singular cuando est presente, ocupa una po- sicin posterior, avanzando la clula por delante de l, como se ve en los esper- matozoides de los animales. En las otras ramas de los eucariontes en que hay agelos, stos son dos ms a menudo y se sitan delante de la clula durante su avance (se dice que son clulas acrocontas). En los grupos clsicos de hongos no existen fases ageladas, pero stas abundan en los quitridios, grupos tradicio- nalmente tratados como protstas, pero que ahora se saben que forman parte del mismo clado. Panofalmits: es un inamacin generalmente de origen infeccioso que afecta a todas las estructuras del ojo. Se produce usualmente en pacientes que tenen deciencia en su sistema inmunitario por alguna enfermedad crnica como la diabetes o la infeccin por el virus VIH, o bien como consecuencia de un trauma- tsmo o intervencin quirrgica sobre el ojo que provoca una va de entrada por la cual penetran los grmenes en el interior del globo ocular. Puede tener mala evolucin y producir como secuela un dcit importante o total de la capacidad visual. Querion dermatoftco: es una lesin anular, alopcica, de aspecto nodular con una delimitacin perifrica muy marcada (no tende a expandirse) y con un as- pecto inamatorio que diere de la presentacin tpica de dermatotosis en la especie canina. A diferencia de la tpica lesin anular descamatva, que se extende a la periferia y que normalmente presenta curacin en la zona central, el querion suele apa- recer de forma aguda, de aspecto eritematoso, exudatvo y sin tendencia a la diseminacin. 184 Manual de Micologa Veterinaria Reproduccin sexual o gmica: consttuye el procedimiento reproductvo ms habitual de los seres pluricelulares. Muchos de estos la presentan, no como un modo exclusivo de reproduccin, sino alternado, con modalidades de tpo asexual. Tambin se da en organismos unicelulares, principalmente protozoos y algas unicelulares. Se puede denir de tres formas, aceptadas cada una por diversos autores. Reproduccin en la que existe singamia (fusin de gametos) Reproduccin en la que interviene un proceso de meiosis (formacin de game- tos haploides) Reproduccin en la que interviene un proceso de recombinacin gentca(descendencia diferente a la parental) Reproduccin asexual: consiste en que de un organismo se desprende una sola celula o trozos del cuerpo ya desarrollado, que por procesos mittcos, son capa- ces de formar un individuo completo gentcamente idntco al original. Se lleva a cabo con un solo progenitor y sin la intervencin de los ncleos de las clulas sexuales o gametos. Los organismos celulares ms simples se reproducen por un proceso conocido como sin o escisin, en el que la clula madre se fragmenta en dos o ms clulas hijas. La divisin celular que da lugar a la proliferacin de las clulas que consttuyen los tejidos, rganos y sistemas de los organismos plu- ricelulares no se considera una reproduccin, aunque es casi idntca al proceso de escisin binaria. En ciertos animales pluricelulares, tales como celentreos, esponjas y tunicados, la divisin celular se realiza por yemas. Estas se originan en el cuerpo del organismo madre y despus se separan para desarrollarse como nuevos organismos idntcos al primero. Este proceso, co- nocido como gemacin, es anlogo al proceso de reproduccin vegetatva de las plantas. Procesos reproductores como los citados, en los que un nico or- ganismo origina su descendencia, se denominan cientcamente reproduccin asexual. En este caso, la descendencia obtenida es idntca al organismo que la ha originado. 185 M.V. Omar Enrique Navarro Reyes BIBLIOGRAFA Aielllo, Susan 2000. El Manual Merck de Veterinaria.Quinta Edicin. Baker.F.J y Breach. M.R 1995. Manual de Tcnica de Bacteriolgica.Zaragoza, Espaa. Benjamn, Maine M. 1988 Manual de Patologa Clnica en Veterinaria. Mexico Garca, Radams 1985. Microbiologa Pecuaria. Tomo II.Habana, Cuba. Garca, Radams 1985 Microbiologa Pecuaria. Tomo I.Habana, Cuba. 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