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Este documento presenta un estudio fitoquímico y la obtención del aceite esencial de la planta Thymus Vulgaris L., conocida como tomillo. El estudio incluyó la recolección y preparación de muestras de hojas de tomillo, así como pruebas de solubilidad y análisis fitoquímico del aceite esencial extraído. Los resultados mostraron que el aceite es insoluble en n-hexano y contiene compuestos como azúcares reductores, aldehídos, alcaloides y
Este documento presenta un estudio fitoquímico y la obtención del aceite esencial de la planta Thymus Vulgaris L., conocida como tomillo. El estudio incluyó la recolección y preparación de muestras de hojas de tomillo, así como pruebas de solubilidad y análisis fitoquímico del aceite esencial extraído. Los resultados mostraron que el aceite es insoluble en n-hexano y contiene compuestos como azúcares reductores, aldehídos, alcaloides y
Este documento presenta un estudio fitoquímico y la obtención del aceite esencial de la planta Thymus Vulgaris L., conocida como tomillo. El estudio incluyó la recolección y preparación de muestras de hojas de tomillo, así como pruebas de solubilidad y análisis fitoquímico del aceite esencial extraído. Los resultados mostraron que el aceite es insoluble en n-hexano y contiene compuestos como azúcares reductores, aldehídos, alcaloides y
ANALIS FITOQUIMICO Y OBTENCION DEL ACEITE ESENCIAL DEL THIMUS VULGARIS L. TOMILLO
INTEGRANTES:
o BELLO SALINAS MARLENE o BENUY BORDA LOURDES o GONZALES GONZALES JEANETTE o HUAPAYA CHANGANAQUI JACQUELINE
LIMA PERU 2014 2
A NUESTROS PADRES E HIJOS, QUE SON EL MOTIVO DE NUESTRA CONSTANTE PERSEVERANCIA PARA ALCANZA EL TRIUNFO. 3
RESUMEN
EL Thymus Vulgaris l. tomillo, es una planta con muchas propiedades, medicnales las que destacan como antinflamatorio, antisptico, antibacteriano, ya que se en este trabajo, recopilando todos los datos se llega a conclusin que contiene muchos compuestos como: timol, carvacrol, borneol, linaol, cimeno, pineno, dipenteno y acetato de bornila), un principio amargo, tanino y materias resinosas y ppticas, responsables de dichos efectos.
El aceite esencial de hojas de Thymus Vulgaris l. tomillo, se ha obtenido por el mtodo de extraccin hidroalcohlico. El aceite esencial extrado fue sometido a prueba de solubilidad, anlisis fitoqumico. En el cual se pudo determinar que en la prueba de solubilidad, con etanol (700,960), agua destilada, acetona, n-butano y metanol, dio como resultado que insoluble a l n-hexano, demostrando as que esta sustancia es insoluble a esta. En el anlisis fitoqumico, se comprob la presencia de azucares reductores, como glucosa, lactosa, la maltosa, aldehdos, alcaloides, y usando el reactivo de tricloruro de hierro se pudo comprobar e identificar la presencia de fenoles. De esta manera estos anlisis, y la obtencin de sus aceite esencial, podemos realizar otros estudios farmacolgicos y poder usarlos como medicina alternativa natural.
PALABRA CLAVE: antinflamatorio, nombre cientfico, accin farmacolgica, componente qumico.
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SUMARY
Thymus Vulgaris l. "Thyme", is a plant with many properties, most notably as medicinal anti-inflammatory, antiseptic, antibacterial, and that in this work, compiling all data reaches conclusion contains many compounds such as thymol, carvacrol, borneol, linaol , cymene, pinene, and bornila dipenteno acetate), a bitter principle, tannin and resinous materials and peptic responsible for these effects.
The essential oil of Thymus vulgaris leaves l. "Thyme" was obtained by hydroalcoholic extraction method. The extracted essential oil was tested for solubility, phytochemical analysis. In which it was determined that the solubility test with ethanol (700.960), distilled water, acetone, n-butane and methanol resulted in insoluble in n-hexane, demonstrating that this substance is insoluble at this. Phytochemical analysis, the presence of reducing sugars such as glucose, lactose, maltose, aldehydes, and alkaloid was found, and using the iron trichloride reagent could check and identify the presence of phenols. Thus this analyzes, and obtaining their essential oil, can make other pharmacological studies and save them as a natural alternative medicine.
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INDICE GENERAL Resumen Sumary I INTRODUCION ..................................................................................... 8 1.1 PLANTEAMINETO DEL PROBLEMA ......................................... 10 1.2 OBJETIVOS ............................................................................... 10 1.2.1 OBJETIVOS GENERALES ................................................... 10 1.2.2 OBJETIVO ESPECFICO: ..................................................... 10 1.3 HIPOTESIS: .............................................................................. 11 II GENERALIDADES ............................................................................. 11 2.1 Historia. ....................................................................................... 11 2.2 ESTUDIO BOTANICO ................................................................. 12 2.2.1 CARACTERISTICAS DE LA FAMILIA LAMINACEA (1) (2) ...... 12 2.2.2 DESCRIPCION BOTANICA DEL GNERO (3) ....................... 12 2.2.3 ESPECIES IMPORTANTES EN EL MUNDO DEL GENERO (THYMUS) ....................................................................................... 14 2.2.4 DESCRIPCION MORFOLOGICA DEL TOMILLO (Thymus Vulgaris l.) ....................................................................................... 15 2.2.5 CLASIFICACION TAXONOMICA ........................................... 15 2.2.6 CLIMA Y SUELO .................................................................. 17 2.2.7 PROPAGACION ................................................................... 17 2.2.8 CULTIVO Y RECOLECCIN (5) ......................................... 18 2.3 ESTUDIO QUIMICO .................................................................... 19 2.3.1 COMPOSICIN QUIMICA DE LA ESPECIE ....................... 19 2.3.2 PROPIEDADES MEDICINALES DEL TOMILO ..................... 20 2.3.3 ACEITES ESENCIALES ........................................................ 25 2.3.4 PROPIEDADES DE LOS ACEITES ESENCIALES ................ 28 2.3.5 USOS DE LOS ACEITES ESENCIALES ............................... 28 2.3.6 TOXICIDAD DEL ACEITE ESENCIAL DEL TOMILLO ........... 30 III PARTE EXPERIMENTAL .................................................................. 31 3.1 PARTE DE LA PLANTA A UTILIZAR ........................................... 31 3.2 MATERIALES Y REACTIVOS ...................................................... 31 6
3.2.1 MATERIALES Y EQUIPO ...................................................... 31 3.2.2 REACTIVOS ........................................................................... 32 3.3 METODOLOGIA Y PROCEDIMIENTO ........................................ 32 3.3.1 PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL ESTUDIO FITOQUIMICO Y FARMACOLOGICO ............................................ 32 3.3.1.1 RECOLECCION ............................................................... 32 3.3.1.2 SELECCIN .................................................................... 33 3.3.1.3 PREPARACION DEL EXTRACTO HIDROALCOHOLICO33 3.4 ENSAYOS PRELIMINARES ......................................................... 33 3.4.1 SOLUBILIDAD ........................................................................ 33 3.4.2 ANALISIS FITOQUIMICO (8) (fig. 6) ......................................... 34 IV RESULTADOS .................................................................................. 36 4.1 ESTUDIO FITOQUIMICO ............................................................. 36 4.1.1 PRUEBA DE SOLUBILIDAD .................................................. 36 4.1.2 ANALSIS FITOQUIMICOS ..................................................... 36 V BIBLIOGRAFIA .................................................................................. 37 ANEXOS ................................................................................................ 38
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INDICE DE FIGURAS
Fig. N01 Descripcin de la especie Thymus Vulgaris l. tomillo38 Fig.N0 2 fotografa del Thymus Vulgaris l. tomillo.38 Fig. N0 3 Recoleccin y seleccin de la muestra problema...39 Fig. N04 Preparacin del extracto hidroalcohlico..40 Fig. N05 Prueba de Solubilidad.41 Fig. N06 Anlisis Fitoqumico..44
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I INTRODUCION
Las plantas son recursos renovables de mltiple uso para el hombre, le proporcionan alimentos para su subsistencia, fibras textiles para vestirse y material para su casas. Adems curan o intoxican segn sus propiedades. En nuestro pas, ciento de plantas son utilizadas en la medicina folclrica o popular, cuya prcticas de ha incrementado en los ltimos aos, las principales razones de su bajo costo comparado con los medicamentos y la idea generalizada de que todo lo que es natural, es bueno. Experiencias cientficas permitieron conocer que el valor medicinal de las plantas se debe a la presencia en su tejido de principios activos- que producen el efecto fisiolgico. Muchos de ellos son complejos y an desconocidos, otros han sido aislados, purificados e incluso sintetizados. Entre los constituyentes se hallan los aceites esenciales. Los aceites esenciales o esencias son mezclas de sustancias orgnicas olorosas qumicamente formadas por terpenos, sesquiterpenos y compuestos aromticos. Pueden localizarse en un determinado rgano vegetal, como flores, hojas, frutas, races o en toda la planta. Los aceites esenciales suelen obtenerse por la preparacin de una solucin hidroalcohlico, o por destilacin, de las partes de la planta que contienen la esencia y el mtodo depender de la condicin del material vegetal. La importancia de la fitoterapia en la actualidad pone en manifiesto la necesidad de investigar sobre propiedades de numerosas plantas que an no han sido determinadas perfectamente en nuestro medio, tal es el 9
caso de Thymus Vulgaris l. tomillo muy usada en la medicina tradicional para el tratamiento de enfermedades y dolencias, ya que presenta una actividad antinflamatoria a niveles musculares, entre muchos beneficios que este dispone, ya que la presencia del carvacrol es uno de sus componentes qumicos responsable de dicha accin.. Por ese motivo es importante el estudio botnico, qumico y microbiolgico de las diferentes especies vegetales tratando de encontrar los principios activos, tanto en forma aislada como en extractos, responsables de la accin farmacolgica.
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1.1 PLANTEAMI NETO DEL PROBLEMA Tendrn las hojas del extracto hidroalcohlico del Thymus Vulgaris l. tomillo los constituyentes fitoqumicos, tradicionalmente usados para hacer su actividad antinflamatoria a nivel tpico en el ser humano? Existir una dosis mnima o mxima tolerable como antinflamatorio tpico? Presentar reacciones adversas frente a la administracin del Thymus Vulgaris l. tomillo?
1.2 OBJETIVOS 1.2.1 OBJETIVOS GENERALES Es analizar y determinar los Fito constituyentes del aceite esencial del Thymus Vulgaris l. tomillo mediante el anlisis fitoqumico utilizando reactivos especficos, aislando, separando los componentes qumicos. 1.2.2 OBJETIVO ESPECFICO: Recoleccin y clasificacin de la especie Thymus Vulgaris l. Clasificacin taxonmica de la especie Thymus Vulgaris l. Identificar cualitativamente los metabolitos de la especie. Determinar la actividad antinflamatoria y la presencia del carvacrol en el aceite esencial de Thymus Vulgaris l. tomillo.
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1.3 HIPOTESIS: Los fitoconstituyentes del extracto hidroalcohlico de genero Thymus Vulgaris l. tomillo, tiene los constituyentes qumicos que posee actividad antinflamatoria de uso tpico.
II GENERALIDADES
2.1 Historia. El origen del tomillo se remonta al Antiguo Egipto, donde era empleado como ungento en embalsamamientos y quemado como purificador del aire durante las epidemias. Los griegos tambin conocieron sus propiedades medicinales para los males del pecho, como antisptico o contra los dolores articulares. El gnero Thymus est ampliamente representado en la Pennsula Ibrica con numerosas especies, muchas de ellas endmicas. Asimismo, la composicin qumica de los aceites esenciales de este gnero ha sido objeto de estudio en numerosas ocasiones, as como otros componentes, especialmente los flavonoides, por su accin teraputica. En castellano tambin recibe los nombres de tomello, tremoncillo o estremoncillo. (1)
A principios del siglo XVIII, Juan de Esteyneffer la usa para curar enfermedades fras de la cabeza y contra el flemn. En este siglo XX, Alfonso Herrera ha comentado el tomillo es usado como condimento. Su aceite esencial y el timol son muy usados en medicina. El primero como excitara difusible y utilizando sus propiedades diaforticas y diurticas; se ha recomendado en el reumatismo articular y en las neuralgias. Se emplea tambin en el periodo catarral y en las afecciones de los bronquios. Luis Cabrera la menciona como anticatarral, antiespasmdico, anti 12
odontlgico, antiparasitario, eupptico y para curar la gastroenteritis. Finalmente la Sociedad Farmacutica de Mxico la refiere como excitante . (2)
En el Per lo encontramos en la sierra central; Caraz, Tarata u Omate. Se desarrolla dese 1 500 a 4 000 m.s.n.m. se desarrolla satisfactoriamente en diferentes tipos de suelo. (3)
2.2 ESTUDIO BOTANI CO
2.2.1 CARACTERISTICAS DE LA FAMILIA LAMINACEA (1) (2)
La familia comprende cerca de 200 gneros, con 3 200 especies distribuidas sobre la superficie de la tierra. En la familia hay hierbas y arbustos, generalmente con tallos caractersticos. Las hojas son simples opuestas o variadas. Las flores pueden ser caractersticas, generalmente irregulares y, por lo comn completas, aunque algunas son imperfectas. El cliz irregular o de dos labios, con coalescencia parcial y por lo general con cinco dientes, cuatro o cinco partes de corola coalescen de manera caracterstica para formar dos labios distintos, de los que se deriva el nombre de la familia. Hay cuatro estambres, de dos tamaos, dos de ellos ms cortos que los otros dos. El ovario superior constituido por cuatro carpelos, tiene cuatro partes, cada una con una semilla. El fruto maduro est formado por cuatro nuececillas simple.
2.2.2 DESCRIPCION BOTANICA DEL GNERO (3)
Este gnero, pertenece a la familia labiatae o lamiaceae, comprende plantas tpicamente mediterrneas, adaptadas a periodos de sequa y pluviosidad alternante. En los periodos ms 13
secos suelen perder las hojas como mecanismo para protegerse de la perdida de agua. Son en su mayora plantas heliofilas y pioneras, que colonizan rpidamente los lugares abiertos y desprovistos de vegetacin, como matorrales quemados, barbechos o cultivos abandonados, presentando por ello un papel fundamental en las primeras fases de desarrollo de los matorrales mediterrneos, llamados frecuentemente tomillares. Esta capacidad de colonizacin se debe en parte al rpido crecimiento de estas plantas, que en algunos casos pueden alcanzar casi el tamao adulto durante su primer ao de vida. En cuanto a su morfologa, el gnero Thymus presenta un sistema radicular con raz principal leosa con bastantes races secundarias. El tallo de estas plantas es ms o menos leoso, variando desde erecto hasta postrado y radicante. Posee numerosas ramas leosas, erectas, compactas, parduscas o blanco aterciopelado. Suelen ser arbustos de unos 30 -40 cm, en algunos casos puede alcanzar 80 cm. Las hojas son opuestas, simples, enteras, generalmente alargadas, y varan en forma de tamao, pilosidad, presencia de cilios en su borde y glndulas esenciales esferoidales en su superficie. Al ser planta que viven expuestas al sol, los tomillos tienen muy frecuentemente todos sus rganos cubiertos de pelos , a veces blanquecinos, para evitar la transpiracin y reflejar la luz intensa. Las flores se suelen agrupar en inflorescencias globosas. Muestran un cliz bilabiado, con cinco dientes. El tamao total de cliz vara entre 3 y 8 mm aproximadamente, y es la estructura ms caracterstica del genero Thymus.
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2.2.3 ESPECIES IMPORTANTES EN EL MUNDO DEL GENERO (THYMUS)
El gnero Thymus se divide en secciones, segn el siguiente esquema:
I. Seccin Mastichina (Miller) Bentham. 1. Th. Mastichina (L) L. 2. Th. albicans Hoffmanns. & link. II. Seccin Micantes velen 3. Th. caespititius Brot.
III. Seccin Piperella willk.
4. Th. Piperella L. IV. Seccin Pseudothymbra Bentham. 5. Th. lotocephalus G. Lopez & R. Morales. 6. Th. Villosus L. 7. Th. Longiflorus Boiss. 8. Th. membranaceus Boiss. 9. Th. moroderi Pau ex Martnez 10. Th. funkii Cosson. 11. Th. antoninae Rouy & coincy.
V. Seccin Thymus. 12. Th. capitellatus Hoffmanns.& link. 13. Th. camphoratus Hoffmanns & link. 14. Th. carnosus Boiss. 15. Th. Vulgaris l. 16. Th. orospedanus Huguet del villar. 17. Th. hymalls lange. 18. Th. zygis loefl. Ex L. 15
2.2.4 DESCRIPCION MORFOLOGICA DEL TOMILLO (Thymus Vulgaris l.) (1) (fig. 2)
La especie Thymus Vulgaris L. (Tomillo) forma una matita de 1 palmo de altura o poco ms, muy poblada. (4)
Es una planta aromtica, vivaz, leosa, muy poli forma de 10 a 40 cm. De altura, tallo recto, muy ramificado ligeramente leoso. Las hojas son opuestas de peciolo corto, ovalado o lineal, y de bordes enrollados; por haz son lampias y estn cubiertas de glndulas, y por el envs son vellosas o tomentosas. Vistas con un cristal de aumento, en la cara superior de las hojas se advierten numerosos hoyuelos, y en muchos ellos brilla una gotita de esencia. En las axilas foliares se desarrollan ramitos de hojas ms pequeos. Las flores son axilares, agrupadas en la extremidad de las ramas, formando una especie de capitulo terminal, a veces con inflorescencia de 3 a 6 flores en espigas; e l cliz tubular- bilabiado, labio superior tridentado, labio inferior con dos divisiones vellosas, atenuado-ascendente; corola rosa o violeta, bilabiada, con el labio superior emarginado y el inferior extendido. A veces las flores tienen la corola diminuta y carecen de estambres. Normalmente son bien visibles, estn adosados al labio superior de la corola. El fruto es un tretraquenio, lampio, de color marrn. Florece a partir de marzo. Esta planta despide un intenso olor a timol; es el tpico olor a tomillo. (4)
2.2.5 CLASIFICACION TAXONOMICA 16
Divisin : Spermatophyta Sub-Divisin : Angiospermae Clase : Dicotyledoneae Sub-clase : Lamiidie Orden : Lamiales Familia : Laminaceae Gnero : Thymus Especie : Thymus Vulgaris L. Nombre vulgar : Tomillo
SINONIMIA Espaol : Tomillo, Tomelo Italiano : Timo vulgare Francs : Thym Cultiv Ingls : Garten Thymo L. Alemn GarteThymmian (1) Fuente tesis composicin qumica del aceite esencial de Thymus Vulgaris l. 17
2.2.6 CLIMA Y SUELO
El hbitat natural del tomillo se encuentra en pases de la cuenca mediterrnea occidental, especialmente sobre los suelos soleados y secos. Predomina en el este, centro y sur de la pennsula Ibrica, as como en Baleare. Sobre suelos calizos, arcillosos y menos frecuente en los silceos. Sus especies perviven bajo temperaturas muy variedad e incluso extremas. Crece en climas templados, templado-clidos y de montaa. Resiste bien las heladas y sequias, pero no el encharcamiento ni el exceso de humedad ambiente. Aunque se adapta bien a los suelos ricos en aluvin y calcreos, se adapta a los arcillosos, ligeros y silceos. Prefiere la exposicin a medioda. Normalmente, se dispone en forma de matorral bajo zonas de sol directo que soportan gracias a la impregnacin oleosa de sus hojas.
2.2.7 PROPAGACION
Los mtodos principales de multiplicacin del tomillo son: por semillas o vegetativamente, por divisin de pies o por esquejes. Por semillas: el peso medio de 1.000 semillas es de 0.265g y su poder germinativo es del 90% en 16 das en oscuridad y a temperatura de 20 c. Por divisin de pies: Las matas de mejor porte se dividen de noviembre a marzo y se entierran hasta la parte foliada (entre 10 y 15 cm). Este mtodo permite una explotacin ms rpida, pero posee el inconveniente de que se obtiene un menor nmero de plantas, de 20 a 30 por cada pie madre dividido. Por esquejes: El tomillo ha de estar en periodo de actividad vegetativa. Con cada pie se puede obtener algunos centenares 18
de esquejes. El enraizamiento se produce a los mese y los esquejes se ponen preferiblemente a principios de primavera, o bien en otoo. El porcentaje de agarres es del 85% aproximadamente, que se reduce al 30 o 40% cuando se lleva a cabo en invierno (durante el reposo vegetativo). La siembra en vivero: Es un mtodo rpido, pero si una previa seleccin clonal, se puede originar individuos muy diferentes. El semillado se realiza desde abril a mayo o incluso algo ms tarde. La semilla es depositada en el suelo y es cubierta con una ligera capa de turba o tierra, y se aplican riegos diarios. A las tres semanas se consigue una nacencia buena. Cuando las plantas alcanzan una altura de 6 a 8 cm se realiza un repicado, que debe hacerse un periodo de reposo vegetativo. Son necesarios 2g de semillas para sembrar 10m2 de vivero.
2.2.8 CULTIVO Y RECOLECCIN (5)
PLANTACION Puede realizarse en fila o eras. En el primer caso, las filas se espacian entre 60 y 80 cm y los pies de cada fila entre 25 y 30 cm. Se alcanza una densidad de 40.000 a 50.000 pies/ha. El segundo, la distancia entre eras ser de 30 a 40 cm con el fin de permitir el paso de las ruedas de tractores y segadoras y una anchura de 0.80 a 1.20 m, o incluso ms dependiendo de la maquinaria. Por tanto, el cultivo en eras est indicado para el caso de explotaciones mecanizadas. Los pies sobre las eras se colocaran a unos 25 cm Entre si y preferiblemente al tresbolillo. La densidad de cultivo en eras puede llegar a los 130.000 pie/ha.
FERTILIZACION El suelo ha de estar bien provisto de materia orgnica, aportada en el momento de la labor, como estircol bien pasado, a razn 19
de 40 50 tm/ha. Los fertilizantes de fondo, cido fosfrico y potasio se aportan a la vez que aquel o bien en el momento de la preparacin superficial del suelo para la plantacin. El nitrgeno se reparte ms tarde, en cobertera, tras el arraigue de las plantas. En cualquier caso, se aporta anualmente. Se aportaran 75-80 unidades de nitrgeno, 50-60 unidades de cido fosfrico y 100-120 unidades de potasio. Se recomienda el aporte adicional de magnesio y calcio, como abono de fondo, en los suelos deficientes, y tambin todos los aos, en cobertera, favorece mucho la vegetacin.
RECOLECIN En funcin de la regin, se puede llevar a cabo una, o incluso dos cortas mecnicas. Se puede elegir dos pocas distintas, segn el destino de la planta. Si es la obtencin de aceites esenciales se llevara a cabo antes de la floracin, de mayo a noviembre.
2.3 ESTUDIO QUI MICO
2.3.1 COMPOSICIN QUIMICA DE LA ESPECIE
El aceite esencial de tomillo contiene compuestos tales como timol, carvacrol, borneol, linaol, cimeno, pineno, dipenteno y acetato de bornila), un principio amargo, tanino y materias resinosas y ppticas. (6) Aceite esencial (0,8- 2,5 %): Presenta fundamentalmente timol (40%), p- cimeno (15 50%), alcanfor (11 16%), carvacrol (2.5 14.6 %), linalol (4%), 1,8- cineol (3%), - terpineno (1-5%), borneol, acetato de bornilo, acetato de linalino, geraniol, y - pineno, limoneno. TIMOLOL 20
El rendimiento porcentual de aceite esencial del tomillo vara al mtodo utilizado para su extraccin ya sea por destilacin con agua, destilacin con vapor de agua o la combinacin de ambas. Flavonoides: Principalmente hetersido del luteol y apigenol, y en menor medida flavonas metoxilidas: cosmosina, timonina, isotiminina, timusina, naringenina. Tambin se ha sealado la presencia de flavanonas, flavonoles y hetersidos de luteolina. Otros: taninos (7-10%), serpilina (principio amargo), saponinas cidas y neutras, cido labitico, oleanlico y urslico (1,5%), cidos fenilcarboxlicos (clorognico y cafeico), cido rosmarnico (1%), cido litosprmico, resinas. (7)
2.3.2 PROPIEDADES MEDICINALES DEL TOMILO
Actividad antiespasmdica y expectorante El tomillo presenta actividad espasmo ltica en las vas respiratorias y ejerce un efecto relajante del msculo liso bronquial que justifica su uso como antitusivo. La accin antiespasmdica se debe al timol y al carvacrol del aceite esencial, que se cree tienen la capacidad de inhibir la 21
disponibilidad del calcio, con lo que podran bloquear la conduccin nerviosa. Por otro lado, se ha comprobado que la accin de los flavonoides derivados del luteolol potencia la accin espasmoltica de los fenoles, actuando sobre todo en la trquea, gracias a una inhibicin de la fosfodiesterasa, seguida de un incremento del nivel intracelular del AMPc. De hecho, estos flavonoides seran los principales causantes de la actividad de los extractos fluidos de tomillo, cuyo contenido en timol y carvacrol suele ser muy bajo.
El tomillo presenta adems una actividad expectorante, gracias a que su aceite esencial aumenta la actividad de los cilios bronquiales, a la vez que por un efecto irritante aumenta la produccin de secrecin bronquio alveolar. Esto causa una fluidificacin de las secreciones bronquiales y favorece su eliminacin.
Actividad antisptica La esencia de tomillo tiene un efecto antisptico superior al del fenol y al del agua oxigenada. De hecho, en el siglo XIX y primera mitad del XX, cuando todava no se conocan los antibiticos, el tomillo era considerado como un eficaz desinfectante. Actualmente, est comprobado que sus componentes fenlicos, timol y carvacrol, tienen actividad antibacteriana frente a grmenes Gram positivos y gramnegativos. Este efecto se debe a su accin sobre la membrana bacteriana. Adems, tambin tienen accin anti fngica (eficaz contra Cndida albicans) y antivrica. Al eliminarse por va respiratoria y renal, el tomillo produce efecto antisptico en el rbol respiratorio y en las vas urinarias. Por su actividad antisptica, el tomillo tambin tiene inters como antisptico de la cavidad bucofarngea, as como para el lavado de heridas. 22
La accin antibacteriana del tomillo se ve potenciada por la capacidad que tiene de producir una estimulacin de la leucopoyesis y una elevacin de los valores de trombocitos en la sangre, por lo que tambin se considera que puede ser interesante su uso como potenciador de la accin de otros inmuno estimulantes.
Actividad bquica El tomillo acta como un eficaz y seguro antitusgeno, limpia las vas respiratorias, inhibe el crecimiento bacteriano y ejerce un efecto antiespasmdico sobre stas, debido a la suma de sus acciones expectorante, espasmoltica y antisptica.
Antihelmntico Es especialmente activo frente a Anquilostoma duodenales.
Actividad antiinflamatoria En aplicacin tpica, el aceite esencial es rubefaciente. Adems, especialmente el carvacrol tiene una accin inhibidora de la biosntesis de prostaglandinas. Ello justifica la inclusin de la esencia de tomillo en linimentos y otros preparados para el tratamiento de dolores musculares y osteo articulares. El cido rosmarnico, presente en el frmaco, tambin tiene accin antiinflamatoria, debido a su capacidad de inhibir la activacin del complemento.
Actividad eupptica Popularmente, al igual que otros frmacos con aceite esencial, el tomillo se emplea como aperitivo, digestivo y carminativo, ya que abre el apetito, favorece la digestin e impide la formacin de gases.
Actividad antioxidante 23
Tiene accin antirradicales, en la que se consideran implicados el timol y el carvacrol de la esencia, as como los flavonoides y otros polifenoles. Actividad estrognica Tiene un efecto dbilmente estrogenito, ya que compite con el estradiol en los receptores intracelulares. Por esta accin algunos autores sugieren su posible inters en la prevencin de enfermedades producidas por un exceso de xenoestrgenos, como es el caso del cncer de mama.
Anti envejecimiento Estudios realizados en Escocia en 1990 sugieren que el tomillo y su aceite voltil tienen un marcado efecto tnico que apoya el normal funcionamiento del organismo y contrarresta los efectos del envejecimiento.
Otros usos:
Uso culinario El tomillo se utiliza habitualmente como condimento de uso culinario y en la elaboracin de encurtidos. Favorece la conservacin de los alimentos que se alian con l, gracias a las propiedades antimicrobianas y a las antioxidantes, en las que intervendran timol, carvacrol, los flavonoides y los polifenoles del frmaco. En licorera se utiliza para la elaboracin del licor Chartreuse y un aguardiente italiano llamado grapa, entre otros. Tambin sirve para la activacin de la circulacin y el sistema nervioso, es tnico y energizante en el nivel fsico, mental y emocional. Mejora la memoria, la astenia nerviosa, despierta las funciones digestivas y evita los espasmos gstricos e intestinales. Estimula la circulacin capilar, alivia el dolor de cabeza de origen nervioso y jaquecas, coadyuva a la mejora de las afecciones del aparato respiratorio como resfriados, catarros y bronquitis, por favorecer la expectoracin y moderar los 24
espasmos de la tos. Se ha empleado contra la tos ferina, excelente mucoltico en procesos catarrales, buen aliado contra el asma, combate las infecciones respiratorias y digestivas, alivia la sinusitis con inhalaciones. En infusiones y baos de asiento para la cistitis, uretritis, vaginitis y prostatitis, halitosis. Aplicado en gargarismos es muy eficaz en casos de laringitis, faringitis y amigdalitis; calmando el dolor de garganta, la ronquera y la tos irritativa. Es de uso externo y no debe ingerirse. Se usa tambin en infecciones de la boca, aftas, cuidado de los dientes y encas (Uso externo); indicado en el tratamiento de la diarrea infantil y la enuresis, regulador de ciclos menstruales irregulares, acaba con las lombrices intestinales y en forma de lavativa expulsa los oxiuros o lombrices diminutas que sufren los nios. La infusin del Tomillo se puede utilizar como locin sobre heridas infectadas, infecciones de piel causadas por hongos y dermatosis, en tratamiento de fornculos y herpes. En algunas del Mediterrneo se utiliza como repelente de los mosquitos y para tratar picaduras de insectos. Hay constancia de que los antiguos egipcios utilizaron ya el tomillo en la conservacin de sus momias debido a sus propiedades bactericidas. (6)
El aceite esencial es eupptico, estimulante, colertico, debido a sus fenoles, antiespasmdico y expectorante (tos ferina), antisptico, antiviral, anti fngico y antihelmntico. Se usa en farmacia y en veterinaria como antisptico, tnico, vermfugo y cicatrizante. Durante siglos la mayor parte de la produccin de tomillo se destinaba a la obtencin del aceite esencial. Para ello se recoga la planta entre los meses de abril y junio y tras su limpieza se proceda a la destilacin, realizada por el sistema tradicional. La mayor produccin se concentra en Sevilla, Granada y Murcia, donde se emplean modernos mtodos de destilacin, si bien en las provincias de Cuenca y Guadalajara todava existen destileras tradicionales que obtienen este producto. (5) 25
2.3.3 ACEITES ESENCIALES
Los aceites esenciales son compuestos vegetales que debido a su consistencia son muy voltiles y de olor intenso. Se incluyen dentro de este grupo solamente aquellas especies de plantas medicinales que las contienen en concentraciones elevadas, entre 0,1 y 10 %. Los aceites esenciales son mezclas de varias sustancias qumicas biosintetizadas por las plantas, que dan el aroma caracterstico a algunas flores, rboles, semillas y a ciertos extractos de origen animal (almizcle, civeta, mbar gris). Se trata de productos qumicos intensamente aromticos, no grasos (por lo que no se enrancian), voltiles (se evaporan rpidamente) y livianos (poco densos). Son insolubles en agua, levemente solubles en vinagre, y solubles en alcohol, grasas, ceras y aceites vegetales. Se oxidan por exposicin al aire. El trmino aceite esencial se aplica tambin a las sustancias sintticas similares preparadas a partir del alquitrn de hulla, y a las sustancias semisintticas preparadas a partir de los aceites naturales esenciales. Los aceites esenciales son llamados as por ser constituyentes odorferos o aceites de una planta, la palabra esencial deriva del latin quinta essentia, que significa quinto elemento, propuesto por Paracelso, quien pensaba que esta era el elemento efectivo en una preparacin mdica. Son ligeramente voltiles y la mayora de ellos tienen un olor caracterstico, a veces aromtico. Son apenas solubles en el agua, pero se volatilizan fcilmente con vapor de agua. Proporcionan efectos estimulantes en la piel y mucosas, son expectorantes y laxantes, as pues todas las plantas que contienen aceites esenciales suelen utilizarse en las enfermedades de boca y garganta, aunque tambin sirven de 26
tnicos digestivos y estimulantes del apetito, y se emplea tambin como condimento. Concepto moderno de aceites esenciales Los aceites esenciales son los aditivos naturales que ms inters han generado en los ltimos aos en la industria de los alimentos ya que ofrecen una alternativa antimicrobiana y antioxidante que puede garantizar la seguridad e inocuidad de los alimentos en donde se adicionen sin riesgo de contaminar el entorno. Los estudio in vitro e in situ reportados en frutas, hortalizas, productos carnicol y lcticos indican que se requieren muy bajas concentraciones para lograr un efecto bioconservador. Los aceites esenciales son mezclas de lpidos o grasas de bajo peso molecular muy hidrofbicas, con excepcin de los nitrogenados y azufrados; generalmente son menos densas que el agua, y confieren las notas caractersticas de sabor y aroma de la fuente vegetal o cultivo celular de donde provienen. Normalmente se extraen de diversas partes de las plantas (flores, frutas, yemas, hojas, races, bulbos, semillas, cortezas, hierbas y madera), son importantes en la industria cosmtica (perfumes y aromatizantes), de alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacutica. En condiciones ambientales, son lquidos menos densos que el agua, pero ms viscosos que ella, no solidifican a -20C. Son poco solubles en etanol; son muy solubles en cloroformo y en aceites fijos o no voltiles como el aceite de oliva, e insolubles en agua, se pueden clasificar qumicamente en cuatro grupos: los terpenos o hidratos de carbono de frmula general (C5H8)n como el limoneno (I); derivados oxigenados de los terpenos como el citral (II); compuestos aromticos que contienen una estructura benzoica como el eugenol (III) y compuestos que contienen azufre y/o nitrgeno como los isotiocianatos y slo azufre como el dialil disulfuro (IV) 27
En un aceite esencial pueden encontrarse hidrocarburos alicclicos y aromticos, as como sus derivados oxigenados; alcoholes, aldehdos, cetonas, steres, sustancias azufradas y nitrogenadas. Los compuestos ms frecuentes derivan biolgicamente del cido mevalnico; se les catalogan como monoterpenoides y sesquiterpenoides. Las propiedades fisico- qumicas de los aceites esenciales o esencias son muy diversas, puesto que el grupo engloba muchas sustancias muy heterogneas, de las que en la esencia de una planta, prcticamente puede encontrarse slo una o ms de 30 compuestos. Debido a su aspecto oleoso y a la capacidad de evaporarse cuando se exponen al aire a temperatura ambiente, se denominan tambin aceites voltiles. Por lo general, reciben el nombre de la especie de la que proceden, como aceite esencial de tomillo, aceite esencial de salvia, aceite esencial de mua, aceite esencial de organo, aceite esencial de eucalipto, etc. Pese a las diferencias de composicin entre los distintos aceites esenciales se pueden afirmar que presentan una serie de propiedades fsicas comunes: son lquidas a temperatura ambiente, voltiles y arrastrables en corrientes de vapor de agua y prcticamente inmiscibles con la misma. Los aceites esenciales son lipoflicos y solubles en disolvente orgnicos apolares (hexano, ter etlico, etc.). Presentan ndices de refraccin elevados y muchos de ellos son ptimamente activos. Los valores del poder rotatorio pueden ser considerados como elementos de alto valor diagnstico. Se oxidan con facilidad y polimerizan dando productos resinosos. La densidad de los aceites esenciales suele ser inferior a la del agua, constituyendo una excepcin los obtenidos a partir de la "canela", el "clavo de olor" y el "sasafrs", cuya densidad es superior a la unidad. Todos ellos poseen olor caracterstico, raramente son coloreados, salvo algunas excepciones, como el aceite esencial 28
de "manzanilla", de intenso color azul, debido a su contenido en camazuelo.
2.3.4 PROPIEDADES DE LOS ACEITES ESENCIALES (6)
Color: Casi todos los aceites esenciales son incoloros en estado puro y frescos; ante la exposicin al aire adquieren diversos colores. Olor: El olor de los aceites voltiles es muy variable es su propiedad ms caracterstica. El olor de un aceite es muy sensible ante la exposicin al aire. Sabor: Son tan variables como sus olores. Algunos tan dulces, otros tienen sabores suaves, picantes, cidos, custicos o ardientes. Densidad: La densidad de los aceites esenciales vara (entre 0.842 y 1.172 g/ml); casi todos son ms livianos que el agua. Deterioro: La exposicin a la luz y al aire deteriora la calidad y destruyen la fragancia de los aceites esenciales. Se deben conservar en botellas de color mbar bien llenas, tapadas y colocadas en lugar fresco. Solubilidad: Son solubles a solventes orgnicos como alcohol, el ter, el cloroformo, el benceno y muchos otros.
2.3.5 USOS DE LOS ACEITES ESENCIALES (6)
La diversidad de componentes terpenoides dotados de actividad antimicrobiana que forma parte de los aceites esenciales contribuye a que se muestren activos frente a bacterias patgenas variadas e incluso frente a distintos hongos responsables de la aparicin de micosis, presentando en conjunto un amplio espectro de actuacin. Se ha sugerido la posibilidad de que los aceites esenciales inhiban con ms 29
facilidad a los microorganismos Gram positivos que a los Gram negativos. Los aceites esenciales destacan debido a sus propiedades antimicrobianas, que determinan su empleo al exterior en el tratamiento de llagas, ulceraciones, abscesos, infecciones, etc. Entre los aceites esenciales ms utilizados con esta finalidad se encuentran el "tomillo, "laurel", "lavanda", "romero". Especialmente merece mencionar la esencia de clavo de olor, y del organo. Los aceites esenciales tambin son ampliamente usados, en el tratamiento de procesos infecciosos respiratorios y urinarios. Ello se debe a que un nmero elevado de aceites esenciales, cualquiera sea su va de administracin (oral, rectal, cutnea) es eliminado por va pulmonar, as como renal. Los aceites esenciales se utilizan por va interna con fines teraputicos: actan sobre afecciones virales, destruyen los microbios, los hongos, las toxinas infecciosas; y, por va externa para un tratamiento de belleza integral (cara, cuerpo, cabello). Pasan muy fcilmente a travs de la piel, atraviesan las diferentes capas para reunir el flujo sanguneo, en unos veinte minutos aproximadamente, y actan en profundidad en el organismo. Penetran tambin por la va respiratoria: inhalar su perfume proporciona un bienestar profundo. Su potencia es tal que no se utilizan puros sobre la piel; algunos pueden provocar quemaduras. Ricos en vitaminas y en cidos grasos insaturados, hidratan y nutren la piel en profundidad, y permiten la penetracin de los activos benficos de los aceites esenciales en la epidermis y la dermis. Industria alimentaria: Se emplean para condimentar carnes preparadas, embutidos, etc. Tambin son utilizados en la preparacin de alcohlicas y no alcohlicas especialmente refrescos. Desodorantes industriales: Para disminuir el olor desagradable de algunos productos industriales como el caucho, los plsticos 30
y las pinturas. En papelera para impregnar fragancias a cuadernos, tarjetas, papel higinicos, toallas faciales. Industria de cosmticos: En la produccin de cosmticos, colonias, jabones, perfumes y maquillaje. Industria Tabacalera: Demanda mentol para los cigarrillos mentolados. Industria Farmacutica: Se usan en cremas dentales, inhalantes para descongestionar las vas respiratorias. Son utilizados en neutralizantes de sabor desagradable de muchos medicamentos.
2.3.6 TOXICIDAD DEL ACEITE ESENCIAL DEL TOMILLO (7)
La planta de tomillo es en general muy segura de consumir, en especial si se ingieren preparados naturales en base a esta planta y se consume en dosis adecuadas. Sin embargo, los aceites esenciales de tomillo pueden provocar efectos txicos en las personas que lo consumen. No se recomienda el consumo, mediante aplicacin oral, de los aceites esenciales del tomillo, conocido cientficamente como Thymus Vulgaris, a las mujeres que se encuentren embarazadas o en la etapa de lactancia .Esto se debe a que no se conoce en detalle, los efectos que podra provocar el tomillo en estas situaciones. Debido a los componentes de esta planta, se especula, que podra provocar reacciones abortivas. El consumo, en dosis elevadas, de los aceites esenciales de esta planta podra ocasionar algn tipo de intoxicacin, la cual se caracterizara por fuertes dolores estomacales y de cabeza, mareos, diarreas y vmitos.
El tomillo puede provocar reacciones alrgicas en las personas que son hipersensibles a esta planta, por lo tanto no se 31
recomienda su ingesta a aquellas personas que son alrgicas a las plantas de la familia de las labiadas.
III PARTE EXPERIMENTAL
3.1 PARTE DE LA PLANTA A UTI LIZAR
Las hojas del Thymus Vulgaris l.Tomillo
3.2 MATERI ALES Y REACTIVOS
3.2.1 MATERIALES Y EQUIPO
Tubos de ensayo Beaker Mechero Gradilla Bureta Gotero Pro pipeta Fosforo Fiolas Embudo Papel de filtro Rejilla de asbesto Pipeta volumtrica Bagueta Jarra de vidrio 32
Platos de cermica
3.2.2 REACTIVOS
Etanol 70 Etanol 96 Acetona Agua destilada N- butanol N- hexano Metanol Reactivo de Tollens Reactivo de Dragendor Reactivo de Benedict Reactivo de Molisch Reactivo de Selivanoff Reactivo de Bouchardat Reactivo de Tricloruro de hierro Reactivo de Mayer
3.3 METODOLOGI A Y PROCEDIMIENTO
3.3.1 PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL ESTUDIO FITOQUIMICO Y FARMACOLOGICO (fig.3)
3.3.1.1 RECOLECCION
33
El Thymus Vulgaris l.Tomillo que se us para la preparacin de La muestra se compr un total de 1300 g de planta (hojas, tallos)
3.3.1.2 SELECCIN
Para la preparacin del extracto se seleccion solo las hojas, Quedando un total de 900g en total, para la preparacin.
3.3.1.3 PREPARACION DEL EXTRACTO HIDROALCOHOLICO (fig.4) Los 900g de hoja fresca de Thymus Vulgaris l. tomillo se lav Y se sec a temperatura ambiente, para luego reducirlas en Partes muy pequeas y colocarlo en un recipiente al cual se le Adiciono 2 litros de alcohol al 70 0 , cubriendo totalmente las Hojas (materia prima), dejando en maceracin por unos 7 das, para luego filtrarlo y proceder al secado a temperatura ambiente, separndolo en pequeas cantidades en platos de cermica para acelerar su secado.
3.4 ENSAYOS PRELIMI NARES
3.4.1 SOLUBILIDAD (fig.5) Extraccin con disolventes: Consiste en poner en contacto la droga con un disolvente capaz de solubilizar los principios activos. Los principios activos deben pasar de la droga al disolvente de manera que se obtenga un extracto lquido. Posteriormente dicho extracto se puede concentrar eliminando mayor o menor cantidad 34
de disolvente. La extraccin con disolventes es uno de los mtodos que se emplea con ms frecuencia para obtencin de principios activos. En la determinacin de solubilidad del extracto seco de tomillo, se utilizaron disolventes de polaridad creciente como: Etanol 70, etanol 96, metanol, agua destilada, N-butano, N- hexano y acetona.
Muestra problem a Etano l 70 Etano l 96 Agua destilad a Aceton a N- butano l N- hexan o Metano l 1ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml
3.4.2 ANALISIS FITOQUIMICO (8) (fig. 6)
El anlisis fitoqumico tiene como objetivo determinar los metabolitos secundarios presentes en la especie vegetal a estudiar, por ejemplo en plantas medicinales, aplicando para ello una serie de tcnicas de extraccin, de separacin y purificacin y de determinacin estructural. Para esta prueba se tom 0.5 ml de muestra problema y 0.5ml de RV.
Reactivo de Tollens: Es te es usado para la verificar la presencia de aldehdos, que son oxidados a cidos carboxlicos. Presencia del espejo de plata (t 0 ). 35
Reactivo de Dragendor: Detecta la presencia de alcaloides, da una coloracin rojiza. Reactivo de Benedict: Esta reaccin identifica azcares reductores, como la lactosa, la glucosa, la maltosa y celobiosa. Origina un precipitado rojo ladrillo Reactivo de Molisch: Identifica monosacridos (pentosa o hexosa).Forma un compuesto de coloracin purpura-violeta. Reactivo de Selivanoff: Identificacin de cetohexosas, diferencindolas de las aldohexosas. Reaccionan produciendo un leve color rosa. Reactivo de Bouchardat: Identificar la presencia de alcaloides, genera un precipitado de color rojo pardo. Reactivo de Tricloruro de hierro: identifica la presencia de fenoles, la presencia de color purpura, verde o azul, indica la presencia. Reactivo de Mayer: identificacin de alcaloides, reaccionan dando un precipitado blanco o amarillo claro, amorfo o cristalino.
Reactiv. Tricloruro de hierro 0.5 ml Bouchardat
0.5 ml Dragendor
0.5 ml Mayer
0.5 ml Molisch
0.5 ml Benedic
0.5 ml Tollens
0.5 ml Selivanoff
0.5 ml Muestra problema 0.5 ml 0.5 ml 0.5ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
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IV RESULTADOS
4.1 ESTUDIO FITOQUIMICO
4.1.1 PRUEBA DE SOLUBILIDAD
Muestra problem a Etanol 70 0 Etanol 96 0 Agua destilad a Aceton a
N- butan ol N- hexano Metan ol 1ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml Solubl e Solubl e Soluble Solubl e Solubl e Insolu b. Solubl e +++ +++ +++ +++ +++ - +++
Presencia de compuesto s fenlicos Presenc ia de esteroid es Presenc ia de alcaloid es _ Presen cia de Carbo hidrato s Azucares reductore s Azucares reductore s Presencia de Cetosas/aldosas + + + - + + + + 37
V BIBLIOGRAFIA
1. LEDESMA BOA. COMPOSICION QUIMICA DEL ACEITE ESENCIAL DE THYMUS VULGARIS L. "TOMILLO" POR CROMATOGRAFIA DE GASES, ESPECTROMETRO DE MASA GC/MS Y ANALISIS DE SU ACTIVIDAD MICROBIANA. TESIS. LIMA: UNIVESIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS, LIMA; 2000. Report No.: ISSN. 2. TORRES JV. ENCICLOPEDIA PLANTAS MEDICINALES PROPIEDADES Y USOS. SEGUNDA ed. IMPORTACIONES AFAEE, editor. BARCELONA: A.F.A.EDITORES E IMPORTADORES; 2003. 3. ROSA MR. INFLUENCIA DEL RIEGO SOBRE EL RENDIMIENTO EN CULTIVO DE TRE ESPECIES DE GENERO THYMUS. ESTUDIO DE LA VARIABILIDAD INTRAESPECIFICA. TESIS DOCTORAL. MURCIA: UNIVERSIDAD DE MURCIA FACULTAD DE BIOLOGIA, CIENCIAS; 2008. Report No.: ISSN. 4. QUER PF. PLANTAS MEDICINALES: EL DIOSCRIDES RENOVADO. SEPTIMA ed. EDITORIAL LABOR , editor. BARCELONA: LABOR S.A; 1981. 5. INFOAGRO.COM. EL CULTIVO DEL TOMILLO. [Online].; 2012 [cited 2014 MAYO 27. Available from: www.infoagro.com Contacto Publicidad. 6. ROSA BERLL. DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD MICROBIANA EN VITRO DEL ACEITE ESCENCIAL THYMUS VULGARIS L. "TOMILLO". TESIS. TACNA: UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN, CIENCIAS DE LA SALUD; 2012. Report No.: ISSN. 7. CAMPOVERDE PN. EVALUACION DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE LOS ACEITES ESENCIALES DE OREGANO (ORIGANUN VULGARE L.) Y TOMILLO (THYMUS VULGARIS L.) COMO POTENCIALES BIOCONSERVADORES EN CARNE DE POLLO". TESIS. ECUADOR: ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO, RIOBAMBA; 2011. Report No.: ISSN. 8. ugaz Dold. analisis fitoquimicos y metabolitos secundarios. In PERU PUCD, editor. MANUAL DE FITOTERAPIA. LIMA: PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DEL PERU ; 2010. p. 42. 9. MEXICANA BDDLMT. TOMILLO-BIBLIOTECA DIGITAL. [Online].; 2009 [cited 2014 MAYO 27. Available from: www.medicinatradicionalmexicana.unam.mx APMTM. 38
10. OROZCO SPE. DETREMINACION DE LA ACTIVIDAD MICROBIANA IN VITRO DE LOS EXTRACTOS DE ROMERO (ROSMARNUS OFFICIALIS) Y TOMILLO (THYMUS VULGARIS L. TESIS. ECUADOR: ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO , RIOBAMBA; 2010. Report No.: ISSN.
ANEXOS Figura 1
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Figura 2: PLANTA DE ESTUDIO BOTANICO
FIGURA3: RECOLECCIN Y SELECCIN DE LA MUESTRA PROBLEMA Thymus Vulgaris l. tomillo Preparacin de la muestra 1300g de Thymus Vulgaris l. tomillo 40
FIGURA 4: PREPARACION DEL EXTRACTO HIDROALCOHOLICO Lavado de la muestra para la preparacin SELECCIN DE LAS HOJAS PARA LA PREPACION DEL EXTRACTO LIMPIEZA DE LA MUESTRA PROBLEMA 41
FIGURA 5: SOLUBILIDAD Reactivos 900G DE HOJAS + 2L DE ALCOHOL 70 0 ACELERAR LA EVAPORACION PARA LA OBTENCION DEL ACEITE ESENCIAL 42
Paso 1: En siete tubos de ensayo de colocara 1ml de muestra problema (Tomillo).
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Paso2: Se colocara en cada tubo con muestra problema, 0.5ml de etanol 70, etanol 96, agua destilada, acetona, N-butanol, N-hexano y Metanol.
Paso 3: De todos los reactivos solo el Hexano fue insoluble.
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Paso 4: Todos los demas tubos con muestra problema y reactivos fueron solubles.
FIGURA 6 ANALISIS FITOQUIMICO 45
El tamizaje fitoqumico o screening fitoqumico es una de las etapas iniciales de la investigacin fotoqumica, que permite determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes qumicos presentes en una planta y, a partir de all, orientar la extraccin y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los grupos de mayor inters. El tamizaje fitoqumico consiste en la extraccin de la planta con solventes apropiados y la aplicacin de reacciones de coloracin.
PARTE EXPERIMENTAL
Paso 1: Se tomaran ocho tubos de ensayo y se colocara 0.5ml de muestra problema (tomillo) en cada tubo respectivamente.
Paso 2: Se agregara 0.5ml de los reactivos (Tricloruro frrico, Bouchardart, Drangendorff, Mayer, Molisch, Benedict, Tollens, Selivanoff).
Presencia de compuesto s fenlicos Presenc ia de esteroid es Presenc ia de alcaloid es _ Presen cia de Carbo hidrato s Azucares reductore s Azucares reductore s Presencia de cetosas/aldosas + + + - + + + +