METODOS EXPERIMENTALES DE

DETERMINACION DE SOLUBILIDAD DE
APIs
Alexis Aceituno, PhD
Facultad de Farmacia
U de Valparaso

Jefe Subdepto. Biofarmacia y Bioequivalencia
Agencia Nacional de Medicamentos
Instituto de Salud Pblica de Chile
SOLUBILIDAD DE APIs
Cuando se alcanza una concentracin de soluto, producto de la
mxima cantidad que un solvente puede disolver a una
temperatura dada!
En estudios de preformulacin:
-cantidad de nuevas entidades farmacolgicamente activas es
pequea
-solubilidad y pka en gran medida controlan el trabajo de
preformulacin
Solubilidad: facilita inyeccin o intubacin gstrica en animales
pKa: uso informado de pH para manipular solubilidad, escoger
sales (para mejorar la BD o la estabilidad) o las propiedades de
flujo del API

QUE SIGNIFICA BUENA, REGULAR O MALA
SOLUBILIDAD???
A menos que un compuesto tenga una solubilidad acuosa mayor al 1% (10 mg/
mL) en un rango de pH de 1-7 a 37C, podran haber POTENCIALES
PROBLEMAS DE ABSORCION
IDR (velocidad disolucin intrnseca) > 1 mg*cm
-2
*min
-1
si IDR < 0,1 (absorcin
limitada por la velocidad de disolucin)
Solubilidad de 1 mg/mL (lmite inferior) indica la necesidad de formacin de una
sal del frmaco (tableta o cpsula)
Solubilidad de 1 10 mg/mL considerar seriamente la formacin de una sal
Si solubilidad no puede manipularse con pH (molcula neutra: glicsido, esteroide,
alcohol, o pka < menor de 3 para una base o mayor de 10 para un cido)
considerar forma farmacutica con llenado de lquido (solucin de PEG 400, etc)
en cpsula blanda o pasta o semislido (disuelto en aceite o TAG) en cpsula dura


Zonas de pH
solubilidad en
donde es
recomendable o
indispensable la
formacin de
sales para
aumentar S
FACTORES PRINCIPALES QUE AFECTAN LA
SOLUBILIDAD
-Para la mayora de los frmacos los factores ms importantes que afectan la
solubilidad son:
-temperatura
-pH (electrolitos)
-Micronizacin (menos importante)

TEMPERATURA

RT
Hsol
s
!
" #
S solubilidad en moles/L
Entalpa solucin + o - , ! T aumentar y disminuir
respectivamente la solubilidad

INFLUENCIA DEL pH
Ionizacin de solutos en general aumenta la solubilidad
(cidos y bases fuertes, sales orgnicas e inorgnicas)
Sales orgnicas: buena solubilidad, pero dependiente del
pH de la solucin
Solutos orgnicos (parcialmente ionizados) solubilidad
depende de celda cristalina, pH y PM (bases y cidos
dbiles)
Reglas generales para predecir solubilidad
exclusivamente analizando el efecto del pH:

1. Similar disuelve similar (propiedades fisicoqumicas similares)

2. Solubilidad acuosa aumenta por aumento de la capacidad del
soluto para formar puentes de hidrgeno con grupos polares (OH,
NH2, SO3H, COOH)

3. Solubilidad en agua disminuye por incremento en el # de tomos de
C en el soluto (aumento PM sin aumento en polaridad)

4. Alto punto de fusin implica baja solubilidad en agua

5. Ismero cis ms soluble que trans (menor punto de fusin cis)

6. Aumento insaturaciones aumenta solubilidad en solventes polares

7. Solutos anhidros ms solubles que solutos cristalinos
NO ELECTROLITOS POCO
SOLUBLES O ELECTROLITOS
EXTREMADAMENTE DBILES
POCO SOLUBLES

Cosolvencia
Efecto mayor sobre la forma no
disociada (ED)
Poca importancia para FFSO-LI
SOLUBILIDAD Y FORMA
POLIMORFICA
Ordenamiento del cristal determina
energas o entalpa de disolucin
Determina cambios dramticos en la
solubilidad entre una y otra forma
cristalina
CLORDIAZEPOXIDO: base dbil , qu sal es ms conveniente al propsito
de mejorar su solubilidad acuosa???
A veces falta correlacin entre la solubilidad
terica (segn equilibrio inico) con el valor
experimental hallado
Seleccin de la
sal formada en
funcin de las
propiedades
fisicoqumicas
Imagen pION Inc.
METODOLOGAS PARA DETERMINACION DE SOLUBILIDAD DE
APIs

Qu interesa medir? Solubilidad cintica o solubilidad termodinmica
METODO TERMODINAMICO

Mtodo tradicional (shake flask o agitacin en matraces)
Medicin de solubilidad en una solucin saturada del frmaco, cuando se
alcanza equilibrio termodinmico entre fase slida-fase solucin (Fsol-Fsoln)
Caracterizacin de un perfil pH solubilidad exige al menos 5 puntos
experimentales dentro del rango de pH 1 7,5
Requiere de metodologa de cuantificacin adecuada y validada
(generalmente HPLC (system suitability y parmetros de validacin
respectivos)
Imagen pION Inc.
PROCEDIMIENTOS GENERAL

1. Estudio cualitativo previo para conocer cantidad necesaria
para saturar sistema a 5 valores de pH (por ejemplo, 2,4; 3,4;
4,5; 5,4; 6,8)
2. Estimacin de diluciones necesarias para cuantificar API
dentro de rango lineal del mtodo
3. En tubos de ensayo, adicionar cantidad fija de principio activo
4. Adicionar a cada tubo, cantidades crecientes del buffer
respectivo
5. Sonicar tubos por tiempo determinado (5min)
6. Agitar tubos de ensayo por 5 min a 37
7. Repetir pasos 5 y 6 hasta que no se observe presencia de
precipitado
8. Verificar pH final solucin resultante
Determinacin tiempo agitacin para alcanzar estado
equilibrio termodinmico FS-FS a cada pH

Agregar cantidad fija de tampn a matraz
Agregar a matraz 3X API (asegurar saturacin sistema)
Agitar matraz vigorosamente (220 rpm) a 37C
Tomar muestras sobrenadante a tiempos distintos y cuantificar (diluir si es
necesario) hasta alcanzar plateau
Imagen pION Inc.
PARAMETROS DE LA VALIDACION ANALITICA

Procedimiento analtico de la categora 1 (USP)
APIs en frmacos a granel o producto terminado
Linealidad y rango, precisin, exactitud, especificidad , robustez y
estabilidad a los distintos pH (buffers)
Adems, evaluar idoneidad del sistema (system suitability) :
Factor capacidad (k`)

NPT (N)

Factor cola o asimetra

Resolucin
Potencimetro (electrodo de
vidrio)
3 canales para soluciones
cido, base y agua
Posibilidad de uso de
cosolventes para casos
particulares
Chaqueta de agua para
mantener T controlada
2 viales de ensayo con
agitacin magntica
Red de argn (elimina gases
disueltos)
Imagen pION Inc.
METODO POTENCIOMETRICO
(solubilidad cintica)
Caractersticas generales equipo
Gemini profiler
Procedimiento de ensayo semi automtico
Tipos de anlisis: pKa, logP y solubilidad
Tamao de muestra reducido (0.1 5 mg)
Permite realizar 3 titulaciones por muestra
Consumo de reactivos reducido
Incorpora software operativo independiente para anlisis
de muestra y para anlisis de datos
Rango aproximado de trabajo pH 1,8 12,2
Desventaja: Slo anlisis de especies ionizables
Buffer
pH 7
cido
Base
Agua
Unidad
dispensadora
cido
Base
Agua
Muestra
Gua tcnica G-BIOF02,
estudios de solubilidad:
Rango de pH 1,0 6,8
Temperatura ensayo

ESTMAGO
0.1 m
2
DUODENO
0.1 m
2
JEYUNO
60 m
2
LEON
60 m
2
COLON
0.3 m
2
pH (ayuno)
1.7 (1.4 -2.1)
6.5 (6.0 - 7.0)
6.5
8.0
pH (con alimento)
5.0 (0.1 hr)
4.7 (2 hr)
6.5
8.0
6.1 (5.8 - 6.2) 4.5 - 5.5 (1 hr)
Solubilidad y fisiologa del tubo
digestivo; condicionantes de la S
Modelo de difusin-solubilidad: particin
por pH
Especie sin carga Especie cargada
Ms permeable
pH
pKa Ms soluble
Menos permeable
Menos soluble
pKa y pH del medio condicionan el
porcentaje de las fracciones ionizadas y no
ionizadas
!" #$% '" ()#" % *+
,
0
50
100
1 2 3 4 5 6 7 8
pH
%

e
s
p
e
c
i
e
s
!"## % &'
(
) *
+
) ,,*
) *
+
) ,,
-
[ ] HA
]
-
A [ ] H [
a
K
+
=
] [BH
][B] [H
a
K
+
+
=
]
-
[A
[HA]
log pH
a
pK + =
] B [
] [BH
log pH
a
pK
+
+ =
cidos Bases
HA ! H
+
+ A
-
BH
+
! H
+
+ B

Considerando las ecuaciones el pKa
corresponde al pH al cual un 50% de la
especie ensayada se encuentra
ionizada
Bsicamente tres tipos de ensayos:
Calibracin (electrodo, titulante)

determinacin pKa (medio acuoso cosolvente)
determinacin solubilidad intrnseca (medio acuoso
cosolvente)
Ingreso de informacin para ensayo de solubilidad y pKa
Medio de la titulacin (acuoso, MeOH, DMSO)
Masa del API
Especie del API (base, cido o anfolito)
Equilibrios qumicos (estructura del API y # de protones)
Peso molecular
pKa (simulado o experimental)
log P (simulado o experimental)
N de titulaciones (1-3)
Rango de titulacin (pH)
Direccin de la titulacin
Informacin adicional
Ejemplo
COOH
COO
-
COO
-
Na
+
cido Benzoico
Ingreso de las especies:
A (-1), H (+1)

Compound (API): AH
Salida de informacin
Informacin cruda que se obtiene para interpretacin
mediante software pS (archivo .sfs uno por titulacin)

Grfica de pH en funcin del volumen de titulante
Grficas de Bjerrum
Solubilidad
Grfica pH en funcin del titulante
Revisar datos
de la titulacin
- Acceder a
software pS
- Grfica de
pH en funcin
del volumen
de titulante
adicionado
- Ingreso del
modelo (frmula,
PM, equilibrios
entre otros)
Extrado de Ps Software pION Inc.
Grfica N de protones cedidos en funcin del pH
Grficas de Bjerrum
Concentracin de H
+

en funcin del pH
Comparacin del set
de datos con respecto a
una titulacin blanco

Cmo se obtiene la grfica de Bjerrum?
El software realiza una
diferencia de volmenes
g a s t a d o s e n t r e u n a
titulacin muestra y una
blanco

Figura (a) curva titulacin
blanco y compuesto prueba

Figura (b) pH ajustado en
funcin de "V
Extrado de Avdeef A. Absorption and drug development (2003)
A continuacin:

Figura (c) para efectos
grficos se rotan los ejes
"V en funcin del pH
ajustado o corregido p
c
H

Figura (d) finalmente se
grafi can l os protones
cedidos en funcin de p
c
H
y se obtiene el valor de
pKa
Extrado de Avdeef A. Absorption and drug development (2003)
Otra forma de derivar las grficas de Bjerrum
C
H K H nC KOH HCl
n
W
H
] /[ ] [ ] [ ] ([
+ +
+ ! + !
=
Se conocen los volmenes de HCl y KOH adicionados durante la
titulacin.
Los protones disociados aportados por la muestra se obtienen del
modelo ingresado al software.
Concentracin total [H
+
] es conocida e independiente del modelo
ingresado.
Kw constante de ionizacin del agua.
C concentracin de la muestra
Solubilidad
] [ ] [ HA A S + =
!
] [
] [
] [
HA
H
Ka HA
S + =
+
!
!
"
#
$
$
%
&
+ =
+
1
] [
] [
H
Ka
HA S
] [
] ][ [
HA
H A
Ka
+ !
=
E1 E2
Reemplazar E1 en E2
) 1 10 ( 0 + =
+ ! pH pKa
S S
Ejemplo: cido
De la grfica logS vs pH:
pKa = 4,42
logS
0
= -5,58

Considerando pH<<pKa#
) 1 10 ( 0 + =
+ ! pH pKa
S S
Ejemplo: base
De la grfica logS vs pH:
pKa = 6,0
logS
0
= -6,0

Considerando pH>>pKa#
) 1 10 ( 0 + =
!pH pKa
S S
Ejemplo: anfolito
) 1 10 10 (
2 1
0 + + =
! ! pKa pH pH pKa
S S
continuacin
HA s HA ! ) (
] [
] [
] [
) (
0 HA
HA
HA
S
S
= =
E3
E4
continuacin
) 1 10 ( 0 + =
+ ! pH pKa
S S
Lmite
cidos log (S/S
0
)= 4
Bases log (S/S
0
)= 3
Avdeef, A. y cols. pH-metric solubility, Pharm
Res 17, 85-89 (2000)
Uso de cosolventes
Cmo se obtiene experimentalmente S
0
?
Grfica de Bjerrum, considerar el
corrimiento del pKa en funcin de
la concentracin de la especie
analizada.

Resultados experimentales
MP activas muestreadas desde la industria farmacutica nacional y cuya
solubilidad ha sido determinada con el equipo Gemini Profiler:

- Clorfenamina maleato
- Ibuprofeno
- Escitalopram oxalato
- Desloratadina
- Naproxeno sdico
- Ketoprofeno
- Ciclobenzaprina clorhidrato

Comparacin de resultados con bases de datos disponibles, algunas
experimentales, otras slo predictivas.
Resultados comparativos con datos publicados
PRINCIPIO ACTIVO
SOLUBILIDAD
PROMEDIO g/mL
Drug bank
Clorfenamina maleato 56,8
51,9 g/mL
(p)
5,5 mg/mL
(e)

Ibuprofeno 45,9
49,0 g/mL
(e)
Escitalopram oxalato 175,6
5,88 g/mL
(p)

Desloratadina 102,1
3,95 g/mL
(p)

Naproxeno sdico 13,8
15,9 g/mL
(e)
51 g/mL
(p)

Ketoprofeno 57,4
51 g/mL
(e)
21,3 g/mL
(p)

Ciclobenzaprina clorhidrato 241,3
6,89 g/mL
(p)

(e): valor informado como experimental
(p): valor informado como predictivo de software
Resultados determinacin solubilidad comparativo
mtodo tradicional (shake flask) y mtodo
potenciomtrico
ANALITO: IBUPROFENO (ACIDO DEBIL)
A. Mtodo shake flask (tradicional)
B. Mtodo potenciomtrico (Gemini Profiler)
ANALITO: IBUPROFENO (ACIDO DEBIL)
Ventajas comparativas del equipo Gemini
Profiler
Utiliza menor cantidad de muestra y ahorra reactivos.

Cuantificacin analtica del API simultnea con la valoracin.

Incorpora software que mejora la eficiencia en la recoleccin y tratamiento de
datos, y reduce el tiempo para generar el perfil de solubilidad.

Permite calibracin peridica del electrodo y titulantes (normalizacin del
titulante).
Pero#.

No es capaz de distinguir entre el analito de inters y algn interferente
(estabilidad pH dependiente del API)

Costo elevado
Gracias!