HEMOGRAMA

AUTOMATIZADO
BQCO. GONZALO OJ EDA
HEMATOLOGA CLNICA
FaCENA UNNE
2013
AUTOMATIZACIN EN
HEMATOLOGA
Exactitud
Precisin
Rapidez
Standarizacin
Screening
TOMA DE MUESTRA Y
PROCESAMIENTO
Sangre entera(EDTA-K3)
Volumen requerido
Procesamiento dentro de
las 8 h
Conservar refrigerada
Temperatura ambiente
PRINCIPIOS DE MEDICION
Impedancia Elctrica
Espectrometra de Absorcin
Citometra de Flujo
Dispersin ptica
Fluorescencia
Citoqumica: Peroxidasa
EQUIPOS
IMPEDANCIA + ESPECTROMETRA
ABSORCIN : COULTER (RBC-INDICE
HEMATIMTRICOS PLT WBC HB)
IMPEDANCIA + RADIOFRECUENCIA +
ESPECTROMETRA DE ABSORCIN: 3
DIFF
IMPEDANCIA + RADIOFRECUENCIA +
ESPECTROMETRA + DISPERCIN DE
LUZ/FLUORESCENCIA/ OTRA : EQUIPOS
5 DIFF
PRINCIPIO COULTER
Wallace Coulter (1913-1998)
IMPEDANCIA ELECTRNICA Y
RADIOFRECUENCIA
Impedancia electrnica o la resistencia a la
corriente continua (cc) de bajo voltaje fue
desarrollada por Wallace Coulter en la
dcada de 1950 y es la metodologa
utilizada con mayor frecuencia
La radiofrecuencia (RF) o la resistencia a la
corriente electromagntica de alto voltaje a
veces se utiliza junto con la impedancia
electrnica de la CC.
IMPEDANCIA ELECTRNICA
El principio de impedancia en el recuento
de clulas se basa en la deteccin y
medicin de cambios en la resistencia
elctrica producida por las clulas cuando
atraviesan una apertura pequea
Las clulas suspendidas en un diluyente
conductor de la electricidad ,se arrastran a
travs de una apertura (orificio) en un tubo
de vidrio
RECUENTO DE
PLT Y RBCs
Impedancia Volumtrica
N Pulsos :proporcional al N de clulas
Amplitud del pulso :proporcional al tamao
de la clula
El numero de pulsos es proporcional
al numero de clulas contadas
El tamao del pulso de voltaje es
proporcional al tamao de la clula
(volumen)
Lo que permite la discriminacin y el
conteo de clulas de tamao
especifico
INTERPRETACION DE HISTOGRAMAS
SANGUINEOS.
RBC`s
Plaquetas.
CLASIFICACION DE LOS IMPULSOS
ELECTRICOS GENERADOS POR RBC Y
PLT.
Los pulsos se renen y ordenan
(canalizan) segn su amplitud mediante
analizadores de la altura de pulsos
Los datos se trazan en un grafico de
distribucin de frecuencias o histograma
de distribucin de tamao con el numero
relativo en el eje de las y el tamao (
numero del canal equivalente al tamao
especifico) en el eje de las x
El histograma producido representa la
distribucin del volumen de las clulas
contadas
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
Histograma de Eritrocitos
INTERPRETACION DE HISTOGRAMAS
SANGUINEOS.
INTERPRETACION DE HISTOGRAMAS
SANGUINEOS.
Limite flotante
para divisin de
PLQ/RBC
Media
MCV
Ancho de Distribucin
Conteo por impedancia: RBC y PLT
50 100 150 200 250 300 350
MCV
Zona Microcitica.
Zona Macrocitica.
PLQ's
Linfocitos.
50
100 150 200 250 300 350
PLQ's
Ancho de Distribucin
Eritroctica.
Conteo por impedancia: RBC y PLT.
ADE RDW INDICE DE
ANISOCITOSIS
La amplitud de distribucin eritrocitaria (RDW)
se calcula a partir del histograma como el
coeficiente de variacin de la distribucin del
volumen eritrocitario. Con valores de
referencia de 11.5-14 %
El RDW es un ndice de anisocitocis, que en
realidad refleja la relacin entre la desviacin
estndar y el VCM
El VCM es un promedio tomado de los datos
de distribucin eritrocitaria de tamao.
Qu significa RDW?
RDW Ancho de la distribucin de la curva de los eritrocitos
Dos frmulas matemticas usadas para describir la variacin
de tamao de los eritrocitos (Anisocitosis).
RDW-CV
Definicin: Es el coeficiente de
variacin alrededor de la media
(X) correspondiente a la curva
de distribucin del volumen de
los glbulos rojos
VR: 11.5 14 %
RDW-SD
Definicin: Medida directa (en fl) del ancho de la
curva de los glbulos rojos (RBC) Tomada 20%
arriba de la lnea base
El ancho es medido al 20%de la altura relativa. A
esta altura es donde se encuentra la mayor
variacin de tamaos de las clulas
RDW-SD
Tamao de los Eritrocitos en fl
20%
Altura
relativa
Histograma de Eritrocitos
La curva ms ancha
Representa a la poblacin
Con mayor anisocitosis
50
100 150 200 250 300 350
Macrocitosis.
Conteo por impedancia: RBC y PLQ.
50
100 150 200 250 300 350
Macrocitosis.
MCV aprox. de 102 fl
Conteo por impedancia: RBC y PLQ.
50
100 150 200 250 300 350
Microcitosis.
Conteo por impedancia: RBC y PLQ.
50
100 150 200 250 300 350
Microcitosis.
MCV Aprox de 70 fl
Conteo por impedancia: RBC y PLQ.
FACTORES QUE PRODUCEN
INTERFERENCIA
FACTORES PARMETRO
AFECTADO
Crioaglutinina GR ,VCM ,CHCM Aglutinacin de GR
Lipemia ,ictericia
,quilomicrones
Hb HbCM La turbidez afecta la
lectura
espectrofotomtrica
Hemlisis GR , Hto Gr lisados y no
contados
GR resistentes a la
lisis con Hb
anormales
GB , Hb Gr (Hb : S,C,F) no
pueden lisarse y se
cuentan como GB
Microcitosis o
esquistocitos
GR El tamao
eritrocitario < que el
umbral
GR nucleados
,fragmento de
Megacariocitos
GB Se cuentan como GB
Histograma de plaquetas.
2 fl
Plaquetas
Lmite para la
zona de
plaquetas.
Zona para
clculo del
. VPM
Lmite flotante
para divisin de
PLQ/RBC
35 fl
Histograma de plaquetas.
5 10 15 20 25 30 35 2
Histograma normal de plaquetas.
5 10 15 20 25 30 35 2
Histograma normal de plaquetas.
El punto de partida debe ser 2 fl en la
base del histograma.
INTERPRETACION DE HISTOGRAMAS
SANGUINEOS.
5
10 15 20 25 30 35 2
Histograma normal de plaquetas.
El VPM es la media
aritmtica de la poblacin de
plaquetas.
No ser calculado en
presencia de alertas de
plaquetas.
INTERPRETACION DE HISTOGRAMAS
SANGUINEOS.
5
10 15 20 25 30 35 2
Histograma normal de plaquetas.
El histograma debe hacerse
asinttico con la horizontal hacia
los 25-30 fl
INTERPRETACION DE HISTOGRAMAS
SANGUINEOS.
ALARMAS PARA RBC Y PLT
RBC/MORPH
LRI
URI
LURI
PSEUDOAGLUTINACIN CON
EDTA
IMPORTANCIA DEL FROTIS DE
PUNTA DE AGUJ A
RECUENTO VS ESTIMACIN
RECUENTO POR
IMPEDANCIA DE
WBC
RECUENTO DE LEUCOCITOS
El conteo se realiza en un transductor de Von Behrens.
Los impulsos elctricos detectados son clasificados y
almacenados en un histograma con canales de 1 fl de ancho
SOBREESTIMACIN POR
PRESENCIA DE
ERITROBLASTOS
Ej: WBC 30.000 /mm3
200 eritroblastos por cada 100 GB
300 (WBC+EB)-----------100
30.000 ---------------------x=10.000
Gb corregidos=Gb contador (Gb contador x 100)
(EB+100)
50
100 150 200 250 300 350
Histograma Normal de Leucocitos por
Impedancia.
Conteo por impedancia: WBC.
50
100 150 200 250 300 350
Histograma Normal de Leucocitos por
Impedancia.
LIM MID
GRAN
Conteo por impedancia: WBC.
50
100 150 200 250 300 350
Histograma Normal de Leucocitos por
Impedancia.
Ubicacin Normal del pico
LIM es entre 50-75 fl
Conteo por impedancia: WBC.
50
100 150 200 250 300 350
Histograma Normal de Leucocitos por
Impedancia.
MID La regin MID debe ser
un valle entre las
regiones LIM y GRAN.
Conteo por impedancia: WBC.
ALARMAS
DOSAJ E DE HEMOGLOBINA
Se utiliza el sobrante de la dilucin con que se
realiz el conteo de WBC.
Mtodo de la Cianmetahemoglobina
Se realiza la lectura en la celda de
hemoglobina a 540 nmcon un blanco para
cada muestra.
El valor de absorbancia obtenido se interpola
en la curva de calibracin almacenada en el
instrumento.
DISPERSIN
PTICA
Una corriente de muestra centrada en forma
hidrodinmica se dirige a travs de un
cuarzo para flujo celular por el que pasa una
fuente de luz centrada (un lser de helio
nen polarizado en sentido vertical). La luz
dispersada se divide en varios ngulos
Se utilizan varias combinaciones de estas
mediciones para diferenciar y cuantificar las
cinco subpoblaciones leucocitaria principales
:neutrfilos ,linfocitos ,monocitos , eosinfilos
y basfilos
Enfoque hidrodinmico
Minimiza la
acumulacin de
protenas
Elimina la circulacin
retrograda
Reduce la
irregularidad de la
altura de pulso
Reduce la perdida
por pasaje
coincidente
Enfoque analtico
Iluminado por medio de
un laser helio nen
Enfocado
hidrodinmicamente a
traves de una celda de
flujo de diseo especial
Medicin de las
carcteristicas de
dispersin ptica de la
luz para las celdas
individuales
Separacin por dispersin polarizada
con mltiples ngulos (M.A.P.S.S).
-La dispersin frontal de luz 0 :se usa para
determinar el TAMAO CELULAR (FORWARD
SCATTER)
-La dispersin ortogonal de 90 : para determinar
la LOBULARIDAD CELULAR. (SIDE SCATTER)
-La dispersin de la luz en ngulo estrecho de
10:se correlaciona con COMPLEJ IDAD
CELULAR (SIDE SCATTER)
-La dispersin de luz despolarizada de 90 (90D)
para evaluar la GRANULARIDAD CELULAR.
El citograma MAPSS
final muestra los eventos
de celdas individuales
los cuales se definen por
medio del uso del color
TECNOLOGIA CVS
La muestra una vez tratada es dirigida a una
celda de flujo (Flowcell) en la cual por el diseo
hidrodinmico, los leucocitos se alinean y pasan
formados uno a uno y en donde se realizan las
siguientes mediciones
Volumen
Mediante impedancia de baja frecuencia se determina el
volumen de la clula
Impedancia (resistencia a la cc de bajo voltaje)
Conductividad
La densidad interna de la clula es proporcional al
tamao del pulso o al cambio de la seal de
Radiofrecuencia
RF(ola resistencia a la corriente magntica de alta
voltaje)
Scatter
La dispersin (scatter) de luz lser indica la estructura y
forma de la clula
Los cambios de voltaje de CC y RF pueden
detectarse en forma simultnea
Pueden graficarse en forma comparativa la impedancia y la conductividad :se forma
Un citogramade distribucin bidimensional ,este trazado de dispersin muestra poblaciones
celulares como cmulos <por anlisis computarizado se determinan los recuentos celulares
DF1: Volumen vs. Scatter
El trazado de dispersin de la funcin de discriminacin
DF1 del volumen vs dispersin de la luz muestra. una
separacin clara de Nt ,L y, Mo, Eo
Sysmex XS-1000i
Descripcin del Cell Dyn 3200
Tecnologa ptica :PLT,WBC;RBC
Tecnologa diferencial MAPSS
Reticulocitos
OTRAS TECNOLOGAS
Tecnologa para Hemoglobina
Reactivo libre de cianuro
Grupo hidrofbico del SLS que se une a la molcula de la globina
Ocurre un cambio de configuracin
Oxidacin de Fe
2+
--> Fe
3+
Grupos Hidroflicos de SLS se unen a Fe -->SLS-Hb
Fe
2+
Fe
3+ Fe
3+
SLS
Sysmex XS-1000i
Tecnologa
En los Xs el Hto se mide
electrnicamente, basado en
el principio de que el pulso
producido cuando un Gr
pasa a travs de la apertura
es proporcional al volumen
de la clula
El Hto se determina
comparando el volumen total
o acumulado de Gr con el
volumen de sangre completa
en la dilucin
Por Citometra de Flujo se obtiene informacin
acerca de la composicin y madurez celular
Dispersin lateral
Informacin del contenido de RNA y
DNA
Informacin de la estructura
interna
Tamao de la clula
Dispersin frontal
Fluorescencia
Lser
Sysmex XS-1000i
Tecnologa
Cuantificacin de Grnulos Inmaduros
Informacin til sobre el diferencial
extendido de leucocitos
IG:
promielocitos
mielocitos
metamielocitos
promielo
mielo
metamielo Blastos bandas segmentos
Maduracin de neutrfilos
IG
Cuantificacin de Grnulos Inmaduros
IG Master
Canal del diferencial
IG % , #
Normal
Dispersin lateral
Deteccin de los RBC resistentes a la
hemlisis
Conteo ptico nucleado NOC
Anlisis ptico de las plaquetas
Por medio del uso de
un enfoque de
dispersin ptica de
la luz con ngulo
dual se logra una
buena separacin de
los GR y las plq
Ademas , la
presencia de los
cmulos de plq se
puede detectar en
forma confiable
Medida de los eritroblastos
Los EB son contados y separados de los WBC
basados en su tamao y cantidad de
fluorescencia
Recuentos de Reticulocitos
Mtodo de Referencia: Azul de Metileno
Variacin entre observadores
Altos coeficientes de variacin
Laboriosos
Mtodos automatizados
Azul de metileno
Fluorescentes
Canal reticulocitos - Fluorescente
Fl alta
Fl baja
Fl muy alta
Tincin:
Polimetino: ARN
Oxazina: ADN
RET
WBC
RBC
RETSEARCH II (Diluyente + Colorante)
Canal de los reticulocitos
Utilidad Clnica - FIR
.Confirmacin de Anemia Aplstica
.Permite la clasificacin de anemias por su
capacidad eritropoytica
.Talasemia vs. deficiencia de Hierro
.Anemia de los procesos crnicos
.Hipoproduccin vs. respuesta eritroide
temprana
.Deteccin de implante correcto luego de
transplante
Contenido de Hb de los reticulocitos
Ret-He
Reticulocitos con contenido de Hb
<28pg Hipocrmicos
Son identificados con colorantes
fluorescentes por la posicin en el
dispersograma de acuerdo con la
fluorescencia y la luz dispersada
frontalmente
Contenido de Hb de los reticulocitos
Ret-He