Mayra Beltrn Pineda Biol.

MSc Microbiologa
http://www.ciberdroide.com/wordpress/wp-content/uploads/cruzamientos.jpg
La evolucin no podra haber ocurrido sin la
recombinacin gentica.

Si no se pudiera intercambiar material entre DNA
homlogos la informacin contenida seria invariable e
inalterable.

http://4.bp.blogspot.com/_UoVfYANq__c/TCTgDpb3K4I/AAAAAAAAAbs/xj3LlNqJkh8/s1600/e
volucion2.jpg


http://tutorbastom.files.wordpress.com/2010/04/imag-celula-procariota-eucariota.png
Proceso fsico por el
cual molculas de
DNA diferentes se
combinan.
Ocurre en clulas
eucariticas y
procariticas.
Por medio de ese
mecanismo pueden
surgir nuevas
combinaciones de
genes.
http://2.bp.blogspot.com/_jT5fXVEwJvo/SXpWsYhkt5I/AAAAAAAAAzM/i
-I18bGCTvg/s400/desierto_1_.jpg
http://1.bp.blogspot.com/_kkCYK1COLsU/SsEn2WE8ysI/AAAAAAAABYM/i
mYQrM1_LJo/s400/deshielo-en-los-polos-ante-de-los-previsto.jpg
Esas combinaciones pueden capacitar al
organismo a llevar a cabo una funcin
nueva y puede dar como resultado la
adaptacin a cambios ambientales.
La recombinacin puede generar grandes
cambios a nivel celular ya que genes, grupos
de genes o hasta cromosomas enteros
pueden ser transferidos entre organismos.





Mantener de
la diversidad
gentica
Reparar
daos
genticos
Transposicin
Integracin
del genoma
viral




Recombinacin sitio
especfica
Transposicin
Recombinacin
homloga o generalizada
Tipo Homologa
de
secuencias
Protena
Rec A
Sitio especfica En sitios
especficos de
los ADN a
recombinar.
No
Transposicin No No
Homloga Si Si
Tipo de recombinacin que fue
descrita por primera vez en
eucariotas.

Se da entre pares especficos de
secuencias de DNA que no son
homlogas totalmente (diferentes
secuencias de bases).

Implica la insercin de elementos
genticos mviles y removibles
como el plsmido.




Esos elementos se integran y
se desprenden del DNA
objetivo mediante unas
secuencias especficas entre los
DNA a recombinar.

Existen sitios cortos de
homologa en dichas
secuencias que se ubican en la
zona de corte y nueva unin.

Esas secuencias son
reconocidas por enzimas
de recombinacin
llamadas recombinasas o
integrasas.

Se requieren
interacciones DNA-
protena altamente
especficas.


http://www.globalcardsalud.com/wp-content/uploads/2010/02/integrasa.gif
Integrasa
Se da cuando un genoma viral se integra con el
genoma de una bacteria. En procesos como el ciclo
ltico en virus.


http://cprcalat.educa.aragon.es/virus/images/virusc.gif
Insercin de una secuencia de DNA en otra sin
depender de la homologa de la secuencia.
Constituye un medio por el que ciertos
elementos pasan de una localizacin
cromosmica a otra.
Los mecanismos implicados en la transposicin
dependen de la ruptura y reunin de cadenas de DNA
y por tanto se relacionan con el proceso de
recombinacin.

La enzima responsable de
la insercin se denomina
Transposasa.

Esta introduce cortes en
el DNA en secuencias al
azar y posteriormente liga
los extremos del DNA
insertado en ese sitio.
Transposn
Descubiertos por Barbara McClintoc (1951)

Encontr elementos genticos mviles en el genoma
del maz: genes saltarines.
Barbara McClintoc
http://www.monografias.com/trabajos62/ciencia-epigenetica-embarazo-obesidad/image006.jpg
http://www.porquebiotecnologia.com.ar/adc/uploads/cuaderno_129/cuaderno-1.jpg
Secuencias grandes de DNA que tienen la capacidad
de moverse por si mismas a otros sitios del genoma
por medio de cortes e integraciones.

Contienen genes de resistencia a antibiticos
http://iescarin.educa.aragon.es/estatica/depart/biogeo/varios/BiologiaCurtis/Seccion%203/17-25.jpg
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ingenieria/2001832/images/recombinacion-homologa.gif
Proceso de recombinacin
que ocurre entre secuencias
homlogas de DNA de
orgenes diferentes.
Las secuencias homlogas
tienen la misma o casi la
misma secuencia por tanto el
apareamiento de las bases
puede ocurrir a lo largo de
una longitud considerable de
las dos molculas de DNA.



Es un proceso importante para todos los organismos pero a su vez es
complejo.
Ocurre al azar en cualquier parte del genoma.
La probabilidad de que ocurra recombinacin entre dos genes es proporcional
a la distancia. Cuando ms alejados estn dos genes es ms probable que exista
recombinacin.
http://3.bp.blogspot.com/_uL1fU_shchw/SPvLs0ie1kI/AAAAAAAAABY/grQK7yH5-o8/s400/bacterias.jpg


Recombinacin
homologa en procariotas
La recombinacin homloga solo ocurre
cuando el DNA donador est dentro de la
clula receptora.Si no se produce
recombinacin el fragmento de DNA se
perder, pues no puede replicarse
independientemente.
A nivel molecular
el proceso ha sido
estudiado en
procariotas y en
virus.
En procariotas el
proceso general
implica la
participacin de
una protena
especfica
denominada Rec
A.
Se han identificado
algunas protenas
homlogas a la
Rec A en Archaeas,
levaduras y
eucariotas
superiores.
Se inicia con una ruptura del DNA gracias a la accin
de una nucleasa en una de las molculas de DNA.
Esta cadena rota debe separarse de la otra por la
accin de protenas helicasas.
Una protena de unin a cadena sencilla se une a la
hebra monocatenara para evitar su reasociacin.
Luego la protena Rec A se une para formar un complejo
que facilita en anillamiento con la secuencia
complementaria de la cadena doble.







Se da un desplazamiento simultneo de la hebra que lo
recibir este proceso se denomina invasin de la banda.

Tras el apareamiento puede ocurrir un intercambio de
secuencias de DNA homlogo lo que conduce a la formacin
de grandes regiones recombinadas en las que cada cadena
proviene de un DNA diferente. Esas cadenas pueden
extenderse por la accin de la RecA

En este proceso tambin
acta la DNA polimerasa
y la ligasa.

Finalmente las cadenas
ligadas se separan en dos
molculas recombinantes
por accin de nucleasas y
DNA ligasas.





Rompimiento del DNA
homlogo, intercambio,
reunin de hebras y
reparacin de las mismas.
La recombinacin puede
ocurrir en cualquier parte
de la hebra.
Se requiere de precisin
en el intercambio porque
no hay prdida o
ganancia de nucletidos,
lo cul previene la
mutacin.

Para poder detectar intercambio
gentico entre dos
microrganismos es necesario
emplear marcadores genticos
cuya transferencia pueda ser
detectada.

Las clulas producto de la
recombinacin deben adquirir
alguna caracterstica que antes
no posean.

http://us.123rf.com/400wm/400/400/kovalvs/kovalvs1112/kovalvs111200003/11417834-lugar-de-trabajo-moderno-laboratorio-
para-la-prueba-de-biologia-molecular.jpg
Ej: la cepa original no puede
crecer en un medio de cultivo
que carezca de un factor de
crecimiento (triptfano) pero
los recombinantes si pueden.

Existen varios tipos de
marcadores seleccionables y
varios medios de cultivos para
identificar a los
recombinantes.

Se da por los procesos de: Transformacin,
conjugacin y transduccin.

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Recoproc/CONJU1.B
MP
Conjugacin
Transformacin
http://www.arrakis.es/~ibrabida/icobactran.jpg
Transduccin
http://www.arrakis.es/~ibrabida/icobactran.jpg

La bacteria toma el material gentico
exgeno del medio en donde se
encuentra para adquirir nuevas
caractersticas.








Griffith(1928): Principio transformante es el DNA.

Streptococcus pneumoniae

La capacidad de invasin lo da la cpsula.

Colonias rugosas(R): mutantes sin cpsula, no infecciosas

Colonias Lisas(S): con cpsula, cepas virulentas.


Si clulas S muertas por calor se inyectan junto con cepas R
vivas hay Infeccin y las bacterias aisladas sern S.



1. Unin del DNA: protena
asociada a la membrana:
autolisina y nucleasas.

2. Incorporacin del DNA:
Primero se fija
reversiblemente, luego se
vuelve irreversible.

3. Integracin del DNA: protena
de unin, en el cromosoma
protena
RecA(recombinacin)

.

ETAPAS
http://www.youtube.com/watch?v=G4bIxmFskmk




Una clula donadora trasmite la informacin
gentica a otra clula, la receptora, por
medio del pili sexual.


Lederberg y Tatum (1946): Hay procesos sexuales en bacterias?

E.coli (mutantes nutricionales)

Medio mnimo: sales inorgnicas, fuente de carbono y energa y
agua







-Met: requiere metionina para crecer.





Prottrofo
Microorganismo que
crece en un medio
mnimo, no tiene
requerimientos
especiales.
Auxtrofo
Microorganismo que ha
desarrollado un
requerimiento
nutricional por
mutacin.





Las cepas de tipo A y B no pueden crecer en un medio
mnimo sin suplementos, puesto que A y B llevan
mutaciones que provocan incapacidad de sintetizar los
constituyentes necesarios para el crecimiento celular.


Sin embargo si se mezclan las cepas A y B durante unas
horas y luego se siembran en una placa, aparecen unas
pocas colonias.


Estas colonias derivan de una sola clula en la cual ha
habido intercambio de material gentico, por tanto son
capaces de sintetizar todos los constituyentes para el
metabolismo.




Davis(1950)
NO hay recombinacin Se requiere el contacto fsico.
Se requiere un contacto fsico entre bacterias.

Se construyo un tubo en forma de U, los brazos
del tubo estaban separados por un filtro con
poros que no permitan el paso de bacterias, pero
si del medio lquido y de sustancias diluidas en el.

En cada brazo coloco cepas diferentes cada una
con una mutacin. Despus de incubarla estudi
si haban clulas que podan crecer en medio
mnimo y no encontr ninguna, entonces
concluyo que se requera el contacto fsico para
que aparecieran cepas recombinantes.


http://www.youtube.com/watch?v=O-EdX4MaMFE


El material gentico pasa de una
bacteria a otra por medio de un
bacterifago que acta como
vector.


Son virus que infectan a las bacterias.

Son elementos genticos de DNA o RNA, controlan su
propia replicacin y transferencia de clula a clula.


Cpside: Protica compuesta
por subunidades denominadas
capsmeros.


Core: Acido nucleico (DNA,
RNA)


Cola: permite la unin del
fago con la superficie de la
clula y la inyeccin del DNA

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioBacteriofagos_archivos/image001.gif


Norton Zinder(1946). Recombinacin
en Salmonella Typhimurium.

Hicieron el experimento del tubo en
U, pero variaron el tamao de poro y
encontraron recombinantes,
encontraron que el agente tena el
tamao de un virus, posteriores
experimentos demostraron que el
agente era el fago P22 que infecta a
Salmonella sp.

Durante el ciclo ltico algunas
partculas vricas incorporan genes
bacterianos que mas tarde se
transfieren a otro hospedador.





Si hay
recombinacin
Virus??









El proceso no se ve afectado por la
DNAsa : no es transformacin.
Este agente puede purificarse como se
hace con partculas vricas.
El proceso puede detenerse si al medio de
cultivo se agregan sustancias que puedan
absorber el virus como clulas o anticuerpos.
ETAPAS
1. Fijacin del bacterifago a la
bacteria, inyeccin del DNA.

2. Respuesta ltica

3. Transduccin del fragmento del
DNA del fago recombinado a
otra bacteria.

4. Integracin del DNA exgeno en
el genoma de la bacteria
receptora.
Transduccin
generalizada
Cualquier
porcin del
genoma
bacteriano pasa a
formar parte del
genoma vrico.
Transduccin
especializada
Una regin
especfica del
genoma de la
bacteria se
integra al
genoma del virus.
http://www.youtube.com/watch?v=9hzUjx_oD8E
http://www.araucaria2000.cl/celula/eucariotica.jpg









Se presenta en la meiosis, despus de la
sntesis de DNA. Aunque se puede
presentar en mitosis como respuesta a
daos masivos del DNA.
Se conoce como entrecruzamiento
(crossing over)
La frecuencia de recombinacin no es
constante en todo el genoma.
http://www.down21.org/revista/2004/imagenes/image5octubre.gif
La recombinacin de los cromosomas ocurre para cada uno de los
23 pares de cromosomas humanos. Cada zigoto contiene una
combinacin de genes arreglados nica.
Cuando los cromosomas recombinados se empiezan a separan se
pueden observar que permanecen unidos en sitios especficos
denominados quiasmas
Cuando los cromosomas recombinados se separan totalmente,
cada uno ha recogido material gentico del otro.
El proceso inicia con la sinapsis o apareamiento de los de los
cromosomas homlogos.
La recombinacin implica un intercambio fsico de sus partes
representado por una ruptura y unin
Quiasmas
http://biocel.galeon.com/imagenes/diacinesis.jpg
http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/alumno/2bachillerato/La_celula/ima
genes/cromosoma_letras.jpg
No existe mucha informacin
acerca de las bases moleculares
del proceso en eucariotas.



Cada cromosoma
esta formado por
dos cromtidas
hermanas
Cada cromtida hermana
contiene una cadena de
doble de DNA.
Los cromosomas
homlogos se acercan
entre si y empiezan a
aparearse para formar
cromosomas
bivalentes.
Cada cromosoma
bivalente tiene cuatro
cadenas de DNA doble. En la recombinacin
interactan la cadena
doble de una
cromtida hermana
con la cadena de
DNA doble de otra
cromtida no
hermana.
Cromosomas homlogos:
tienen secuencias de DNA
idnticas y entre ellos se
produce la recombinacin.

http://1.bp.blogspot.com/_RRDaUhm-aag/SxcLRSsa31I/AAAAAAAAABI/HG-pD20Up44/s320/quiasma.jpg

El proceso inicia con la ruptura de los
puntos correspondientes de las cadenas
de DNA apareadas (nucleasa).

La ruptura permite crear extremos
libres que se desplazan y se unen con
la cadena complementaria de la otra
cadena doble.











Articulacin recombinante
Sitio donde una cadena
de DNA individual se
cruza con una de cadena
doble y tiene la
capacidad de desplazarse
por la cadena doble, esa
movilidad de denomina
migracin de rama.
Molcula articulada
Las dos molculas dobles
conectadas.
Tambin se denomina
intermediario de
Holliday.
Cuando ya se ha producido en
entrecruzamiento, este se desplaza a lo largo
de la cadena en cualquier direccin.

La molcula articulada debe resolverse en dos
molculas dobles separadas. Esa separacin
requiere dos hendiduras ms.

Dependiendo de donde se haga la segunda
hendidura el resultado de la reaccin
cambiar.









Si la ruptura se hace en el par de
cadenas que ya la tenan, las otras dos
cadenas permanecen intactas, y se
liberan las dos cadenas dobles
originales, pero cada una tendr un
regin recombinada.

Si la ruptura se hace en el par de
cadenas que inicialmente no las tenan,
las cuatro cadenas habrn sufrido
ruptura y recombinacin. Entonces se
liberan dos cadenas dobles
recombinadas totalmente.



http://img.zmensajes.com/gracias/99.gif
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