GUAS DE LABORATORIO

QUMICA AMBIENTAL

ESCUELA AMBIENTAL
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
Elaborado por:
Daro Naranjo Fernndez
Esmeralda Vsquez Bahamn
Fecha de elaboracin:
Enero de 2013
Edicin:
04

1
SEGUNDA PRCTICA: BIODEGRADABILIDAD INMEDIATA

MTODO: RESPIROMTRICO

1. OBJETIVOS

Determinar el porcentaje de biodegradabilidad inmediata y de degradacin de un compuesto
orgnico o de una mezcla de compuestos orgnicos en una muestra acuosa.
Calcular el orden de reaccin y la constante de velocidad de biodegradacin de un
compuesto orgnico o de una mezcla de compuestos orgnicos en una muestra acuosa.

2. GENERALIDADES

La biodegradabilidad puede definirse como la capacidad intrnseca de una sustancia a ser
transformada en una estructura qumica ms simple por va microbiana; en otras palabras, es la
destruccin de un compuesto qumico por medio de la accin biolgica de organismos vivos.
Este parmetro, medido en un periodo de 28 das, constituye una propiedad anhelada de los
productos que son liberados en gran cantidad al medio natural, tales como detergentes, tintes,
pesticidas, residuos industriales, entre otros. En el proceso de biodegradacin, los
microorganismos utilizan los compuestos orgnicos como sustrato y los incorporan en sus
procesos metablicos, originando luego compuestos ms simples que los iniciales.

La biodegradacin puede ser primaria cuando en los primeros estadios del proceso se
generan simples alteraciones estructurales de la molcula orgnica, convirtindola en
sustancias intermedias y conduciendo a la desaparicin del compuesto original; o puede ser
secundaria cuando se destruye totalmente al compuesto mediante el metabolismo de los
microorganismos que lo utilizan como fuente de carbono y energa, siendo completamente
transformado en compuestos inorgnicos, proceso que tambin se denomina biodegradacin
ltima o mineralizacin.

Existen diversas formas para determinar la biodegradabilidad primaria y generalmente las
tcnicas analticas utilizadas son especficas para cada compuesto o tipo de compuesto; por
ejemplo, para sustancias surfactantes se puede medir el valor espumante o la tensin
superficial, entre otros. Actualmente las tcnicas colorimtricas son las ms comnmente
usadas para determinar la biodegradabilidad primaria de surfactantes, por ejemplo las
Sustancias Activas al Azul de Metileno SAAM para surfactantes aninicos, Sustancias
Activas al Tiocinato de Cobalto SATC para surfactantes no inicos y Sustancias Activas a la
Disulfina Azul SADA para surfactantes catinicos.

Aunque la determinacin de la biodegradabilidad primaria es fundamental para compuestos de
origen antropognico comunes y abundantes en el medio ambiente, la determinacin de la
biodegradabilidad ltima es necesaria en caso de compuestos de difcil mineralizacin, como
los pesticidas, para determinar la seguridad ambiental de su uso continuo y extendido. Para
determinar la biodegradabilidad ltima de un compuesto se pueden medir parmetros directos
no especficos, como la produccin de dixido de carbono (CO
2
) y la reduccin de la Demanda
Qumica de Oxgeno DQO o el Carbn Orgnico Total COT, y parmetros indirectos que
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2
se relacionan con la mineralizacin de la molcula, como la Demanda Bioqumica de Oxgeno
DBO, mediciones que pueden aplicarse a cualquier sustancia orgnica.

Experimentalmente, para la determinacin de la biodegradabilidad, se deben realizar tres
ensayos sucesivos segn recomienda la Organizacin para la Cooperacin y el Desarrollo
Econmico OCDE (OECD, 1992; Vzquez R. y Beltrn H., 2004). Inicialmente debe
realizarse un ensayo de biodegradabilidad inmediata utilizando como inculo microorganismos
sin aclimatacin al compuesto orgnico a biodegradar, provenientes de aguas servidas
sedimentadas, efluentes de plantas de tratamiento de aguas residuales domsticas o inculos
liofilizados comerciales. Posteriormente, en caso que el resultado del ensayo de
biodegradabilidad inmediata d resultados negativos, debe realizarse un ensayo de
biodegradabilidad intrnseca en el que se utilizan los mismos inculos pero aclimatados al
compuesto orgnico a biodegradar. Finalmente, en caso que el resultado de biodegradabilidad
intrnseca d resultados negativos, deben realizarse ensayos de simulacin de la
biodegradabilidad del compuesto qumico. Cuando se obtienen resultados positivos del ensayo
de biodegradabilidad inmediata, el compuesto orgnico puede clasificarse como fcilmente
biodegradable. Por otro lado, si es necesario realizar el ensayo de biodegradabilidad intrnseca
y se obtienen resultados positivos, el compuesto orgnico puede clasificarse como
intrnsecamente biodegradable. Finalmente, si es necesario realizar ensayos de simulacin y
se obtienen resultados negativos, el compuesto orgnico puede clasificarse como persistente
y puede estar sujeto a restricciones.

3. PRINCIPIO

Los ensayos de biodegradabilidad inmediata y biodegradabilidad intrnseca se realizan por
medio de un bioensayo aerobio que mide el oxgeno requerido por los microorganismos en sus
procesos metablicos al consumir la materia orgnica presente en la muestra, susceptible a ser
biodegradada, durante 28 das; mtodo denominado respiromtrico, en el que el oxgeno
consumido se determina por medicin de la disminucin de la presin manomtrica en una
botella respiromtrica (figura 1). No obstante, este metabolismo genera dixido de carbono
(CO
2
), una interferencia negativa que se elimina mediante la adicin de granallas de hidrxido
de sodio (NaOH).


Figura 1. Botella respiromtrica para ensayos de biodegradabilidad.
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3

En una botella respiromtrica, la materia orgnica biodegradable es oxidada inicialmente por
microorganismos aerobios hetertrofos en compuestos como dixido de carbono (CO
2
) y agua
(H
2
O); si la materia orgnica contiene nitrgeno, azufre o fsforo se formarn iones amonio (NH
4
+
),
iones sulfato (SO
4
2-
) e iones fosfato (PO
4
3-
), como se presenta en la reaccin 1.

+
+ + + + +
3
) ( 4
2
) ( 4 ) ( 4 ) ( 2 ) ( 2 ) ( 2 ) (
_
ac ac ac l ac
ismos Microorgan
ac ac BLE BIODEGRADA
PO SO NH O H CO O Orgnica Mat

Reaccin 1

En caso de formarse iones amonio (NH
4
+
), microorganismos aerobios auttrofos llamados
Nitrosomonas realizan su oxidacin hasta iones nitrito (NO
2
-
) y, posteriormente, microorganismos
aerobios auttrofos llamados Nitrobacter realizan la oxidacin de los iones nitrito hasta iones nitrato
(NO
3
-
), como se muestra en las reacciones 2 y 3.

+ +
+ +
) ( ) ( 2 ) ( 2 ) ( 4
4
ac ac
as Nitrosomon
ac ac
H NO O NH
Reaccin 2

+
) ( 3 ) ( 2 ) ( 2
2 2
ac
r Nitrobacte
ac ac
NO O NO
Reaccin 3

Por un lado, la cantidad de oxgeno requerida por los microorganismos para oxidar la materia
orgnica hasta compuestos minerales se denomina Demanda Bioqumica de Oxgeno Carboncea
DBO
C
, mientras que la cantidad de oxgeno requerida por los microorganismos para oxidar los
iones amonio (NH
4
+
) hasta iones nitrato (NO
3
-
) se denomina Demanda Bioqumica de Oxgeno
Nitrogencea DBO
N
; la suma de ambas representa la Demanda Bioqumica de Oxgeno DBO.
Existen otras mediciones, como la Demanda Bioqumica de Oxgeno al quinto da DBO
5
, que
corresponde al procedimiento estndar de laboratorio, y la Demanda Bioqumica de Oxgeno
ltima DBO
U
que corresponde al consumo de oxgeno a los 28 das, determinacin realizada en
este ensayo de biodegradabilidad.

Para realizar la degradacin de la muestra se deben preparar soluciones a concentraciones
determinadas utilizando agua de dilucin para su preparacin. Esta agua de dilucin contiene
todos los minerales necesarios para el crecimiento microbiano y se encuentra en condiciones
de saturacin de oxgeno (la presencia de oxgeno en la botella respiromtrica debe
garantizarse durante el tiempo del ensayo). Los microorganismos se incorporan mediante
siembra en el agua de dilucin de un inculo apropiado; para el caso del ensayo de
biodegradabilidad inmediata pueden utilizarse aguas servidas sedimentadas, efluentes de
plantas de tratamiento de aguas residuales domsticas o inculos liofilizados comerciales,
mientras que para el caso del ensayo de biodegradabilidad intrnseca pueden utilizarse estos
mismos inculos pero aclimatados al compuesto orgnico a biodegradar.

Ahora, la biodegradabilidad se determina como una razn entre la Demanda Bioqumica de
Oxgeno ltima DBO
U
y otro parmetro denominado Demanda Qumica de Oxgeno Terica
DQOT correspondiente al oxgeno necesario para alcanzar la mineralizacin completa del
compuesto orgnico, tal como presenta la reaccin 4.


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4

+ + + + +
3
) ( 4
2
) ( 4 ) ( 3 ) ( 2 ) ( 2 ) ( 2 ) (
_
ac ac ac l ac ac ac
PO SO NO O H CO O Orgnica Mat

Reaccin 4

No obstante, en aquellas ocasiones en las que se desconoce la frmula qumica del compuesto,
necesaria para determinar la Demanda Qumica de Oxgeno Terica DQOT, o en las que se
posee una muestra de agua residual con una mezcla de compuestos, la biodegradabilidad
puede determinarse como una razn entre la Demanda Bioqumica de Oxgeno ltima DBO
U
y
la Demanda Qumica de Oxgeno DQO experimental de la muestra, una determinacin
indirecta del oxgeno requerido para realizar la oxidacin qumica completa de la materia
orgnica e inorgnica susceptible de oxidacin contenida en la muestra. Cuando la
biodegradabilidad inmediata y la biodegradabilidad intrnseca son determinadas a partir de la
Demanda Qumica de Oxgeno Terica DQOT, los ensayos se consideran positivos cuando
se obtiene un porcentaje de biodegradabilidad del 70%; mientras que, cuando son
determinadas a partir de la Demanda Qumica de Oxgeno DQO experimental, los ensayos
se consideran positivos cuando se obtiene un porcentaje de biodegradabilidad del 60%
(Vzquez R. y Beltrn H., 2004).

La determinacin experimental de la Demanda Qumica de Oxgeno DQO se realiza
utilizando dicromato de potasio (K
2
Cr
2
O
7
) como agente oxidante junto con cido sulfrico
(H
2
SO
4
) para establecer condiciones cidas (hidrlisis cida), sulfato de plata (AgSO
4
) para
catalizar la degradacin, una temperatura de 148C por 2h para aumentar la cintica y sulfato
de mercurio (HgSO
4
) para eliminar la interferencia por cloruros (Cl
-
), ofreciendo as todas las
condiciones para que los compuestos susceptibles de oxidacin efectivamente se oxiden. Para
el proceso redox, el dicromato de potasio (K
2
Cr
2
O
7
) genera iones cromato (CrO
4
2-
) mediante las
reacciones 5 a 7.

+
+
2
) ( 7 2 ) ( ) ( 7 2 2
2
ac ac
K
s
O Cr K O Cr K
ps
Reaccin 5

+
) ( 4 ) ( 2
2
) ( 7 2
2
ac l ac
HCrO O H O Cr
Reaccin 6
+
+
2
) ( 4 ) ( ) ( 4
2
ac ac
K
ac
CrO H HCrO
a
Reaccin 7

Los iones cromato (CrO
4
2-
) son el agente oxidante en la reaccin redox 8, en la que la materia
orgnica e inorgnica susceptible de oxidacin acta como agente reductor. Finalmente, la
reduccin de iones cromato (CrO
4
2-
) a iones cromico (Cr
3+
) genera un cambio de color, pasando
de color amarillo a color verde; as, la determinacin colorimtrica de los iones cromico (Cr
3+
)
puede relacionarse con la concentracin de oxgeno requerida para la oxidacin del agente
reductor (materia orgnica e inorgnica susceptible de oxidacin).

+ +
+ + + + + + + +
+
3
) ( 4
2
) ( 4 ) ( 3 ) ( 2 ) ( 2
3
) (
_
) (
2
) ( 4 ) ( ) (
_ _
ac ac ac l g
VERDE
ac
Q Ag
ac
AMARILLO
ac ac ac
PO SO NO O H CO Cr H CrO Inorgnica Mat Orgnica Mat
Reaccin 7

En el desarrollo de esta prctica deben realizarse dos determinaciones de la Demanda Qumica
de Oxgeno DQO del compuesto orgnico o de la mezcla de compuestos; la primera para
establecer el porcentaje de biodegradabilidad, determinada el da 0, y la segunda para
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establecer el porcentaje de remocin en trminos de Demanda Qumica de Oxgeno DQO,
determinada el da 28.

Por otro lado, una de las variables de mayor inters en los ensayos de biodegradabilidad es el
inculo, pues estos microorganismos son los encargados de la biodegradacin del compuesto
orgnico o de la mezcla de compuestos; por esta razn debe estar en ptimas condiciones al
momento de la prueba. El comportamiento del inculo debe ser controlado por medio de un
compuesto de referencia con un porcentaje de biodegradacin conocido [comnmente acetato
de sodio (NaCH
3
COO) o anilina (C
6
H
7
N), como en esta prctica]; en caso de no observar
biodegradacin del compuesto de referencia, la prueba debe repetirse. Igualmente, para
diferenciar el porcentaje de degradacin logrado por microorganismos (porcentaje de
biodegradabilidad) del porcentaje de degradacin generado por mecanismos abiticos
(fotodegradacin, por ejemplo), en los ensayos de biodegradabilidad debe establecerse un
sistema de referencia con el compuesto orgnico o con la mezcla de compuestos sin presencia
de microorganismos, con el fin de realizar un seguimiento a la degradacin abitica y utilizarla
para obtener el porcentaje de biodegradabilidad. Finalmente, debido a que los microorganismos
realizan un consumo de oxgeno propio a su metabolismo en ausencia de materia orgnica,
denominada respiracin endgena, debe establecerse un blanco como sistema de referencia
con inculo pero en ausencia del compuesto orgnico o de la mezcla de compuestos
evaluados; resultados que sern necesarios para corregir toda la informacin obtenida durante
el seguimiento de la Demanda Bioqumica de Oxgeno DBO.

El equipo respiromtrico utilizado en este ensayo para la determinacin de la biodegradabilidad
inmediata posee seis botellas respiromtricas, Teniendo en cuenta las consideraciones
anteriores, cada botella respiromtrica debe seguir la distribucin presentada en la tabla 1.

Tabla 1. Distribucin en cada botella del equipo respiromtrico.

# BOTELLA Agua destilada
Agua de dilucin
e inculo
Anilina Muestra
1 Respiracin endgena X
2 Compuesto de referencia X X
3 Degradacin abitica X X
4 Degradacin general X X
5 Degradacin general X X
6 Degradacin general X X

Para determinar el volumen a agregar de muestra a cada botella del equipo respiromtrico y
garantizar condiciones aerobias, es necesario estimar la Demanda Bioqumica de Oxgeno
ltima DBO
U
(28 das); estimacin que puede realizarse al multiplicar por un factor que vara
entre 0,60 y 0,80 a la Demanda Qumica de Oxgeno DQO inicial. Con esta estimacin, se
selecciona el volumen de muestra de acuerdo a la tabla 2, en la que tambin aparece el factor
multiplicador necesario para determinar los valores de la Demanda Bioqumica de Oxgeno
DBO da tras da, al multiplicarlo por los dgitos que reporta el equipo respiromtrico.

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Tabla 2. Volumen de muestra y factor multiplicador para el equipo respiromtrico.

Intervalo de medicin
DBO (mgO2/L)
Volumen de la muestra
(mL)
FACTOR
0-40 432 1
40-80 365 2
80-200 250 5
200-400 164 10
400-800 97 20
800-2000 43,5 50
Tomada de WTW, Manometric BOD Measuring Devices: Instruction Manual (2008).

Algunas consideraciones a tener en cuenta durante el desarrollo del ensayo son: las muestras a
evaluar deben estar homogenizadas con el fin de obtener un resultado confiable y
representativo; para tal fin, el equipo de respirometra cuenta con una plataforma en la que se
mantienen las botellas respiromtricas en permanente agitacin por induccin magntica; por
otro lado, la temperatura del sistema debe oscilar en un intervalo entre 20 y 25C, para su
control se utiliza una incubadora; mientras que el pH de la solucin debe estar inicialmente
alrededor del neutro; de ser necesario su ajuste, puede utilizarse una solucin de cido
clorhdrico (HCl) o de hidrxido de sodio (NaOH).

Finalmente, este ensayo puede aplicarse a compuestos con una biodegradabilidad entre 1 y
100%, pero deben evitarse muestras con una Demanda Qumica de Oxgeno DQO superior a
1000mgO
2
/L debido a que, a estas altas concentraciones de materia orgnica, la respiracin
celular de las bacterias pierde eficiencia ocasionando que no degraden satisfactoriamente la
muestra y provoquen un error en los resultados. As, en caso de contar con muestras con una
Demanda Qumica de Oxgeno DQO superior a 1000mgO
2
/L, deben realizarse diluciones
para obtener valores entre 500 y 1000mgO
2
/L y, sobre este valor, estimar la Demanda
Bioqumica de Oxgeno ltima DBO
U
, el volumen de muestra a agregar a las botellas
respiromtricas y el factor por el cual multiplicar los resultados, segn la tabla 2.

4. MATERIALES

4.1. EQUIPOS Y VIDRIERA

Equipo respiromtrico con seis botellas y
plataforma
Incubadora
pH-metro
Oxmetro
Microscopio
Balanza analtica
Aireador con manguera y difusor
Termorreactor
Espectrofotmetro
Micropipeta
Plancha de agitacin
Agitador magntico
1 Esptula
1 Recipiente de 5L
8 Pipetas graduadas de 10mL
2 Pipeteadores
3 Balones volumtricos de 1000mL
4 Probetas graduadas de 250mL
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7
4 Beakers de 100mL
5 Tubos de digestin con tapa
1 Gradilla

4.2. REACTIVOS

Micronutrientes:
Solucin de sulfato de magnesio (MgSO
4
): Disolver 22,50g de sulfato de magnesio
heptahidratado (MgSO
4
.7H
2
O) en aproximadamente 500mL de agua destilada, en un baln
volumtrico de 1000mL, y enrasar con agua destilada.
Solucin de cloruro de calcio (CaCl
2
): Disolver 27,50g de cloruro de calcio (CaCl
2
) en
aproximadamente 500mL de agua destilada, en un baln volumtrico de 1000mL, y enrasar
con agua destilada.
Solucin de cloruro frrico (FeCl
3
): Disolver 0,25g de cloruro frrico hexahidratado
(FeCl
3
.6H
2
O) en aproximadamente 500mL de agua destilada, en un baln volumtrico de
1000mL, y enrasar con agua destilada.
Solucin de cloruro de amonio (NH
4
Cl): Disolver 1,15g de cloruro de amonio (NH
4
Cl) en
aproximadamente 500mL de agua destilada, ajustar el pH a 7,2 con solucin de hidrxido
de sodio (NaOH) y enrasar con agua destilada en un baln volumtrico de 1000mL.
Macronutrientes:
Solucin buffer de fosfatos: Disolver 8,50g de fosfato dicido de potasio (KH
2
PO
4
), 21,75g
de fosfato cido de potasio (K
2
HPO
4
), 33,40g de fosfato cido de sodio heptahidratado
(Na
2
HPO
4
.7H
2
O) y 1,70g de cloruro de amonio (NH
4
Cl) en aproximadamente 500mL de
agua destilada, en un baln volumtrico de 1000mL, y enrasar con agua destilada. El pH de
la solucin debe ser de 7,2 sin ajuste adicional y debe descartarse si se observa crecimiento
bacteriano.
Inculo (liofilizado): Con una semana de antelacin al ensayo de biodegradabilidad
inmediata, pesar 0,5g de inoculo liofilizado en un beaker de 250mL y adicionarle agua
destilada, 1,0mL/L de micronutrientes y macronutrientes y airearlo hasta que las bacterias
se desencapsulen; realizar seguimiento continuo de mediciones de pH y observaciones al
microscopio para ver el crecimiento de bacterias y caractersticas del flculo y mantener
continuamente aireado hasta su utilizacin.
Agua de dilucin: Adicionar 3L de agua de abastecimiento en un recipiente de 5L y airearla
por 2h aproximadamente, hasta saturarla de oxgeno (medir el porcentaje de saturacin
utilizando un oxmetro), por medio del aireador con difusor de burbuja fina. Verificar que el
pH se encuentra entre 6,8 y 7,5 y adicionar 1,0mL/L sea del inculo preparado, de aguas
servidas sedimentadas o de efluentes de plantas de tratamiento de aguas residuales
domsticas, y 1,0mL/L de micronutrientes y macronutrientes.
Solucin digestota (DQO): Disolver 10,20g de dicromato de potasio (K
2
Cr
2
O
7
) de calidad
para reactivo estndar primario, previamente secado a 103C durante 2h, 167mL de cido
sulfrico (H
2
SO
4
) concentrado y 33,30g de sulfato de mercurio (HgSO
4
) en
aproximadamente 500mL de agua destilada y enrasar con agua destilada en un baln
volumtrico de 1000mL.
cido sulfrico (H
2
SO
4
) contaminado (DQO): Disolver 5,10g de sulfato de plata (Ag
2
SO
4
)

de calidad para reactivos, en cristal o polvo, en aproximadamente 500mL de cido sulfrico
(H
2
SO
4
) concentrado y enrasar con agua destilada en un baln volumtrico de 1000mL.

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5. PROCEDIMIENTO

Inicialmente, determinar la Demanda Qumica de Oxgeno DQO de la anilina (C
6
H
7
N) y de la
muestra del compuesto orgnico o de la mezcla de compuestos que puede encontrarse, por
ejemplo, en un agua residual agropecuaria, industrial o domstica.

Para hacerlo, adicionar 0,2mL de anilina pura, por medio de una micropipeta, en
aproximadamente 500mL de agua de dilucin, en un baln volumtrico de 1000mL, y enrasar
con agua de dilucin; adicionar un agitador magntico a la solucin y llevarlo a la plancha de
agitacin durante 15min para lograr la completa disolucin de la anilina (C
6
H
7
N). Una vez
alcanzada la disolucin, tomar 2,5mL de solucin por medio de una micropipeta y adicionarlos a
un tubo de digestin, adicionar tambin 1,5mL de solucin digestora y 3,5mL de cido sulfrico
contaminado; tapar los tubos y agitar cuidadosamente por inversin, teniendo cuidado de no
quemarse (la reaccin es altamente exotrmica). Colocar el tubo en el termorreactor a 148C
por 2h, previo calentamiento por 20min a esta temperatura; dejar enfriar, calibrar el
espectrofotmetro con un blanco de agua de dilucin y reactivos a una longitud de onda de
600nm, leer la absorbancia y hallar la Demanda Qumica de Oxgeno DQO utilizando la curva
de calibracin elaborada para resultados entre 100 y 1000mgO
2
/L. Reportar el resultado de la
Demanda Qumica de Oxgeno DQO en la tabla de resultados, estimar la Demanda
Bioqumica de Oxgeno DBO esperada al multiplicar el resultado obtenido por un factor de
0,60 y hallar el volumen de la solucin de anilina, preparada en el baln volumtrico de
1000mL, a adicionar a la botella respiromtrica 2 y el factor, ambas variables reportadas en la
tabla 2.

De manera similar, si la muestra es un compuesto puro, debe realizarse un procedimiento como
al desarrollado para la anilina. Adicionar una cantidad de compuesto, medido por medio de una
micropipeta si es lquido o de una balanza analtica si es slido, para obtener una Demanda
Qumica de Oxgeno Terica DQOT entre 500 y 1000mgO
2
/L en aproximadamente 500mL de
agua de dilucin, en un baln volumtrico de 1000mL, y enrasar con agua de dilucin; adicionar
un agitador magntico a la solucin y llevarlo a la plancha de agitacin durante 15min para
lograr la completa disolucin del compuesto. Posteriormente, seguir el mismo procedimiento
para determinar la Demanda Qumica de Oxgeno DQO y reportar el resultado en la tabla de
resultados; estimar la Demanda Bioqumica de Oxgeno DBO esperada al multiplicar el
resultado obtenido por un factor de 0,60 y hallar el volumen de la solucin de muestra,
preparada en el baln volumtrico de 1000mL, a adicionar a las botellas respiromtricas 4, 5 y 6
y el factor, ambas variables reportadas en la tabla 2.

En caso que la muestra sea una mezcla de compuestos (como un agua residual), deben
prepararse varias soluciones para realizar la determinacin de la Demanda Qumica de Oxgeno
DQO y seleccionar aquella con la que se alcance un valor entre 100 y 500mgO
2
/L para
muestras diluidas o entre 500 y 1000mgO
2
/L para soluciones concentradas. El procedimiento
para la preparacin de las soluciones, determinacin de la Demanda Qumica de Oxgeno
DQO, Demanda Bioqumica de Oxgeno DBO esperada, volumen de la solucin de muestra
a adicionar a las botellas respiromtricas y el factor, es el mismo presentado en el prrafo
anterior.

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Para la botella respiromtrica 3, correspondiente a la degradacin abitica, el procedimiento es
el mismo presentado en los dos prrafos anteriores, dependiendo de si se trata de una muestra
de un compuesto puro o de una mezcla de compuestos. No obstante, sea cual sea la muestra,
la solucin debe prepararse utilizando agua destilada en lugar de agua de dilucin pues,
obviamente, esta solucin no puede contener microorganismos ya que se desea obtener el
porcentaje de degradacin abitico. Este mismo motivo justifica que, en el procedimiento para
la determinacin de la Demanda Qumica de Oxgeno DQO, se utilice agua destilada en lugar
de agua de dilucin para la preparacin del blanco de reactivos.

Por otro lado, para la botella respiromtrica 1, correspondiente al blanco del proceso de
seguimiento de la Demanda Bioqumica de Oxgeno DBO y en la que se determina la
respiracin endgena de los microorganismos, debe determinarse la Demanda Qumica de
Oxgeno DQO por un procedimiento similar al presentado en prrafos anteriores a partir del
agua de dilucin preparada previamente. No obstante, similarmente al procedimiento realizado
para la botella respiromtrica 3, debe utilizarse agua destilada para la preparacin del blanco de
reactivos para determinar la Demanda Qumica de Oxgeno DQO.

Una vez determinado el volumen a adicionar a cada una de las botellas respiromtricas, medir
cuidadosamente estos volmenes utilizando una probeta graduada para cada una de las
soluciones, adicionarlos a cada una de las botellas previamente marcadas, colocar el soporte
para la adicin de una granalla de hidrxido de sodio (NaOH) y cerrar suavemente cada botella
respiromtrica hasta sentir que se encuentra hermticamente sellada. Encender los cabezotes
de cada botella y colocarlas en la plataforma del equipo respiromtrico, ubicarlo en la
incubadora durante 28 das a 20C y tomar los resul tados diariamente.

Finalmente, determinar la Demanda Qumica de Oxgeno DQO en el da 28 mediante el
procedimiento especfico para cada botella respiromtrica presentado anteriormente y reportar
los resultados obtenidos en la tabla de resultados.

6. INFORMACIN

El informe de esta prctica de laboratorio debe contener la siguiente informacin:
1. La Demanda Qumica de Oxgeno Terica DQOT, la Demanda Bioqumica de Oxgeno
DBO esperada, la Demanda Qumica de Oxgeno DQO experimental, la Demanda
Bioqumica de Oxgeno ltima DBO
U
y el factor f
s
para la degradacin del compuesto
orgnico evaluado o de la mezcla de compuestos orgnicos evaluados y de la anilina.
2. El porcentaje de biodegradabilidad inmediata y de degradacin alcanzada en los 28 das del
ensayo y el porcentaje de remocin de Demanda Qumica de Oxgeno DQO, en este
mismo periodo, del compuesto orgnico evaluado o de la mezcla de compuestos orgnicos
evaluados y de la anilina.
3. El orden de reaccin y la constante de velocidad obtenidos en el proceso de biodegradacin
del compuesto orgnico evaluado o de la mezcla de compuestos orgnicos evaluados y de la
anilina; resultados obtenidos a partir de la grfica de Demanda Bioqumica de Oxgeno
DBO contra tiempo.


GUAS DE LABORATORIO
QUMICA AMBIENTAL

ESCUELA AMBIENTAL
UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
Elaborado por:
Daro Naranjo Fernndez
Esmeralda Vsquez Bahamn
Fecha de elaboracin:
Enero de 2013
Edicin:
04

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7. BIBLIOGRAFA

American Public Health Association APHA. Standard Methods for the Examination of
Water and Wastewater. American Public Health Association APHA, American Water
Works Association AWWA, American Water Works Association AWWA, Water
Environment Federation WEF, Twentieth Edition. Washington D.C., United States of
America, 1998.
Organization for Economic Cooperation and Development OECD. Guidelines for the
Testing of Chemicals. Organization for Economic Cooperation and Development OECD .
Pars, Francia, 1992.
McCarty, Perry L.; Sawyer, Clair N. y Parkin, Gene F. Qumica para Ingeniera Ambiental.
Cuarta Edicion. McGraw-Hill Interamericana Editores. Bogot, Colombia, 2001.
Vzquez R., G. A. y Beltrn H., R. I. Pruebas Normalizadas para la Evaluacin de la
Biodegradabilidad de Sustancias Qumicas. Una Revisin. En: Interciencia. Vol. 19, No. 10,
p.p. 568-573. 2004.
Wissenschaftlich-Technische Werksttten WTW. Manometric BOD Measuring Devices:
Instruction Manual. Wissenschaftlich-Technische Werksttten WTW. Weilheim in
Oberbayern, Germany, 2008.
GUAS DE LABORATORIO
QUMICA AMBIENTAL

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Elaborado por:
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Esmeralda Vsquez Bahamn
Fecha de elaboracin:
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Tabla de resultados. Informacin de la prctica de laboratorio.

PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE ANILINA
Volumen (mL) Densidad (g/mL) 1,02 Masa (mg)
Concentracin (mg/L) DQO (mgO2/L) DBOESPERADA (mgO2/L)
Volumen de solucin a agregar a la botella respiromtrica 2
PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE LA MUESTRA (COMPUESTO CONOCIDO)
Concentracin (mg/L) DQO (mgO2/L) DBOESPERADA (mgO2/L)
Volumen de solucin a agregar a las botellas respiromtricas 4, 5 y 6
PREPARACIN DE LA SOLUCIN DE LA MUESTRA (MEZCLA DE COMPUESTOS DESCONOCIDOS)
Factor de dilucin DQO (mgO2/L) DBOESPERADA (mgO2/L)
Volumen de solucin a agregar a las botellas respiromtricas 4, 5 y 6

BOTELLA
1
Endgena
2
Anilina
3
Abitica
4
Degradacin
5
Degradacin
6
Degradacin
DQOT (mgO2/L) -
DQOINICIAL (mgO2/L)
DBOESPERADA (mgO2/L)
DBO (mgO2/L)
Volumen (mL)
Factor
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
D

A

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DQOFINAL (mgO2/L)
%Degradacin
(DBO/DQOT)

%Degradacin
(DBO/DQOINICIAL)

%Remocin DQO
(DQOINICIAL DQOFINAL)
/DQOINICIAL