Guia - Practicas C.Q.B PDF

DRA.
SANDY LUZ OVANDO CHACN

PRCTICAS DE LA ASIGNATURA

DE

CINTICA QUMICA Y BIOLGICA

CATEDRTICO

DRA. SANDY LUZ OVANDO CHACN


INDICACIONES PARA REPORTAR PRCTICAS

Las prcticas se realizaran bajo el formato de gua de prctica, donde el
instructor proporciona al alumno:

ACTIVIDADES DEL INSTRUCTOR ACTIVIDAD DEL ALUMNO
El instructor le proporcionara el objetivo
de la prctica.
El alumno realizara una revisin
bibliogrfica y de tcnicas de
laboratorio para disear la prctica bajo
la gua del catedrtico.
En caso de existir un manual de
tcnicas de laboratorio, est ser
proporcionado para que el alumno
seleccione la tcnica ms adecuada
dependiendo de los reactivos existentes.

El instructor revisara antes de la
prctica la informacin recolectada, la
cual se presentara en borrador, en su
cuaderno de laboratorio
Durante su desarrollo experimental el
instructor supervisar el trabajo del
equipo., siendo est parte de la
calificacin prctica.

El alumno presentara como reporte de
la prctica.
El marco terico., (donde se
presentara de forma resumida la
informacin bibliogrfica previamente
recabada y analizada.
El desarrollo experimental ser la
explicacin de la prctica, incluyendo
materiales y reactivos., en caso
necesario explicar con dibujos.
Las observaciones realizadas durante
la prctica se anotaran en una libreta de
laboratorio estrictamente personal, la
cual le servir posteriormente para el
reporte de laboratorio.
El reporte de la prctica debe incluir:
1.- Objetivo
2.- Marco terico,
3.- Desarrollo experimental con
fotografas y redactando el
procedimiento.
4.- Conclusiones personales.
5.- Discusin de resultados,
comparando los resultados
bibliogrficos con las observaciones
prcticas.
6.- La bibliografa se anotar de forma
tradicional.
La prctica se entregara al instructor en
la siguiente sesin una vez que est se
ha terminado.
El alumno entregara la prctica, una
semana despus de terminada., se
enviara al siguiente correo
ovansandy@hotmail.com
La calificacin depender de la unidad
En las evaluaciones tericas, se harn
preguntas bsicas, de tcnicas usadas
para las diferentes determinaciones, la
prctica contar en un porcentaje de la
calificacin de las diferentes unidades.

MATERIAL NECESARIO PARA EL DESARROLLO DE LAS PRCTICAS DE CINTICA
QUMICA Y BIOLGICA
Libreta de laboratorio individual.
Por equipo:

Detergente
Brocha chica para limpiar balanza.
Tres jeringas de 0.5, 1 y 3 mL
Cinta adhesiva Maskintape.
Bandeja grande de plstico cuadrada.
Papel aluminio un rollo.
Un paquete de Kleenpack.
Franela o magitel.
Jabn de tocador.
Jabn corta grasa.
Escobilln para matraces de 250 mL
Escobilln para tubos 13 x100

INSTITUTO TECNOL
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA
PROPUESTA PR
ESTUDIO CINTICO DE
YODURO DE POTASIO CO
Objetivo: Determinar la ecuacin de la velocidad, el
la constante de velocidad de la reaccin de oxidacin del yoduro de
potasio con persulfato de sodio

I.- GENERALIDADES:
La cintica qumica es el estudio de la velocidad y del mecanismo
cuales una especie qumica se transforma en otra. La velocidad es la masa, en moles, de un
producto formado o de un reactante
La palabra mecanismo indica todos los procesos individuales colisinales o elementales en
intervienen molculas, tomos radicales o iones,
produciendo la velocidad total observada. Se entiende tambin que el mecanismo de una reaccin
debe proporcionar una idea estereoqumica detallada de cada
La velocidad de una reaccin qumica es aqulla a la que l
reaccionantes varan con el tiempo,
t el tiempo. El signo menos usado
dependencia de las sustancias que reaccionan viene dada por la ley de accin de masas,
expresa de la siguiente forma: la velocidad de una r
concentracin de los reactivos con cada conc
las molculas de cada especie que parti
Los factores que influyen en la velocidad de reaccin son los siguientes:
Estado fsico de los reactivos: Las
estn en disolucin.
INSTITUTO TECNOLGICO DE TUXTLA GUTIRREZ

DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUMICA
PROPUESTA PRCTICA. No 1

ESTUDIO CINTICO DE LA REACCIN DE OXIDACIN DEL
YODURO DE POTASIO CON PERSULFATO DE SODI

Objetivo: Determinar la ecuacin de la velocidad, el orden de reaccin y
potasio con persulfato de sodio.
La cintica qumica es el estudio de la velocidad y del mecanismo de reaccin por medio de los
umica se transforma en otra. La velocidad es la masa, en moles, de un
producto formado o de un reactante consumido por unidad de tiempo.
La palabra mecanismo indica todos los procesos individuales colisinales o elementales en
s radicales o iones, que se verifican simultnea o consecutivamente,
debe proporcionar una idea estereoqumica detallada de cada etapa a medida que se v
La velocidad de una reaccin qumica es aqulla a la que las concentraciones de las sust
reaccionantes varan con el tiempo, es decir, , donde C es la concentracin d
t el tiempo. El signo menos usado indica que la concentracin disminuye con el tiempo
las sustancias que reaccionan viene dada por la ley de accin de masas,
: la velocidad de una reaccin en cada instante es proporcional a la
reactivos con cada concentracin elevada al coeficiente estequiomtrico de
que participan en la reaccin.
Los factores que influyen en la velocidad de reaccin son los siguientes:
Estado fsico de los reactivos: Las reacciones son ms rpidas si los reactivos son gaseosos o
RREZ
CIN DEL
N PERSULFATO DE SODIO
orden de reaccin y
por medio de los
umica se transforma en otra. La velocidad es la masa, en moles, de un
La palabra mecanismo indica todos los procesos individuales colisinales o elementales en los que
que se verifican simultnea o consecutivamente,
etapa a medida que se verifica.
s concentraciones de las sustancias
donde C es la concentracin del reactivo y
concentracin disminuye con el tiempo. Esta
las sustancias que reaccionan viene dada por la ley de accin de masas, que se
s proporcional a la
l coeficiente estequiomtrico de
reacciones son ms rpidas si los reactivos son gaseosos o
Concentracin de los reactivos: La velocidad de la reaccin se incrementa al aumentar la
concentracin de los reactivos, ya que aumenta el nmero de choques entre ellos.
Temperatura: Un incremento de la temperatura provoca un incremento en la energa cintica de las
molculas, lo que hace que sea mayor el nmero de molculas que alcanza la energa de
activacin.
Catalizadores: Los catalizadores cambian la energa de activacin de una determinada reaccin, y
por lo tanto varan la velocidad de reaccin.
Para definir la ecuacin de velocidad se utiliza el trmino orden de reaccin, que significa la suma
de todos los exponentes al que se encuentran elevadas las concentraciones en la ecuacin de
velocidad. Debe hacerse una distincin entre el nmero de molculas que participan en una
reaccin o el grado molecular, es decir, el nmero de molculas comprendidas en la etapa
conducente a la reaccin, y el orden de sta. Segn la primera, las reacciones son unimoleculares,
bimoleculares, etc., dependiendo de si una, dos o ms molculas estn involucradas en la
velocidad de la etapa determinante. Por otra parte, el trmino orden de reaccin se aplica a la
dependencia de la velocidad observada con las concentraciones de los reactivos.

II.- FUNDAMENTO DE LA REACCIN:

III.- MATERIALES Y REACTIVOS:
Material y Equipo:
Matraces Erlenmeyer de 125 mL.
Pipeta volumtrica de 5 mL.
Matraces aforado de 50 mL.
Vasos de precipitado de 100 mL.
Bureta de 25 mL.
Pinza para bureta.
Soporte universal.
Termmetro.
Pipeta graduada de 1 mL.
Pizeta.
Esptula.
Vidrio de reloj.
Varilla de vidrio.
Balanza analtica.
REACTIVOS:
Persulfato de potasio 0.1 M.
Tiosulfato de sodio 0.01 M.
Yoduro de potasio 0.2 M.
Almidn al 1%.

PRACTICA 1. -
ESTUDI O CINTICO DE LA REACCI N DE OXI DACI N DE YODURO DE POTASI O CON
PERSULFATO DE SODI O

El catedrtico: Expondr las bases tericas para el desarrollo experimental, organizar el trabajo
con los alumnos para el desarrollo de la prctica.
El alumno:
Previo a la prctica entregar un diagrama de flujo donde describa cada uno de los pasos que
realizar en el laboratorio para lograr el objetivo.
I.- ACTIVIDADES PROPUESTAS:
a.- Preparar las siguientes soluciones:
Persulfato de potasio 0.1 M
Tiosulfato de sodio 0.01 M
Yoduro de potasio 0.2 M
Almidn al 1%

II.- METODOLOGA:
a.- Medir con una pipeta volumtrica 50 mL de yoduro de potasio 0.2 M y transferirlo en un matraz
Erlenmeyer de 125 mL
b.- Colocar el mismo volumen, ahora de persulfato de potasio 0.1 M en un matraz Erlenmeyer de
125 mL.
c.- Agregar el yoduro de potasio al persulfato de potasio y mezclar muy bien el sistema. Al
momento de mezclar registrar el tiempo.
d.- Inmediatamente tomar una muestra de 10 mL de la mezcla anterior y transferirlo en un matraz
Erlenmeyer de 125 mL.
e.- Adicionar a la muestra anterior 1 mL de almidn al 1%
f.- Titular rpidamente el yodo liberado con la solucin de tiosulfato de sodio 0.1 M
g.- Tomar 5 muestras ms de 10 mL cada una a intervalos de 10 min, de la mezcla de yoduro de
potasio y persulfato de potasio (inciso d). Medir la temperatura de reaccin y anotarlo. Repetir para
cada muestra tomada, los procedimientos del inciso f y g.

III.- RESULTADOS:

Completar las siguientes tablas con los resultados generados en la prctica.

Relacin de nmero de moles
2KI K
2
S
2
O
8
I
2
2K
2
SO
4

Moles inciales
Moles que reaccionan
Moles producidos
Moles en equilibrio

Tiempo (minutos)
Tiosulfato de sodio
(mL gastados)
Temperatura C

TIEMPO
(min)
Vg (mL) [I
2
] n I
2
[KI] 0.2 M [K
2
S
2
O
8
] 0.1 M
0
10
20
30
40

Determinar el orden de la reaccin grficamente.

IV.- CUESTIONARIO:

1. Qu tipo de funcin se obtiene cuando se hace la grfica del inverso de la concentracin
de persulfato de potasio contra tiempo de reaccin?

2. Qu indica la ordenada al origen de la grfica?

3. Defina con sus propias palabras los trminos de: velocidad y mecanismo de reaccin

4. Explicar en qu consiste la ley de accin de masas.

5. Cul es la importancia de la cintica qumica en el anlisis de un sistema reaccionante y
la aplicacin a la ingeniera qumica?

6. Cmo se comprueba que la reaccin es de segundo orden y que significa esto?

V.- DISCUSIN Y CONCLUSIN DE RESULTADOS:

VI.- BIBLIOGRAFA:

VII.- APENDICE:

VIII.- CLCULOS:



DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUIMICA

ESTUDIO CINTICO DE LA REACCIN DE OXIDACIN DEL
YODURO DE POTASIO CON PERSULFATO DE SODIO EN
PRESENCIA DE UN CATALIZADOR

Objetivo: Determinar la ecuacin de la velocidad, el orden de reaccin y
potasio con persulfato de sodio en presencia del sulfato ferroso como
catalizador.

I.- GENERALIDADES:
La termodinmica aplicada a reacciones qumicas estudia los sistemas cuando ya se encuentra en
estado de equilibrio; sin embargo, cuando se estudia la velocidad de una reaccin y su mecanismo,
generalmente se realizan clculos antes de llegar a este estado, por lo que es necesario apoyarse
en estudios fisicoqumicos, adems de la termodinmica.
La cintica qumica es una rama de la fisicoqumica que estudia la colisin de las molculas
reaccionantes, la velocidad de la reaccin y sus mecanismos considerando la termodinmica de la
reaccin.
Las reacciones son aceleradas o retardadas por un catalizador, el cul es una sustancia que se
adiciona al sistema de reaccin. Un catalizador tiene la particularidad de ser recuperado al final de
la reaccin qumica y no influye en la reaccin global.
El poder de un catalizador es su capacidad para cambiar la velocidad, a la cual una reaccin
determinada por las relaciones de energa libre tiene lugar. Una reaccin es factible de realizar si
su variacin de energa libre es negativa. No obstante an en este caso, la velocidad de
transformacin es a veces tan lenta que parece como si los reactivos fuesen inertes.
En tales casos, el fin del catalizador es acelerar la reaccin y permitir una aproximacin ms rpida
al equilibrio. Por este motivo, desde el punto de vista termodinmico, la catlisis no introduce
ninguna complicacin en las relaciones energticas del sistema. La energa libre, el calor de
reaccin y la entropa de una reaccin siguen siendo iguales tanto en el caso de que aquella
proceda normalmente o sea acelerada por un catalizador.
Un catalizador tampoco modifica la constante de equilibrio. Por lo tanto, si se altera la reaccin
directa debe alterarse tambin la del sentido contrario.
La catlisis puede ser homognea o heterognea segn que el catalizador forme una sola fase con
los reactivos o constituya una fase separada.


Material y Equipo:
Bureta de 25 mL.
Pinza para bureta.
Soporte universal.
Termmetro.
Pizeta.
Esptula.
Vidrio de reloj.
Varilla de vidrio.
Balanza analtica.
REACTIVOS:
Almidn al 1%.
Sulfato ferroso 0.005 M

PRACTICA 2. -
ESTUDI O CINTICO DE LA REACCI N DE OXI DACI N DEL YODURO DE POTASI O CON
PERSULFATO DE SODI O EN PRESENCI A DE UN CATALIZADOR

El alumno:
Persulfato de potasio 0.1 M
Tiosulfato de sodio 0.01 M
Yoduro de potasio 0.2 M
Almidn al 1%

II.- METODOLOGA:
a.- Medir con una pipeta volumtrica 50 mL de yoduro de potasio 0.2 M y transferirlo en un matraz
Erlenmeyer de 125 mL
b.- Colocar el mismo volumen, ahora de persulfato de potasio 0.1 M en un matraz Erlenmeyer de
125 mL.
c.- Agregar el yoduro de potasio al persulfato de potasio y mezclar muy bien el sistema. Al
momento de mezclar registrar el tiempo.
d.- Inmediatamente tomar una muestra de 10 mL de la mezcla anterior y transferirlo en un matraz
Erlenmeyer de 125 mL.
e.- Adicionar a la muestra anterior, 2 mL del catalizador, en este caso el sulfato ferroso 0.005 M.
f.- Adicionar a la muestra anterior 1 mL de almidn al 1%.
g.- Titular rpidamente el yodo liberado con la solucin de tiosulfato de sodio 0.1 M
h.- Tomar 5 muestras ms de 10 mL, cada una a intervalos de 10 min, de la mezcla de yoduro de
potasio y persulfato de potasio (inciso d). Medir la temperatura de reaccin y anotarlo. A cada
muestra tomada de cada intervalo de tiempo aumentar gradualmente (2 mL) el volumen de
catalizador adicionado. Repetir para cada muestra tomada, los procedimientos de los incisos f y g.

III.- RESULTADOS:


Relacin de nmero de moles
2KI K
2
S
2
O
8
I
2
2K
2
SO
4

Moles inciales
Moles que reaccionan
Moles producidos
Moles en equilibrio

Tiempo (minutos)
Tiosulfato de sodio
(mL gastados)
Temperatura C

TIEMPO
(min)
Vg (mL) [I
2
] n I
2
[KI] 0.2 M [K
2
S
2
O
8
] 0.1 M
0
10
20
30
40


IV.- CUESTIONARIO:

1. Qu tipo de funcin se obtiene cuando se hace la grfica del inverso de la concentracin
de persulfato de potasio contra tiempo de reaccin?

2. Qu indica la ordenada al origen de la grfica?

3. Cmo se comprueba que la reaccin es de segundo orden y que significa esto?


VI.- BIBLIOGRAFA:

VII.- APENDICE:

VIII.- CLCULOS:



DEPARTAMENTO DE INGENIERIA BIOQUIMICA

ESTUDIO CINTICO DE LA ENZIMA INVERTASA

Objetivo: Determinar los parmetros cinticos y el efecto de la
temperatura, pH, concentracin de sustrato y de la enzima sobre la
actividad enzimtica de la invertasa.

I.- GENERALIDADES:
Las enzimas son macromolculas de naturaleza proteica con la capacidad de manipular otras
molculas, denominadas sustratos. Un sustrato es capaz de unirse al centro cataltico de la enzima
que lo reconozca y transformarse en un producto a lo largo de una serie de pasos denominados
mecanismo enzimtico. Casi todos los procesos en las clulas necesitan enzimas para que ocurran
en tasas significativas. A las reacciones mediadas por enzimas se les denomina reacciones
enzimticas.
Como todos los catalizadores, las enzimas funcionan disminuyendo la energa de activacin (
)
para una reaccin, as se acelera substancialmente la tasa de la reaccin. Las enzimas no alteran
el balance energtico de las reacciones en que intervienen, ni modifican, por lo tanto, el equilibrio
de la reaccin, pero consiguen acelerar el proceso incluso millones de veces. Una reaccin que se
produce bajo el control de una enzima, o de un catalizador en general, alcanza el equilibrio mucho
ms deprisa que la correspondiente reaccin no catalizada. Al igual que ocurre con otros
catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que ellas catalizan, ni alteran su
equilibrio qumico. Al contrario que las reacciones qumicas, las enzimas se saturan. Esto significa
que a mayor cantidad de sustrato, mayor nmero de centros catalticos estarn ocupados, lo que
incrementar la eficiencia de la reaccin, hasta el momento en que todos los sitios posibles estn
ocupados. En ese momento se habr alcanzado el punto de saturacin de la enzima y, aunque se
aada ms sustrato, no aumentar ms la eficiencia.


Material y Equipo:
Bureta de 25 mL.
Pinza para bureta.
Soporte universal.
Termmetro.
Pizeta.
Esptula.
Vidrio de reloj.
Varilla de vidrio.
Balanza analtica.
REACTIVOS:
Almidn al 1%.


PRACTICA 3. -
ESTUDI O CINTICO DE LA ENZIMA INVERTASA

El alumno:
Solucin de DNS
Solucin de sacarosa 0.3 M
Regulador de acetato 0.05 M pH 4.7
Solucin de glucosa 0.005 M
Solucin de fructosa 0.005 M
Solucin de invertasa (revisar las tablas para la concentracin)

II.- METODOLOGA:
Elaboracin de la curva patrn.
Se prepara la solucin de DNS total a utilizar.

1) Etiquetar ocho tubos y se van preparando de la forma indicada en la siguiente tabla.
Adicin de: T P1 P2 P3 P4 P5 P6 T2
Glucosa 0.005 M +
Fructosa 0.005 M
0 ml 0.1
ml
0.2
ml
0.4
ml
0.8
ml
1.2
ml
1.5
ml
0.0
Sacarosa 0.3 M 1.0
ml
1.0
ml
1.0
ml
1.0
ml
1.0
ml
1.0
ml
1.0
ml
1.0
ml
Regulador de acetatos
0.05 M JH 4.54
0.5
ml
0.5
ml
0.5
ml
0.5
ml
0.5
ml
0.5
ml
0.5
ml
0.5
ml
Agua destilada 1.5
ml
1.4
ml
1.3
ml
1.1
ml
0.7
ml
0.3
ml
0.0
ml
2.5
ml
DNS 2.0
ml
2.0
ml
2.0
ml
2.0
ml
2.0
ml
2.0
ml
2.0
ml
2.0
ml
Desarrollo de color
Ebullicin en bao
mara

5 min
5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min
Enfriar y diluir con
agua
destilada

5 ml
5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml

2) Se realiza la lectura en el espectrofotmetro a 540-550 nm.
3) Se elabora una grfica cuyo eje x pertenecer a la [AR en mg/ml] y el eje y indicar la
lectura en absorbancia.

Adicin de : P1 P2 P3 P4 P5 P6 T2
Sacarosa 0.3 M 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
0.05 M JH 4.7
0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Agua destilada 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
5 mins. De Preincubacin
adiferentes temperaturas
4C 25C 37C 50C 75C 80C 37C
Invertasa [6.336 UAE/ml] 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 2ml de DNS
+0.5 ml de E
5 min de incubacin 4C 25C 37C 50C 75C 80C 37C
DNS 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 0.0 ml
Desarrollo de color
Ebullicin en bao mara
5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min
Enfriar y diluir con agua
Destilada

Metodologa parte 2. Efecto del J JJ JH HH H.
1) Se etiquetan siete tubos y se procede a su preparacin de la siguiente manera :
Adicin de : P1 P2 P3 P4 P5 P6 T
Sacarosa 0.3 M 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Regulador de citratos
0.2 M
JH 2.5 JH 3.5 JH 4.5 JH 4.95 JH 6.5 JH 7 JH 4.95
Agua destilada 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
5 min. De Incubacin a temperatura ambiente
Invertasa [6.36 UAE/ml] 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5
ml
0.5 ml 2ml de DNS
+ 0.5 ml de E
5 min. De incubacin a temperatura ambiente
Inactivar con DNS 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0
ml
2.0 ml 0.0 ml
Desarrollo de color
Ebullicin en bao mara
5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5 min 5min
Enfriar y diluir con agua
Destilada


Metodologa parte 3. Efecto de la concentracin de sustrato.
1. Se etiquetan siete tubos y se procede a su preparacin de la siguiente manera:
Adicin de : P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 T
Sacarosa 0.3 M
(ml)
2.0 ml 1.5 ml 1.0 ml 0.5 ml 0.25 ml 1.0 ml 0.05 ml 1.0 ml
0.5 M Ph 4.72
Agua destilada 0.0 ml 0.5 ml 1.0 ml 1.5 ml 1.75 ml 1.9 ml 1.95 ml 1.0 ml
5 mins. De preincubacin a temperatura ambiente
Invertasa
[2.7984 UAE/ml]
0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 2ml de
DNS
+ 0.5 ml
de E
5 min. De incubacin a temperatura ambiente
Inactivar con
DNS
Desarrollo de calor. Hasta ebullicin en bao de mara
Enfriar y diluir
con agua
destilada
5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml


Metodologa parte 4. Efecto de la concentracin de la enzima.
1) Se etiquetan siete tubos y se procede a su preparacin de la siguiente manera:

Adicin de: P1 P2 P3 P4 P5 T
Sacarosa 0.3 M
(ml)
1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Regulador de
acetatos 0.5 M JH 4.7
0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Agua destilada 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
Preincubacin 5 minutos
Invertasa 0.5 ml 0.0528
mgE/ml
0.0264
mgE/ml
0.0132
mgE/ml
0.0066
mgE/ml
0.0033
mgE/ml
2 ml de DNS
+0.5 ml de E
Inactivar con
DNS
2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 2.0 ml 0.0 ml
Desarrollo de
calor
En bao Mara hasta ebullicin
Enfriar y diluir
con agua
destilada
5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml

2. Se realiza la lectura en el espectrofotmetro a 450-550 nm.

Preparacin del reactivo DNS.

Reactivo de DNS. Acido 3,5-dinitrosaliclico (C7H4N2O7; PM 228,1) al 0,1% (p/v), tartrato sdico
potsico [NaK(COO)2(CHOH)2.4H2O; PM 282,23] al 30% (p/v) en NaOH (PM 40) 0,4 M. Disolver 1
g de cido 3,5-dinitrosaliclico y 300 g de tartrato sdico potsico en 200 ml de hidrxido sdico 2
M (16 g de NaOH en 200 ml de agua destilada) y diluir hasta 1000 ml con agua destilada. La
disolucin obtenida puede utilizarse durante 2 meses si se guarda en el refrigerador.

III.- RESULTADOS:

Elaboracin de la curva patrn.
Los resultados obtenidos para la realizacin de la curva patrn son los siguientes:


Parte 1. Efecto de la temperatura en la velocidad de reaccin.
TUBOS [A] (mg/ml) ABSORBANCIA
T
P1
P2
P3
P4
P5
P6
Se completa la tabla que presenta las absorbancias, temperaturas y velocidades de reaccin.
Tubo Temperatura
(C)
Abs
(= 540 nm)
Vrxn
(mgAR/mgE*min)
1 4
2 25
3 37
4 50
5 75
6 80

Parte 2. Efecto del JH en la velocidad de la reaccin.

TUBOS JH absorbancia Concentracin
azucares
reductores
(mg/ml)
Vrxn(mg
A.R/mg E min)
T1 2,5
T2 3,5
T3 4,5
T4 5
T5 6,5
T6 7
TESTIGO 5

Parte 3. Efecto del sustrato.
Las velocidades de reaccin obtenidas con diferentes concentraciones de sustrato se muestran en
el siguiente cuadro:
Concentracin de
sacarosa (mg/ml)
Absorbancia 540 nm Concentracin de
Azucares Reductores
(mg/ml)
Velocidad de reaccin
(mgAR/mgE(min))
20,53
15,4
10,27
5,1
2,57
1,03

Parte 4. Efecto de la concentracin de la enzima.
La siguiente tabla muestra las velocidades obtenidas a diferentes concentraciones de enzima.

Concentracin de la
Enzima
(mg/ml)
Absorbancia
lectura
540nm
Concentracin de
Azucares
Reductores (mg/ml)
Vrxn
mg /ml(min)
0,0528
0,0256
0,0132
0,0066
0,0033


IV.- CUESTIONARIO:

1. Qu es catlisis enzimtica?

2. Desde el punto de vista bioqumico como influencia el pH sobre la actividad enzimtica?

3. Desde el punto de vista bioqumico como influencia la temperatura sobre la actividad
enzimtica?

4. Que indica el parmetro KM?

5. Deduce la ecuacin de Michaelis-Menten?


VI.- BIBLIOGRAFA:

VII.- APENDICE:

VIII.- CLCULOS:

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