Staphylococcus y Streptococcus

Caractersticas
morfolgicas
Forma
Agrupacin
Hbitat
Taxonoma
Temperatura de crecimiento
Atmosfera
pH
Medios de cultivo
Patogenicidad
Enfermedades
Diagnostico
Tratamiento
Taxonoma
Hbitat
Over 30 different types of Staphylococci can infect
humans, but most infections are caused by
Staphylococcus aureus.
Staphylococci can be found normally in the nose and
on the skin (and less commonly in other locations) of
25%-30% of healthy adults.
In the majority of cases, the bacteria do not cause
disease.
S
Staphyloccoccus aureus
Anyone can develop a Staph infection, although certain
groups of people are at greater risk, including newborn
infants, breastfeeding women, and people with chronic
conditions such as diabetes, cancer, vascular disease, and
lung disease.
Injecting drug users, those with skin injuries or disorders,
intravenous catheters, surgical incisions, and those with a
weakened immune system all have an increased risk of
developing Staph infections.
What types of diseases are caused by Staph?
Impetigoor cellulites
Scalded skin syndrome
Breastfeeding women (in mastitis )
Bacteremia or sepsis.
Pneumonia
(Endocarditis) can lead to heart failure.
Osteomyelitis.
Food poisoning
Toxic shock syndrome
What types of diseases are caused by Staph?
Skin infections are the most common type of disease
produced by Staphylococcus. Staph infections of the skin
can progress to impetigo (a crusting of the skin) or
cellulitis (inflammation of the connective tissue under
the skin, leading to swelling and redness of the area).
In rare situations, a serious complication known as
scalded skin syndrome can develop.
In breastfeeding women, Staph can result in mastitis
(inflammation of the breast) or in abscess of the breast.
Staphylococcal breast abscesses can release bacteria into
the mother's milk.
When the bacteria enter the bloodstream and spread to other organs, a
number of serious infections can occur. Spread of the organisms to the
bloodstream is known as bacteremia or sepsis.
Staphylococcal Pneumonia predominantly affects people with underlying
lung disease and can lead to abscess formation within the lungs.
Infection of the heart valves (endocarditis) can lead to heart failure.
Spread of Staphylococci to the bones can result in severe inflammation of
the bones known as osteomyelitis. When Staph bacteria are present in the
blood, a condition known as staphylococcal sepsis (widespread infection
of the bloodstream) or staphylococcal bacteremia exists.
Staphylococcal sepsis is a leading cause of shock and circulatory collapse,
leading to death, in people with severe burns over large areas of the body.
When untreated, Staph aureus sepsis carries a mortality (death) rate of
over 80%. Although not common, Staph aureus has been reported as a
cause of chorio-amnionitis and neonatal sepsis in pregnancy, but group B
streptococci are the most common bacterial cause of this life-threatening
condition for the fetus.
Staphylococcal food poisoning is an illness of the bowels that causes
nausea, vomiting, diarrhea, and dehydration. It is caused by eating
foods contaminated with toxins produced by Staphylococcus aureus.
Symptoms usually develop within one to six hours after eating
contaminated food.
The illness usually lasts for one to three days and resolves on its own.
Patients with this illness are not contagious, since toxins are not
transmitted from one person to another.
Toxic shock syndrome is an illness caused by toxins secreted by Staph
aureus bacteria growing under conditions in which there is little or no
oxygen.
Toxic shock syndrome is characterized by the sudden onset of high
fever, vomiting, diarrhea, and muscle aches, followed by low blood
pressure (hypotension),which can lead to shock and death.
There may be a rash resembling sunburn, with peeling of skin. Toxic
shock syndrome was originally described and still occurs especially in
menstruating women using tampons.
Antigenos celulares.
Cpsula ( pocas cepas de S. aureus la poseen). Inhibe la fagocitosis.
Polisacrido A (cidos teicoicos). Le dan adherencia a la mucosa.
Protena A. Interaccin con las IgG, activando la va clsica y alterna
del complemento, reacciones anafilcticas locales y sistmicas,
inhibicinde la actividad opsnica de los Ac.
Adhesinas. Permite unirse a protenas estructurales como laminina,
fibronectina y colgeno.
Los cidos teicoicos: forman parte de la gruesa capa de
peptidoglicano que rodea a la membrana plasmtica y estn
directamente unidos a l mediante un enlace fosfodister. De
este modo pueden conectar varias capas de peptidoglicano.
Los cidos lipoteicoicos: atraviesan totalmente la capa de
peptidoglicano porque estn integrados en la membrana
plasmtica por medio de dos cadenas de cido graso.
Los cidos teicoicos son polmeros de un polialcohol
(glicerol o ribitol
Las molculas de polialcohol se unen entre s mediante
enlaces ster con el cido fosfrico, formando una cadena
lineal. Tras polimerizar, los hidroxilos libres del polialcohol
pueden estar glicosilados (con glucosa, galactosa o N-
Acetilglucosamina) o esterificados con D-Alanina.
Los cidos lipoteicoicos constan de un polmero
lineal formado por entre 16 y 40 unidades de glicerol-
fosfato, unido a un glicolpido que vara segn las
especies y que permite a la molcula integrarse en la
membrana plasmtica.
Como en el caso de los cidos teicoicos, el hidroxilo
libre del polialcohol pueden estar glicosilado (con
glucosa, galactosa o N-Acetilglucosamina) o
esterificado con D-Alanina .
Proteinas extracelulares.
Coagulasa. Requiere la interaccin con un factor de reaccin-coagulasa
(CRF) en el plasma, que se cree es un derivado de la protrombina y el
complejo coagulasa-CRF convierte el fibringeno en fibrina, el proceso
difiere del de la coagulacin normal en que los factores accesorios
como el Ca
++
no son necesarios y en que el cogulo es ms friable y no se
retrae.
Hidrolasas.
Estafilocinasa ( estreptocinasa y urocinasa). Disolucin de cogulo.
Nucleasa. Endonucleasa y exonucleasa del DNAy el RNA.
Lipasas. Contribuye a la supervivencia del m.o.
Hialuronidasa.
Lisostofina. Enzima de litio.
RESISTENCIA
Hemlisis causada por Staphylococcus aureus.
El aspecto de las colonias tpicas de Staphylococcus aureus sobre agar
Baird-Parker es el siguiente: redondas, de bordes lisos, convexas, de 2-3
mm de dimetro, hmedas, brillantes, negras, con un borde blanco fino,
rodeadas de una zona opaca y de un halo claro de 2-5 mm.
El cloruro de litio y el telurito potsico que forman parte del medio inhiben
el desarrollo de la flora competitiva; el piruvato sdico y la glicocola
favorecen el crecimiento de los estafilococos.
El medio de cultivo es opaco, debido a que se le incorpora emulsin de
yema de huevo. S. aureus sintetiza una lipasa que, al actuar sobre la
lipoproteina de la yema de huevo, produce un aclaramiento alrededor de
las colonias.
Alrededor de las colonias se forma tambin una zona opaca como
consecuencia de la formacin de un precipitado de sales de calcio y
magnesio, insoluble en cidos grasos. Esta zona opaca se hace ms
visible a partir de las 24 horas de incubacin.
El aclaramiento del medio que rodea a las colonias junto con el color
negro brillante de las mismas, son las caractersticas mas visibles de las
colonias tpicas.
Cultivo de Staphylococcus aureus en medio agar Baird Parker
Colonias tpicas
Colonias atpicas
Typical Appearance of microrganisms
Staphylococcus aureus pink to mauve
Other bacteria Colourless, blue or inhibited
Las colonias de SARM que crecieron en la placa () son rosas y muestran la
silueta de los dedos del trabajador (imagen A).
Despus de que la mano del trabajador se limpiara con un gel alcohlico se
obtuvo otra huella, y el cultivo resultante fue negativo para SARM(imagen B).
BBL
TM
CHROMagar
TM
Staph aureus
Colonias de color malva.
Identificacin
de Staphylococcus aureussin pruebas
Confirmatorias.
Sensibilidad: 99.5%
Especificidad: 99.2%
Diagnstico de laboratorio.
Manitol (+)
Catalasa (+)
Staphylococcus aureus.
Coagulasa.
O/F.
Manitol (-).
S. epidermidis y S. saprophyticus.
Novobiocina (5g /g).
NO
3
. Para confirmar S. saprophyticus, el cual es (-)
Urea. Para confirmar S. epidermidis , el cual es (+)
Caracteres Staphylococcus Micrococcus
Staphylococcus.
Cocos Gram positivos, inmviles, aerobios facultativos que fermentan la
glucosa y se distinguen por un crecimiento en racimos irregulares.
S. aureus produce neumona, meningitis, empiema, endocarditis y sepsis.
Prueba. S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus
Coagulasa (+) (-) (-)
Manitol. (+) (-) (-)
Novobiocina
.
(S) (S) (R)
Catalasa (+), Oxidasa (-) O/F F
Proteina A + - -
Pruebas 1 2 3
Crecimiento (anaerobio) + W -
Catalasa + + +
Oxidasa - -
-
Chos ( for. cidos) F F F
Glucosa + + -
Lactosa + d -
Maltosa + + -
Manitol + d -
Manitol (aerbico) + - -
Sucrosa + + -
Xilosa - - -
Voges Proskauer - d -
Nitratos + d -
Gelatina + d d
Ureasa + d d
Arginina + + -
Fosfatasa + d -
Coagulasa + - -
Tabla de identificacin para Staphylococcus
1. Staphylococcus
aureus
2. Staphylococcus
epidermidis
3.Staphylococcus
saprophyticus
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Bacteremia causasa por Staphylococcus aureus.
Staphylococcus aureus
MUELLER HINTON
antibiticos
Sreptococcus
Agar sangre
Frotis-Gram
Cocos en cadena
positivos ,sembrar en
agar sangre
STREPTOCOCCUS.
Cocos Grampositivos, cadenas o pares.
Da problemas de faringitis, renitis, celulitis,
endocarditis, glomerulonefritis, etc.
Primera prueba para diferenciar de Staphylococcus:
Catalasa
Las pruebas dependen de la hemlisis que presentan: o
.
CLASIFICACIN.
En base a:
1) Hemlisis. Beta hemolticos y no beta hemolticos.
Brown en 1919
2)Presencia de carbohidratos C especficos.
(R.Lancefield)
3)Pruebas bioqumicas. (Biotipo)
FARINGITIS ESTREPTOCCICA
FARINGITIS ESTREPTOCCICA
COMPLICACIONES
SUPURATIVAS
Absceso peri amigdalino
Absceso retro farngeo
Adenitis cervical
NO SUPURATIVAS
Escarlatina
Fiebre reumtica
Glomerulonefritis postestreptoccica
Characteristic rash of scarlet fever
Crusty sore caused by impetigo
Reddened throat with white patches
on tonsils caused by strep throat
FARINGITIS ESTREPTOCCICA
DIAGNSTICO
Datos clnicos
Deteccin rpida del antgeno (Carbohidrato C
especifico de estreptococo
Sensibilidad : 85 %
Especificidad: 95 %
Cultivo exudado farngeo: Patrn oro
Determinacin de anticuerpos (ASLO)
Diagnstico retrospectivo
CARBOHIDRATOS C ANTIGNICOS
Corte de un Streptococcus pyogenes
Compuestas de protena M (determinante
antignico)
Nace desde la membrana
citoplsmica y se expresa
como fimbria; es ms
antifagocitaria que la
cpsula.
M, T, R
La mayora de las infecciones
respiratorias estreptoccicas
humanas se deben a los
Streptococcus del grupo A (S.
pyogenes), C,G. y en casos raros, a
los del grupo B (S. agalactiae).
Cpsula de cido hialurnico Factor de virulencia que retarda la fagocitosis de los
PMN y Macrfagos.
Pared Celular Estructura compleja con sustancias antignicas:
- Carbohidratos especfico (dmero de ramnosa-
ramnosa y N-acetilglucosamina.
- Mucopptido (PG): provee de rigidez a la PC. Se
compone de polmeros repetidos de
N-acetilglucosamina y cido N-acetilmurmico,
conectado a cadenas laterales de aminocidos.
- La Protena M: Mayor antgeno de virulencia de los
estreptococos del grupo A.
- cido Lipoteicoico: Importante factor de virulencia
con gran afinidad a unirse con las membranas de
clulas epiteliales. Responsable del primer paso de
colonizacin (Adherencia a la fibronectina en la
superficie de clulas epiteliales humanas).
Adems, rompe los enlaces peptdicos de C5a del
complemento, evitando as la quimiotxis de
Neutrfilos.
Existen alrededor de 80 serotipos reconocidos en base a su protena M.
Estreptococo del grupo A, en el que se
Distinguen las fibrillas de la protena M.
Participa en la adherencia a clulas epiteliales.
Streptococcus del grupo A
Exotoxina pirognica(eritrognica).- responsable del sarpullido en la fiebre
escarlatina. Adems: pirognica y citotxica.
La produccin de la toxina se induce por la lisogenia con un bacterifago
temperado. Hay 3 tipos serolgicos de la toxina (A-C).
Produccin de hemolisinas:
Estreptolisina O: oxgeno lbil. Inmunognica (es referencia de infeccin);
citotxica. Producida por todas las cepas de S. pyogenes. Antignica. La presencia
de anticuerpos ASO indican infeccin estreptoccica reciente.
Estreptolisina S: No antignica y oxgeno-estable..
Las estreptolisinas O y S daan las membranas de los PMN, plaquetas y
organelos subcelulares.
La prueba definitiva o confirmatoria se realiza mediante el
uso de anticuerpos dirigidos contra los carbohidratos de
pared, unidos en su porcin Fc a partculas de ltex, con lo
que se identifican aqullos pertenecientes a los grupos A, B,
C, D y F.
Existen pruebas rpidas basadas en la extraccin del
carbohidrato de pared de muestras de hisopados farngeos
que identifican slo a estreptococos del grupo A mediante
una prueba de inmunoensayoptico.
Aunque estas pruebas no logran una identificacin de
serotipos, permiten identificar la presencia de EbHGA en los
siguientes 10 o 20 minutos posteriores a la toma de muestra.
CUADRO 2 Agentes infecciosos causantes de faringoamigdalitis
Bacterias Estreptococo del grupo A, C, G
Corynebacterium spp.
Haemophilus influenzae
Anaerobios (Bacteroides, Fusobacterium)
Legionella pneumophila
Yersinia enterocolitica
Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitidis
Treponema pallidum
Chlamydia spp.
Mycoplasma spp.
Virus Rinovirus
Coronavirus
Adenovirus
Virus sincitial respiratorio
Virus del herpes simple
Virus de la parainfluenza 1, 2, 3, 4
Virus de la influenza A, B
Cocksakievirus A9, B1-5
Virus ECHO
Enterovirus
Virus Epstein-Barr
Citomegalovirus
VIH
Hongos Candida spp.
Serogrupo Antgeno grupo especfico de la
pared
Aspectos clnicos
A
Ramnosa-N-acetil-glucosamina Faringitis, amigdalitis,
escarlatina, erisipela,
imptigo, celulitis.
Secuelas no supurativas:
Fiebre reumtica,
glmerulonefritis
B
Ramnosa-glucosamina Corioamninitis, sepsis
puerperal y neonatal,
Meningitis neonatal
C
C Ramnosa-N-acetil-galactosamina Infecciones respiratorias altas
D
Acido glicerol teicoico Infecciones del tracto
gnitourinario, heridas,
endocarditis
G
Ramnosa-galactosamina Infecciones respiratorias altas,
celulitis, sepsis
Estreptococcus hemolticos. Producen hemolisinas
solubles. Se clasifican en grupos A-H y K-U, de acuerdo al antisuero especfico
con el cual precipitan.
Grupo A. S. pyogenes, principal patgeno para el hombre.
Asociado con invasiones locales o generalizadas y trastornos inmunolgicos.
Grupo B. S. agalactiae, miembros de flora normal de aparato
genital femenino y una causa importante de sepsis neonatal y meningitis.
Grupos C y G. En ocasiones se presentan en faringe, pueden causar
sinusitis, bacteriemia o endocarditis y pueden confundirse con los miembros
del grupo A.
Grupo D. abarca a los Enterococcus, S. faecalis, S. faecium.
Estreptococos no beta hemolticos.
Por lo general estos presentan alfa hemlisis y otros no producen hemlisis en
gelosa sangre.
S. pneumoniae (pneumococo)
S. viridans, incluye: S.salivarius, S.mitis, S. mutans,
S.sanguis, y otros. Prevalecen en vas respiratorias como flora normal.
Peptoestreptococos. Solo se desarrollan bajo condiciones anaerobias o
microaerfilas y producen hemlisis variable.
FACTORES DE PATOGENICIDAD.
Protena M. Permite adherencia a la clula donde
va a producir el dao, principalmente a la clula de
faringe.
Cpsula. Es un factor antifagocitario.
Hemolisinas. Conocidas comoestreptolisinas:
Tipo O, es la ms importante porque es
antignica, es lbil al oxgeno.
Tipo S, no antignica, es oxgeno estable, puede
lisar los eritrocitos de la parte afectada ( garganta).
Hialuronidasa. Destruye clula del husped por
mediodel ataque al cidosilicoque se produce.
DIAGNSTICO DE LABORATORIO.
Sembrar en agar sangre y detectar tipo de hemlisis ,
, .
Catalasa
Streptococcus grupo A.
1. Hemlisis .
2. Bacitracina.
3. Prueba de Lancefield ( serologa), presencia de
carbohidrato C especfico.

Streptococcus sp:
Cocos en cadena, Grampositivos
Nota: Es importante sealar que en la tincin de Gram directa,
realizada a partir de una muestra de esputo encontramos una gran
mezcla de bacterias, por lo que es muy importante evitar el contacto
del hisopo con la muestra y tratar de tomarla a partir de las zonas de
inflamacin o puntos blancos, para tratar de obtener mayor cantidad
del
Hisopo humedecido
en CN
Tomar colonia
aislada
Bacitracia
Disco de 0.04 u.
AS (5%)
Cepa de
Sthapylococcus aureus
b-lisina (+)
CAMP
Cocos en cadena,
catalasa +
BACITRACINA Y CAMP
Nota: es importante picar el agar, ya que si no lo hacemos, slo se manifestar la
estreptolisina S. Adems podemos estimular la estreptolisina Oen atmsfera de
CO
2
.
ANTIBITICO POLIPEPTDICO
Impide el rehus del lpido transportador
de la membrana citoplasmtica.
Inhibicin del transporte del N-acetil Murmico
para el peptidoglucano.
Bactericida frente a microorganismos Gram
positivos, incluyendo estafilococos
peniciloresistentes y Gramnegativo Neisseria.
Es nefrotxica, produciendo proteinuria, hematuria y
Retencin de nitrgeno.
Estos efectos limitan su uso clnico y slo se administra
tpicamente (ciruga de coln) .
CONTROL DE CALIDAD
Cepas
Staphylococcus aureus ATCC 6538-P
Streptococcus pyogenes ATCC 12344
Streptococcus agalactiae ATCC 13813
Streptococcus pneumoniae ATCC 6301
Listeria monocytogenes ATCC 19118
Bacillus cereus ATCC 11778
Clostridiumperfringens ATCC 13124
Cuotas de
recuperacin
>70%
>70%
>70%
>70%
>70%
>70%
>70%
(anaerobia)
Hemlisis
Beta
Beta
-
Alfa
-
Beta
Beta
Test de
Bacitracina
No necesaria
+
-
-
No necesaria
No necesaria
No necesaria
(anaerobiosis)
Preparacin:
Disolver 40g/L, esterilizar en autoclave (15min. A 121C), dejar
enfriar a 45-50C, incorporar 5% de sangre desfibrinada y verter
en placas.
pH: 6.80.2
El tipo de hemlisis es til en la identificacin de los estreptococos. Pero debe
tenerse cuidado en el tipo de sangre que se emplea en el medio, ya que
pueden presentarse ciertas variaciones hemolticas:
Estreptococo Sangre Hemlisis
Enterococos del grupo D Carnero No hemolticos
Humana Beta-hemoltico
Caballo Alfa Beta-hemoltico
La base de agar debe ser libre de azcares reductores (Glu, Fruc, Gal y otras pentosas),
ya que la cada de pH inactiva la estreptolisina O, suprimiendo la hemlisis.
La reaccin hemoltica representa el grado de
destruccin eritrocitaria (y de Hb) del medio de
Agar sangre (ATYDE, Art. 8810886).
En la imagen se representa la hemlisis beta
producida por un cultivo puro de
Streptococcus pyogenes, donde se confirma
su identificacin presuntiva por medio de la
susceptibilidad a la Bacitracina.
REACCIN DE CAMP
Para identificacin presuntiva de los
estreptococos del grupo B de Lancefield (S.
agalactiae); producen mastitis en vacas y la
leche contaminada, provoca infecciones en
neonatos. El factor CAMP es un compuesto
extracelular producido por los estreptococos
del grupo B, que incrementa la lisis
eritrocitaria, en combinacin con la beta-
hemolisina del Staphylococcus aureus (slo
son positivos S agalactiae y Listeria).
1. Enterococcus faecalis
2. Streptococcus salivarius
3. S. agalactiae
4. E. durans
El factor CAMP (Christie, Atkins, Munch y Petersen)
es responsable del efecto sinrgico entre la hemlisis
de SGB cuando se inocula en forma adyacente a una
cepa de Staphylococcus aureus.
Es una protena extracelular que lisa la membrana de
los eritrocitos pretratados con la beta-toxina de
Staphylococcus, ( esfingomielinasa).
Hay evidencias muy limitadas en cuanto a su funcin11.
Streptococcus grupo B.
Hemlisis .
Prueba de CAMP.
Hidrlisis de hipurato.
Streptococcus grupo D.
hemlisis.
ENTEROCOCOS NO ENTEROCOCOS.
Bilis esculina (+) Bilis esculina (+)
NaCl (+) NaCl (-)
Para identificacin de los estreptococos del
grupo B, que poseen la enzima hipuricasa.
La enzima hidroliza el hipurato de sodio, con
formacin de benzoato de sodio y glicina.
Streptococcus gpo. B: Positivo
Streptococcus gpo. D: Negativo
La reaccin se realiza en tubo con medio rico + hipurato de sodio.
20-24h
37C
Caldo BHI (ATYDE; art.8810493)
Caldo Soya tripticasena
Todd-Hewitt (recomendado)
CENTRIFUGAR
0.8ml Sobrenadante + 0.2ml Sol. FeCl
3
al 7% Pp blanco
(Benzoato)
Deteccin de Benzoato con FeCl
3
al 7%: precipitacin de protenas,
hipurato y benzoato, que persiste despus de 10min. (+).
Prueba de glicina: Aparicin de color prpura intensaodespus de
aadir ninhidrina por la presencia de glicina y por tanto, hidrlisis de
hipurato.
La reaccin se realiza en tubo con medio rico + hipurato de sodio.
20-24h
37C
Caldo BHI (ATYDE; art.8810493)
Caldo Soya tripticasena
Todd-Hewitt (recomendado)
CENTRIFUGAR
0.8ml Sobrenadante + 0.2ml Sol. FeCl
3
al 7% Pp blanco
(Benzoato)
Deteccin de Benzoato con FeCl
3
al 7%: precipitacin de protenas,
hipurato y benzoato, que persiste despus de 10min. (+).
Prueba de glicina: Aparicin de color prpura intensaodespus de
aadir ninhidrina por la presencia de glicina y por tanto, hidrlisis de
hipurato.
Medio base inclinado + esculina + bilis al 1-4%.
Siembra del estreptococo identificado, no beta-hemoltico.
24h
37C
Color negro (+)
Incoloro (-)
Siembra por
estriado y
picado
Fe (Cit)
3
es un indicador que forma un
complejo con la esculetina, formando un
pp negro.
En el medio base BHI + Bilis se adiciona
por filtracin y de forma esterilizada, la
esculina. El medio contiene citrato frrico,
y se somete a autoclaveado (no la
esculina). Despus se calienta en un bao,
donde se aade la esculina y se inclina el
medio.
+ -
Algunos medios contienen azida de sodio para inhibir a los
microorganismos gramnegativos, y son selectivos para estreptococos del
grupo D.
Medio base inclinado + esculina + bilis al 1-4%.
Siembra del estreptococo identificado, no beta-hemoltico.
24h
37C
Color negro (+)
Incoloro (-)
Siembra por
estriado y
picado
Fe (Cit)
3
es un indicador que forma un
complejo con la esculetina, formando un
pp negro.
En el medio base BHI + Bilis se adiciona
por filtracin y de forma esterilizada, la
esculina. El medio contiene citrato frrico,
y se somete a autoclaveado (sin la
esculina). Despus se coloca en un bao,
a 45C se aade la esculina y se inclina el
medio.
+ -
Algunos medios contienen azida de sodio para inhibir a los
microorganismos gramnegativos, y son selectivos para estreptococos del
grupo D.
En el medio base BHI + Bilis se adiciona por filtracin y
de forma esterilizada, la esculina.
El medio base contiene citrato frrico, y se somete a
autoclaveado (sin la esculina).
Despus se coloca en un bao a 45C, se aade la
esculina y se sirve en los tubos y se inclina el medio.
Fe (Cit)
3
es un indicador que forma un
complejo con la esculetina, formando un pp
negro.
+ -
Algunos medios contienen azida de sodio para inhibir a los
microorganismos gramnegativos, y son selectivos para estreptococos del
grupo D.
Para diferenciar a los estreptococos del grupo D de otros
estreptococos.
Prueba que se efecta en caldo BHI con NaCl al 6.5% +
Glucosa (incrementa crecimiento) + Prpura de Bromocresol.
24-48h
37C
Inocular
cepa.
Medio Lquido BHI
Turbio y amarillo
Crecimiento, prueba positiva
Indicador: Prpura de bromocresol
cido: amarillo
Bsico: prpura
Streptococcus del grupo D:
S. Faecalis
S. Faecium
S. durans
Zymogenes
Lyquefaciens
Variedades
Rebecca Craighill Lancefiel (1895-1981)
Prueba serolgica
desarrollada por la Dr.
Lancefiel.
Los estreptococos se clasifican en grupos de
Lancefield A, B, C, D y E en base a las
caractersticas antignicas de los
carbohidratos C grupoespecficos de sus
paredes celulares. Hoy se han ampliado hasta
18 (A T).
La Dr. Lancefield tipific los estreptococos con una variedad de anticuerpos especficos
contra la protena M, mezclados con un extracto estreptoccico. Debido a una reaccin
visual de precipitacin en pipetas capilares, se pudo clasificar a los estreptococos del
grupo A en base a la expresin de la protena M.
INFORMACION TECNICA:
PRINCIPIO: ASO LATEX (Test de aglutinacin en porta)
TEST: Antiestreptolisina. O.
SIN DILUCION PREVIA DE LA MUESTRA
FUNDAMENTO DEL METODO.
Reaccin de aglutinacin de una suspensin de partculas de ltex poliestireno sensibilizadas
con estreptolisina O estabilizada. La aglutinacin es visible en una concentracin de ASO en
suero igual o superior a 200 Ul/mL
REACTIVOS
Reactivo 1: Tapn blanco.- Ltex ASO en suspensin. Contiene azida sdica 0.1%
Reactivo 2: Tapn rojo.- Control +, Concentracin superior a 200 U/mL; Suero
humano, Contiene azida sdica 0.1%
Reactivo 3: Tapn azul.- Control -, Concentracin inferior a 200 UI/mL Suero
Humano. Contiene azida sdica 0.1%
* Los controles son sueros humanos. Aunque no se ha detectado la presencia de antgeno
HBs, ni anticuerpos anti-HIV, deben ser manipulados con la misma precaucin que un suero
muestra.
PREPARACION Y ESTABILIDAD
El reactivo 1 es una suspensin de partculas de ltex, homogeneizar con agitacin suave, antes
de utilizar.
Los goteros dispensan una gota de volumen aproximado de 50 L que es el idneo para una buena
sensibilidad.
Los reactivos se deben conservar a 2-8 C, no deben congelarse. En estas condiciones los
componentes mantendrn su funcionalidad hasta la fecha de expiracin sealada en la etiqueta.
MUESTRA
Utilizar suero. Los sueros, conservados a 2-8 C, mantienen su actividad durante 2 das.
No utilizar sueros hemolizados ni sueros altamente lipmicos pues podran dar una aglutinacin
no especfica.
TECNICA
1.- Atemperar el reactivo y los controles a temperatura ambiente.
2.- Homogeneizar el reactivo 1 ASO-ltex, con agitacin suave.
3.- Comprobar la funcionalidad del reactivo mediante los controles positivo y negativo. Ver
procedimiento a continuacin
4.- Dosificar 50 L (1 gota) de suero muestra a analizar en un crculo del porta, SIN DILUIR.
5.- Aadir, al lado de la anterior, una gota de R.1 ASO-ltex
6.- Mezclar las dos gotas mediante agitacin y extenderlas por todo el circulo.
7.- Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 rpm) y observar la aparicin y/o ausencia de
aglutinacion exactamente al cabo de 2 minutos. El exceso del tiempo de reaccin podra dar lugar a
falsos resultados.
INTERPRETACION.
- La presencia de aglutinacin indica un nivel de ASO igual o superior a 200 Ul/ml. en la muestra.
- La ausencia de aglutinacin indica un nivel de ASO inferior a 200 Ul/ml. en la muestra.
Reaccin positiva Reaccin negativa
Streptococcus grupo C.
oHemlisis .
Carbohidratos.
oTrealosa (-)
oSorbitol (-)
oGlicina (+)
Tipo Optoquina Sol. bilis Bacitracina Hipurato CAMP Bilis
esculina
NaCl
A R - S - - - -
B R - R + + - -
D R - R - - + +
Neumococos
S + R - - - -
Beta hemolticos
Catalasa
Morfologa
Sensibles a Bacitracina 0.04U
CAMP -
Hidrlisis de Hipurato
Colonial Puntiforme en AS
(0.5-1mm)
Microscpica (cocos
grampositivos en cadenas largas).
Beta hemlisis.
Catalasa
Morfologa: Colonial.- colonias de ms de 1-2mm.
Microscpicamente: cocos grampositivos en
cadenas cortas.
CAMP +
Hidrlisis de hipurato +.
Enterococos Alfa hemolticos.
Catalasa
Morfologa: Colonial.- colonias de ms de 1-2mmen AS.
Microscpicamente: cocos grampositivos en
cadenas cortas.
CAMP -
Bilis esculina +
Tolerancia + a la sal (NaCl al 6.5%) Especfica de este grupo.
MORFOLOGIA DE
STREPTOCOCCUS
The S. pyogenes M1
rheumatogenic strain SF370
and the M49 nephritogenic
strain NZ131 have been
completely sequenced, and
partial genome sequences have
been obtained for four other
strains (representing an M3, an
M5, and an M18 strain as well
as another M49 strain).
Tipos de
hemlisis.
HIDRLISIS DE ESCULINA
POSITIVA NEGATIVA
HIDRLISIS DE HIPURATO
NEGATIVA POSITIVA
Kit para prueba de aglutinacin
1. Streptococus pyogenes 10. Streptococus salivarus
2. Streptococus agalactiae 11. Streptococus milleri
3. Streptococus dysgalactiae 12. Streptococus sanguis
4. Streptococus equisimiles 13. Streptococus mitior
5. Streptococus equi 14. Streptococus mutans
6. Streptococus zooepidemicus
7. Streptococus del grupo E
8. Streptococus anginosus
9. Streptococus pneumoniae
Tabla de identificacin para Streptococcus
Streptococcus pneumoniae.
Streptococcus spp.
Qu sustancia transmita la propiedad de matar a
los ratones de las bacterias S muertas a las bacterias
R vivas? Esta pregunta es clave si consideramos a la
transformacin de R en S como un fenmeno de
intercambio de informacin gentica.
Pero en ese entonces nadie imaginaba que las
bacterias llevaran genes y por lo tanto la
identificacin de la sustancia responsable de tal
transformacin pareca no estar relacionada con el
descubrimiento de la naturaleza de los mismos.
El mdico microbilogo Oswald Avery qued
sorprendido por los resultados publicados por
Griffith y aunque al principio no crea mucho en
ellos, se propuso descubrir la sustancia
responsable del fenmeno de
transformacin. As fue como Oswald Avery,
junto a sus colegas Colin MacLeod y Maclyn
McCarty comenzaron a fraccionar el extracto de
bacterias S libre de clulas donde, segn Griffith,
estaba el principio transformante
Oswald Avery
Colin MacLeod
Encontraron que podan eliminar las protenas, los
lpidos, los polisacridos y el ARN del extracto sin
disminuir la propiedad del extracto de transformar a los
neumococos R en S.
Sin embargo, si purificaban el ADN presente en el
extracto y lo incubaban con las bacterias R, stas se
transformaban en S.
Era el ADN el principio transformante que haca que los
neumococos R se transformaran en S, es decir, era el ADN
el que llevaba la informacin necesaria para que la cepa R
fuera capaz de sintetizar una cpsula de polisacridos
idntica a la que posean las bacterias S.
Cuando Avery, MacLeod y McCarty publicaron sus resultados en
1944, fueron muy pocos los que concluyeron que los genes
estaban compuestos de ADN.
En esa poca era realmente difcil de imaginar que una molcula
montona compuesta slo de cuatro bases nitrogenadas
diferentes pudiera tener la suficiente variabilidad como para
llevar toda la informacin gentica que precisaban los seres
vivos.
Sin duda, eran las protenas las candidatas para tal funcin,
debido a su gran complejidad y mltiples formas. En este
contexto, Avery, MacLeod y McCarty concluyeron, tmidamente,
en su artculo:
Si los resultados del presente estudio se confirman,
entonces el ADN debe ser considerado como una molcula
que posee especificidad biolgica cuya base qumica an no
ha sido determinada.
Llev ocho aos ms para que la comunidad cientfica
se convenciera de que el ADN era el material gentico.
Fue gracias al experimento que presentaron Al
Hershey y Martha Chase en 1952, sobre la infeccin de
bacteriofagos o fagos (virus que infectan bacterias).
Los fagos estn compuestos por una cabeza proteica
que guarda en su interior ADN.
Hershey y Chase vieron que durante la infeccin el
ADN abandona la cabeza del fago y entra en la bacteria,
dejando afuera la cabeza proteica.
Es decir que el ADN lleva la informacin necesaria y
suficiente para hacer ms fagos hijos dentro de la
bacteria.
Por lo tanto el experimento indicaba que era el ADN el
portador de la informacin gentica del fago.
Los tipos neumococicos, tienen una Patogenicidad diferente,
en general los nmeros inferiores lo son ms.
En la era prea-antibiotica, los tipos 1, 2 y 3 eran la causa
del 75% de las enfermedades bacteremicas.
Actualmente unos 8-10 tipos causan un 66% de los casos:
1, 3, 4, 7, 8, 9, 12, 14; y menos 6, 18 y 19; aunque no
necesariamente en ese orden.
En los nios, se encuentran en el 85% de los casos los
tipos 14, 6, 18, 19, 23, 1, 4 y 9. En < 1% de casos de neumona
neumococica, se asocian infecciones con > 1 serotipo y
con otros agentes infecciosos .
La vacuna polivalente disponible que contiene 23
serotipos, cubre aproximadamente al 90% de las
infecciones adquiridas en la comunidad.
Las cepas de S. pneumoniae frecuentemente se encuentran en la garganta
Sin causar enfermedad.
En ocasiones , es necesario realizar estudios de prevalencia en portadores
sanos con fines de salud publica.
1.- Determinar
Pared de Pneumococo
OTITIS MEDIA AGUDA (OMA)
EXPLORACIN
TMPANO NORMAL OTITIS
SINUSITIS
Inflamacin de la
mucosa de los senos
paranasales
Neumatizacin
Maxilares (1 ao)
Etmoidales (3 aos)
Frontal (5 aos)
Esfenoidal (10 aos)
SINUSITIS
ETIOLOGA
Streptococcus pneumoniae
Haemophilus influenzae
Moraxella catarrhalis
Factores de riesgo
Infecciones respiratorias superiores virales
Alergia
Complica el 5 % de los casos de resfriado comn
OTITIS MEDIA AGUDA (OMA)
ETIOLOGA
Streptococcus pneumoniae: 40-45 %
Cepas totalmente resistentes a la penicilina: 10-15 %
Cepas parcialmente resistentes a la penicilina:50-60 %
Haemophilus influenzae: 25 %
Moraxella catarrhalis 10 %
Streptococcus pyogenes 5 %
Staphilococcus aureus 2 %
Muestra de sitio
estril de un caso
de paciente
sospechoso
Examine el crecimiento de las
colonias en agar sangre o chocolate
pequeas, grisceas, hmedas
acuosas con halo verdoso.
Prueba de susceptibilidad a la optoquina
( 6mm, 5ug)
Diplococos gram+ o en
cadena, u otra
morfologa diferente a
Pneumococo
Realizar
gram
Inocular medios de agar
sangre o chocolate
Cepa a hemoltica con zona
de inhibicin 14mm
S.pneumoniae
Cepa a hemoltica con zona
de inhibicin 9 13 mm con
disco de 6mm con 5ug
Cepa a hemoltica con zona
de inhibicin 8 mm con
disco de 6mm con 5ug S.
viridans
Pba. de solubilidad en bilis
Cepa soluble en bilis S. pneumoniae
Cepa NO soluble en bilis NO S.pneumoniae Prueba de susceptibilidad a los
antimicrobianos en agar Muller Hinton + 5
% de sangre de carnero (o caballo)
Neumococo
Prueba de optoquina con discos de 6mm y 5ug
PRUEBA DE OPTOQUINA.
Streptococcus pneumoniae.
Crecimiento en cajas de agar sangre
Los aislamientos de S. pneumoniae tienen un
centro deprimido (flechas amarillas) a las 2448
horas
de incubacin, mientras que los de S. viridans
retienen el centro elevado .
Solubilidad en bilis.