Control de Calidad FF

CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS, DICIEMBRE 3 AL 7, 2001
Gloria Amparo Valencia P., y Alejandro Martnez M.

1

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA
DEPARTAMENTO DE FARMACIA

GUIA PARA EL RECONOCIMIENTO DE DROGAS VEGETALES
POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Elaborado por:

GLORIA AMPARO VALENCIA P.
ALEJANDRO MARTINEZ M.

Medelln, Diciembre de 2001

2

Prctica 1
RECONOCIMIENTO CROMATOGRFICO DE PLANTAS MEDICINALES
APROBADAS EN COLOMBIA

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA
DE AJENJO, Artemisia absinthium L., Asteraceae

Introduccin
La droga la constituyen las hojas y flores. Las hojas contienen 0.3% de principios
amargos (absinthina y anabsinthina), mientras que las flores contienen un 0.15%.

Extraccin
1 g. de droga pulverizada se extrae durante 10 minutos con 10 ml de Metanol a 60C
sobre un bao de agua. La mezcla se filtra y el filtrado se evapora hasta un volumen
aprox. de 2 ml.

Fase estacionaria: Slica gel 60F-254
Fase mvil: Cloroformo:Metanol 95:5
Revelador: Liebermann-Burchard/UV 365 nm

Rf SIJSTANCIA COLOR
0.3-0.4 Absinthina amarillo ocre

DEL AJO, Allium sativum, Liliaceae

Introduccin
El bulbo o diente contiene cistena, cistina, sulfxido de metionina, cicloalina, alina (=
sulfxido de S-alilcistena), y deoxialina (=S-alil-cistena), junto con otros aminocidos
azufrados y sulfxidos de cistena.

Extraccin
25 g. de dientes frescos finamente desmenuzados se extraen en fro (con ayuda de
hielo seco) con 2 porciones de 100 ml de metanol al 80%. Se purifica por cromatografa
en columna, controlando las fracciones con Reactivo de Ninhidrina.

3

Fase estacionaria: Slica gel 60
Fase mvil: n-Butanol : n-Propanol : Acido actico glacial : Agua
30 : 10 : 10 : 10
Revelador: Ninhidrina

Rf SUSTANCIA COLOR
0.5 Alicina Naranja
0.7 Alina Azul-violeta

RECONOCIMIENTO DE LA ALCACHOFA POR
CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Introduccin

La droga la constituyen las hojas, las cuales contienen sesquiterpenlactonas como
cinaropicrina, grossheimina y cinarina; cidos fenolcarboxilicos como 1,3-
dicafeoilqunico, clorognico y neoclorognico; y luteolina-7-O-glucsido, un flavonoide.
Extraccin
1 g. de droga pulverizada se extrae durante 10 minutos con 10 ml de metanol a 60C
sobre un bao de agua. La mezcla se filtra y se evapora hasta un volumen de aprox. 2
ml

Fase mvil: Acetato de etilo:Acido frmico:Acido actico:Agua
100 : 11 : 11 : 27
Revelador: Polietilnglicol para productos naturales/UV 365 nm

Rf SIJSTANCIA COLOR
0.7 Cinarina Azul fluorescente
0.6 Luteolina-7-0-gluc. Amarillo
0.45 Acido clorognico Azul fluorescente
0.4 Rutina Amarillo


4

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA DE LA
ALBAHACA, Ocimum basilicum, Lamiaceae

Introduccin

La droga la constituyen las hojas, las cuales contienen 0.1-0.45% de aceite esencial. El
aceite esencial contiene principalmente metilchavicol 55% y linalool.

Extraccin

a) Por arrastre con vapor de agua

Mtodo oficial de la Farmacopea Europea III, pg. 62.

b) Con Diclorometano

1 g. de droga pulverizada se extrae por agitacin durante 15 minutos con 10 ml de
diclorometano. El filtrado obtenido se evapora a sequedad. El residuo se disuelve en 1
ml de Tolueno, y se aplican 50-100 mL. en la placa cromatogrfica.

Fase mvil: Tolueno : Acetato de Etilo 93 : 7
Revelador: Vainillina- Acido sulfrico

Rf SUSTANCIA COLOR
0.3 Linalool Azul intenso
0.9 Metilchavicol Rojo violeta

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA DE
LA HIERBABUENA, Mentha viridis L., Lamiaceae

Introduccin

La droga la constituyen las hojas y ramas jvenes, las cuales contienen 1.2% de aceite
esencial. El aceite contiene principalmente L-carvona 42-67%, mentol, acetato de
dihidrocarveol, alcohol dihidrocuminlico, pineno, limoneno y felandreno.


5
Extraccin

1) Destilacin por arrastre con vapor de agua
Se utiliza el mtodo oficial de la Farmacopea Europea III pg. 62 con 50 g de muestra,
500 ml de agua, 2 horas de destilacin a un flujo de 3-3.5 ml /min.

2) Extraccin con diclorometano
Como se describi para la albahaca

Revelador: Vainillina-Acido sulfrico

Rf SUSTANCIA COLOR
0.25 Alcohol dihidrocumnico Azul intenso
0.46 Carvona Rojo-Violeta
0.7 Acetato de dehidrocarveol Azul intenso

RECONOCIMIENTO POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA DE
HINOJO, Foeniculum vulgare, Apiaceae
Introduccin
La droga la constituyen los frutos, los cuales contienen 2-7% de aceite esencial. El
aceite esencial contiene principalmente anetol (50-80% en la variedad dulce, 60-80%
en la variedad vulgare), metilchavicol, safrol, anisaldehdo y fenchona (0.4-0.8% en la
variedad dulce, 12-22% en la variedad vulgare).

Extraccin

1) Destilacin por arrastre con vapor de agua
Segn el mtodo oficial de la Farmacopea Europea III, pg. 62, utilizando 10 g. de
muestra, 200 ml de agua, 2 horas de destilacin a una rata de 2-3 ml /min.

2) Extraccin con diclorometano
Tal como se describi para la albahaca.
Reveladores: 1.Vainillina-Acido sulfrico
2. PMA-Permanganato de potasio
3. Acido sulfrico concentrado


6
Rf SUSTANCIA REVELADOR COLOR
0.6 Fenchona 3 Azul oscuro
0.9 Anetol 1
2
3
Rojo-Violeta
Rojo-Pardo
Azul oscuro

Nota: La fenchona no se detecta en estas condiciones para el ans, lo que permite
diferenciar las dos plantas.

DE LA MALVA, Malva sylvestris, Malvaceae

Introduccin
La flor contiene la malvina, un pigmento que le confiere el color caracterstico.

Extraccin
1 g. de droga pulverizada se extrae por agitacin durante 15 minutos con 6 ml de
Metanol:Acido Clorhdrico (9 partes de metanol, 1 parte de cido al 25%). Se utilizan 25
ml del filtrado para la cromatografa.

Fase mvil: n-Butanol : Acido actico glacial : Agua
40 : 10 : 20
Reveladores: Ninguno

Rf SUSTANCIA COLOR
0.4 Malvina (=Malvidin-3,5-di-
glucsido
Violceo

DE LA MANZANILLA MATRICARIA, Matricaria chamomilla, Asteraceae

Introduccin
La droga la constituyen las flores, las cuales contienen 0.5-1.5% de aceite esencial. El
aceite esencial a su vez contiene chamazuleno 0-15%, bisabolol 10-25%, bisabolol
xidos A y B (ambos 10-25%), polinas 1-40%, farneseno 15%.


7
Extraccin

a) Destilacin por arrastre con vapor de agua
Segn mtodo oficial de la F. Eur. III pg. 62 con:
50 g de muestra, 500 ml de agua destilada de una solucin de cloruro de sodio al 1%, 4
horas de destilacin a 3-4 ml/minuto.

b) Extraccin con Diclorometano
Tal como se ha descrito para la albahaca.


Rf SUSTANCIA COLOR
0.2 Oxidos A y B de bisabolol Amarillo/Verde
0.25 Alcohol terpenoide Violeta
0.35 Bisabolol Violeta
0.5-0.6 Polinas Pardo
0.95 Azuleno Rojo violeta
0.99 Farneseno Azul-Violeta

DEL ROMERO, Rosmarinus officinalis, Lamiaceae
Introduccin
Las hojas contienen 1-2% de aceite esencial, el cual contiene principalmente 1,8-cineol
15-30%, borneol 10-20%, acetato de bornilo, camfeno 5-10%, alfa- y beta-pineno.

Extraccin
a) Destilacin por arrastre con vapor de agua

Segn mtodo oficial de la Farm. Eur. III pg. 62.

b) Extraccin con diclorometano

Tal como se describi para la albahaca.


8

Rf SUSTANCIA COLOR
0.25 Borneol Azul oscuro
0.45 Cineol Azul intenso
0.7 Acetato de bornilo Azul intenso
0.99 Alfa- y beta-pineno Violeta

DE LA SABILA, Aloe vera, Liliaceae

Introduccin

La droga la constituye el jugo desecado de las hojas el cual contiene 14-28% de
principios antracnicos tales como alona, aloesinas A y B, aloinsidos A y B, etc.

Extraccin
0.5 g. de droga pulverizada se extraen con 5 ml de Metanol, calentando durante 5
minutos sobre un bao de agua. El filtrado se aplica directamente sobre la placa
cromatogrfica.

Fase mvil: Acetato de etilo : Metanol : Agua
100 : 13.5 : 10

Reveladores: 1) Hidrxido de potasio/UV 365 nm

2) Poiietilnglicol PN/UV 365 nm

Rf SUSTANCIA REVELADOR COLOR
0.3 Aloinsidos A y B 1 y 2 Amarillo
0.47 Alona 1 y 2 Amarillo
0.95 Alo-emodina 1 Rojo
---
Aloesinas A y B
1
Azul fluorescente


9
DE FLORES DE SAUCO, Sambucus nigra, Caprifoliaceae

Introduccin

La droga la constituyen las flores, las cuales contienen glicsidos de quercetina 1.5-3%
como hipersido, isoquercitrina y rutina.

Extraccin
1 g. de droga pulverizada se extrae con 10 ml de metanol durante 5 minutos sobre un
bao de agua a aproximadamente 60 C. El filtrado se utiliza para la cromatografa.

Fase mvil: Acetato de etilo : Acido frmico : Acido actico : Agua
100 : 11 : 11 : 27

Reveladores: 1) R. productos naturales/UV 365 nm

2) Polietilnglicol para productos naturales/UV 365 nm

Rf SUSTANCIA COLOR
0.4 Rutina Amarillo
0.7 Isoquercitrina Amarillo
0.9 Acido cafeico Azul fluorescente

DE HOJAS DE TORONJIL, Melissa officinalis, Lamiaceae
Introduccin
Las hojas contienen 0.01-0.25% de aceite esencial, el cual est constituido
principalmente de citronelal 39%, citral 30%, citronelol, linalool, geraniol y cariofileno.

Extraccin

a) Por arrastre con vapor de agua

Segn el mtodo oficial de la Farmacopea Europea III pg. 62, con:
40 g. de muestra, 400 ml de agua, destilando a 2-3 ml/min durante
2 horas.


10
b) Extraccin con Diclorometano

Como se describi para la albahaca.
Fase mvil: Cloroformo
Revelador: Anisaldehdo/Acido sulfrico

Rf SUSTANCIA COLOR
0.7 Citronelal Azul intenso
0.45 Citral Azul violceo
0.25-0.4 Geraniol, linalool y
Citronelol
Azul violceo

DE RAICES DE VALERIANA, Valeriana officinalis, Valerianaceae

Introduccin
La droga la constituyen las races o rizomas que contienen los valepotriatos como:
valtrato, isovaltrato, IVDH_valtrato, didrovaltrato y acevaltrato, cuya concentracin
cambia de una variedad a otra. Adems contiene 0.25% de aceite esencial en los
rizomas frescos, el cual contiene valerenal, valeranona y cido valernico.

Extraccin
0.2 g. de droga pulverizada se extraen con 5 ml de diclorometano durante 5 minutos a
unos 60
0
C con agitacin ocasional. El residuo de la filtracin se lava con otros 2 ml de
diclorometano. Los extractos combinados se evaporan a sequedad, y el residuo de
disuelve en 0.2 ml de acetato de etilo. Se aplican en la cromatoplaca 10 microlitros de
esta solucin.
Fase mvil: Tolueno : Acetato de etilo 75 : 25
Revelador: HCl concentrado : Acido actico glacial 2 : 8
Rf SUSTANCIA COLOR
0.73 Valtrato/Isovaltrato Azul
0.65 Didrovaltrato Pardo
0.55 Acevaltrato Azul
0.4 IVDH-Valtrato Azul
<0.4 Valtrahidrinas Azul
Origen Productos de degradacin

11

Bibliografa

1. Domnguez, X. A., Mtodos de Investigacin Fitoqumica, Edit. Limusa, Mexico,
1973.
2. Wagner, H., Bladt, S., Zgainski, E. M., Plant Drug Analysis. A Thin Layer
Chromatography Atlas, Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-New York-Tokyo, 1984.
3. Evans, W. C., Farmacognosia Trease-Evans, 13 edic., Interamericana McGraw-Hill,
Madrid-Auckland-Bogot, 1991.
4. Harborne, J. B., Phytochemical Methods. A Guide to Modern Techniques of Plant
Analysis, Chapman & Hall, London-Weinheim-New York, 1998.
5. Gattuso, M. A., Gattuso, S. J., Manual de Procedimientos para el Anlisis de Drogas
en Polvo, UNR Editora, Cyted, Rosario (Argentina), 1999.
6. Ramrez, S., Fonnegra, R., Plantas Medicinales Aprobadas en Colombia,
Universidad de Antioquia, Medelln, 1999.
7. http://matematicas.udea.edu.co/~carlopez/laboratorio/pagelab.html
8. http://muiscas.udea.edu.co/~amart/indice.html
9. http://matematicas.udea.edu.co/~carlopez
10. Stahl, E., Thin Layer Chromatography
11. Martnez, A., Farmacognosia y Fitoqumica Experimental, Universidad de Antioquia,
Medelln, 1991.
12. Revistas especializadas: Phytochemistry, Planta Medica, Journal of Natural
Products, Journal of Food and Agricultural Chemistry, etc.
13. Bases de datos: Napralert
14. Repblica de Colombia, Ministerio de Salud, Decreto ley N 677, Ley del
medicamento de 1994.
15. Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials, World Health Organization,
Geneva, 1998.
16. Sharapin, N., Fundamentos de Tecnologa de Productos Fitoterapeticos, Roberto
Pinzn ed., Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnologa para el Desarrollo,
Cyted, Santaf de Bogot D. C., 2000.
17. CD Farmacognosia y Fitoqumica, versin 2.0, Alejandro Martnez y Gabriel J.
Arango, Universidad de Antioquia, Medelln, 2001.


12

Prctica 2
DESARROLLO DE UN METODO CUANTITATIVO
POR CCF-UV

CUANTIFICACION DE RUTINA EN FLORES DE SAUCO Y EN PARTES AEREAS DE
PENSAMIENTO

Introduccin
La rutina es un glicsido flavonoide que se encuentra ampliamente distribuido en
plantas y productos fitofarmacuticos. Esta amplia distribucin, junto con la facilidad en
su deteccin a nivel de laboratorio mediante la cromatografa en capa fina (CCF) y la
espectroscopia Ultravioleta (UV), la hacen un indicador adecuado para el
reconocimiento y el control de calidad de productos fitofarmacuticos terminados o sus
materias primas vegetales correspondientes.

Procedimiento
Preparar una solucin estndar de rutina en metanol de concentracin 100 ppm
Tomar 1.2 ml de solucin completar a 10 ml y determinar el espectro UV entre
200 y 400 nm.
Seleccionar la longitud de onda de trabajo.
Para obtener la curva de calibracin, tomar alcuotas de la solucin estndar y
llevar a 10 ml segn la tabla siguiente. Leer absorbancias de cada solucin a la
longitud de onda de trabajo. Realizar una curva de Absorbancia vs.
Concentracin en ppm.

Alcuota (ml) Volumen final
(ml)
Absorbancia a
360 nm
Concentracin de rutina
(ppm)
0.6 10.0
0.9 10.0
1.2 10.0
1.5 10.0
1.8 10.0

La grfica muestra una curva de calibracin obtenida experimentalmente con una
solucin estndar de rutina de concentracin aproximada a 100 ppm.

13
Curva de calibracin de estndar de rutina
y = 0,0352x + 0,037
R
2
= 0,9906
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
0 5 10 15 20 25
Concentracin en metanol (ppm)
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a

a

3
6
0

n
m

2. Extraccin de la droga
1 g de droga seca y en polvo (pesar con balanza de precisin 1 diezmilsima
de gramo), se extrae con 10 ml de metanol, con agitacin, calentamiento en
bao de agua a 60C, durante 10 minutos. Filtrar, lavar el filtrado dos veces con
10 ml de metanol (preferiblemente caliente), evaporar a sequedad y pesar el
extracto obtenido.

3. Separacin mediante CCF
Redisolver el extracto en 2 ml de metanol caliente y sembrar una banda en una
cromatoplaca de slica gel GF-254 (20x10 cm, 1 mm espesor de capa),
colocando al lado una aplicacin del estndar de rutina disuelto en metanol.
Evaporar a sequedad el resto de extracto y pesar para determinar por diferencia
el peso de extracto sembrado en CCF.
Desarrollar en la mezcla Acetato de etilo/Acido frmico/Acido actico/Agua
100:11:11:2.7.
La rutina se observa con un rf aproximado de 0.3, de color amarillo.
Retirar la placa luego de desarrollar, dejarla secar en un extractor de vapores y
analizarla con una lmpara UV a 254 nm.
Demarcar la banda correspondiente a la rutina en la muestra, raspar y extraer
con metanol caliente 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). Los filtrados se
concentran a sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol, medidos con
exactitud.


14
4. Lectura espectrofotomtrica y cuantificacin
Leer absorbancia a 360 nm y determinar concentracin mediante interpolacin
con la curva de calibracin.
Determinar el porcentaje de rutina en la muestra y comparar con lo reportado
para muestras autnticas.

CUANTIFICACION DE RUTINA EN UN JARABE DE SAUCO

Introduccin
La rutina es un glicsido flavonoide que se encuentra ampliamente distribuido en
plantas y productos fitofarmacuticos. Esta amplia distribucin, junto con la facilidad en
su deteccin a nivel de laboratorio mediante la cromatografa en capa fina (CCF) y la
espectroscopia Ultravioleta (UV), la hacen un indicador adecuado para el
reconocimiento y el control de calidad de productos fitofarmacuticos terminados o sus
materias primas vegetales correspondientes. En este caso se propone un mtodo de
cuantificacin en un jarabe.

Procedimiento
Preparar una solucin estndar de rutina en metanol de concentracin 100 ppm
200 y 400 nm.
longitud de onda de trabajo. Realizar una curva de Absorbancia vs.
Concentracin en ppm.

(ml)
Absorbancia a
360 nm
Concentracin
de rutina (ppm)
0.6 10.0
0.9 10.0
1.2 10.0
1.5 10.0
1.8 10.0

A partir de la informacin dada en la etiqueta por el fabricante tomar un volumen
equivalente a 1 g de droga seca y en polvo (medir exactamente con material
volumtrico). Evaporar a sequedad con ayuda de vaco y calentando a 60C. El
residuo se extrae con 10 ml de metanol, con agitacin, calentamiento en bao

15
de agua a 60C, durante 10 minutos. Filtrar, lavar el filtrado dos veces con 10 ml
de metanol (preferiblemente caliente), evaporar a sequedad y pesar el residuo
obtenido.

Redisolver el residuo en 2 ml de metanol caliente y sembrar una banda en una
colocando al lado una aplicacin del estndar de rutina disuelto en metanol.
Desarrollar en la mezcla Acetato de etilo/Acido frmico/Acido actico/Agua
100:11:11:2.7.
La rutina se observa con un rf aproximado de 0.3, de color amarillo.
analizarla con una lmpara UV a 254 nm.
Demarcar la banda correspondiente a la rutina en la muestra, raspar y extraer
con metanol caliente 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). Los filtrados se
concentran a sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol, medidos con
exactitud.


Figura 1. Espectro UV de rutina en metanol


16

CUANTIFICACION DE ANETOL EN SEMILLAS DE ANIS E HINOJO

Introduccin
El anetol es un fenilpropano que se encuentra distribuido en varias plantas aromticas.
Esta amplia distribucin, junto con la facilidad en su deteccin a nivel de laboratorio
mediante la cromatografa en capa fina (CCF) y la espectroscopia Ultravioleta (UV), la
hacen un indicador adecuado para el reconocimiento y el control de calidad de
productos fitofarmacuticos terminados o sus materias primas vegetales
correspondientes.

Procedimiento
Preparar una solucin estndar de anetol en metanol de concentracin 100 ppm
200 y 400 nm.
longitud de onda de trabajo. Las absorbancias deben estar en el rango de 0.3 a
0.8, si no es as se debern preparar diluciones calculando absorbancias de 0.3,
0.4, 0.5, 0.6 y 0.7. Realizar una curva de Absorbancia vs. Concentracin en
ppm.

(ml)
Absorbancia a
360 nm
Concentracin
de rutina (ppm)
10.0
10.0
10.0
10.0
10.0

1 g de droga seca y en polvo (pesar con balanza de precisin 1 diezmilsima
de gramo), se extrae con 10 ml de diclorometano, con agitacin, durante 15
minutos. Filtrar, lavar el filtrado dos veces con 10 ml de diclorometano, evaporar
a sequedad y pesar el extracto obtenido.


17
Redisolver el extracto en 1 ml de tolueno y sembrar una banda en una
colocando al lado una aplicacin del estndar de anetol disuelto en tolueno
diclorometano. Evaporar a sequedad el resto de extracto no sembrado y pesar.
Por diferencia determinar el peso de extracto sembrado.
Desarrollar en la mezcla Tolueno/Acetato de etilo 93:7.
analizarla con una lmpara UV a 254 nm. El anetol se observa a un Rf
aproximado de 0.95.
Demarcar la banda correspondiente al anetol en la muestra, raspar y extraer con
diclorometano 3 veces (porciones de 5 a 10 ml). Los filtrados se concentran a
sequedad y se redisuelven en 3 ml de metanol, medidos con exactitud.

Determinar el porcentaje de anetol en la muestra y comparar con lo reportado
para muestras autnticas.

Figura 2. Espectro UV de anetol en metanol

Control de Calidad FF

Hochgeladen von

Dokumentinformationen

Originalbeschreibung:

Originaltitel

Copyright

Verfügbare Formate

Dieses Dokument teilen

Dokument teilen oder einbetten

Freigabeoptionen

Stufen Sie dieses Dokument als nützlich ein?

Sind diese Inhalte unangemessen?

Copyright:

Verfügbare Formate

Control de Calidad FF

Hochgeladen von

Copyright:

Verfügbare Formate

CURSO DE CONTROL DE CALIDAD DE FITOFARMACOS, DICIEMBRE 3 AL 7, 2001

Gloria Amparo Valencia P., y Alejandro Martnez M.

Das könnte Ihnen auch gefallen