PRACTICA N 02

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

I. INTRODUCCION:
Los organismos vivos pueden obtener y gastar la energa ms rpidamente debido a la presencia de
catalizadores biolgicos llamados enzimas. Como sucede con los catalizadores inorgnicos, las
enzimas modifican la velocidad de una reaccin qumica sin afectar el equilibrio final y slo se requieren
pequeas cantidades para efectuar la transformacin de un gran nmero de molculas de sustrato.
Para poder mostrar la actividad enzimtica se debe tener presente fundamentalmente que la accin
cataltica de las enzimas es de carcter especfico; o sea, cada reaccin qumica debe ser catalizada
por una determinada enzima. El reactante o sustancia qumica que reacciona para dar un producto en
un sistema enzimtico se llama sustrato, habra entonces tantos sistemas enzimticos como sustratos
reaccionantes existen en un organismo vivo.
Debido a que solo se necesitan muy bajas concentraciones de enzima para catalizar una reaccin dada,
solo muy pocas enzimas pueden medirse directamente.
En general, la actividad de cualquier sistema enzimtico puede ser demostrada de dos maneras:
1. Verificando el sustrato no transformado (SUSTRATO RESIDUAL) despus de un tiempo
determinado de incubacin en condiciones especificas de pH y temperatura.
2. Verificando los productos liberados despus de un tiempo determinado de incubacin en
condiciones especificas de pH y temperatura.

La finalidad del presente trabajo experimental es determinar la actividad enzimtica, utilizando a la
enzima amilasa salival que tiene la capacidad de producir degradacin del almidn en maltosa
(Disacrido reductor) y algo de glucosa como ejemplo de un sistema enzimtico.

II. REACTIVOS A UTILIZAR:
- Solucin de almidn pH 6.0 al 1%.
- Cloruro de sodio solucin 0.1M
- Enzima al 1% (amilasa salival).
- cido Clorhdrico 0.05N
- Solucin yodada.
- Reactivo Folin Wu:
a. Solucin Cprica alcalina.
b. Solucin fosfomolbdica.

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento)

Armar el siguiente sistema :
TUBOS
COMPONENTES I II
Solucin de almidn 1% pH 6.0 5 ml. 5 ml.
Solucin de cloruro de sodio 0.1M 1 ml. 1 ml.
Agua destilada 4 ml. 3 ml.



Colocar los tubos al bao de agua a 37C por 5 minutos.
Agregar 1 ml. de enzima al tubo II.
Volverlos a colocar al bao de agua a 37C durante 10 minutos.

CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL.

De cada uno de los tubos de incubacin transferir 0.5 ml. de su correspondientes del cuadro
siguiente, inmediatamente de cumplidos los 10 minutos.
TUBOS
COMPONENTES I II
cido clorhdrico 0.05 N 5 ml. 5 ml.
De los tubos I y II: Etapa A 0.5 ml. 0.5 ml.
Solucin yodada 0.5 ml. 0.5 ml.

Mezclar, observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color
resultante.

CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA POR LOS PRODUCTOS FORMADOS (Folin WU)

TUBOS
COMPONENTES I II
De los tubos I y II: etapa A 1ml. 1ml.
Solucin Cprica alcalina 1ml. 1ml.
Hervir 8 minutos
Enfriar
Solucin fosfomolbdica 1ml. 1ml.
Agua destilada 2ml. 2ml.

Mezclar, observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color
resultante