Universidade Federal de Santa Maria

Centro de Cincias Naturais e Exatas

Departamento de Qumica
Setor de Qumica Analtica



Anlise Instrumental Prtica





Profa. Dra. Martha B. Adaime
Prof. Dr. Renato Zanella
(http:www.ufsm.br/larp)





2010
2
A. COLORIMETRIA

Confeco de uma curva analtica para anlise de KMnO
4
visando
determinao de Mn em ao ou rao animal

Para realizar esta dosagem voc deve, inicialmente, escolher o filtro ideal para
anlise colorimtrica de KMnO
4
e traar uma curva analtica para KMnO
4
(com oito
pontos) considerando a faixa de menor erro (15-65 %T) em colorimetria. A dosagem
colorimtrica na amostra real deve ser realizada aps a oxidao a on permanganato.
Nesta aula, voc realizar somente a escolha do filtro e a confeco da curva
analtica.

1. Escolha do filtro para colorimetria.

Usando uma soluo de KMnO
4
(0,0002 mol/L = 0,001 N)

preparada a partir de
uma soluo (0,02 mol/L = 0,1 N) previamente padronizada, escolha o filtro para
anlise de KMnO
4.


Tomar dois tubos que acompanham o aparelho. Em um dos tubos colocar gua
desionizada e no outro, soluo de KMnO
4
. Limpar as paredes do tubo com
papel absorvente.
Colocar o primeiro filtro no caminho ptico do colormetro.
Introduzir o tubo com gua desionizada (branco) no caminho ptico e ajustar o
100% de T (transmitncia).
Colocar o tubo com KMnO
4
e fazer a leitura da transmitncia.
Colocar o segundo filtro e ajustar o 100% de T com o branco, colocar o tubo
com KMnO
4
e fazer a leitura.
Proceder da mesma maneira com os demais filtros.
Examinar os resultados obtidos e indicar o filtro correto (ou o mais indicado).

3
2. Confeco da curva analtica.

Traar uma curva analtica para permanganato de potssio, com oito pontos,
dentro da faixa de menor erro (15 a 65% de transmitncia).

Preparar uma soluo estoque de KMnO
4
(0,0006 mol/L=0,6 mmol/L= 0,003 N).
Fazendo uso do valor de absorvncia (A) obtido com o filtro escolhido, calcular
as concentraes da soluo que apresenta 15% de T e da que apresenta 65%
de T.
Partindo de uma soluo estoque 0,0006 mol/L, calcular os volumes
necessrios desta soluo, para a preparao das solues padres dos
extremos da curva.
Calcular o incremento em volume necessrio para preparar as demais
solues. Este clculo depende do nmero de solues padres que se deseja.
Construir a tabela dos padres e calcular as concentraes finais das 8
solues.

N
sol.
Vol. sol. estoque
0,0006 mol/L (mL)
Vol final de gua
desionizada (mL)
Conc.
(mol/L)
%T T A
1 25
2 25
3 25
4 25
5 25
6 25
7 25
8 25

Separar 8 bales volumtricos de 25 mL e numer-los de 1 a 8.
Preparar, nestes bales, as diluies conforme a tabela acima.
Medir as transmitncias das 8 solues usando o filtro previamente escolhido
(sempre usar gua desionizada como branco para o ajuste do 100% de T).
Construir a curva analtica (A x c) em papel milimetrado e no Excel

.
4
B. COLORIMETRIA

Dosagem Colorimtrica de Fe em ao e/ou medicamento.

Para realizar esta dosagem voc deve traar uma curva analtica para o
complexo [Fe(C
12
H
8
N
2
)
3
2+
] e escolher o melhor filtro para a anlise deste complexo.
A dosagem colorimtrica deve ser comparada com a dosagem por potenciometria que
ser realizada no experimento G.
Obs.: Cada reativo utilizado deve ter seu uso justificado.

Mtodo da 1,10-Fenantrolina.
O Fe(II) reage com a 1,10-fenantrolina para formar o complexo de cor
vermelho-alaranjado [( C
12
H
8
N
2
)
3
Fe
2+
]. No intervalo de pH de 2 a 9, o complexo
estvel por longos perodos.
O Fe(III) pode ser reduzido com cloreto de hidroxilamnio ou com hidroquinona.

Parte Experimental:

Preparo dos reativos: (observe se estes reativos j esto prontos)

1) Soluo padro de Fe
2+
: Pesar exatamente 0,7 g de almen ferroso (sulfato de ferro (II) e
amnio) padro primrio [Fe(SO
4
)
2
(NH
4
)
2
].6H
2
O e transferir quantitativamente para um balo
volumtrico de 500 mL. Acidificar com gotas de cido sulfrico, dissolver e completar o
volume com gua desionizada. Nesta soluo 1 mL = 0,2 mg de Fe (II).

2) Soluo padro diluda de Fe
2+
: Pipetar 10 mL de sol. padro de Fe
2+
para um balo
volumtrico de 100 mL e completar o volume com gua desionizada. Nesta soluo 1 mL =
0,02 mg de Fe(II).

3) Soluo de cloridrato de hidroxilamina 5% (m/v): Dissolver 5 g de NH
2
OH.HCl em 100
mL de gua destilada.

4) Soluo de acetato de sdio 2 mol/L: Pesar cerca de 41 g de acetato de sdio anidro,
transferir para balo de 250 mL e completar o volume com gua desionizada.

5) Soluo a 0,25% (m/v) de 1,10-fenantrolina: Pesar 0,25 g de 1,10-fenantrolina, transferir
para balo de 100 mL, adicionar cerca de 50 mL de gua desionizada, 5 gotas de cido ntrico
concentrado, agitar e completar o volume com gua desionizada.

OBS.: Para evitar contaminao, tomar o cuidado de usar uma pipeta para cada
reagente que no deve ser pipetado diretamente do frasco.
5
Confeco da reta de calibrao:

1) Numerar 6 bales volumtricos de 25 mL.

2) Adicionar nos bales de nmeros 2, 3, 4, 5 e 6, os seguintes volumes de soluo
padro de ferro contendo 0,02 mg/mL de Fe (II), de acordo com a tabela abaixo:

3) Fazer as seguintes adies, em todos os bales, inclusive no branco, na ordem
indicada:
2 mL de soluo aquosa de cloridrato de hidroxilamina a 5% (m/v).
2 mL de soluo aquosa de de acetato de sdio 2 mol/L.
4 mL de soluo de 1,10-fenantrolina a 0,25% (m/v).

4) Completar os volumes dos 6 bales com gua desionizada. Deixar as solues em
repouso por 10 minutos antes de fazer as leituras.

5) Escolher o filtro com a soluo do balo de n 3, fazendo uso da soluo do balo
de n 1 como branco.

6) Medir as absorbncias de todas as solues usando a soluo do balo de n 1
como branco.

7) Traar a curva analtica (A x conc.) em papel milimetrado e no Excel

.

N do
Balo
Vol. sol. 0,02 mg/mL
(sol. diluda de Fe (II))
Concentrao
(mg/mL)

T%

T

A
1 0,0
2 3,0
3 5,0
4 7,0
5 9,0
6 11,0

6
Aplicao: Determinao da Concentrao de Ferro em Medicamentos

Amostra: Antianmicos a base de sulfato ferroso na forma lquida

1) Medir 2 mL do medicamento em pipeta volumtrica.
2) Transferir para balo volumtrico de 50 mL e adicionar, na ordem indicada:
- 2 mL cloridrato de hidroxilamina a 5%.
- Acetato de sdio 2 mol/L at que o pH esteja entre 2-9 (aproximadamente 2 mL).
- 4 mL de soluo de 1,10-fenantrolina.
3) Completar o volume com gua desionizada.
4) Deixar em repouso por 10 minutos.
5) Da soluo acima preparada medir com pipeta volumtrica 2 mL e transferir para
um balo volumtrico de 10 mL.
6) Completar o volume com gua desionizada.
7) Fazer a leitura no colormetro em %T com o filtro adequado. Passar para
absorvncia e obter a concentrao atravs da curva analtica.
8) Calcular o resultado em mg de ferro por mL de medicamento.

Obs.: Voc pode comparar seu resultado com aquele obtido no mtodo
potenciomtrico (Experimento G).

7
C. ESPECTROFOTOMETRIA

Neste experimento voc deve verificar:
se Cr(NO
3
)
3
.9H
2
O, na faixa de concentrao de 0,01 a 0,05 mol/L, obedece a
Lei de Beer.
qual o melhor comprimento de onda para se trabalhar com esta substncia
espectrofotometricamente?

LEI DE BEER

A lei fundamental da absorciometria a Lei de BEER-BOURGUER-LAMBERT,
comumente chamada de Lei de BEER. Esta lei relaciona a absorvncia (A) com a
concentrao (c) da espcie absorvente, de acordo com: A = a . b . c
Onde: a= absortividade.
b= comprimento do percurso ptico (em cm).
c= concentrao da espcie absorvente (g/L).

Quando a concentrao da espcie absorvente for dada em mol/L, "a" deve ser
substituda por "" que a absortividade molar. O valor da absortividade molar ""
caracterstico da espcie absorvente em um solvente particular e a um comprimento
de onda particular e independente da concentrao e do comprimento do percurso
ptico.
O comportamento de um sistema absorvente frente a Lei de Beer pode ser
verificado mediante a representao da absorvncia em funo da concentrao para
um valor fixo de percurso ptico. A obedincia do sistema Lei de Beer denotada
por uma linha reta que passa pela origem, caso contrrio, ou seja, uma relao no
linear da absorvncia com a concentrao, denota um desvio na Lei de Beer.

Objetivo do experimento:
Demonstrar o procedimento para verificar se uma soluo obedece a Lei de
Beer e em qual comprimento de onda isto ocorre.

8
Parte Experimental:

1) Obteno do espectro de absoro de uma soluo de nitrato de cromo 0,050
mol/L. Medir a absorbncia (A) desta soluo de 400 a 650 nm, de 10 em 10 nm.

2) Confeco das curvas analticas:

a) Preparar solues com as seguintes concentraes de nitrato de cromo: 0,010;
0,020; 0,030; 0,040 e 0,050 mol/L.
b) Fazer as leituras de absorvncia de cada uma das solues, nas seguintes
regies ( ) do espectro de absoro obtido para o nitrato de cromo:
- em uma regio de mxima absoro ( max)
- em uma regio de mnima absoro ( min)
- em uma poro ascendente ( asc)
- em uma poro descendente ( desc)

c) Tabelar as leituras de absorvncia:

Conc.
(mol/L)
max
(....... nm)
min
(....... nm)
asc
(....... nm)
desc
(....... nm)
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05

d) Desenhar grficos da Lei de Beer (A x conc.) para cada conjunto de dados, usando
o mesmo papel milimetrado. Tambm, no programa Excel

desenhar grficos
sobrepostos.

Obs.: Para decidir o melhor compriomento de onda para se trabalhar com esta
substncia, observar que a faixa de absorbncia onde trabalha-se com menor
erro de 0,2 a 0,8 A.
9
D. ESPECTROFOTOMETRIA

Determinao Espectrofotomtrica do pKa de um Indicador.

A variao da cor de um indicador cido-base em funo do pH, permite
determinar o valor do seu pKa espectrofotometricamente.
Quando se faz o espectro de absoro de um indicador em sua forma cida,
outro espectro do indicador na sua forma bsica e ainda outro espectro do indicador
na sua forma neutra em um mesmo grfico, verifica-se que todos estes espectros se
cortam em um ponto, que chamado PONTO ISOSBSTICO ou ISOABSORTIVO.
A seguir, escolhem-se dois comprimentos de onda situados esquerda e a
direita do ponto isosbstico. Nestas regies, se situam a absorvncia mxima da
forma cida e a absorvncia mxima da forma bsica, respectivamente.
Empregando-se os dois valores de , constrem-se em um mesmo grfico duas
curvas A x pH. O ponto de encontro das duas curvas corresponde a uma concentrao
igual da forma cida e alcalina, indicando o pH que corresponde ao pKa.

Objetivo do Experimento: Determinar o pKa do indicador azul de bromotimol, por
espectrofotometria na regio do visvel.

Parte Experimental:
Obteno dos espectros de absoro do azul de bromotimol em pH cido,
neutro e alcalino (de 450 a 650 nm de 10 em 10 nm)
- Indicador na forma cida (pH= 1): em balo de 25 mL, colocar 1 mL de soluo 0,1%
de azul de bromotimol, 12 gotas de soluo 4 mol/L de HCl e completar o volume com
gua desionizada. Verificar o pH e anotar a cor da soluo.
pH ........., cor soluo: .........................................

- Indicador em pH neutro em balo de 25 mL, colocar 1 mL de soluo 0,1% de azul
de bromotimol, 5 mL de fosfato de sdio dibsico 0,1 mol/L e 5 mL de soluo de
fosfato de potssio monobsico 0,1 mol/L M completando o volume com gua
desionizada. Verificar o pH e anotar a cor da soluo.
pH ........., cor soluo: .........................................

- Indicador na forma bsica (pH= 13): em balo de 25 mL, colocar 1 mL de soluo
0,1% de azul de bromotimol, 12 gotas de soluo de NaOH 4 mol/L e completar o
volume com gua desionizada. Anotar o pH e a cor da soluo.
pH ........., cor soluo: ........................................

OBS: observe que estas solues so a 1, 5 e 10 da tabela a seguir, portanto
no necessrio prepar-las novamente.
10
Construo das curvas A x pH.

a) Numerar 10 bales de 25 mL e adicionar as solues conforme a seguinte tabela.
Completar os volumes com gua desionizada, agitar, verificar o pH e anotar.

Sol.
n.
Vol. Indic.
0,1%
Vol. NaOH
4 mol/L
V. HCl
4 mol/L
Vol. Na
2
HPO
4
0,1 mol/L
Vol. KH
2
PO
4
0,1 mol/L

pH
A
.... nm
A
.... nm
1 1 mL 12 gotas
2 1 mL 5 mL
3 1 mL 1 mL 5 mL
4 1 mL 5 mL 10 mL
5 1 mL 5 mL 5 mL
6 1 mL 10 mL 5 mL
7 1 mL 5 mL 1 mL
8 1 mL 10 mL 1 mL
9 1 mL 5 mL
10 1 mL 12 gotas

b) Fazer a leitura das absorvncias de cada uma destas solues nos 2 comprimentos
de onda selecionados.

c) Construir um grfico em papel milimetrado e no Excel

colocando em abscissas o
pH e em ordenadas as absorbncias de cada uma das solues. O ponto em que a
curva da forma cida corta a curva da forma bsica fornece o pH, que permite
calcular o pKa.


d) Comparar com o valor de pKa apresentado pela literatura.

11
E. POTENCIOMETRIA

Dosagem de cido Acetilsaliclico (AAS) em medicamentos por potenciometria.

Atravs de medidas potenciomtricas, proceda a titulao de uma soluo
contendo o medicamento e determine a concentrao do cido acetilsaliclico (AAS)
no medicamento.
Esta titulao deve ser feita em triplicata e os dados convenientemente
tratados. Para cada titulao construir as curvas:
pH x V (mL)

pH /V x V (mL)

Determinar o volume no ponto final da titulao por via grfica atravs da mdia
dos trs volumes obtidos e calcular a concentrao de AAS no medicamento.
Obs.: Faa a comparao do valor obtido com o do rtulo do medicamento.

Parte Experimental:

1. Coloque um comprimido de AAS (infantil) em um gral e triture-o com auxlio de um
pistilo.
2. Transfira para um bquer e adicione 50 mL de etanol e agite para dissolver.
3. Adicione 150 mL de gua destilada e uma barra de agitao magntica.
4. Calibre o pHmetro com um tampo de pH= 9,0.
5. Lave o eletrodo e coloque-o imerso na soluo a ser titulada.
6. Coloque soluo padro de NaOH em uma bureta de 50 mL, sem esquecer de
anotar a concentrao.
7. Proceda a titulao, titulando de 1 mL em 1 mL para localizar o ponto de
equivalncia (P.E.)
8. Usando o volume do P.E. como guia, titule uma nova soluo, adicionando
incrementos de 0,5 mL prximo ao P.E.
9. Repetir o item 8.
10. Tabelar os resultados.
11. Construir as curvas, em papel milimetrado e no Excel

:
pH x V (mL).
pH / V x V (mL)
12. Calcular a concentrao de AAS no comprimido.
12
F. POTENCIOMETRIA

Dosagem de Cl
-
por potenciometria de precipitao

Esta dosagem deve ser realizada atravs de uma titulao potenciomtrica de
precipitao.
A amostra deve ser titulada com soluo de AgNO
3
0,1 mol/L usando um
eletrodo indicador de Ag e um eletrodo de calomelano saturado como referncia e
uma ponte salina de KNO
3
em gar. Ou ento, um eletrodo de Ag combinado (que
possui um indicador internamente).
Esta titutlao deve ser feita em triplicata e os dados convenientemente
tratados.

Parte Experimental:

1. Pesar 0,15 g de amostra de sal de cozinha e dissolver em 250 mL de gua
desionizada ou 10 mL de soro fisiolgico em 100 mL de gua desionizada.

2. Colocar o agitador magntico no bquer, conectar o eletrodo de prata combinado.

3. Coloque AgNO
3
0,1 mol/L padro na bureta, observando sua real concentrao.

4. Ligue o agitador e adicione na bureta mL por mL de titulante, esperando estabilizar.
Faa a leitura do E em mV.

5. Detecte o salto potenciomtrico e repita a titulao adicionando de 0,5 em 0,5 mL
nas imediaes do ponto de equivalncia.

6. Tabele os resultados e construa os grficos:

E (mL) x V (mL)
E / V (mL) x V (mL)

7. Determine a concentrao de Cl
-
na amostra em g%.

13
G. POTENCIOMETRIA

Dosagem de Ferro em uma amostra real, por potenciometria.

Atravs da utilizao de um eletrodo combinado para oxidao-reduo e/ou
um eletrodo de Pt como indicador e um eletrodo de calomelano saturado (ECS)
como referncia, proceder a titulao de uma amostra contendo Fe
2+
usando como
titulante K
2
Cr
2
O
7
.
A titulao deve ser feita em triplicata e os dados convenientemente tratados.
O volume do ponto final da titulao deve ser obtido graficamente, atravs das
curvas: E/V x V (mL), usando a mdia dos volumes obtidos em cada uma delas.

Observao: Voc pode dosar Fe
2+
em medicamento e comparar seu resultado com
aquele obtido no mtodo colorimtrico (B).

Titulao Potenciomtrica de Oxidao-Reduo.

Um eletrodo inerte (por exemplo, de platina), responder a concentrao
relativa de ons frrico/ferroso em soluo, de acordo com a equao Nernst:

E = E
o
Fe
3+
/Fe
2+
+ 0,059 . log [Fe
3+
]
[Fe
2+
]

Ao titular-se uma soluo contendo ons Fe
2+
com soluo de um oxidante
(como dicromato), o eletrodo de platina tomar o potencial do sistema frrico/ferroso
at o ponto de equivalncia e a seguir, o potencial do sistema titulante.

Objetivo: Determinar a concentrao de uma soluo de Fe
2+
, por potenciometria,
usando o oxidante dicromato de potssio como titulante.
14

Parte Experimental:
1) Preparar a amostra: Medir 3 mL sulfato ferroso na forma lquida, transferir para um
bquer e diluir com 90 mL de gua desionizada. Adicionar 10 mL de cido sulfrico
1:4.
Preparar o titulante: soluo aquosa de K
2
Cr
2
O
7
0,1 N.

2) Conectar o eletrodo combinado de Platina.

3) Ligar o agitador e iniciar a titulao adicionando soluo de dicromato de potssio
0,1 N da bureta, de 1 mL em 1 mL e a cada adio, fazer a leitura em E(mV).

5) Detectar o salto potenciomtrico e repetir a titulao adicionando de 0,5 em 0,5 mL
nas imediaes do ponto de equivalncia.

6) Repetir o item 5.

6) Tabelar os resultados e construir os grficos:
E (mV) x V (mL) do titulante
E/V x V (mL) do titulante

7) Determinar a concentrao de Fe
2+
na amostra empregando a mdia dos volumes
encontrados nos grficos.

15
H. CONDUTOMETRIA

Determinao das Constantes de Ionizao de cidos Orgnicos por
Condutometria Direta

Na condutometria direta a clula de imerso, usada para a medida da
condutncia especfica, contm dois eletrodos em posies fixas que devem ser
mergulhados em soluo.
Como a condutividade varia de um eletrlito forte para um fraco, com o intuito
de comparar a condutncia de diferentes eletrlitos foi introduzido o conceito de
condutncia equivalente (
o
)

Condutncia equivalente total a soma das condutncias inicas em diluio
infinita.

Objetivo: Determinao da constante de ionizao de cidos orgnicos (actico
e tricloroactico) por condutometria.

Parte Experimental:

1) Mergulhar a clula condutomtrica na soluo, ajustando previamente no aparelho
a constante da clula, quando necessrio. Realizar a leitura da condutncia
especfica (k).
2) Determinar a condutncia equivalente (
eq
) a partir da relao:
1000 . k

eq
= ------------ onde C= concentrao da amostra em N
C


eq

3) Determinar o grau de ionizao: = ---------

o


o =
O
+
+
O
-
so tabelados (soma das condutividades do ction e do nion).
Obs. Obter da literatura os valores de condutividade inica (com a unidade) para os
ons envolvidos neste experimento.

4) Calcular o Ka HA sabendo-se que:

[H
+
] [ A
-
] ( C. ) . ( C . )
Ka HA = ----------------- = ---------------------------
[HA] C ( 1- )
16
I. CONDUTOMETRIA

Titulao Condutomtrica de uma mistura de cidos

Neste experimento voc vai determinar a concentrao de dois cidos atravs
de uma titulao condutomtrica de neutralizao.

A condutncia da soluo deve ser acompanhada no decorrer da titulao e o
ponto final, verificado graficamente (a curva da titulao apresenta dois pontos de
interseco, o primeiro assinalando a neutralizao do cido forte e o segundo a do
cido actico).

Parte Experimental:

1) Transfira 50 mL de uma mistura em partes iguais do cido clordrico e cido actico
0,01 mol/L para um bquer de 250 mL e dilua com 50 mL de gua desionizada.

2) Faa a medida da condutncia da soluo.

3) Coloque a soluo padro de hidrxido de sdio 0,1 mol/L em uma bureta.

4) Proceda a titulao titulando em incrementos de 0,5 mL, medindo a condutncia
aps cada adio.

5) Trace um grfico relacionando condutncia e volume de titulante.

6) Fazer o grfico x V (mL) do titulante em papel milimetrado e no Excel

,
determinando por via grfica os pontos finais da titulao, o primeiro relacionado ao
cido forte e o segundo, ao cido fraco.

7) Determinar a concentrao dos cidos na soluo.

8) Buscar na literatura os valores de condutividade inica molar (com a unidade) para:
H
+
Cl
-

CH3COO
-
Na
+


-
OH
17
J. CONDUTOMETRIA

Dosagem de Cl- por condutometria.

Neste experimento voc vai dosar Cl
-
em uma amostra, atravs de uma titulao
condutomtrica de precipitao.
A condutncia da soluo deve ser acompanhada no decorrer da titulao e o
ponto final da titulao verificado graficamente (na interseco dos dois segmentos da
reta).
O volume do ponto final permite o clculo da concentrao de Cl
-
na amostra.
Esta titulao deve ser feita em triplicata e os dados convenientemente tratados.

Parte Experimental:

1) Transfira 50 mL de uma soluo de cloreto de sdio aproximadamente 0,01 mol/L
para bquer de 250 mL.
2) Adicione 50 mL de gua desionizada e uma barra de agitao magntica.
3) Faa a medida da condutncia desta soluo.
4) Coloque a soluo padro de nitrato de prata 0,1 mol/L em uma bureta.
5) Proceda a titulao, titulando em incrementos de 0,5 mL, medindo a condutncia
aps cada adio.
6) Trace um grfico relacionando condutncia e volume titulante.
7) Detecte o ponto final da titulao graficamente e calcule a concentrao da
soluo.


Observaes:
1. No deixar a clula todo tempo em contato com a soluo para evitar depsitos
do precipitado de AgCl na clula.
2. No h a necessidade de usar correo atravs do fator de diluio, pois o
titulante tem concentrao mais de dez vezes maior que a do titulado.
18

K. CROMATOGRAFIA GASOSA

Identificao e quantificao de lcoois superiores em aguardente de cana

Materiais e equipamentos:

Preparar uma soluo padro contendo 2,6 mg de n-propanol, isobutanol e 3-
metil-1-butanol (lcool isoamlico) e 2,0 mg de 2-pentanol (padro interno) em etanol
43% (v/v). Optou-se pela utilizao de etanol 43% (v/v), por ser este o teor alcolico
mais comumente encontrado em aguardentes. A massa de 2,6 mg de cada lcool
correspondente a 180 mg/100 mL de lcool 100% (expresso em lcool isoamlico), a
concentrao mxima recomendada pela legislao do estado de So Paulo, em
bebidas destiladas.
Usar aguardente de cana, preferencialmente de fabricao caseira. Preparar a
amostra adicionando 1 mL de uma soluo 0,2% (p/v) de 2-pentanol em etanol 43%
(v/v) a 9 mL da aguardente. Dessa maneira tem-se a mesma concentrao do padro
interno na amostra e no padro, ou seja, 0,2 mg/mL.
Utilizar uma coluna de ao inox (0,47 x 300 cm) recheada com Hallcomide M 18
OL 15% em Chromosorb W, ou outra fase estacionria com polaridade similar. Utilizar
nitrognio como fase mvel.
As condies de operao do cromatgrafo a gs sugeridas para este
experimento so:
- Temperatura da coluna= 100 C
- Temperatura do injetor= 130 C
- Temperatura do detector= 150 C
- Vazo do gs de arraste= 50 mL/min

Procedimento:
Uma vez atingidas as condies de operao do cromatgrafo, injetar 5 L da
soluo padro. Repetir as injees, at obter 3 cromatogramas.
A seguir, injetar 5 L da amostra de aguardente contendo o padro interno.
Repetir as injees at obter 3 cromatogramas similares.
Comparar os tempos de reteno observados nos cromatogramas da soluo
padro e da amostra, e identificar os lcoois superiores presentes na amostra.
19
Calcular as reas dos picos correspondentes aos lcoois e padro interno e
fazer a mdia das reas de cada composto. Utilizando a mdia das reas de um dos
picos do cromatograma da soluo padro e a rea do padro interno, determinar a
constante K:

A
i
/ A
p
= K C

onde, A
i
a rea do composto que se deseja determinar a concentrao na amostra,
A
p
a rea do padro interno e C a concentrao do composto de interesse na
soluo padro (mg/mL).
Utilizar o cromatograma obtido na injeo da amostra para o clculo de A
i
e A
p
.
Utilizando esta frmula e a constante K, j determinada a partir da soluo padro,
calcular a concentrao de cada um dos lcoois superiores na amostra analisada
(mg/100mL).
20
L. Otimizao Cromatogrfica da anlise e quantificao de uma mistura de
hidrocarbonetos

Materiais e equipamentos:

Preparar uma soluo padro de trs (ou mais) compostos alifticos ou
aromticos (por ex., ciclohexano, benzeno e tolueno) na razo 1:1:1. Utilizar uma
coluna de ao inox (0,4 x 200 cm) recheada com fase estacionria de leo de silicone
(SE-30 ou similar), 15% sobre Chromosorb W (malha de 80-120).
Utilizar uma fase mvel consistente com o detector a ser empregado, isto ,
nitrognio para o detector por ionizao em chama e hidrognio ou hlio para o
detector por condutividade trmica.
Empregar um cromatgrafo a gs apropriado e seguir cuidadosamente as
instrues do fabricante quanto ao aquecimento do aparelho, acerto da(s) vazo(es)
do(s) gs(es) e acerto do registrador.
As condies iniciais de operao do cromatgrafo a gs so:

- Temperatura da coluna= 60 C
- Temperatura do injetor= 130 C
- Temperatura do detector= 150 C
- Vazo do gs de arraste= 40 mL/min

Procedimento:

Aps atingidas as condies de operao do cromatgrafo, injetar 1 L de cada
um dos componentes separadamente e, a seguir, a mistura 1:1:1. Escolher uma
atenuao que permita ter todos os picos dentro da escala do papel do registrador.
Procurar ter os maiores picos possveis, sem que sejam necessrias mudanas da
atenuao durante a corrida cromatogrfica.
Medir ou calcular, a partir dos cromatogramas obtidos, t
R
, R
S
(resoluo entre
os picos adjacentes) e n (nmero de pratos tericos).
Repetir o teste, mudando a temperatura da coluna, mantendo a vazo do gs
de arraste em 30 mL/min. O tempo necessrio de condicionamento da coluna de
cerca de 20 minutos. A partir destas observaes, determinar qual a temperatura
tima, para se obter uma resoluo igual ou maior a um para todos os componentes
da amostra, com o mesmo nmero de pratos tericos.

21

M. CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA

Determinao de cafena em vrias bebidas

Materiais e equipamentos:

Preparar uma soluo estoque, em gua destilada, contendo 1000 mg/L de
cafena (previamente seca em estufa a 110 C durante uma hora) e, a partir desta,
preparar 4 ou 5 solues aquosas padres, contendo de 1 a 10 mg/L de cafena.
Preparar a amostra a partir de uma quantidade tpica para consumo de uma
bebida contendo cafena (ch, coca cola, caf, energticos, etc.). Degaseificar as
bebidas carbonatadas por agitao, vcuo ou ultra-som. Filtrar a quantidade
selecionada de bebida e diluir com a fase mvel, ou gua. Sendo que a diluio
depender da quantidade de cafena na amostra, mais de uma diluio deve ser feita
(por ex., 1:5, 1:10 e 1:20).
Utilizar uma mistura de metanol/gua (50:50, v/v) como fase mvel e uma
coluna contendo recheio do tipo fase reversa (C-18 ou C-8).
Empregar um cromatgrafo a lquido equipado com bomba e detector por
absorbncia no ultravioleta.
As condies sugeridas para operao do cromatgrafo so:
- Vazo da fase mvel = 1,2 mL/min
- Comprimento de onda do detector = 275 nm
- Volume de injeo (loop) = 20 L


Procedimento:

Condicionar a coluna com a fase mvel (cerca de 15 minutos) e, a seguir,
injetar 20 L de cada soluo padro e amostra. A ordem de injeo aleatria e as
injees devem ser repetidas at obter trs cromatogramas similares de cada soluo.
Calcular as reas (ou medir as alturas) dos picos de cafena e, a partir das
mdias, obter a curva analtica ou de calibrao (mtodo da calibrao externa) para
quantificar a cafena nas amostras.
22

N. CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA

Anlise de analgsicos

Materiais e equipamentos:
Preparar 50 mL de uma soluo de metanol contendo cido acetilsaliclico (86,0
mg), salicilamida (87,8 mg), cafena (28,1 mg) e fenacetina (11,4 mg).
Preparar a amostra triturando um comprimido que contenha um ou mais dos
compostos acima e adicionando alguns mL de metanol. Filtrar a suspenso para um
frasco volumtrico de 10 mL e completar o volume com metanol. Filtrar a suspenso
para um frasco volumtrico de 10 mL e completar o volume com metanol.
Preparar tampes fosfato 0,025 mol/L a pH 5, a pH 7 e a pH 9 dissolvendo
quantidades apropriadas de Na
2
HPO
4
e Na
2
H
2
PO
4
em gua destilada e ajustar o pH
com NaOH ou H
3
PO
4
, atravs de um pHmetro.
A partir do tampo a pH 7, preparar fases mveis contendo 30, 40, 50 e 60%
(v/v) de metanol. Com os tampes a pH 5 e pH 9 preparar fases mveis com 40 e
50% (v/v) de metanol. Todas as solues devem ser filtradas antes do uso.
Utilizar uma coluna contendo recheio tipo fase reversa (C-18 ou C-8).
Empregar um cromatgrafo a lquido contendo uma bomba e detector por
absorbncia no ultravioleta. As condies sugeridas para operao do cromatgrafo
so: vazo da fase mvel= 2 mL/min; = 254 nm e volume do amostrador= 20 L.

Procedimento:
Condicionar a coluna com a fase mvel contendo 60% de metanol e 40% de
tampo fosfato 0,025 mol/L a pH 7 (cerca de 15 minutos) e, a seguir, injetar 20 L da
soluo padro obtendo-se um cromatograma.
Repetir este procedimento com as outras fases mveis preparadas, lembrando
de condicionar a coluna por 15 minutos cada vez que a fase mvel trocada.
As composies qumicas diferentes dos compostos levam a diferentes
interaes. Selecionar a fase mvel que proporciona a melhor separao como
mostra a figura abaixo, e confirmar a identidade dos picos, injetando os solutos, em
metanol, individualmente.
Usando a fase que deu melhores resultados, injetar 20 L da amostra do
comprimido, identificando os analgsicos presentes. A quantificao pode ser feita
comparando-se as reas dos picos da amostra e da soluo padro, corrigindo os
volumes usados.
23
O. FOTOMETRIA DE CHAMA

Dosagem de potssio em adubo.

Obter, inicialmente, uma curva padro para K (%Emisso x conc. de K)
utilizando KCl padro. Logo aps, proceder a determinao em um adubo folhar. Trate
os dados obtidos convenientemente.

Parte Experimental:

Obteno da curva analtica:
1. Preparar 5 solues de KCl padro contendo 1,0; 2,5; 5,0; 7,5 e 10,0 mg/L de K,
respectivamente.
2. Ajustar o zero e o 100% de emisso do aparelho com gua desionizada de emisso
e com a soluo mais concentrada (no caso, 10,0 mg/L), respectivamente.
3. Fazer a leitura da % de Emisso de cada uma das solues, tendo o cuidado de
acertar o 100% de Emisso com a soluo mais concentrada, a cada leitura.
4. Construir a curva analtica (de calibrao) %E x mg/L de K.

Determinao de K em fertilizante:
1. Usar como amostra um fertilizante folhar sob forma de soluo. Fazer uma diluio
de 1:10.000 se o fertilizante contiver cerca de 5% de K.
2. Fazer a leitura da amostra e levar curva de calibrao obtida na primeira parte
deste trabalho. Antes da medio, ajustar o zero e o 100 como no item 2 da
primeira parte.
3. Calcular a quantidade de potssio existente no fertilizante em mg/kg e g% de K.

Observaes:
O compressor de ar deve ser ligado antes da abertura da vlvula do combustvel.
Para apag-la, desligar antes o gs combustvel, e somente aps a extino da
chama, desligar o compressor de ar.
A altura (temperatura) da chama deve ser regulada pelas presses adequadas dos
gases. As leituras devem ser feitas 30 s aps o incio da nebulizao. No deixar a
chama ardendo no "vazio" (sem amostra ou gua).
Para cada medio ajustar o 0 e o 100 % de Emisso como no item 2 e realizar 3
leituras consecutivas, intercalando-as com nebulizao de gua destilada. O valor
de E% deve ser a mdia das trs leituras realizadas.
24
P. FOTOMETRIA DE CHAMA

Dosagem de sdio e potssio no leite por fotometria de chama.

A tcnica baseia-se na separao do soro do leite, por coagulao das
protenas e gorduras com cido tricloroactico. A seguir, determinam-se os teores de
sdio e potssio no soro por fotometria de chama utilizando-se o filtro adequado.

Parte Experimental:
Reagentes e solues: Soluo aquosa de cido tricloroactico a 20% (m/v). A partir
desta soluo, preparar a soluo 5% (m/v); Soluo de NaCl contendo 100 mg/L em
sdio; Soluo de KCl contendo 100 mg/L em potssio.

Tcnica: Para um tubo de centrfuga adicione:
20 mL de leite e 10 mL de soluo aquosa de cido tricloroactico a 20% (m/v) ;
Centrifugue at a clarificao da soluo e prepare em seguida duas amostras:
uma para a determinao de sdio (A) e outra para a determinao de potssio (B).

Para a determinao de sdio - amostra A: Retire 5 mL do lquido aquoso
sobrenadante, resultante da centrifugao, e coloque-o num balo de 100 mL
completando com gua desionizada.

Para a determinao de potssio - amostra B: Retire 2 mL do lquido aquoso
sobrenadante, resultante da centrifugao, para um balo de 250 mL e complete com
gua desionizada.

Curvas Analtica:
Sdio: 6 bales de 100 mL contendo respectivamente: 0,0 mL (branco), 2,0, 4,0, 6,0,
8,0 e 10,0 mL da soluo estoque de sdio, mais 10 mL de cido tricloroactico a 5%
(m/v). Completar os volumes com gua desionizada.

Potssio: 6 bales de 100 mL contendo respectivamente: 0,0 mL (branco), 1,0, 2,0,
4,0, 6,0 e 8,0 mL da soluo estoque de potssio, mais 2 mL de cido tricloroactico a
5% (m/v) em cada balo. Completar os volumes com gua desionizada.

Efetuar as leituras das solues analticas, construir as curvas analticas,
analisar as amostras e efetuar os clculos expressando os resultados em mg/L.

Sdio e potssio existem no leite na forma de cloretos em concentraes da
ordem de 500 mg/L para sdio e 1500 mg/L para potssio. Quando os animais
estiverem doentes, o teor de sdio no leite aumenta, podendo chegar a 900 mg/L.
25
Confecdo de Srficos no Microsoft EceI

1" Pusso: Insiro os voIores o serem ufiIi;odos no grofico do seguinfe
moneiro: Os voIores que devem represenfor o "Eixo x" no "CoIuno A" e
os que devem consfor no "Eixo y" no "CoIuno 8".

Z" Pusso: Poro inicior o confeco do 0rofico, cIique em "Inserir" no
borro de ferromenfos e seIecione o opo "0rofico".



























26
3" Pusso: SeIecione o "Tipo de 0rofico" o ser criodo. Mesfe exempIo,
seIecionoremos "Disperso (XY)". Mo seo "Subfipo de grofico"
escoIho se desejor exibir ponfos de dodos e cIique "Avonor".































27
4" Pusso: Mo joneIo que obriro, seIecione "CoIunos" e cIique em
"Avonor".
































28
b" Posso: SeIecione fodos os voIores de dodos e cIique em

































29
" Pusso: CIique em "ConcIuir" e o grofico esforo pronfo.


































30
7" Pusso: Poro inserir umo Iinho de fendncio oo grofico, cIique com o
bofo direifo do mouse no curvo do grofico e cIique em "Adicionor Iinho
de fendncio".
































31
" Pusso: SeIecione o fipo de Iinho de fendncio que desejor. Mesfe
coso, sero "Lineor", cIique em OI.

































32
9" Pusso: Poro exibir o voIor de P
Z
, cIique com o bofo direifo no Iinho
de fendncio e cIique em "Formofor Iinho de fendncio".

































33
10" Pusso: CIique no guio "Opes" e seIecione o opo "Exibir voIor de
P-quodrodo no grofico" e cIique em OI.


















O grofico esfo pronfo