Capitulo 6 PDF

C A P I T U L O 6
Fotosntesis
y cloroplastos
6-1 Estructura y funcin del cloroplasto
6-2 Revisin del metabolismo fotosinttico
6-3 Absorcin de luz
6-4 Unidades fotosintticas y centros de reaccin
6-5 Fotofosforilacin
*
6-6 Fijacin de dixido de carbono y formacin de
carbohidratos
La perspectiva humana: "Mejores" plantas por medio
de ingeniera gentica
La va experimental: Organizacin de la membrana
tilacode
FIGURA 6-A. Cloroplastos en una hoja de Arabidopsis thaliana, miem-
bro de la familia de las mostazas, vistos con criorrastreo mediante mi-
croscopio electrnico. (Cortesa de Richard ]. Howard, DuPojit Company.)
L
as formas primitivas de vida sobre la Tierra debieron
haber obtenido sus materias primas y energa a partir
de molculas orgnicas simples disueltas en su ambiente
acuoso. Estas molculas orgnicas con certeza se formaron
a partir de procesos abiticos, o sea, como resultado de reac-
ciones qumicas no biolgicas que ocurran en los mares
primitivos. Por lo tanto, as como nosotros sobrevivimos de
nutrientes tomados de nuestro ambiente, as tambin de-
bieron haberlo hecho las formas originales de vida. Los or-
ganismos que dependen de una fuente externa de compues-
tos orgnicos se llaman heterotrofos.
As como todos los organismos vivientes fueron hetero-
trofos, la oportunidad de la biomasa sobre la Tierra para
aumentar estaba gravemente restringida, ya que la produc-
cin espontnea de molculas orgnicas era muy lenta. El
desarrollo de la vida sobre la Tierra recibi un tremendo
impulso con la evolucin de organismos que emplearon
una nueva estrategia metablica que les permiti sobrevi-
vir a partir de molculas que eran mucho ms abundantes
que la escasa variedad orgnica. Este nuevo tipo de orga-
nismos tena capacidad de elaborar sus propios nutrientes
orgnicos a partir de molculas de los tipos ms simples,
como el dixido de carbono (CO) y el sulfuro de hidrgeno
(H2S). Los organismos capaces de sobrevivir con CC^como
principal fuente de carbono se denominan autotrofos.
La elaboracin de molculas complejas a partir de CC>2
requiere el ingreso de grandes cantidades de energa. En el
curso de la evolucin se desarrollaron dos tipos principales
de autotrofos que pueden distinguirse por su fuente de
energa. Los quimioautotrofos utilizan energa almacena-
207
208 CAPITULO 6 Fotosntesis y cloroplastos
da en molculas inorgnicas (como amonio, sulfuro de hi-
drgeno o nitritos) para convertir CO2 en compuestos org-
nicos, en tanto que los fotoautotrofos emplean la energa
radiante del sol para efectuar esa tarea. Puesto que todos los
quimioautotrofos son bacterias y su contribucin relativa a
la formacin de biomasa sobre la Tierra es pequea, no con-
sideraremos ms sus actividades metablicas. Por otro lado,
los fotoautotrofos se encargan de capturar la energa que
sirve como combustible para las actividades de casi todos
los organismos sobre la Tierra. Los fotoautotrofos incluyen
plantas evolutivamente organizadas y algas eucariotas;
varios protistas flagelados, y una variedad de procarotes,
incluyendo bacterias prpura azufrosas y no azufrosas,
bacterias verdes y canobacterias. Todos estos organismos
efectan fotosntesis, proceso en el cual la energa de la luz
solar se transforma en energa qumica, la cual se utiliza en
la formacin de carbohidrato y otros metabolitos orgnicos.
Como analizaremos en detalle en este captulo, la foto-
sntesis es un proceso en el cual los electrones de energa
relativamente baja son eliminados de un compuesto dona-
dor y convertidos en electrones de alta energa como resul-
tado de la absorcin de luz. Estos electrones de alta energa
pueden utilizarse entonces en vas anablicas en las cuales
se sintetizan molculas biolgicas reducidas, como almi-
dn y aceites. Es probable que los primeros grupos de
fotoautotrofos que dominaron el planeta durante casi 2 000
millones de aos utilizaran sulfuro de hidrgeno como fuen-
te de electrones para la fotosntesis, efectuando la reaccin
total
CO2 + 2H2S -i^> (CH20) + H2O + 2S
donde (CH2O) representa una unidad de carbohidrato.
En la actualidad hay numerosas bacterias vivientes que
efectan este mismo tipo de fotosntesis, pero el sulfuro de
hidrgeno ya no es abundante ni extenso, y en consecuen-
cia los organismos que dependen de este compuesto como
fuente de electrones estn inevitablemente restringidos en
cuanto a importancia y distribucin.
Hace aproximadamente 2 500 millones de aos apare-
ci un nuevo tipo de procariote fotosinttico sobre la Tierra
capaz de utilizar una fuente mucho ms abundante de elec-
trones, es decir, el agua. El empleo del agua no slo permi-
ti a estos organismos, o canobacterias, explotar una ma-
yor diversidad de hbitats sobre la Tierra, sino que tambin
produjo un material de desperdicio de enormes consecuen-
cias para todas las formas de vida. El producto de desperdi-
cio fue el oxgeno molecular (02) formado en la reaccin
total:
CO2 + H2O -^> (CH2O) + O2
La evolucin de un tipo de fotosntesis que libera oxgeno
(oxignica) no slo abri el camino para que las cianobacterias
se convirtieran en la forma dominante de vida sobre la tie-
rra, sino que tambin suministr la oportunidad a los orga-
nismos para evolucionar hacia un metabolismo aerobio.
Como veremos en el ltimo captulo, la respiracin aerobia
permite a los organismos extraer una cantidad mucho ma-
yor de energa de los nutrientes en comparacin con la que
se puede obtener por vas anaerobias, como gluclisis y
fermentacin. El cambio de H2S a H2O como "combustible"
para la fotosntesis es ms complicado que cambiar una
letra del alfabeto por otra. El potencial redox del par S-H2S
es de -0.25 V en comparacin con +0.816 V para el par
|O2-H2O (pg. 190). En otras palabras, el tomo de azufre
en una molcula de H2S tiene mucha menor afinidad por
sus electrones (y por lo tanto los dona con mayor rapidez)
que el tomo de oxgeno en una molcula de HÔ. Por lo
tanto, cuando un organismo debe adquirir electrones del
agua tiene que generar un agente oxidante muy fuerte como
parte de su metabolismo fotosinttico. El cambio de H2S
a H2O como fuente de electrones para la fotosntesis requi-
ri una transformacin completa del mecanismo fotosint-
tico.
Iniciaremos nuestro anlisis de la fotosntesis exami-
nando brevemente los organelos en los cuales ocurre el pro-
ceso.
6-1 Estructura y funcin
del cloroplasto
La fotosntesis comparte muchas caractersticas con !a res-
piracin aerobia, incluyendo un sistema de transporte de
electrones que consta de citocromos, quinonas y protenas
de hierro y azufre; el establecimiento de un gradiente elec-
troqumico de protones, y el empleo de este gradiente para
efectuar la sntesis de ATP a travs de una ATP-sintasa
homologa. Por lo tanto, no es sorprendente que, como en la
respiracin aerobia, los sucesos de la fotosntesis estn nti-
mamente vinculados a la membrana celular. La fotosntesis
no oxignica del tipo efectuado por la bacteria prpura se
realiza en componentes que residen en la membrana plas-
mtica o en vesculas derivadas de la membrana plasmtica
por invaginacin (fig. 6-1, a). Por lo contrario, el mecanismo
fotosinttico oxignico de las cianobacterias reside en una
elaborada disposicin de verdaderas membranas citopls-
micas que forman vallas o laminillas, como se muestran en
la figura 6-1, b.
En las clulas eucariotas, la fotosntesis tiene lugar en
un organelo citoplsmico especializado, el cloroplasto, lo-
calizado predominantemente en las clulas mesfilas de las
hojas. En la figura 6-2 se muestran la estructura de una hoja
y la disposicin de los cloroplastos alrededor de la vacuola
central de una clula mesfila. Los cloroplastos de plantas
evolutivamente elevadas por lo general tienen forma len-
ticular (fig. 6-3), unos 2 a 4 / fm de ancho y 5 a 10 fin de
largo, y en condiciones tpicas su nmero vara entre 20 y 40
por cada clula. Estas dimensiones colocan al cloroplasto
como gigante entre los organelos, de igual tamao que el
eritrocito completo estudiado en el captulo 4. Los cloro-
plastos se identificaron como sitio de la fotosntesis en 1881
en un ingenioso experimento efectuado por el bilogo
alemn Theodor Engelmann, quien demostr que cuando
se iluminan las clulas del alga verde Spyragyra, algunas
bacterias se desplazan activamente para agruparse en e!
exterior de las clulas cerca del sitio correspondiente a los
grandes cloroplastos acintados. Las bacterias estaban utili-
zando las mnimas cantidades de oxgeno liberadas en el
cloroplasto por la fotosntesis para estimular su respiracin
aerobia,
CAPITULO 6 Fotosntesis y cloroplastos 209
0.4/m
Tilacoides
F I J URA 6-1. Dos tipos diferentes de bacterias fotosntticas. a)
Bacteria Rhodopseudomonas spheroides cuyo mecanismo de fotosntesis
est contenido en vesculas derivadas por invaginacin de la membra-
na plasmtica, b) Cianobacteria Anacystis nidulans, cuyo aparato foto-
sinttico se aloja en las laminillas discoides, (a. Segn K. Menke, en
T.W. Goodwin, ed., Biochemistry o Chloroplasts, vol. I , Academic Press,
1966; b: segn Norma ]. Lang y B.A. Whitton, eds. Biology of the Blue-
Green Algae, Blackwell Science Ltd., 1973.)
Clulas
- rnesfilas
de la hoja
Seccin
transversal ,- .
de la hoja Estomast
Cloroplasto
Vacuol a
Ncleo
Vista
amplificada
de las clulas
en palizada
con los
cloroplastos
FIGURA 6-2. Organizacin funcional de una hoja. La seccin
transversal de una hoja muestra varias capas de clulas, incluyendo
clulas en palizada, un tipo de clulas mesfilas que contienen los
cloroplastos encargados de efectuar la fotosntesis y suministrar la
materia prima y energa qumica para toda la planta.
La cubierta externa del cloroplasto consta de una en-
voltura compuesta de dos membranas separadas por un
espacio estrecho (fig. 6-3). Igual que la membrana externa
de las mitocondrias, la membrana externa del cloroplasto
contiene porinas (pg. 173) que hacen a esta membrana per-
meable a solutos de peso molecular tan alto como 10 000
daltons. En contraste, la membrana interna de dicha envol-
tura es relativamente impermeable; las sustancias que se
mueven a travs de dicha membrana interna lo hacen con
ayuda de varios transportadores.
Gran parte del mecanismo de sntesis de los cloroplas-
tos, incluyendo pigmentos que absorben luz, una compleja
cadena transportadora de electrones y un aparato sintetiza-
dor de ATP, se localiza en un sistema de la membrana nter-
210 CAPITULO 6 Fotosntesis y doroplastos
Ti l acoi des
2 mi
( b )
FIGURA 6-3. Estructura interna de un cloroplasto. a) Micrografa de transmisin electrnica a travs de un solo cloroplasto. La membrana
interna est dispuesta en pilas de tilacoides en forma de discos fsicamente separados de la membrana externa, b ) Esquema de un cloroplasto
que muestra la doble membrana externa y la membrana tilacoide que se divide en tilacoides de los grana apilados y tilacoides del estroma no
apilado (o laminillas de estroma). ( a: Cortesa de Lester K. Shumway.)
na fsicamente separado de la doble capa de la envoltura.
La membrana interna del cloroplasto, que contiene el meca-
nismo transductor de energa, est organizada en sacos
membranosos aplanados denominados tilacoides. Los
tilacoides se disponen ordenadamente en unas estructuras
llamadas grana, que recuerdan una pila de monedas {figs.
6-3 y 6-4). El tratamiento de cloroplastos aislados en un
medio salino diluido dispersa los tilacoides que se reapilan
cuando se incrementa la fuerza inica del medio. El espacio
dentro de un tilacoide es a luz, y el espacio fuera del tilacoide
pero dentro de la envoltura externa se denomina estroma.
Las cisternas membranosas aplanadas, llamadas estroma
tilacoide (o estroma laminar), conectan algunos tilacoides
de una grana con los de otra (fig. 6-4). La diferencia en
estructura y funcin entre grana tilacoides y estroma
tilacoide se analiza en La va experimental, al final del cap-
tulo.
Igual que la matriz de una mtocondria, el estroma de
un cloroplasto contiene pequeas molculas circulares
de DNA en doble cadena y ribosomas semejantes a los de
clulas procariotas, que junto con algunas enzimas forman
una reserva de informacin gentica y el medio para utili-
zarla. Se estima que en las membranas tilacoides hay casi 60
polipptidos diferentes relacionados con sistemas para con-
versin de energa, y casi la mitad estn codificados en el
DNA del cloroplasto.
Los lpidos que componen la membrana tilacoide son
poco comunes porque contienen una cantidad relativamen-
te escasa de fosfolpidos y un elevado porcentaje de gluco-
lpidos neutros monogalactosil y digalactosil diacigliceroles.
Los cidos grasos de estos lpidos son abrumadoramente
insaturados y la bicapa de lpidos es muy fluida. Los cloro-
plastos son organelos semiautnomos, capaces de autodu-
plicarse, y se piensa que evolucionaron a partir de un pro-
cariote fotosinttico capaz de producir oxgeno (al parecer
una cianobacteria) que adopt una existencia simbitica
dentro de una clula husped primitiva no fotosinttica.
Como resultado, los cloroplastos y las bacterias fotosintticas
comparten muchas propiedades, incluyendo la presencia
de porinas en las membranas externas, el tipo de DNA y de
ribosomas en el estroma, y la naturaleza de su mecanismo
fotosinttico, que analizaremos en detalle en las siguientes
pginas.
6-2 Revisin del metabolismo
fotosinttico
Uno de los mayores avances para entender las reacciones
qumicas de la fotosntesis provino de una hiptesis pro-
Grana .s .- -"
tilacoides "*->"",.;-.- Esfrorna S2
i l acdi de
0.3 m
F IGURA 6-4. Membranas tilacoides. Micrografa electrnica de un
corte a travs de una porcin de un cloroplasto de espinaca mostran-
do los grana tilacoides apilados y ls estromas tilacoides no apilados.
( Segn LA. Staeheln, en LA. Staehelin, ed., Encyclopedia of Plant
Physiology, vd. 19, p. 23, Sprhiger-Verag, 1986.)
puesta por C.B. van Niel a principios del decenio de 1930,
quien entonces era estudiante graduado de la Universidad
Stanford. Consideremos la ecuacin total propuesta para la
fotosntesis:
CO2 +H2O -^(CH2O) + 02
En 1930, la idea prevaleciente era que la energa de la luz se
empleaba para desdoblar el CO2, liberando oxgeno mole-
cular (2) y transfiriendo el tomo de carbono a una mo-
lcula de agua para formar una unidad de carbohidrato
(CH2O). En 1931, van Niel propuso un esquema alterno
basado en su trabajo con sulfobacterias. Se haba demostra-
do de manera concluyente que estos organismos tenan ca-
pacidad para reducir CO2 a carbohidratos empleando la
energa de la luz sin produccin simultnea de O2 molecu-
lar. Se propuso que la reaccin para la sulfobacteria era:
CO2 +2H2S -^(CH2O) +H2O + 2S
Reconociendo la semejanza bsica en el proceso fotosintti-
co de todos los organismos, van Niel propuso una reaccin
general para incluir todas estas actividades:
presenta un resumen total que contrasta la termodinmica
de estas dos actividades metablicas.
Los sucesos de la fotosntesis se pueden dividir en dos
series de reacciones. En la primera etapa, reacciones de-
pendientes de luz, se absorbe energa de la luz solar para
convertirla en energa qumica, la cual se almacena en el
ATP y el NADPH. Durante la segunda etapa, reacciones
independientes de luz (o "reacciones en la oscuridad"), se
sintetizan carbohidratos a partir de dixido de carbono
empleando la energa almacenada en el ATP y el NADPH
formado en las reacciones dependientes de luz. Se estima
que cada ao la vida vegetal sobre el planeta convierte
aproximadamente 600 trillones de kilogramos de CO2 en
carbohidratos y libera casi 400 trillones de kilogramos de
O2. La mayor parte de esta actividad se efecta en el
fitoplancton, una delgada y sensible capa de algas unicelula-
res vivientes que cubre los ocanos del mundo cada vez
ms contaminados.
Iniciaremos nuestro anlisis con las reacciones que de-
penden de luz, que son complejas y todava incompleta-
mente definidas.
CO2 + 2H2A H2O + 2A
Para la produccin de una hexosa, como la glucosa, la reac- 6-3 Absorcin de luz
cn sera
6CO2 + 12H2A C6Hi2O6 + 6H2O + 12A
Van Niel reconoci que la fotosntesis es un proceso
esencialmente de oxidorreduccin. En la reaccin preceden-
te, H2A es un donador de electrones (agente reductor) y se
puede representar por H2O, H2S, o algn otro sustrato re-
ducido. Sin embargo, CO2 es un agente oxidante, que en
una clula vegetal se reduce para formar hexosa en la si-
guiente reaccin:
6CO2 +12H2O -^C6H12O6 +6H2O +6O2
En este esquema cada molcula de oxgeno se forma a
partir del desdoblamiento de dos molculas de H2O, proce-
so causado por absorcin de luz. El papel del agua en la
formacin de oxgeno molecular fue claramente establecido
en 1941 por Samuel Rubn y Martin Kamen, de la Univer-
sidad de California, quienes efectuaron un experimento utili-
zando un istopo de oxgeno 18O especialmente marcado
en vez del istopo comn 16O. En su experimento marcaron
un grupo de plantas con C[18O2] y agua "regular", en tanto
que otro grupo se marc con dixido de carbono "regular"
y H2[18O] marcado. Los investigadores plantearon una pre-
gunta sencilla: cul de estos dos grupos de plantas libera
18O2? Los resultados mostraron que las plantas con agua
marcada produjeron oxgeno marcado, en tanto que las plan-
tas con dixido de carbono marcado produjeron oxgeno
"regular". Contrario a lo que se pensaba, no es el dixido de
carbono el que se desdobla en sus dos elementos atmi-
cos, sino el agua. La hiptesis de van Niel se haba confir-
mado.
La proposicin de van Niel coloc a la fotosntesis en
una perspectiva diferente; en esencia vino a ser lo inverso
de la respiracin. En la respiracin, las mitocondrias redu-
cen oxgeno para formar agua y en la fotosntesis el cloro-
plasto oxida agua para formar oxgeno. En la figura 6-5 se
La energa de la luz se transporta en paquetes llamados
fotones. El contenido energtico de un fotn depende de la
longitud de onda de la luz segn la ecuacin
,. , he
E~hv-
A
donde h es la constante de Planck (1.58 x 10"34 cal seg), v
es la frecuencia de la radiacin, c es la velocidad de la luz en
el vaco y A es la longitud de onda de la luz. Cuanto ms
corta sea la longitud de onda, mayor ser el contenido de
energa. Un mol (6.02 X 1023) de fotones de luz roja (longi-
tud de onda 635 nm) contiene aproximadamente 45 kcal de
energa.
La absorcin de luz es el primer paso en cualquier pro-
ceso fotoqumico. Cuando se absorbe un fotn, un electrn
adquiere suficiente energa para pasar de un orbital interno
a otro ms externo. Se dice que la molcula ha cambiado de
un estado basal a un estado excitado. Puesto que hay un
nmero limitado de orbitales en los cuales puede existir
un electrn y cada orbital tiene un nivel energtico espec-
fico, se deduce que cualquier tomo o molcula slo puede
absorber luz de longitud de onda especfica.
Una molcula en estado excitado es inestable y podra
esperarse que slo dure alrededor de 10~9 segundos. A un
electrn excitado pueden ocurrirle varias cosas, segn las
circunstancias. Consideremos una molcula de clorofila, el
pigmento fotosinttico ms importante que absorbe luz. Si
el electrn de una molcula de clorofila excitada retorna a
su orbital de menor energa, la energa absorbida debe libe-
rarse. Si la energa de excitacin se libera en forma de calor
o de luz (fluorescencia), la clorofila ha retornado al estado
basal original y la energa absorbida del fotn se desperdi-
cia. Esto es precisamente lo que se observa cuando se ilumi-
na una preparacin de clorofila aislada: la solucin emite una
fluorescencia intensa debido a que la energa absorbida se
Fotosntesis
Cloroplasto
C02 + H20
R espi rac i n aerobia
M tocn dr a
C02 + H20
Carbohi drato
/ , (contiene electrones de alta energa)
NADPH f|ff] ; [j [jl [p NADH
Energa
luminosa
NADH
energa qumica
(ATP)
12U e-
(c onti ene elec trones de baja energa)
H90
FIGURA 6-5. Comparacin entre la energtica total de la fotosntesis y la respiracin aerobia.
emite de nuevo con una longitud de onda ms larga (o sea,
menor energa). Sin embargo, si este mismo experimento se
ejecuta con una preparacin de doroplastos aislados, slo
se observa una dbil fluorescencia, lo que ndica que se
disipa muy poca de la energa absorbida. En vez de ello, los
electrones energticos son transferidos a aceptores antes que
tengan oportunidad de retornar a sitios vacos en los orbita-
les ms internos de las molculas de clorofila. Se estima
que la transferencia del electrn puede ocurrir en menos
de 10~12 segundos.
Pigmentos foto sintticos
Los pigmentos son molculas que contienen un crom/oro,
grupo qumico capaz de absorber luz de una longitud de
onda particular del espectro visible. Las hojas de las plantas
son verdes porque contienen gran cantidad del pigmento
clorofila que absorbe luz con mayor intensidad entre el azul
y el rojo y deja que las longitudes de onda verdes intermedias
se reflejen a nuestros ojos. La estructura bsica de la cloro-
fila se muestra en la figura 6-6. Cada molcula consta de
dos partes principales: 1) un anillo de porfirina cuya fun-
cin es absorber luz, y 2) una cadena fitol hidrfoba (deri-
vada de una unidad isoprenoide repetitiva, cuya estructura
se muestra en la pgina 185) que mantiene la clorofila inte-
grada al interior de la membrana fotosinttica. A diferencia
de las porfirinas rojas de la hemoglobina y la mioglobina
que contienen fierro (grupos hem), la porfirina de la mo-
lcula de clorofila contiene un tomo de magnesio. Enla-
ces dobles y sencillos alternos a lo largo del borde del ani-
llo de porfirina actan deslocalizando electrones que for-
man una nube alrededor de dicho anillo (fig. 6-6). Siste-
mas conjugados de este tipo son fuertes absorbedores de
luz, y dicha absorcin es causa de una redistribucin de la
densidad de electrones en la molcula favoreciendo la pr-
dida de un electrn hacia un aceptor adecuado. Adems,
los sistemas de uniones conjugadas amplifican los picos de
absorcin causando que las molculas individuales absor-
ban intervalos de longitudes de onda. Estas caractersticas
son evidentes en un espectro de absorcin de molculas
purificadas de clorofila (fig. 6-7), que es una grfica de la
intensidad de la luz absorbida en relacin con su longitud
de onda. El intervalo de longitudes de onda que pueden
absorber los pigmentos fotosintticos situados dentro de la
membrana tilacoide aumenta adicionalmente por la pre-
sencia de varios tipos de especies de pigmento (estudiadas
en el siguiente prrafo), presencia de varios polipptidos a
los cuales se unen los pigmentos mediante enlaces no cova-
lentes y diferencias locales en el entorno (fluidez, estado de
agregacin, etc.), en el cual residen los pigmentos.
Entre los organismos fotosintticos (fig. 6-6) se encuen-
tran varias clases de clorofila, que se distinguen entre s por
los grupos laterales unidos al anillo de porfirina. La clorofi-
la a est presente en todos los organismos fotosintticos
productores de oxgeno, pero est ausente en las diferentes
sulf o bacterias. Adems de la clorofila a, la clorofila b se
encuentra en todas las plantas evolutivamente elevadas y
en las algas verdes, y una tercera variedad, la clorofila c,
ocurre en algas de color marrn, diatomeas y ciertos proto-
CAPITULO 6 Fotosntesis y doroplastos 213
O ^rEn la bacterioclorofila a
C Cri3
^Ên la clorofila f
2 CHO^
CH3
/"VNAcCHCH \i \j \i ^~\ri\y\jr\-3
Vc
C=0
CH3 CH3 CH3
HC CH2
CH2 C=0
C=0 O
O CH3
CH 2
CH
\:
H3C HC
\-
H3C HC
UP
riL.
CH3
Clorofila a
F IG UR A 6-6. Estructura de la clorofila a. La molcula consta de un
anillo de porfirina {a su vez formado por cuatro anillos pirrol ms
pequeos) con un ion magnesio en su centro y una larga cola hidrocar-
bonada. En la clorofila b, el grupo CH3 sobre el anillo II es reem-
plazado por un grupo CHO. El rea sombreada que rodea al borde
de la porfirina indica la deslocalizacin de electrones para formar una
nube. La estructura de la porfirina de la clorofila que contiene mag-
nesio se puede comparar a la porfirina que contiene hierro de un
grupo hem mostrado en la figura 5-12.
zoarios. La bacterioclorofila slo se observa en bacterias
verdes y prpuras, organismos en los cuales la fotosntesis
no se acompaa de la formacin de oxgeno.
Los pigmentos accesorios ms importantes de la fotosn-
tesis en plantas evolutivamente elevadas son los carotenoi-
des, por ejemplo el /3-caroteno.
CH3 CH3 CH3
/J-caroteno
Los carotenoides absorben luz de longitudes de onda
azul al verde (fig. 6-7). Las longitudes de onda amarillo,
naranja y rojo son reflejadas por los carotenoides, lo que
produce los colores caractersticos naranja y rojo de zanaho-
rias, naranjas y hojas de algunas plantas durante el otoo. A
medida que las hojas cesan de producir clorofila durante el
fro clima invernal, los carotenoides dorados y rojos son
ms visibles; esto explica los brillantes y coloridos paisajes
del otoo. La funcin ms importante de los carotenoides
puede ser proteger el mecanismo de fotosntesis contra da-
os causados por especies reactivas de oxgeno, y no la de
absorber luz para la fotosntesis. Por ejemplo, clulas mu-
tantes de algas que carecen de carotenoides no pueden so-
brevivir en un ambiente aerobio debido a la destruccin
mediada por oxgeno de su mecanismo de fotosntesis.
La luz que incide sobre una hoja se compone de una
gran variedad de longitudes de onda, por lo que la presen-
cia de pigmentos con diferentes propiedades de absorcin
garantiza que un mayor porcentaje de los fotones inciden-
tes tengan oportunidad de estimular la fotosntesis. Esto se
putde comprobar al examinar un espectro de accin (fig.
6-8), que es una grfica de la eficiencia total de la fotosnte-
sis a diferentes longitudes de onda. Es importante la dife-
rencia entre un espectro de accin y un espectro de absor-
cin. El espectro de absorcin mide las longitudes de onda
capaces de suministrar la energa de transicin apropiada
para que una sustancia especfica eleve los electrones a or-
bitales ms altos, en tanto que el espectro de accin indica
350 400 450 500 550 600 650
Longitud de onda (nm)
750
FIGURA 6-7. Espectro de absorcin para varios pigmentos foto-
sintticos de plantas evolutivamente avanzadas. El trasfondo mues-
tra los colores percibidos para longitudes de onda del espectro visible.
La clorofila absorbe con mayor intensidad en las regiones violeta-azul
y rojo del espectro, en tanto que los carotenoides (o sea, beta-carote-
nos) absorben tambin en la regin verde. Las algas rojas contienen
pigmentos adicionales (ficobilinas) que absorben en las bandas inter-
medias del espectro.
Cl o r o f i l a a
SJ
"*- 3
SO O"
D O
='>2
r ra
'
o =
u 3 3
Espect ro de ac c i n
500 600
Longitud de onda, nm
700
FIGURA 6-8. Espectro de accin para la fotosntesis. El espectr o de
a cci n (r epr esenta do po r l a l nea de co l o r r o jo ) i ndi ca l a ef i ca ci a de l a
l uz de di f er ente l o ngi tud de o nda pa r a pr o mo ver l a f o to sntesi s en l a s
ho ja s de una pl a nta . La s l nea s medi a s i ndi ca n el espectr o de a bso r -
ci n de ca da uno de l o s pr i nci pa l es pi gmento s f o to si ntti co s. La l nea
ver de muestr a el espectr o de a bso r ci n co mbi na do de to do s l o s pi g-
mento s.
l a s l o ngi tudes de o nda ver da der a mente ef i ca ces pa r a ef ec-
tua r una r espuesta f i si o l gi ca deter mi na da . El espectr o de
a bso r ci n pa r a l a f o to sntesi s sigue ba sta nte bi en el pa tr n
del espectr o de a bso r ci n de cl o r o f i l a s y ca r o teno i des, l o
que i ndi ca l a i mpo r ta nci a de esto s pi gmento s en l a a bso r -
ci n de l uz.
6-4 Unidades fotosintticas
y centros de reaccin
En 1932, Ro ber t Emer so n y Wi l l i a m Ar no l d, del Ca l i f o r ni a
Insti tute o f Techno l o gy, ef ectua r o n un exper i mento que
sugi er e que no to da s la s mo l cul a s de cl o r o f i l a del cl o r o -
pl a sto pa r ti ci pa n a cti va mente en l a co nver si n de ener ga
l umi no sa a ener ga qumi ca . Empl ea ndo suspensi o nes del
a l ga Chlorella y l uz i nter mi tente de muy co r ta dur a ci n (p.
ej., 10 jMseg) e intensidad de saturacin, deter mina r o n la
ca nti da d mni ma de l uz necesa r i a pa r a pr o duci r el mxi mo
de o xgeno en un ci cl o de f o to sntesi s. Segn el nmer o de
mo l cul a s de cl o r o f i l a pr esentes en l a pr epa r a ci n, ca l cul a -
r o n que dur a nte un br eve destel l o de l uz se l i ber a una
mo l cul a de o xgeno po r ca da 2 500 mo l cul a s de cl o r o f i l a
pr esentes. Po ster i o r mente se demo str que se a bso r be un
mni mo de o cho f o to nes (quantum) de l uz pa r a pr o duci r
una mo l cul a de C2; po r l o ta nto , se puede co ncl ui r que l o s
cl o r o pl a sto s co nti enen a pr o xi ma da mente 300 veces ms
mo l cul a s de cl o r o f i l a de l o que a l pa r ecer se r equi er e pa r a
l a f o to sntesi s.
Una po si bl e i nter pr eta ci n de este da to es que sl o un
pequeo po r centa je de l a s mo l cul a s de cl o r o f i l a pa r ti ci pa n
en l a f o to sntesi s. Si n emba r go , ste no es el ca so . Ms bi en,
l a s 300 mo l cul a s de cl o r o f i l a a cta n junta s co mo una uni -
da d f o to si ntti ca en l a cua l slo un mi embr o del gr upo , l a
cl o r o f i l a del centr o de r ea cci n, ti ene r ea l mente l a ca pa ci -
da d de tr a nsf er i r el ectr o nes a un a cepto r de l o s mi smo s.
Aunque l a ma sa de l a s mo l cul a s del pi gmento no pa r ti ci pa
di r ecta mente en l a co nver si n de ener ga l umi no sa a ener -
ga qumi ca , to da s se enca r ga n de a bso r ber l uz; f o r ma n una
especi e de a ntena , un si stema pa r a ca pta r l uz que a tr a pa
f o to nes de di f er entes l o ngi tudes de o nda y tr a nsf i er e esta
ener ga de exci ta ci n co n gr a n r a pi dez a l a mo l cul a del
pi gmento si tua da en el centr o de r ea cci n. El si stema a nte-
na no sl o i ncr ementa l a va r i eda d de l a s l o ngi tudes de o nda
que pueden a bso rberse, sino ta mbin incrementa la eficien-
ci a de l a f o to sntesi s. Se esti ma que i ncl uso co n l uz br i l l a nte
un f o tn i nci dente go l pea una mo l cul a de pi gmento a una
f r ecuenci a de ca si una vez po r segundo . En co ntr a ste, en el
centr o de r ea cci n el pi gmento ti ene ca pa ci da d pa r a tr a ns-
f er i r el ectr o nes a un a cepto r a dya cente co n una f r ecuenci a
ma yo r de 200 po r segundo . El a gr upa mi ento de va r i o s ci en-
to s de mo l cul a s de pi gmento ca pta do r de l uz a l r ededo r de
un so l o centr o de r ea cci n a umenta no ta bl emente el nme-
r o de el ectr o nes que el pi gmento del centr o de r ea cci n
puede tr a nsf er i r en una uni da d de ti empo .
La tr a nsf er enci a de l a ener ga de exci ta ci n de una
mo l cul a de pi gmento a o tr a es muy sensi bl e a l a di sta nci a
entr e l a s mo l cul a s. La estr echa pr o xi mi da d de l o s pi gmen-
to s se f a ci l i ta gr a ci a s a su el eva da co ncentr a ci n y su a so ci a -
ci n a l o s po l i ppti do s de l a membr a na que l o s ma nti ene en
po si ci n f i ja , l o que f a vo r ece l a tr a nsf er enci a de ener ga .
Una "r egla " i mpo r ta nte que o per a entr e l o s pi gmento s a n-
tena es que l a ener ga de exci ta ci n nunca puede tr a nsf er i r -
se a una mo l cul a que r equi er a ma yo r ener ga . En o tr a s
Molculas de pigmento antena
Fotn
Centro de r eacci n
FIGURA 6-9. Transferencia de la energa de excitacin. La ener ga
de exci ta ci n se tr a nsf i er e a l a za r a pi gmento s que a bso r ben l uz de
l o ngi tud de o nda cr eci entemente ma yo r ha sta que a l ca nza l a cl o r o f i l a
del centr o de r ea cci n que tr a nsf i er e un el ectr n exci ta do a un a cepto r
pr i ma r i o , co r no se descr i be po ster i o r mente en el ca ptul o .
CAPITULO 6 Fotosntesis y dowplastos 215
palabras, la energa de excitacin no puede transmitirse a
una molcula de pigmento que absorbe luz de longitud de
onda ms corta (mayor energa) que la absorbida por la
molcula donadora. Por consiguiente, corno la energa que
pasa a travs de una unidad fotosinttica (fig. 6-9) cada vez
se transfiere a una molcula de pigmento que absorbe una
longitud de onda mayor, la naturaleza de las transferencias
subsecuentes est muy restringida. La clorofila del centro
de reaccin es la nica que tiene un pico mximo de absor-
cin a la longitud de onda mayor, y por lo tanto acta como
una especie de "trampa" o "pozo" haca el cual inevitable-
mente se dirigen todas las molculas del pigmento antena
captadoras de energa. La diferencia en el contenido de
energa entre el fotn originalmente absorbido por un pig-
mento antena y la energa transferida finalmente al centro
de reaccin se libera en forma de calor. Se estima que la
energa de excitacin tarda unos 200 X 10~12 segundos en
viaj ar desde el sitio de absorcin hasta el centro de reaccin
del pigmento. Una vez que la energa es recibida en el cen-
tro de reaccin, el electrn excitado puede transferirse al
aceptor "en espera".
Evolucin del oxgeno: coordinacin
de la actividad de dos sistemas
foto sintticos diferentes
La evolucin de organismos capaces de utilizar HjO como
fuente de electrones requiri innovaciones en el mecanismo
de fotosntesis, razn por lo cual puede entenderse si se
considera la energtica de la fotosntesis oxignica (libera-
dora de 03). El par C^-HjO tiene un potencial redox estn-
dar de +0.82 V, en tanto que el del par NADP+-NADPH es
-0.32 V. La diferencia entre estos dos valores (1.14 V,
que equivale a 52.6 kcal/mol) proporciona una medida de
la energa que debe suministrarse a un par de electrones
para eliminarlos de HÔ y pasarlos a NADP+ en condicio-
nes estndar. Un fotn de luz roja no contiene suficiente
energa para elevar un electrn al nivel energtico reque-
rido (pg. 211). Este problema se resolvi con la evolucin
de dos diferentes reacciones fotoqumicas que ocurren
en dos fotosistemas espacialmente separados.
Cada fotosstema es "responsable" de impulsar los elec-
trones una parte del camino sobre la cuesta energtica (fig.
6-10), de manera no muy diferente a como una silla eleva-
dora de dos pasos levanta a los esquiadores para pasar un
plano inclinado particularmente largo. Un fotosistema, de-
nominado fotosistema II (PSII), impulsa los electrones des-
de un nivel energtico menor que el del agua en el extre-
mo de baja energa hasta un punto a mitad del camino
donde el otro fotosistema, denominado fotosistema I (PSI),
eleva los electrones hasta un nivel energtico por arriba de
NADP+. Se dice que los dos fotosistemas actan en serie, o
sea, uno despus del otro.
El centro de reaccin del fotosistema II se denomina
P680: "P" por "pigmento" y "680" por la longitud de onda
de la luz que la molcula de clorofila absorbe con mayor
intensidad. El centro de reaccin del fotosistema I se deno-
mina F700 por razones similares. Cuando la luz del sol in-
cide sobre la membrana tilacoide, se absorbe energa simul-
tneamente en los pigmentos antena de ambos PSII y PSI, y
pasa a los centros de reaccin de ambos fotosistemas. Los
electrones de los pigmentos de ambos centros de reaccin
son impulsados a un orbital ms externo y cada electrn
fotoexcitado es transferido a un aceptor primario de elec-
trones. La transferencia de electrones afuera de los fo-
tosistemas deja los pigmentos de los dos centros de reaccin
con un electrn menos, y por lo tanto con carga positiva.
Luego de perder sus electrones, los centros de reaccin de
PSII y PSI se pueden denominar P680+ y P700+, respectiva-
mente. Los centros de reaccin positivamente cargados
atraen electrones, lo que establece la etapa de f luj o de elec-
trones entre transportadores. En la fotosntesis oxignica,
donde actan dos fotosistemas en serie, el fluj o de electro-
nes ocurre a lo largo de tres ramas: entre agua y PSII, entre
PSII y PSI, y entre PSI y NADP+, disposicin descrita como
esquema Z. En la figura 6-10 se muestra una amplia repre-
sentacin del esquema Z; explicaremos el nombre de los
diferentes componentes conforme examinemos por separa-
do cada una de las principales partes de la va.
Operaciones PSII: obtencin de electrones
por separacin de agua
PSII es un complejo de ms de 20 polipptidos diferentes, la
mayor parte codificados por el genoma del cloroplasto de
una clula vegetal. Nuestra comprensin de los sucesos que
ocurren en los centros de reaccin PSII recibi un gran im-
pulso en el decenio pasado cuando se comprob que PSII
posee estructura y funcin muy similares a un centro de
reaccin fotosinttico (CRF) de la bacteria prpura no sulfu-
rosa Rhodopseiidomonas viridis. A mediados de los aos 1980,
Johann Deisenhofer, Robert Huber y Helmut Michel, del
Max Planck Institute de Alemania, describieron la estructu-
ra del CRF bacteriano a nivel de resolucin atmica. Estos
datos suministraron la primera imagen tridimensional de
una protena de membrana (o complejo protenico de mem-
brana) en la forma que reside dentro de la bicapa del lpido
de una membrana celular (fig. 6-11, a). El CRF de esta bac-
teria prpura contiene dos protenas hidrfobas, denomi-
nadas subunidad L y subunidad M, unidas a varios pigmen-
tos y centros redox (indicados en color en la figura 6-11, a,
y mostradas por separado de la protena en la figura 6-11,
b} . Los centros redox se requieren para absorber luz y trans-
ferir electrones lejos de los pigmentos de los centros de reac-
cin, como se describe en el pie de figura. En vez de anali-
zar el mecanismo que emplea esta bacteria retornaremos al
fotosistema II, que efecta una serie similar de reacciones
con una excepcin importante: los sucesos en PSII dan como
resultado la separacin del agua.
Una vez obtenida la secuencia de las subunidades L y
M del centro del CRF bacteriano se determin su estructura
tridimensional, comprobndose que el PSII de la cianobac-
teria y de plantas evolutivamente elevadas contiene dos
protenas pequeas, denominadas DI y D2 (fig. 6-12, a),
cuya secuencia de aminocidos mostr notable homologa
con las dos subunidades bacterianas. Estudios subsecuen-
tes demostraron que DI y D2 se-enlazan a la molcula de
clorofila P680 y a los centros redox del fotosistema para
efectuar las complejas actividades fotoqumicas requeridas
para oxidar el agua.
-400
-200
O
+200
+400
+600
+800
Aceptor de electrones
"Fi -
NADP+ +
Acept or de electrones
Fotolisis
2H+ i/202 e
e
Sistema de
transporte de
electrones
Sistema de
transporte
de electrones
Mol cul as
antena
Centro de reaccin (P700)
Fotn
incidente
Molculas
antena
Fotosistema
Luz
Centro de reaccin ( P6 8 Q )
H30
Fot osi st ema II
H < ; i : R A f > - ! Panorama del f lujo de electrones durante las reacci ones f otodependi entes de la f otosntesi s. Los sucesos mostrados en este
esquema se describen en detalle en las siguientes pginas. Los diferentes portadores implicados en el transporte de electrones para la fotosntesis
se indican en la figura 6-18.
Recoleccin de luz. El primer paso en la activacin de
PSII es la absorcin de luz por un pigmento antena. La
mayor parte de los pigmentos antena que recolectan luz
para PSII residen en un complejo pigmento-protena sepa-
rado, denominado complejo II captador de luz, o simple-
mente LHCII, el cual puede situarse fuera del propio f otosis-
tema (fig. 6-12, a). Se ha aislado LHCII de cloroplastos de
plantas de guisantes en forma de un trmero que consta
de tres polipptidos integrales de membrana (fig. 6-12, a).
Cada polipptido mantiene enlaces no covalentes que lo
unen a casi 12 molculas de clorofila (7 molculas de cloro-
fila a y 5 molculas de clorofila b; fig. 6-12, b) y dos carote-
nodes (mostrados en amarillo en la figura 6-12, b). Las
clorofilas cuelgan de las hlices del polipptido a dos nive-
les diferentes respecto de la bicapa de lpidos; por esta ra-
zn, la disposicin de las clorofilas se compara con ropa
colgada al aire para secar en dos cuerdas a diferente nivel.
Los carotenoides protegen el complejo de las especies reac-
tivas de oxgeno.
Los pigmentos de LHC se encuentran en estrecho con-
tacto entre s, facilitando la rpida transferencia de energa
hacia el centro de reaccin. Los complejos LHCII son muy
abundantes en las membranas tilacoides; se estima que casi
50% de todas las molculas de clorofila sobre el planeta
estn presentes como parte de un complejo LHCII. Segn se
analiza en La va experimental al final del captulo, LHCII no
siempre se une a PSII, y en condiciones apropiadas puede
desplazarse a travs de la membrana tilacoide y unirse a
PSI sirviendo como complejo captador de luz para el centro
de reaccin PSI.
Transferencia de electrones dentro de PSII. La ener-
ga de excitacin se transfiere de LHCII a un complejo ante-
na interno situado en el plano central de la membrana y que
consta de protenas ntimamente unidas a clorofila relacio-
nadas con el centro de reaccin PSII. En la figura 6-13 se
ilustra la secuencia de acontecimientos que ocurren en el
centro de reaccin. Cuando se transfiere la energa de los
pigmentos antena centrales a P680, los pigmentos del cen-
tro de reaccin responden (en unos 3 a 4 picosegundos)
transfiriendo un electrn fotoexcitado a una molcula de
feofitina, semejante a clorofila, con la que estn ntimamen-
te relacionados (paso 1, fig. 6-13), que es el aceptor primario
L a d o
Lado L
B C h l
(P )
BChl
BPh
200ps
-
Q A
r
Fe
( a)
( b )
F I < ; i H t \l ' Estructura del centro de reaccin fotosinttico deK. viridis. a) Las cadenas de protenas se representan por trazos de esqueletos
lisos: el citocromo se muestra en verde, la subuni dad M en azul, la subuni dad L en marrn y la subuni dad H en prpura. Los tomos de los
cofact ores redox se di bujan en colores brillantes: carbonos en amarillo, ni t rgenos en azul, oxgenos en rojo, magnesio en verde, b ) La va que
si guen los electrones a travs del centro de reaccin de R. viridis est indicada por la flecha ancha de color amarillo. Aunque hay dos conjuntos
de cofactores, la t ransferenci a de electrones es muy asimtrica y ocurre casi exclusivamente a lo largo de la rama L mostrada a la derecha. Durante
la fotosntesis, una molcula del pigmento (P) de bact eri ocl orofi l a absorbe la luz (molcula azul en la parte superior), que responde transfiriendo
un electrn exci t ado a un aceptor cercano (A) provocando la formaci n de un donador de electrones con carga positiva (P+) y un aceptar de
electrones con carga negativa (A~). En R. viridis, A es la bact eri ofeofi t i na (molcula roja), una molcula parecida a la clorofila que carece de ion
Mg2+. P+ es defi ci ent e en electrones y busca electrones; o sea, es un agente oxidante. Por lo contrario, A~ tiene un electrn extra que puede perder
con faci l i dad; o sea, es un agent e reductor. Puesto que las especies con carga positiva y negativa muestran una atraccin mut ua evidente, es
esenci al estabilizar las dos cargas separadas. La estabilizacin se logra transfiriendo electrones a una molcula de quinona (QA/ molcula
prpura) si t uada en un punt o lejano de la bacterioclorofila original. Los electrones excitados pasan subsecuentemente a la ubiquinona (UQ) para
formar un UQHi, que es un fuert e agente reduct or. Por ltimo, los electrones fluyen de un UQH2 de nuevo al pi gment o del cent ro de reaccin
deficiente de electrones generando un gradiente de protones a travs de la membrana que se emplea en la sntesis de ATP. ps = picosegundo.
( a: Segn Johann Deisenhofer y Helmut Michel, EMBO J. 8: 2154, 1989, con permiso de Oxford University Press.)
de electrones. Esta transferencia de un electrn genera un
donador con carga positiva (P680+) y un aceptor con cargta
negativa (Feo~). La importancia de la formacin de dos
especies con carga opuesta, P680+ y Feo~ puede ser ms
evidente si consideramos la capacidad de oxidorreduccin
de estas dos especies. P680+ es deficiente en electrones y
anda en busca de ellos, convirtindose as en un agente
oxidante. En contraste, Feo~ tiene un electrn ext ra que
puede perder con facilidad y por lo tanto es un agente re-
duct or. Este hecho, la formacin de un agente oxidante y un
agente reduct or operado por la luz, que tarda menos de una
milmillonsima de segundo, es la esencia de la fotosntesis.
P680+ es un agente oxi dant e fuerte, en tanto que Feo~
es un agente reductor dbil. Se estima que el potencial redox
de la forma oxidada de P680 es alrededor de +1.1 V, lo
bastante fuert e para at raer con gran intensidad (baja ener-
ga) a los electrones del agua (potencial redox de +0.82 V)
y separar la molcula. La separacin del agua durante la
fotosntesis se denomina fotolisis.
Debido a su carga opuesta, P680+ y Feo~ muestran
notable atraccin mutua. Igual que en el CRF bacteriano
ilustrado en la fi gura 6-11, la separacin de cargas se estabi-
liza separando cargas que finalmente quedan en lados opues-
tos de la membrana. En PSII, Feo~ transfiere su electrn
LHC
( b )
FIGURA 6-12. Organizacin molecular del fotosistema II. a) El fotosistema II consta de varios polipptidos, incluyendo DI y D2, unidos
a la clorofila del centro de reaccin y los componentes redox relacionados. El centro de reaccin est rodeado por complejos captadores de luz
(LHCII) cuya estructura trimrica se muestra en el recuadro, b ) Vista lateral del monmero LHCII en la forma que reside dentro de la bica-
pa de lpidos {indicada por las bandas azules). El monmero contiene tres hlices alfa que rodean a toda la membrana, marcadas A, B y C, ade-
ms de 12 molculas de clorofila. Las porfirinas de la clorofila estn dispuestas en dos niveles, correspondiendo regularmente a las dos hojas
de la bicapa (clorofila a, verde oscuro; clorofila b , verde claro; caroenoides, amarillo; tomos de magnesio, esferas de color rosa), ( a: Segn G.
Renger, en Topics in Photosynthesis, /. Barb er, ed., vol. 11, Elsevier, 1992; b : reimpreso con autorizacin deWernerKhlb randt, Da NengWangy Yoshinori
Fujiyoshi, Nature 367:618, 1994, copyright 1994, Macmian Magazines Ltd.)
(paso 2, fig. 6-13) a una molcula de plastoquinona (desig-
nada QA) enlazada a la protena DI en el lado externo (del
estroma) de la membrana. La plastoquinona (PQ) es una
molcula Hposoluble (fig. 6-14) de estructura similar a la
ubiquinona (fig. 5-12, c) . El electrn de la plastoquinona
QA se transfiere (paso 3, fig. 6-13) a una segunda plastoqui-
nona (designada QB), generando una forma semirreducida
de la molcula (Q~) que permanece firmemente enlaza-
da a la protena DI del centro de reaccin. Con cada una de
estas transferencias, los electrones se aproximan cada vez
ms al lado del estroma de la membrana.
Conforme ocurren los acontecimientos descritos antes,
el agujero del electrn en el pigmento con carga positiva
(P680+) se llena mediante la transferencia de un electrn
(paso A, fig. 6-13) procedente de un residuo especfico de
tirosina (designado Tirz) de la protena DI, formando Tirz+
y P680 neutro. A su vez, Tir^"1" se reduce al aceptar electro-
nes suministrados por el agua (paso B, fig. 6-13), segn
analizaremos ms adelante.
La absorcin de un segundo fotn por P680 enva un
segundo electrn a lo largo de la va, de feofitina a QA, a
QB~ para formar QB 2" (paso 4, fig. 6-13), que se combina
con dos protones para formar QsH2 (PQH2) (paso 5, figs. 6-
13 y 6-14). Los protones empleados en la formacin de PQHi
se derivan del estroma, lo que provoca disminucin de la
concentracin de H+ del estroma (elevacin de su pH). La
molcula PQH2 reducida se disocia de la protena y es sus-
tituida por una nueva molcula QB recien oxidada proce-
dente de la reserva de plastoquinona de la bicapa (paso 6,
fig. 6-13). En la siguiente seccin seguiremos el destino de
los electrones (y protones) transportados por PQHj.
Flujo de electrones del agua a PSII
La parte menos conocida de toda la cadena que se extiende
desde el agua hasta NADP+ es el primer segmento entre
H2O y PSII. El desdoblamiento del agua es altamente
endergnico debido a la asociacin estable del hidrgeno
con los tomos de oxgeno. Consideremos que en el labora-
torio el desdoblamiento del agua requiere el empleo de una
fuerte corriente elctrica o temperaturas que se aproximan
a 2 000C. Aun as, una clula vegetal puede efectuar esta
hazaa en una montaa nevada utilizando la pequea can-
tidad de energa procedente de la luz visible.
Se cree que la formacin de una molcula de oxgeno
durante la fotolisis requiere la prdida simultnea de cuatro
electrones procedentes de dos molculas de agua, segn la
reaccin
2H2O -> 4H+ + O2 + 4e-
Incluso un centro de reaccin PSII slo puede generar a la
vez una carga positiva (P680+), o un equivalente oxidante.
En PSII se asocian cuatro iones manganeso (Mn) (fig. 6-13)
que desempean un papel vital en la formacin de oxgeno.
Los cuatro iones reunidos acumulan cuatro cargas positi-
0
: 2H* (del estroma)
DESTELLO
L u z ti lacoi de
FIGURA 6-13. Organizacin funcional del fotosistema II. El dibujo muestra un modelo estructural de PSII, incluyendo los principales
componentes redox que se analizan en el texto. La va que siguen los electrones est indicada por la flecha amarilla. Los acontecimientos
comienzan con la absorcin de luz por P680, lo que provoca la excitacin de un electrn y su transferencia (paso 1) a la feofitina (Feo), aceptar
primario de electrones de PSII. Subsecuentemente, el electrn pasa a QA (fase dos) y luego a Qg (paso tres) para formar un radical libre con carga
negativa (Qg~). La absorcin de un segundo fotn enva un segundo electrn a lo largo de la misma va convirtiendo en aceptor a Qs2~ (paso
cuatro); A continuacin entran dos protones del estroma (paso cinco) generando QB!"^ (que en realidad es plastoquinona reducida, PQI-y, la
cual se libera en la bicapa de lpidos y es sustituida por una nueva molcula QB oxidada (paso seis). Conforme ocurren los sucesos anteriores,
los electrones se desplazan desde H2 por la va Tirz al pigmento del centro de reaccin con carga positiva (pasos B y A).
vas sucesivas que en el estado de oxidacin proceden desde
O hasta +4. El grupo Mn alcanza el estado de oxidacin +4
(o 64) transfiriendo cuatro electrones, uno a la vez, al P680+
cercano (va Tirz+)- Despus de transferir cada electrn a
P680+ para regenerar P680, el pigmento vuelve a oxidarse
(regresando a P680+) luego de absorber otro fotn. Por lo
tanto, la acumulacin de cuatro cargas positivas (equiva-
lentes oxidantes) en el grupo Mn se efecta gracias a la
absorcin sucesiva de cuatro fotones en el centro de reac-
cin PSII. Una vez logrado esto, el oxgeno liberado en el
complejo PSII puede catalizar la eliminacin de 4e~ de las
molculas 2H2, generando un O2 y regenerando al grupo
Mn completamente reducido (estado SQ). Este proceso se
puede escribir como
4H++O2 2H2O
4e-
)
hv- hv. hv-
La reaccin requiere la presencia de iones cloro y iones cal-
cio; la razn de estos cofactores todava no es clara.
Los protones producidos en la reaccin de fotolisis se
desplazan a la luz del tilacoide donde contribuyen al gra-
diente de protones. La demostracin de la acumulacin de
equivalentes oxidantes sucesivos se obtuvo por primera vez
exponiendo clulas de algas a destellos muy breves de luz
(1 /fseg). Despus de 1 o 2 destellos prcticamente no se
libera oxgeno. Las clulas deben iluminarse varias veces
para que detecten una cantidad cuantificable de 2, lo que
indica que para liberar O2 debe acumularse el efecto de
fotorreacciones individuales (fig. 6-15).
De PSII a PSI
Anteriormente se describi cmo la absorcin de dos foto-
nes sucesivos en el centro de reaccin PSII conduce a la
formacin de una molcula de plastoquinona totalmente
reducida (PQH2) que se libera en el interior de la reserva de
PQ en la bicapa de lpidos. PQH2 es un transportador
de electrones movibles cuya estructura y funcin es similar
CH3
(CH,-CH=C-CrU,-H
C H 3
~CH= C
OH
Plastoquinol
FIGURA 6-14. Plastoquinona. La aceptacin de dos electrones y de
dos fotones reduce PQ (plastoquinona) a PQH2 (plastoquinol).
a UQH2 de la cadena respiratoria de las mitocondrias (pg.
184). Durante la fotosntesis, los electrones procedentes de
PQH2 se transfieren a un complejo multiprotenico denomi-
nado citocromo b$f(paso 1, fig. 6-16), en tanto que los proto-
nes se liberan en el interior de la luz tilacoide (paso 2, fig.
6-16). Puesto que estos protones originalmente se derivan
del estroma, su liberacin en la luz constituye una translo-
cacin de protones a travs de la membrana tilacoide (fig.
6-18). Los electrones procedentes del citocromo ^/se trans-
i i i i i i i i i i i I
12 16
Destello nmero
FIGURA 6-15. Medicin de la cintica de liberacin de C> 2. La
grfica muestra la respuesta de doroplastos aislados que se mantuvie-
ron en la oscuridad a destellos sucesivos de muy breve duracin. La
cantidad de oxgeno liberada es mxima cada cuatro destellos de luz.
El primer mximo ocurre despus de tres destellos (en vez de cuatro)
debido a que la mayor parte de las protenas que contienen manga-
neso se presentan en el estado M1+ cuando se mantienen en la oscu-
ridad.
FIGURA 6-16. Transporte de electrones entre PSII y PSI. El flujo
de electrones est indicado por la flecha amarilla. Los pasos se descri-
ben en el texto.
fieren a otro transportador de electrones mviles, una pro-
tena hidrosoluble que contiene cobre denominada plasto-
cianina, situada en el lado luminal de la membrana tilacoide
(paso 3, fig. 6-16). La plastocianina transporta electrones al
lado luminal de PSI, donde se transfieren a P700+, el pig-
mento con carga positiva del centro de reaccin PSI (paso 4,
fig. 6-16).
Operacin PSI y reduccin de NADP+
Los sucesos fotoqumicos que tienen lugar en PSI se inician
con la absorcin de fotones por un complejo captador de
luz (denominado LHCI) que contiene molculas antena
de clorofila formando un complejo de varios polipptidos
diferentes. La energa de la excitacin pasa de los pigmen-
tos antena al centro de reaccin PSI, una multiprotena com-
pleja grande que contiene varios centros redox diferentes
(fig. 6-17). El pigmento del centro de reaccin es una mol-
cula de clorofila a, P700, que al aceptar la energa de la
excitacin se convierte en P700+ oxidado. La oxidacin del
pigmento ocurre conforme se transfiere un electrn a una
segunda molcula de clorofila a (designada AO), que acta
como aceptor primario de electrones (paso 1, fig. 6-17). La
separacin de cargas en PSI que acompaa a la absorcin
de un fotn da como resultado la formacin de un agente
oxidante dbil (P700+) y un agente reductor fuerte (Ao~). El
agente reductor formado en PSI debe tener un potencial
redox suficientemente negativo (estimado en 0.7V ) capaz
de reducir NADP+ (potencial redox de -0.324 V).
La separacin inicial de cargas se estabiliza por la trans-
ferencia del electrn de AQ~ a travs de varias "manos",
incluyendo un tipo de quinona denominado filoquinona (de-
signado Aj) y tres centros de hierro y azufre (designados
FX , FB y FA), todos formando parte del centro de reaccin
PSI (pasos 2-4, fig. 6-17). La formacin de P700+ ocurre en
el lado luminal de la membrana y el electrn que pierde el
aceptor primario pasa a travs de la membrana hasta los
centros de hierro y azufre del lado del estroma. A continua-
cin, el electrn se transfiere a una pequea protena perif-
rica de hierro y azufre denominada ferredoxina (paso 5, fig.
6-17). De la ferredoxina, el electrn pasa al NADP+ junto
con un protn, formando NADPH (paso 6, fig. 6-17). Esta
reaccin es catalizada por una enzima grande denominada
ferredoxina-NADP+ reductasa (FNR). Puesto que necesita
dos electrones para formar NADPH y una molcula indivi-
CAPITULO 6 Fotosntesis y dorophstos 221
H+ + N AD P+ N AD PH
F IGUR A 6-17. Organizacin funcional del
fotqsistema I. El dibujo muestra un modelo es-
tructural de PSI, incluyendo los principales com-
ponentes redox analizados en el texto. Los suce-
sos se inician con la absorcin de luz por P700, lo
que provoca la excitacin de un electrn y su
transferencia (paso uno) a AQ, el aceptor primario
de electrones de PSI. Posteriormente el electrn
pasa a A; (paso dos) y luego a un centro de hierro
y azufre denominado FX (paso tres) y despus a
travs de dos centros ms de hierro y azufre (FA
y FE), y por ltimo a la ferredoxina, una protena
pequea de hierro y azufre (paso cinco). Cuando
dos molculas diferentes de ferrodoxina han
aceptado un electrn, actan juntas para reducir
una molcula NADP+ a NADPH (paso seis). El
pigmento deficiente en electrones se reduce por
medio de un electrn donado por plastocianina
(paso A).
Luz tilacoide
dual de ferredoxina slo puede aceptar un electrn, duran-
te la reduccin deben actuar juntas dos ferredoxinas:
2 Ferredoxinare(j + H+
NADP+
ferredoxina-NADP + reductasa
2 ferredoxinaov + NADPH
La eliminacin de un protn del estroma aumenta el gra-
diente de protones a travs de la membrana tilacoide.
No todos los electrones que pasan a la ferredoxina ter-
minan inevitablemente en NADPH; pueden tomar rutas
alternas, segn el organismo particular y las condiciones
del momento. Por ejemplo, los electrones procedentes de
PSI pueden pasar a varios aceptares inorgnicos, que por lo
tanto se reducen. Estas vas para electrones a veces condu-
cen a la reduccin final de nitrato (NOs") a amonio (NHs)
o de sulfato (SO42~) a sulfhidrilo (SH), reacciones que
convierten "desperdicios" inorgnicos en compuestos ne-
cesarios para la vida. Por lo tanto, la energa de la luz solar
se emplea no slo para reducir los tomos de carbono
ms oxidados (del COa), sino tambin para reducir formas
altamente oxidadas de nitrgeno y tambin tomos de
azufre.
Si reconsideramos todo el proceso de transporte de elec-
trones que tiene lugar durante la fotosntesis oxignca (re-
sumida en la figura 6-18), podemos observar que los elec-
trones viajan del agua al NADP+ por accin de dos f otosiste-
mas que absorben luz que generan C> 2 y NADPH. Adems,
se establece un gradiente de protones a travs de la mem-
brana tilacoide como resultado de la eliminacin de H+ del
estroma y liberacin de H+ en la luz tilacoide. La contribu-
cin al gradiente de protones (fig. 6-18) tiene su origen en:
1) separacin del agua; 2) adicin de 2H+ a Qe2~ para for-
mar QeH2 y la liberacin subsecuente de los protones por el
citocromo b ^ f , y 3) reduccin del NADPH. Es necesario ab-
sorber cuando menos ocho fotones (cuatro por cada foto-
sistema) para la formacin de una molcula de 2 y dos
molculas de NADPH.
6-5 Fotof osf orilacin
La conversin de un mol de CC> 2 a un mol de carbohidrato
(CH2) requiere el ingreso de una cantidad considerable
de energa; especficamente, tres moles de ATP y dos de
NADPH (fig. 6-22). El mecanismo para la sntesis de ATP
en un cloroplasto es prcticamente idntico al de la mito-
condria y la membrana plasmtica de las bacterias aerobias.
Igual que en otros casos, la ATP sintasa (fig. 6-18) consta de
una pieza cabeza (denominada CFi en los cloroplastos), que
contiene el sitio cataltico de la enzima, y una pieza basal
(CFo) integrada en la membrana, que forma un canal para
Estroma
CF
U.
Luz
tilacoide
P, + ADP
AT P :
2NADPH
2H4 +2NADP 1
FIGURA 6-1 i. Resumen de las reacciones fotodependientes. a) Re-
sumen del flujo de electrones procedentes de H2O hacia NADPH a tra-
vs de los tres complejos transmembrana. Se muestra el menor nmero
de protones translocados a travs de la membrana como resultado de
la oxidacin de dos molculas de agua. Se pueden translocar otros
protones como resultado de la reduccin de molculas adicionales de
plastoquinona, la accin de una bomba de protones, o ambos. Tambin
se muestra la ATP sintasa de la membrna tilacoides que se analiza en
la siguiente seccin. Los experimentos sugieren que se requieren tres
protones para sintetizar cada molcula de ATP. b) Versin detallada del
esquema Z que muestra la energtica de los dos fotosistemas y los di-
ferentes transportadores de electrones implicados en las reacciones
fotodependientes.
cit bsf
Reserva P Q
( a )
P700'
-400 i-
-200
O
+200
+400
+600
+800
+1000
P680*
HA
O , T t r 2
\.
Feo
X
'-Fe-S
<- f l x
'\, BVH FNR
f ' F d
1 P700 |
( b)
protones. Las dos partes estn conectadas por un tallo. Las
diferentes partes de la ATP-sintasa se construyen a base de
polipptidos homlogos a los encontrados en las enzimas
bacterianas y mitocondriales.
Los grandes complejos ATP-sintasa no se distribuyen
uniformemente a travs de la membrana tilacoide, pero se
localizan de manera preferencia! en las laminillas del estro-
ma y en las regiones expuestas de las grana ( fig. VE 6-4).
Las piezas cabeza, CFi, se proyectan por fuera al interior
del estroma conservando la orientacin del gradiente de
protones, cuya concentracin ms alta est en la luz tila-
coide. Por lo tanto, los protones se desplazan desde el sitio
de mayor concentracin en la luz por medio de la ATP-
sntasa al interior del estroma, y por lo tanto opera el proce-
so de fosforilacin.
Cuando la fotosntesis se lleva a cabo con cloroplastos
aislados, el medio en el cual se encuentran inmersos se
alcaliniza conforme los protones son translocados a travs
de las membranas tilacoides al interior de la luz del tilacoide.
Las mediciones efectuadas durante periodos de sntesis
mxima de ATP sugieren que hay diferencias de con-
centracin de H+ de 1 000 a 2 000 veces a travs de las
membranas tilacoides, lo que corresponde a un gradiente
de pH (ApH) de 3 a 4 unidades. El movimiento de protones
dentro de la luz durante el transporte de electrones se com-
pensa por el movimiento de otros iones, de modo que no se
establece un potencial de membrana significativo. Por lo
tanto, a diferencia de las mitocondrias, la fuerza motriz de
protones (Ap) que acta en los cloroplastos se debe princi-
pal o exclusivamente a un gradiente de pH. Puesto que la
luz de los tilacoides est prcticamente desprovista de enzi-
mas, el pH bajo de este compartimiento (pH 4.5) no tiene
efecto nocivo sobre la actividad celular.
Fosforilacin no cclica en comparacin
con la cclica
La formacin de ATP durante el proceso de fotosntesis
liberadora de oxgeno se denomina fotofosforilacin no
cclica debido a que los electrones se desplazan en una va
lineal (o sea, no cclica) desde H2O a NADP+ (fig, 6-18).
Durante el decenio de 1950 se demostr que cloroplastos
aislados eran capaces de formar ATP en ausencia de NADP+
o de C2- Todo lo que se necesita es luz, cloroplastos, ADP
y Pj. El proceso descubierto posteriormente se llam fotofos-
forilacin cclica y se ilustra en la figura 6-19. PSI lleva a
cabo la fotofosforilacin cclica de manera independiente
de PSII. El proceso se inicia con la absorcin de un quantum
de luz en PSI y la transferencia de un electrn de alta ener-
ga al aceptor primario. A partir de all, el electrn se trans-
fiere a lo largo de la ferredoxina, como siempre es el caso,
pero en vez de transferirse al NADP+ el electrn pasa de
nuevo al centro de reaccin deficiente en electrones, para
completar el ciclo. Durante el flujo de electrones en este
trayecto se libera suficiente energa libre para translocar
protones a travs de la membrana por medio del complejo
citocromo bg/ y para establecer un gradiente de protones
capaz de efectuar la sntesis de ATP. La preponderancia de
fotofosforilacin cclica en comparacin con la no cclica en
un cloroplasto particular refleja presumiblemente las nece-
sidades de la clula de ATP, NADPH y carbohidratos en
ese momento.
6-6 Fijacin de dixido de carbono
y formacin de carbohidratos
FI G U R A 6-1 < J . Esquema simplificado de la fotofosforilacin ccli-
ca. La absorcin de luz por PSi excita un electrn que se transfiere a
la ferredoxina (paso 1) y al citocromo b f (2), a plastocianina (3), y
regresa a P700+ (4). En el proceso, el complejo citocromo transloca
protones.
Despus de la segunda guerra mundial, Melvin Calvin y
sus colegas, de la Universidad de California, en Berkeley,
iniciaron lo que se conoci como el decenio largo del estu-
dio de las reacciones enzimticas mediante las cuales se
asimila dixido de carbono en las molculas orgnicas de
las clulas. Armados con el recientemente disponible isto-
po radiactivo de carbono (14C) de vida media prolongada, y
la nueva tcnica de cromatografa bidimensional en papel,
emprendieron la tarea de identificar todas las molculas
marcadas formadas donde se permite a las clulas utilizar
[14C]C>2. Los estudios comenzaron con hojas de plantas, pero
pronto se cambi a un sistema ms sencillo, el alga Clordla.
Las algas cultivadas crecieron en cmaras cerradas en pre-
sencia de CC>2 no marcado y luego se introdujo CC>2 radiac-
tivo (en forma de gas disuelto) mediante inyeccin en el
medio de cultivo. Luego de determinado tiempo de incuba-
cin con C2 marcado, se dren de lquido la suspensin de
algas y se pas a un contenedor con alcohol caliente para
matar las clulas de inmediato, deteniendo la actividad
enzimtica, y para extraer molculas solubles. A continua-
cin se colocaron los extractos de las clulas como puntos
sobre papel cromatogrfico y sujetados a cromatografa bi-
dimensional. Para identificar el sitio de los compuestos ra-
diactivos al final del procedimiento, se comprimi un pe-
dazo de pelcula de rayos X contra el cromatgrafo y las
placas se mantuvieron en la oscuridad para exponer la pel-
cula. Despus de revelar las fotografas, los compuestos
radiomarcados se identificaron comparando los estndares
conocidos y tambin por anlisis qumicos.
La va Cg
Se encontr que la conversin de C2 marcado a compues-
tos orgnicos reducidos ocurre de manera muy rpida. Si el
periodo de incubacin es muy breve (unos pocos segun-
dos), predomina un punto de radiactividad sobre el croma-
tograma (fig. 6-20). Se determin que el compuesto es un 3-
fosfoglicerato (PGA), uno de los intermediarios de la glucli-
sis. Puesto que el primer intermediario que se identific fue
la molcula PGA de tres carbonos, estas reacciones se cono-
5 segundos de fotosntesis cor
Chlorel la
Azcar iJ1 fosfato;
FIGURA 6-20 Cromatograma que muestra los resultados de un
experimento en el cual clulas de algas se incubaron durante cinco
segundos con 14COz antes de sumergirlas en alcohol. Un punto, que
corresponde a 3-fosfoglicerato (PGA marcado) contiene la mayor
parte de la radiactividad. (Cortesa de James Bassham y Melvin Calvin.)
cieron como va 3. Inicialmente, Calvin sospech que el
C2 se una por enlaces covalentes (o se fijaba) a un com-
puesto de dos carbonos. Sin embargo, luego de una inves-
tigacin considerable se descubri que el aceptor inicial era
un compuesto de cinco carbonos, rbulosa 1,5-difosfato
(RuBP), el cual al condensarse con C2 forma una molcula
de seis carbonos. Este compuesto de seis carbonos se frag-
menta de inmediato en dos molculas de PGA, una de las
cuales contiene el tomo de carbono recin aadido.
El papel de la ribulosa 1,5-difosfato como aceptor de
C2 se demostr en varios experimentos, como el ilustrado
en la figura 6-21. Es bien sabido que cuando se administra
C2 marcado a las clulas, luego de cierto periodo cada uno
de los puntos presenta mxima radiactividad; o sea, se sa-
turan de radiactividad. Se ha observado que las clulas ex-
puestas durante suficiente tiempo a [14C]2 en la luz para
saturar de radiactividad a los intermediarios presentan ele-
Luz Oscuridad
I
20-
s 10
Fosfogl icerato
Ribulosa difosfato
..~. o,
100 200 300
T i e m p o ( s e g u n d o s ) L u z a p a g a d a
F I GURA 6-2 ]. Datos en apoyo de la hiptesis de que RuBP es el
compuesto al cual se fija el C2- Cuando se apagaron las luces que
iluminaban un cultivo de algas con una cantidad mxima de istopos
marcados, hubo un descenso casi inmediato de la concentracin de
RuBP y la correspondiente elevacin de la concentracin de PGA. Esto
sera de esperar si se consumiera RuBP durante la fijacin de CO2,
paso que conduce a la formacin de PGA.
vacih inmediata de radiactividad en PGA y descenso in-
mediato de radiactividad en ribulosa 1,5-disfosfato (fig. 6-21)
cuando se apaga la luz. La razn de este resultado se de-
muestra al considerar la necesidad de ATP y NADPH sinte-
tizados en las reacciones de luz para la sntesis de RuBP
(fig. 6-22, & ). En ausencia de ATP y de NADPH, el PGA
marcado no puede convertirse a otros intermediarios ni
pueden formarse nuevas molculas de RuBP. En contraste,
la condensacin de CC> 2 con RuBP y la subsecuente conver-
sin a PGA pueden continuar debido a que esta reaccin no
depende de productos de alta energa formados en las
reacciones con luz. Por consiguiente, la radiactividad de
PGA se eleva, en tanto que la radiactividad de RuBP des-
ciende.
Tanto la condensacin de RuBP con C2 como la sepa-
racin del producto de seis carbonos (fig. 6-22, a) tienen
lugar en el estroma por medio de una enzima grande de
mltiples subunidades, ribulosa dif osf ato carboxilasa. Esta
enzima, conocida comnmente como "Rubisco", slo es
capaz de fijar tres molculas de CC>2 por segundo, y por lo
tanto debe estar presente en gran cantidad dentro del cloro-
plasto. En realidad, Rubisco constituye la protena ms abun-
dante sobre la Tierra, y equivale a casi la mitad de la prote-
na de la mayor parte de las hojas o cerca de 10 kg por cada
ser humano del planeta.
Conforme se determin la estructura de varios inter-
mediarios, junto con la posicin de los tomos de carbono
marcados, cada vez fue ms aparente que la va para con-
vertir CC-2 en carbohidratos es bsicamente circular. En la
figura 6-22, b, se muestra una versin "abreviada" de la va.
El crculo comprende tres partes principales: 1) carboxilacin
para formar PGA; 2) reduccin de PGA a gliceraldehido 3-
fosfato (GAP) utilizando el NADPH y el ATP formados por
transporte de electrones en las reacciones dependientes de
luz, y 3) la regeneracin de RuBP, que requiere ATP adicio-
nal. En la figura 6-22, b, se puede observar que por cada seis
molculas fijadas de C2 se producen 12 molculas de GAP
(GAP es el punto marcado como triosa fosfato sobre el
cromatograma de la figura 6-20). Los tomos en 10 de estas
molculas GAP de tres carbonos se redisponen para rege-
nerar seis molculas del aceptor de cinco carbonos de CC> 2,
RuBP (fig. 6-22, b). Las otras dos molculas GAP se pue-
den considerar como productos. Estas molculas GAP
pueden exportarse al citoplasma, donde se convierten en el
disacrido sacarosa o se oxidan por medio de gluclisis y
el ciclo del cido tricarboxlico para suministrar ATP en el
citoplasma. Alternativamente, GAP puede permanecer en
el cloroplasto, donde se convierte en almidn.
Las molculas de sacarosa formadas en el citoplasma a
partir del GAP de la va Cs se transportan fuera de las clu-
las de la hoja y dentro de la corteza, donde se transfieren a
los diferentes rganos no fotosintticos de la planta. As
como la glucosa sirve como fuente de energa y unidad
orgnica de construccin en la mayor parte de los animales,
la sacarosa tiene un papel anlogo en casi todas las plantas.
Por otra parte, el almidn se almacena dentro de las clulas
vegetales en forma de granulos (fig. 2-16, b}. De la misma
manera que el glucgeno almacenado suministra a los ani-
males una glucosa rpidamente disponible en tiempos de
necesidad, el almidn almacenado en las hojas proporciona
azcares a la planta durante la noche cuando cesa la foto-
sntesis.
De las reacciones de la figura 6-22, b, es evidente que la
formacin de carbohidratos es una actividad costosa. La
conversin de seis molulas de C2 a una molcula de az-
car de seis carbonos y la regeneracin de RuBP requiere 12
molculas de NADPH y 18 molculas de ATP. Este gran
consumo de energa refleja el hecho de que CC>2 es la forma
ms altamente oxidada de la cual se puede obtener carbo-
no. Las reacciones que constituyen la va C^ (tambin de-
nominada ciclo Calvin o ciclo de reduccin de la pentosa
fosfato) ocurren en cianobacterias y en todas las clulas fo-
C
C H?OPO
I
C - O H
C hLOPO r
I
C J C Ô H H
O
H C -O H
1
C H2OPO \P
(Forma ene-diol)
( a)
c=o o
I I
H C -OH H
C H2OPO f
Intermediario
C H2OPO f
HC -OH
o = c -o -
I
HC -OH
C H2OPO f
3-PGA
6 (C 02)
H O -C -C O C
C -0
I
HC OH
6 carboxilasa intermediaria
S E P AR AC IO N E S
HC OH
I
HC OH
C H2OPOf
6 (Ru B P)
1 2 ( P GA) HC OH
C i cl o de C alvin-B enson
0
6 AD P + 6 P
1 0 ( GAP )
H
I
C =0
HC OH
I _
C H2OPO
1 2 ADP + 1 2P
C H2OPOf
rx
cH2op or \2 NADPH
1 2 NADP+
2 GAP > Fru ctosa -*-Sacarosa
1 ,6-difosfato
( b)
FIGURA 6-22. Conversin de COz en carbohidrato, a) Reaccin catalizada por ribulosa difosfato carboxilasa para fij ar CO2 por unin a RuBP.
El producto se desdobla rpidamente en dos molculas de 3-fosfoglicerato. b) Una versin abreviada del ciclo de Calvin que muestra el destino
de seis molculas de CC>2 fijadas por combinacin con seis molculas de RuBP. (Se han borrado numerosas reacciones.) La fijacin de CX >2 se
indica en el paso 1. En el paso 2 se fosforilan las 12 molculas PGA para formar 12 molculas de 1,3-difosfoglicerato, que en el paso 3 sufren
reduccin por electrones suministrados por NADPH para formar 12 molculas de gliceraldehido 3-fosfato (GAP). En el caso que aqu se muestra,
se eliminan dos molculas GAP (paso 4) para emplear en la sntesis de sacarosa en el citosol, que se puede considerar el producto de las reacciones
independientes de luz. Las otr^s 10 molculas se convierten en seis molculas de RuBP (paso 5), que pueden actuar como aceptares de seis
molculas ms de C2. La regeneracin de 6 RuBP requiere la hidrlisis de seis molculas de ATP. NADPH y ATP empleados en la formacin
de carbohidratos en el ciclo de Calvin son los dos productos de alta energa de las reacciones foto-dependientes.
osintticas eucariotas; forman la nica va significativa para
que el carbono inorgnico presente en la atmsfera se con-
vierta en las complejas molculas biolgicas necesarias para
la vida. La mayor parte de las enzimas del ciclo Calvin
tambin se encuentran en otras vas, incluyendo la glucli-
sis. Una vez ms, es evidente la importancia de las membra-
nas en la compartamentalizacin celular. Aunque muchos
de los intermediarios formados en el ciclo Calvin tambin
son sustratos en otras vas, su formacin dentro del estroma
del cloroplasto los aisla de las enzimas del citoplasma.
Fotn'espiracin
Un punto de los que aparecieron en los primeros cromato-
gramas de los trabajos de Calvin con clulas de algas se
identific como el compuesto glucolato, el cual fue ignora-
do (correctamente) al formular la va C$ de la figura 6-22.
Aunque el glucolato no forma parte de la va Cs, es produc-
to de una reaccin catalizada por Rubisco. Casi 20 aos
despus de observar que Rubisco cataliza la unin de C2
a RuBP se descubri que Rubisco tambin cataliza una se-
gunda reaccin, en la cual se une C> 2 a RuBP para formar 2-
fosfoglucolato (fig. 6-23), el cual subsecuentemente se con-
vierte dentro del estroma a glucolato mediante la accin de
una enzima. El glucolato formado en el cloroplasto se trans-
fiere a la mitocondria y finalmente conduce a la liberacin
de CC> 2, como describiremos posteriormente (fig. 6-25).
Esta serie de reacciones implica captacin de Oj y libe-
racin de CC> 2, por lo que se denomina f otorrespiracin. La
fotorrespiracin libera molculas de C2 recin fijadas y
por esa razn se considera un desperdicio de la energa de
la planta. En realidad, la fotorrespiracin puede explicar la
prdida hasta de 50% del dixido de carbono recin fijado
por plantas cultivadas que crecen en condiciones de ilumi-
nacin muy intensa. Por lo tanto, como sera de esperar,
desde hace varios decenios se desarrrolla un esfuerzo con-
certado para desarrollar plantas con menor probabilidad de
efectuar la fotorrespiracin. Hasta ahora, estos esfuerzos
prcticamente han sido infructuosos, como se analiza en
detalle en el ensayo La perspectiva humana: "Mejores" plantas
por medio de ingeniera gentica.
Estudios de la actividad enzimtica de Rubisco purifi-
cado muestran que la enzima no tiene preferencia por C2
como sustrato en comparacin con C*2. La razn de esta
falta de especificidad es que al parecer ni el C2 ni el C 2 se
unen al sitio activo de la enzima. Ms bien, la enzima se une
a RuBP, que adopta la forma enediol mostrada en la figura
6-23. Esta forma de RuBP puede entonces ser atacada por
C2 o por C> 2 para formar PGA o fosfoglucolato, respectiva-
mente. Considerada de esta manera, la fotorrespiracin
parece ser una consecuencia inevitable de las propiedades
qumicas de RuBP. Puesto que C 2 y C2 compiten entre s,
la direccin predominante de la reaccin es determinada
por la proporcin C2/O2 disponible para la enzima. S las
plantas crecen en ambiente cerrado con concentracin ele-
vada de C2, tienen capacidad para crecer con mucha ma-
yor rapidez en virtud de su elevada tasa de fijacin de CC> 2.
Por lo contrario, cuanto mayor sea la concentracin relativa
de C> 2 en comparacin con la de CC> 2, la planta participa
ms en la fotorrespiracin y es menor la fijacin de dixido
de carbono. Dos grupos de plantas, denominadas 04 y MAC,
02CO;
H2C-OP032-
H2C-OP032~
I
C=0
I
H-C-OH
H-C-OH
H2C-OP032~
RuBP
H2C-OP032-
Oxi genasa intermedia
H2C-OPQ32-
HO-C-COO-
I
C=0
I
H-C-OH
H2C-OP032-
Carboxi l asa intermedia
o-
c=o
H-C-OH
H2C-OP032~
3-PGA
+ 2HH
O
II
c-o-
H2C-OP032-
2-fosfogl col ato
FIGURA 6-23. Reacciones de la fotorrespiracin. El Rubisco puede catalizar dos reacciones diferentes con RuBP como sustrato (mostradas
en estado enediol dentro del plano). Si RuBP reacciona con O2 (paso Ib) se produce una oxigenasa intermedia (paso 2b) que se desdobla en 3-
PGA y 2-fosfoglicoato (paso 3b). Las reacciones subsecuentes de fosfoglicolato se muestran en la figura 6-25. El resultado final de estas reacciones
es la liberacin de CO2, una molcula de la que la clula gasta previamente energa para fijarla. En contraste, si la molcula RuBP reacciona con
CO2 (paso la), se produce una carboxilasa intermedia (paso 2a) que se rompe en dos molculas de PGA (paso 3a), la cual contina a travs del
ciclo de Calvin.
han superado los efectos negativos de la fotorrespiracin
desarrollando una innovacin evolutiva que incrementa la
proporcin C2/O2 a la cual se exponen las molculas de
la enzima Rubisco.
Plantas 4
En 1965, Hugo Kortschak public que cuando se suminis-
tra [14C]2 a la caa de azcar, la radiactividad aparece
primero en los compuestos orgnicos que contienen un es-
queleto de cuatro carbonos y no en la molcula PGA de tres
carbonos, como se observa en otros tipos de plantas. Un
anlisis ms detallado revel que los compuestos de cuatro
carbonos (predominantemente malato y oxalacetato) son
resultado de la combinacin de C2 con fosfoenolpiruvato
(PEP), y por lo tanto representan un segundo mecanismo
de fijacin del dixido de carbono atmosfrico (fig. 6-24). La
enzima encargada de unir C2 a PEP se denomin fosfoenol-
piruvato carboxilasa y cataliza el primer paso de la va 4 (o
Hatch-Slack). Las plantas que utilizan esta va se conocen
como plantas C^ y estn representadas principalmente por
las hierbas tropicales. Antes de considerar el destino de es-
tos tomos de carbono recin fijados es til examinar las
razones de la evolucin de una va alternativa para fijar
CO2.
Cuando se colocan plantas en una cmara cerrada y se
vigila su actividad fotosinttica, una vez que la concentra-
cin de C2 en la cmara disminuye a casi 50 partes por
milln (ppm), en la mayor parte de los casos se observa que
la fotosntesis prcticamente se detiene. En contraste, una
planta que utiliza la va C contina la fotosntesis hasta
que la concentracin de C2 ha descendido a 1 o 2 ppm. La
razn de esta diferencia es que la PEP carboxilasa puede
seguir operando con concentraciones mucho ms bajas de
CC>2 en comparacin con la enzima Rubisco, pero cul es el
valor de que una planta pueda fijar COj a concentraciones
tan bajas cuando la atmsfera invariablemente contiene C2
en concentraciones muy superiores a 200 ppm? El proble-
ma se complica todava ms cuando se comprueba que: 1)
el empleo de PEP requiere un consumo adicional de ATP, y
2) las plantas no tienen una va biosinttica directa que con-
duzca de malato o de oxalacetato a carbohidrato.
El valor de la va 4 es evidente cuando se colocan
plantas C^ en un ambiente seco y caliente, similar al de
donde viven muchas de ellas. El problema ms grave al que
hacen frente las plantas que viven en un clima seco y calien-
te es la prdida de agua, llamada transpiracin, que inva-
riablemente acompaa a la captacin de C2. El dixido de
carbono entra a las hojas de las plantas a travs de orificios
situados en la superficie, denominados estomas, y por los
cuales el agua tambin puede escapar. Las plantas C4 se
FIGURA 6-24. Estructura y funcin de las plantas Cj. Micrografa electrnica de un corte transversal a travs de la hoja de una planta 4
que muestra la relacin espacial entre las clulas mesfllas y los haces de clulas de las vainas. Superpuestas en la micrografa se encuentran
las reacciones de fijacin de COi que ocurren en cada tipo de clula. En el paso 1, la enzima carboxilasa PEP une COi a PEP en una clula mesfila
localizada cerca de! exterior de la hoja. Los compuestos de cuatro carbonos formados se transportan a las clulas ms centrales localizadas en
el haz de la vaina (paso 2), donde se libera CO2- El COi se concentra mucho en las clulas de las vainas, lo que favorece la fijacin de CO2 por
la enzima carboxilasa RuBP (Rubisco) para formar 3-PGA (paso 3), el cual puede circular a travs del ciclo de Calvin. El piruvato formado cuando
se- libera COi se enva de regreso a la clula mesfila (paso 4), donde se convierte en PEP. Aunque el proceso requiere la hidrlisis de ATP {paso
5), la elevada proporcin de C2/O2 en las clulas de las vainas reduce al mnimo el efecto de la fotorrespiracin. (Micrografa electrnica cortesa
de S. Craig.)
adaptan a los ambientes calientes y ridos debido a que
tienen la capacidad de cerrar sus estomas para prevenir la
prdida de agua e incluso tambin pueden mantener una
captacin suficiente de CC2 para suministrar combustible a
su actividad fotosinttica a tasa mxima. Se dice que son
fotosintetizadores de "elevada eficiencia" debido al alto
grado de fotosntesis por unidad de agua perdida. Por esta
razn, las hierbas silvestres, plantas 4, tienden a invadir
los terrenos, desplazando a las hierbas domsticas Cj origi-
nalmente plantadas. La caa de azcar, el maz y el sorgo
son las plantas cultivadas ms importantes que utilizan la
va C< j. Puesto que las plantas C4 se desarrollan escasamente
en temperaturas fras, su distribucin est muy limitada a
latitudes al sur y al norte.
Como se mencion anteriormente, no hay va directa
de malato o de oxalacetato a carbohidrato. Cuando se sigue
el destino del CC> 2 fijado por medio de la va C^, se observa
que el grupo COj pronto se libera slo para ser capturado
por Rubisco y convertido en un intermediario metablico
de la va Cs (fig. 6-24). La razn para que las plantas C4
participen en este metabolismo aparentemente paradjico
es evidente cuando se examina la anatoma de sus hojas. A
diferencia de las plantas Cs, las hojas de las plantas C4 con-
tienen dos cilindros concntricos de clulas. El cilindro ex-
terior est formado por clulas mes/Has y el cilindro interno
por haces de clulas envainadas (fig. 6-24). La fijacin de CC2
a PEP ocurre en las clulas mesfilas externas. La actividad
de la PEP carboxilasa puede continuar, incluso cuando los
estomas de las hojas estn casi enteramente cerrados y la
concentracin de C2 en las clulas es muy baja. Una vez
formados, los productos C4 se transportan a los haces de
clulas envainadas, sellados a gases atmosfricos. Una vez
dentro de las clulas envainadas, el CC2 puede separarse
del C4 transportador, de manera que se produce una concen-
tracin elevada de C2 en estas clulas interiores, concentra-
cin adecuada para la fijacin efectuada por Rubisco. La
concentracin del dixido de carbono en las clulas envai-
nadas puede ser 100 veces mayor en comparacin con la
mesfila. Por lo tanto, ta va C4 suministra un mecanismo
para controlar la fijacin de CC> 2 efectuada por la va menos
eficiente C$ bombeando CC> 2 en el haz envainado. Una vez
separado el C2 del compuesto de cuatro carbonos, el
piruvato formado retorna a las clulas mesfilas para vol-
verse a cargar como PEP (fig. 6-24). Adems de ahorrar
agua, las plantas que utilizan la va C4 tienen capacidad
para generar una proporcin de C2/O2 elevada en el
ambiente local de Rubisco, y por lo tanto favorecen el pro-
ceso de formacin de CC> 2 de preferencia al de fotorrespi-
racin. En realidad, de ordinario fracasan todos los intentos
para demostrar fotorrespiracin en las hojas intactas de C4.
Plantas MAC
Menos de 5% de las plantas poseen otra adaptacin bioqu-
mica que les permite sobrevivir en habitat muy calientes y
secos, como los desrticos. Estas plantas, denominadas plan-
tas MAC, incluyen las suculentas (cactus), utilizan PEP
carboxilasa para fijar el CC2 atmosfrico igual que las plantas
C4, pero efectan las reacciones que dependen de luz y la
fijacin de CC>2 en momentos diferentes del da, en vez de
hacerlo en diferentes clulas de la hoja. (MAC significa me-
tabolismo cido de las crasulceas, por las plantas de la familia
Crassulaceae, en las cuales se descubri por primera vez.)
Las plantas Cs y C abren sus estomas y fijan C2 durante
el da, pero las plantas MAC mantienen sus estomas fuerte-
mente cerrados durante las horas diurnas de mayor calor y
sequedad. Luego, durante la noche, cuando la tasa de pr-
dida de vapor de agua se ha reducido mucho, abren sus
estomas y fijan C2 por medio de la PEP carboxilasa. Con-
forme se fija ms y ms dixido de carbono durante la noche,
el cido mlico generado se transporta a travs de la mem-
brana del tonoplasto al interior de las vacuolas de la clula.
La presencia de este cido C4 se manifiesta por el "sabor
matinal" agrio de la planta. Durante las horas del da, los
estomas se cierran y el cido mlico se desplaza al interior
del cloroplasto. En ese sitio cede su COz- el cual puede ser
fijado a RuBP por el Rubisco en las condiciones de baja
concentracin de C2 que existen cuando los estomas estn
cerrados. Los carbohidratos se forman utilizando ATP y
NADPH generados por las reacciones dependientes de luz.
Peroxisomas y f o torr espiracin
Los peroxisomas son organelos citoplsmicos cuyo papel
en el mecanismo oxidativo de las clulas animales se anali-
z en la seccin 5-7 del captulo anterior. Los peroxisomas
tambin estn presentes en ciertas clulas vegetales. Estudios
acerca de peroxisomas de clulas de hojas muestran un
notable ejemplo de interdependencia entre diferentes orga-
nelos. La micrografa electrnica de la figura 6-25 muestra
un peroxisoma de la clula de una hoja en estrecha aposicin
a las superficies de dos cloroplastos adyacentes y en ntima
proximidad a una mitocondria cercana. Esta disposicin no
es fortuita, sino que refleja una relacin bioqumica subya-
cente en donde los productos de un organelo sirven como
sustratos en otro organelo. Las reacciones que tienen lugar
en los diferentes organelos se superponen en la micrografa
de la figura 6-25, y ms adelante se presenta un resumen.
Anteriormente se hizo notar que los cloroplastos parti-
cipan en un proceso denominado fotorrespiracin, que se
inicia cuando RuBP reacciona con 2 en vez de C2 para
formar un compuesto de dos carbonos, el fosfoglicolato.
Una vez formado, el fosfoglicolato se convierte a glicolato,
el cual se transfiere fuera del cloroplasto en el interior de un
peroxisoma donde la enzima glicolato oxidasa lo convierte
en glioxilato, el cual puede convertirse entonces a glicina
por transaminacin. La glicina formada en el peroxisoma
puede transferirse a una mitocondria, donde se convierte
en serina. La serina producida en la mitocondria se transfie-
re de regreso al peroxisoma, donde se convierte en glicerato,
el cual puede transportarse al cloroplasto y utilizarse en la
sntesis de carbohidratos a travs de la formacin de cido
3-fosfoglicrico.
Fotoinhibicin
La fotosntesis es un proceso complejo y finamente contro-
lado. As como demasiado oxgeno puede disminuir el ren-
CAPITULO 6 - Fotosntesis y cloroplastos 229
. :. . GIfctna
Ocii Mitocondria
FIGLllA 6-2, Bases celulares de la fotorrespiracin. Micrografa electrnica de una porcin de una hoja de clulas mesfilas de la planta
del tabaco que muestra un peroxisoma (identificado por su centro cristalino) comprimido contra un par de cloroplastos y cerca de una mito-
condria. Las reacciones de fotorrespiracin que ocurren en cada uno de estos organelos se describen en el texto y se muestran superpuestas en
los organelos, en los cuales ocurren. (Micrografa cortesa de Sue Ellen Frederck y Eldon H. Newcomb.)
dimiento de la fotosntesis, tambin el exceso de luz puede
hacerlo. El efecto negativo de la luz muy intensa sobre la
fotosntesis se denomina fotoinhibicin y se cree que es
resultado principalmente del dao infligido al fotosistema
II por la absorcin de un exceso de luz. PSII opera con el
potencial de oxidacin ms alto de todos los sistemas biol-
gicos conocidos. La formacin de un agente fuertemente
oxidante y el peligro siempre presente de la formacin de
radicales oxgeno sumamente txicos confiere a PSII una
posibilidad de autodestruccin como resultado de sobre-
excitacin del sistema. Todo el dao parece dirigido al po-
lipptido (DI) que une casi todos los centros redox activos
del fotosistema. Los cloroplastos contienen un mecanismo
para la descomposicin proteoltica selectiva de DI y reem-
plazarlo por una molcula de polipptido recin sintetiza-
da. Este proceso de reciclamiento de DI, cuya tasa se incre-
menta al aumentar la intensidad de la luz, parece ser la
respuesta primaria de la fotoinhibicin inducida por luz.
L A P E R S P E C T I V A H U M A N A
"Mejores" plantas por medio de ingeniera gentica
El ser humano ha tratado de modificar
el material gentico de las plantas du-
rante miles de aos mediante seleccin
de cultivos e hibridacin. Con el desa-
rrollo de la tecnologa del DNA recom-
binante, los genetistas de plantas logra-
ron modificar selectivamente genes
especficos que codifican caractersti-
cas de inters para la agricultura, de
modo que se desarrollaron nuevas es-
pecies con mejores caractersticas. En-
tre los rasgos que los genetistas de plan-
tas les gustara modificar est el grado
de resistencia a sustancias qumicas
que matan plantas (herbicidas) y el ni-
vel de resistencia a la fotorrespiracin;
ambos incluyen temas que analizare-
mos en este captulo.
Algunos de los herbicidas comu-
nes, incluyendo diurn, atrazina y
terbutrina, actan enlazndose a la pro-
tena DI de PSII. En la pgina 218 vi-
mos cmo la absorcin de la luz por
PSII conduce a producir una molcula
PQ2, que posteriormente se libera de
un sitio (el sitio QB) de la protena DI y
es sustituido por una PQ de la reserva.
Los herbicidas mencionados antes ac-
tan enlazndose al sitio QB abierto
luego de liberar PQF2, al bloquear el
transporte de electrones a travs de
PSII.
Recordemos que el centro de reac-
cin fotosinttico (CRF) de las bacte-
rias prpura se parece mucho al de
PSII, tanto en estructura como en me-
canismo de operacin. La operacin del
CRF bacteriano normalmente es in-
hibida por el herbicida terbutrina,
causando la muerte de las clulas. La
difraccin por rayos X de estas prepa-
raciones revela una bolsa en la prote-
na del centro de reaccin, a la cual se
une la molcula de terbutrina. Se han
aislado algunas bacterias mutantes re-
sistentes a terbutrina. Inversamente,
una bacteria muante (el mutante T4)
es sensible a los herbicidas f enlico y de
tipo urea, agentes que normalmente ac-
tan sobre las plantas pero que no tie-
nen efectos sobre bacterias prpura. El
mapeo gentico de los sitios de estas
diferentes mutaciones ha puntualiza-
do las partes de la protena bacteriana
implicadas en el enlace con el herbici-
da. Puesto que la protena DI de los
fotosstemas vegetales presenta una ho-
mologa estrecha con las protenas bac-
terianas, estos datos abrieron la puerta
a modificaciones selectivas del gen DI
para alterar la resistencia de las plan-
tas a estos herbicidas.
Los agrnomos tienen la esperan-
za de emplear tcnicas de ingeniera
gentica para incrementar la sensibili-
dad de las plantas no deseadas (p. ej.,
maleza) a los herbicidas, en tanto se
aumenta la resistencia a los herbicidas
en plantas de valor en horticultura o
agricultura. Si se pudiera lograr esto,
la utilidad de los herbicidas aumenta-
ra mucho. En aos recientes se han
aislado de plantas o de microorga-
nismos varios inhibidores PSII, como
gramidol, estigmatolina, auraquinas y
cianobacterinas. Un estudio ms deta-
llado de estos "herbicidas" naturales
puede llevar a la produccin de nue-
vos exterminadores de maleza menos
peligrosos para el ambiente.
Una de las metas ms difciles de
lograr para los bilogos moleculares
de plantas es disear una versin del
Rubisco, la enzima fijadora del C2 de
todas las plantas, que sea menos sus-
ceptible a la fotorrespiracin (pgina
226). En el texto se hizo notar que el
Rubisco acta como oxigenasa (enzi-
ma fijadora de 02) y como carboxilasa
(enzima fijadora de CC>2). El Rubisco
sera menos susceptible a la fotorrespi-
racin si se pudiera alterar su estructu-
ra, de modo que su actividad oxigenasa
disminuyera en relacin con su activi-
dad carboxilasa. Aunque los intentos
para modificar la enzima e incremen-
tar su capacidad de fijacin de C2 a
expensas de la fotorrespiracin no tu-
vieron xito en el pasado, estudios re-
cientes acerca de microorganismos han
aumentado el optimismo de que pue-
de lograrse este objetivo.
Los organismos ms tiles en esta
tarea han sido: 1) la bacteria no sul-
furosa prpuraR. rubrum, cuyo Rubis-
co funcional requiere la expresin de
un solo gen sencillo en vez de dos, como
en las plantas, y 2) el alga verde Cha-
mydomonas reinhardt, que tiene capa-
cidad de fotosntesis pero puede cre-
cer en ausencia de fotosntesis tanto
como su entorno contenga nutrientes
orgnicos.
Se han aislado cepas mutantes de
estos microorganismos que expresan
mayor actividad carboxilasa y menor
actividad oxigenasa en comparacin
con el tipo nativo. Por consiguiente, el
crecimiento de estas cepas en presen-
cia de concentraciones elevadas de 2
no inhibe la fotosntesis hasta un gra-
do cercano a lo que normalmente ocu-
rrira. En la actualidad se estn efec-
tuando estudios para determinar la
razn de que estos mutantes muestren
menor actividad oxigenasa. Una hi-
ptesis es que la sustitucin de ami-
nocidos altera el canal por el cual los
gases atmosfricos llegan al sitio acti-
vo de la enzima, y por lo tanto el canal
es menos accesible a 2. Puesto que la
fotorrespiracin desempea un papel
importante en la reduccin de la pro-
ductividad de la mayor parte de las
cosechas de vegetales, cualquier xito
para desarrollar cepas de plantas me-
nos susceptibles a C>2 tendra mayor
impacto en la produccin de alimen-
tos.
LA VI A E X P E R I ME N T A L
Organizacin de la membrana tilacoide
Con el descubrimiento de que la fotosntesis requiere la coope-
racin de dos fotosistemas distintos conectados por una cade-
na transportadora de electrones, se asumi que todos los com-
ponentes que participan en el transporte de electrones residen
en muy estrecha proximidad en la membrana tilacoide. Como
se indica en la figura 6-4 y se analiza en el texto acompaante,
los tilacoides normalmente ocurren como parte de pilas nter-
conectadas (o grana). La membrana del estroma tilacoide (la-
minillas que interconectan las grana) se conoce como mem-
brana no comprimida debido a que reside en contacto con el
estroma, ms bien que comprimida contra otra membrana. En
contraste, la mayor parte de las grana de la membrana tilacoide
se conocen como membrana comprimida debido a que su super-
ficie externa est comprimida contra la superficie externa de
un tilacoide adyacente. Las excepciones son los bordes latera-
les y las superficies superior e inferior de las grana tilacoides,
que tambin estn en contacto con el estroma (fig. VE 6-1).
En los aos de 1960 y 1970, varios laboratorios intentaron
determinar la distribucin en las membranas tilacoides de di-
ferentes componentes implicados en la fotosntesis. En los pri-
meros estudios se trat de fraccionar la membrana tiacoide en
regiones de grana y estromatosas mediante centrifugacin di-
ferencial de las vesculas de la membrana formadas luego de
romper los cloroplastos por fuerzas mecnicas de corte, vibra-
ciones de ultrasonido de alta frecuencia o tratamiento con de-
tergentes. l-$ Los estudios se complementaron con el examen
microscpico de las partculas visibles en la membrana tila-
coide mediante fracturas por congelacin (fig. 4-18).4 Los re-
sultados de estos primeros estudios condujeron a formular el
modelo de la membrana tilacoide mostrado en la figura VE
6-2, en el cual los complejos PSII se restringen a las membranas
Gr ana tilacoides Estroma tilacoide
Membrana terminal de los grana
CC
J
Mrgenes
c=j Membranas comprimidas
BB Membranas expuestas
FIGURA VE 6-1. La superficie externa de la membrana tiacoide se
puede dividir en dos regiones estructuralmente diferentes: membra-
nas comprimidas de los grana tilacoides cuya superficie est en con-
tacto con otras membranas, y membranas no comprimidas del estro-
ma tilacoide (o estroma laminar), y !os extremos y bordes de los grana
tilacoides que tambin estn expuestos al estroma. (Segn }.M.
Anderson, FEBS Lett. 124:1, 1981.)
comprimidas de fas grana, los complejos PSI estn presentes
en las regiones comprimidas y no comprimidas de las grana,
las molculas de ATP-sintasa se proyectan hacia afuera de las
regiones no comprimidas, y las molculas Rubisco se encuen-
tran laxamente enlazadas a la superficie externa de la mem-
brana no comprimida.
Estos datos establecieron el concepto de que la membrana
comprimida de las grana contiene ambos fotosistemas y repre-
senta el sitio de transporte de electrones para la fotosntesis no
cclica. Se pens que la membrana no comprimida era el sitio
de fosforilacin cclica (la cual slo requiere la participacin de
PSI) y de la sntesis de ATP (gobernada por el gradiente
de protones y que por lo tanto no tiene que estar fsicamen-
te relacionada con otra parte del mecanismo de fotosntesis).
En 1980, el concepto de una ntima relacin entre los dos
fotosistemas de la membrana tilacoide de las grana fue motivo
de controversia. Se desarrollaron mejores tcnicas para distin-
guir entre membranas comprimidas y no comprimidas. Por
ejemplo, se descubri que cuando los cloroplastos se rompen
mecnicamente utilizando presin o fuerza a travs de un
pequeo orificio, los segmentos de membrana tilacoide adya-
centes a las regiones comprimidas de as grana se funden entre
s para formar vesculas cuya superficie externa corresponde a
la superficie interna de la membrana tilacoide (fig. VE 6-3). Las
vesculas de este tipo se describen como "vesculas con lo de
adentro por afuera".5 El resto de la membrana (estroma
tilacoide, membranas de granos terminales, y bordes de los
granos) forma vesculas, en las cuales la superficie externa de
los tilacoides se convierte en la superficie externa de la vescu-
la (denominadas "vesculas con el lado correcto hacia afue-
ra").
Los dos tipos de vesculas se pueden separar, dependien-
do de la diferencia de las propiedades de superficie, como
carga e hidrofobicidad. Las vesculas con lo de adentro hacia
afuera ejecutan las actividades caractersticas de PSII con poca
contribucin de PSI. Si los tilacoides de! cloroplasto fueran
tratados en un medio escaso en sal antes de romperlos, trata-
miento que desapila los tilacoides de los granos y por lo tanto
elimina las membranas comprimidas, no se formaran las ve-
sculas con el lado interno hacia afuera. Estos datos condujeron
al modelo propuesto por Bertil Andersson y Jan Anderson, de
la Universidad de Lund, en Suecia,6 en el cual PSI y ATP sintasa
se localizan casi exclusivamente en la membrana no compri-
mida, en tanto que PSII se segrega en las regiones comprimidas
(fig. VE 6-4). El nico complejo mayor de protenas distribuido
regularmente entre los dos tipos de regiones de la membrana
es el complejo citocromo b(f , que se sita en la cadena trans-
portadora de electrones que conecta PSII con PSI (fig. 6-16).7
Las protenas no son los nicos elementos de las membra-
nas tilacoides que muestran heterogeneidad lateral; tambin
los lpidos. En el texto se hizo notar que las membranas
PS II + complemento ntegro de
chl a/b LHCP
PS II + complemento parcial de
chl a/b LHCP
PS I + pigmento captador de luz relacionado
JFactor de acoplamiento
. J RuBP carboxilasa
Modelo de membrana tilacoide de f inales de! decenio de 1970, en el cual se propuso que la membrana tilacoide comprimida
contiene ambos fotosistemas. Se propuso que las regiones no comprimidas contienen PSI, ATP-sintasa (factor de acoplamiento 1, o CF'i) y Rubisco
(LHCP, protenas del complejo de captacin de luz). (Segn LA. Staehelin y C.}. Arntzsn, Ciba Found. Symp. 61:166, 1979.)
tilacoides contienen dos tipos predominantes de lpidos:
monogalactosildiacilglicerol (MGDG) y digalactosildiacilgli-
cerol (DGDG). La comparacin de las vesculas a partir de las
fracciones comprimidas y no comprimidas indic que la pro-
porcin MGDG/DGDG es de casi 3:1 en las regiones compri-
midas, pero slo de 1:1 en las regiones no comprimidas,8 dato
que sugiere que las bicapas de las membranas comprimidas y
no comprimidas pueden tener diferentes propiedades fsicas.
La confianza generada con el empleo de fracciones purifi-
cadas de membrana como base para determinar la heteroge-
neidad lateral condujo a sugerir que el procedimiento de rotu-
ra y purificacin introduca artefactos y que las vesculas no
corresponden a las partes de la membrana tilacoide interna de
Presin
m ecnica
( c
2)
C
Resellado
Hinchazn
D
Mecanismo propuesto para la formacin de ves-
culas de membranas tilacoides fragmentadas con la parte interna
hacia afuera. (Segn E. Andersson y cois. Bioc. Biop. Acta 599:392,1980.)
las cuales se asuma que eran. Estas objeciones fueron supera-
das cuando se demostr visualmente la localizacin de los
diferentes componentes con el uso de anticuerpos marcados
con oro.9'10 Utilizando esta tcnica no invasiva, los investiga-
dores demostraron que las protenas PSII haban sido exclui-
das de las membranas tilacoides no comprimidas, en tanto que
las protenas PSI fueron excluidas de las regiones comprimi-
das (fig. VE 6-5). Por lo contrario, el complejo citocromo fcg/se
distribuye regularmente a todo lo largo del sistema de mem-
branas, como se muestra en el modelo de la figura VE 6-4.
La demostracin de que los dos fotosistemas estaban
espacialmente separados entre s dentro de la membrana
tilacoides condujo al punto de vista actual de la naturaleza
dinmica de la membrana fotosinttica, en la cual los transpor-
tadores movibles, como plastoquinona y plastocianina, tienen
capacidad para difundir dentro de la membrana y transportar
electrones de un complejo protenico al otro. El alto grado de
fluidez de la membrana tilacoide, necesario para facilitar tales
movimientos laterales, se demostr al medir el coeficiente de
difusin de molculas de plastoquinona marcadas con colo-
rantes fluorescentes dentro de la bicapa de lpidos mediante la
tcnica de recuperacin de la fluorescencia despus de foto-
blanqueamiento (pg. 136, cap. 4).11 Se han medido coeficien-
tes para PQ en las membranas tilacoides con cifras tan eleva-
das como 10~6 cm2/seg (en comparacin con 10~8 cm2/seg
para los lpidos de la mayor parte de las membranas), lo que
sugiere que estas membranas fotosintticas pueden ser las ms
fluidas de todas las principales membranas biolgicas. En ese
estudio se calcul que la distancia promedio entre PSII y el
complejo citocromo b f ms prximo es de casi 73 nm. Segn
el coeficiente de difusin mencionado antes, se calcul que
una molcula PQ debe poder difundir casi 2 800 nm en 20
Membranas no apiladas
(estroma laminar)
ATP sintasa
Complejo PSII
Complejo PSI / Citocromo b6f
Membranas
apiladas
(grana)
. Modelo revisado de la organizacin de la membrana tilacoide propuesto en 1981; los dos fotosistemas estn espacialmente
separados: PSII se localiza en la regin de las membranas comprimidas y PSI en la regin de las membranas no comprimidas. (Segn J.M Anderson
y B. Andersson, Trends Biochem. Sci. 7:291, 1982.)
mseg, lo que corresponde a la vida media calculada para la
reduccin del citocromo b $ f luego de una serie de destellos
luminosos saturantes. Por lo tanto, incluso si una molcula PQ
sigue un camino muy desviado para la difusin entre los dos
complejos de protenas, ste debe ser capaz de hacer la co-
nexin en el tiempo permitido.
En 1977, John Bennett, de la Universidad de Warwick, en
Inglaterra, hizo un descubrimiento que posteriormente demos-
tr tener importantes implicaciones en el estudio de la mem-
brana tilacoides. Bennett incub cloroplastos iluminados en
un medio que contena fosfato marcado con istopo radiactivo
(32P), a continuacin extrajo las protenas de los cloroplastos y
fraccion la mezcla de protenas utilizando electroforesis en
gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio.12 Durante la
incubacin varias protenas resultaron marcadas con rapidez,
una de las cuales se identific como la principal protena que
enlaza la clorofila a/b captadora de luz (referida como LHCII
en el texto, pgina 215). Estudios subsecuentes revelaron la
(a) (b )
Micrografas electrnicas de cortes delgados de las clulas mesfilas tilacoides del maz marcadas con anticuerpos para: a)
subunidad D del centro de reaccin PSI, y b ) citocromo 7-559 del centro de reaccin PSII. Los centros de reaccin PSI se localizan casi exclu-
sivamente en los tilacoides del estroma y en las membranas terminales de los grana tilacoides, en tanto que los centros de reaccin PSII se hallan
casi por completo en membranas comprimidas de los grana tilacoides. (Cortesa de O. Vaon.)
presencia en la membrana tilacoides de una proteincinasa en-
cargada de la fosforilacin de LHCII.13 La atencin se volvi al
mecanismo de regulacin de la cinasa y la importancia de la
fosforilacin de protenas captadoras de luz.
Normalmente, LHCII no sufre fosforilacin cuando los
cloroplastos se incuban en la oscuridad. Sin embargo, la activi-
dad de la proteincinasa no es estrictamente dependiente de
luz, debido a que se puede activar incubando cloroplastos en
la oscuridad en un medio que contenga un agente fuertemente
reductor, como la ferredoxina reducida.14 Estos resultados
sugieren que uno de los transportadores de electrones de la
cadena de fotosntesis debe estar reducido antes de que se
active la proteincinasa. Varias piezas sugieren que el compo-
nente clave es la plastoquinona.revisada en 15 La plastoquinona
es el aceptor terminal de electrones del centro de reaccin PSII
(fig. 6-13). Sera de esperar que el fondo comn de molculas
de plastoquinona de la membrana se acumule en su estado
reducido (PQH2) conforme los electrones se transfieren a PQ,
pero que no pasen a los subsecuentes transportadores. Podra
esperarse que esta condicin ocurriera en los momentos cuan-
do PSII est operando a un nivel ms alto que PSI, o sea, cuan-
do la actividad de los dos fotosisternas est fuera de equilibrio.
Segn los diferentes datos, se propuso que la fosforilacin
de LHCII por la proteincinasa activada sirve para corregir el
desequilibrio resultante de la superexcitacin de PSII en rela-
cin con PSI. Por ejemplo, se demostr que la fosforilacin de
LHCII incrementa la transferencia de energa de excitacin a
PSI a expensas de PSII.16 La explicacin molecular ms simple
para estos datos es que la fosforilacin disocia LHCII de PSII
en los sitios donde normalmente reside de las regiones com-
primidas de a membrana tilacoide, El complejo LHCII fosforila-
do tendra entonces que emigrar a las regiones no comprimidas
de la membrana, donde se pone en estrecho contacto con PSI,
y por lo tanto permite la transferencia de la energa de excita-
cin al centro de reaccin PST.
Esta conclusin concuerda con los resultados de los anli-
sis de las fracturas por congelacin, en las cuales partculas de
8.0 nm pueden representar los complejos captadores de luz
que en la membrana tilacoide de los cloroplastos de guisantes
se redistribuyen de las regiones comprimidas a las no compri-
midas despus de la fosforilacin.17 Tambin es consistente
con el dato de que las protenas captadoras de luz en las frac-
ciones de membrana aisladas de las regiones no comprimidas
estn 10 veces ms intensamente fosforiladas que las mismas
protenas en las regiones comprimidas.18 Las regiones compri-
midas de la membrana son sitios donde las protenas de las
membranas adyacentes entran en estrecho contacto entre s.
La fosforilacin de as protenas captadoras de luz aadira
cargas negativas a la superficie de la protena, lo que puede
causar que la protena experimente repulsin electrosttica por
parte de las protenas vecinas. Este tipo de repulsin fue suge-
rido como la mayor fuerza que aparta el LHCII fosforilado de
las porciones comprimidas del tilacoide.19'20 Estudios subse-
cuentes indican que en la mayor parte de las situaciones slo
la reserva exterior de LHCII que contiene los pofipptidos r-
pidamente fosforilados se desplaza al interior del estroma
tilacoide despus de la fosforilacin, dejando que la reserva
interna de protenas LHCII permanezca con PSII.21
El desplazamiento de los complejos LHCII de una parte
del tilacoide a la otra puede desempear varas funciones en la
fotosntesis, adems de corregir el desequilibrio entre los dos
fotosisternas. Por ejemplo, casi todo el dao al aparato de foto-
sntesis causado por luz de alta intensidad lo experimenta PSII
(pg. 228). Puesto que la exposicin a luz brillante conduce a la
fosforilacin de LHCII y a separarlo de PSII, este fenmeno
podra limitar el dao a PSII por sobreexcitacin. La migracin
de LHCII tambin puede servir para regular el equilibrio entre
la fosforilacin cclica y la no cclica. Algunos de los primeros
estudios indicaron que la proteincinasa tilacoide tambin es
sensible a la proporcin NADP+/NADPH del cloroplasto.
SINOPSIS
Se presume que las primeras formas de vida fueron hetero-
trofos que dependan de molculas orgnicas formadas por
procesos abiticos; con el tiempo, estas formas fueron supe-
radas por autotrofos, organismos capaces de sobrevivir con
CC>2 como fuente principal de carbono. Se cree que los prime-
ros autotrofos efectuaban fotosntesis no oxignica en la cual
compuestos como H2S eran oxidados como fuente de electro-
nes. La evolucin de la fotosntesis oxignica, en la cual se
oxida agua y se libera 2, permiti a las cianobacterias aprove-
char un nmero mucho mayor de habitat y preparar el escena-
rio para la respiracin aerobia (p. 207).
Los cloroplastos son organelos grandes enlazados a mem-
brana que tal vez evolucionaron a partir de procariotes foto-
sintticos que contenan un sistema interno de membranas
tilacoides, el cual aloja al mecanismo fotosinttico. Los cloro-
plastos estn enlazados por una doble membrana porosa gra-
cias a la inclusin de porinas en la bicapa de lpidos. Los
tilacoides son sacos membranosos aplanados dispuestos en
filas ordenadas o grana. Los tilacoides estn rodeados por un
estroma fluido que contiene DNA, ribosomas y el mecanismo
requerido para la expresin del gen (p. 208).
Las reacciones dependientes de luz de la fotosntesis empie-
zan con la absorcin de fotones por los pigmentos fotosint-
ticos, suceso que impulsa los electrones a los orbitales exter-
nos, desde los cuales pueden ser referidos a un aceptor de
electrones. Los principales pigmentos que absorben luz en las
plantas son las clorofilas y los carotenoides. Cada molcula de
clorofila consta de un anillo de porfirina que contiene Mg2+
que acta en la absorcin de la luz, y una cola hidrocarbonada
(un fitol) que conserva el pigmento integrado a la bicapa. La
clorofila absorbe con mayor intensidad en la regin azul y roja
del espectro visible y con menor fuerza en la regin verde. Las
Conforme esta proporcin disminuye y la concentracin rela-
tiva de NADPH aumenta, se reduce la necesidad de transporte
no cclico de electrones. Sera de esperar que la fosforilacin de
LHCII concentre ms energa de excitacin .en PSI, la cual po-
dra utilizarse para estimular la fosforilacin cclica, proceso
que permite al cloroplasto seguir produciendo ATP sin forma-
cin de NADPH adicional.
BIBLIOGRAFA
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longitudes de onda especficas que absorbe una molcula de-
penden de los polipptidos con los cuales est relacionada y
las propiedades fsicas de la bicapa. Los carotenoides absor-
ben con mayor intensidad en la regin azul y verde y con
menor intensidad en la roja y naranja. El espectro de accin de
la fotosntesis, que proporciona una medida de la longitud
de onda capaz de estimular la fotosntesis, sigue muy estre-
chamente el espectro de absorcin de los pigmentos. Los pig-
mentos fotosintticos se organizan en unidades funcionates en
las cuales slo una molcula, el centro de reaccin de la cloro-
fila, tiene capacidad para transferir electrones a un aceptor de
los mismos. La masa de las molculas de pigmento forma un
sistema antena captador de luz que atrapa fotones de diferen-
tes longitudes de onda y transfiere la energa de excitacin de
la molcula del pigmento al centro de reaccin (p. 211).
La transferencia de un par de electrones de H2O a NADP+ en
condiciones estndar requiere el ingreso de cuando menos
52.6 kcal por mol, que es ms energa de la que un mol de
fotones puede suministrar. El impulso energtico necesario se
logra mediante dos fotosistemas separados, cada uno de los
cuales impulsa la energa de los electrones una parte del cami-
no para rebasar fa cuesta energtica. El fotosistema II (PSII)
impulsa los electrones desde un nivel de energa ms bajo que
el del agua hasta el punto medio, donde el fotosistema I (PSI)
eleva los electrones hasta el tope, por arriba de NADP+. Con-
forme los fotones se absorben en cada fotosistema, la energa
pasa a los pigmentos en el centro de reaccin respectivo (P680
para PSII y P700 para PSI). La energa absorbida por la cloro-
fila del centro de reaccin sirve para impulsar un electrn ha-
cia un orbital externo, donde puede transferirse a un aceptor
primario, produciendo un pigmento con carga positiva (P680+
yP700+) fp. 235).
La va no cclica de flujo de electrones del agua a PSII y
luego a PSI y NADP+ se denota por medio de una Z. La
primera rama de la Z va de H2 a PSII. La mayor parte de los
pigmentos antena que recolectan luz para PSII residen dentro
de un complejo separado, denominado LHCII. La energa flu-
ye de LHCII hacia el centro de reaccin PSII, donde se transfie-
re un electrn P680 a un aceptor primario, una molcula de
feofitina similar a clorofila. Esta transferencia de electrones
genera un agente fuertemente oxidante (P680+) y un agente
dbilmente reductor (Feo~). La separacin de cargas en PSII se
estabiliza separando molculas con carga opuesta; esto se lo-
gra conforme se transfieren electrones de feofitina a la quinona
QA y luego a QB- La absorcin sucesiva de dos fotones por PSII
conduce a la transferencia de dos electrones a Qg para formar
Qs2~, que entonces capta dos protones del estroma formando
QgH2 (la cual se reduce verdaderamente a plastoquinona). La
plastoquinona reducida abandona el centro de reaccin y es
sustituida por una plastoquinona oxidada capaz de recibir elec-
trones adicionales. El movimiento de electrones a travs del
centro de reaccin PSII sigue una va similar a la que se obser-
va en el centro de reaccin de las bacterias prpura no azufradas
cuya estructura cristalina ya se ha determinado. Conforme cada
electrn se transfiere desde P680 al aceptor primario y de all
a QB, el agujero en el pigmento del centro de reaccin con
carga positiva (P680+) se llena con un electrn procedente de
un residuo tirosina especfico (Tirz). Tirz, a su vez, recibe elec-
trones, uno cada vez, de una protena que contiene cuatro
iones manganeso. Conforme cada electrn se transfiere a Tirz,
la protena que contiene Mn acumula una carga positiva. Una
vez que la protena acumula cuatro cargas positivas tiene ca-
pacidad para eliminar cuatro electrones del agua, una reaccin
que genera C> 2 y suministra cuatro H+ a la luz tilacoide, que
contribuye al gradiente de protones ( p. 216).
Los electrones de la plastoquinona reducida se transfieren al
complejo citocromo multiprotenico b{/, en tanto que los pro-
tones son liberados a la luz tilacoide y por lo tanto contribu-
yen al gradiente de protones. Los electrones procedentes de
citocromo b $ f pasan a la plastocianina localizada en el lado
luminal de la membrana tilacoide y a P700+, el pigmento del
centro de reaccin PSI que ha perdido un electrn luego de
absorber un fotn. Conforme se absorbe cada fotn en P700 el
electrn se transfiere a un aceptor primario QA y luego a travs
de varios centros de hierro y azufre del centro de reaccin PSI
a la ferredoxina. Los electrones se transfieren de la ferredoxina
a NADP+ formando NADPH, que requiere un protn del es-
troma, contribuyendo al gradiente de protones. En resumen,
el flujo no cclico de electrones produce la oxidacin de H2
a C> 2 con transferencia de electrones a NADP+, formando
NADPH y estableciendo un gradiente de H+ a travs de la
membrana
El gradiente de protones establecido durante las reacciones
dependientes de luz proporciona la energa requerida para
formar ATP en el cloroplasto, proceso denominado fotofos-
forilacin. El mecanismo para la sntesis de ATP en el cloro-
plasto es prcticamente idntico al de la mitocondria; la ATP
sintasa consta de una pieza cabeza CFi que se proyecta dentro
del estrorna y una pieza basal CFo integrada a la membrana
tilacoide. Los protones efectan la sntesis de ATP a medida
que se desplazan a los sitios de mayor concentracin de la luz
tilacoide por medio de la ATP sintasa y en el interior del estro-
ma, en donde disipan el gradiente H+. La sntesis de ATP
puede ocurrir en ausencia de oxidacin de HÔ por medio de
un proceso de fosforilacin cclica que no implica PSII. La luz
es absorbida por P700 de PSI, pasa a la ferredoxina y retorna al
centro de reaccin PSI deficiente en electrones a travs del
citocromo b f . Conforme los electrones se mueven en la va
cclica, los protones se translocan a la luz tilacoide y posterior-
mente sintetizan ATP ( p. 221).
Durante las reacciones independientes de luz, la energa
qumica almacenada en NADPH y ATP se emplea para la
sntesis de carbohidratos a partir de C2. El CC2 se convierte
en carbohidratos en la va Cs (o ciclo de Calvin), en la cual se
fija CC> 2 por medio de la RuB P carboxilasa {Rubisco) a un
compuesto RuBP de cinco carbonos, formando un intermedia-
rio inestable de seis carbonos que se separa en dos molculas
de cido 3-fosfoglicrico. NADPH y ADP se emplean para
convertir molculas PGA a glicer al debido 3-fosfato (GAP). Por
cada seis molculas de CC> 2 fijadas se pueden orientar dos
molculas de GAP a la formacin de sacarosa o de almidn, en
tanto que as 10 molculas restantes de GAP pueden utilizarse
para generar RuBP para un ciclo adicional de fijacin de COj
( p. 223).
Rubisco tambin puede catalizar una reaccin en la cual O^
en vez de CO^ se une a RuBP en forma covalente. Este pro-
ceso, que se denomina fotorrespiracin, conduce a la forma-
cin de compuestos rnetabolizados en reacciones en las cuales
se pierde C2- Puesto que la fotorrespiracin implica capta-
cin de C> 2 y liberacin de C2, representa un desperdicio de
la energa de la planta. La tasa de fotorrespiracin en compa-
racin con la fijacin de CC> 2 depende de la proporcin CC> 2/
C*2 establecida por Rubisco. Dos grupos de plantas, denomina-
das plantas C4 y MAC, poseen mecanismos que aumentan esta
proporcin \p. 225).
Las plantas 4 y MAC poseen una enzima adicional fijadora
de C2 denominada PEP carboxilasa, capaz de operar con
concentraciones muy bajas de C2- Las plantas C4 poseen
hojas de estructura nica que contienen un cilindro externo de
clulas mesfilas y un cilindro interno de haces de clulas
envainadas selladas a los gases atmosfricos. La PEP carboxilasa
opera en las clulas mesfilas, donde se fija CC> 2 al compuesto
de tres carbonos fosfoenolpiruvato (PEP) para formar un cido
de cuatro carbonos, el cual se transporta a los haces envaina-
dos donde se descarboxila. El CC> 2 liberado en el haz envai-
nado se acumula en concentracin elevada favoreciendo la
fijacin de CC> 2 a RuBP y la formacin de PGA y de GAP por
medio del ciclo de Calvin. Las plantas MAC efectan reaccio-
nes dependientes de luz e independientes de la misma en di-
ferentes horas del da. Las plantas mantienen estrechamente
cerrados sus estomas durante las horas calientes y secas del
da, lo que evita la prdida de agua. A continuacin, durante
la noche, abren sus estomas y fijan C2 por medio de la PEP
carboxilasa. El cido mlico producido en estas reacciones se
almacena en la vacuola hasta las horas del da cuando el com-
puesto se desplaza de nuevo al cloroplasto. All cede su C2,
que puede entonces fijarse por Rubisco en condiciones de baja
concentracin de C> 2 y convertirse a carbohidrato usando ATP
y NADPH generados por las reacciones dependientes de luz
( p. 2;
CAPITULO 6 Fotosntesis y doropastos 237
PREGUNTAS DE REPASO
1. Describir el efecto que se cree que tuvo la aparicin de
cianobacterias en el metabolismo de los organismos.
2. En qu son similares la fotosntesis no oxignica que em-
plea 2S como fuente de electrones y la fotosntesis oxigni-
ca que utiliza H2O como fuente de electrones? En qu son
diferentes?
3. Describir la organizacin de las membranas del cloroplas-
to, incluyendo la disposicin de la ATP sintasa. En qu
difiere esta organizacin de la observada en las rm'tocon-
drias?
4. Cmo puede una clula vegetal emplear electrones de baja
energa procedentes del agua para reducir NADP+?
5. En trminos generales, en qu difieren las reacciones
independientes de luz de las reacciones dependientes de
luz? Cules son los productos primarios de los dos gru-
pos de reacciones?
6. Cmo se compara el centro de reaccin de una bacteria
prpura no azufrosa R. viridis con el centro de reaccin
fotosinttico del cloroplasto de una planta?
7. Cul es la relacin entre el contenido energtico de un
fotn y la longitud de onda de la luz? De qu manera
determina la longitud de onda de la luz si puede o no
estimular la fotosntesis? Cules son algunos de los facto-
res que determinan las propiedades de absorbancia de la
molcula de clorofila? Cmo determinan las propiedades
de absorbancia de los pigmentos fotosintticos la direccin
en la cual se transfiere la energa de excitacin dentro de
una unidad de fotosntesis?
8. Cul es el papel de los pigmentos antena que captan luz
en la fotosntesis?
9. Cul es la diferencia entre un espectro de absorcin y un
espectro de accin?
10. Describir la secuencia de acontecimientos que ocurren des-
pus de la absorcin de un fotn por el pigmento del cen-
tro de reaccin del fotosistema II. Describir los sucesos com-
parables en el fotosistema I. Cmo se enlazan los dos
fotosis temas entre s?
11. Describir la diferencia de los potenciales redox de los pig-
mentos del centro de reaccin de los dos fotosistemas.
12. Describir el proceso mediante el cual se separa el agua
durante la fotolisis. Cuntos fotones debe absorber PSII
para que esto ocurra?
13. Cules son los pasos en las reacciones dependientes de
luz encargadas de generar un gradiente electroqumico
de protones a travs de la membrana tilacoide? En qu
grado este gradiente se refleja en el gradiente de pH en
comparacin con el voltaje? Cmo puede el gradiente de
protones conducir a la formacin de ATP?
14. Describir el plan bsico del ciclo de Calvin, indicando las
reacciones que requieren ingreso de energa. Por qu se
decribe como ciclo? Por qu se tiene que conseguir ener-
ga en este tipo de va? Cules son los productos finales de
la va?
15. Describir las principales diferencias estructurales y bioqu-
micas entre las plantas Cs y las plantas C,}. Cmo afectan
estas diferencias la capacidad de estos dos tipos de plantas
para crecer en climas secos y calientes?
PREGUNTAS ANALTICAS
1. Cul de los dos fotosistemas opera con el potencial redox
ms negativo? Cul genera el agente reductor ms fuerte?
Cul debe absorber cuatro protones durante cada vuelta
de la fosforilacin no cclica?
2. Qu tipo de plantas (Cg, C4 o MAC) esperara usted que
funcionen mejor si se exponen a luz diurna continua bajo
condiciones de calor y sequedad?
3. De las siguientes sustancias: PQH2, citocromo reducido b,
ferredoxina reducida, NADP+, NADPH, O2, H2O, Tirz+,
cul es el agente reductor ms fuerte?; cul es el agente
oxidante ms fuerte?; cul tiene mayor afinidad por elec-
trones?; cul posee los electrones ms energticos?
4. Supongamos que se desea aadir el desacoplador dinitrofe-
nol (DNF) a una preparacin de cloroplastos que efectan
la fotosntesis. Cul de las siguientes actividades espera-
ramos que fuera afectada? 1) Absorcin de luz; 2) fosfori-
lacin cclica; 3) transporte de electrones entre PSII y PSI;
4) fotofosforilacin no cclica; 5) sntesis de PGA; 6) reduc-
cin de NADP+.
5. Calcular la fuerza motriz de protones que se formara a
travs de la membrana tilacoide para mantener una dife-
rencia de 10 000 veces la [H+] sin diferencia de potencial
elctrico. (La ecuacin para la fuerza motriz de protones se
encuentra en la pgina 191.)
6. En qu condiciones se esperara que una planta participa-
ra ms intensamente en la fotofosforilacin cclica?
7. Contrastar el cambio de pH del medio que ocurre cuando
cloroplastos aislados efectan la fotosntesis en compara-
cin con mitocondrias aisladas que efectan respiracin
aerobia.
8. En e captulo precedente se hizo notar que la mayor parte
de la fuerza motriz en las mitocondrias se expresa como
voltaje. Por lo contrario, la fuerza motriz de protones gene-
rada durante la fotosntesis se expresa casi exclusivamente
como gradiente de pH. Cmo se pueden explicar estas
diferencias?
9. Cmo se comparan !as propiedades redox de los centros
de reaccin de una bacteria prpura no azufrosa con los de
una planta PSII?
10. Estara usted de acuerdo en que una planta Cs tenga que
gastar ms energa por C2 convertido a carbohidrato en
comparacin con una planta C-4? Por qu s o por qu no?
11. En la fotosntesis, la captura de energa luminosa da como
resultado liberacin y subsecuente transferencia de elec-
trones. De qu molcula se derivan originalmente los
electrones? En qu molculas residen finalmente dichos
electrones?
12. Cuntas molculas de ATP y NADPH se requieren en la
va Cs para sintetizar un azcar de seis carbonos? Si la
sntesis de una molcula de ATP requiriera tres protones,
esperara usted que este requerimiento relativo para ATP
y NADPH pudiera satisfacerse por fotofosforilacin no c-
clica en ausencia de fotofosforilacin cclica?
13. Si feofitina y AQ {una molcula de clorofila a) son aceprores
primarios de electrones en PSII y PSI, respectivamente,
cules son los donadores primarios de electrones de cada
fotosistema?
14. Contrastar el papel de tres diferentes tomos metlicos en
las reacciones fotodependientes de la fotosntesis.
15. Sera de esperar que el efecto invernadero (incremento
del contenido de CC>2 de la atmsfera) tuviera mayor efec-
to en las plantas C4 o en las plantas Cj? Por qu?
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