MICROBIOLOGIA

FACULTAD FARMACIA Y BIOQUIMICA

2014
TECNICAS DE SIEMBRA, ESTUDIO DEL DESARROLLO
BACTERIANO EN MEDIOS LIQUIDOS, SEMISOLIDOS Y
SOLIDOS

Para cada bacteria a ser cultivada para
cualquier propsito es necesario proveer el
ambiente bioqumico y biofsico apropiado. El
ambiente bioqumico (nutricional) se hace
disponible como medio de cultivo, y
dependiendo de las necesidades especiales de
cada bacteria particular se ha desarrollado
una gran variedad y tipos de medios de
cultivo con diferentes propsitos y
utilizaciones. Los medios de cultivo son
empleados para el aislamiento y
mantenimiento de cultivos puros de bacterias y tambin son utilizados para la
identificacin de bacterias de acuerdo a sus propiedades bioqumicas y fisiolgicas.
El modo en que las bacterias son cultivadas, y el propsito de los medios de cultivo,
varan ampliamente. Los medios lquidos son utilizados para el crecimiento de
lotes de cultivos puros mientras que los medios slidos son ampliamente
utilizados para el aislamiento de cultivos puros, para la estimacin de poblaciones
de bacterias viables, y una variedad de otros propsitos. El agar, agente glido ms
utilizado para medios slidos o semislidos, es un hidrocoloide derivado de las
algas rojas. El agar es utilizado por sus propiedades fsicas nicas (se funde a 100
grados y permanece lquido hasta enfriarse a 40 grados, la temperatura a la que se
vuelve gel) y porque no puede ser metabolizado por la mayora de las bacterias.
Por lo tanto, como un componente del medio es relativamente inerte, simplemente
mantiene (geliza) los nutrientes que se encuentran en la solucin acuosa.

Los medios de cultivo pueden ser clasificados en varias categoras dependiendo de
su composicin o uso. Un medio qumicamente definido (sinttico) (Tabla 4 y 4b)
es un medio en el que se conoce la exacta composicin qumica. Un medio complejo
(indefinido) (Tabla 5 y 5b) es un medio en el que no se conoce la composicin
qumica exacta. Los medios definidos estn habitualmente compuestos por
bioqumicos puros sacados del stock; los medios complejos habitualmente
contienen materiales complejos de origen biolgico tales como la sangre, la leche,
el extracto de levadura o el extracto de carne, cuya composicin qumica exacta es
obviamente indeterminada. Un medio definido es un medio mnimo (Tabla 4) si
provee slo los nutrientes exactos (incluyendo algunos factores de crecimiento)
necesarios para el crecimiento del organismo. La utilizacin de medios mnimos
MICROBIOLOGIA

FACULTAD FARMACIA Y BIOQUIMICA

2014
definidos requiere que el investigador conozca los requerimientos nutricionales
exactos de los organismos en cuestin. Los medios definidos qumicamente son de
valor para el estudio de los requerimientos nutricionales mnimos de los
microorganismos, para cultivos enriquecidos, y para una amplia variedad de
estudios fisiolgicos. Los medios complejos habitualmente proveen la gama
completa de factores de crecimiento que pueden ser requeridos por un organismo
por lo que pueden ser utilizados ms prcticamente para cultivar bacterias
desconocidas o bacterias cuyos requerimientos nutricionales son complejos (por
ejemplo, organismos que requieren muchos factores de crecimiento).
Otros conceptos empleados en la construccin de medios de cultivo son los
principios de seleccin y enriquecimiento. Un medio selectivo es aquel que tiene
agregados componentes que inhibirn o prevendrn el crecimiento de ciertos tipos
o especies de bacterias y/o promovern el crecimiento de las especies deseadas.
Uno puede tambin ajustar las condiciones fsicas del medio de cultivo, como el pH
y temperatura, para hacerlo selectivo para organismos capaces de crecer bajo esas
condiciones.
Un medio de cultivo puede tambin ser un medio diferencial si permite al
investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias basado en algn rasgo
observable de su pauta de crecimiento en el medio. As, un medio selectivo,
diferencial para el aislamiento de Staphylococcus aureus, el patgeno bacteriano
ms comn en los humanos, contiene una concentracin muy alta de sal (que el
estafilococo tolerar) que inhibe a la mayora de las otras bacterias, mannitol como
fuente de azcar fermentativo, y un tinte de indicador de pH. De los especimenes
clnicos, slo el estafilococo crecer. S. aureus es diferenciado de S. epidermidis (un
componente no patgeno de la flora normal) por su capacidad de fermentar el
mannitol. Las colonias fermentadoras de mannitol (S. aureus) producen cidos que
reaccionan con el tinte indicador formando un halo coloreado alrededor de las
colonias; las no fermentadoras del mannitol (S. epidermidis) utilizan otros
sustratos no fermentadores en el medio para el crecimiento y no forman un halo
alrededor de sus colonias.
Competencias:

- Realizar diversas tcnicas de siembra
para su cultivo y aislamiento.
- Aplica las tcnicas de aislamiento hasta
la obtencin de cultivos puros.



MICROBIOLOGIA

FACULTAD FARMACIA Y BIOQUIMICA

2014
MATERIALES:
1.- Tecnicas de siembra en medios liquidos, semislidos y solidos:
- Placas Petri con agar TSA.
- Tubos agar SIMy TSA en agar inclinado
- Tubos con caldo TSB
- Cultivo de Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Bacilus subtilis y Psudomonas
aeruginosa.
2.- Desarrollo bacteriano:
- Utilizar los medios de cultivo preparados en la practica anterior y proceder a
realizar los sembradosen los distintos medios segn tcnicas.
PROCEDIMIENTO:
1. Tecnicas de Siembra en medios lquidos, semislidos y solidos:
Siguiendo la metodologa descrita segn los esquemas anexos, proceder tal como
sigue:
- Con el asa en aro previamente esterilzada, tomar una asada del cultivo de
mocroorganismos, y sembrar por el mtodo de dispersin y agotamiento en
las placas TSA.
- Con el asa en punta previamente esterilizada, tomar el inculo del cultivo de
bacterias y sembrar en AGAR SIM, por el mtodo de puntura.
- Con el asa en aro, toma el inculo del cultivo, bacteriano y siembra en el
tubo con agar en pico de flauta o plano inclinado, por el mtodo de estra.
- Con el asa en aro previamente esterilizada tomar una asada del cultivo, y
sembrar por el mtodo de inoculacin en el tubo con TSB.
2.- Desarrollo bacteriano:
- Efectuara la lectura de los cultivos proporcionados por la profesora y observa.
Se tiene sumo cuidado de no sacudir los cultivos en caldo ya que esto puede
trastornar los crecimientos superficiales, describir.