Universidad de Chile

Facultad de Ciencias
Curso de Bioqumica
Enzimas 1
ACTIVIDAD ENZIMTICA Y
CURVA DE PROGRESO
Integrantes: Pedro Briceo
Ignacio Ortiz
Pr!esr: Victoria Guix
Carrera: !icenciatura en ciencias "# $iologa
INTRODUCCI"N
!os organismos %resentes en la naturaleza &uncionan gracias a reacciones
qumicas que llevan a ca$o %ara so$revivir' (stas reacciones son catalizadas
%or enzimas es%ec&icas) %rotenas que al disminuir la energa de activaci*n de
estas reacciones de los seres vivos) aumentan la velocidad en gran medida'
"uchas de estas reacciones) de no ser %or las enzimas seran tan lentas que
no %ermitiran la via$ilidad del organismo'
Como la actividad cataltica de cada enzima es es%ec&ica) %ara su estudio se
de$en considerar distintos &actores) como la reacci*n que cataliza) sus
%roductos) el sustrato es%ec&ico + la velocidad a la que ocurre la reacci*n
de$ido a la enzima' Para esto es necesario dis%oner de los equi%os necesarios
+ conocer las condiciones %ara estudiar una enzima'
,dem-s es im%rescindi$le realizar un $lanco de enzima + $lanco de sustrato
%ara controlar .nicamente las varia$les que se de$en a la %resencia del
%roducto de la reacci*n enzim-tica realizada'
Para este la$oratorio se utiliza /0galactosidasa) enzima altamente a&n %or el o0
nitro&enil0/0galact*sido) sustrato sinttico que al ser hidrolizado li$era o0
nitro&enol que toma color amarillo) indicando que se llev* a ca$o la reacci*n'
!os o$1etivos de este tra$a1o %r-ctico son2
3e&inir las condiciones ex%erimentales %ara ensa+ar un sistema
enzim-tico
3eterminar la actividad de la /0galactosidasa
(studio de la velocidad de hidr*lisis enzim-tica del O4FG %or la /0
galactosidasa en &unci*n del tiem%o 5curva de %rogreso6
MATERIA#ES Y M$TODOS
"ateriales2
0 ,mortiguador &os&ato de sodio %7 8)9 5:); "6
0 o0nitro&enil0/0galact*sido 5O4FG6 5:):; "6
0 o0nitro&enol 5O4F6 5:)< m"6
0 Car$onato de sodio ;): "
0 /0galactosidasa
0 =u$os de ensa+o
0 Pi%etas de :);0:)90;090;: ml
0 (s%ectro&ot*metro
"todo ex%erimental2
E%&eriment 1'1: Determinacin de la actividad enzimtica de la -
galactosidasa'
Para %oder conocer la cantidad de o0nitro&enol que se &ormar- en la reacci*n
de hidrolisis de O4FG con la /0galactosidasa) se de$e hacer una curva de
cali$raci*n usando soluciones con concentraci*n conocida de o0nitro&enol)
o$tenidas de la soluci*n %atr*n O4F :)< m"' (stas concentraciones de$en
a1ustarse al un rango que va desde :):9 a :)> ?moles#ml) midiendo luego su
a$sor$ancia en el es%ectro&ot*metro a @9:nm'
(l %rotocolo de tra$a1o que se muestra a continuaci*n contiene la cantidad de
?moles#ml de las alcuotas de O4F) en un volumen de > m! %ara cada tu$o' !a
tem%eratura de tra$a1o &ue de a%roximadamente ;ABC 5=em%eratura am$iental6'
(l rango de concentraci*n del O4F te*rico %ara que la medici*n de la
,$sor$ancia sea la o%tima) es de :):9 a :)>moles#ml) siendo la concentraci*n
de O4F es de <moles#ml) %or lo tanto se esta$leci* la siguiente equivalencia2
C moles D > m! E F m! D :'< moles
C moles E 5F m! D :'< moles6# > m!
=u$os O4F 5ml6
O4F
5"oles#m!6
79O 5ml6
Bu&&er
5ml6
Car$onato de
sodio 5ml6
=u$o , : : 9)9 :)< :)>
=u$o B :'< :':G> ;)8 :)< :)>
=u$o C :'G :';>> ;)@ :)< :)>
=u$o 3 ; :';H8 ;)9 :)< :)>
=u$o ( ;'< :'9<: :)8 :)< :)>
=u$o F ;'G :'> :)@ :)< :)>
Ta()a I2 Protocolo para obtener la Absorbancia del ONF.
Ie realizaron controles %ara %oder descartar las %osi$les inter&erencias que
%ueden simular actividad enzim-tica) como la inesta$ilidad del sustrato o la
inter&erencia de los com%onentes distintos del sustrato' Para ellos se realizaron
tres soluciones) una corres%ondiente a un tu$o con todos los reactantes
%resentes) otro con ausencia de sustrato 5Blanco de sustrato6 + otro sin la
enzima 5Blanco de enzima6' (l volumen de incu$aci*n usado &ue de ;)< ml) que
%ermiti* distri$uir de &orma c*moda + con %recisi*n los elementos del sistema
enzim-tico' !a tem%eratura de incu$aci*n &ue la tem%eratura am$iente 5;ABC6)
+ el tiem%o de incu$aci*n &ue de > minutos) +a que %asado este tiem%o la
coloraci*n de los tu$os &ue similar a la del tu$o F de la ta$la I) que tena una
concentraci*n de :)> ?moles#ml' Posteriormente se midi* la a$sor$ancia en un
es%ectro&ot*metro a @9: nm'
=u$o
(nzima
5m!6
Iustrato
5m!6
Bu&&er 5m!6 ,gua 5m!6
4a
9
CO
>
5m!6
;D :)> :);< :)< ;)8< :)>
B' (' : :);< :)G ;)8< :)>
B' I' :)> : :)H< ;)8< :)>
Ta()a II' Protocolo de preparacin de controles para la reaccion completa (1*)
Enzima (B.E.) y Sstrato (B.S.).
E%&eriment 1'*: Estudio de la velocidad de hidrlisis enzimtica de o-
nitrofenil--galactsido en funcin del tiempo de incubacin (curva de
progreso)'
Ie %re%araron G tu$os de ensa+o siguiendo el %rotocolo que se muestra en la
ta$la II) en $ase a enzima) Bicar$onato) Bu&&er) agua + sustrato' Primero se
mezclaron los com%onentes de la soluci*n exce%tuando el sustrato) siendo la
tem%eratura de incu$aci*n a%rox ;ABC) la misma que en el ex%erimento
anterior) + se agreg* el sustrato %ara iniciar la reacci*n de1-ndose reaccionar
cada tu$o %or un tiem%o es%ec&ico cada uno' (n el %rimer tu$o agreg* el
car$onato de sodio 1unto al sustrato de manera que la reacci*n se detuviera
inmediatamente) esto corres%onde al tu$o tiem%o cero' !os tu$os que restan se
&ueron deteniendo con car$onato de sodio en distintos tiem%os
a%roximadamente cada < J ;: min'
O4FG
Km!L
Bu&&er
Km!L
(nzima
Km!L
,gua
Km!L
Volumen de
incu$aci*n
Km!L
:);< :)@< :)9 :)8 ;)<
Ta()a III' Protocolo para !olmen de incbacin (" m#).
RESU#TADOS +RUTOS
E%&eriment 1'1:
!as distintas muestras est-n diluidas en >ml) como se ha$a dicho en el
mtodo ex%erimental'

Ieguido de la %re%araci*n de los tu$os corres%ondientes se midi* la
a$sor$ancia %ara cada tu$o + as &ue %osi$le o$tener los datos ex%resados en
la siguiente ta$la2
=u$os ,$sor$ancia M
5@9:nm6
,$sor$ancia
Corregida M
5@9:nm6
, :):;@ :
B :);AH :';G9
C :)>AA :'>G<
3 :)8:G :'HA@
( :)AGA :'A8<
F ;):G8 ;':8>
Ta()a IV' Absorbancia de ONF de concentracin conocida medida a $%&nm.
(stos resultados ser-n ocu%ados %ara la con&ecci*n de una curva de
cali$raci*n %ara O4F) + as ser- %osi$le extraer de sta el coe&iciente de
extinci*n %ara este com%uesto'
Posteriormente &ue medida la a$sor$ancia %ara el %roducto de la reacci*n
incu$ada en los sistemas de controlN Blanco de reaccion com%leta) $lanco de
enzima + el $lanco de sustrato' !os resultados o$tenidos &ueron los siguientes2
=u$o ,$sor$ancia 5@9: nm6
;D :)>9@
B' (' :):;G
B' I' :)::@
Ta()a V' Absorbancia para prodcto de la reaccin incbada' blanco enzima y
blanco sstrato desp(s de " min. de incbacin.
E%&eriment 1'*:
, %artir de la ta$la III se con&eccionaron ocho tu$os iguales %ero %ara cada uno
la reacci*n se detuvo a di&erentes tiem%os de incu$aci*n' Ie hizo las
mediciones de a$sor$ancia corres%ondientes de lo cual se o$tuvo los
siguientes resultados2
=u$os
=iem%o
5minutos6
,$sorancia
@9: nm
,$sorancia
Corregida
5@9: nm6
; : :):;@ :
9 < :)9;< :'9:;
> ;: :)@>A :'@9<
@ 9: :)H:< :'<A;
< >: :)G< :'G>H
H @: ;):AH ;':G9
8 <: ;)9@H ;'9>9
G H: ;)9H> ;'9@A
Ta()a VI' Absorbancia de ONF medida a $%&nm a di)erentes tiempos de
incbacin.
AN#ISIS DE RESU#TADOS
E%&eriment 1'1: Determinacin de la actividad enzimtica de la -
galactosidasa
, %artir de los datos entregados en la ta$la III) es %osi$le construir el gr-&ico
desde el cual se extraer- el coe&iciente de extinci*n %ara O4F2
,ig-ra 1' *r!a de calibracin para ONF.
!a gr-&ica ilustrada en la &igura ; nos entrega una ecuaci*n de la recta del ti%o
mx y =
) donde) seg.n la ecuaci*n de lam$er0 Beert
y
re%resenta las
a$sor$ancias o$tenidas)
x
las distintas concentraciones de O4F +
m
es igual
al coe&iciente de extinci*n

E >)HHG'
Fa conociendo del valor de

) es %osi$le determinar la concentraci*n de la

muestra %ro$lema' !a a$sor$ancia que se o$tuvo %ara esta muestra es de
:)>9@ %or lo tanto) con el uso de la ecuaci*n de !am$ert0Beer se o$tiene que la
concentraci*n de la muestra es :):GG> ?mol#m!'
(ste tu$o contena la misma %re%araci*n es%eci&icada en la ta$la II) %or lo tanto
tiene un volumen total de >m!' Ie incu$* durante > minutos a ;ABC'
Como se tiene que la concentraci*n de la muestra %ro$lema es :):GG>
?mol#m!) es %osi$le determinar cuantos ?moles de O4F &ueron %roducidos en
el volumen &inal de >m! %or regla de tres2
Para determinar la actividad enzim-tica de /0galactosidasa) de&inida como la
cantidad de enzima que cataliza ;?mol de sustrato %or minuto) se realiza de la
siguiente manera2


!uego %ara determinar la actividad es%ec&ica de la %rotena se relaciona la
actividad enzim-tica con el volumen de enzima2


E%&eriment 1'*: Est-.i .e )a /e)0i.a. .e 1i.r2)isis enzim3ti0a .e) 4
nitr!eni)4 54ga)a0t2si. en !-n0i2n .e) tiem& .e in0-(a0i2n 60-r/a .e
&rgres7'
(n la segunda %arte de ste %r-ctico se o$tuvieron los datos ex%resados en la
ta$la VI' (stos datos &ueron modi&icados + de sta manera se o$tuvo la
actividad enzim-tica %ara la /0galactosidasa + tam$in su actividad enzim-tica
es%ec&ica' !os resultados modi&icados se encuentran en la siguiente ta$la2
=u$o
=iem%o
5min6
, J ,
tE:
5@9:nm6
,ctividad U
5?mol#min6
,ct' es%ec&ica
5U#m!6
; : : : :
9 < :)>@> :):>@HG :);;<H
> ;: :)@H9 :):9>>H :):88G
@ ;< :)HA8 :):9>@A :):8G>
< >: ;);<: :):;A>G :):H@H
H @< ;);H> :):;>:H :):@><
8 H: ;);9> :)::A@H :):>;<
Ta()a VI' Oesultados modi&icados ex%erimento ;'9'
Con el uso del coe&iciente de extinci*n entregado en el ex%erimento anterior) es
%osi$le tam$in determinar la concentraci*n de O4F o$tenida en cada
incu$aci*n) si se relaciona ste &actor con el tiem%o de incu$aci*n se o$tiene la
velocidad de reacci*n' ,dem-s tam$in es %osi$le conocer la cantidad de O4F
%roducida en ?moles' (stos resultados se ta$ulan de la siguiente manera2
=u$os
=iem%o
5minutos
6
,$soranci
a @9: nm
,$sor$anci
a arreglada
@9: nm
Concentraci*
n O4F
5Pmoles#ml6
Velocidad
5Pmoles#min
6
,ctividad
O4F
KU#m!L
; : :):;@ :):; :)::98 : :
9 < :)9;< :)9;; :):<88 :):;;<> :):<88
> ;: :)@>A :)@>< :);;GA :):;;GA :):<A@
@ 9: :)H:< :)H:; :);H@9 :)::G9; :):@;;
< >: :)G< :)G@H :)9>;; :)::88: :):>G<
H @: ;):AH ;):A9 :)9AG@ :)::8@H :):>8>
8 <: ;)9@H ;)9@9 :)>>A> :)::H8A :):>>A
G H: ;)9H> ;)9<A :)>@@: :)::<8> :):9G8
Ta()a VII' +atos necesarios para con)eccionar ,r-)icos de Prodcto !s. .iempo
y /elocidad de reaccin !s. .iempo.
Con los datos o$tenidos en la ta$la VII) se hace relaci*n la concentraci*n de
O4F a distintos tiem%os) como se ve gra&icado en la &igura 9'
,ig-ra *' *r!a de pro,reso para la incbacin de 01,alactosidasa con ONF2.
!a &igura 9 corres%onde a la curva de %rogreso entregada al relacionar las
varia$les de O4F %roducido en ?moles con el tiem%o de incu$aci*n %ara cada
tu$o' (n un %rinci%io se veri&ica que esta es una relaci*n directa donde la
cantidad de %roducto o$tenida aumenta a medida que el tiem%o tam$in lo
hace) %ero luego se o$serva que la cantidad de %roducto vara en %ro%orciones
m-s %equeas lo que hace que se &orme una curva de saturaci*n'
IegQn los datos o$tenidos en la ta$la VII) se relaciona la velocidad de la
reacci*n de hidr*lisis del sustrato en &unci*n del tiem%o
,ig-ra 8' 2r-)ico de !elocidad de la reaccin en )ncin del tiempo.
(n sta gr-&ica se o$serva que en un %rinci%io la velocidad de la reacci*n se
mantiene relativamente constante 5%untos 9 + >6 + luego se o$serva un
%ronunciado descenso a medida que avanza el tiem%o'
DISCUSI"N
Primero que todo &ue necesario el desarrollo de un $lanco de sustrato + un
$lanco enzima en estos ensa+os ex%erimentales' Ii $ien el $lanco sustrato
contiene todos los reactivos) menos el sustrato) %or lo que no de$era
%resentar coloraci*n alguna) %ues se entiende que aquella coloraci*n se
relaciona con la &ormaci*n de %roductoN al igual &orma que con el $lanco
enzima) se intenta$a hacer evaluar la actividad enzim-tica + ocurri* que
tam$in %resent* coloraci*n el %re%arado' ,quello hace alusi*n %rinci%almente
a dos cosas2 lo m-s %ro$a$le que algunos com%onentes del sistema 5menos el
sustrato de$ido a que no se adicion*6 esta$a inter&iriendo en el mtodo %ara
medir el sustrato o %roductos + %or otra %arte que se %uede in&erir que el
sustrato es inesta$le + lo m-s %ro$a$les es que genera %roducto en ausencia
de la enzima' Ii se inter%ola la ecuaci*n de !am$ert J Beert a la ta$la 4R V se
o$serva que las concentraci*nes de O4FG %ara cada control) se encuentran
que e&ectivamente existen inter&erencias e&ectivas que son &actores que
simulan la actividad enzim-tica) %ero en contraste con las dem-s a$sor$ancias
se %ueden des%reciar %ero generan un cierto grado de desviaci*n con res%ecto
al com%ortamiento ideal de la enzima) ahora algo que en ninguno de los casos
se %uede realizar si aquella simulaci*n del sustrato sea mu+ grande) %or lo que
no se %ueden des%reciar %or lo que de$erian ser tomadas en cuenta %ara los
e&ectos de la cuanti&icaci*n de la enzima'
, travs de la utilizaci*n de la ecuaci*n de la recta entregada %or el gr-&ico de
la &igura ; 5curva de cali$raci*n %ar O4F6 se hizo %osi$le calcular el coe&iciente
de extinci*n %ara O4F con el cual se determin* la concentraci*n de ste %ara
distintas muestras a lo largo del %r-ctico' (l O
9
de sta gr-&ica indica que la
ecuaci*n entregada tiene un error de ;)H9S) el cual es mu+ ace%ta$le +a que
es in&erior al <S' ,dem-s los dem-s c-lculos realizados a con el uso de la
in&ormaci*n entregada %or ste gr-&ico resultaron ser congruentes con lo
es%erado'
(n el ex%erimento ;'9 el gr-&ico ilustrado en la &igura 9 dio tal como era de
es%erar +a que en un comienzo asciende con %ro%orcionalidad directa con el
tiem%o de incu$aci*n %ero luego de un momento comienza a saturarse' (sto es
de$ido a que las concentraciones de sustrato han ido disminu+endo
%rogresivamente hasta un momento en el cual la concentraci*n de %roducto se
hace mucho ma+or' (sto se re&le1a tam$in en los resultados ta$ulados %ara la
actividad enzim-tica que a medida que el tiem%o avanza sta va disminu+endo'
3e esta misma manera se relaciona la velocidad de reacci*n con el tiem%o de
incu$aci*n' Ie ve que en un %rinci%io la velocidad se mantiene relativamente
constante' 7a+ un %unto en esta gr-&ica que se esca%a de lo es%erado 5%unto
;6 donde la velocidad de reacci*n es m-s alta + de$era ser constante al igual
que los dos %untos que lo siguen' 3es%us de ste %unto la curva se com%orta
como es de es%erar) se mantiene constante + luego desciende de manera
notoria'
!os cam$ios $ruscos en los gr-&icos de las &iguras 9 5saturaci*n6 + >
5descenso6 se de$en a los mismos motivos los cuales %ueden ser una
disminuci*n notoria de la concentraci*n de sustrato de manera tal que la
%roducci*n de O4F tam$in disminu+a + con esto su velocidad' =am$in %uede
de$erse a inhi$ici*n de la enzima %or %arte del %roducto de la reacci*n o a la
acumulaci*n de ste'
(n relaci*n a la velocidad de hidr*lisis enzim-tica del O4FG) se o$serv*
claramente que al inicio la velocidad aumenta$a %rogresivamente) hasta un
valor m-ximo) luego comenza$a a disminuir) esto hace menci*n a que %udo
de$erse a &actores como2 inhi$ici*n T%or el o los %roductos de la reacci*n)
acumulaci*n de %roductos) %or lo que se tiende a esta$lecer el equili$rio de la
reacci*n ) %or lo que no sera %ara sor%renderse que ste sea un &actor que
desnaturaci*n) %or lo que la %rotena %ierde actividad cataltica'
CONC#USIONES
(l mtodo de inter%olaci*n de la concentraci*n de O4F %roducido en la
incu$aci*n del com%le1o enzima0sustrato a %artir del coe&iciente de extinci*n
entregado %or la curva de cali$raci*n es %reciso a momento de hacer los
c-lculos'
Ie de$e ser cuidadoso al momento de &i1ar las condiciones ex%erimentales
so$re las cuales se tra$a1ar- +a que stas a&ectan directamente a la actividad
enzim-tica + su cuanti&icaci*n'
,unque la literatura lo seala) no se %uede concluir a %artir de este
ex%erimento que a cierto tiem%o la velocidad de la reacci*n se hace cero) +a
que esto no ocurri* en nuestro ex%erimento a %esar de que des%us de cierto
tiem%o disminu+e a$ru%tamente' Para com%ro$arlo el ex%erimento de$era
realizarse en un tiem%o ma+or) %ero vale mencionar que las enzimas &uncionan
sin alterar el equili$rio de una reacci*n) sino que alteran las constantes de
velocidad de la reacci*n so$re la cual act.an'
(xisten sustancias que son letales %ara las enzimas) como lo es un inhi$idor
que tiene un tiem%o de acci*n inmediato so$re stas'
Claramente dentro de una curva de %rogreso existe una clara tendencia de
equili$rio) lo cual hace menci*n a que la cantidad de enzima %resente estara
&ormando el com%le1o (I + reaccionando con velocidad constante'
CUESTIONARIO
1'4 9:-; !-n0i2n 0-m&)e e) 0ar(nat .e s.i en e) sistema .e ensa<
.e )a 54ga)a0tsi.asa=
(l car$onato de sodio detiene casi instant-neamente la reacci*n enzim-tica)
con lo cual se %uede medir la actividad) cantidad de sustrato) de enzima) etc'
%resentes al tiem%o en que se agrega el susodicho com%uesto' !as enzimas
tienen un %7 *%timo en el que su actividad es m-ximaN a valores su%eriores o
in&eriores de %7 la actividad disminu+e' (l car$onato de sodio aumenta el %7
de la soluci*n) alterando las &unciones del sitio activo) deteniendo la reacci*n
enzim-tica) actuando como un inhi$idor del sistema
*'4 9C2m &.r>a 0m&r(ar ?-e -na rea00i2n ?->mi0a .etermina.a es
-na rea00i2n enzim3ti0a=
!a %resencia de un catalizador trae como consecuencia el alcance de
equili$rio m-s de%risa que la misma reacci*n sin un catalizador' Como
sa$emos las enzimas son mu+ es%ec&icas) %or lo tanto) al tener conocimiento
de nuestro sustrato + %roducto %odemos identi&icarla' Ii aumentamos la
tem%eratura de la reacci*n so$re el lmite de la enzima va a %rovocar la
inactividad de la reacci*n de$ido a su desnaturaci*n) %or el contrario la
reacci*n no catalizada se ver- &avorecida su velocidad'
Una curva de %rogreso nos %ermitira di&erencia entre una reacci*n enzim-tica
+ una no enzim-tica' Para la %rimera) o$tenemos inicialmente un
com%ortamiento lineal seguido de una meseta donde la reacci*n llega al
equili$rio + %ara la segunda se o$tendr- una recta +a que no alcanza el
equili$rio'
8'4 Si .esea .eterminar -na a0ti/i.a. enzim3ti0a 0-a)?-iera en -n e%tra0t
.e te@i.: 9:-; 0ntr)es 1ar>a= 9:-; 0nsi.era0i2n .e(e tener en
0-enta &ara !i@ar e) tiem& .e in0-(a0i2n=
Ii se tiene conocimiento de las caractersticas de la enzima tales como la
solu$ilidad) %7 *%timo) %I) %eso molecular) etc' se de$e en %rimera instancia
%uri&icar la %rotena con diversos mtodos' !uego de&inir las condiciones
ex%erimentales necesarias %ara su estudio) las cuales no a&ecten su actividad
cataltica) como lo son los amortiguadores) concentraci*n de iones alrededor
del sitio activo) tem%eratura a la cual se de$e mantener) entre otros'
Oealizaci*n de controles enzima) sustrato + un tiem%o cero %ara evaluar los
%osi$les &actores que intervienen en la determinaci*n de la actividad
enzim-tica) o que incluso generaran &alsos %ositivos' Uunto con el estudio de la
actividad) es decir un estudio cintico de la enzima con su curva de %rogreso'
Con res%ecto al tiem%o de %rogreso) se tiene que ste de$e tener relaci*n a la
cantidad de enzima + su actividad) %or lo que de$er ser su&iciente %ara %ermitir
el desarrollo de la reacci*n enzim-tica) + as cuanti&icar el %roducto generado)
no o$stante el tiem%o no de$e ser mu+ extendido %ues como este ensa+o se
$asa en un estudio es%ectro&otomtrico) si se de1a mucho tiem%o de
incu$aci*n se va a o$tener mucho %roducto) %or lo que ser- mucha la
a$sor$ancia que %resentara) lo cual generara un resultado no o%timo %ara la
curva de %rogreso + requerira de una diluci*n %ara su medici*n'
1'4 9C2m a!e0tan )a !rma .e -na 0-r/a .e &rgres: )a 0n0entra0i2n .e
s-stratA )a 0n0entra0i2n .e enzima=
Ii se disminu+e la concentraci*n de sustrato) la reacci*n alcanza antes la &ase
estacionaria donde +a no ha+ m-s aumento en la concentraci*n del %roducto)
adem-s el valor de la concentraci*n del %roducto es menor' ,l su$ir la
concentraci*n del sustrato la &ase estacionaria se alcanza des%us + a ma+or
concentraci*n del %roducto siem%re + cuando la enzima no se satura + no
%ueda seguir aumentando su velocidad aun que aumente la concentraci*n de
sustrato'
,l cam$iar la concentraci*n de la enzima se induce un cam$io en la curva que
modi&ica su %endiente) sin em$argo la concentraci*n de %roducto que se
alcanza no vara'
Ii se cam$ia la concentraci*n de enzima la velocidad de la %arte de %rimer
orden de la curva aumenta o disminu+e) %or lo que la %endiente cam$ia) %ero la
concentraci*n de %roducto que se alcanza es la misma'
*'4 Una rea00i2n enzim3ti0a se .etiene es&nt3neamente .es&-;s .e
trans0-rri. -n 0iert tiem&:
9:-; e%&)i0a0i2n &.r>a .ar &ara este !en2men=
(ste &en*meno %odra ex%licarse %or dos razones) en %rimer lugar el
%roducto &ormado %uede inhi$ir la acci*n de la enzima o %rovocando que
sta se desactive gradualmente'
(n segundo lugar) se %odra %ensar que la reacci*n +a alcanz* un equili$rio)
%or lo que su cam$io neto de concentraci*n de %roducto es cero %or lo que
se %erci$e como si la reacci*n se detuviera'
9C2m &.r>a 0m&r(ar e%&erimenta)mente s- 1i&2tesis=
Ii se trata del %rimer &actor descrito) al agregar m-s enzima la reacci*n
de$era continuar' Pero si es la segunda hi%*tesis) al modi&icar el equili$rio
agregando m-s sustrato) la reacci*n de$era reanudarse'
+I+#IOGRA,BA
0 Gua de =ra$a1os Pr-cticos) ,signatura de Bioqumica) 3e%artamento de
Biologa) Facultad de Ciencias) Universidad de Chile) 9:;9'
0 !ehninger) Princi%ios de Bioqumica) cuarta edici*n'