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UIA 1






1. INTRODUCCIN
La cromatografa en capa fina (TLC) se desarrolla sobre placas los cuales son
trozos de aluminio vidrio recubiertos con una fina capa de una fase
estacionaria como almina gel de slice slica. Con el fin de visualizar los
compuestos activos a la luz ultravioleta, la slica est recubierta con una capa
de colorante fluorescente, lo cual permite detectarlos.

Factor de retencin R
f
, se calcula midiendo la distancia que avanz una
sustancia desde el punto de aplicacin hasta el centro de la mancha (Distancia
recorrida por la muestra) dividido por la distancia del frente del disolvente
desde la lnea de base (Distancia recorrida por el disolvente). El R
f
es un
indicativo de la polaridad de la molcula y su valor nunca es mayor a 1.

En el laboratorio se va a trabajar la cromatografa en fase normal la cual se
caracteriza por separar los compuestos con base en la polaridad de los
mismos, es decir sobre una fase estacionaria polar (slica gel) se va a utilizar
una fase mvil apolar (disolvente apolar o mezcla de disolventes apolares o de
baja polaridad). Esta tcnica se utiliza cuando la polaridad del (los) compuestos
a separar es alta. Las fuerzas de absorcin aumenta a medida que aumenta la
polaridad del compuesto y la interaccin entre el compuesto polar y la fase
estacionaria polar lo cual redunda en el aumento del tiempo de retencin. De
acuerdo a esto se espera que los compuestos que asciendan mas (Mayor Rf),
sern los menos polares y los que menos asciendan (menor Rf) sern aquellos
con mayor polaridad. En el caso de trabajar con cromatografa en fase reversa
la tendencia ser la contraria.

En general, la fuerza de elucin de los disolventes comnmente utilizados para
la cromatografa en fase normal aumenta de acuerdo a su polaridad as:
teres de petrleo<hexanos<ciclohexano<tolueno<<ter
dietlico<diclorometano <<cloroformo<acetato de
etilo<acetona<<<etanol<metanol<cido actico.


2. OBJETIVOS
2.1 Utilizar la tcnica de cromatografa de placa delgada (TLC) para la separacin de
una mezcla de colorantes

2.2 Variar la polaridad de la fase mvil con el fin de observar la variacin de R
f
de cada
uno de los componentes de la mezcla.


3. CONSULTAS PRELIMINARES
3.1 Consulte los principios en los cuales se fundamenta la cromatografa. Cules son
los tipos de cromatografa ms importantes? Describa cada uno.
3.2. Consulte los valores de polaridad de los disolventes ms usados en el laboratorio

UNIVERSIDAD
DEL CAUCA
FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES, EXACTAS Y DE LA EDUCACION
DEPARTAMENTO DE QUIMICA
REA: QUIMICA ORGANICA
Practicas de Laboratorio de Qumica Orgnica I
Practica: Cromatografa de capa delgada

Gua No:1
Pginas: 1 a 7

Practica 2: Cromatografa de capa delgada
Aldehdos y cetonas
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3.3. Consulte cules son algunos de los criterios que mas importantes que deben
tenerse en cuenta en la eleccin de adsorbente para desarrollar una: separacin
cromatogrfica determinada?
3.4. Consulte la estructura de cada uno de las sustancias utilizadas durante la prctica


4. MATERIALES

MATERIAL CANTIDAD
Vaso de precipitados 50 mL 2
Vidrio de reloj 2
Capilares para cromatografa 4
Placas de TLC slica sobre aluminio 1.5
x 6 cm
4


5. REACTIVOS

SUSTANCIAS* CANTIDAD
Fluorescena R36, S26 5 mg
Azul de metileno 22, R 36/37/38, S26,
S36
10 mg
Naranja de metilo R25, S45 1 mg
Etanol 80% 2 ml
Etanol 20% 2 ml
*Remitir al manual de protocolo de riesgo/ seguridad y fichas tcnicas de seguridad.

NOTA PARA EL LABORATORISTA: Las muestras de colorantes deben estar
preparadas antes del desarrollo de la prctica como se describe en la parte
experimental. Las cantidades sugeridas de colorantes en la tabla de reactivos
corresponden a la cantidad total para todos los grupos.

6. EQUIPOS

EQUIPOS* CANTIDAD
Lmpara ultravioleta 1
* Remitir al manual de protocolo de calibracin de equipos

7. PROCEDIMIENTO
NOTA: SE REQUIERE QUE CADA GRUPO LLEVE UN DEPILADOR AL
LABORATORIO

7.1 Separacin de fluorescena y azul de metileno.
Tome dos trozos de placa para cromatografa de 1 cm x 5 cm y con la ayuda de una
regla trace muy suavemente una lnea con un lpiz o un portaminas a una distancia de
0.7 cm de cada extremo de la placa, como se muestra en la figura 1.

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5 cm
1 cm
0.7 cm
0.7 cm



Figura 1. Placa de TLC (izquierda) y aplicacin de la muestra sobre la placa (Derecha)

Introduzca un capilar para cromatografa dentro de la muestra 1 (Solucin
previamente preparada de colorantes que contiene 1 mg de fluorescena y 1 mg de
azul de metileno en 5 mL de etanol 96%), y aplique sobre una de las lneas que traz a
cada una de las placa un pequeo punto el cual debe tener un dimetro mximo de
0.4 cm (Figura 1 derecha), deje que el disolvente se evapore completamente. Con la
ayuda de una pinza (o un depilador) introduzca la placa dentro de un vaso de
precipitados de 50 mL que contiene 2 mL de Acetato de etilo y tape con un vidrio de
reloj. Deje que el disolvente ascienda por capilaridad hasta que el frente alcance la
lnea superior de la placa, en este punto retire la placa con la ayuda de la pinza (o un
depilador).

Calculo del Rf
Una vez se evapore el disolvente trace una crculo alrededor de cada mancha y mida
la distancia desde el punto de aplicacin hasta el centro geomtrico de la mancha,
esta es la distancia recorrida por la muestra. Mida exactamente la distancia entre las
lneas que traz en la placa, esta es la distancia recorrida por el disolvente. Realice
sus anotaciones en la hoja de preinforme

R
f
=
Distancia recorrida por la muestra
Distancia recorrida por el disolvente


Distancia recorrida por la muestra: distancia recorrida desde el punto de aplicacin
hasta el centro geomtrico de la mancha

Distancia recorrida por el disolvente: distancia recorrida entre las dos lneas
marcadas sobre la placa


Distancia recorrida
por el disolvente
Distancia recorrida
por la muestra

Figura 2. Montaje de la placa de TLC en el vaso de precipitados (Izquierda), medicin
de las distancia para el clculo de R
f
(derecha)
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7.1.1. Cambio de polaridad en la fase mvil
Tome la segunda placa a la cual le aplic la muestra previamente e introdzcala en un
vaso de 50 mL el cual contiene 2 mL de Acetato de etilo:Etanol 1:1, tape y deje que se
desarrolle de igual manera que en el caso anterior, determine el Rf de cada mancha,
realice sus anotaciones en la hoja de preinforme.

7.1.2. Revelado con luz ultravioleta
Ubique las dos placas cromatogrficas desarrolladas una al lado de la otra y bajo la
supervisin de su profesor ilumnelas con cada una de las dos longitudes de onda de
la lmpara ultravioleta (Onda larga y onda corta). Realice sus observaciones en la hoja
de preinforme.

7.2. Separacin de naranja de metilo y azul de metileno.
Tome otros dos trozos de placa para cromatografa de 1.5 cm x 5 cm y con la ayuda
de una regla trace muy suavemente una lnea con un lpiz o un portaminas a una
distancia de 0.7 cm de cada extremo de la placa, como se muestra en la figura 1.

Introduzca un capilar para cromatografa dentro de la muestra 2 (Solucin
previamente preparada de colorantes que contiene 2 mg de naranja de metilo y 1 mg
de azul de metileno en 4 mL de etanol de 95%), y aplique una mnima cantidad de
forma que se forme un pequeo punto, el cual debe tener un dimetro mximo de 0.4
cm, deje que el disolvente se evapore completamente, con la ayuda de una pinza (o
un depilador) introduzca la placa dentro de un vaso de precipitados de 50 mL que
contiene 2 mL de etanol 80% y tape con un vidrio de reloj. Deje que el disolvente
ascienda por capilaridad hasta que el frente alcance la lnea superior de la placa, en
este punto retire la placa con la ayuda de la pinza (o un depilador) y calcule el Rf de la
misma manera que en los ensayos anteriores.

7.2.1. Cambio polaridad en la fase mvil
Tome la segunda placa a la cual le aplic la muestra previamente e introdzcala en un
vaso de 50 mL el cual contiene 2 mL de Etanol 20%, tape y deje que se desarrolle de
igual manera que en el caso anterior, y determine el R
f
de cada mancha

7.2.2. Revelado con luz ultravioleta
Ubique las dos placas cromatogrficas desarrolladas y bajo la supervisin de su
profesor ilumnelas con cada una de las dos longitudes de onda de la lmpara
ultravioleta. Realice sus observaciones en la hoja de preinforme.


RECOMENDACIONES:
1. Debe sujetar muy cuidadosamente las placas sin poner sus dedos sobre la fase
estacionaria.
2. La cantidad de muestra que debe tomar en el capilar es mnima, la mejor manera de
sacarla es pinchar la solucin de la muestra muy suavemente, la muestra debera
llenar el capilar hasta una altura mxima de 3 mm.
3. Para aplicar la muestra sobre la placa debe aplicar simplemente pinchando muy
suavemente el capilar sobre la placa y retirndolo inmediatamente.
4. Antes de introducir la placa en el vaso debe asegurarse que el nivel del disolvente
est por debajo del punto de aplicacin de la muestra en la placa.
5. La mejor manera de colocar la placa dentro del vaso de precipitados es con la
ayuda de una pinza (o un depilador), sea muy cuidadoso y no deje que se resbale y
caiga sobre el disolvente
6. Durante el desarrollo de la cromatografa NO MUEVA el vaso de precipitados con la
placa, slo OBSERVE!!!
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8. OBSERVACIONES, CLCULOS Y RESULTADOS

__________________________________ ___________ _________________
__________________________________ ___________ _________________
__________________________________ ___________ _________________

8.1 SEPARACIN DE FLUORESCENA Y AZUL DE METILENO.

Tabla 1 Clculo del R
f
de las manchas de fluorescena y azul de metileno desarrollado en
Acetato de etilo

Mancha Distancia recorrida
por la muestra (cm)
Distancia recorrida
por el disolvente (cm)
R
f





Tabla 2 Clculo del R
f
de las manchas de fluorescena y azul de metileno desarrollada en
Acetato de etilo:Etanol 1:1

Mancha Distancia recorrida
por la muestra (cm)
Distancia recorrida
por el disolvente (cm)
R
f





8.1.2. Revelado con luz ultravioleta






8.2 SEPARACIN DE NARANJA DE METILO Y AZUL DE METILENO.

Tabla 3 Clculo del R
f
de las manchas de naranja de metilo y azul de metileno desarrollada en
Etanol 80%

Mancha Distancia recorrida
por la muestra (cm)
Distancia recorrida
por el disolvente (cm)
R
f





Tabla 4 Clculo del R
f
de las manchas de naranja de metilo y azul de metileno desarrollada en
Etanol 20%

Mancha Distancia recorrida
por la muestra (cm)
Distancia recorrida
por el disolvente (cm)
R
f




Revelado con luz ultravioleta






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9. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

9.1. Cual es la diferencia entre fluorescencia y fosforescencia? En este caso cual de la
dos se presenta?
9.2. Consulte otras formas de revelado durante un proceso de cromatografa en TLC
9.3. En que consisten las tcnicas de GC-MS y HPLC? Para que tipos de
separaciones se utilizan? Que relacin tienen con la cromatografa?
9.4. Consulte la estructura de las fases estacionarias ms comunes usadas en
cromatografa?

10. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/O ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE
LOS RESIDUOS QUMICOS

10.1 RECUPERACIN
El disolvente que sobre despus de cada desarrollo cromatogrfico debe ser devuelto
a su recipiente

10.2 DESACTIVACIN
NA

10.3 ALMACENAMIENTO TEMPORAL
Los trozos de placa pueden ser desechados en el recipiente de residuos slidos.

NOTA: Lo que no se recupere o se desactive dentro de la prctica de laboratorio
deber disponerse dentro de los recipientes de almacenamiento intermediario
segn la clasificacin de segregacin establecida.


11. BIBLIOGRAFA
11.1. SHRINER.L. Identificacin Sistemtica de Compuestos Orgnicos. Mxico, D. F. Limusa.,
2002.
11.2. GILBERT C. MARTIN S. Experimental Organic Chemistry. A miniscale and microscale
approach. Brooks/Cole Laboratory Series. Fifth edition, 2011.
11.3. LEONARD J. LYGO, B, PROCTER G. Advanced Practical Organic Chemistry, Stanley
Thornes Publishers. Third edition, 1998.
11.4. HART. H., HART. D.J. Y CRAINE L. E. Qumica Orgnica. Madrid, Mc Graw-Hill, Novena
edicin 1997.