I) HOJA DE DATOS

1) Preparacin de la solucin Stock Patrn de Nitrato (100ppm-(NO

3
-N)
Peso de KNO
3
=0.1819g Volumen Fiola utilizada = 0.25L (Se enrazo hasta un Vol. de 0.25L con A. Dest)
Ttulo de la solucin Stock = 100.86 ppm
2) Preparacin de Solucin Intermedia de Nitrato (5ppm (NO
3
-N))

Volumen Usado de la solucin Stock= 5 mL Volumen Fiola utilizada = 0.1L (Se enrazo hasta un Vol. de
0.1L con A. Dest)
Ttulo de la Solucin intermedia=5.04 ppm
3) Preparacin de las Soluciones estndar para la curva de calibracin

Identific
acin
Vol Sol.
Intermedia
(mL)
V HCl
1N
(mL)
Volumen Final
(mL)
[N] ppm
(NO
3
-N) A
std 0
(bk) 0 1 50 - -0.061
std 1 3 1 50 0.30 0.037
std 2 4 1 50 0.40 0.074
std 3 5 1 50 0.50 0.065
std 4 10 1 50 1.08 0.119
std 5 20 1 50 2.02 0.263

4) Preparacin de Las muestras de Agua mineral
Marca
de Agua
Mineral Identificacin
Volumen de
Muestra de
Agua
(mL)
V HCl
1N
(mL)
Volumen Final
(mL) A
Agua
Cielo
m 1-1 2 1 50 0.553
m 1-2 3 1 50 0.019
M 1-3 4 1 50 0.047
Agua
San
Mateo
M 2-1 2 1 50 0.263
M 2-2 3 1 50 0.090
M 2-3 4 1 50 0.084
Agua
San
Luis
M 3-1 2 1 50 -0.053
M 3-2 3 1 50 0.010
M 3-3 4 1 50 -0.045
Agua
Vida
M 4-1 2 1 50 0.151
M 4-2 3 1 50 0.288
M 4-3 4 1 50 0.360


II) RESUMEN
En esta experiencia se determin la cantidad de nitratos presentes en diferentes muestras de
agua mineral para el consumo humano por el mtodo de espectrofotometra molecular de
absorcin Ultravioleta. Primero se determin la

de absorbancia de nitrato la cual fue de

214 nm, Luego con la ayuda de una curva de calibracin se determin la cantidad de nitrato en
cada muestra de agua mineral los cuales se muestra en la siguiente tabla

Con estos resultados se concluy que las muestras N1( agua cielo) y muestras N2 (agua san
mateo ) tienen una concentracin promedio de nitrato dentro de los limites permitidos segn
lo que especifica la OMS que es 50 ppm y la Muestra N4 (agua vida) excede estos limites.
III) FUNDAMENTOS DEL MTODO DE ANLISIS

A) Objetivos

Determinar el

de Absorbancia de NO
3
-


Determinar el contenido de nitratos en diferentes muestras de agua mineral para
el consumo humano por el mtodo de espectrofotometra de absorcin molecular
UV.

B) Fundamentos del mtodo de anlisis

Este mtodo se utiliza para la determinacin de nitratos en bajas concentraciones de unos
pocos ppm o trazas que pueden encontrarse en alimentos o en el agua. Cuando se encuentra
niveles altos de nitratos en alguna sustancia puede producirle a una persona problemas de
salud, El efecto ms conocido producido por una alta concentracin de nitritos en sangre es la
transformacin de la hemoglobina a metahemoglobina. La hemoglobina se encuentra presente
en los glbulos rojos de la sangre y es la encargada de transportar el oxgeno a todo el
organismo. La metahemoglobina es un tipo de hemoglobina no funcional que por lo tanto no
es capaz de transportar oxgeno. Segn la OMS la concentracin mxima de nitratos como N es
aproximadamente 10 ppm y si esta como NO3
-
en si la concentracin mxima es de 50 ppm.



IV) DESCRIPCIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA

Para poder medir la cantidad de energa absorbida se emplea un espectrofotmetro, el cual es
un instrumento que nos permite medir la relacin entre los valores de una misma magnitud
fotomtrica relativos a 2 haz de radiaciones en funcin de la longitud de onda. Este
instrumento tiene la capacidad de proyectar su propio haz de luz monocromtica a travs de la
muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida, lo cual permite dar informacin sobre la
naturaleza de la sustancia en la muestra o indicar directamente que cantidad de la sustancia
que nos interesa est presente en la muestra. El equipo utilizado en este mtodo es un
espectrofotmetro de doble haz
El funcionamiento de este espectrofotmetro de doble haz consiste en que la fuente luz pasa
alternadamente por la cubeta de la muestra y dela referencia, cuando el cortador no desva el
haz, la luz pasa a travs de la muestra y el detector mide Po. El haz se corta varias veces por
segundo y el circuito compara automticamente P y Po, dando as la tramitacin o la
absorbancia.
Cuando se registra un espectro de absorbancia, se registra el primer espectro de la lnea base
con las disoluciones de referencia en las 2 cubetas, despus se resta el espectro base de la
absorbancia de la muestra para obtener finalmente la verdadera absorbancia de la muestra a
las diferentes longitudes de onda.
Para la regin ultravioleta se usa como fuente de radiacin una lmpara de deuterio, esta
fuente de luz est compuesta por una lmpara de cristal ultravioleta, o de cuarzo, que
contiene deuterio a baja presin en su interior. Emplea un filamento de Wolframio y un nodo
situados en los extremos opuestos de una estructura de nquel y forman una generacin de
arco elctrico.
Este arco voltaico generado excita las molculas de deuterio que conforman el gas contenido
en la capsula de la lmpara a un nivel superior de energa, cuando retornan al estado inicial, el
deuterio emite luz UV durante dicha transicin; Este proceso se repite continuamente por lo
que se emite una radiacin UV continua.

DESCRIPCIN BREVE DEL INSTRUMENTO
El nombre del equipo utilizado es: Espectrofotmetro UV-Visible UV-1700, de marca
Shimadzu.
Especificaciones: (exactitud espectral, resolucin, exactitud fotomtrica, etc....) y
funciones en conformidad con las farmacopeas de EE.UU., Europea y Japonesa.
Validacin del hardware (9 tems) como estndar.
Soporte IQ/OQ*
Diseo compacto - modelo liviano de slo 17 kg que puede ser transportado por una
persona.
Operacin sencilla con teclas especficas para funciones.
Facilidad en la operacin a travs de la amplia pantalla de cristal lquido.
Funciones completas para anlisis cualitativo y cuantitativo instaladas como estndar;
se pueden agregar programas especiales usando tarjetas IC.
Compatible con PC usando software bajo Windows.
Modo de medicin fotomtrica de mltiples longitudes de onda (estndar).

*IQ/OQ contiene los siguientes detalles que son verificados y registrados durante la instalacin
del equipo. Son documentos fundamentales para cumplir con las pautas de la FDA.

1. IQ (Calificacin de la Instalacin) Confirma que el instrumento fue instalado correctamente
en la configuracin original y en el ambiente apropiado.
2. OQ (Calificacin de Operacin) Confirma que el instrumento alcanz el desempeo original
deseado.
ACCESORIOS DEL INSTRUMENTO
Utilice el software UVProbe para controlar el UV-1700 mediante una computadora personal. El
paquete incluye funciones para mediciones fotomtricas, espectrales y cinticas, adems de
elaboracin de informes.
V) REACCIONES QUMICAS DE IMPORTANCIA

VI) DETALLES EXPERIMENTALES

1) MATERIALES Y EQUIPOS

Espectrofotmetro visible SHIMADZU 1700
Celdas de Cuarzo
Fiolas de 50, 100 y 250 mL
Vasos de precipitados de 250 mL
Pipetas volumtricas de 1, 2, 3, 4, 5, 10 y 20 mL
1 Luna de reloj
Propipeta
Balanza digital Analtica
1 Cuchara
Bagueta
Pizeta

2) REACTIVOS

Solucin Stock de Patrn Primario de KNO
3
: Colocar en un crisol de porcelana
aproximadamente 0.3 g de KNO
3
y secar en estufa a 105C durante 24 h.
Retirar y enfriar en el desecador.
Solucin de HCl 1N

3) PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A) Preparacin de la solucin Stock Patrn de KNO
3
(100ppm-(NO
3
-
-N) )

1) Se pesa 0.1819g de KNO
3
reactivo que se encuentra en el desecador, luego se
diluye con agua destilada en un vaso de precipitado de 250 mL y se lleva a una
fiola de 250 mL la cual se llena hasta enrase con agua destilada.

B) Preparacin de Solucin Intermedia de Nitrato (5 ppm NO
3
-
- N)

1) Se mide un volumen de 5 mL de la solucin Stock Patrn de KNO
3
y se lleva a
una fiola de 100mL la cual se llena hasta enrase.



C) Preparacin de soluciones estndar para curva de calibracin

1) Extraer de la solucin intermedia de Nitrato volmenes de 3, 4 , 5, 10 y 20 mL ,
luego se llevan estos volmenes a Fiolas de 50mL(1 fiola por cada volumen)
2) Luego de colocar los volmenes correspondientes a las 5 Fiolas se debe
agregar un poco de agua destilada sin llegar a enrasar para agregar 1 mL de
HCl 1N a cada una, finalmente se debe enrasar con agua destilada.
3) Para la preparacin del blanco se hace un procedimiento similar, se debe
agregar agua destilada a una fiola de 50 mL sin llegar a enrase
aproximadamente unos 45mL, luego se agrega 1mL de HCl 1N finalmente se
debe completar el enrase con agua destilada.
D) Preparacin de la Muestra de Agua Mineral

Se realiza el mismo procedimiento para todas las muestras de agua mineral que se
utilizaron (Agua Cielo, Agua San Mateo, Agua San Luis, Agua Vida)

1) Se miden 2, 3 y 4 mL de las muestra de agua y se llevan estos volmenes a
Fiolas de 50 mL (1 fiola por cada volumen).
2) Se aade 1 mL de HCl 1N a cada fiola y se completa hasta enrase agregando
agua destilada.
E) Determinacin de

de absorbancia de NO
3
-


1) Primero se hace la limpieza respectiva a las celdas de cuarzo del
espectrofotmetro con agua destilada, luego se agrega la solucin estndar del
blanco a las 2 celdas y se introducen en el espectrofotmetro SHIMADZU (Parte
opaca de la celda frente al operador), el cual debe medir un valor de
absorbancia 0 si no es as se debe hacer el ajuste respectivo haciendo clic en
AUTOZERO.
2) Se retira una celda que contiene la solucin de blanco y se debe introducir en el
compartimiento de muestra la solucin estndar N1 y se debe realizar el scan
respectivo en el software el cual nos dar el valor de

de absorbancia de
NO
3
-


F) Medida de absorbancia para la construccin de la curva de calibracin

1) Se debe introducir uno a uno todas las soluciones estndar en el
compartimiento de muestra del espectrofotmetro SHIMADZU y con ayuda
del software se anota los valores de absorbancia para cada solucin
estndar para la posterior construccin de la curva de patrones.

G) Medida de absorbancia en las muestras de agua de mineral

1) De igual manera se debe introducir uno a uno todas las soluciones muestra
de agua mineral en el compartimiento de muestra del espectrofotmetro
SHIMADZU y con ayuda del software se anota los valores de absorbancia
para cada muestra.


VII) CALCULOS DETALLADOS

VIII) GRAFICOS DE LOS EXPERIMENTOS









IX) DISCUSION DE RESULTADOS

Para la determinacin del

de absorbancia del NO3

-
, se us el estndar
N1 y se obtuvo un valor de

; Al comparar este valor con el

valor terico referencial mostrado en la bibliografa (220nm) se observa que
son cercanos.
Para la realizacin de la curva de calibracin de los 5 pares de datos que se
tena de concentracin y absorbancia de los estndares solo se consider 3
puntos ya que los otros 2 puntos distorsionan la tendencia lineal ideal que
debe tener, con los 3 puntos escogidos se obtiene un coeficiente de relacin
de 0.9999; Todo esto se observa en el Grfico N1.
En la determinacin del contenido de Nitrato en las muestras de agua mineral
se obtuvo los siguientes valores de concentracin como se muestra en la
siguiente Tabla
Marca de
Agua
Mineral Identificacin
Volumen de
Muestra de Agua
(mL) [NO3
-
] ppm
Muestra 1
Agua Cielo
M 1-1 2 455,82
M 1-2 3 11,81
M 1-3 4 20,48
Muestra 2
Agua San
Mateo
M 2-1 2 224,72
M 2-2 3 51,67
M 2-3 4 36,53
Muestra 3
Agua San
Luis
M 3-1 2 -
M 3-2 3 5.90
M 3-3 4 -
Muestra 4
Agua Vida
M 4-1 2 128,41
M 4-2 3 163,87
M 4-3 4 159,41

A su vez en la Muestra 3 solo se obtuvo un valor de concentracin para la
muestra 3-2; ya que para la muestra 3-1 y 3-3 se tena valores negativos de
absorbancia por lo cual nos iban arrojar valores negativos de concentracin, lo
que es completamente imposible, los motivos posibles de este hecho es que
esta muestra haya sido preparada de forma inadecuada, pues la solucin
blanco
Podemos atribuir la falta de precisin en los resultados del anlisis de las
muestras a la mala manipulacin de las celdas de cuarzo, pues se determin
en el trazado de la curva de calibracin por adicin de patrn que la solucin
estaba preparada correctamente.

Al hacer el anlisis estadstico de nuestros resultados de concentracin de nitrato en las
muestras de agua mineral se muestra los siguientes resultados
Identificacin
[NO3
-
]promedio
ppm
S CV
Muestra 1
Agua Cielo
16,14 6.13 37.97
Muestra 2
Agua San Mateo
44,10 10.71 24.28
Muestra 3
Agua San Luis
- - -
Muestra 4 Agua
Vida
150,56 19,31 12.82

Se observa que no se hizo el anlisis estadstico para la muestra 3 ya que solo se contaba con
un solo valor lo cual hace imposible un anlisis, a su vez no se consider el resultados de esta
muestra ya que no se puede discutir la veracidad de este valor con un solo resultado.








X) CONCLUSIONES

Se utiliz una celda de cuarzo debido que este material absorbe energa por
debajo de 210 nm.

Se hall que la longitud de onda de mxima absorbancia fue 214 nm acorde a
lo indicado en la referencia terica

Se concluye que tres de los cuatro tipos de agua mineral (Cielo, San Mateo
y San Luis) se encuentran dentro del lmite mximo permisible de NO3
-
en
agua apta para el consumo humano.

XI) RECOMENDACIONES

Se recomienda agitar vigorosamente los patrones y las muestras antes de cada lectura
de absorbancia con el fin de que el equipo lea correctamente el valor de absorbancia.

No se debe tocar con los dedos las paredes de las celdas por donde debe pasar la luz,
pues las huellas dactilares dispersan y absorben la luz, a su vez se debe limpiar o secar
las celdas con un pauelo desechable (papel tissue).

Se recomienda limpiar bien las celdas entre cada medicin de absorbancia en las
muestras, con el fin de no alterar la composicin de las mismas




XII) BIBLIOGRAFIA
AMERICAN PUPLIC HEALTH ASSOCIATION. Standard Methods for the Examination of Water
and Wastewater. 18th Edition. Washington, APHA, 1992. pp 4-87-4-88.
http://www.astm.org/SNEWS/SPANISH/SPND08/datapoints_spnd08.html
http://www.minsa.gob.pe/webftp.asp?ruta=normaslegales/2010/DS031-2010-SA.pdf en el peru
http://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/gdwq3rev/es/ oms


XIII) ANEXOS