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Resumen
En este trabajo se obtuvo el espe
tro de absor
in de la
lorola alfa y la
lorola beta. Se en
ontr que en la
lorola alfa tiene dos mximos uno en la regin azul ultravioleta y otra en el infrarrojo. Para el
aso de la
lorola
+
beta se en
ontr que tena satura
in en la parte del azul ultravioleta y un maximo en 650 5nm. La satura
in se
debido a que a que no se separ bien el pigmento de la
lorola beta de las xantolas, siendo estas
arotenoides y
absorben en la regin azul ultravioleta solamente . Se en
ontraron que para la
lorola alfa los mximos estaban en
+
+
430 5nm y el segundo maximo 660 5nm .Para esta
lorola los mximos de absor
in
omnmente a
eptados son
de 430 y 660. Con el diagrama de absor
in de la
lorola alfa se pudo
al
ular el tiempo de vida de la uores
en
ia
+
el
ual fue de 3.2(108 ) 109 s.
Objetivo.
Determinar el espe
tro de absor
in y de transmisin de la
lorola alfa y la
lorola beta en la regin visible del
espe
tro.
Introdu
in.
Clorola.
La
lorola est
ompuesta por una porriana que lleva in
orporado un tomo de magnesio. Una porrina es
un
ompuesto que posee anillos formados por hidro
arburos en su mayora (Carbonos de metano y
arbonos beta
pirrolti
os)
ausante de las rea
iones ele
trolti
as
Diagrama 1. Porrina.
Los anillos de la porrina, son estru
turas
ompartidas entre la
lorola y la hemoglobina. La ni
a diferen
ia es
que la
lorola presenta en su n
leo un tomo de magnesio mientras que la hemoglobina tiene un tomo de erro.
Espe
trofotmetro.
Para poder obtener el espe
tro de absor
in se utiliza un espe
trofotmetro la idea bsi
a del fun
ionamiento de
este es la siguiente:
Absor
in S-S S0 + h S1 , este pro
eso trans
urre en un tiempo de aproximadamente 1015 s
Absor
in S-T S0 + h T1 Transi
in prohibida ya que son de diferente multipli
idad de spin y por tanto de
momento de transi
in se anula.
Emisin de uores
en
iaS1 S0 + h , transi
in permitida y
ara
terizada por una
onstante de velo
idad kf
on
valores entre 1010 a 107 s1
Emisin de fosfores
en
ia T1 S0 + h transi
in prohibida y
ara
terizada por una
onstante de velo
idad kp
on
valores entre 106 a 1s1
Transi
iones no-radiativas
Conversin interna (CI). Transi
iones entre estados ex
itados de la misma multipli
idad de spin (ej. S1 S0 + Q)
ara
terizadas por una
onstante kci
on valores entre 1011 109 s1 . Cuanto menor sea la diferen
ia entre los estados
ex
itados, mayor es la e
ien
ia de CI.
Cru
e entre sistemas (CIS). Transi
iones prohibidas entre dos niveles vibra
ionales isoenergti
os de estados ele
trni
os ex
itados de diferente multipli
idad de spin (ej. S1 T1 + Q o bien T1 S0 + Q)
ara
terizadas por una
onstante kcis
on valores
omprendidos entre 1010 108 s1 . La presen
ia de tomos pesados in
rementa el a
oplamiento spin-rbita y por tanto favore
e que se produz
a
on ms probabilidad este tipo de transi
in. Existe un
tipo de transi
in no-radiativa que o
urre entre estados vibra
ionales de un mismo estado ele
trni
o. Este pro
eso
se denomina relaja
in vibra
ional y a temperatura ambiente, esta disipa
in de energa, se produ
e en un tiempo
de alrededor 1012 s. Este pro
eso es lento
on respe
to a la absor
in, sin embargo es muy rpido
on respe
to a la
uores
en
ia, CI y CIS. Esto expli
a que las propiedades uores
entes de una mol
ula sean independientes del estado
vibrni
o, dentro de la banda de absor
in S0 S1 , al que la mol
ula es ex
itada.
Estos pro
esos no-radiativos son los responsables de que no uorez
an el 100 % de las mol
ulas ex
itadas, que la
uores
en
ia se origine siempre desde el estado S1, que su perl no vare
on la longitud de onda de ex
ita
in y que
el mximo de emisin siempre se site a mayores longitudes de onda (menor energa) que el mximo de absor
in.
Este gap entre el mximo de la primera banda de absor
in y el mximo de uores
en
ia se denomina desplazamiento
de Stokes. En general, las diferen
ias entre los niveles vibra
ionales son similares en el primer estado ex
itado y en el
fundamental de aqu que los perles de la primera banda de absor
in y la uores
en
ia sean imgenes espe
ulares .
Los espe
tros de absor
in nos dan informa
in a
er
a de que longitudes de onda absorbe ms una mol
ula. Sin
embargo esta no es toda la informa
in que podemos obtener de los espe
tros de absor
in ya que los espe
tros de
absor
in tienen informa
in importante del estado singulete. Una de las bandas ms importante en un espe
tro de
absor
in, es la banda 0-0 .
3.5(108 )
2 Integral(dv)
m
Donde m es el nmero de onda medio de absor
in de la banda, Integral(dv) es el
oe
iente de absor
in. Si
la banda es simtri
a:
=
3.5(108 )
2 v
m
1
2
En este
aso es el
oe
iente de absorvan
ia mximo de la banda y v 12 es la mitad del an
o de banda, una
osa
importante en la formula anterior es que tiene que las unidades de distan
ia tienen que estar en
entmetros.
4
Extra
ion
Cuando se le agrega a
etona a las hojas se puede extraer la
lorola ya que debido a su simetra esta, la a
etona es
un
ompuesto apolar, si a la a
etona se le adi
iona un po
o de
arbonato de
al
io, neutraliza tejidos
idos y previene
una prdida par
ial de magnesio. La
lorola, no se disuelve en el agua por lo que para poder separar la
lorola alfa
de la beta, primero removemos la a
etona por medio de agua, al tiempo que se le agrega ter de petrleo
on lo que
se separa la a
etona
on agua y los pigmentos en el ter de petrleo.
Para poder separar los pigmentos alfa y beta, se mez
la ter de petrleo
on metanol a
uoso (al
ohol metli
o y
agua).Como el metanol es ms polar y denso que el ter de petrleo y son inmis
ibles se forman dos
apas. La superior
on ter de petrleo y
lorola alfa. Y la inferior
on metanol a
uoso y
lorola beta. En el
aso de la
lorola beta se
ambia el disolvente a ter etli
o. Por medio de agua se separa el metano a
uoso de los pigmentos ya que es demasiado
polar y los pigmentos de
lorola no.
Finalmente tanto a la
lorola alfa
omo a la
lorola beta se le agrega hidrxido de potasio para romper el enla
e
ster que une al tol
on el anillo de la porrina.
Rea
tivos.
A
etona diluida al 80 %.
ter de petrleo.
Agua destilada.
Al
ohol metli
o.
Hidrxido de potasio.
Se moli la espina
a (previamente lavada y sin los nervios de la hoja) en un mortero, y se pesaron 10 gr de la espina
a
molida. Estos 10 gr se mez
laron
on 128 ml de a
etona previamente rebajada al 80 %(Figura 1). De estos 128 ml
solo 100 ml se ltraron de modo que se retiraran los residuos slidos que quedaron, de las hojas utilizando un papel
ltro. Estos 100 ml una vez ltrados fueron vertidos en un embudo de separa
in y se le agrego 125 ml de ter de
petrleo y 175 ml de agua destilada al embudo de separa
in(Figura 2). Para que se pudiera dar la separa
in de
forma homognea se roto el embudo hasta que se formaron dos
apas.
Figura 4. En esta gura se muestra
omo se separan las dos
lorolas. En la parte superior se en
uentra la
lorola
alfa y en la inferior la
lorola beta.
De las dos fases, la parte inferior fue vertida en un vaso de pre
ipitado. De la parte superior, metanol a
uoso se
utiliz 125 ml los
uales fueron vertidos en el embudo de separa
in, previamente lavado en a
etona y agua, y se
aadi 50 ml de ter etli
o, al tiempo que se le adi
iono agua destilada, hasta que se dio la separa
in de fases.
Se mez
l 29 ml de al
ohol metli
o
on 63 mg de hidrxido de potasio. Esta solu
in (Hidrxido- al
ohol) se
mez
l por separado
on la solu
in del ter de petrleo, y la solu
in de ter etli
o. Para el
aso del ter de petrleo
se utilizaron 52 ml de la solu
in y se mez
laron
on 7.8 ml de la solu
in de hidrxido- al
ohol y 5.2 ml de agua
6
destilada(Figura 5). Y nalmente para el
aso del ter etli
o se mez
laron 97 ml de esta solu
in
on 11.05 ml de
la solu
in hidrxido al
ohol y 9.7 ml de agua destilada. Hasta que tanto en el ter de petrleo y en el ter etli
o
apare
ieron dos fases en
ada solu
in.
Figura 5. En esta gura se muestra la
lorola alfa despus de adi
ionarle la mez
la de hidrxido- al
ohol, y se
muestra
omo se separa en dos fases. La fase de arriba son
arotenos y la parte de abajo es la
lorola.
Resultados.
Absorban
ia.
Se en
ontr que en la
lorola alfa se presentan dos mximos(Gr
a 1.), uno en la regin
orrespondiente al
violeta, y la otra
orrespondiente al naranja rojo, a
ontinua
in se muestran los valores de los mximos en
ontrados:
+
Primer mximo
Segundo mximo
Longitud de Onda(nm5nm)
430
660
Como no se realizo ms que una sola medi
in no fue posible realizar una estadsti
a de los datos obtenidos por
eso se le asigno ese error a nuestras medi
iones. Cuando la
lorola alfa fue iluminada
on luz violeta, se present el
fenmeno de uores
en
ia y la
lorola emiti en una longitud de onda mayor
omo era de esperarse. Como sabemos
que tiene un mximo en esa fre
uen
ia enton
es esa banda
orresponde a la banda
ero, es de
ir a la banda en donde
o
urre las transi
iones del estado singulete base al primer estado ex
itado singulete. Con esta informa
in obtenida
de esta banda , se obtiene que el tiempo que de transi
in del estado ex
itado al estado singulete:
Para el
aso de la
lorola beta se observ una satura
in en la regin de longitudes de onda de 300nm a 480nm.
Esto pudo ser debido a que para separar la
lorola beta de las xantolas, el
ual es un
aroteno, es de
ir al agregar
el perxido de potasio no fue el su
iente, o
asionando que no se separaran del todo.
+
Satura
in
Segundo Maximo
Longitud de Onda(nm5nm)
300-480
650
Transmitan
ia.
+
Para el
aso de la transmitan
ia de la
lorola alfa, se en
ontr que tena un mximo en 560 5nm
osa que
+
on
uerda
on los datos de absorban
ia en donde el mximo esta en 550 5nm. Con esto se puede pensar en el
espe
tro de transmisin
omo el negativo de absorban
ia. Mientras que para la
lorola beta el mximo se en
ontr
+
Fluores
en
ia.
Cuando se ilumino la
lorola
on luz violeta se observ uores
en
ia en la
lorola alfa. Se pudo observar que
emita en una longitud de onda del rojo es de
ir mu
ho ms grande que la longitud
on la que se ilumino la muestra.
Con la informa
in que obtuvimos del espe
tro de absor
in podemos
al
ular el tiempo de de
aimiento del estado
singulete ex
itado al estado base. Es de
ir el tiempo de vida de la uores
en
ia teniendo en
uenta que el mximo en
donde o
urre la absorban
ia es en 430(107)cm, para este valor de la longitud de onda el mximo en la absorban
ia
es 2 y la mitad de la banda es 107 cmobteniendo:
=
3.5(108 )
(2)(107 )
1
(430(107 ))2
Este resultado es del orden esperado, ya que al ser un
ambio entre el primer estado ex
itado y el estado base es
una transi
in que es permitida o
asionando que o
urra en un tiempo muy pequeo.
Absorban
ia
Tabla 1.-Absorban
ia
Tabla 1.-Absorban ia
Longitud de Onda(nm)
Absorban ia(0.003)
Longitud de Onda(nm)
Absorban ia(0.003)
330
350
360
362
364
370
380
390
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
2
1.08
0.954
0.963
0.974
1.022
1.11
1.195
1.44
1.72
1.98
2
1.58
1.225
0.958
0.794
0.69
0.491
0.22
0.082
0.046
0.057
0.055
0.046
560
570
580
590
600
610
620
630
640
646
648
650
660
670
680
690
700
720
740
750
770
0.067
0.111
0.135
0.119
0.158
0.246
0.271
0.23
0.323
0.453
0.509
0.678
1.375
0.782
0.124
0
-0.022
-0.029
-0.027
-0.025
-0.029
Tabla 2.-Absorban ia
Tabla 2.-Absorban ia
Longitud de Onda(nm)
Absorban ia(0.003)
Longitud de Onda
Absorban ia(0.003)
300
312
330
350
370
390
410
430
450
460
470
480
484
490
500
520
540
560
580
590
600
610
620
630
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
2
1.82
1.305
0.53
0.263
0.343
0.403
0.649
0.984
0.774
0.996
1.1
1.125
640
650
660
670
680
690
700
720
740
760
780
800
820
840
860
880
900
920
940
960
980
1000
1.5
2
2
1.84
0.891
0.118
0.014
-0.0128
-0.021
-0.023
-0.024
-0.026
-0.026
-0.026
-0.024
-0.02
0.006
0.001
-0.001
-0.01
-0.013
-0.01
Transmitan
ia.
Tabla 3.-Transmitan
ia
+
Tabla 3.-Transmitan ia
200
7.70.0231
210
7.50.0025
220
6.40.0192
440
8.20.0246
450
12.20.0366
460
13.30.0399
470
12.50.0375
480
31.50.0945
490
70.80.2124
500
100.00.300
540
1200.36
230
5.50.0165
240
5.30.0159
250
4.30.0129
260
3.70.0111
270
3.40.0102
280
3.00.009
+
+
+
+
+
550
128.10.3413
560
136.20.4086
570
141.30.4239
580
1440.432
590
1350.405
600
127.10.3813
610
125.50.3765
620
113.50.3405
630
93.30.2799
640
62.60.1878
650
25.50.0768
660
6.60.0198
670
12.00.036
680
111.50.3345
690
199.90.5997
290
2.20.0066
300
1.10.0033
310
0.30.0009
320
0.50.0015
330
0.90.0027
340
1.30.0039
350
1.20.0036
360
0.70.0210
370
1.20.0036
380
1.80.0054
390
1.90.0057
400
1.30.0039
410
1.10.0033
420
1.00.0030
430
2.50.0075
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
10
Tabla 4.-Transmitan
ia
+
200
3.40.0102
520
72.70.2181
530
74.00.222
540
75.70.2271
560
77.50.2425
570
71.80.2154
580
67.80.2034
590
64.10.1934
600
60.20.1806
610
36.30.1089
620
52.90.1587
630
44.10.1323
640
36.00.108
650
30.90.0927
660
26.60.0798
670
23.30.0699
680
20.50.0615
690
18.10.0543
700
15.20.0456
710
12.70.0381
720
10.20.0315
730
8.70.0261
740
7.30.0219
750
7.60.0228
760
8.90.0267
770
10.70.0321
780
13.80.0414
790
17.50.0525
800
21.20.0636
810
24.50.0735
820
26.10.0783
830
27.80.0834
840
31.00.093
210
3.50.0105
220
3.00.009
230
2.60.0078
240
2.50.0075
250
2.40.0072
260
2.10.0063
270
1.80.0054
280
1.60.0048
290
1.40.0042
300
1.00.003
310
0.60.0018
320
0.30.0009
330
0.60.0018
340
1.10.0033
350
1.70.0051
360
3.70.0111
370
6.90.0207
380
10.10.0303
390
14.30.0429
400
26.40.0792
410
35.40.1062
420
44.10.1323
430
50.70.1521
440
55.70.1671
450
59.60.1788
460
63.10.1893
470
66.20.1986
480
66.20.1986
490
66.20.2058
500
68.60.2058
510
Tabla 4.-Transmitan ia
70.90.2127
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Gr
as .
A
ontinua
in se muestran las gr
as de los espe
tros que se midieron tanto para la
lorola alfa
omo para la
lorola beta
11
Absorban ia.
12
Transmitan ia.
Dis
usin.
En el espe
tro de absor
in de la
lorola alfa se en
ontr dos mximos uno en la regin del azul violeta y la otra
en la regin del roo infrarrojo, estos mximos son:
+
Para el
aso de la regin azul violeta, se observ que al iluminar la
lorola alfa
on longitud de onda
er
ana a
este mximo, se presentaba el fenmeno de uores
en
ia. Con lo que se le pudo ver que el mximo de la regin azul
violeta
orresponda a la banda 0-0. Y
on esta banda se
al
ul el tiempo de dura
in de la uores
en
ia en donde se
obtuvo:
+
650 5nm
Y para la regin azul violeta se saturo la medi
in, esto se debi a que la hidrolisis no se realiz
orre
tamente y
los
arotenos no se separaron
orre
tamente de la
lorola beta saturando el de espe
tro en esa regin debido a que
los
arotenos absorben en esa regin..
Referen
ias.
Theory of mole
ular relaxation: appli
ations in
hemistry and biology, Fran
is K. Fong.
T
ni
as de bioqumi
a y biologa mole
ular, David Freifelder.
Biologa, Neil A. Campbell,Jane B. Ree
e.
Mole
ular Photo
hemestry, Ni
holas J. Turbo
Apndi
e.
A
ontinua
in se
al
ulara la in
ertidumbre aso
iada
on el tiempo de de
aimiento de la
lorola. Por medio de
propaga
in de errores :
+
Sabemos que el error aso
iado a la longitud de onda es 5 107 . El error del nmero de onda es:
1107
(430107 )2
107 ) +
1107
(430107 )2
107 = 270.415
La frmula anterior nos da el error debido a la multipli
a
in del nmero de onda y la mitad de an
ho de banda.
Finalmente el error del
o
iente es:
(
3.5(108 )
(2)(107 ))2
1
(430(107 ))2
14