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RESUTADOS

PRUEBAS TUBO CON


LEVADURA
TUBO CON
LACTOBACILLUS
Piruvato con
nitroprusiato
+ +
acetaldehdo + -
etanol + -
cido lctico - +

La tabla muestra los resultados obtenidos en la determinacin de los productos
formados por la fermentacin de la glucosa por accin de la levadura y el
lactobacillus.
DISCUSIN
1. DETERMINACIN DE PIRUVATO CON NITRO PRUSIATO DE SODIO.
Se pueden cambiar las condiciones fisiolgicas para que la enzima piruvato
descarboxilasa funcione a una velocidad muy por debajo de su actividad mxima,
o se puede usar un agente como el nitro prusiato de sodio que atrape el
intermediario y que forme un compuesto que no puede metabolizarse. La piruvato
descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que el
piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reaccin con nitro
prusiato de sodio, entonces se desactiva la enzima piruvato descarboxilasa en
solucin alcalina dbil, y de este modo el nitro prusiato de sodio reacciona con el
piruvato formando un anillo de coloracin verde; en esta prueba nos dio positivo
tanto para la levadura como para el lactobacillus. (*1)
En esta reaccin se produce la transformacin de glucosa a piruvato, en
condiciones anaerbicas junto con una pequea cantidad de energa en forma de
ATP y NADH.
Este proceso, se denomina glucolisis, es el proceso ms imprtante del
metabolismo de carbohidrtos. De carcter anaerbico, esta ruta la utilizan tanto
los organismos anaerbicos como los aerbicos para generar una pequea
cantidad de energa en forma de ATP y NADH.
En los aerbicos es la fase inicial para preparar a la glucosa en la produccin de
energa extra va ciclo de cido ctrico y fosforilacin oxidativa. Esta ltima utiliza
NADH como fuente de energa reductora para sintetizar ATP.
Las enzimas responsables de la gluclisis se encuentran en el citoplasma celular.
La va glucoltica consta de diez (10) reacciones catalizadas por enzimas, usando
Glucosa como sustrato inicial. Se divide en dos etapas principales:
Etapa I - primeras cinco reacciones; tienen como fin "activar" la glucosa. Es la
etapa de inversin porque se consume energa (dos ATP).
Etapa II - ultimas 5 reacciones que comienzan con gilceraldehdo 3- fosfto y
culminan con piruvato, ambos metabolitos de 3 carbonos. Es la etapa de
"ganancia" porque se recupera la inversin inicial de dos ATP y se ganan otros
dos. (*2)
(*3)

2. DETERMINACIN DE ACETALDEHDO
En esta reaccin el cido pirvico es descarboxilado, por accin de la enzima
piruvato descarboxilasa, producindose acetaldehdo.
Esta reaccin da positiva en la levadura al tomar una coloracin azul, ya que esta
reaccin da positivo para condiciones anaerobias que son las que siguen una
fermentacin y se produce acetaldehdo, etanol, lactato, entre otros; en
condiciones aerobias es resultado es negativo, porque el piruvato es transportado
mediante una permeasa especfica al mitocondria, donde sufre una
descarboxilacin oxidativa catalizada por el complejo multienzimtico piruvato
deshidrogenasa que da origen a CH
3
-CO-CoA (acetil-CoA) que se degrada en el
Ciclo de Krebs. (*1)
Reaccin global de la gluclisis
+
Glucosa + 2NAD
+
+ 2ADP + 2 2Piruvato + 2NADH + 2ATP + 2H
+
+ 2H
2
O


3. DETERMINACIN DE ETANOL MEDIANTE SU OXIDACIN CON CIDO
SULFOCROMICO A ACETALDEHDO.
Los resultados de esta prueba dieron positivos para la levadura, presentndose un
color verde, mientras que en lactobacillus se form un precipitado dando la prueba
negativa.
La oxidacin de un alcohol produce un compuesto carbonilico. Dependiendo del
alcohol y del agente oxidante puede resultar que se obtenga un aldehdo, una
cetona o un cido carboxlico; en nuestro caso un acetaldehdo. El etanol es un
alcohol primario Por lo general es difcil obtener el acetaldehdo, porque la mayor
parte de los agentes oxidantes que pueden oxidar al alcohol primario, tambin
oxidan al aldehdo. El cido crmico oxida a un alcohol primario y llega hasta el
cido carboxlico. Esquema general:
paso 1- El cido crmico es protonado, casi de inmediato se rompe el enlace con
el cromo para formar agua, la parte parcialmente positiva del cromo se une con la
negativa del alcohol para formar un ster cromado:

paso 2-
El agua se protona formando un in hidronio, se forma el doble enlace con el
oxgeno para formar un aldehdo, el cromo se reacomoda para formar el ion
cromito ms estable (*4)


4. DETERMINACIN DEL CIDO LCTICO.
La fermentacin lctica es una ruta metablica anaerbica que se desarrolla en el
citoplasma de la clula, en este proceso la glucosa se oxida parcialmente para
obtener energa y acido lctico. El acido lctico se identifica en los sistemas D y
Dm que siguen la ruta de la fermentacin lctica, dada la adicin de el
lactobacillus proveniente del yogurt. El mtodo empleado para su determinacin
colorimtrica, es la adicin de cloruro frrico (formacin de lactato ferroso que
presenta una coloracin amarillo verdoso).













(*5)
ESQUEMAS DE LAS REACCIONES DE FERMENTACION ALCOHOLICA Y
LACTICA


(*5)
Bibliografa
(*1) A. Lehninger, D, Nelson y M. Cox. "Principios de bioqumica". Editorial Omega, 2000
(*2) http://www.verema.com/articulos/500449-levaduras-y-la-fermentacion-alcoholica-ii
(*3) Ward, O.P. Biotecnologa de la fermentacin. Acribia, S.A. Zaragoza, 1991
(*4) Sanz Esteban, M.; Serrano Barrero, S.; Torralba Redondo, B. Biologa. Oxford
University Press. Madrid, 2003.
(*5) http://www2.uah.es/tejedor_bio/BBM-II_2F/T4-piruvato-pagina.pdf