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Neues von der Honigbiene

- aktuelle Forschungsergebnisse aus


Physiologie, Pathologie und Diagnostik -

26.04.2014
Bad Kissingen

Referenten:
PD Dr. Heike Aupperle (A) LABOKLIN GmbH & Co. KG, Bad Kissingen
PD Dr. Elke Genersch (G) Lnderinstitut fr Bienenkunde, Hohen Neuendorf e.V.
Dr. Lena Poppinga (P) Lnderinstitut fr Bienenkunde, Hohen Neuendorf e.V.
Dr. Friedrich E. Rcken (R) FTA fr Kleintiere und Chirurgie, Schleswig

Programm
9:30-10:15 Vom Ei zur Imago
die Honigbiene ist ein ganz besonderes Haustier! (A)
10:15-10:45 Das kleine 1x1 der Diagnose von Bienenkrankheiten (A)
Kaffeepause und Besuch der Industrieausstellung
11:15-11:45 Das Bienenmonitoringsystem in Deutschland (G)
11:45-12:15 Die Honigbiene und der Tierarzt;
Aktuelle Situation, Weiterbildung und Medikamente in
Deutschland und in Europa (A)
12:15 -12:30 Therapeutischer Einsatz von medizinischem Honig bei Wunden
von Kleintieren (R)
12:30 - 13:15 So funktioniert die moderne Erforschung von Bienenkrankheiten (G, A)
Mittagspause und Besuch der Industrieausstellung
14:15-14:45 Bsartige Faulbrut - aktuelle Erkenntnisse zur Genetik und
Pathogenese (G)
14:45-15:00 Bsartige Faulbrut - morphologische Befunde im genetischen
Kontext (A)
Kaffeepause und Besuch der Industrieausstellung
15:30-16:00 Nosema neue Einblicke in die Schdigungsmechanismen (P)
16:00-17:00 Varroa und die Bienenviren (G)

ab 19:00 Sektempfang mit anschlieendem Gesellschaftsabend

Vom Ei zur Imago
die Honigbiene ist ein ganz
besonderes Haustier!
H. Aupperle
1
, L. Poppinga
2
, E. Genersch
2
1
LABOKLIN GmbH & Co KG, Bad Kissingen
2
Lnderinstitut fr Bienenkunde e.V. , Hohen Neuendorf
Knigin Drohn Arbeiterin
Apis mellifera - Das Bienenvolk (der Bien)
1 Knigin
10.000 40.000 Arbeiterinnen
300-3000 Drohnen
Die Entwicklungsstadien
von Dr. Kristin Mller
Ziel der Studie - Tiergut
Systematische histopathologische Untersuchungen an Bienen
(Arbeiterin, Knigin, Drohn) definierten Alters
Bislang nur rudimentre Kenntnisse zur normalen Histomorphologie
der verschiedenen Entwicklungsstadien von Knigin, Arbeiterin und
Drohn (Apis mellifera)
Grundlagen fr die Erforschung der Pathogenese der
(Brut)krankheiten der Bienen
Projekt BIENENATLAS gefrdert durch:
Bundesministeriums fr Ernhrung, Landwirtschaft und Verbraucherschutz ber die Verwendung des
Zweckvermgens des Bundes bei der Landwirtschaftlichen Rentenbank
Arbe|ter|n Kn|g|n 0rohn
n=640 n=88 n=198
Eier 60 -- 3
Larven 290 37 75
Puppen 40 37 85
Imagos 250 14 35
Die Entwicklungsstadien
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
1 3 3 7 9 11 13 13 17 19 21
Wachstum der Arbe|ter|nnen
Puppe
Larve
Ei
mm
d
Eier
Ei, Tag 3
dorsales Blastoderm
Organanlagen
Dotter, Vitellophagen
ventrales Blastoderm
Keimhllen
Ei, Tag 2 Eier: 2 mm
Schale
Chorion
Wachsschicht
Dottermembran
Die Entwicklungsstadien
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
1 3 3 7 9 11 13 13 17 19 21
Wachstum der Arbe|ter|nnen
Larve
mm
d
Larven
Larve, Tag 7
Larven: 4-11 mm
Mitteldarm
Enddarm
sophagus
Larve, Tag 6
Larve, Tag 7
Darm Larven
Larve, Tag 9
Larve, Tag 10 Larve, Tag 6
Mitteldarm
Enddarm
Mitteldarm
Larve, Tag 9
Mitteldarm
Fettkrper
Vorderdarm
Larven
Larve, Tag 10
Fettkrperzellen
nozyten
Die Entwicklungsstadien
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
1 3 3 7 9 11 13 13 17 19 21
Wachstum der Arbe|ter|nnen
Puppe
mm
d
Larve zu Puppe
Nymphe, Tag 12-13
Puppen:
13-15 mm
Nymphe, Tag 12-13
Puppen Stadien
Puppe, Tag 13
Puppe, Tag 16
Puppe, Tag 18
Puppe, Tag 13
Arbeiterin, Puppe, Tag 13
Flugmuskulatur Gehirn Fettkrper
Puppe, Tag 16
Arbeiterin, Puppe, Tag 16
Flugmuskulatur
Bauchganglion
Darm
Ocelle
Imago
Arbeiterin, frisch geschlpft
Imago: 15-17 mm
ausgewhlte Organsysteme
Histologische Besonderheiten von Insekten sind:
- chitinhaltige Kutikula
- andere Organe und andere Nomenklatur als bei Wirbeltieren
- Hmolymphe statt Blut
- kein geschlossenes Kreislaufsystem
- keine echte Leibeshhle
- kaum Bindegewebe
- die Muskulatur setzt meist innen an der Kutikula an
Kutikula - Hutung
4 Hutungen als Larve
1 Hutung Nymphe (Vorpuppe) Puppe
1 Hutung Puppe Imago
Hutung
Puppe, Tag 15
Larve, Tag 11 Larve, Tag 12
Apolyse: Ablsung der alten Kutikula von der Epidermis
Exuvialflssigkeit zwischen alter Kutikula (Excuvie) und neuer Kutikula
Ecdysis: Schlpfen
Puppe, Drohn, Tag 16
Augen Imago
Flugbiene
3 Punktaugen (Ocellen)
8 Sehzellen mit gemeinsamer Linse
Helligkeitsintensitt
2 Facettenaugen (Omatidien)
4000 bis 8000 Einzelaugen
Bewegung, Farben, Bilder, Muster
Beine
Prtarsus
Tarsus
Tibia
Trochanter
Femur
Metatarsus
Beine
Knigin, Puppe, Tag 13
Flgel
Arbeiterin, Puppe, Tag 17
Drsen
Kopfdrsen
Pharynx-/Futtersaftdrse
Labialdrse
(Kopf- und Thoraxteil
Oberkieferdrsen
Wachsdrsen
3 Paar Wachsdrsen am Abdomen
Arbeiterinnen im Alter von 12-18 Tagen
Tracheen
Tracheen
Luftscke
Atmungssystem
Perikardiale Zellen
Diaphragma
Mitteldarm
Malphighische
Gefe
Arbeiterin, frisch geschlpft
Imago Darm
Mitteldarm
Proventriculus
Honigblase
sophagus
Mitteldarm Proventriculus Honigblase
Imago Darm
Mitteldarm
Imago Darm
Rektalpapillen
Enddarm
Der Drohn
0
5
10
15
20
25
30
35
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
Wachstumskurven
Drohn
Arbeiterin
mm
Tage
Drohn Hodenentwicklung
Drohn, Larve, Tag 8 Drohn, Larve, Tag 9
178IV Drohn 13d HOden 2x
Drohn Hodenentwicklung
Drohn, Puppe, Tag 13
Drohn Hodenentwicklung
Drohn, frisch geschlpft
Schrder, LIB
Drohn Genitale
Borstenfeld
Hrnchen
Borstenfeld
Hrnchen
Drohn Genitale
Drohn, gettet
Schrder, LIB
Hrnchen
Borstenfeld
Schleim Sperma
Die Knigin
0
5
10
15
20
25
30
35
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
Wachstumskurven
Drohn
Arbeiterin
Knigin
mm
Tage
Knigin Ovarentwicklung
Knigin, Larve, Tag 8
pr-vitellogene Phase:
Oogonien und Ammenzellen
Knigin Ovarentwicklung
Knigin, Puppe, Tag 11
Knigin Genitale
Knigin, Eiablage
Eier
Spermatheka
Spermathekadrse
Spermatheka
Die Eiablage
Zusammenfassung
erstmals detaillierte histologische Bilder von verschiedenen Entwicklungsstadien
gesunden Arbeiterinnen
faszinierende mikroskopische Unterschiede zwischen Insekt und Wirbeltier
interessante Einblicke in die Funktionsmorphologie der Bienenorgane
Grundlage fr weiterfhrende Untersuchungen zur Histopathologie und
Pathogenese von Bienenkrankheiten
Das kleine 1x1 der Diagnose von
Bienenkrankheiten
H. Aupperle
Laboklin GmbH & Co KG, Bad Kissingen
Besonderheiten der Bienen
Die fr Wirbeltiere etablierten Diagnosemethoden (Vitalparameter,
Antikrpertiter, bildgebende Verfahren etc.) sind bei Bienen nicht mglich.
Die Krankheitssymptome der Bienen sind meist zu unspezifisch fr eine
differentialdiagnostische Abgrenzung.
Viele Symptombeschreibungen beziehen sich auf tote Bienen
(z.B. schiffchenfrmige Larvenreste bei Sackbrut, fadenziehende Masse bei Faulbrut).
Viele Bienenkrankheiten sind polyfaktoriell bedingt.
Der Erregernachweis mit mikroskopischen oder molekularen Verfahren gibt
daher oft keinen Aufschluss ber die tatschlichen Relevanz.
Viele Symptome betreffen das ganze Volk oder Bienengruppen.
(z.B. Durchfall, Buckelbrtigkeit, Black Queen Virus).
Vorgehen bei der diagnostischen Beurteilung der
Bienengesundheit und Identifikation von Bienenkrankheiten
Die Bienen
Die Bienen
man kann sie nicht streicheln
sie stechen
es ist keine gefhlsmige
Bindung zu Einzeltieren mglich
sie werden trotzdem hufig als
Hobby gehalten
schon fr Kinder interessant
stark emotional besetzt
sehr medienwirksam
Die Imker
ein sehr spezielles Klientel
alt, weise und erfahren (?)
einzelgngerisch (?)
abgehrtet, unerschrocken
verschroben, erfinderisch
meist beraus kommunikativ
Die Imker
Der Tierarzt
Tierrztliches Wissen wird
zunehmend nachgefragt
1980er Invasion der Milbe Varroa destructor
2000er Vlkerverluste bis ca. 30% pro Jahr in EU
Mgliche Faktoren: Milben, Viren, Bakterien, Pilze,
Pestizide, Vergiftungen,
Arzneimittelmissbrauch,
Managementfehler
Die Bienenkrankheiten
Bsartige Faulbrut Anzeigepflicht Bakterium Paenibacillus larvae!
Europische Faulbrut Bakterium Verschiedene Bakterien
Kalkbrut Pilz Ascophaera apis
Steinbrut Pilz Aspergillus flavus und
A. fumigatus
Nosemose Pilz Nosema apis, N. ceranae
Varroose Parasit V. destructa
Tracheenmilbenkrankheit Parasit Acaparis woodi
Ambenruhr Parasit Malphigamba mellifica
Tropilaelapsmilben Anzeigepflicht Parasit T. clareae, T. koenigerum
Kleiner Beutenkfer Anzeigepflicht Parasit Aethina tumida
Deformierte Flgel-Virus Virus Deformed Wing Virus
Sackbrut Virus Sackbrutvirus
Schwarze Kniginnen Krankheit Virus Black Queen Cell Virus
Ansteckende Schwarzsucht Virus Chronisches Paralysevirus
Bienen haben keine Plasmazellen und keine spezifischen Antikrper
Besonderheiten der Bienen
tiologische
Untersuchungsmethoden
keine serologische Infektionsdiagnostik man kann Bienen nicht impfen
Bienenspezifische
Therapiemanahmen
Abwehr durch Verhalten / soziale Immunitt
Putzverhalten (gegenseitiges Befreien von Parasiten)
Nesthygiene (Abwehr von Parasiten, Entfernung toter Bienen,
Propolis, Subern des Nestes)
Behavioral fever (Steigerung der Nesttemperatur auf bis zu 45C um
Eindringlinge zu tten, Kalkbrut zu stoppen)
Soziale Organisation (Putzbienen fttern keine Brut mehr um die Gefahr der
Erregerbertragung zu mindern)
Symbiotische Bakterien (endogene Bakterien hemmen z.B. Kalkbrutpilze)
Abwehrsysteme der Bienen
Besonderheiten der Bienen
Die kollektive Infektionsabwehr steht bei Bienen im Vordergrund
Diagnose Bienenstand
Management & Hygiene
Bienenspezifische Therapiemanahmen
z.B. Putztrieb frdern
Kunstschwrme
optimales Futterangebot
Vlker zusammenlegen
neue Knigin einsetzen
Diagnose Hygiene Bienenstand
Lage des
Bienenstandes
Hygiene
Wabenhygiene
Schutzkleidung
Lagerrume
Schleuderrume
Diemer
Besonderheiten der Bienen
Erkrankungen haben Bedeutung fr den ganzen Bien
Man behandelt und diagnostiziert nicht die einzelne Biene
Fluglochbeobachtung
Volksstrke und Zusammensetzung prfen
Hans Thoma: Der Bienenfreund
Diagnose Volksstrke
Cave: Jahreszeit und Volksstatus bercksichtigen!
Diagnose Bienenstand und Gemll
Diagnose Wabenbild
Dr. M. Hardt
Diagnose Bienenmaden
Kalkbrut
Varroa
Diagnose Bienen
Varroa Bienenlaus Tropilaelaps
Milbe
Beinpaare 4 3 4
Gre 3-4 mm 1-1,5 mm 0,7-1 mm
Schadwirkung Brut/Adulte Knigin Brut
Diagnostisches Material
Probenmaterial
Bienen
Waben
Futterkranzproben
Honig
Dr. M. Hardt Dr. M. Hardt
Mikrobiologische Untersuchungen
akter|en|P||ze
Prooer sler|| erlrerrer, |ur| |agerr, r|crl e|rlr|ererl versard orre Zusalzel
Ku|lurverlarrer, verscr|edere Narrooder
gelarole oder urgelarole Ausslr|crpraparale
z.8. 8urle Re|re, Kala|ase-Tesl, ,APl-ZYV-Tesl' vor ,o|o Ver|eux'
Praz|p|lal|orsverlarrer, ELl3A, lrrurl|oureszerz
Vo|e|u|are 0|llererz|erurg z.8. ERlC l-lv
Bakterielle Infektion z.B. Amerikanische Faulbrut
Paenibacillus larvae
Gram positives, begeieltes Stbchen
Sporen bildend
Genotypen ERIC I-IV
Probenentnahme nur im
Beisein des
Amtstierarztes bzw. eines
Bienensachverstndigen!
Dr. M. Hardt
PD Dr. E. Genersch
Dr. M. Hardt PD Dr. E. Genersch
Futterkranzproben
Futterkranz
Die Nahrung wird in Form eines Futterkranzes ber dem Brutnest evtl.
auch im Brutraum gespeichert.
Im Futterkranz liegt der Pollen direkt ber der Brut und der Honig
auerhalb des Pollens.
Dr. M. Hardt
Kerrze|crrurg: Probe zur Untersuchung auf Fau|brut
Aul||eoer : Nare Arscrr|ll des lr|ers, 3loc|rurrer, 0alur der Prooererlrarre
8eg|e|lor|el : Arscrr|ll des lr|ers urd des 8|ererslardes, 3loc|rurrer, 0alur der
Prooererlrarre, Nare urd Arscrr|ll des Arlsl|erarzles ozW. des 83v, Aoserder
voroer|crl: 0rurd der E|rserdurg, ersles Aullreler der Erscre|rurger,
verra|ler der 8|erer, sorsl|ge 8eooacrlurger, 3lardorl urd 0esarlzar| der vo||er
Fuller|rarzprooer: z.8. oe| Arer||ar|screr Fau|orul
verdacrl|ge wabe b|enenfre| racrer
{n|cnr 3|enenoesen oenurzen, oa sonsr ronram|nar|onsgelanrj urd r|l Rarrer e|rserder
waoe |r e|re P|asl||lule [3treichholz bleibt in der wabe, wenn sog. 3treichholztest
durchgefuhrt wurde}, Tule |r e|re zWe|le Tule geoer
E|rgelulele waoe |r Ze|lurgspap|er W|c|e|r urd |r e|rer Karlor
Probenversand bei AFB Verdacht
Pilzinfektion z.B. Kalkbrut
Ascophaera apis
Schimmelpilzinfektion
Larve vom Pilzmyzel durchsetzt (wei)
Fruchtkrper des Pilzes mit Sporen
(grn-braun)
Diagnose: Mykologie, Histologie
Pilzinfektion z.B. Nosema sp.
Pilz (Nosema spp.)
Material: frisch abgettete Bienen einsenden, mglichst kurze Transportzeiten!
Morphologische Untersuchungen: Makroskopie, Mikroskopie (nativ, Histologie)
Dr. M. Hardt
Tracheenmilben
Material: frisch abgettete Bienen einsenden
Morphologische Untersuchung: Makroskopie, Mikroskopie
Parasitre Infektion z.B. Tracheenmilben
Dr. M. Hardt
Deformed wing virus
Material: frisch abgettete Bienen einsenden, Varroadiagnostik!
Molekulare Untersuchungen: RT-PCR
Virusinfektion z.B. DWV
Intoxikationen
Untersuchungsmaterial
mind. 1000 tote Bienen (Gewicht ca. 80 bis 100 g)
mind. 100 g Pflanzenmaterial
Bienenschutzverordnung
gem Pflanzenschutzgesetz 33 Absatz 2 Nr. 8 ist die einzige
Untersuchungsstelle fr Bienenvergiftungen das Julius Khn-Institut
jhrlich bis zu 400 Bienen- und Pflanzenproben auf Rckstnde
von Pflanzenschutzmittel-Wirkstoffen und deren Metabolite untersucht
es wurden insgesamt 238 Wirkstoffe und Metabolite ermittelt.
Ana|yse des an den |enen anhaftenden Po||ens
Lo|a||sal|or des 0rles urd der Tracrl, Wo s|cr d|e 8|erer |urz vor |rrer Tod Warer
Untersuchung der |enen auf w|cht|ge Krankhe|ten
Nosera-|rar|e 8|erer reag|erer oe| Korla|l r|l Pl|arzerscrulzr|lle|r erreo||cr
erpl|rd||crer a|s gesurde 8|erer
|otest
Larven der Ce|bf|ebermcke Aedes aegypti L.
3|rd lur 8|erer g|ll|ge 3lolle racrWe|soar?
Aedes-Test pos|t|v
Tolerla|| racr 21 3lurder
Korla|lg|llW|r|urg?
,o|erergelarr||cre' Pl|arzerscrulzr|lle|
Aedes-Test negat|v
|e|re crer|scre
urlersucrurger
Aedes-Test pos|t|v
Tolerla|| racr Wer|ger 3lurder
crer|scre urlersucrurger e|r|e|ler
Zusammenfassung Diagnoseschema
- Bienenstand Management & Hygiene
- Fluglochbeobachtung
- Volksstrke und Zusammensetzung
- Brutbild
- Erwachsene Bienen
- Weiterfhrende tiologische Untersuchungen
- (Therapiemanahmen einleiten)
Aus dem Lnderinstitut fr Bienenkunde Hohen Neuendorf,
Molekulare Mikrobiologie und Bienenpathologie
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf


DeBiMo Das Deutsche Bienenmonitoring

E. Genersch

1. Einleitung
Den Winter 2002/2003 hatten im Mittel 30% der Bienenvlker in Deutschland nicht
berlebt. Wissenschaftlern und Imkern fiel es gleichermaen schwer, diese
ungewhnlich hohe Verlustrate zu erklren.
Gleichzeitig hie es aus Imkerkreisen, dass die Winterverluste in Deutschland seit
Jahren kontinuierlich ansteigen wrden und auch in den Medien huften sich die
Berichte, dass die Zahl der gehaltenen Bienenvlker weltweit alarmierend abnehmen
wrde und ein baldiges Aussterben der Honigbienen zu befrchten sei.
Auch wenn die Situation nicht ganz so dramatisch ist, und die Zahl der
Honigbienenvlker global in den letzten 60 Jahren sogar um 45% zugenommen hat,
hilft das den Imkern, die unerklrliche und hohe Vlkerverluste erleiden, und den
Regionen, in denen sich solche Verluste hufen, leider gar nicht.
Deshalb wurde im Herbst 2004 von den Bieneninstituten in Deutschland ein
nationales Monitoring-programm, das sogenannte DeBiMo (Deutsches
Bienenmonitoring) initiiert (1). Ziel dieses nun schon im 10. Jahr laufenden
Monitorings war und ist es, das tatschliche Ausma der Winterverluste zu erfassen
und Hinweise auf mgliche Ursachen sowohl von normalen als auch von
auergewhnlichen Verlusten zu erhalten.
2. Durchfhrung
Seit dem Herbst 2004 werden an ungefhr 220 ber ganz Deutschland verteilten
Bienenstnden jeweils 10 Bienenvlker mehrmals im Jahr untersucht und beprobt.
Die Brut-, Bienen- und Futterkranzproben werden auf diverse Krankheitserreger
hin untersucht, das Pollenspektrum der Honigproben dient der Abschtzung der von
den Bienen genutzten Trachtpflanzen und in den Bienenbrotproben wird nach
Rckstnden von Pflanzenschutzmitteln gesucht.
Mit statistischen Auswertungen und Modellen werden einzelne Faktoren oder
Faktorenkombinationen und die Winterverluste der dazugehrenden Vlker korreliert.

3. Zusammenfassung
Die Hhe der Winterverluste seit 2004/2005 bewegte sich erfreulicherweise
zwischen ungefhr 6 % und knapp 19% und ist damit seit Jahren als normal zu
bewerten.
Die erfassten Vlkerverluste, soweit sie nicht durch Verhungern oder
Kniginnenverlust erklrt werden konnten, hingen wesentlich mit der Hhe des
Varroabefalls im Herbst und den damit assozierten Virusinfektionen zusammen.

4. Literaturverzeichnis
1. GENERSCH, E., VON DER OHE, W., KAATZ, H., SCHROEDER, A., OTTEN,
C., BCHLER, R., BERG, S., RITTER, W., MHLEN, W., GISDER, S., MEIXNER,
M., LIEBIG, G., ROSENKRANZ, P. (2010): The German Bee Monitoring Project: a
long-term study to understand periodically high winter losses of honey bee
colonies. Apidologie 41, 332-352.

Anschrift der Verfasserin
PD Dr. E. Genersch, Lnderinstitut fr Bienenkunde
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf
elke.genersch@rz.hu-berlin.de
Die Honigbiene und der Tierarzt
aktuelle Situation, Weiterbildung und
Medikamente
in Deutschland und in Europa
H. Aupperle
Laboklin GmbH & Co. KG, Bad Kissingen
Bienenhaltung in der EU (2010)
Chauzat et al. (2013)
Demographics of the European Apicultural Industry.
PLoS ONE 8(11): e79018.
doi:10.1371/journal.pone.0079018
13,8 Mio Bienenvlker
90,7% Hobbyimker
9,3% Berufsimker
220 000 to Honig/Jahr (140 Mio )
Bienenvlker Imker Vlker/Imker
Deutschland 680 000 89 000 7,6
England 200 000 40 000 5,0
Frankreich 1 346 000 70 000 19,5
Italien 1 127 000 70 000 16,1
sterreich 367 000 24 450 15,0
Portugal 580 000 17 291 33,0
Spanien 2 500 000 24 250 103,0
Bienenhaltung in der EU
Berufsimker in Europa
Chauzat et al. (2013)
Honigproduktion in Europa 2010
Honig (t) t/100 Vlker
Deutschland 20 441 3
England 6 000 3
Frankreich 20 000 1,5
Italien 23 000 2,0
sterreich 6 000 1,6
Portugal 7 426 1,3
Spanien 33 084 1,3
Honigproduktion in Europa
Bienenprodukte in der EU 2010
Pollen Gelee Royal Kniginnen
(kg) (kg) (Anzahl)
Deutschland ? ? ?
England ? ? 4 500
Frankreich ? 7 000 ?
Italien ? 4 000 350 000
sterreich ? ? ?
Portugal ? ? ?
Spanien 761 540 ? ?
Ungarn 100 000 ? 45 000
Slowakai 100 000 30 75 000
Zusammenschluss von +2 veterinarorganisationen
in 37 Landern
Reprasentation von ca. 200 000 Tierarzten
Austria,
Belgium, Bosnia-Herzegovina, Bulgaria,
Croatia, Cyprus, Czech Republic,
Denmark, Estonia,
Finland, France, FYROM,
Germany, Greece, Hungary,
Iceland, Ireland, Italy,
Latvia, Lithuania, Luxembourg,
Malta, Montenegro, Netherlands, Norway,
Poland, Portuga,l Romania,
Serbia, Slovak Republic, Slovenia, Spain, Sweden, Switzerland,
Turkey, United Kingdom
Mitglieder der AG Bienen 2012
Dr. Nicolas Vidal-Naquet Frankreich: Ordre des Vtrinaires Conseil Suprieur
Dr. Giuliana Bondi Italien: FNOVI
Dr. Barbara Bernhart sterreich: sterreichische Tierrztekammer
Dr. Matthew Sharman England: Defra, Central Science Laboratory
Dr. Heike Aupperle BRD: Bundestierrztekammer
Dr. Mariano Higes Pascual,
Dr. Raquel Martn Hernndez
Spanien: Consejo General de Colegios
Veterinarios de Espaa (CGCVE)
Rolle der Veterinre bei Bienenkrankheiten
Bienenkrankheiten im Studium der Veterinrmedizin
postgraduale Weiterbildungsmglichkeiten
tierseuchenrechtliche Situation in der EU
fr Bienen zugelassene Arzneimittel in der EU
Rckstandsproblematik in der EU
AG Bienen der FVE
Ziele der AG Honigbienen
Bestandsaufnahme der Situation der Bienen und
der Veterinrmedizin in Europa
Empfehlungen an die FVE
1. Ausbildung
Studentische Ausbildung
Tiermedizin Studium (Bienenkrankheiten)
in allen Lndern nur 5 bis 10 Vorlesungsstunden
meist sogar nur fakultativ
einzelne Universitten bis zu 30 stndige Kurse
Italien (Bari, Bologna, Perugia, Sassari, Torino)
Spanien (Cordoba, Murcia)
Vinetum-Professur fr Bienengesundheit an der Universitt Bern
Peter Neumann ist der erste Professor fr Bienengesundheit in der Schweiz.
von der Bieler Vinetum-Stiftung errichtete Professur
fnf Millionen Franken fr zehn Jahre
Empfehlungen/Ziele der FVE
intensiviertes und einheitliches Unterrichtsprogramm fr
die Studierenden aller EU Lnder
Lehrsthle fr Bienenkrankheiten
Studentische Ausbildung Postgraduale Weiterbildung in Europa
Frankreich:
seit 2006 ein French Diploma mit 3-monatiger Weiterbildung
Italien:
Padova und Pisa: 300 Stunden Ausbildung (Theorie & Praxis)
Spanien:
Barcelona: an der Biologischen Fakultt ein 40-stndige Weiterbildung
Belgien:
ein 4-stndiger und ein 23 Tage Weiterbildungskurs
Fachtierarzt in sterreich
seit Juni 2013 "Fachtierarzt Bienen"
Ausbildungszeit: 3 Jahre (6 Module oder 20 h/Jahr)
- theoretischer und praktischer Teil
dokumentierte Zusammenarbeit mit einem Kommissionsmitglied
oder einem anderen Fachmann
Voraussetzungen :
5 Fallberichte (einer in einem ffentlichen Vortrag vorzustellen)
1 wissenschaftliche Publikation
Praktikum bei einem Imker
(wenn der Tierarzt nicht selbst bereits mehrere Jahre Imker
und Mitglied eines Verbandes ist)
Prfungskommission
Vorsitz Dr. Robert Fink, Veterinrdirektor Burgenland.
Ausbildungsprogramm (6 Module) von Prfungskommission organisiert
nicht verpflichtend
Aufgabenbereiche fr Fachtierrzte fr Bienen
(aus den Weiterbildungsbestimmungen von sterreich)
Beratung ber gute imkerliche Praxis und bienengerechte Haltung
prventive und kurative Betreuung von Bienenvlkern
Diagnostik
Schadenserhebung in Krankheits- und Vergiftungsfllen
Untersttzung von Amtstierrzten bei der Seuchenbekmpfung
Qualittssicherung des Lebensmittel Honig
Aufzeigen von Forschungsbedarf
Postgraduale Weiterbildung
Inhalte sollten sein:
Die Rolle der Bienen bei der Bestubung in der Landwirtschaft und
fr die Biodiversitt des kosystems
Biologie der Honigbiene
Bienenhaltung in Europa
Gute imkerliche Praxis (GIP)
Prvention und Kontrolle von Bienenkrankheiten
Inspektion, Sanierung und Management von Bienenhaltungen
Medikamentse Therapie von Bienenkrankheiten
Nationale und EU Gesetze zur Haltung und zum Handel mit
Bienen(produkten)
Postgraduale Weiterbildung BRD bis 2013: Fachtierarzt fr Bienen
Bis 2013: keine Mglichkeit der Qualifikation in
Bayern, Niedersachsen und Hessen!
Quelle: DIB
BRD bis 2013
Z 8aar Thr Rhe|n-
Pfa|z
8achs 8-A R w 8ch|esw|g NR
0auer (Jarre) 2 2 3 2 2 2 2 2 (3) 2 (1)
Fa||ber|chte - - - 20 25 30 25 50 25
we|ter-
b||dung (r)
30 10 30 10 0 0 0 0
(90)
0
Pub||kat|onen 1 1 1 - - - 1 - -
FTA h hh HV er||n westf L|ppe
0auer (Jarre) 1 1 1 1 1 (8)
Fa||ber|chte - - 25 -
we|ter-
b||dung (r)
- - - 10 10 (320)
Pub||kat|onen 1 1 3 2 1
Aktuelle Situation in der BRD
2013 BTK Vorschlag einheitliche Weiterbildungsordnung:
Zusatzbezeichnung Bienen
von den vier mitteldeutschen Kammern und Mecklenburg-Vorpommern
bereits umgesetzt
vier weitere Kammern planen baldige Umsetzung
Bayern will im Mai 2014 auch die Zusatzbezeichnung Bienen einfhren
TK Bayern und TK Baden Wrttemberg planen fr 2014 Bienen-
Module Kooperation mit der ATF?
LABOKLIN, Bad Kissingen, Bayern als Weiterbildungssttte anerkannt
ab Ende 2015 ist eine Online-Weiterbildung durch die ATF geplant
Aktueller Vorschlag ZB Bienen
Zusatzbezeichnung Bienen
(Stand 6.2.2013)
I. Aufgabenbereich
Diagnostik, Therapie und Prophylaxe von Bienenerkrankungen. Beratung in
Krankheits- und Vergiftungsfllen sowie zu Zucht und Haltung von Bienen.
II. Weiterbildungszeit 2 Jahre
III. Weiterbildungsgang
.
B.
Nachweis der Teilnahme an anerkannten fachbezogenen
Fortbildungsveranstaltungen im In- oder Ausland mit insgesamt mindestens 80
Stunden.
..
IV. Wissensstoff
1. Biologie der Bienen, insbesondere Anatomie, Physiologie, Ethologie,
Fortpflanzung, Haltung und kologie
2. Untersuchung von Bienenvlkern, Bienen und Brut zum Nachweis von
Krankheiten, Schden und Vergiftungen
3. Pathologie und Labordiagnostik von Bienenkrankheiten
4. Prophylaxe von Bienenkrankheiten und schden
5. Biologische und medikamentelle Behandlung von Bienenkrankheiten
6. Honigkunde, sonstige Bienenprodukte (Propolis, Wachs, Bienengift)
7. Einschlgige Rechtsvorschriften
V. Weiterbildungssttten
1. Einschlgige Einrichtungen tierrztlicher Bildungssttten
2. Tierrztliche Kliniken und Praxen
3. Lebensmittelberwachungs- und Veterinrmter
4. wissenschaftlich geleitete Forschungseinrichtungen oder Institute mit
einschlgigen Aufgabengebieten des In- und Auslandes.
Anlage
Vorlage von 2 ausfhrliche Fallberichten und 10 Dokumentationen
(z. B. diagnostische Fallberichte, Dokumentation von Bestandssanierungen bei
Seuchenfllen, Verste gegen rechtliche Bestimmungen), die durch den
Weiterbildungsbefugten zu besttigen sind.
Aktueller Vorschlag ZB Bienen
Ausfhrlicher Fallbericht
ANFORDERUNGEN an den AUSFHRLICHEN FALLBERICHT
A.) Allgemeine Anforderungen
Der Ausfhrliche Fallbericht ist in seinem Umfang und in seiner Gliederung an den
Krankenberichten an den Universittskliniken orientiert.
Es soll ein Fall ausfhrlich in seinem gesamten Verlauf dargestellt werden, es sollen
Differentialdiagnosen aufgefhrt werden und es soll eine ausfhrliche Diskussion des
Falles beigefgt werden.
Insbesondere sollen die Flle von Beginn an oder ab bernahme einer berweisung bis
zum Ende (Erstellung und Durchfhrung eines entsprechenden Therapieplanes)
dargestellt werden. Auch soll der weitere Verlauf erwhnt werden.
Nicht gltig sind Berichte, deren Bearbeitung in wesentlichen Punkten eingeschrnkt ist
wegen des Abbruches einer Behandlung durch den Besitzer z.B. aus finanziellen oder
anderen Grnden.
Der Umfang der ausfhrlichen Fallberichte betrgt mindestens 1200 Worte. Der Text
soll in ganzen Stzen erstellt werden. Ergebnisse weiterfhrender Untersuchungen
sollen in Kopie des Originalbefundes (z.B. Labor, Pathologie, Fotos usw.) oder auf
einem beigefgten Datentrger in einem allgemein zugnglichen Dateiformat (z.B. kurze
Filmsequenzen usw.) angefgt werden.
Die Ausfhrlichen Fallberichte der Nicht klinischen Weiterbildungsgnge sollen in
Gliederung und Umfang den oben genannten Anforderungen entsprechen.
Ausfhrlicher Fallbericht
B.) Gliederung
berschrift Thema, Autor, Gebietsbezeichnung
Signalement Tierbesitzer, Karteinummer, Datum der ersten Vorstellung
Tiername, Art, Rasse, Geschlecht, Alter, Gewicht
Anamnese
Klinische Untersuchung
Allgemeine klinische Untersuchung
Spezielle klinische Untersuchung
Haare, Haut ,Unterhaut
Sichtbare Schleimhute
Palpierbare Lnn.
Zirkulationsapparat
Respirationsapparat
Digestionsapparat
Urogenitaltrakt
Bewegungsapparat
Nervensystem und Sinnesorgane
Problemliste mit aufflligen Symptomen
Ausfhrliche Differentialdiagnose
Weiterfhrende Untersuchungen mit Belegen und z.T. mit kurzer Begrndung
Diagnose, Therapie, Verlauf
Diskussion
Vorschlag fr Fallbericht Bienen
ANFORDERUNGEN an den AUSFHRLICHEN FALLBERICHT
B.) Gliederung
berschrift Thema, Autor, Gebietsbezeichnung
Signalement Tierbesitzer, Datum der ersten Vorstellung,
geographische Region, Stocknummer, Rasse,
ggf. Gre/Gewicht des Volkes
Anamnese
Klinische Untersuchung
Besichtigung des Bienenbestandes (Hygiene, Haltungsbedingungen)
Fluglochbeobachtung
Diagnose an der Beute (Volksstrke, Wabenhygiene, Parasiten, Gemll etc)
Diagnose an den Bienen (Brut, Futterkranz, Knigin, Arbeiterinnen, Drohnen)
Problemliste mit aufflligen Symptomen
Ausfhrliche Differentialdiagnose
Weiterfhrende Untersuchungen mit Belegen und z.T. mit kurzer Begrndung
Probenentnahme (ggf. im Beisein des Amtstierarztes bzw. eines
Bienensachverstndigen! )
Diagnose
Therapie-/Sanierungsmanahmen (Plan erstellen, Ablauf und Erfolg dokumentieren)
Diskussion
Zusammenfassung Weiterbildung
nationale Bestrebungen in der EU sehr unterschiedlich
bislang keine Vereinheitlichung auf europischer Ebene
Probleme in Deutschland:
Die Umsetzung knnte an den komplizierten Entscheidungsstrukturen
der Landestierrztekammern scheitern
aktuell nur 7 FT Bienen in BRD (4 in Rente)
kaum zugelassene Weiterbildungssttten
kaum tierrztl. Weiterbildungskurse
Appell: auf Tierrztekammern und deren Delegierten einwirken und
den Bedarf / das Interesse deutlich machen!
2. Bienenkrankheiten - Tierseuchenrecht
Unterschiede zwischen den EU Lndern
klimatischen Gegebenheiten
Nutzungsformen (Anteil der Berufsimker bzw. der Hobbyimker)
Politik des Landes
Bienenkrankheiten in der EU
doi:10.1371/journal.pone.0079018.g003
Das Deutsche Bienen Monitoring System gibt seit einigen
Jahren eine gute bersicht ber die Prvalenz und die klinische
Relevanz bestimmter Erreger von Bienenkrankheiten sowie
verschiedener Kofaktoren (Giftstoffe).
AF EF Varroose Acar|ose
Nosemose
h. apis
Nosemose
h. ceranae
R0

r=25 |r 2012
() -
Frankre|ch

r=121 |r 2011


5 Ausorucre
|r 2011
()
|ta||en

r=19 |r 2012
- -
()
2 Ausorucre
|r 2012
3porer
erder|scr
0sterre|ch

r=159 |r 2012
? ? ? ?
8pan|en
/ -
r=281 |r 2009
r=0 |r 2011
()
Vorkommen und Relevanz verschiedener
Bienenkrankheiten in einigen EU-Lndern
Tierseuchenrecht in einigen EU Lndern
AF EF Varroatose Nosemose Trop||ae|aps
c|areae
Aeth|na
tum|da
0eutsch|and
Arze|gepl||crl
Vararrer
ja
8v, K, 0lP
re|r
-
re|r
8pl, 0lP
re|r
8pl, 0lP
ja
K, 0lP
ja
K, 0lP
Frankre|ch
Arze|gepl||crl
Vararrer
ja
8v, K
re|r
-
ja
Ke|re 8pl
ja, N. ap|s
8v, K, 0lP
ja
K, 0lP,
ja
K, 0lP
|ta||en
Arze|gepl||crl
Vararrer
ja
8v, K, 0lP
ja
8v, K, 0lP
ja
8pl, 0lP
ja, N. ap|s
8v, 0lP
ja
K
ja
K
0sterre|ch
Arze|gepl||crl
Vararrer
ja
8v, K, 0lP
re|r
-
ja
8pl oe|
Ep|der|e
re|r
-
ja
K, 0lP
ja
K, 0lP
8pan|en
Arze|gepl||crl
Vararrer
ja
-
re|r
-
ja
1x Jarr
oerarde|r
re|r
-
ja
K
ja
K
Bienenkrankheiten in der EU
Empfehlungen/Ziele der AG Bienen
Vereinheitlichung der tierseuchenrechtlichen Vorschriften
Vereinheitlichung der Bekmpfungsstrategien
Probleme
internationaler Handel mit Bienen (Kniginnen!) und Bienenprodukten
Gefahr der Ausbreitung von Tierseuchen
Sperrbezirke mit grenzberschreitenden Ausdehnungen
3. Medikamente
Prparat Wirkstoff Lnder
D NL AU I P F
API-Bioxal Oxalsure - - - + - -
APIGUARD Thymol + + + + + +
API Life Var Thymol u.a. + - - + - +
APISTAN Fluvalinate - + - + + +
APIVAR Amitraz - - - + + +
Bayvarol Flumethrin + - - - + -
Ecoxal Oxalsure - - - - - -
Perizin Coumafos + - - + - -
Thymovar 15g Thymol + + - - + +
Verschreibungspflichtig, zugelassen
Beispiele fr lnderspezifische Unterschiede
Varroatose: z.B. Oxalsure in Frankreich nicht zugelassen
AFB: in den USA sind Antibiotika zugelassen
Nosemose: Spanien dringt auf Behandlung mit Fumagillin
2. Untersttzung, Frderung und verstrkte Einbindung der Veterinre
in Forschung, Lehre und Therapiekonzepte
Forderungen der FVE AG Bienen
1. Verbesserung der Ausbildung in und nach dem Studium
3. Apis mellifera L. ist als lebensmittellieferndes Tier wie alle anderen
Spezies zu bercksichtigen
4. verstrkte Einbindung der Veterinre in die Produktion von
Bienenprodukten von der Bienenhaltung bis zum Konsumenten
(farm to fork)
5. Einheitliche Verschreibungspflicht fr alle Bienenmedikamente
6. Vereinheitlichung des Tierseuchenrechtes auf EU Ebene
4 Positionspapiere der Arbeitsgruppe Bienen
1 Broschre
Tierrztliche Fachpraxis fr Kleintiere und Kleintierchirurgie Dr. Friedrich Rcken
Christian-Albrecht-Str. 16, 24837 Schleswig



Therapeutischer Einsatz von medizinischem Honig bei Wunden von
Kleintieren

F. Rcken


Das seit Jahrtausenden bekannte Heilmittel Honig ist seit ca. zwanzig Jahren
wieder in den Fokus humanmedizinischen Interesses zur topischen Behandlung von
Wunden unterschiedlicher Natur gelangt. In letzter Zeit findet dieses Naturprodukt
auch zunehmende Aufmerksamkeit in der Tiermedizin.

Das wissenschaftliche und klinische Interesse richtet sich dabei in besonderem
Mae auf die antibakteriellen Eigenschaften von Honig, denn die Besorgnis
erregende Zunahme von Antibiotikaresistenzen und die hinterherhinkende
Entwicklung neuer Antibiotika machen neue antimikrobielle Strategien fr die
Wundbehandlung und pflege dringend erforderlich. Diese mssen folgende
Eigenschaften erfllen: sichere mikrobizide Wirkung gegen infrage kommende
Erreger mglichst ohne Potential fr Resistenzbildung sowie ausreichende objektive
und subjektive Vertrglichkeit ohne relevante Nebenwirkungen.

Medizinischer Honig erfllt offensichtlich nach bisherigen in vitro und klinischen
Studienergebnissen in der Humanmedizin diese Bedingungen fr die prventive und
therapeutische Anwendung in der Wundpflege, ohne und mit Wundinfektionen ohne
und mit (multi)resistenten Erregern gegen Antibiotika. Darber hinaus lassen
antidematse, antiinfllammtorische sowie angiogenese-, granulations- und
epithelisationsfrdernde Eigenschaften den Einsatz von medizinischem Honig in der
Wundbehandlung und-pflege vorteilhaft erscheinen.

Die antibakterielle Wirkung von Honig beruht auf mehreren sich gegenseitig
beeinflussenden Faktoren: dem hohen Zuckergehalt, der Produktion von
Wasserstoffperoxid, dem niedrigen pH, dem Gehalt an Methylglyoxal sowie dem
jngst identifizierten Peptid Bee defensin-1, wobei die Konzentrationen an
Wasserstoffperoxid, Methylgyloxal und Bee defensin-1 je nach Herkunft teilweise
erheblich schwanken knnen.

Seit der ersten Zulassung von Honig als standardisiertes Medizinprodukt zur
Wundpflege 1999 in Australien werden Wundauflagen mit medizinischem Honig in
zunehmendem Mae auch in Deutschland zur Wundpflege verwendet.

Es gibt mehrere medizinische Honige mit potenter antibakterieller Wirksamkeit, die
als Medizinprodukte fr die lokale Wundbehandlung zugelassen sind, beispielsweise
Revamil
R
(Holland), Medihoney
R
, MelMax
R
(Deutschland). Die Quelle des
hollandischen Revamil
R
ist sog. RS-Honig, der unter standardisierten Bedingungen in
Gewchshusern produziert wird. In standardisierter Form wird seit einigen Jahren
Manuka- bzw. Leptospermum-Honig aus Neuseeland bzw. Australien zur
medizinischen Anwendung auch in Deutschland vertrieben, als Medizinprodukte
beispielsweise Medihoney
R
Medizinischer Honig und Wundgel sowie als Gelverband
(Fa. Comvita, Vertrieb: ApoFit Arzneimittelvertrieb GmbH, Strullendorf) und als
Pflegeprodukte (z.B. Kruuse Manuka G Honig, Vertrieb Henry Schein Vet GmbH,
Hamburg). In letzter Zeit kamen weitere Honig enthaltende Wundauflagen als
Medizinprodukte auf den Markt, wie mit Buchweizenhonig imprgnierte
Wundverbnde (MelMax
R
, Fa. Dermagenics, Vertrieb: Beese, Barsbttel). Die
deklarierte Wirksamkeit kann sich aber nur auf den physikalischen, osmotischen
Effekt beziehen, da anders als bei Arzneimitteln kein pharmakologischer
Wirksamkeitsnachweis gefordert wird.

Anwendungsgebiete fr medizinischen Honig sind akute und chronische Wunden,
oberflchliche und tiefe, einschlielich nekrotische und/oder infizierte Wunden,
chirurgische Wunden, Verbrennungen/Verbrhungen, Wundpflege und
Wundantisepsis, auch bei durch Chemotherapie immunsupprimierten Patienten,
belriechende Wunden oder Tumoren, nekrotisierende Weichteilinfektionen sowie
allgemeine erste Hilfe.

Medizinischer Honig zur Wundbehandlung wird berwiegend sehr gut toleriert.
Selten knnen lokal transiente Schmerzen unmittelbar nach der Honigapplikation
auftreten, vermutlich aufgrund der osmotischen Aktivitt und des niedrigen pH.
Vereinzelt werden auerdem lokale Ekzeme im Wundnahbereich beobachtet.
Weitere Untersuchungen sind aber notwendig, ob diese Hautreaktionen auf den
Honig selbst oder auf die Wundabdeckungen zurckzufhren sind

Honig darf nicht bei Patienten mit Allergien gegen Bienenprodukte nicht
angewendet werden. Honige mit pflanzlichen Verdickungsmitteln (Medihoney
R

Wundgel) sollten nicht in tiefen Wunden oder Fistelgngen eingebracht werden, da
sich diese eventuell nur schwer entfernen lassen.

Fazit: Auch wenn es nach meinem Wissen in der (Kleintier)Tiermedizin bisher an
publizierten robusten klinischen Studien fehlt, seien es nun retrospektive oder
prospektive randomisierte Studien, die die Sicherheit und Wirksamkeit von
medizinischem Honig an einer greren Fallzahl in der Behandlung bzw. Pflege
unterschiedlicher Wundtypen untersucht haben, um dem Kliniker eine gesicherte
Grundlage fr sein medizinisches Handeln zu geben, so zeigen doch eigene
klinische Beobachtungen mit gassterilisierten Leptospermum-Honigen aus
Neuseeland bzw. Australien bisher sowohl eine sehr gute Vertrglichkeit als auch
zumindest keine die Wundheilung nachteilig beeinflussende Wirkung.

Weiterfhrende Literatur (mit ausfhrlichem Literaturverzeichnis):
Rcken, F (2013): Honig fr die moderne Wundbehandlung Renaissance eines
uralten Heilmittels. KLTP 58 (12): 617-628


Anschrift des Verfassers:
Dr. med. vet. Friedrich E. Rcken, Dipl. ECVS
Fachtierarzt fr Kleintiere und Chirurgie (Kleintiere)
Christian-Albrecht-Str. 16, D-24837 Schleswig
E-mail: Friedrich.Roecken@t-online.de

Aus dem Lnderinstitut fr Bienenkunde Hohen Neuendorf,
Molekulare Mikrobiologie und Bienenpathologie
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf


So funktioniert die moderne Erforschung von Bienenkrankheiten

E. Genersch

1. Einleitung
Bei Bienenkrankheiten handelt es sich ausschlielich um Infektionskrankheiten
oder Parasitosen. Die Erreger gehren zu den Viren, Bakterien, Pilzen und
Metazoen.
Bis vor ca. 20 Jahren wurden bei der Diagnose und Erforschung von
Bienenkrankheiten kaum molekulare Methoden angewendet, obwohl die Anfnge der
Molekularbiologie bereits in den 50er Jahren des letzten Jahrhunderts liegen und fr
die Diagnose und Erforschung von Krankheiten der Vertebraten (incl. des Menschen)
von Anfang an genutzt wurden.
Grnde fr diesen Dornrschenschlaf der Bienenkrankheiten gibt es viele. Beim
Erreger der Amerikanischen Faulbrut der Bienen (AFB), dem Bakterium
Paenibacillus larvae, fhrte z.B. eine fehlerhafte Klassifizierung dazu, dass eine
Standardmethode in der Diagnose von Infektionserregern, die Polymerase
Kettenreaktion (PCR), fr ungeeignet in der Labordiagnose der AFB erklrt wurde,
da mit ihr die pathogene, AFB-auslsenden Subspezies P. larvae larvae nicht von
der apathogenen Subspezies P. larvae pulvifaciens zu unterscheiden sei. Erst als wir
2006 die Reklassifizierung der Spezies P. larvae verffentlichten und zeigten, dass
es keine in der Pathogenitt unterschiedliche Subspezies gibt, sondern dass es
lediglich Unterschiede in der Virulenz innerhalb der Spezies P. larvae gibt, konnte die
PCR zur eindeutigen AFB-Diagnostik eingesetzt werden (1).
Die Diagnose von Virusinfektionen bei Bienen war ohne PCR auch nur sehr
eingeschrnkt mglich. Eine Anzucht von Bienenviren in Zellkultur ist bis heute nicht
mglich. Ein Virusnachweis ber spezifische Antikrper, die sich im Wirt bilden, ist
bei Bienen nicht durchfhrbar, da Bienen kein adaptives Immunsystem haben und
keine Antikrper bilden. Der Nachweis einzelner Bienenviren (ABPV) ber ELISA-
Techniken oder Agardiffusionsassays wurde zwar von einigen Laboren angeboten,
war aber in der Aussagekraft limitiert, da die Qualitt des Nachweises ber
polyklonale Antikrper von der schwankenden Qualitt der Antikrperprparationen
abhing und vor allem die Sensitivitt nicht ausreichte, um einzelne Bienen oder
Milben zu untersuchen. Die Etablierung eines ersten Protokolls zum PCR-Nachweis
von DWV in einzelnen Bienen bzw. Krperteilen von Bienen brachte auch in der
Bienenvirologie den entscheidenden Durchbruch (2). Inzwischen beschrnken sich
die molekularen Methoden in der Erforschung von Bienenkrankheiten lngst nicht
mehr nur auf PCR-Nachweise sondern sie dominieren mit ihrer Vielfalt die moderne
Erforschung von Bienenkrankheiten und fhrten in den letzten Jahren auch zu
entscheidenden Fortschritten.

2. Durchfhrung
Am Beispiel der AFB und P. larvae kann sehr gut nachvollzogen werden, wie sich
die moderne Erforschung von Bienenkrankheiten entwickelt hat und welche
Fortschritte mit den modernen Methoden erreicht werden knnen. Nach der
Reklassifizierung der Spezies im Jahr 2006 (1), bei wir auch schon moderne
Methoden angewendet hatten, konnte der PCR-Nachweis des Erregers endlich in die
Labordiagnostik der AFB eingefhrt werden. Eine molekulare Typisierung der
Erreger mit PCR-Protokollen, in denen repetitive Elemente in der bakteriellen DNA
mittels geeigneter Primer vervielfltigt werden, ermglichte uns die Identifizierung
von vier praxisrelevanten P. larvae Genotypen, P. larvae ERIC I IV.
Die Unterschiede zwischen den Genotypen sind ausreichend, um sie auch mittels
MALDI-ToF-Analyse unterscheiden zu knnen (3). Dadurch sollte der Einfhrung
der Differenzierung der Erreger als Bestandteil der Routinelabordiagnostik der AFB
nichts mehr im Weg stehen. Als Goldstandard der Genotypisierung gilt heutzutage
das multi locus sequence typing (MLST). Mit Hilfe einer von uns in Kooperation mit
englischen Kollegen entwickelten MLST-Analyse konnten die vier Genotypen in
insgesamt 21 Sequenztypen aufgespalten werden, wobei die Gruppierung in ERIC I,
ERIC II und ERIC III/IV erhalten blieb.
Um die Krankheitsentstehung der AFB und die molekularen Grundlagen der
Virulenzunterschiede zwischen Genotypen und Stmmen zu verstehen, haben wir
das Genom, das Proteom und das Metabolom von P. larvae untersucht.
Vergleichende Genomanalysen haben wir zunchst mit Hilfe der suppression
subtractive hybridization (SSH) durchgefhrt. Aus dem Vergleich verschieden
virulenter Stmme von P. larvae, die zu den verschiedenen Genotypen gehrten,
erhielten wir erste Informationen zu mglichen Virulenzfaktoren (4).
Mit den modernen Methoden der Hochdurchsatzsequenzierung, dem sog. next
generation sequencing (NGS), ergnzt durch die klassischen Sequenziertechniken
gelang es uns in Kooperation mit Kollegen aus Gttingen, die vollstndigen Genome
von je einem Vertreter von P. larvae ERIC I und ERIC II zu entschlsseln (5).
Ein in silico-Vergleich dieser beiden Genome besttigte und erweiterte die
Erkenntnisse, die die SSH-Analyse erbracht hatte: Die beiden weltweit fr AFB-
Ausbrche verantwortlichen Genotypen ERIC I und II haben vllig unterschiedliche
Strategien zur Ttung der Larven entwickelt (5).
Mit vergleichenden Proteomanalysen innerhalb der Spezies P. larvae konnten wir
die Unterschiede zwischen den Genotypen, diesmal allerdings auf der Ebene der
exprimierten Proteine, weiter belegen. Der bisher wichtigste Unterschied ist, dass nur
P. larvae ERIC II ein S-layer-Protein, SplA, exprimiert (6). S-layer-Proteine zhlen bei
pathogenen Bakterien hufig zu den Virulenzfaktoren, so dass eine funktionelle
Analyse dieses Proteins sinnvoll erschien.
ber eine vergleichende Analyse der metabolischen Eigenschaften von etlichen
Vertretern der Spezies P. larvae hatten wir schon frh gezeigt, dass sich die
Genotypen deutlich in ihren Stoffwechselfhigkeiten unterscheiden (7). So knnen
Vertreter von P. larvae ERIC II Glucose und Fructose verstoffwechseln, wogegen P.
larvae ERIC I nicht wachsen kann, wenn als einzige Kohlenstoffquelle D-Fructose
angeboten wird.
Bei der modernen Erforschung von pathogenen Bakterien wird die Rolle einzelner
Proteine in der Pathogenese oft analysiert ber den Vergleich von Wildtyp-Bakterien
mit davon abgeleiteten, gentechnisch hergestellten Mutanten, die das fragliche
Protein nur vermindert oder gar nicht mehr exprimieren knnen. Vor zwei Jahren ist
es uns gelungen, ein Protokoll fr die genetische Manipulation von P. larvae zu
entwickeln (8) und - in Zusammenarbeit mit sterreichischen Kollegen auch ein
Protokoll zur gezielten Ausschaltung der Expression einzelner Gene, z.B. des Gens
fr das S-layer-Protein (9). Damit war P. larvae und die AFB-Forschung endgltig im
Zeitalter der modernen Erforschung von Bienenkrankheiten angekommen.

3. Zusammenfassung
Nachdem die Molekularbiologie in der Erforschung von Bienenkrankheiten lange
ausgeblendet worden war und damit die Mglichkeiten, die die Methoden dieser
Disziplin bieten, ungenutzt blieben, sind wir inzwischen an einem Punkt, an dem
auch die Erforschung der durch Viren, Bakterien, Pilze und Milben verursachten
Bienenkrankheiten ohne molekulare Methoden nicht mehr denkbar ist.
Damit hat auch diese Forschungsrichtung den Sprung in die heutige Zeit
geschafft.

4. Literaturverzeichnis
1. GENERSCH, E., FORSGREN, E., PENTIKINEN, J., ASHIRALIEVA, A.,
RAUCH, S., KILWINSKI, J., FRIES, I. (2006): Reclassification of Paenibacillus
larvae subsp. pulvifaciens and Paenibacillus larvae subsp. larvae as Paenibacillus
larvae without subspecies differentiation. Int J Syst Evol Microbiol 56, 501-511.
2. GENERSCH, E. (2005): Development of an RT-PCR method for the rapid and
sensitive detection of Deformed wing virus, a pathogen of the honeybee (Apis
mellifera). Vet J 169, 121-123.
3. SCHFER, M.O., GENERSCH, E., FNFHAUS, A., POPPINGA, L.,
FORMELLA, N., BETTIN, B., KARGER, A. (2014): Rapid identification of
differentially virulent genotypes of Paenibacillus larvae, the causative organism of
American foulbrood of honey bees, by whole cell MALDI-TOF mass spectrometry.
Vet Microbiol 170, 291-297.
4. FNFHAUS, A., ASHIRALIEVA, A., BORRISS, R., GENERSCH, E. (2009): Use
of suppression subtractive hybridization to identify genetic differences between
differentially virulent genotypes of Paenibacillus larvae, the etiological agent of
American Foulbrood of honeybees. Environ Microbiol Rep 1, 240-250.
5. DJUKIC, M., BRZUSZKIEWICZ, E., FNFHAUS, A., VOSS, J., GOLLNOW, K.,
POPPINGA, L., LIESEGANG, H., GARCIA-GONZALEZ, E., GENERSCH, E.,
DANIEL, R. (2014): How to kill the honey bee larva: Genomic potential and
virulence mechanisms of Paenibacillus larvae. PLoS ONE 9, e90914.
6. FNFHAUS, A., GENERSCH, E. (2012): Proteome analysis of Paenibacillus
larvae reveals the existence of a putative S-layer protein. Environ Microbiol Rep 4,
194-202.
7. NEUENDORF, S., HEDTKE, K., TANGEN, G., GENERSCH, E. (2004):
Biochemical characterization of different genotypes of Paenibacillus larvae subsp.
larvae, a honey bee bacterial pathogen. Microbiology-SGM 150, 2381-2390.
8. POPPINGA, L., GENERSCH, E. (2012): Heterologous expression of green
fluorescent protein in P. larvae, the causative agent of American Foulbrood of
honey bees. J Appl Microbiol 112, 430-435.
9. POPPINGA, L., JANESCH, B., FNFHAUS, A., SEKOT, G., GARCIA-
GONZALEZ, E., HERTLEIN, G., HEDTKE, K., SCHFFER, C., GENERSCH, E.
(2012): Identification and functional analysis of the S-Layer protein SplA of
Paenibacillus larvae, the causative agent of American Foulbrood of honey bees.
PLoS Path 8, e1002716.


Anschrift der Verfasserin
PD Dr. E. Genersch, Lnderinstitut fr Bienenkunde
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf
elke.genersch@rz.hu-berlin.de

So funktioniert die moderne Erforschung
von Bienenkrankheiten
H. Aupperle
1
, L. Poppinga
2
, E. Genersch
2
1
LABOKLIN GmbH & Co KG, Bad Kissingen
2
Lnderinstitut fr Bienenkunde e.V. , Hohen Neuendorf
Gliederung
Pathologie-ATLAS Bienenkrankheiten
Mikro CT bei Bienen
Makro CT bei Bienen
Pathologie-Atlas der Bienenkrankheiten
PD Dr. Elke Genersch, Lnderinstitut fr Bienenkunde Hohen Neuendorf e.V.
Bereitstellung der gesunden, infizierten und kranken Bienen
PD Dr. Heike Aupperle, LABOKLIN GmbH & Co.KG
Histopathologische Befunderhebung, Diagnostik,
Fotodokumentation und Verfassung des Bildatlas
gefrdert durch:
Bundesministeriums fr Ernhrung, Landwirtschaft und Verbraucherschutz ber die
Verwendung des Zweckvermgens des Bundes bei der Landwirtschaftlichen Rentenbank
Teil I: Klinisch und tiologisch gesunde Bienenvlker des LIB
Etablierung histologischer Prparations- und Frbetechniken fr Bienen
Entwicklung und Normalstrukturen der Bienenorgane
Unterschiede zwischen Bienenknigin, Arbeiterbienen und Drohnen
Etablierung histopathologischer Methoden fr die Honigbiene
Hintergrund
Es gibt keine systematische histopathologische Grundlagenliteratur zur
Histopathologie der Bienen und ihrer Entwicklungsstadien.
Fragstellung
Wie prpariert man Insekten, speziell Bienen fr die
Routinehistopathologie?
Was kann man histopathologisch darstellen und welche Frbungen
eignen sich dazu?
Welchen Einfluss haben Autolyse und Fulnis?
Tiergut und Methoden
Arbeiterin Knigin Drohn
n=640 n=88 n=198
Eier 60 -- 3
Larven 290 37 75
Puppen 40 37 85
Imagos 250 14 35
Makroskopische Prparation
Messung Prparation
Makroskopische Prparation
Fotografische Dokumentation
Histologische Prparation
ggf. Chlordioxidbehandlung (Fa. Diagonal) 15 bis 40 Minuten
3h
5h
1h
Histologische Prparation
Einbettung
Schneiden, Superfrost Objekttrger
langsam Trocknen lassen ber Nacht im Wrmeschrank
Frben (HE, Azan, W&S)
Tabelle: Reaktionsmuster verschiedener Frbungen bei der Honigbiene
HE PAS W&S Azan Pikrosirius
Kerne blau blau schwarz hellrot braun
Muskulatur rot rosa gelb-braun rosa-rot gelb
Tracheen rosa blass-rosa schwarz blass-rosa rosa
Drsen
rosa-rot-
hellblau
rosa-violett gelb-braun rosa rot-braun
Peritroph.
Membran
hellblau violett hellbraun farblos violett
Endokutikula
rosa - schwarz rosa -
Histologische Frbungen
Azan Pikrosiriusrot W&S
PAS
Larven
zu verschiedenen Zeitpunkten der Entwicklung
Tiere entnommen
in 80% Ethanol gettet
3x mit A. bidest. gewaschen
toten Tiere zurck aufs Futter gesetzt
Inkubation bei 35C
Probenentnahme zu definierten Zeitpunkten
Autolyse?
Begasung mit CO2
Tten in 80% Ethanol
3x Waschen mit Bidest
Inkubation bei 32C
ganze Tiere und prparierte Drme zu
definierten Zeitpunkten p.m. in Formalin fixiert
Autolyse?
Larven und Imagos max. 6 Stunden post mortem fixieren
2h pm 6h pm 48h pm 24h pm
1h pm 9h pm
Die histologische Untersuchung von Bienen erfordert einige
Modifikationen der mikroskopischen Techniken.
Die Unterschiede in Aufbau und Funktion der Gewebe von
Honigbienen bedingen andere Frbemuster als bei Wirbeltieren.
Die Etablierung dieser routinemig einsetzbaren Techniken
bildet die Grundlage fr die systematische Untersuchung
physiologischer und pathologischer Befunde bei
Honigbienen.
Zusammenfassung Gliederung
Pathologie-ATLAS Bienenkrankheiten
Mikro CT bei Bienen
Makro CT bei Bienen
Mikro-CT
Ziel der Studie:
Darstellung der chitinhaltigen Strukturen der Biene
Darstellung von chemischer Schdigung des Chitins
Hintergrnde:
Chitin ist Bestandteil der wichtigen Barrieren (Kutikula und peritrophe Membran)
gegen diverse Noxen.
V.a. chemische Noxen z.B. Pestizide und Umweltfaktoren knnen diese Barriere
schdigen erhhte Anflligkeit fr Infektionen
Mikro-CT
Chitin:
kommt in drei kristallinen Formen vor
Kutikula der Bienen: beta-Kristallform
Methodisches Prinzip der Studie:
Bindung von Silberverbindung an denaturiertes nichtkristallines
Chitin und Hydrochloridsalze
Denaturierung von Chitin
Deazetylierung Verlust der kristallinen Chitinstruktur
hydrophile Schwellung Oxidation (Ozon,ROS)
Schweiger-peeling Prozess und Bildung von Hydrochloridsalzen
Mikro-CT
Vorversuch:
Rntgen der Bienen nach Silberkontrastierung
Mikro-CT
Gruppeneinteilung
1) Unreifes Chitin bei Biene kurz vor Schlupf weich aber vllig unbelastet
2) Reifes Chitin nach Ablsung der ueren Schicht + chemischer Behandlung
3) Reifes Chitin nach Ablsung der ueren Schicht
4) Reifes Chitin bei Flugbiene
Mikro-CT
Zusammenfassung:
Vernderungen der Chitinschicht der Bienen knnen mit
dieser Technik sichtbar gemacht werden.
v.a. die Kutikula der Augen zeigt die Unterschiede!
Mglichkeiten in der weiteren Forschung und Diagnostik
von toxischen Effekten, die die Chitinschicht und die
Kutikula schdigen
Gliederung
Pathologie-ATLAS Bienenkrankheiten
Mikro CT bei Bienen
Makro CT bei Bienen
Ziel der Studie:
Identifikation eines mglichen Ersatzes fr Zuckerwasser in Bienenmedikamenten
Tylose MH, Sorbitol und Glycerol werden getested hinsichtlich
Attraktivitt fr Apis mellifera
Applikationsmglichkeiten
Toxizitt bei individueller Applikation und bei Weitergabe in kleinen
Bienengruppen
Makro-CT
Hintergrnde:
Varroazide z.B. Oxalsure wirken besser, wenn sie mit Zuckerlsung versetzt werden
Weitergabe von Tier zu Tier
Aber: Problem der oralen Aufnahme und toxischer Effekte
Makro-CT
Tiergut
Apis mellifera carnica Volk mit ca. 3000 Individuen in Wintertraube ohne Brut
Substanzen
Tylose MH 0.5 %, 1 %, 3 %
Sorbitol 7 %
Glycerol 85 %
Makro-CT
1) Einzeltieruntersuchungen
Attraktivitt: 5 L Lsung angeboten
dermale Applikation: 5 L aufgetrufelt
Putzverhalten whrend 30 min?
Toxizitt nach 24 h, 48h, 72 h
1) Ergebnisse
keine Substanz war attraktiv fr Bienen
unterschieldiche Haftungseigenschaften
Bienen versuchen sich die Substanzen selber abzuputzen
nur einzelne Todesflle
fr weitere Experimente nur noch Tylose MH 1 % und Glycerol 85 %
Makro-CT
2) Was machen die Bienen mit der Substanz?
Gelber Farbstoff zur wssrigen Lsung (0,2 g/mL)
5 Tropfen (100 L) auf beide Seiten der Wabe auf die Bienentraube getrufelt
1 ml/100 Bienen
Kontrolle nach 24 h
Rckstnde auf den Bienen?
Rckstnde in den Waben?
Glycerol Tylose Zuckerwasser
2) Ergebnisse
Glycerol 85% am besten geeignet!
Makro-CT
3) Darstellbarkeit der Verteilung mittels CT?
Gleichmige Verteilung im Volk?
unbehandelte Bienen versus Unilux+Glycerol
3) Ergebnisse
Keine Toxizitt von Unilux
Gute Darstellbarkeit der Bienenverteilung mittels Unilux+Glycerol
Zusammenfassung Makro-CT
Studien 1) und 2)
Glycerol 85% bleibt feucht
haftet am lngsten
wird von Bienen zu Biene bertragen und verteilt
Tylose, Sorbitol perlen ab oder fallen nach Trocknung ab
Zuckerwasser bildet groe Kristalle
wird beim Selbstputzen und gegenseitigen Putzen entfernt
Gefahr der Indigestion
zB Oxalsure ist dann toxisch (Raderacrer ard larz 2009)
Studie 3)
Kombination aus Kontrastmittel und Glycerol im CT gut darstellbar
Ausblick
Glycerol als potentieller Trger fr Mediakmente gut geeignet
Verteilungsstudien mittels Kontrastmittel und CT sind mglich
kombinatorische toxische Effekte mit dem jeweiligen Medikament mssen
jedoch geklrt werden!
Fazit
Grenzen berschreiten!
es gibt auch in der Bienenforschung spannende Mglichkeiten,
z.B. die fr Wirbeltiere etablierten bildgebenden Verfahren auf die
Honigbiene zu bertragen!
tierrztliche Expertise und Kreativitt knnen neue Wege gehen und
Mglichkeiten erffnen..
Aus dem Lnderinstitut fr Bienenkunde Hohen Neuendorf,
Molekulare Mikrobiologie und Bienenpathologie
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf


Bsartige Faulbrut Aktuelle Erkenntnisse zur molekularen Pathogenese

E. Genersch, L. Poppinga


1. Einleitung
Die Amerikanische Faulbrut der Bienen (AFB) ist eine anzeigepflichtige
Tierseuche verursacht durch Paenibacillus larvae, ein Gram-positives,
stbchenfrmiges Bakterium (1).
Eine Genotypisierung vieler Erregerstmme verbunden mit Untersuchungen zur
Virulenz der einzelnen Stmme zeigte, dass es vier phnotypisch relevante
Genotypen gibt, die sich mittels repPCR unter Verwendung von ERIC-Primern
differenzieren lassen.
Die beiden Genotypen ERIC I und II sind weltweit verantwortlich fr AFB-
Ausbrche, whrend von ERIC III und IV nur wenige historische Isolate in
Stammsammlungen hinterlegt sind.
Der fr die Praxis entscheidende Unterschied zwischen den P. larvae Genotypen
ERIC I IV ist die unterschiedliche Virulenz gemessen als die Zeit, die das Pathogen
braucht, um alle infizierten Tiere zu tten (LT100). In Expositionsbioassays gelang es
ERIC II-IV, alle infizierten Larven innerhalb von 6-7 Tagen zu tten, wogegen Tiere,
die mit ERIC I infiziert waren, auch schon mal erst nach 12-13 Tagen starben (1,2).
Diese Unterschiede fhren dazu, dass in einer Gruppe von Tieren, die mit P.
larvae ERIC II infiziert wird, ca. 90% der Larven vor Erreichen der Metamorphose
(Zeitpunkt der Verdeckelung der Brutzelle im Volk) sterben, whrend bei P. larvae
ERIC I infizierten Tieren dieser Anteil nur bei ca. 60% liegt und daher ca. 40% erst
nach der Verdeckelung, das heit in der verdeckelten Zelle, sterben (3).
Diese Unterschiede sind vor allem relevant vor dem Hintergrund der sozialen
Immunabwehr der Bienen: Die Bienen, die die Brut versorgen, sind auch in der
Lage, erkrankte Tiere zu erkennen und diese im Rahmen des sog.
Hygieneverhaltens auszurumen. Diese soziale Immunabwehr funktioniert vor allem
in den Larvenstadien, wenn die Larven in den offenen Zellen liegen und tglich
gefttert und kontrolliert werden. Nach der Verdeckelung der Zelle und mit dem
Beginn der Puppenentwicklung ist es fr die Bienen wesentlich schwieriger,
erkrankte Tiere zu erkennen und zu entfernen. Es daher fr die Mglichkeit eines
Bienenvolks, eine AFB-Erkrankung ber die soziale Immunabwehr zu bekmpfen,
entscheidend, wie hoch der Anteil der Larven ist, die bereits vor der Verdeckelung
erkennbar erkrankt, moribund oder sogar tot sind. Diese Larven knnen nmlich sehr
effektiv entfernt werden, was auch den Erregerdruck im Volk reduziert (3). Je mehr
Larven bis zur Verdeckelung unauffllig bleiben und erst nach der Verdeckelung
sterben, desto mehr Sporen werden gebildet und desto schneller kann sich der
Erreger im Volk und zwischen Vlkern ausbreiten (3).

2. Durchfhrung
Nachdem wir diese Virulenzunterschiede zwischen den Genotypen in
Laborversuchen und in Minivlkern untersucht und im Detail beschrieben hatten,
wollten wir die molekularen Grundlagen der Pathogenese und der
Virulenzunterschiede ergrnden.
Erste Hinweise auf genomische Unterschiede zwischen den Genotypen hatte eine
vergleichende Genomanalyse mittels suppression subtractive hybridization (SSH)
ergeben, die bereits nahelegte, dass P.larvae ERIC I nicht aber P. larvae ERIC II
Toxine exprimiert und, dass sich die Genotypen auch in der Ausstattung mit
Genclustern fr die Produktion von Sekundrmetaboliten unterscheiden (4).
Dagegen hatte eine vergleichende Proteomanalyse ergeben, dass P. larvae
ERIC II nicht aber P. larvae ERIC I ein S-layer-Protein, SplA, exprimiert (5). Die
funktionelle Charakterisierung dieses Proteins erfolgte unter anderem ber Nutzung
von gentechnisch hergestellten P. larvae-Mutanten, die dieses Protein nicht mehr
herstellen knnen. Es zeigte sich, dass SplA ein wichtiger Virulenzfaktor von P.
larvae ERIC II ist und die Adhsion der Bakterien an das Darmepithel der Larven
vermittelt (6).
Auch die funktionelle Analyse der bei P. larvae ERIC I gefundenen Toxine Plx1
und Plx2 erfolgte ber Mutanten, die diese Toxine nicht mehr exprimieren konnten,
und ergab, dass diese Toxine wichtige Virulenzfaktoren von P. larvae ERIC I sind (7).
Die genomischen Unterschiede zwischen P. larvae ERIC I und II konnten mit der
Sequenzierung der vollstndigen Genome je eines ERIC I- und eines ERIC II-
Stammes besttigt und erweitert werden (8).
Diese Genomsequenzen erlaubten auch eine detaillierte Untersuchung der
Sekundrmetaboliten von P. larvae, deren nicht-ribosomale Produktion durch
Megaenzymkomplexe (Nicht-ribosomale Peptidsynthetasen (NRPS) und
Polyketidsyntasen (PKS)) gesteuert wird. Es ist uns krzlich gelungen, drei der vier
Gencluster zu entschlsseln und die Produkte ber massenspektrometrische
Analysen zu identifizieren (9).

3. Zusammenfassung
Obwohl die AFB mit eine der wichtigsten und verheerendsten Krankheiten der
Honigbiene ist, war bis vor kurzem erschreckend wenig ber die Pathogenese und
den Erreger bekannt. Das, was in den Lehrbchern ber P. larvae und die AFB
nachgelesen werden kann, erwies sich bei genauerem Hinsehen als eine Sammlung
von Anekdoten und plausiblen aber nicht berprften Halbwahrheiten. I
n den letzten 10 Jahren hat sich diese Situation vor allem durch unsere Arbeiten
gendert. Das Konzept und die Bedeutung der verschiedenen Genotypen von P.
larvae sind inzwischen weitgehend akzeptiert, auch weil sie zunehmend von
molekularen Daten, die die Unterschiede zwischen den Genotypen belegen und
erklren, untermauert werden.
Die Ergebnisse zur molekularen Pathogenese der AFB zeigen, dass die beiden
weltweit verbreiteten Genotypen P. larvae ERIC I und II zwar beide zum Tod der
infizierten Larven fhren, sich in dieser Hinsicht prinzipiell also nicht unterscheiden,
dass die Genotypen dieses Ziel aber nicht nur unterschiedlich schnell, sondern vor
allem ber unterschiedliche Strategien erreichen.
Diese Strategien noch besser zu verstehen, um dann auch eine bessere
Bekmpfung der AFB entwickeln zu knnen, ist unser Ziel.


4. Literaturverzeichnis
1. GENERSCH, E., FORSGREN, E., PENTIKINEN, J., ASHIRALIEVA, A.,
RAUCH, S., KILWINSKI, J., FRIES, I. (2006): Reclassification of Paenibacillus
larvae subsp. pulvifaciens and Paenibacillus larvae subsp. larvae as Paenibacillus
larvae without subspecies differentiation. Int J Syst Evol Microbiol 56, 501-511..
2. GENERSCH, E., ASHIRALIEVA, A., FRIES, I. (2005): Strain- and genotype-
specific differences in virulence of Paenibacillus larvae subsp. larvae, a bacterial
pathogen causing American Foulbrood disease in honey bees. Appl Environ
Microbiol 71, 7551-7555.
3. RAUCH, S., ASHIRALIEVA, A., HEDTKE, K., Genersch, E. (2005): Negative
correlation between individual-insect-level virulence and colony-level virulence of
Paenibacillus larvae, the etiological agent of American Foulbrood of honey bees.
Appl Environ Microbiol 75, 3344-3347.
4. FNFHAUS, A., ASHIRALIEVA, A., BORRISS, R., GENERSCH, E. (2009): Use
of suppression subtractive hybridization to identify genetic differences between
differentially virulent genotypes of Paenibacillus larvae, the etiological agent of
American Foulbrood of honeybees. Environ Microbiol Rep 1, 240-250.
5. FNFHAUS, A., GENERSCH, E. (2012): Proteome analysis of Paenibacillus
larvae reveals the existence of a putative S-layer protein. Environ Microbiol Rep 4,
194-202.
6. POPPINGA, L., JANESCH, B., FNFHAUS, A., SEKOT, G., GARCIA-
GONZALEZ, E., HERTLEIN, G., HEDTKE, K., SCHFFER, C., GENERSCH, E.
(2012): Identification and functional analysis of the S-Layer protein SplA of
Paenibacillus larvae, the causative agent of American Foulbrood of honey bees.
PLoS Path 8, e1002716.
7. FNFHAUS, A., POPPINGA, L., GENERSCH, E. (2013): Identification and
characterization of two novel toxins expressed by the lethal honey bee pathogen
Paenibacillus larvae, the causative agent of American Foulbrood. Environ
Microbiol 15, 2951-2965.
8. DJUKIC, M., BRZUSZKIEWICZ, E., FNFHAUS, A., VOSS, J., GOLLNOW, K.,
POPPINGA, L., LIESEGANG, H., GARCIA-GONZALEZ, E., GENERSCH, E.,
DANIEL, R. (2014): How to kill the honey bee larva: Genomic potential and
virulence mechanisms of Paenibacillus larvae. PLoS ONE 9, e90914.
9. GARCIA-GONZALEZ, E., MLLER, S., ENSLE, P., SSSMUTH, R.D.,
GENERSCH, E. (2014): Elucidation of sevadicin, a novel non-ribosomal peptide
secondary metabolite produced by the honey bee pathogenic bacterium
Paenibacillus larvae. Environ Microbiol, doi:10.1111/1462-2920.12417


Anschrift der Verfasserin
PD Dr. E. Genersch, Lnderinstitut fr Bienenkunde
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf
elke.genersch@rz.hu-berlin.de

Bsartige Faulbrut - morphologische
Befunde im genetischen Kontext
H. Aupperle
1
, L. Poppinga
2
, E. Genersch
2
1
LABOKLIN GmbH & Co KG, Bad Kissingen
2
Lnderinstitut fr Bienenkunde e.V. , Hohen Neuendorf
Einleitung
Paenibacillus larvae
Genotypen ERIC I-IV
Verschiedene Stmme
Virulenz (Larve) Virulenzfaktoren
ERIC I ttet langsam Plx1+2 (Toxine)
ERIC II ttet schnell SplA (Adhsion)
Ziel der Studie
Gibt es ein histomorphologisches Korrelat zu den klinischen und
molekularbiologischen Ergebnissen?
Tiergut
1. Studie
Untersuchung noch lebender Larven zu definierten Zeitpunkten post infectionem
2. Studie
Untersuchung der verstorbenen Larven zu definierten Zeitpunkten post infectionem
Infektionen
Kontrolle n=23
Autolyse n=128
ERIC I (Stamm 03-189, LC100 = 2200 cfu/ml Futter)
lebend n=27
tot n=23
ERIC II (Stamm 04-309, LC100 = 300 cfu/ml Futter)
lebend n=29
tot n=31
Verdnnung
der Sporen
kontaminiertes
Futter
Versuchsansatz:
24 Stunden alte Larven 10 Larven/Well,
24h bei 35C inkubiert
Infektion: 24h auf kontaminiertem Futter
Larven zurck auf frisches Futter
Vitalittsbestimmung: Atmungsaktivitt und
Oberflchenbeschaffenheit der Larven
Methoden
Sporen-
suspension
Weiterer Verlauf:
Alle weiteren 24 h werden die Larven
auf frisches Futter gesetzt, bis sie
defkieren (ca. Tag 7)
Weiterer Verlauf:
Ab Defkation wird die Larve auf
sauberen KimWipe Tchern weiterhin
bei 35C inkubiert, bis die
Metamorphose abgeschlossen ist.
Methoden
Identifikation toter Larven:
Braune Verfrbung
keine Atmungsaktivitt
Verlust der Oberflchenstabilitt
Identifikation AFB:
Larven auf CSA ausgestrichen
bei 37C inkubiert
DNA Isolation aus Bakterien
PCR: Identifikation von P. larvae
Methoden
Methoden
Formalin fixierung Paraffineinbettung Makroskopie
3 Tage p.i.
ERIC I und ERIC II
zahlreiche Bakterien im Darmlumen
PM wird zerstrt
4 Tage p.i.
ERIC I und ERIC II
Bakterien dicht am Mikrovillisaum,
PM aufgelst
Darmepithelzellen vakuolisiert und teils abgeschilfert
5 Tage p.i.
ERIC I
unverndert, wie Tag 4 p.i.
ERIC II
Desquamation von Epithelzellen
Destruktion des Darmepithels
Durchbrche in die Krperhhle
tote Larven, ERIC II, 7 Tage p.i.
ERIC II - tote Larven ab Tag 5 p.i.:
Destruktion der Darmwand
Verbreitung der Bakterien in der Krperhhle
keine Nekrose der Organe
Fixierung max. 24 h p.m.
noch keine fadenziehende Masse!
tote Larven, ERIC I, 10 Tage p.i.
ERIC I - tote Larven ab Tag 6 p.i.:
Krperhhle von Massen an Bakterien
destruiert und durchsetzt
Organe nekrotisch
Fixierung max. 24 h p.m.
noch keine fadenziehende Masse!
post mortem Befunde, Kontroll-Larven
Ergebnis
Darminhalt ist auch 48h p.m. noch von der PM umschlossen
keine Bakterienmassen, die im Sinne von Fulnis die Larve zersetzen!
Fragestellung
Unterscheidet sich das Bild, das man bei den durch AFB getteten Larven sieht,
von normaler Zersetzung/Autolyse?
Vorlufige Befunde bei toten Larven
ERIC I
(Virulenzfaktor Plx1+2 (Toxine) , ERIC I ttet langsam)
groe Erregermengen in toter Larve!
(toxische?) Nekrose der Organe
ERIC II
(Virulenzfaktor SplA (Adhsion), ERIC II ttet schnell)
aggressive Destruktion der Darmwand
mige Erregermengen in toter Larve
keine massive Nekrose der Organe
Vorlufige Befunde bei lebenden Larven
- Auflsung der PM
- Anlagerung der Bakterien an den Mikrovilisaum
- Vakuolisierung des Epithels
- Destruktion des Epithels v.a. ERIC II
- histopathologisch kein Einfluss der verschiedenen Virulenzfaktoren
(Toxine und Adhsionsfaktoren) bei den noch lebenden Larven
Zusammenfassung
Limitationen
- pro Tag bislang nur 2-4 Bienen/Tag
- nur zwei Erregerstmme ausgewertet
- vorlufige Ergebnisse!
Ausblick
Auswertung der anderen AFB-Stmme
mehr Bienen untersuchen
sonstige Effekte auf andere Organe z.B. Fettkrperzellen?
Detailanalysen der Histologie z.B. Mikrovilli, Epithelhhe?
Diskussion
Lnderinstitut fr Bienenkunde Hohen Neuendorf e.V.,
Molekulare Mikrobiologie und Bienenpathologie, Hohen Neuendorf;
*Laboklin GmbH & Co KG, Bad Kissingen


Nosema neue Einblicke in die Schdigungsmechanismen

L. Poppinga, S. Gisder, H. Aupperle*, E. Genersch


Die europische Honigbiene (Apis mellifera) wird durch eine Reihe von
Krankheitserregern befallen, die den Bestand der Bienenvlker in den letzten Jahren
weltweit stark reduziert haben. Bei diesen Parasiten und infektisen Pathogenen
handelt es sich unter anderem um die ektoparasitische Varroamilbe (Varroa
destructor), Viren, Bakterien und die obligat intrazellulren Mikrosporidien, die zu den
Pilzen gezhlt werden.
Die bienenpathogenen Mikrosporidien Nosema apis und N. ceranae infizieren die
Epithelzellen des Mitteldarms der erwachsenen Honigbiene. Dies kann zu
Durchfallerscheinungen und einer Schwchung der Vlker, der sog. Nosemose,
fhren.
N. ceranae ist laut Literatur virulenter als N. apis, da an einer durch N. ceranae
ausgelsten Nosemose das ganze Bienenvolk eingehen kann, was bei N. apis nicht
der Fall ist.
Epidemiologische Studien zeigen jedoch widersprchliche Ergebnisse zu etwaigen
Zusammenhngen von N. ceranae Infektionen und Vlkerverlusten:
Die beschriebenen Vlkerverluste stammen ausschlielich aus sdlichen Teilen
Europas, wohingegen aus nrdlichen Teilen des Kontinents Vlkerzusammenbrche
bisher nicht mit N. ceranae in Verbindung gebracht werden konnten.
Klimafaktoren (z.B. Temperatur) scheinen bei der Ausbreitung, Durchsetzung und
Virulenz des Erregers eine wichtige Rolle zu spielen (1).
Eine seit 10 Jahren im Nordosten Deutschlands laufenden Kohortenstudie (ca.
220 Bienenvlker) zum Vorkommen von Nosema spp. zeigt, dass sich N. ceranae in
dieser Region noch nicht durchsetzen konnte, obwohl durchaus zu beobachten ist,
dass N. apis in den letzten Jahren immer mehr von N. ceranae verdrngt wurde (1).
Eine grobe Auswertung unserer Daten in Bezug auf die
Durchschnittstemperaturen in den erfassten Wintern zeigte, dass auergewhnlich
milde Winter (z.B. Winter 2006/2007 und 2011/2012) mit einer deutlichen Zunahme
der N. ceranae-Belastung einhergehen: Auf ungewhnlich warme Winter folgten
jeweils Frhjahre mit ungewhnlich vielen Nosema-infizierten Vlkern. Ein hnlicher
Zusammenhang zeigte sich auch fr ungewhnlich warme Sommer (z.B. Sommer
2010), die regelmig mit einer hohen N. ceranae-Infektionsrate, die z.T. deutlich
ber der des Frhjahrs lag, einhergingen.
In Laborversuchen konnten wir demonstrieren, dass sowohl die Keimfhigkeit von
N. ceranae-Sporen als auch die intrazellulre Vermehrungsrate von N. ceranae sehr
temperaturabhngig sind. Die experimentell ermittelten Schwellentemperaturen
passten zu den Temperaturen aus den Klimadaten der jeweiligen Jahre. Erste
Berechnungen mit statistischen Modellen deuten sogar statistisch signifikante
Korrelationen an.
Innerhalb des Beobachtungszeitraums von nun inzwischen 10 Jahren gab es
keine statistisch belegbaren Korrelationen zwischen der Infektion eines Volks mit N.
apis oder N. ceranae und aufgetretenen Vlkerverlusten im Winter oder whrend der
Saison. Auch gab es berhaupt nur sehr selten klinische Ausbrche von Nosemose,
d.h. mehr als 95% der Infektionen verliefen symptomlos.
Infektionsversuche mit gekfigten Bienen und N. apis bzw. N. ceranae belegen
diese Daten. Bienen, die mit N. apis oder N. ceranae experimentell infiziert worden
waren, zeigten weder Unterschiede in der Mortalitt zwischen den beiden
Infektionsgruppen (p = 0,78) noch im Vergleich der Infektionsgruppen zu den
Kontrollgruppen (p = 0,61 fr N. apis vs. Kontrolle, p = 0,40 fr N. ceranae vs.
Kontrolle).
Das heit, weder N. apis noch N. ceranae Infektionen fhren zum Tod der
infizierten Bienen (Laborversuche) oder Bienenvlker (10-Jahres-Kohortenstudie).
Histopathologische Untersuchungen der Drme von Nosema spp.-infizierten
Honigbienen, welche sowohl aus den Laborversuchen als auch aus Feldproben
stammten, zeigten aber immer wieder massive Infektionen des Darmepithels, die
auch mit entsprechenden Gewebevernderungen einhergingen.
Noch ist ungeklrt, welche Mechanismen verhindern, dass diese ganz
offensichtlichen Gewebeschdigungen nicht zum Tod der infizierten Tiere fhren und
wie Bienen, deren Darmepithel fast nur noch Nosema spp. produziert, weiterleben
knnen.

Literaturverzeichnis
1. GISDER, S., HEDTKE,

K., MCKEL,

N., FRIELITZ,

M.C., LINDE,

A.,

GENERSCH, E. (2010): Five-year cohort study of Nosema spp. in Germany: Does
climate shape virulence and assertiveness of Nosema ceranae? Appl. Environ.
Microbiol. 76, 3032-3038.

Anschrift der Verfasserin
Dr. Lena Poppinga, Lnderinstitut fr Bienenkunde
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf
elke.genersch@rz.hu-berlin.de
Aus dem Lnderinstitut fr Bienenkunde Hohen Neuendorf,
Molekulare Mikrobiologie und Bienenpathologie
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf


Varroa und die Bienenviren

E. Genersch


1. Einleitung
Die ektoparasitische Milbe Varroa destructor wurde vor ca. 40 Jahren nach
Deutschland eingeschleppt und konnte sich danach innerhalb weniger Jahre in der
Bienenpopulation in West-Europa ausbreiten.
Die Schden, die als Folge der Varroa-Parasitierung in den Bienenvlkern
beobachtet wurden, wurden unter dem Begriff Varroose zusammengefasst. Es
handelt sich hierbei vor allem um eine erhhte Mortalitt der Brut im Puppenstadium,
um das Auftreten verkrppelter Bienen vor allem im Herbst, um eine generelle
Schwchung der Vlker, welche zu einem verstrkten Ausrubern dieser Vlker
durch starke Nachbarvlker fhrt und um eine verminderte Lebensdauer der
Winterbienen, welche zu erhhten Vlkerverlusten im Winter fhrt (1).
Relativ schnell wurde allerdings auch klar, dass etliche dieser Symptome mit
einem Virus zusammenhingen, dem sogenannten Deformed wing virus (DWV,
Flgeldeformationsvirus). Dieses Virus war berhaupt erst im Gefolge der
Varroamilbe in den Fokus der Bienenvirologen geraten und das Auftreten aufflliger
Krankheitssymptome als Folge einer Virusinfektion schien eng mit der Milbe
verbunden zu sein.
Trotzdem dauerte es noch etliche Jahre, bis sich die Erkenntnis durchsetzte, dass
es im Grunde das Virus DWV ist, das die meisten Symptome der Varroose
verursacht. Die Milbe alleine ist zwar auch unzweifelhaft hchst schdlich fr
befallene Bienenvlker, so richtig gefhrlich wird es aber erst, wenn die Milbe das
Virus DWV auf Puppen bertrgt. Diese sterben entweder noch whrend der
Puppenentwicklung oder es entwickeln sich verkrppelte, nicht lebensfhige Bienen,
die innerhalb von ca. 70 Stunden, nachdem sie aus der Zelle geschlpft sind,
sterben. Es kann auch sein, dass aus infizierten Puppen gesund aussehende Bienen
schlpfen, die allerdings oftmals eine DWV-Infektion des Gehirns und
Nervensystems aufweisen. Das heit, dass erst DWV aus der Milbe einen tdlichen
Parasiten macht.
hnliches gilt fr DWV: Diese Virus ist ohne die Varroamilbe harmlos und
verursacht keine sichtbaren Symptome (covert infection). Erst wenn das Virus durch
die Varroamilbe als biologischer Vektor auf Bienenpuppen bertragen wird, kommt
es zur Ausprgung einer symptomatische Infektion (overt infection), die zum Tod der
erkrankten Tiere fhren kann. Das heit, erst die Varroamilbe macht aus DWV ein
tdliches Virus.

2. Durchfhrung
Seit bald 10 Jahren beschftigen wir uns mit dem Zusammenspiel Varroa
destructor und Deformed wing virus. Mit Hilfe von Infektionsbioassays konnten wir
die Kochschen Postulate fr DWV und die Symptome Infektion des Gehirns und
verkrppelte Flgel nachweisen (2).
Es gengte, DWV in Puppen zu injizieren, um die Leitsymptome der Varroose an
Einzelbienen hervorzurufen. Damit war eindeutig gezeigt, dass das Virus die
Symptome verursacht, aber auch, dass der bertragungsweg eine Rolle spielt:
Das Virus musste injiziert werden, wodurch die bertragung des Virus whrend des
Saugakts der Milbe an der Puppe nachgeahmt wurde, um die Symptome
hervorzurufen.
Wir konnten auch zeigen, dass die bertragung von DWV durch die Varroamilbe
zwar notwendig aber nicht hinreichend fr die Ausbildung einer symptomatischen
Infektion ist.
Nur, wenn die Varroamilbe als biologischer Vektor fungierte, das heit, nur wenn
DWV vor der bertragung die Milbe infiziert hatte und sich in der Milbe vermehrt
hatte, traten symptomatische Infektionen auf.
Diente Varroa destructor lediglich als mechanischer Vektor, waren die
schlpfenden Bienen regelmig gesund (3).
In weiteren Infektionsversuchen mit erwachsenen Bienen untersuchten wir auch
die orale bertragung von DWV, wie sie z.B. stattfindet, wenn Bienen im Rahmen
des Hygieneverhaltens stark Varroa/DWV-geschdigte Puppen ausrumen und
dabei oftmals auffressen (4). Dieser bertragungsweg fhrte in unseren Versuchen
nur zu einer Infektion des Darmepithels (2).
Mit der Injektion von DWV in erwachsene Bienen haben wir die Virusbertragung
durch phoretische Milben, die auch die erwachsenen Bienen anstechen um
Hmolymphe zu saugen, nachgeahmt. Dieser bertragungsweg verursachte bei
ausreichend hohem Virustiter eine Infektion des Gehirns (2).
Lernversuche mit experimentell DWV-infizierten Bienen zeigten, dass diese
Bienen tatschlich kognitive Beeintrchtigungen haben knnen.
Es zeigte sich bei diesen Versuchen aber auch, dass Bienenvlker unterschiedlich
empfindlich auf DWV-Infektionen reagieren.

3. Zusammenfassung
Es ist inzwischen kaum noch strittig, dass die Varroaschden hauptschlich
DWV/Varroa-Schden sind und dadurch verursacht werden, dass DWV durch die
Varroamilbe als biologischer Vektor auf Puppen bertragen wird.
Da sich DWV in der Milbenpopulation immer weiter ausbreitet, steigt auch die
Gefhrdung der Bienen durch die Varroamilbe, da es immer weniger Milben gibt, die
nicht als biologischer Vektor fungieren.
Eine sorgfltige, kontrollierte und in ihrem Erfolg berprfte Behandlung der
Varroamilbe in jedem Volk wird daher immer wichtiger fr die Bienenhaltung.


4. Literaturverzeichnis
1. GENERSCH, E., VON DER OHE, W., KAATZ, H., SCHROEDER, A., OTTEN,
C., BCHLER, R., BERG, S., RITTER, W., MHLEN, W., GISDER, S., MEIXNER,
M., LIEBIG, G., ROSENKRANZ, P. (2010): The German Bee Monitoring Project: a
long-term study to understand periodically high winter losses of honey bee
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Anschrift der Verfasserin
PD Dr. E. Genersch, Lnderinstitut fr Bienenkunde
Friedrich-Engels-Str. 32, 16540 Hohen Neuendorf
elke.genersch@rz.hu-berlin.de