Universidad Industrial de Santander

Tecnologa en Regencia de Farmacia

PRACTICA DE LABORATORIO- PREINFORME
ASTRID CONTRERAS
ISABEL VARGAS
JESICA ROJAS
CAROLINA
BIOQUMICA FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS
OBJETIVOS
El desarrollo de este laboratorio permitir corroborar, con la prctica, lo
aprendizajes tericos logrados hasta el momento. En forma especfica, esta
experiencia le permitir:
1. Establecer la relacin entre la velocidad de reaccin y la
concentracin de la enzima, manteniendo constante los factores de
la actividad enzimtica.
2. Confrontar la fundamentacin sobre la cintica de la actividad
enzimtica con los resultados obtenidos en el laboratorio.
3. Identificar la funcin de la catalasa en los seres vivos como la
oxidoreductasa.
FUNDAMENTACIN TERICA
FACTORES QUE AFECTAN A LA ACTIVIDAD ENZIMTICA.
Diferentes factores ambientales pueden afectar a la actividad enzimtica.
Destacaremos dos: el pH y la temperatura.
EFECTO DEL pH.
La mayora de los enzimas presentan un pH ptimo para el cual su
actividad es mxima; por encima o por debajo de ese pH la actividad
disminuye bruscamente. Este efecto se debe a que, al ser los enzimas de
naturaleza proteica, al igual que otras protenas, se desnaturalizan y
pierden su actividad si el pH vara ms all de unos lmites estrechos De ah
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la conocida importancia biolgica de los sistemas tampn.

En la mayor parte de los casos el pH ptimo est prximo a la neutralidad,
en consonancia con el pH intracelular, pero existen enzimas con pH ptimo
muy diverso segn sea el pH del medio en el que habitualmente actan
(los enzimas proteolticos del jugo gstrico tienen pHs ptimos prximos a 2
ya que este es el pH de dicho jugo). Por ltimo existen algunos enzimas a
los que el pH no afecta en absoluto.
-EFECTO DE LA TEMPERATURA.
Al igual que ocurre con la mayora de las reacciones qumicas, la
velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas se incrementa con la
temperatura. La variacin de la actividad enzimtica con la temperatura
es diferente de unos enzimas a otros en funcin de la barrera de energa
de activacin de la reaccin catalizada. Sin embargo, a diferencia de lo
que ocurre en otras reacciones qumicas, en las reacciones catalizadas por
enzimas se produce un brusco descenso de la actividad cuando se
alcanza una temperatura crtica.
Este efecto no es ms que un reflejo de la desnaturalizacin trmica del
enzima cuando se alcanza dicha temperatura. Si representamos
grficamente la variacin de la actividad de los enzimas en funcin de la
temperatura da la impresin de que existe una temperatura "ptima"
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anloga al pH ptimo estudiado anteriormente;


hay que resaltar que esa aparente temperatura ptima no es ms que el
resultado de dos procesos contrapuestos: 1) el incremento habitual de la
velocidad de reaccin con la temperatura y 2) la desnaturalizacin
trmica del enzima.

MATERIALES UTILIZADOS
I pipeta
5 tubos de ensayo
1 bureta
3 vasos de precipitado
1 probeta pequea
Muestra de sangre (enzima catalasa)
cido sulfrico H2SO4 (5 ml por tubo)
Permanganato de potasio KMnO4 0.005 N
Perxido de Hidrgeno H2O2 al 0.24% pH 7
Agua destilada
Preparacin de la catalasa (se hace previamente)
La catalasa puede ser preparada de la sangre humana as:
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1. Colocar en un tubo de ensayo 25 ml de agua destilada y enfriarla
sobre hielo picado.
2. Obtener 0.02ml de sangre de la punta del dedo y para ello se hace
un pinchazo con lanceta estril.
3. Dejar caer 0.02 ml de la sangre sobre el agua destilada y lavar varias
veces la pipeta en el agua.
4. Mantener la solucin en agua helada para evitar el deterioro de la
enzima.
Procedimiento
1. Tomar 5 tubos de ensayo y numerarlos
2. A cada tubo agregar 3 ml de H2O2 al 0.24% y pH 7
3. A cada uno de los tubos agregar solucin enzimtica de catalasa
as:
Tubo 1 0.0ml
Tubo 2 0.1 ml
Tubo 3 0.2ml
Tubo 4 0.3ml
Tubo 5 0.4ml
Tubo 6 0.8ml
4. Dejar reposar por 5 min
5. Aadir 3 ml de H2SO4 2N a cada tubo de la reaccin enzimtica.
6. Proceder a titular el contenido de cada tubo agregando KnMO4
0.005N (hasta obtener un color rosado muy ligero y que
permanezca)
7. Calcular: el micro moles H2O2 destruidos en 5 min, la velocidad de
reaccin y la relacin con la concentracin enzimtica.
8. Graficar la velocidad de reaccin vrs concentracin de la enzima en
el papel milimetrado.

RESULTADOS



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Tubo Ml de
H2O2
MICROMOL
DE H2O2
ML DE
ENZIMA
ML DE
H2SO4
MICROMOLREMANEN MICROMOL
DESTRUIDO
EN 5MIN
VELOCIDAD
MMOL
DESTR.1MIN
1 0.0




2 0.1




3 0.2




4 0.4




5 0.8






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