1

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
ESCOLA DE ENGENHARIA
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA
Concentrao, Purificao e Fracionamento
das Protenas do Soro Lcteo atravs da
Tecnologia de Separao por Membranas
DISSERTAO DE MESTRADO

Camila Baldasso

Porto Alegre
2008
Concentrao, Purificao e Fracionamento
das Protenas do Soro Lcteo atravs da
Tecnologia de Separao por Membranas
Camila Baldasso
Dissertao de Mestrado apresentada como
requisito parcial para obteno do ttulo de
Mestre em Engenharia
rea de concentrao: Fenmenos de Transporte
e Operaes Unitrias
Orientadora: Prof Dra. Isabel Cristina Tessaro
Porto Alegre
2008


A Comisso Examinadora, abaixo assinada, aprova a Dissertao
Concentrao, Purificao e Fracionamento das Protenas do Soro Lcteo atravs
da Tecnologia de Separao por Membranas , elaborada por Camila Baldasso como
requisito parcial para obteno do Grau de Mestre em Engenharia.

Comisso Examinadora:

Prof. Dra. Lgia Damasceno Ferreira Marczak

Prof. Dr. Joo Henrique Corra Kanan

Prof. Dr. Plinho Francisco Hertz

iv

Agradecimentos
Professora Isabel Cristina Tessaro, pelo apoio, ateno, orientao,
confiana, pacincia, compreenso e acima de tudo amizade desenvolvida
durante estes dois anos de mestrado.
Ao Programa de Ps Graduao em Engenharia Qumica pela
oportunidade.
Capes pela oportunidade e apoio financeiro.
Eleg Alimentos pela doao do soro em p para execuo do trabalho.
Aos Professores: Lgia Damasceno Ferreira Marczak (Departamento de
Engenharia Qumica), Joo Henrique Corra Kanan (ICBS), Plinho Francisco
Hertz (ICTA), e aos laboratrios de Biotecnologia (BIOTEC) por
compartilharem seus conhecimentos e experincias cientficas.
Aos funcionrios e professores do Departamento de Engenharia Qumica,
especialmente Sirley e ao Fernando, pela pacincia, cooperao e agilidade
nos momentos necessrios.
bolsista Tatiana de Castro Barros pela colaborao, disponibilidade e
amizade.
Aos colegas pelo apoio e amizade.
E finalmente, agradeo aos pilares de minha vida: a Deus, minha famlia
e em especial, ao meu amor Carlos Eduardo, sem os quais a realizao deste
trabalho no seria possvel.
v

Resumo
O soro lcteo produzido pela indstria de laticnios durante a fabricao de queijos e
casena. Como matria-prima pode conferir tecnologia alimentar novas potencialidades
devido s propriedades funcionais e nutricionais das suas protenas. Porm, muitas
indstrias ainda consideram o soro como um efluente, o qual quando no devidamente
tratado gera um srio problema ambiental por causa da sua elevada carga orgnica. Estes
fatores tornam importante o desenvolvimento de alternativas para um adequado
aproveitamento do soro, porque ao mesmo tempo em que a transformao do soro em
produtos diversos diminui o problema ambiental, proporciona ganhos s indstrias de
laticnios, atravs do desenvolvimento de novos produtos. A tecnologia de separao por
membranas, especialmente a ultrafiltrao (UF), vem sendo empregada pelas indstrias
de laticnios para obter concentrados proticos a partir do soro, pois este processo permite
a concentrao seletiva das protenas em relao aos outros componentes de natureza no
protica. Alm disto, devido s propriedades especficas de cada protena do soro, tem
havido um crescente interesse no fracionamento destas protenas, porque muitas vezes
estas caractersticas no so realadas nos concentrados proticos devido a interaes
com outros componentes. A UF e a microfiltrao (MF) vm sendo testadas para se obter
fraes distintas das protenas do soro. Dentro deste contexto, utilizando processos de
separao por membranas, os objetivos deste trabalho so: (i) concentrar e purificar as
protenas do soro, (ii) a partir do concentrado protico obtido em (i) obter duas fraes,
uma rica em -lactoglobulina e a outra em - lactoalbumina (as protenas mais
abundantes no soro). A etapa de concentrao (i) foi realizada utilizando membranas de
UF com massa molar de corte de 10 kDa, o sistema foi operado no modo batelada
associado a diafiltrao (DF), permitindo, desta forma, uma maior remoo de sais e
lactose, conduzindo simultaneamente a uma maior concentrao de protenas no retido.
As condies de operao mantidas constantes foram: temperatura de 50 C, presso
transmembrana de 2 bar e vazo de alimentao de 840 L.h
-1
. Foram testadas quatro
estratgias variando o fator de concentrao volumtrico (FC); o volume e o nmero de
DF que deveriam ser realizadas para obteno do concentrado protico mais puro. Na
etapa de fracionamento (ii) o concentrado protico obtido em (i) foi tratado por diferentes
processos de separao com membranas a fim de fracionar as protenas majoritrias.
Nesta etapa membranas de UF e MF foram testadas: HN06 (20 kDa), RZ04 (70 kDa),
VCWP (0,1 m), MF-7002 (0,1 m), UF-C50 (50 kDa) e UF-C20 (20 kDa). Para realizar
a separao foram consideradas caractersticas como: massa molar e pH da soluo de
alimentao. A eficincia de cada processo foi avaliada pela determinao da
concentrao de protena, lactose, slidos totais, pH e condutividade eltrica das
correntes de permeado e de retido. Os resultados obtidos em (i) indicaram que o
processo adequado para obteno de concentrados proticos com diferentes graus de
pureza, podendo chegar a uma pureza protica de 70 % em base seca. Em (ii) os
resultados indicam que algum tipo de agregao e desnaturao pode ocorrer com as
protenas nas condies em que os experimentos foram realizados, pois as tentativas de
fracionamento no apresentaram resultados satisfatrios. Entre as membranas utilizadas
as que apresentaram os resultados mais promissores foram a MF-7002 e a VCWP, com
um fracionamento parcial das protenas majoritrias presentes no soro.

vi

Abstract
Whey is the liquid byproduct produced by the dairy industry during the
manufacture of cheeses and casein. As a raw material it can provide in the food
technology new potentialities due to the functional and nutritional properties of its
proteins. However, many industries still consider the whey as waste material, which if not
properly disposed creates a very severe environmental problem due to its high organic
load. These factors led to the development of important alternatives to the right utilization
of the whey, therefore solving the pollution problem and providing economical
advantages to the dairy industries. Membrane technology, especially ultrafiltration (UF),
has been used in the dairy industries to produce whey protein concentrates, because this
process allows the selective concentration of the proteins in relation to the other
components. Moreover, due to the specific properties of each whey protein, the interest in
fractionating these proteins has been increased, since their properties could not be
enhanced in the protein concentrates due to the interactions between the different
components. The UF and microfiltration (MF) have being tested to simultaneously
fractionate, purify and concentrate the whey thus improving its utilization. In this
context, by using membrane separation process, the objectives of this work are: (i) to
concentrate and to purify the whey proteins, (ii) from the protein concentrate obtained in
(i) to fractionate the main whey proteins, the -lactoglobulin and the -lactoalbumin. The
concentration step (i) was performed with UF membranes with a molecular weight cut-
off of 10 kDa, the system was operated in batch mode associate with discontinuous
diafiltration (DF), in order to remove salts and lactose simultaneously, leading to a whey
protein concentrate above 50% protein (dry basis). The experiments were carried out
with the following operating conditions: temperature of 50 C, transmembrane pressure
of 2 bar and cross flow rate of 840 L.h
-1
. Four strategies have been tested by changing the
volumetric concentration factor (FC) and the volume and the number of DF. In the
fractionation stage (ii) the protein concentrate obtained in (i) was processed with different
UF and MF membranes in order to separate the two main proteins present in the whey.
The following UF and MF membranes have been tested: HN06 (20 kDa), RZ04 (70 kDa),
VCWP (0,1 m), MF-7002 (0,1 m), UF-C50 (50 kDa) and UF-C20 (20 kDa). To
achieve the separation, characteristics such as molecular weight of the proteins and pH of
the solution had been considered. The efficiency of each process was evaluated by
determining the concentration of proteins and lactose, total solids contend, the pH and the
electrical conductivity for both streams, the permeate and the concentrate. The results
have shown that the UF process is adequate for production of protein concentrates with
different degrees of purity; in the best experimental strategy, the protein concentrate
obtained had 70 % protein, dry basis. In the protein fractionating stage the results indicate
that some kind of aggregation and denaturation is occurring with the proteins in the
operating conditions tested in this work, therefore the fractionation process did not show
satisfactory results until now. Amongst the membranes used the results showed that the
most promising were the MF-7002 and VCWP membranes, with a partial separation.
vii

Sumrio
Resumo ............................................................................................................... v
Abstract .............................................................................................................. vi
Sumrio ............................................................................................................. vii
Introduo ........................................................................................................... 1
Fundamentos Tericos e Reviso Bibliogrfica .............................................. 4
2.1 Soro Lcteo .............................................................................................................. 4
2.2 Produo do Soro .................................................................................................... 6
2.3 Principais Componentes do Soro Lcteo ................................................................. 8
2.3.1 Lactose ............................................................................................................ 9
2.3.2 Sais minerais e vitaminas ............................................................................... 9
2.3.3 Protenas ....................................................................................................... 10
2.4 Propriedades das Protenas do Soro ...................................................................... 16
2.4.1 Propriedades Nutricionais............................................................................. 16
2.4.2 Propriedades Funcionais ............................................................................... 18
2.5 Produtos Derivados do Soro de Queijo ................................................................. 19
2.5.1 Soro em p .................................................................................................... 20
2.5.2 Produtos Proticos do Soro (Concentrados e Isolados Proticos) ................ 23
2.5.2.1 Processos de Recuperao das Protenas do Soro ............................... 25
2.5.3 Fraes Purificadas das Protenas Majoritrias do Soro .............................. 26
2.5.3.1 Processos de Fracionamento das Protenas Majoritrias do Soro ....... 28
2.6 Aproveitamento do Soro Situao Mundial ....................................................... 29
2.7 Processos de separao por membranas ................................................................ 31
2.7.1 Membranas ................................................................................................... 31
2.7.2 Microfiltrao (MF) ...................................................................................... 33
2.7.3 Ultrafiltrao (UF) ........................................................................................ 34
2.7.4 Mdulos ........................................................................................................ 35
2.7.4.1 Mdulo Placa e Quadro ....................................................................... 35
2.7.4.2 Mdulo Fibra-oca ................................................................................ 35
2.7.4.3 Mdulo Espiral .................................................................................... 36
2.7.4.4 Mdulo Tubular ................................................................................... 36
2.8 Princpios dos PSM ............................................................................................... 37
2.8.1 Fluxo Permeado ............................................................................................ 37
2.8.2 Seletividade .................................................................................................. 38
2.8.3 Fator de Concentrao .................................................................................. 39
2.9 Problemas que afetam os PSM .............................................................................. 39
2.10 Aplicao dos PSM na Indstria Alimentcia ..................................................... 42
2.10.1 Aplicao dos PSM na Indstria de Laticnios ........................................... 46
Materiais e Mtodos ......................................................................................... 56
3.1 Preparao do soro................................................................................................. 56
3.2 Reagentes Analticos ............................................................................................. 57
3.3 Membranas ............................................................................................................ 59
3.4 Equipamento .......................................................................................................... 61

viii

3.5 Metodologia Experimental .................................................................................... 63
3.5.1 Compactao das Membranas e Medidas de Fluxo de gua ...................... 63
3.5.2 Concentrao e Purificao das Protenas do Soro ...................................... 64
3.5.3 Fracionamento das protenas do soro ........................................................... 67
3.6 Mtodos Analticos ............................................................................................... 70
3.6.1 Anlise de Extrato Seco Total - Mtodo Gravimtrico ............................... 70
3.6.2 Anlise de pH ............................................................................................... 70
3.6.3 Anlise de Condutividade Eltrica ............................................................... 70
3.6.4 Anlise de Lactose - Mtodo do cido Dinitrossaliclico - DNS ................ 71
3.6.5 Anlise de Acar - Mtodo Fenol Sulfrico .............................................. 71
3.6.6 Determinao da Protena Total - Mtodo de Lowry .................................. 71
3.6.7 Anlise de Protena - Eletroforese SDS PAGE ......................................... 72
3.6.8 Cromatografia gel ........................................................................................ 73
3.7 Limpeza do Sistema de Membranas ..................................................................... 74
Resultados e Discusso .................................................................................. 76
4.1 Concentrao e Purificao das protenas ............................................................. 76
4.1.1 Seleo da membrana .................................................................................. 76
4.1.2 Fluxos permeados para a gua e para o soro ................................................ 78
4.1.3 Comparao das estratgias para concentrao e purificao protica ....... 80
4.1.4 Resultados para a melhor estratgia de purificao protica ....................... 83
4.2 Fracionamento das Protenas Majoritrias ............................................................ 89
4.2.1 Membranas HN06, RZ04 e VCWP ............................................................. 90
4.2.2 Membrana MF - 7002 .................................................................................. 94
4.2.3 Membrana UF - C50 .................................................................................... 99
4.2.4 Membrana UF C20 ................................................................................. 104
4.2.5 Comentrios gerais sobre o fracionamento das protenas .......................... 107
4.3 Limpeza das membranas ..................................................................................... 111
Concluses e Sugestes para trabalhos futuros ........................................ 115
Referncias Bibliogrficas ............................................................................ 121
Apndice A ...................................................................................................... 131
A.1.1 Anlise de Extrato Seco Total - mtodo gravimtrico .............................. 131
A.1.2 Anlise de Lactose - Mtodo do cido dinitrossaliclico - DNS ............... 132
A.1.3 Anlise de acar - Mtodo fenol sulfrico .............................................. 133
A.1.4 Determinao da protena total - Mtodo de Lowry ................................. 133
A.1.5 Anlise de protena - Eletroforese SDS PAGE (Sodium Dodecyl Sulfate
Polyacrylamide Gel Electrophoresis of Proteins) ............................................... 134
A.1.6 Anlise de Protena Cromatografia Gel ................................................. 135
Apndice B ...................................................................................................... 137
B.1 Concentrao e Purificao de Protenas - tabelas ............................................. 137
B.2 Fracionamento das Protenas tabelas ............................................................... 146
B.3 Limpeza das membranas - tabelas ...................................................................... 163
Lista de figuras .................................................................................................. ix
Lista de tabelas ................................................................................................. xii
Lista de Abreviaturas e Smbolos .................................................................. xvi
ix

Lista de figuras
Figura 2.1: Fluxograma simplificado da produo de queijo. ............................................. 7
Figura 2.2: Variao da conformao da Lg em funo do pH . ................................... 12
Figura 2.3:Fluxograma do processamento do soro de queijo em p.. ............................... 21
Figura 2.4: Representao esquemtica do modo de operao tangencial . ...................... 37
Figura 3.1: Fotografias das membranas: espiral (A), tubular(B) e plana (C). ................... 60
Figura 3.2: Representao esquemtica simplificada da unidade piloto de UF. ............... 61
Figura 3.3:Fotografias dos tanques de alimentao (A) e (B). .......................................... 62
Figura 3.4: Fotografias das carcaas para mdulos de membrana. ................................... 62
Figura 3.5: Representao esquemtica do processo de UF. ............................................. 65
Figura 3.6: Representao esquemtica do processo de DF. ............................................. 66
Figura3.7: Resumo esquemtico das estratgias utilizadas para concentrao e purificao
das protenas do soro. .......................................................................................... 67
Figura 3.8: Representao esquemtica do processo de fracionamento desejado. ............ 67
Figura 3.9: Representao esquemtica das estratgias utilizadas para fracionamento das
protenas do concentrado protico obtido do soro. ................................................ 70
Figura 4.1: Fluxo de gua vs presso transmembrana, para as membranas UF-6001, UF-
6002 e UF-7001, a 30 C e vazo de alimentao mdia de 700 L.h
-1
. ................ 77
Figura 4.2: Reteno de dextrana vs presso transmembrana, para as membranas UF-
6001, UF-6002 e UF-7002, a 30 C e vazo de alimentao mdia de 700 L.h
-1
.
............................................................................................................................... 78
Figura 4.3: Fluxo de gua e de soro vs presso transmembrana para a membrana UF-
6001, T=50 C, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
. .................................. 79
Figura 4.4: Percentual protico no concentrado (base seca) vs etapas do processo para os
experimentos 1, 2, 3 e 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de
alimentao mdia de 840 L.h
-1
. ............................................................................ 80
Figura 4.5: Percentual de lactose no concentrado (base seca) vs etapas do processo para
os Experimentos 1, 2, 3 e 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de
-1
. ............................................................................ 81
Figura 4.6: Percentual de sais no concentrado (base seca) vs etapas do processo para
experimento 1, 2, 3 e 4, para a membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de
-1
. ............................................................................ 82
Figura 4.7: Fluxo permeado vs fator de concentrao volumtrico para Experimento 4 na
etapa de UF, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia
de 840 L.h
-1
. ........................................................................................................... 83
Figura 4.8: Fluxo permeado vs tempo para o Experimento 4, para a membrana UF-6001,
T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
. .............................. 84
Figura 4.9: Concentrao de slidos totais das amostras de permeado e concentrado vs
tempo para o Experimento 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de
-1
. ............................................................................ 85
Figura 4.10: Concentrao de protena das amostras de permeado e concentrado vs tempo
para o Experimento 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de
-1
. ............................................................................ 86
Figura 4.11: Concentrao de lactose para as amostras de permeado e concentrado vs
tempo para o Experimento 4, membrana UF-6001, T=50C, P=2 bar, vazo de
alimentao mdia de 840L.h
-1
. ............................................................................. 87
Figura 4.12: pH para as amostras de permeado e concentrado vs tempo para Experimento
4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840
L.h
-1
. ...................................................................................................................... 88

x

Figura 4.13: Condutividade eltrica das amostras de permeado e concentrado vs tempo
para Experimento 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de
-1
. .......................................................................... 88
Figura 4.14: Reteno de protena, lactose e slidos totais em funo do tempo para o
Experimento 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao
mdia de 840 L.h
-1
. ............................................................................................... 89
Figura 4.15: Fluxo permeado em funo do tempo para os experimentos de compactao
das membranas VCWP, HN06 e RZ04, vazo de alimentao 620 L.h
-1
, P =
3,25 bar, T = 25 C. ............................................................................................. 91
Figura 4.16: Fluxo permeado de gua (esquerda) e de fluxo permeado de concentrado
protico (direita) em funo da presso transmembrana para as membranas
VCWP, HN06 e RZ04, vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C e pH = 4,6
(VCWP e RZ04) e T = 25 C e pH = 6,3 (HN06). ............................................... 91
Figura 4.17: Fotografia dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para
as amostras de concentrado e permeado da membrana HN06, RZ04, VCWP (100
V e 30 mA).. .......................................................................................................... 93
Figura 4.18: Compactao da membrana MF-7002, vazo de alimentao 700 L.h
-1
, P =
3,25 bar, T = 25 C. ............................................................................................. 95
Figura 4.19: Fluxo de gua e de concentrado protico em funo da presso
transmembrana para a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6
(concentrado). ....................................................................................................... 95
Figura 4.20: Fluxo permeado de concentrado protico em funo do tempo para a
membrana MF-7002 , vazo de alimentao 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6 e P =
1,75 bar. ................................................................................................................ 96
Figura 4.21: Fotografia dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para
as amostras de concentrado e permeado da membrana MF-7002 (100 V e 30
mA)....................... ................................................................................................ 97
Figura 4.22: Fluxo permeado de gua versus tempo do experimento de compactao da
membrana UF-C50; vazo de alimentao 400 L.h
-1
, P = 3,75 bar, T = 25 C. 99
Figura 4.23: Fluxos permeados de gua (esquerda) e de concentrado protico (direita) em
dois pHs (4,6; 6,3) em funo da presso transmembrana para a membrana UF-
C50, vazo de alimentao 400 L.h
-1
, T = 40 e 25 C (concentrado). ................ 100
Figura 4.24: Fluxo permeado de concentrado protico em pHs e temperaturas diferentes
em funo do tempo para a membrana UF-C50, vazo de alimentao 400 L.h
-1
e
P =, 2,25 bar. .................................................................................................... 101
Figura 4.25: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para
as amostras de concentrado e permeado obtidos nos experimentos com a
membrana UF-C50 (100 V e 30 mA).. ............................................................... 103
Figura 4.26: Compactao da membrana UF-C20, vazo de alimentao 620 L.h
-1
, P =
3,75 bar, T = 25 C. ........................................................................................... 104
Figura 4.27: Fluxo permeado de gua (esquerda) e de concentrado protico e de soro
(direita) em funo da presso transmembrana para a membrana UF-C20, vazo
de alimentao 620 L.h
-1
, T = 25 C, pH = 6,3. .................................................. 105
Figura 4.28:Fluxo permeado de soro diludo e de concentrado protico em funo do
tempo para a membrana UF-C20; condies de operao: vazo de alimentao =
620 L.h
-1
, T = 25 C, pH = 6,3 e P = 2,25 bar. ................................................. 105
Figura 4.29:Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para
as amostras de concentrado e permeado da membrana UF-C20 (100 V e 30
mA)................... .................................................................................................. 107
xi

Figura 4.30: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina
Superose
TM
12, equilibrada com tampo fosfato de sdio 10 mM, pH 7,0; vazo
de eluio = 0,5 mL.min
-1
; amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm. .. 108
Figura 4.31: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina
Superose
TM
12, equilibrada com tampo acetato de sdio 10 mM, pH 4,6; vazo
-1
, amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm.. . 108
Figura 4.32:Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para a
amostra de soro analisada por cromatografia gel (100 V e 30 mA). ................... 109
Figura 4.33: Fluxos de gua aps realizao dos experimentos e em cada etapa da
limpeza qumica para a UF-6001, P = 2 bar e T = 50 C, vazo de alimentao
840 L.h
-1
.............................................................................................................. 112
limpeza qumica para a MF-7002, P = 1,75 bar e T = 40 C, vazo de
alimentao 700 L.h
-1
.......................................................................................... 113
limpeza qumica para a UF-C20, P = 2,25 bar e T = 25 C, vazo de alimentao
620 L.h
-1
. ............................................................................................................. 114
limpeza qumica para a UF-C50, P = 2,25 bar e T = 25 C, vazo de alimentao
400 L.h
-1
. ............................................................................................................. 114
Figura A.1: Esquema da preparao do sistema de eletroforese. ................................... 135
Figura B.1: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) do
experimento de duplicata para as amostras de concentrado e permeado da
membrana HN06, RZ04, VCWP (100 V e 30 A).. .............................................. 148
Figura B.2: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para
as amostras do expermimento de duplicata para o concentrado e o permeado da
membrana MF-7002 (100 V e 30 A).. ................................................................. 152
as amostras de concentrado e permeado da membrana UF-C50.. ....................... 155
as amostras de concentrado e permeado da membrana UF-C20............ ............. 159
Figura B.5: Curva de calibrao da coluna de cromatografia gel. .................................. 160
Figura B.6: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina
Superose
TM
12, equilibrada com tampo fosfato de sdio 10 mM, pH 7,0; vazo
-1
; amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm. .. 161
Figura B.7: Duplicata da cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com
a resina Superose
TM
12, equilibrada com tampo fosfato de sdio 10 mM, pH 7,0;
vazo de eluio = 0,5 mL.min
-1
; amostras monitoradas pela absorbncia a 280
nm. ....................................................................................................................... 161
Figura B.8: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina
Superose
TM
12, equilibrada com tampo acetato de sdio 10 mM, pH 4,6; vazo
-1
, amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm. .. 162
Figura B.9: Duplicata da cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com
a resina Superose
TM
12, equilibrada com tampo acetato de sdio 10 mM, pH 4,6;
vazo de eluio = 0,5 mL.min
-1
, amostras monitoradas pela absorbncia a 280
nm. ....................................................................................................................... 162

xii

Lista de tabelas
Tabela 2.1: Concentrao e tamanho dos componentes do leite, e distribuio mdia
destes componentes no coalho e no soro. ............................................................... 5
Tabela 2.2: Composio aproximada do soro doce. ........................................................... 8
Tabela 2.3: Quantidades mdias de vitaminas e minerais em 100 g de soro doce em p. . 9
Tabela 2.4: Propriedades e concentrao das protenas do soro. ...................................... 11
Tabela 2.5: Concentrao de aminocidos essenciais na protena de referncia, nas
protenas do soro, na -Lg e na -La. ................................................................... 16
Tabela 2.6: Valores que representam a qualidade nutricional do leite e das suas fraes
proticas. ............................................................................................................... 17
Tabela 2.7: Caracterizao dos principais produtos derivados do soro de queijo. ........... 22
Tabela2.8:Propriedades funcionais que os concentrados proticos conferem aos alimentos
............................................................................................................................... 24
Tabela 2.9:Composio de fraes industriais de -La e -Lg. ........................................ 26
Tabela 2.10:PSM relacionados pelo tamanho de poros das membranas e respectivas
presses de operao. ............................................................................................ 33
Tabela 3.1: Caractersticas fsico-qumicas do soro em p. .............................................. 57
Tabela 3.2: Caractersticas nutricionais do soro em 100 g. .............................................. 57
Tabela 3.3: Reagentes utilizados, frmula, grau de pureza e fornecedor. ........................ 58
Tabela 3.4: Caractersticas das membranas utilizadas nos experimentos. ........................ 60
Tabela 4.1: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de concentrado
e permeado das membranas VCWP, HN06 e RZ04. ............................................ 92
Tabela 4.2: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de concentrado
e permeado da membrana MF-7002. .................................................................... 97
Tabela4.3: Dados de intensidade relativa (em porcentagem) correspondendo a quantidade
de protena em cada banda eletrofortica das amostras de concentrado e
permeado da membrana MF-7002. ....................................................................... 98
Tabela 4.4: Dados de concentrao de protena, lactose e pH das amostras de permeado e
concentrado para o experimento com concentrado protico para a membrana UF-
C50, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
. ..................................... 102
concentrado para o experimento com concentrado protico e para o soro diludo
para a membrana UF-C20, T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 620
L.h
-1
. .................................................................................................................... 106
Tabela A.1: Componentes das Solues para preparao dos gis de eletroforese ........ 135
Tabela B.1: Dados de fluxo mdio de gua e reteno mdia de dextrana em funo da
P, para as membranas UF-6001, UF-6002 e UF-7001, a 30 C. ...................... 137
Tabela B.2: Dados de fluxo mdio de soro em funo da P, para a membrana UF-6001,
a 50 C e vazo de alimentao de 840 L.h
-1
. ..................................................... 137
Tabela B.3: Resumo dos dados mdios de concentrao, massa e percentual (*base seca)
de protena, lactose e sais para o concentrado dos Experimentos 1, 2, 3,e 4 em
funo da etapa do processo utilizando a membrana UF-6001, T= 50 C, P= 2
bar e vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
. ................................................. 138
Tabela B.4: Resumo dos dados mdios de concentrao, massa e percentual (*base seca)
de protena, lactose e sais para o concentrado dos Experimentos 2 e 4 em funo
da etapa do processo utilizando a membrana UF-6001, T= 50 C, P= 2 bar e
vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
(duplicatas dos experimentos 2 e 4). 139
Tabela B.5: Dados detalhados do Experimento 1, incluindo concentraes de slidos
totais, protena, lactose, condutividade eltrica, pH para as amostras de
xiii

concentrado e permeado monitoradas conforme o tempo e etapa dos processos de
concentrao e purificao do soro utilizando a membrana UF-6001, T= 50 C,
P= 2 bar e vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
. ....................................... 140
-1
. ....................................... 141
-1
. ....................................... 142
-1
. ....................................... 143
Tabela B.9: Dados detalhados da duplicata do Experimento 2, incluindo concentraes de
slidos totais, protena, lactose, condutividade eltrica, pH para as amostras de
-1
. ....................................... 144
Tabela B.10: Dados detalhados da duplicata do Experimento 4, incluindo concentraes
de slidos totais, protena, lactose, condutividade eltrica, pH para as amostras de
-1
. ....................................... 145
Tabela B.11: Dados de fluxo permeado de gua em funo do tempo para compactao
das membranas VCWP, HN06 e RZ04 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 25 C
, P =3,25 bar. ..................................................................................................... 146
Tabela B.12: Dados de fluxo permeado de gua para as membranas VCWP, HN06 e
RZ04 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C (VCWP e RZ04) e 25 C
(HN06). ................................................................................................................ 146
Tabela B.13: Duplicata dos dados de fluxo permeado de gua para as membranas VCWP,
HN06 e RZ04 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C (VCWP e RZ04) e 25
C (HN06). .......................................................................................................... 146
Tabela B.14: Dados de fluxo permeado de concentrado protico para as membranas
VCWP, HN06 e RZ04 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6
(VCWP e RZ04) e 25 C, pH = 6,3 (HN06). ...................................................... 147
Tabela B.15: Duplicata dos dados de fluxo permeado de concentrado protico para as
membranas VCWP, HN06 e RZ04 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C, pH
= 4,6 (VCWP e RZ04) e 25 C, pH = 6,3 (HN06). ............................................. 147
Tabela B.16: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de
concentrado e permeado das membranas VCWP, HN06 e RZ04 (duplicata). .... 147
da membrana MF-7002 vazo de alimentao 700 L.h
-1
, T = 25 C , P =3,25 bar.
............................................................................................................................. 148

xiv

Tabela B.18: Dados de fluxo permeado de gua e de concentrado protico em funo da
presso transmembrana para a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C,
pH = 4,6 (concentrado). ...................................................................................... 148
Tabela B.19: Duplicata dos dados de fluxo permeado de gua e de concentrado protico
em funo da presso transmembrana para a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-
1
, T = 40 C, pH = 4,6 (concentrado). ................................................................. 149
Tabela B.20: Dados de fluxo permeado de concentrado protico em funo do tempo para
a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6, P = 1,75 bar. .. 149
Tabela B.21: Dados de intensidade do modelo (pixel) e de intensidade relativa,
correspondendo a quantidade de protena em cada banda eletrofortica das
amostras de concentrado e permeado da membrana MF-7002. .......................... 150
Tabela B.22: Dados do experimento de fluxo permeado de concentrado protico em
funo do tempo para a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH =
4,6, P = 1,75 bar (duplicata). ............................................................................ 151
Tabela B.23: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de
concentrado e permeado da membrana MF-7002 (duplicata). ........................... 152
da membrana UF-C50 vazo de alimentao 400 L.h
-1
, T = 25 C , P =3,75 bar.
............................................................................................................................. 152
Tabela B.25: Dados de fluxo permeado de gua em funo da presso transmembrana
para a membrana UF-C50, T = 40 C, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
. ......... 153
Tabela B.26: Dados de fluxo permeado de concentrado em pH 6,3 em funo da presso
transmembrana para a membrana UF-C50, T =25 C, vazo de alimentao = 400
L.h
-1
. .................................................................................................................... 153
transmembrana para a membrana UF-C50, T = 40 C, vazo de alimentao = 400
L.h
-1
. .................................................................................................................... 153
a membrana UF-C50, pH= 6,3; T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao =
400 L.h
-1
. ............................................................................................................. 154
400 L.h
-1
(duplicata). ........................................................................................... 154
Tabela B.30: Dados de concentrao de protena, lactose e pH das amostras de permeado
e concentrado para o experimento com concentrado protico para a membrana
UF-C50, pH =6,3, T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 400 L.h
-1

(duplicata). .......................................................................................................... 154
400 L.h
-1
. ............................................................................................................. 154
400 L.h
-1
(duplicata). ........................................................................................... 155
UF-C50, pH =4,6, T = 40 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 400 L.h
-1

(duplicata). .......................................................................................................... 155
da membrana UF-C20 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 25 C , P =3,75 bar.
............................................................................................................................. 156
xv

Tabela B.35: Dados de fluxo permeado de gua em funo da presso transmembrana
-1
. ......... 156
Tabela B.36: Dados de fluxo permeado de concentrado protico em funo da presso
L.h
-1
. .................................................................................................................... 156
a membrana UF-C20, T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 620 L.h
-
1
. ........................................................................................................................... 157
a membrana UF-C20, T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
(duplicata). ........................................................................................................... 157
UF-C20, T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
(duplicata).
............................................................................................................................. 158
Tabela B.40: Dados de fluxo permeado de soro diludo em funo da presso
L.h
-1
. .................................................................................................................... 158
Tabela B.41: Dados de fluxo permeado de soro diludo em funo do tempo para a
membrana UF-C20, T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
.
............................................................................................................................. 158
Tabela B.42: Dados de fluxo permeado de soro diludo em funo do tempo para a
-1

(duplicata). ........................................................................................................... 159
e concentrado para o experimento com soro diludo para a membrana UF-C20, T
= 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
(duplicata). .............. 159
Tabela B.44: Dados para construo da curva de calibrao da coluna de cromatografia
gel. ....................................................................................................................... 160
Tabela B.45: Mdias dos fluxos de gua aps realizao dos experimentos e em cada
etapa da limpeza qumica para a UF-6001, P = 2 bar e T = 50 C, vazo de
alimentao 840 L.h
-1
. ......................................................................................... 163
etapa da limpeza qumica para a MF-7002, P = 1,75 bar e T = 40 C, vazo de
alimentao 700 L.h
-1
. ......................................................................................... 163
etapa da limpeza qumica para a UF-C50, P = 2,25 bar e T = 25 C, vazo de
alimentao 400 L.h
-1
. ......................................................................................... 163
alimentao 620 L.h
-1
. ......................................................................................... 163

xvi

Lista de Abreviaturas e Smbolos
PSM processo de separao por membranas
MF microfiltrao
UF ultrafiltrao
NF nanofiltrao
OI osmose inversa
ED eletrodilise
DF diafiltrao
IP isolado protico de soro
CP concentrado protico de soro
pI ponto isoltrico
-La -lactoalbumina
-Lg -lactoglobulina
Ig imunoglobulina
BSA albumina do soro bovino
NPN nitrognio no protico
MMC massa molar de corte (kDa)
FC fator de concentrao
ST slidos totais ( g. L
-1
)
DBO demanda bioqumica de oxignio (mg O
2
. L
-1
)
J
p
fluxo permeado (L. m
-2
. h
-1
)
p presso transmembrana
V volume (L)
A rea da membrana (m
2
)
P permeabilidade
t tempo (min)
R coeficiente de reteno (%)
C
P
concentrao de soluto no permeado ( g. L
-1
)
C
f
concentrao de soluto na alimentao ( g. L
-1
)
V
o
volume inicial da soluo (L)
V
R
volume do retido (L)
V
F
volume permeada da soluo (L)
dt
dV
variao do volume com tempo (L. h
-1
).

Captulo 1
Introduo

O soro lcteo a poro aquosa do leite que se separa do cogulo durante a fabricao
convencional de queijos ou da casena. um subproduto de importncia relevante na indstria
de laticnios, tendo em vista o volume produzido e sua composio nutricional; 10 litros de
leite produzem cerca de 1 quilograma de queijo e 9 litros de soro; neste volume encontra-se
cerca da metade dos slidos do leite, sobretudo lactose, protenas solveis e sais minerais.
Estima-se que a produo mundial de soro seja de 180 a 190 milhes de toneladas por
ano. Cerca da metade do soro produzido eliminado como efluente em sistemas hdricos ou
como adubo diretamente no solo, resultando numa perda importante de energia alimentar, e,
ao mesmo tempo, uma grande perda econmica. Quando incorporado s guas residuais dos
laticnios, sem tratamento, o soro constitui a principal fonte poluidora do meio ambiente
gerada por esse setor, a carga poluente, representada pela Demanda Bioqumica de Oxignio
(DBO) pode chegar a 60.000 mg.O
2
.L
-1
; este poder poluente cerca de 100 vezes maior que o
de um esgoto domstico. A outra metade do soro produzido no mundo processada em vrios
produtos alimentcios retornando, desta forma, como alimentao animal ou humana, ou ainda
para a produo de medicamentos e outros produtos.
A indstria de alimentos investe no desenvolvimento de produtos novos e inovadores
para satisfazer as necessidades dos consumidores. A conscientizao crescente dos
consumidores da importncia de alimentos ao mesmo tempo nutritivos e saudveis, motiva
pesquisadores a concentrar esforos nos estudos dos efeitos do soro e suas fraes. H cada
vez mais evidncias de que o soro contm uma variedade de compostos capazes de gerar
impacto favorvel sobre a sade. Alm do mais, a utilizao no racional do soro constitui
prtica antieconmica e at mesmo anti-social, devido carncia mundial de alimentos e
tambm pelo carter sazonal da produo de leite e oscilaes desta.
O desenvolvimento de novas tecnologias capazes de solucionar o problema do soro de
queijo pode trazer benefcios econmicos e ambientais, pois o soro considerado uma
2 INTRODUO

importante fonte de protena a ser utilizada para consumo. Assim, justificam-se estudos sobre
a possibilidade de utiliz-lo comercialmente.
As protenas do soro possuem valor nutricional elevado, conferido pela presena de
alto teor de aminocidos essenciais. O perfil destes aminocidos atende ou supera todas as
exigncias qualitativas e quantitativas estabelecidas pela FAO/WHO (Organizao das
Naes Unidas para a Agricultura e Alimentao/Organizao Mundial da Sade). Devido
quantidade de aminocidos essenciais e da elevada qualidade protica, as protenas do soro
podem aumentar o valor nutricional dos alimentos usados na dieta humana. Alm das
propriedades nutricionais, as protenas do soro possuem propriedades funcionais e
tecnolgicas versteis quando utilizadas como ingredientes em produtos alimentcios.
Industrialmente, o soro pode ser processado mediante diversas tcnicas, tais como a
filtrao, centrifugao, evaporao, secagem, ultrafiltrao, osmose inversa, tratamento
trmico, fermentao, desmineralizao e cristalizao, entre outras.
O mtodo convencional de concentrao de soro mais utilizado a evaporao
trmica. As principais desvantagens deste mtodo so o elevado consumo energtico e o
elevado teor de sais e acares no produto concentrado. Os fatores que determinam a
dificuldade no aproveitamento das protenas do soro de queijo so os elevados teores de gua,
de sais e de lactose.
A ultrafiltrao (UF) se apresenta como um mtodo alternativo bastante atraente, uma
vez que no faz uso do calor e no envolve mudana de fase, o que torna o processo de
concentrao mais econmico. A UF um Processo de Separao por Membranas (PSM)
tipicamente usada para reter macromolculas permitindo que molculas de baixa massa molar
atravessem a membrana. A UF vem sendo empregada na indstria de laticnios,
principalmente na recuperao de produtos como as protenas do soro de queijo e no seu
fracionamento. A UF permite uma variao na relao de concentrao entre os vrios
componentes do soro, devido reteno seletiva de protena e da permeao da lactose, sais
minerais, gua e compostos de baixa massa molar.
A frao protica do soro contm: -lactoglobulina (-Lg), -lactoalbumina (-La),
Albumina do soro bovino (BSA), Imunoglobulinas (Ig), Glicomacropeptdeos e alguns
polipeptdios resultantes da protelise das casenas por enzimas do leite. Devido s
propriedades especficas de cada uma das protenas do soro, tem havido um crescente
interesse no fracionamento das protenas. As caractersticas nutricionais, teraputicas e
funcionais nicas nestas protenas isoladas no se manifestam em concentrados proticos
devido a interaes entre componentes e a degradao durante o processamento. Aumentou,
portanto, o interesse comercial na produo de protenas de soro isoladas com propriedades
funcionais e biolgicas bem caracterizadas. Atualmente estuda-se o possvel papel da -La na
formulao de agentes antitumorais. Uma das funes in vivo da -Lg parece ser a fixao de
retinol e seu transporte ao intestino delgado. A -Lg tambm pode fixar cidos graxos. Alm
disso, a -Lg tem maior capacidade de gelificao que a -La. Por outro lado, o leite humano
no contm -Lg ( a protena do leite bovino que causa mais reaes alrgicas), e por esse
INTRODUO 3

motivo a -La mais adequada para a formulao de alimentos para lactentes, do que os
concentrados proticos do soro.
Dentro deste contexto, este trabalho visa aproveitar um subproduto da indstria de
laticnios, o soro lcteo, e transform-lo em produtos com alto valor nutritivo e funcional para
serem utilizados nas indstrias de alimentos e farmacutica. O trabalho divide-se em duas
etapas: na primeira etapa, o objetivo concentrar e purificar as protenas do soro de queijo
atravs da UF procurando aumentar ainda mais o valor agregado ao produto. A diafiltrao
usada com o intuito de eliminar do concentrado os componentes de baixa massa molar (sais e
lactose) o que propcia a purificao das protenas. Os experimentos foram realizados em uma
unidade piloto de UF, utilizando-se membranas polimricas com massa molar de corte de 10
kDa em mdulo em espiral. Estratgias modificando o fator de concentrao volumtrico e o
volume e o nmero de DF foram testadas, para se obter a melhor purificao protica.
A segunda etapa tem como objetivo fracionar as protenas em maior concentrao no
soro (-La e -Lg) processando o concentrado obtido na primeira etapa. Para isto, utilizou-se
a ultrafiltrao e a microfiltrao, associadas a propriedades como: massa molar e pH da
soluo de alimentao.
A partir dos produtos obtidos em cada uma das etapas, foi necessrio avaliar atravs
de mtodos analticos, as concentraes de protena, lactose, slidos totais, pH e
condutividade eltrica obtidas nas correntes de permeado e concentrado.

Captulo 2
Fundamentos Tericos e Reviso Bibliogrfica
Neste captulo apresentada uma reviso da literatura sobre as caractersticas do soro
lcteo, dando nfase para as protenas do soro, que contm elevado valor nutritivo e funcional
e, por isso, vm despertando o interesse das indstrias. Nesta etapa foi realizada uma reviso
dos trabalhos que tratam da possibilidade de concentrao, purificao e fracionamento das
protenas do soro. Tambm, so apresentados fundamentos tericos sobre os Processos de
Separao com Membranas (PSM), assim como os fatores que afetam a eficincia destes
processos. E finalmente, foi realizada uma reviso de trabalhos publicados nos ltimos anos
sobre a utilizao dos PSM nas indstrias alimentcias e especialmente sobre o
aproveitamento do soro lcteo atravs do uso de microfiltrao (MF) e ultrafiltrao (UF).
2.1 Soro Lcteo
O soro lcteo, tambm conhecido como soro de leite, soro de queijo ou lacto-soro,
um subproduto da indstria de laticnios, representa a poro aquosa do leite que se separa do
cogulo durante a fabricao convencional de queijos ou da casena. um lquido quase
opaco e de cor amarelo-esverdeado, que contm aproximadamente metade dos slidos do leite
(MAWSON, 1994; ZADOW, 1992; MILLER et al., 2000).
Apesar de ser considerado um subproduto, o soro possui alto valor nutricional,
conferido pela presena de protenas com elevado teor de aminocidos essenciais e ainda
propriedades funcionais relevantes (WIT, 1998; NEVES, 2001). Na mdia, 10 litros de leite
produzem cerca de 1 quilograma de queijo e 9 litros de soro e dependendo das tcnicas
utilizadas na produo, podem ser produzidos at doze litros de soro.
O leite fonte de lipdeos, carboidratos e protenas e apresenta estabilidade incomum
para um fluido dessa natureza. Constitui uma das principais fontes de protenas na
alimentao de animais jovens e de humanos de todas as idades. A composio do leite, a
concentrao e a massa molar dos componentes, e a distribuio destes componentes no soro
e no coalho podem ser observadas na Tabela 2.1.
FUNDAMENTOS TERICOS E REVISO BIBLIOGRFICA 5

Tabela 2.1: Concentrao e tamanho dos componentes do leite, e distribuio mdia destes
componentes no coalho e no soro.
Componente Leite (g.L
-1
) Massa molar (kDa) Coalho(%)
*
Soro (%)*
gua 87,1 < 0,1 6 94
Slidos totais 12,9 - 48 52
Casenas 2,6 20-300 96 4
Protenas do soro 0,7 4-160 4 96
Gordura 4,0 100-15.000 94 6
Lactose 4,6 0,35 6 94
Minerais 0,7 < 1 62 38
Outros 0,32 - - -
* percentual mssico
Fonte: adaptado de MILLER et al. (2000); BRANS et al. (2004).
Observa-se na Tabela 2.1 que, em mdia, 52 % dos slidos totais, 94 % da lactose, 96
% das protenas solveis e 38 % dos minerais do leite, permanecem no soro aps a fabricao
de queijo. O queijo por sua vez, retm casenas e gorduras, que so a base do coalho.
As protenas do leite compreendem duas fraes principais: as casenas (entre 70 e 80
% das protenas totais) e as protenas do soro, que esto em soluo. As casenas e as
protenas do soro diferem em aspectos fisiolgicos e biolgicos. As casenas formam com o
clcio partculas coloidais, chamadas micelas. As protenas do soro so de natureza globular,
mais solveis em gua que as casenas (SGARBIERI, 1996).
As protenas do soro se diferenciam da casena por serem insensveis s coagulaes
cidas assim como ao da quimosina/renina. Portanto, durante a coagulao das casenas
juntamente com a gordura (formao do coalho) as protenas do soro e boa parte da lactose
permanecem em soluo. O soro ainda contm minerais e traos de gordura, somando
aproximadamente 6 % de slidos totais (SGARBIERI, 1996).
O soro um subproduto de importncia relevante tendo em vista o volume produzido
e sua composio nutricional. Com o aumento na produo de queijo ao longo do mundo e o
mais rigoroso controle da disposio de efluentes, a produo do soro um dos problemas
mais crticos para a indstria leiteira.
O soro pode ter basicamente trs destinos principais: o primeiro o seu processamento
at produtos diversos; o segundo seria o seu uso na alimentao animal; finalmente, o terceiro
destino seria o seu tratamento para posterior despejo no esgoto (BRANDO, 1994; NEVES,
2001).
Segundo MARWANA & KENNEDY (1988), grande parte do soro de queijo produzido em
diversas partes do mundo ainda incorporada as guas residuais dos laticnios, sendo a
principal fonte poluidora do meio ambiente gerada por esse setor.
Um dos principais problemas do soro seu alto poder poluente devido alta
quantidade de substncias orgnicas, representadas principalmente pela lactose e pelas
protenas. A carga poluente, representada pela Demanda Bioqumica de Oxignio (DBO),
6 FUNDAMENTOS TERICOS E REVISO BIBLIOGRFICA

varia de 30.000 a 60.000 mgO
2
.L
-1
, dependendo do processo de fabricao de queijo
(BRANDO, 1994). Esta carga poluente cerca de 100 vezes maior que a de um esgoto
domstico. Uma fbrica com produo mdia de 10.000 L de soro por dia polui o equivalente
a uma populao de 5.000 habitantes. Quando descartado diretamente no solo compromete
sua estrutura fsico-qumica e diminui o rendimento da colheita (RICHARDS, 2002; PORTO et
al., 2005).
Em decorrncia dos problemas enfrentados pelas indstrias para efetuarem o
tratamento do soro como resduo industrial, adequando-o s exigncias dos rgos de
inspeo e sade pblica, teve incio na dcada de 60 testes de aproveitamento do soro de
queijo (KOSIKOWSKI, 1967).
Com o contnuo desenvolvimento de tecnologias e crescente responsabilidade
ambiental, por parte das indstrias, a imagem do soro est mudando rapidamente de efluente
para uma fonte valiosa de nutrientes.
Antes de ser considerado apenas mais um componente dos efluentes das indstrias de
laticnios, o soro pode e deve ser aproveitado como complemento na alimentao humana. A
utilizao no racional do soro constitui prtica anti-econmica e at mesmo anti-social,
devido carncia mundial de alimentos e tambm pelo carter sazonal da produo de leite e
oscilaes desta.
2.2 Produo do Soro
A fabricao de queijo um mtodo de transformao de componentes do leite em um
produto de fcil conservao, menor volume, alto valor nutritivo, sabor agradvel e boa
digestibilidade, porm neste processo no h converso de 100 % do leite em queijo. Seu
rendimento pode variar entre 8,5 a 20 % em funo da consistncia do queijo, produzindo
assim, alm do queijo, um derivado denominado de soro (GIROTO & PAWLOWSKY, 2001).
Na Figura 2.1 pode-se observar o fluxograma da produo de queijo. Em geral, a
produo de queijo iniciada com o tratamento trmico do leite para eliminar as bactrias
patognicas e as formas vegetativas de microrganismos prejudiciais. Este processo trmico
denominado de pasteurizao e ocorre em temperaturas entre 70 a 80 C durante 15 a 20
segundos. Em seguida ocorre a correo do ndice de gordura do leite e a adio de
ingredientes tais como: fermento ltico, coalho e cloreto de clcio. Como coagulantes podem
ser utilizados cidos e coalhos de origem animal, coagulantes vegetais e microbianos.
A etapa seguinte a coagulao do leite, atravs da precipitao das casenas. Quando
o cogulo se encontra com a consistncia desejada, cortado ou partido, para se proceder a
remoo do soro. Para acelerar o fenmeno de sinerese o processo envolve aquecimento e
agitao. Aps essa operao o queijo enformado, esta operao consiste em moldar a
massa (ou os pedaos de cogulo) mais ou menos aglomerada, em frmas; a seguir o queijo
prensado para remover o restante de soro e embalado.

Figura 2.1: Fluxograma simplificado da produo de queijo.
O soro proveniente das operaes de corte, agitao, aquecimento, enformagem e
prensagem da produo de queijo.
H dois tipos bsicos de soro fluido - o doce e o cido - que variam de acordo com o
tipo de queijo produzido.
O tipo predominante o soro doce, que derivado da manufatura de queijos
amadurecidos duros, semi-duros ou macios (Cheddar, Suo, Provolone, Mussarela, etc.). A
desestabilizao das micelas de casena realizada por via enzimtica em pH maior do que
5,6. O pH do soro doce ligeiramente menor do que o do leite fresco, varia de 5,9 a 6,6.
(ZADOW, 1992; MILLER et al., 2000).
Na produo de soro cido a precipitao das casenas realizada pela acidificao
no acima de pH 5,1. Na coagulao cida, o pH abaixa devido converso da lactose em
cido ltico por fermentao microbiana, ou por adio direta de cidos minerais ou
orgnicos. O soro resultante deste processo designado de soro cido com um pH de 4,3 a
5,1. O soro cido provm principalmente da fabricao de queijos tipo Cottage e da
fabricao de casena comercial. (MILLER et al., 2000; MIZUBUTI, 1994; BYLUND, 1995).
As diferenas na acidez e no contedo mineral, entre os dois tipos de soro, so as
responsveis pelas diferentes propriedades fsico-qumicas que apresentam (ZADOW, 1992).

O soro doce geralmente mais rico em lactose, enquanto que o soro cido exibe uma
maior concentrao em minerais. A composio protica de ambos os soros semelhante no
que se refere maioria das protenas. A concentrao de lactose no soro cido menor do que
no soro doce, devido ao processo de fermentao, pois uma frao de lactose transformada
em cido ltico, durante a formao do coalho. Por outro lado, o soro cido contm mais
clcio e fsforo que o soro doce, devido solubilizao do complexo clcio-fsforo, existente
nas micelas de casena, em pH cido (MIZUBUTI, 1994; WONG et al., 1999).
A maior parte dos produtos de soro derivada do soro doce (MILLER et al., 2000).
Segundo YADA (2004), aproximadamente 94 % do soro industrializado nos Estados Unidos
proveniente do soro doce.
Neste trabalho dado enfoque ao soro doce, j que o soro utilizado para realizao dos
experimentos proveniente do queijo tipo Mussarela.
2.3 Principais Componentes do Soro Lcteo
A composio mdia do soro doce apresentada na Tabela 2.2. Os slidos do soro so
essencialmente lactose, protenas e minerais.
Tabela 2.2: Composio aproximada do soro doce.
Componente Soro doce (%)*
gua 93-95
Slidos Totais (ST) 5,5-6,5
Protena 0,7-1,2
Gordura 0,04-0,05
Lactose 3,8-5,0
Cinzas 0,5-0,8
NPN 0,15-0,18
* percentual mssico
Fonte: adaptado de MILLER et al. (2000); BYLUND (1995); YADA (2004).

O contedo em gordura pode variar dependendo do tipo de leite usado e do processo
de fabricao de queijo (ZADOW, 1992). A frao de nitrognio no protico (NPN) inclui
alguns componentes de baixa massa molar como uria (30 % do NPN), amnia, cido rico,
creatinina, aminocidos e produtos de degradao enzimtica das casenas (PEREIRA, 2002).
Normalmente o soro apresenta as caractersticas mostradas na Tabela 2.2, contudo, a sua
composio apresenta variaes sazonais, e depende tambm da raa do rebanho, e varia com
o tipo de tratamento a que o leite submetido (aquecimento, centrifugao, homogeneizao).
Alm disso, o processo de fabricao de queijo ou casenas e o tratamento que o soro sofre
aps estar separado do coalho (pasteurizao, pr-concentrao e remoo de partculas de
casena) tambm influenciam nas suas caractersticas finais.
Devido a sua importncia nos processos de separao as caractersticas dos principais
componentes presentes sero estudados com maiores detalhes nas sees a seguir.

2.3.1 Lactose
A lactose ou acar do leite o carboidrato caracterstico do leite, um dissacardeo
formado de galactose e glicose, que no leite cru responsvel por 40 % do total de slidos, e
nos leites desengordurados corresponde a 54 % dos slidos totais. No soro o composto
slido em maior quantidade em torno de 70 % em base seca (MATTILA-SANDHOLM &
SAARELA, 2003).
A concentrao de lactose no leite e no soro de leite varia amplamente entre as
espcies. O contedo de lactose do leite bovino varia com a raa, fator de individualidade e
especialmente devido fase de lactao do animal (FOX & MCSWEENEY, 1998).
Este acar encontrado no leite de todos os mamferos, em diferentes teores e
responsvel por seu sabor levemente adocicado. essencialmente produzido por secrees
mamrias e sintetizado da glicose absorvida pelo sangue (FOX & MCSWEENEY, 1998).
2.3.2 Sais minerais e vitaminas
O soro portador de vitaminas e minerais. Vitaminas so substncias qumicas
orgnicas requeridas pelo organismo, mas que no podem ser sintetizadas pelo corpo (FOX &
MCSWEENEY, 1998).
O soro contm tambm a maioria das vitaminas presentes no leite (e solveis em
gua), como a vitamina B12, a vitamina B6, cido pantotnico, riboflavina, tiamina, vitamina
C, retinol (vitamina A). As quantidades destes compostos presentes no soro de queijo esto
apresentadas na Tabela 2.3 (LAGRANGE & DALLAS, 1997; MILLER et al., 2000).
Tabela 2.3: Quantidades mdias de vitaminas e minerais em 100 g de soro doce em p.
Constituinte Unidades Quantidade
Vitaminas
Vitamina A IU 44
Vitamina C mg 1,5
Vitamina E mg 0,03
Tiamina (B1) mg 0,5
Riboflavina (B2) mg 2,2
Piridoxina (B6) mg 0,6
Vitamina B12 mcg 2,4
cido pantotnico mg 5,6
Niacina mg 1,3
Minerais
Clcio mg 796
Fsforo mg 931
Sdio mg 1079
Potssio mg 2080
Magnsio mg 176
Zinco mg 1,97
Fonte: adaptado de MILLER et al. (2000).

Os sais de leite so principalmente fosfatos, citratos, cloretos, sulfatos, carbonatos,
bicarbonato de sdio, potssio, clcio e magnsio. So encontrados aproximadamente 20
outros elementos no leite em quantias menores, inclusive cobre, ferro, silcio, zinco e iodo.
Os elementos principais so de importncia para a nutrio, na preparao, processamento e
armazenamento de produtos de leite devido influncia na conformao e estabilidade das
protenas do leite (FOX & MCSWEENEY, 1998; BYLUND, 1995).
O soro e os concentrados de soro so primorosas fontes de clcio, magnsio e fsforo,
como pode ser observado na Tabela 2.3. Na indstria de alimentos ingredientes de soro
podem ser incorporados a produtos fortificados, aumentando, desta forma, o teor de nutrientes
minerais do produto final (MATTILA-SANDHOLM & SAARELA, 2003).
2.3.3 Protenas
As protenas so polmeros constitudos por monmeros denominados aminocidos;
cada um deles possui um grupo amina (NH
2
) e um grupo carboxila (COOH) unidos ao mesmo
tomo de carbono (SGARBIERI, 1996).
Uma molcula de protena consiste em uma ou mais cadeias de aminocidos
interligadas onde os aminocidos so organizados em uma ordem especfica. Uma molcula
de protena normalmente contm ao redor de 200 aminocidos unidos (BYLUND, 1995).
Quando a casena retirada do leite por algum mtodo de precipitao, em soluo
resta um grupo de protenas que so chamadas protenas do soro, protenas solveis, soro-
protenas ou no-casenas. A quantidade de protenas encontradas no soro varia de 0,7 a 1,2 %
da sua composio mdia e equivale cerca de 20 a 25 % do total de protenas encontradas no
leite (MIZUBUTI, 1994; FOX & MCSWEENEY, 1998).
A frao protica do soro contm um grupo de protenas globulares: -lactoglobulina
(-Lg), -lactoalbumina (-La), Albumina do soro bovino (BSA), Imunoglobulinas (Ig),
Lactoferrina, Lactoperoxidase, Glicomacropeptdeos, Proteose-peptonas, entre outras.
As protenas do soro em maior concentrao so a -Lg e -La, elas constituem de 70
a 80 % das protenas totais do soro (MATTILA-SANDHOLM & SAARELA, 2003).
A Tabela 2.4 apresenta as propriedades das protenas do soro, tais como: a massa
molar, ponto isoeltrico e as concentraes mdias no soro.


Tabela 2.4: Propriedades e concentrao das protenas do soro.
Protena Massa molar (kDa) Ponto isoeltrico Concentrao (g. L
-1
)
-Lg 18,3 5,2 2,0-4,0
-La 14,1 4,2 - 4,8 0,6-1,7
BSA 69,0 4,7 - 4,9 0,1-0,4
Ig 15,0 160,0 5,5 - 8,3 0,6-1,0
Proteose-Peptonas 4,1 80,0 3,3 - 3,7 1,4
Lactoferrina 78,0 9 0,1
Lactoperoxidase 89,0 9,5 0,02
Glicomacropeptdio 7,0 - 0,01
Fonte: adaptada de MILLER et al. (2000); ZYDNEY (1998).

Dentre todas as protenas presentes no soro, este trabalho visa recuperar e separar as
protenas em maior concentrao, isto , a -lactoglobulina e a -lactoalbumina.
-Lactoglobulina (-Lg)
A protena mais abundante no soro -lactoglobulina, que representa 10 % da
protena total do leite ou aproximadamente 50 % da protena do soro. Contm 162
aminocidos com uma massa molar de 18,362 kDa (YADA, 2004).
A -Lg tem diferentes variantes, sendo as principais a A e a B. A -Lg variante A
difere da variante B, em dois aminocidos: aspartato (posio 64) e valina (posio 118).
Estes aminocidos so substitudos na -Lg B, pela glicina e pela alanina. Ambas tm
resduos de cistenas (WIT, 1998; YADA, 2004). Segundo WONG et al. (1999) existem estudos
que destacam a presena de outras variantes genticas: C, D, E com diferentes mobilidades
eletroforticas.
-Lg produzida especificamente na glndula mamria. O leite de todo ruminante
contm -Lg enquanto que a maior parte do leite dos no ruminantes, por exemplo, o leite
humano, no possui (YADA, 2004).
A cadeia de -Lg possui vrios pontos de ligao para minerais, vitaminas
lipossolveis e lipdios. Estes pontos de ligao podem ser usados para incorporar compostos
lipoflicos desejveis como tocoferol e retinol (vitamina A). A -Lg tambm se liga ao clcio
e zinco (FOX & MCSWEENEY, 1998). Segundo YADA (2004) a molcula pode ligar-se a
lipdios cidos e no polares e acontece preferencialmente em meios alcalinos.
Foram especuladas funes biolgicas para a existncia da -Lg, mas nenhuma foi
aceita completamente. Alguns especulam que a ligao com a Vitamina A pode ter um papel
regulador na glndula mamria (YADA, 2004).
A -Lg possui na sua estrutura um grupo tiol livre, que lhe permite a associao a
outras protenas hidrofbicas, e duas pontes dissulfeto internas. A conformao da -Lg
depende do pH, como pode ser observado na Figura 2.2. A complexa associao-dissociao

da -Lg tem sido objeto de diversos estudos (YADA, 2004; WONG et al., 1999). Para valores
de pH compreendidos entre 5,20 (ponto isoeltrico) e 7,50 (faixa que compreende o pH do
leite e do soro) e temperatura ambiente, todas as variantes genticas investigadas de -Lg
existem principalmente como um dmero estvel de dois monmeros unidos por ligaes no
covalentes, com massa molar de 36,7 kDa. O dmero consiste em duas esferas com raios de
17,9 e uma distncia de centro a centro de 33,5 (WONG et al., 1999).

Figura 2.2: Variao da conformao da Lg em funo do pH (VISSER & JERUNINK, 1997 apud RODRIGUES,
2001).
O monmero de 18,3 kDa s existe em pHs inferiores a 3,0 ou acima de 8,0. Para
valores de pH inferiores a 3,5 as estruturas quaternrias dissociam-se reversivelmente em
monmeros devido foras eletrostticas repulsivas muito fortes. O dmero dissocia-se em
monmeros, com uma extenso de dissociao que ocorre conforme o pH vai baixando.
Existe, portanto um rpido equilbrio monmero-dmero. A constante de dissociao da
reao varia de acordo com a variante gentica, temperatura, pH e fora inica (WONG et al.,
1999).
Em meio alcalino a dissociao dos dmeros tambm acontece, existe um equilbrio
entre os pHs 6,9 e 8,8. Mudanas conformacionais reversveis acompanham esta dissociao
indicada por mudanas da rotao e disperso rotatria ptica (WONG et al., 1999).
Entre os pHs 3,7 e 5,1, em elevadas concentraes da protena, os dmeros de ambos
variantes A e B associam-se para formar octmeros com polimerizao mxima em pH 4,6. A
associao rpida, conforme indicam estudos da velocidade de sedimentao, e a constante
de equilbrio da reao diminui com o aumento da temperatura. Alm de acontecer a
octomerizao ocorre associao de monmero-dmero (WONG et al., 1999; YADA, 2004).
Uma dependncia do pH com a octomerizao mxima no pH 4,6 sugere que grupos
carboxila esto envolvidos, com uma possvel formao de pontes de hidrognio entre os
grupos carboxila protonados. conhecido que quatro grupos carboxila do monmero so
protonados neste pH (WONG et al., 1999; YADA, 2004).

A 0 C podem ser observados alguns intermedirios como tetrmeros e hexmeros
(WONG et al., 1999).
Apesar deste efeito de carga, a estrutura nativa da protena no alterada, mesmo a
temperaturas superiores a 80 C at pH 8,6. Em pH neutro e temperaturas at 70 C a
desnaturao reversvel. Para valores de pH superiores a 8,6, ocorre uma desnaturao
irreversvel da protena, devido alteraes nas propriedades fsico-qumicas da protena
(WIT, 1998).
A principal protena contendo grupos sulfdricos no leite a -Lg, normalmente este
grupo sulfdrico est enterrado dentro da molcula e no reativo. Na desnaturao por
calor a cerca de 75
C, por exemplo, o grupo -SH da -Lg exposto e reage com a casena (e

provavelmente com a -La) com efeitos muito significativos em algumas das propriedades
fsico-qumicas tecnologicamente importantes do leite, por exemplo estabilidade do leite ao
calor e coagulao atravs da renina (FOX & MCSWEENEY, 1998). Devido abundncia desta
protena no leite bovino, em uma grande extenso as propriedades dos concentrados proticos
de soro so, na verdade, as propriedades da -Lg (YADA, 2004).
-lactoalbumina (-La)
A segunda protena mais abundante no soro a -lactoalbumina que inclui
aproximadamente 2 % da protena total do leite e 15 a 25 % da protena total do soro. A
molcula consiste em 123 aminocidos e tem uma massa molar de 14,1 kDa, e contm quatro
ligaes dissulfeto e nenhum grupo fosfato (YADA, 2004).
O local de sntese da -La a glndula mamria, no leite humano representa 28 % do
teor total de protenas (YADA, 2004; FOX & MCSWEENEY, 1998).
A -La contm 8 grupos de cistena, todos envolvidos em pontes dissulfetos internas e
4 resduos de triptfano, com uma estrutura secundria ordenada e uma estrutura terciria
esfrica e compacta. A -La existe principalmente como uma molcula globular quase
esfrica, compacta em meio neutro e alcalino. Sugere-se tambm que ela tenha formato de
elipside com cerca de 2,2 x 4,4 x 5,7 nm a 2,5 x 3,7 x 3,2 nm (WONG et al., 1999).
Quando so comparadas as seqncias de -La e lisozima, so encontrados 40 % dos
resduos iguais, incluindo todos os resduos de cistena, outros 20 % dos resduos tm
estruturas semelhantes; estas informaes sugerem que as molculas so fortemente
relacionadas. Na realidade, o conhecimento da estrutura tridimensional de lisozima foi
utilizado para predizer a estrutura tridimensional da -La (YADA, 2004).
A -La encontrada em duas variantes genticas A e B. A variante B consiste em 123
resduos de aminocido com massa molar de 14,174 kDa e a variante A difere disto tendo
glicina em vez de arginina na posio 10. A -La necessria para a sntese de lactose devido
a sua interao com a enzima galactosetransferase, sem a -La, a glicose um substrato
extremamente pobre para esta enzima (WONG et al., 1999).

A -La uma metalo-protena com um tomo de clcio que lhe possibilita a ligao a
outras protenas, tendo por isso tendncia a polimerizar. Se, por exemplo, existir um grupo -
SH livre em outra molcula (como por exemplo na -Lg), este reage com uma das pontes S-S
presente na -La originando assim uma associao de protenas. Em valores de pH inferiores
a 5,0 ocorre uma mudana na estrutura da protena, uma vez que a acidificao do meio
conduz liberao do on Ca
2+
, a uma desnaturao reversvel e a um processo de agregao,
sendo este mais acentuado em temperaturas prximas dos 55 C (WIT, 1998).
A -La uma molcula que mais estvel ao calor na presena de clcio, de todas as
protenas do soro a mais estvel termicamente. A maioria das protenas aumenta a
sensibilidade ao calor na presena de clcio; isto ocorre provavelmente devido habilidade do
clcio de promover a formao de ligaes inicas intermoleculares com a maioria das
protenas, estas ligaes mantm as molculas prximas e aumentam a probabilidade de
agregao ao aquecer. Por outro lado, -La utiliza o clcio para formar laos inicos
intramoleculares que tendem a fazer a molcula resistente ao desdobramento trmico. Em
condies favorveis de concentraes de clcio e pH, a -La pode permanecer solvel depois
de exposio a 100
o
C (YADA, 2004).
A remoo do clcio da -La produz mudanas conformacionais profundas
equivalentes ao que ocorre na desnaturao cida. Em valores de pH neutro ou alcalino, e na
ausncia de grupos tiis em soluo, os ons OH
-
atacam as pontes S-S, levando formao de
dihidroalanina, de H
2
S e de cido cisteco, os quais so responsveis por acelerar o processo
de desnaturao da protena (WIT, 1998).
A -La interatua com lipdios no polares e cidos, tal como a -Lg, mas
preferencialmente em meios fortemente cidos (WIT, 1998).
Em valores de pH abaixo do ponto isoeltrico possvel que -La associe-se para
formar dmeros e trmeros. A associao rpida e reversvel, dependente da temperatura,
sendo, maior aos 10 C do que aos 25 C. A agregao tambm depende da fora inica e da
concentrao, com pequena agregao abaixo de 1 % de protena. Esta associao e agregao
atribuda a mudana conformacional da molcula da protena abaixo do pH 4, e ocorre
devido a unies hidrofbicas que o resultado da mudana de conformao e decrscimo da
barreira eletrosttica. Em valores de pH alcalinos, embora nenhuma associao observvel ou
agregao acontea, so observadas algumas mudanas na configurao, como a disperso
ptica rotatria em pH 11,5 (WONG et al., 1999).
Segundo SMITH (2003), nas condies inicas do leite a -La encontra-se como um
monmero.
Outras Protenas
Alm da -Lg e da -La outras protenas so encontradas no soro de leite. Estas
protenas so consideradas protenas minoritrias ou secundrias por estarem presentes em
quantidades pequenas.

A Albumina de Soro Bovina (BSA), isolada do leite, idntica molcula do soro
sanguneo. Assim, BSA no sintetizada na glndula mamria, mas est presente na
circulao sangnea. A protena tem uma massa molar de 69 kDa, no contm fsforo,
contm 17 dissulfetos e um grupo sulfdrico livre. As molculas tm locais de ligaes
especficos para molculas hidrofbicas, ligam-se a cidos graxos e outras molculas
pequenas como metais (YADA, 2004).
As Imunoglobulinas (Ig) incluem pelo menos 2 % da protena total do leite. H quatro
classes de Ig encontradas em leite, devido a sua micro-heteregoneidade so caracterizadas
pelos determinantes antignicos: IgG1, IgG2, IgA e IgM. Todas estas molculas tm uma
estrutura bsica semelhante compostas de cadeias leves com massas molares de 20 a 25 kDa e
duas cadeias pesadas, com massas molares de 50 a 70 kDa (YADA, 2004). O colostro, i.e., o
leite obtido imediatamente aps o parto pode conter at 100 vezes o nvel de Ig do leite do
meio da lactao. As Igs provm imunidade para os recm nascidos atravs do colostro; esta
proteo ocorre at que o animal seja adulto o bastante para sintetizar seus prprios
anticorpos.
A Lactoferrina a mais notvel protena que se liga ao ferro (2 mols de ferro / 1 mol
de protena), mas tambm pode ligar-se ao Cu
2+
, Mn
3+
, Co
3+
e Zn
2+
. A Lactoferrina
produzida na glndula mamria, mostrou-se til para inibir o crescimento de bactrias. A
atividade bacteriosttica da Lactoferrina est sendo estudada visando o uso potencial da
substncia como conservante natural. Ainda possui outras caractersticas, incluindo efeitos
antioxidantes e fortalecimento do sistema imunolgico (FOX & MCSWEENEY, 1998).
A Lactoperoxidase uma enzima que degrada o perxido de hidrognio, um
componente nutracutico do leite e produtos de soro com propriedades antibacterianas. A
Lactoperoxidase tem sido objeto de vrios estudos visando sua utilizao como meio de
controlar o desenvolvimento da acidez e mudanas de pH durante a estocagem de produtos de
leite resfriados (MATTILA-SANDHOLM & SAARELA, 2003, USDEC, 2002).
Existem ainda alguns polipeptdios (proteose-peptonas) resultantes da protelise das
casenas por enzimas do leite. Aproximadamente 1,1 % da protena do leite total consistem
em proteose-peptonas, esta frao pode ser dividida em trs componentes principais: PP3,
PP5 e PP8, e ainda so reconhecidos outros componentes secundrios (YADA, 2004).
Finalmente, possvel tambm encontrar no soro glicomacropeptdeos (apenas no soro
doce), protena biologicamente ativa que resulta da hidrlise da k-casena pela enzima
quimosina (ou renina) presente no soro. O glicomacropeptdeo altera a produo de pigmentos
pelos melancitos, atua como prebitico e tem atuao imunomoduladora (MATTILA-
SANDHOLM & SAARELA, 2003).

2.4 Propriedades das Protenas do Soro
As protenas do soro tm elevado valor funcional e nutricional no encontrado em
outras protenas utilizadas como aditivos na indstria alimentcia (a protena de soja e de ovo,
por exemplo) e por isso relevante abordar tais aspectos.
2.4.1 Propriedades Nutricionais
A protena um nutriente essencial ao organismo animal e humano e como tal, deve
estar presente na alimentao em quantidades adequadas. Alm do aspecto quantitativo deve-
se levar em conta o aspecto qualitativo das protenas (SGARBIERI, 1996).
Um fato importante a respeito da nutrio que oito (nove para crianas) dos 20
aminocidos no podem ser sintetizados pelo organismo humano, eles so chamados
aminocidos essenciais. Como eles so necessrios para manter o metabolismo, eles tm que
ser providos atravs da alimentao (BYLUND, 1995). Uma protena equilibrada, ou de alta
qualidade, contm aminocidos essenciais em propores correspondentes s necessidades
humanas (FENNEMA, 1989).
A Organizao das Naes Unidas para a Agricultura e Alimentao (FAO) e a
Organizao Mundial de Sade (WHO) especificaram a concentrao ideal de aminocidos
essenciais que devem ser includos na dieta humana (FENNEMA, 1989).
A Tabela 2.5 mostra a concentrao de aminocidos essenciais na protena de
referncia e nas protenas do soro. As protenas do soro de leite bovino so uma fonte
excelente de aminocidos essenciais: comparando a concentrao de referncia com a das
protenas do soro, pode-se observar que a frao protica do soro contm mais aminocidos
essenciais do que a protena de referncia.
Tabela 2.5: Concentrao de aminocidos essenciais na protena de referncia, nas protenas do
soro, na -Lg e na -La.
Aminocido Protena de
Referncia
Protena
do Soro
-Lg -La
Triptfano 1,0 2,1 2,2 6,6
Fenilalanina+tirosina 6,0 7,3 7,3 9,6
Leucina 7,0 11,1 15,3 11,6
Isoleucina 4,0 6,8 6,7 6,8
Tionina 4,0 8,0 5,4 5,5
Metionina+cistena 3,5 4,8 5,6 6,9
Lisina 5,5 9,9 11,7 11,4
Valina 5,0 6,8 5,9 4,8
Total 36,0 56,8 60,1 63,2
Fonte: adaptado de ZADOW (1992), MILLER et al. (2000)
O perfil de aminocidos essenciais das protenas do soro atende ou supera todas as
exigncias qualitativas e quantitativas estabelecidas pela FAO/WHO. O teor de aminocidos
essenciais de protenas do soro maior do que quaisquer outras fontes e correspondem a 60 %
do valor protico total do soro. As protenas do soro contm nveis elevados de leucina, lisina,

em comparao ao isolado protico de soja e a clara de ovo desidratada, ainda possuem uma
boa fonte de aminocidos contendo enxofre, tais como cistena e metionina (RICHARDS, 2002).
Observando a Tabela 2.5 tambm possvel verificar que, isoladamente, a -Lg e a -
La, tm um valor nutritivo superior ao da protena de referncia.
A qualidade, o valor ou o balano de uma protena alimentar alm de depender do tipo
e da quantidade de aminocidos essenciais, depende da sua digestibilidade; representa a
medida da eficcia com que pode ser utilizada pelo organismo. Portanto, alm da
concentrao de aminocidos, devemos ter em conta a sua disponibilidade biolgica. A
qualidade da protena pode ser expressa pelos seguintes parmetros: Valor Biolgico (VB) -
a poro da protena que retida e absorvida pelo organismo; Digestibilidade Protica (PD) -
a poro da protena do alimento absorvida
; Utilizao Protica Lquida (Net Protein

Utilization- NPU) - a porcentagem de nitrognio ou protena diettica que retida;
Coeficiente de Eficcia Protica (Protein Efficiency Ratio- PER) o ganho em massa obtido
por grama de protena consumida e PDCAAS (Protein Digestibility Corrected Amino Acid
Score) que a medida da digestibilidade e disponibilidade de aminocidos essenciais. Na
Tabela 2.6 so apresentados estes parmetros relacionados s protenas do soro, ao leite e
casena.
Tabela 2.6: Valores que representam a qualidade nutricional do leite e das suas fraes
proticas.
Componente BV* PD NPU PER PDCAAS
Leite 91 95 86 3,1 1,21
Protenas do Soro 104 100 92 3,6 1,15
Casenas 77 100 76 2,9 1,23
*BV da protena do ovo definido como 100.
Fonte: adaptado de MILLER et al.(2000); YADA (2004).

Como pode ser observado na Tabela 2.6, comparadas as do leite e casena, as
protenas do soro tm valores de BV, PD, NPU e PER maiores e valor de PDCAAS
comparvel, mostrando a elevada qualidade deste tipo de protena. Devido ao seu elevado
valor biolgico so necessrias apenas 14,5 gramas de protenas do soro por dia para
satisfazer as necessidades dirias proticas, em comparao com 17,4 gramas de protena do
ovo (LAGRANGE & DALLAS, 1997).
Assim, devido quantidade de aminocidos essenciais e da elevada qualidade
protica, as protenas do soro podem aumentar o valor nutricional dos alimentos usados na
dieta humana. Muitas protenas do soro so associadas a funes imunes ou digestivas. Alm
disso, o soro de leite uma fonte natural de Ig e de BSA e, como tal oferece proteo contra
infeces, pois estimula a produo de linfcitos. Protenas do soro secundrias como a
Lactoferrina e a Lactoperoxidase so consideradas protenas antimicrobianas (YADA, 2004).
Recentemente, tm sido atribudas s protenas do soro propriedades funcionais
fisiolgicas, capazes de produzir um importante controle na modulao do metabolismo e nos

mecanismos de defesa dos organismos animal e humano (SGARBIERI & PACHECO, 1999;
MATTILA-SANDHOLM & SAARELA,2003).
Ainda, existem estudos sobre o possvel papel da -La na formulao de agentes
antitumorais. Uma das funes in vivo da -Lg parece ser a fixao de retinol e seu transporte
ao intestino delgado. A -Lg e o BSA tambm podem fixar cidos graxos (MATTILA-
SANDHOLM & SAARELA,2003).
2.4.2 Propriedades Funcionais
Alm das propriedades nutricionais, as protenas do soro do leite so conhecidas pela
versatilidade de suas propriedades funcionais tecnolgicas como ingredientes em produtos
alimentcios.
As propriedades funcionais das protenas do soro so as propriedades fsico-qumicas,
que contribuem para obter uma determinada caracterstica no produto alimentar final em que
so inseridas (SGARBIERI, 1996).
As protenas do soro tm propriedades fsicas e funcionais no seu estado nativo e aps
tratamento fsico, qumico ou enzimtico (absoro de gua, solubilidade, emulsificao entre
outras), devido s vrias estruturas conformacionais que possuem e/ou adquirem. So
molculas estruturalmente ordenadas e qualquer alterao nessa conformao leva
desnaturao. As principais causas so: calor, mudanas de pH, radiao ultravioleta,
concentrao salina, luz ou ao mecnica. A desnaturao causa uma modificao da
conformao globular ou pregueada das protenas para a forma linear, causando, assim, um
desenrolamento da cadeia peptdica. O resultado a formao de novos enlaces entre
molculas, que tornam as protenas quimicamente mais reativas (SGARBIERI, 1996; BYLUND,
1995).
Depois de uma desnaturao fraca, as protenas s vezes podem voltar ao estado
original, com restaurao das suas propriedades originais. Em muitos casos, porm, a
desnaturao irreversvel (BYLUND, 1995).
O fenmeno da desnaturao no implica necessariamente diminuio da
digestibilidade das protenas nem diminuio do seu valor biolgico, porque a desnaturao
promove a exposio de resduos de aminocidos essenciais, anteriormente protegidos da
ao gstrica. Atualmente sustenta-se a hiptese de melhor digestibilidade da protena
desnaturada (PEREIRA, 2002; SGARBIERI, 1996; BYLUND, 1995).
Descrevem-se a seguir outras propriedades funcionais importantes das protenas do
soro (ZADOW, 1992; HUFFMAN, 1996; YADA, 2004).
- Solubilidade as protenas do soro tm uma elevada solubilidade numa grande gama
de valores de pH, desde que no tenham sido termicamente desnaturadas. A elevada

solubilidade destas protenas a valores de pH cido importante na sua aplicao em bebidas,
pois permitem um acrscimo de viscosidade e turbidez.
- Adsoro de gua e viscosidade quando comparadas com outras protenas, as do
soro tm uma viscosidade baixa, o que permite a sua incorporao na produo de produtos
dietticos. As protenas concentradas do soro so geralmente muito solveis e, portanto no
tm grande capacidade de adsorver gua na sua forma nativa. O tratamento trmico causa
desnaturao aumentando a sua capacidade de reteno de gua, bem como a sua viscosidade.
Assim, as aplicaes de produtos proticos do soro como retentores de gua e espessantes,
restringem-se aos alimentos que recebam tratamentos trmicos, como, por exemplo, produtos
de carne, sopas, bolos, entre outros.
- Gelificao sob condies apropriadas de aquecimento, as protenas concentradas
do soro formam gis de uma forma irreversvel, aumentando a capacidade de reter gua e/ou
outras molculas. Podem ser aplicados na indstria alimentar para aumentar a capacidade de
reteno de gua e alterar a textura dos alimentos, como a elasticidade, a coesividade e a
dureza.
- Emulsificao as protenas do soro podem atuar como emulsificantes, pois tm
regies hidrofbicas e hidroflicas. Esta propriedade, bem como o fato de se manterem
solveis em valores de pH cido, permite a sua aplicao em molhos para saladas, caf e
formulaes para crianas.
- Formao de espumas a capacidade espumante das solues de protenas do soro
aumenta com o tratamento trmico, uma vez que as protenas do soro so melhores
espumantes quando desnaturadas. A estabilidade da espuma depende do tipo de protena,
nvel de desnaturao da protena, contedo em gordura, concentrao de protena e
carboidratos, concentrao de clcio e outros ons, pH, bem como do mtodo e equipamento
de processamento do soro. Esta propriedade desejvel em alguns produtos como merengues
e sorvetes e indesejvel em produtos como fiambres e sucos de fruta fortificados.
2.5 Produtos Derivados do Soro de Queijo
Um tratamento do soro do leite que alie custo e eficincia o problema principal dos
fabricantes de queijo apesar da variedade de tcnicas disponveis. Os caminhos possveis de
minimizao deste efluente foram descritas por ZADOW (1992):
-aplicao de tcnicas que minimizem a produo do soro durante fabricao de
queijo;
-uso do soro de leite como um subproduto valioso na indstria de alimentos;
-produo de petroqumicos tais como o metano e o metanol;
-produo do cido lctico e dos seus derivados;
-produo de plsticos e de polmeros biodegradveis;
-o tratamento do soro como um efluente.


Cerca da metade do soro produzido no mundo eliminado como efluente ou utilizado
como adubo no solo ou em sistemas hdricos, resultando numa perda importante de energia
alimentar, bem como criando uma grande perda econmica; a outra metade processada em
vrios produtos alimentares retornando alimentao animal ou humana, bem como para a
produo de medicamentos e outros produtos de interesse (RODRIGUES, 2001; MIZUBUTI,
1994).
As tecnologias de processamento de soro tm crescido exponencialmente nos ltimos
dez anos devido ao desenvolvimento dos processos de separao com membranas e dos
mtodos de troca inica, bem como a um melhor entendimento do soro como matria-prima.
O soro como matria-prima pode conferir tecnologia alimentar novas potencialidades
devido s propriedades nutricionais e funcionais das suas protenas (HUFFMAN, 1996).
Na alimentao humana o soro pode ser utilizado na forma lquida, condensada ou em
p. O soro lquido pasteurizado fresco raramente usado em indstrias de alimentos, devido
ao alto custo de transporte e a suscetibilidade para deteriorao durante armazenamento
(MILLER et al., 2000).
O soro lquido possui vida til muito curta, quando no so tomadas medidas de
conservao adequadas, devido grande proliferao microbiana. Portanto, deve-se usar
refrigerao e/ou adio de conservantes (VIEIRA et al., 1985).
Alm do mais, o soro integral deve ser evitado para o consumo direto devido ao seu
alto contedo em lactose, que pode provocar problemas de intolerncia a determinados
indivduos, alm da dificuldade de aceitao sensorial do produto que possui alto teor de
cinzas. O soro de queijo utilizado na sua forma bruta principalmente como alimento animal
(MORESI, 1994).
Dentre as alternativas para o uso do soro lquido podem ser citadas a fabricao de
ricota e a fabricao de bebidas lcteas (WONG et al., 1999).
A produo de soro em p, bem como a concentrao e fracionamento das protenas
com posterior secagem uma das opes para utilizao do soro de leite, e sero apresentadas
nas prximas sees.
2.5.1 Soro em p
O soro em p a forma mais satisfatria para o uso do soro de leite em alimentos,
obtido removendo aproximadamente 95 % da umidade do soro, mas que contm todos os
constituintes nas mesmas propores relativas ao soro original. Desta forma o soro pode ser
armazenado por um tempo maior sem danos para suas propriedades nutricionais, alm de
reduzir os custos de transporte e aumentar a qualidade do produto podendo ser modificado
e/ou misturado a outros produtos servindo a propsitos especficos (MILLER et al., 2000;
HUFFMAN, 1996).

O soro em p pode ser usado como aditivo em vrios gneros alimentcios destinados
ao consumo humano. Soro em p no higroscpico um excelente veculo no-aglutinante de
fcil disperso muito usado em misturas secas, muito utilizado em produtos de panificao,
salgadinhos, sorvetes e sobremesas lcteas. No que se refere aos dois primeiros produtos, a
utilizao do soro de leite em p intensifica o desenvolvimento de cor durante o cozimento e
forneamento a alta temperatura, alm de aumentar o volume dos pes e tambm uma fonte
econmica de slidos lcteos. J nos sorvetes e sobremesas lcteas, o uso do soro ajuda a
formar espumas estveis e facilita aerao (BYLUND, 1995).
Segundo CRISTIANINI & ROIG (1987), O iogurte que recebeu adio de soro em p em
nveis de 0,7 a 1,5 % apresentou melhor viscosidade, menor tempo de coagulao, melhor
firmeza e no apresentou sinerese. E, ainda, o produto acrescido de soro mais nutritivo
possuindo maior teor protico e vitamnico.
Segundo USDEC (2002), melhorias em sabor so observadas quando o soro de leite
substitui amido ou outro emulsificante adicionado ao iogurte.
Existem vrias metodologias para obter soro em p. O processamento do soro lquido
para transformao em produto seco pode ser observado na Figura 2.3.
Figura 2.3:Fluxograma do processamento do soro de queijo em p. (Fonte: BYLUND, 1995).
O soro fluido filtrado para recuperar a gordura e a casena residuais (a centrifugao
tambm pode ser utilizada). Aps esta filtrao inicial o soro pasteurizado, com o objetivo
principal de destruir microrganismos patognicos, eventualmente presentes, e interromper a

converso da lactose em cido lctico, todo soro para uso humano deve ser pasteurizado
(MILLER et al., 2000).
A concentrao de soro acontece tradicionalmente atravs de evaporadores (85 C),
mas plantas de OI (osmose inversa) tambm so utilizadas para a pr-concentrao. Depois da
evaporao o fluido atinge 45 a 65 % de slidos totais. O concentrado resfriado rapidamente
para 30 C em um trocador de calor de placas. O concentrado transferido para um tanque de
resfriamento com agitao por 6 a 8 horas at atingir 15 a 20
o
C. O resfriamento deve ser
lento para que se formem cristais finos para evitar um produto higroscpico na etapa de
secagem (BYLUND, 1995). A operao de centrifugao opcional. No caso de produo de
soro de leite com teor de lactose reduzido, os cristais de lactose formados so removidos por
centrifugao.
A secagem do soro basicamente a mesma que a usada para a fabricao do leite em
p, isto em secadores de tambor ou spray driers. O uso de secadores de tambor envolve um
problema: a difcil raspagem da camada de soro que se adere superfcie do tambor. O spray
drier amplamente utilizado para este fim, porm, o elevado custo para a desidratao do
soro limita sua adoo como prtica comum em pequenos estabelecimentos (MORESI, 1994;
BYLUND, 1995).
Algumas limitaes nas propriedades funcionais de soro seco para uso direto em
alimentos, principalmente as altas concentraes de sais e lactose, conduziram ao seu
fracionamento. Recentes desenvolvimentos de tcnicas de separao molecular como
ultrafiltrao, osmose inversa, filtrao gel, eletrodilise, e troca de ons tornaram possvel o
fracionamento, modificao e a utilizao dos produtos derivados de soro em uma variedade
de produtos de forma mais adequada (WONG et al., 1999).
Os produtos obtidos a partir do fracionamento do soro, dependendo do processamento
a que so submetidos, geram produtos com caractersticas diferentes do soro em p
propriamente dito. A Tabela 2.7 apresenta as caractersticas dos principais produtos derivados
do soro.
Tabela 2.7: Caracterizao dos principais produtos derivados do soro de queijo.
Produto Protena (%) Lactose (%) Gordura (%) Sais (%) Umidade (%)
Soro em p 10-15 63-75 1,0-1,5 8,2-8,8 3,5-8,0
Soro em p
deslactosado
18-24 52-58 1,0-4,0 11,0-22,0 3,0-4,0
Soro em p
desmineralizado
11-15 70-80 0,5-1,8 1,0-7,0 3,0-4,0
CP 35 34-36 46-52 3,0-4,5 6,5-8,0 3,0-4,5
CP 50 50-52 33-37 5,0-6,0 7,5-8,5 3,5-4,5
CP 65 63-65 20-23 5,0-6,0 3,0-7,0 3,5-4,5
CP 80 80-82 4-8 4,0-8,0 3,0-4,0 3,5-4,5
IP > 90 0,5-1,0 0,5-1,0 2,0-3,0 3,5-4,5
Lactose - > 99 - 0,3 1
*CP Concentrado Protico; IP Isolado Protico. (%) percentual mssico em base seca
Fonte: adaptado de YADA (2004); BYLUND (1995); USDEC (2002).

Quando o contedo de lactose original do soro reduzido obtm-se como produto
resultante soro em p deslactosado ou soro em p com teor reduzido de lactose.
Semelhantemente, processos, como a eletrodilise, podem ser usados pra reduzir o contedo
mineral do soro, obtendo como produto o soro desmineralizado (BYLUND, 1995).
O soro em p deslactosado empregado principalmente em queijos processados,
molhos e carnes industrializadas como alternativa para o soro em p, nos casos em que so
desejadas concentraes mais baixas de lactose e mais elevadas de protenas. Alm do mais,
muitas pessoas esto limitando o uso de lactose devido dificuldade para digeri-la, sndrome
conhecida como intolerncia lactose (LAGRANGE & DALLAS, 1997).
O soro em p desmineralizado utilizado amplamente em frmulas infantis, bem
como em coberturas aeradas, sobremesas congeladas e em produtos de confeitaria. Nestas
aplicaes o alto teor de lactose usado como fonte conveniente de carboidratos. O soro
desmineralizado tambm acrescenta flavor lcteo agradvel sem perturbar o equilbrio de
minerais do produto final (LAGRANGE & DALLAS, 1997).
Os minerais de leite so usados para fortificao de alimentos e bebidas com clcio
(YADA, 2004; MATHEWS, 1984).
A lactose por ser fonte de material energtico pode ser utilizada para diversos
processos biotecnolgicos e como componente utilizado na indstria alimentcia. um
componente essencial na produo de produtos de leite fermentado, afeta a textura de certos
produtos concentrados e congelados; altamente envolvida em mudanas de cor e sabor
induzidas pelo calor em produtos de leite aquecidos. H ainda os fins farmacuticos, pois a
lactose confere compressibilidade, fluidez e dureza na confeco de comprimidos,
revestimento de plulas e na produo de cosmticos (FOX & MCSWEENEY, 1998; GIROTO &
PAWLOWSKY, 2001).
2.5.2 Produtos Proticos do Soro (Concentrados e Isolados
Proticos)
Os componentes mais valiosos do soro so as protenas, mas como a sua concentrao
neste lquido muito reduzida so necessrias etapas de concentrao, para que as suas
propriedades funcionais sejam realadas (HUFFMAN, 1996).
O desenvolvimento de tcnicas de fracionamento, de modificao e de preservao
das protenas do soro pode contribuir para a recuperao desse nutriente, assim como
melhorar a expresso de suas propriedades funcionais. O fracionamento do soro em lactose e
protenas do leite representa um expediente que permite a utilizao dos constituintes de
maior importncia comercial presentes no soro de leite.
Quando um produto de soro tem 25 % ou mais de protenas em base seca
denominado concentrado protico do soro (CP). Os CP podem ser classificados com base na

sua composio. Geralmente so agrupados de acordo com o seu contedo em protena (em
base seca) como pode ser observado na Tabela 2.7 (LAGRANGE & DALLAS, 1997).
Os CP mais comuns tm um teor de protena de 35, 50, 65 e 80 %, em base seca.
Quando o grau de purificao protica maior que 90 % (em base seca) o produto
denominado de isolado protico (IP) (YADA, 2004; MATHEWS, 1984).
Os CP tm uma vasta aplicao na indstria alimentar pela funcionalidade que podem
conferir aos alimentos. A Tabela 2.8 resume as propriedades funcionais e as principais
aplicaes industriais dos CP. O uso de protenas do soro como ingredientes em alimentos
funcionais lcteos e no lcteos est aumentando progressivamente conforme tem aumentado
a capacidade tecnolgica da indstria para produzir CP, IP ou, mais recentemente, fraes
enriquecidas em protenas do soro individuais (RICHARDS, 2002).
Tabela 2.8: Propriedades funcionais que os concentrados proticos conferem aos alimentos
Propriedade funcional Setor alimentar Percentual de protena no
CP
Viscosidade Sobremesas CP 35
Solubilidade, estabilidade coloidal Bebidas CP 35
Emulsificao
Caf, sopas, alimentos
infantis
CP 85

Formao de espumas Confeitaria CP 35
Gelificao Produtos lcteos CP 65
CP 65 Elasticidade Panificao
Coeso e adeso Produtos em pasta CP 85
Absoro de gua e de gordura Produtos de carne CP 85
Fonte: adaptado de WITT (1998)
O IP possui excelentes propriedades de gelificao, aerao, emulsificao, reteno
de gua e gordura. As principais aplicaes de IP incluem produtos lcteos, de panificao e
de confeitaria, snacks, salgadinhos, aperitivos e carnes processadas (RICHARDS, 2002).
NIKAEDO et al. (2004) testaram o uso de concentrados proticos de soro em
sobremesas lcteas substituindo o leite em p. Os resultados mostram que vivel utilizar o
CP em substituio ao leite em p, oferecendo um produto com menores teores de gordura e
de slidos totais, e maior teor de protenas. O produto apresentou melhor qualidade
nutricional, alm da reduo calrica, favorecendo seu consumo por pessoas preocupadas com
a sade.
Segundo USDEC (2002), iogurtes produzidos com leite fortificado com CP apresentam
melhor textura e consistncia. Um dos benefcios mais significativos ao substituir o leite
desnatado por CP o resultado da reduo no efeito da sinerese durante o perodo de
estocagem do iogurte.
Segundo NIKAEDO et al. (2004), o CP adequado para substituir a gordura em
sobremesas lcteas congeladas (frozen yogurt), demonstrando que possvel elaborar uma
sobremesa lctea nutritiva, com substitutos de gordura e com boa aceitabilidade sensorial.

Para a produo de iogurtes light (sem gordura), um substituto de gordura indicado
para prover a sensao de saciedade (mouthfeel), segundo USDEC (2002), iogurte com elevado
teor protico (protenas provenientes do soro) provoca uma diminuio do apetite quando
comparado com iogurtes com menor quantidade de protenas, mas com igual valor calrico.
Conforme CASTRO et al. (2002), iogurtes probiticos de baixas calorias foram elaborados com
CP 35 % e CP 80 % sem prejuzos nas suas caractersticas fsico-qumicas e microbiolgicas.
Os CPs tambm tm aplicao na sade humana, uma vez que tm um elevado valor
nutritivo e, portanto, podem complementar e fortificar alguns alimentos, aumentando o valor
nutricional do produto. Assim, so muito teis para incorporar em bebidas para esportistas,
porque ajudam no desenvolvimento ou formao de massa muscular do corpo humano. So
considerados atualmente como um dos componentes alimentcios mais adequados para as
dietas de fisiculturistas e atletas que desejam aumentar a sua massa muscular (RICHARDS,
2002; HUFFMAN,1996).
As protenas do soro, devido aos aspectos nutricionais e fisiolgicos, so amplamente
usadas em nutrio infantil; podem ser usadas em frmulas enterais; na forma de protenas
nativas ou pr-digeridas contribuindo com o ganho de peso em pacientes ps-cirrgicos,
geritricos e imobilizados; em uma dieta de alimentos de baixa caloria; e na substituio de
gordura, ou na formulao de alimentos e bebidas saudveis (LEE, 1996; WIT, 1998;
MATTILA-SANDHOLM & SAARELA,2003).
Alm do mais, o valor comercial de um concentrado protico de 3 a 40 vezes maior
que o do soro em p, devido maior especificidade do produto em nvel funcional e ao
excelente valor nutritivo do mesmo (ZADOW, 1992).
2.5.2.1 Processos de Recuperao das Protenas do Soro
Tm sido desenvolvidas metodologias que permitem a concentrao de protenas
relativamente aos outros componentes de natureza no protica, visto que o soro no uma
fonte equilibrada de nutrientes, contm um elevado teor de lactose e uma baixa concentrao
de protenas e cinzas, e no permite evidenciar nenhuma das propriedades das protenas. A
seguir sero descritos os principais mtodos usados atualmente para obter concentrados
proticos e fraes individuais de protenas.
O maior desenvolvimento de tecnologias de separao slido-lquido tem sido
utilizado pelas indstrias de laticnios para a recuperao das protenas. Entre estas tcnicas
podemos citar a adsoro em suporte insolvel, a precipitao pelo calor, a precipitao por
agentes complexantes e os processos de separao com membranas, com especial ateno
para o processo de ultrafiltrao (MIZUBUTI, 1994; MATTHEWS, 1984).
Desde 1981, a ultrafiltrao se tornou a tcnica mais utilizada para recuperar as
protenas solveis do soro. Os componentes de baixa massa molar (lactose, sais e gua)
permeiam preferencialmente atravs das membranas de ultrafiltrao, as quais retm as
molculas de protena (retido). Na maioria das aplicaes comerciais a ultrafiltrao
acompanhada de diafiltrao, permitindo uma maior remoo de sais e lactose. O retido

seco por spray drier. As protenas de soro obtidas por separao de membrana possuem
propriedades funcionais boas, tais como solubilidade, capacidade de formar espuma, gel e
emulso (FOX & MCSWEENEY, 1998).
A desnaturao trmica um mtodo tradicional para a recuperao de protenas de
soro, onde a coagulao tima em pH 6 e aproximadamente 90 C por 10 a 20 min. As
protenas de soro coaguladas so recuperadas por centrifugao, porm tm baixa solubilidade
e funcionalidade limitada (FOX & MCSWEENEY, 1998; SCOPES, 1988).
As protenas podem ser precipitadas normalmente atravs de polieletrlitos como
carboximetilcelulose. Processos tcnicos para recuperao de protenas de soro
freqentemente fazem uso de tais substncias ou de uma combinao de calor e ajuste de pH
(BYLUND, 1995; CAPITANI et al., 2005).
Filtrao por colunas cromatogrficas (cromatografia de permeao gel) torna possvel
o fracionamento de molculas, inclusive protenas. possvel separar a casena e as protenas
do soro atravs de filtrao gel, mas o processo ainda antieconmico em nvel industrial
(FOX & MCSWEENEY, 1998; YADA, 2004).
Preparaes de protena de soro altamente purificadas so industrialmente preparadas
atravs de cromatografia de troca inica. As protenas so adsorvidas em uma coluna de troca
inica e aps remoo da lactose so eludas atravs do ajuste de pH. Os sais so retirados
atravs da osmose inversa e o produto seco em spray drier (FOX & MCSWEENEY, 1998;
BOBRESHOVA et al., 2002).
2.5.3 Fraes Purificadas das Protenas Majoritrias do Soro
Devido s propriedades funcionais, fisiolgicas e biolgicas especficas de cada uma
das protenas do soro, h um crescente interesse no fracionamento das protenas, pois muitas
vezes estas caractersticas no se fazem notar nos CP devido s interaes de outros
componentes (BRAMAUD et al, 1997 e ZYDNEY, 1998).
As duas principais protenas do soro, -La e -Lg, so produzidas comercialmente
como fraes de protenas isoladas de pureza relativamente alta utilizando diversos
procedimentos patenteados ou registrados. A Tabela 2.8 mostra a composio de fraes
industriais de -La e -Lg.
Tabela 2.9:Composio de fraes industriais de -La e -Lg.
Protena do Produto
Protena bruta (%)

Produto rico em
-La
Produto rico em
-Lg
-La 70,6 13,8
-Lg 13,2 74,8
BSA + Ig 10,4 4,6
Outras protenas 5,8 6,8
Fonte: RICHARDS (2002).

Estes tipos de produtos so utilizados como ingredientes alimentcios, tanto por
utilidade tecnolgica como nutritiva, e so vendidos a preos elevados em lojas especializadas
de produtos para atletas e outras pessoas que precisam de dietas especiais (RICHARDS, 2002).
Conhece-se h muito tempo a capacidade nica que tem a -La para fixar clcio. O
fato de que a -La apresenta uma alta capacidade de renaturao e, em conseqncia tem uma
alta resistncia ao tratamento trmico, se deve provavelmente a esta propriedade. Os
alimentos que contm -La suficientemente pura e em uma quantidade elevada no se
coagulam por aquecimento, propriedade esta importante para o desenvolvimento de novos
produtos com alta concentrao de protenas do soro que sofram tratamento trmico
(RICHARDS, 2002).
Em nvel funcional a -Lg tem maior capacidade de gelificao que a -La (ZYDNEY,
1998). A cadeia de -Lg possui vrios pontos de ligao para minerais, vitaminas
lipossolveis e lipdios. Estes pontos de ligao podem ser usados para incorporar compostos
lipoflicos desejveis como tocoferol e retinol (vitamina A) em produtos com baixo teor de
gordura. A -Lg liga-se ao clcio e zinco e apresenta homologia seqencial parcial com
determinadas protenas capazes de ligar retinol (FOX & MCSWEENEY, 1998). Segundo YADA
(2004) a molcula pode se ligar a lipdios cidos e no polares.
A protena do leite humano consiste em protena do soro e casena na proporo 70:30,
enquanto o leite de bovinos tem a proporo de 20:80. O componente protico principal do
soro no leite humano a -La, o restante so BSA, Lactoferrina e Ig. A -Lg, o componente
principal da protena do soro de bovinos (50 %) no est presente no leite humano, porm a -
La dos bovinos assemelha-se a do soro humano. Os substitutos de leite humano so
compostos formulados para imitar a relao soro:casena do leite humano, quando o soro de
bovinos adicionando na mistura resulta em elevadas concentraes de -Lg que um
alergnico em potencial. Assim, est crescendo o interesse de fabricar frmulas infantis com
nveis reduzidos de -Lg (OUTINEN et al., 1996).
Por outro lado, a frao enriquecida de -Lg poderia ter aplicaes em larga escala na
indstria de alimentos, devido a algumas excelentes propriedades funcionais, como por
exemplo, gelificao e capacidade de formar espuma (OUTINEN et al., 1996).
Entretanto, existe uma controvrsia em torno do papel da -Lg bovina como protena
com atividade fisiolgica, j que por no estar presente no leite humano, poderia ser
alergnica para certas pessoas. Alguns indivduos, particularmente as crianas, exibem uma
resposta alrgica s protenas de leite bovinas ingeridas. Estudos indicam que em mdia 2 a 3
% da populao infantil com menos de um ano de idade possui alguma alergia protena do
leite bovina. Esta sensibilidade no restrita s crianas, uma pequena populao de adultos
tambm pode ser vulnervel a esta condio (YADA, 2004).
A adio de -La tem sido defendida como forma de humanizar frmulas infantis e
criar outros produtos para pessoas que consomem ou podem ingerir apenas quantidades
limitadas de protenas. Alm do mais, a -La tem 4 resduos de triptfano por molcula e

devido necessidade deste aminocido para o desenvolvimento do organismo infantil, mais
adequada para a formulao de alimentos para crianas do que os CPs (FOX & MCSWEENEY,
1998; ZYDNEY, 1998).
Embora quase toda publicidade em torno da alergenicidade da -Lg tenha se
concentrado na produo de frmulas infantis hipo-alergnicas, deve tambm se ter em conta
a alergenicidade que apresentam certos consumidores adultos a esta protena, e a necessidade
de desenvolver produtos para este pblico (RICHARDS, 2002).
A hidrlise enzimtica, a desnaturao induzida pelo calor em pores individuais das
protenas do leite esto sendo investigadas como meios de reduzir a alergenicidade destas
protenas (YADA, 2004).
2.5.3.1 Processos de Fracionamento das Protenas Majoritrias do Soro
Atualmente, existe um interesse comercial considervel na preparao das protenas
individuais para alimentao e aplicaes nutricionais e teraputicas. Tcnicas para isolar
protenas de soro individuais escala laboratorial por salting-out, permutao inica e/ou
cristalizao esto disponveis a cerca de 40 anos. Assim, tm sido desenvolvidos vrios
mtodos de fracionamento de protenas do soro, embora s alguns deles tenham aplicao em
nvel industrial (ZYDNEY, 1998).
Estes produtos funcionais so fabricados mediante diversos processos, incluindo a
precipitao de cidos ou bases, a troca inica, ou as tcnicas de separao por membranas, e
os produtos resultantes tm diferentes propriedades segundo o procedimento utilizado
(RICHARDS, 2002; GRANDISON & LEWIS, 1996).
Protenas do soro eram originalmente isoladas pelo uso de vrias tcnicas de
precipitao, mas hoje em dia a tecnologia de separao por membranas e processos
cromatogrficos so usados alm das tcnicas de precipitao com agentes complexantes
(SCOPES, 1988; ZYDNEY, 1998).
Na precipitao seletiva parmetros como o pH, a temperatura e a concentrao salina
podem ser manipulados de forma a se obter diferentes fraes proticas (ZYDNEY, 1998).
Uma estratgia para eliminar a -Lg do soro utilizar a baixa solubilidade da -Lg em
valores de pH prximos do seu ponto isoeltrico. O soro sofre um pr-tratamento que inclui
ultrafiltrao, desmineralizao por eletrodilise e ajuste do pH, de forma a precipitar a -Lg,
ficando um sobrenadante rico em -La em conjunto com outras protenas (GRANDISON &
LEWIS, 1996).
Diversos mtodos para o fracionamento da protena do soro foram desenvolvidos,
alguns so baseados na solubilidade baixa da -La entre os pH de 3,5 a 4,5; onde a -Lg
permanece solvel; outros mtodos baseiam-se em precipitao pelo calor. Usando os
mtodos da precipitao por calor, a -Lg recuperada facilmente por UF, mas a recuperao

do precipitado de -La difcil devido a sua baixa massa especfica. Alm disso, em soros
cidos ocorre uma desnaturao significativa da -La (OUTINEN et al., 1996).
ZYDNEY (1998) mostrou que, atravs de um sistema de membranas e com
modificaes no pH e fora inica das solues, possvel fracionar os constituintes proticos
do soro, isto , isolar -Lg e -La, BSA, Lactotransferrina, Lactoperoxidase e
Imunoglobulinas em fraes distintas. Esta uma tcnica que poder ter aplicao em larga
escala se as condies adequadas forem utilizadas.
BRAMAUD et al. (1997) mostrou que possvel isolar a -La e a -Lg de uma soluo
de soro atravs de ajuste de temperatura e pH (pH 3,9; 55 C por 30 min), associada a
centrifugao (4000 g, 30 min, 20 C). Na fase solvel permanece parte da -Lg, lactose e
minerais e na fase precipitada -La, BSA, Ig e -Lg. Na fase solvel a -Lg purificada
atravs de UF associada a DF, e a -La purificada por centrifugao e ressolubilizao em
NaCl ou CaCl
2
obtendo, um grau de pureza de -Lg e de -La de 56 % e 79 %,
respectivamente.
A precipitao de -La por acidificao de soro e protena de soro concentrada foi
estudado por LUCENA et al. (2007). Trs cidos diferentes (HCl, cido ctrico e cido lctico)
foram considerados para a precipitao. Os dois cidos orgnicos foram capazes de complexar
os ons de Ca
2+
, porm, quando cido clordrico foi usado, a precipitao ocorreu devido
desnaturao irreversvel das protenas. Quando o processo de precipitao foi levado para um
valor de pH prximo ao ponto isoeltrico da -La e foi combinado com complexao dos
ons clcio, -La precipitou juntamente com BSA e Ig. Enquanto, a -Lg permaneceu em
soluo devido estabilizao desta protena em baixas concentraes de Ca
2+
.
2.6 Aproveitamento do Soro Situao Mundial
Segundo ZADOW (1992) e BYLUND (1995), cerca de 120 a 130 milhes de toneladas de
soro de leite foram produzidas no mundo em 1990.
Nos ltimos anos tem-se verificado um aumento da produo de soro devido a
produo mundial de queijo crescente, em virtude das exigncias da populao. Estima-se que
a produo de queijo aumente a uma taxa de 3 % ao ano (MEIRELES, 1999 apud RODRIGUES,
2001). Como a existncia de soro fortemente condicionada pela produo de queijo, pode-se
deduzir que atualmente haja uma produo mundial de cerca de 180 a 190 milhes de
toneladas de soro.
Cerca da metade do soro produzido no mundo eliminado como efluente em sistemas
hdricos ou como adubo no solo, resultando numa perda importante de energia alimentar, bem
como criando uma grande perda econmica (SISO, 1996; RODRIGUES, 2001; MIZUBUTI, 1994).
A outra metade processada em vrios produtos alimentares retornando alimentao
animal ou humana, assim como para a produo de medicamentos e outros produtos. Sendo
que quase 50 % deste total so usados diretamente na forma lquida, 30 % na forma de p, 15

% como lactose e o restante como concentrados de protena (SISO, 1996; RODRIGUES, 2001;
MIZUBUTI, 1994).
A produo mundial estimada de protenas de soro de elevada qualidade de pelo
menos 600.000 toneladas (RODRIGUES, 2001).
Na Comunidade Econmica Europia aproximadamente 45 % do soro gerado
utilizado na forma lquida, 30 % na forma de soro em p, 15 % como lactose e derivados
desta e 10 % usado na produo de protena concentrada (GIROTO & PAWLOWSKY, 2001). Em
1995 foram produzidas 230.000 toneladas de concentrados proticos na Europa (MEIRELES,
1999 apud RODRIGUES, 2001).
Os Estados Unidos o maior produtor mundial de soro em p e derivados (GIROTO &
PAWLOWSKY, 2001). Mais de 25 % da produo mundial de soro em p e de lactose
800.000 toneladas so fabricadas nas mais de 200 fbricas de processamento de soro que
existem neste pas. Em conjunto, a indstria de soro dos EUA representa a maior fornecedora
de soro em p do mundo (LAGRANGE & DALLAS, 1997).
Quase 60 % do soro e produtos de soro produzidos nos Estados Unidos em 1980 eram
usados em produtos alimentcios para humanos, mais de 80 % como soro em p. Como
alimento animal, mais de 65 % do soro usado tambm era produto de soro em p (WONG et
al., 1999).
O uso de produtos de soro tem aumentado de maneira espetacular nos ltimos anos,
uma lista feita em um supermercado de Washington, nos EUA, mostrou uma relao de mais
de 900 produtos contendo um dos vrios produtos de soro que esto disposio das
indstrias de alimentos (LAGRANGE & DALLAS, 1997).
No Brasil, segundo dados da Associao Brasileira das Indstrias de Queijo (ABIQ,
2007), anualmente tem-se produzido cerca de 450.000 toneladas de queijos. Levando em
considerao que o soro representa 90 % do volume de leite gasto para produzir 1 kg de
queijo, pode-se deduzir que so gerados, cerca de 4 milhes de toneladas de soro por ano.
No entanto, apenas parte do soro gerado aproveitada pelas indstrias brasileiras,
principalmente na fabricao de ricota, na produo de bebidas lcteas e um pequeno
percentual seco, porm sem a completa concentrao das protenas, sendo mais comum a
utilizao do soro na alimentao de animais ou seu lanamento em rios (PORTO et al., 2005;
NEVES, 2001).
A produo de bebidas lcteas uma das principais opes de aproveitamento do soro
lcteo no mercado brasileiro, as mais comercializadas so as bebidas fermentadas com
caractersticas sensoriais semelhantes ao iogurte, contudo, o aproveitamento desse subproduto
atinge apenas 15 % do total de soro produzido no pas (NEVES, 1993; NAKAMAE, 2004).

2.7 Processos de separao por membranas
Os processos de separao por membranas (PSM) so operaes que utilizam
membranas no fracionamento de misturas, solues e suspenses envolvendo espcies de
tamanho e natureza qumica diferentes.
O objetivo principal de qualquer PSM a separao, a concentrao e/ou a purificao
de qualquer componente presente em soluo e este pode ser alcanado devido capacidade
da membrana de transportar um determinado componente da fase de alimentao mais
prontamente que qualquer outro componente presente. Isso ocorre devido s diferenas
existentes entre as propriedades fsicas e/ou qumicas da membrana e dos componentes que
permeiam (MULDER, 1996).
Os processos de filtrao por permeao com membranas so usados para efetuar uma
variedade de separaes e podem ser definidos como barreiras seletivas ao transporte de
massa de certos componentes de uma amostra.
Os PSM podem ser considerados processos de separao relativamente recentes, pois,
mesmo por volta de 1970, estes ainda no eram considerados processos de relevncia tcnica.
As membranas naturais so conhecidas desde a antiguidade, mas o desenvolvimento e
as principais aplicaes de processos de separao com membranas sintticas, em escala de
laboratrio, tiveram incio em 1920. Foi a partir da dcada de 30 que alguns PSM passaram a
ser conhecidos e utilizados em pequena escala. Estes, entretanto, acabaram no se
desenvolvendo, na poca, em uma escala industrial devido aos baixos fluxos de permeado
obtidos, resultantes da elevada espessura das membranas utilizadas.
Atualmente, entretanto, os PSM so largamente utilizados para diferentes aplicaes
principalmente, como um processo alternativo aos processos de separao convencionais, tais
como a destilao, a centrifugao e a evaporao. Esse crescimento se d devido a algumas
vantagens apresentadas pelos PSM, tais como: a economia de energia, visto que a maioria
destes ocorre sem mudana de fase; a seletividade da membrana; a separao de compostos
termolbeis (operam temperatura ambiente) e a simplicidade de operao e escalonamento
(sistemas modulares).
2.7.1 Membranas
A membrana definida como uma interface ou uma barreira semi-seletiva que separa
duas fases (alimentao e permeado) e restringe, total ou parcialmente, o transporte de uma ou
vrias espcies qumicas presentes nestas fases. Elas podem, ainda, apresentar inmeras
caractersticas, podendo ser naturais ou sintticas, neutras ou carregadas, espessas ou finas, de
estrutura homognea ou heterognea, com mecanismo de transporte ativo ou passivo, entre
outras (MULDER, 1996).
As membranas devem apresentar caractersticas especficas conforme a separao
desejada. As propriedades de separao das membranas dependem de fatores como: a

natureza qumica do material constituinte, existncia ou no de poros e, no caso de
membranas porosas, o tamanho dos poros e sua distribuio.
De um modo geral, as membranas podem ser classificadas em duas grandes
categorias: densas e porosas. A membrana denominada porosa quando o transporte atravs
da mesma ocorre devido diferena de tamanhos entre as partculas e os poros da membrana.
J as membranas densas no possuem poros onde o transporte dos componentes envolve a
soro e a difuso atravs do material que constitui a membrana.
Os parmetros de natureza morfolgica envolvem a distribuio de tamanho de poros,
a porosidade superficial e a espessura, no caso de membranas porosas e a espessura do filme
polimrico e as caractersticas fsico-qumicas do polmero e das substncias a serem
separadas, no caso das membranas densas. Tanto as membranas densas como as porosas
podem ser simtricas ou assimtricas, dependendo se apresentam ou no as mesmas
caractersticas morfolgicas ao longo de sua espessura A escolha adequada do uso de uma
membrana, densa ou porosa, no processo de separao implica em conhecer as caractersticas
da membrana e da soluo a ser separada (MULDER, 1996).
As membranas podem ser produzidas por diferentes tipos de materiais. De acordo com
tipo de material utilizado so classificadas em dois grupos; as membranas orgnicas e as
membranas inorgnicas. As membranas inorgnicas so produzidas com materiais cermicos,
vtreos e metlicos e as membranas orgnicas com materiais polimricos sintticos ou
biolgicos.
As membranas polimricas podem ser divididas em hidrofbicas e hidroflicas. Alguns
materiais geradores de membranas hidrofbicas so o politetrafluoretileno (PTFE), o
polipropileno (PP), o polietileno (PE), entre outros. Os materiais geradores de membranas
hidroflicas, por sua vez, so os steres de celulose, o policarbonato (PC), a polissulfona (PS)
e a polietersulfona (PES), a poliamida (PI) e a polieteramida (PEI).
As membranas inorgnicas devem ser utilizadas em processos industriais sujeitos s
condies severas de limpeza e esterilizao. As membranas inorgnicas so compostas de
uma fina camada de material inorgnico sobre um suporte cermico ou metlico. Os materiais
para as membranas inorgnicas incluem vidro, metal sinterizado, materiais cermicos e ainda
os polimricos inorgnicos. Dentre os materiais mais utilizados para fabricao de membranas
cermicas podem-se citar a alumina (Al
2
O
3
), o zircnio (ZrO
2
) e o titnio (TiO
2
).
As membranas cermicas possuem custo mais elevado o que torna o seu emprego mais
restrito. J as membranas polimricas dominam o mercado devido a sua diversidade quanto
aos diferentes tipos de polmeros existentes e quanto disponibilidade no mercado, alm de
apresentarem um campo de aplicao muito amplo.
Os PSM podem ser divididos em dois tipos: aqueles que envolvem a difuso do
solvente (gua) e os que envolvem a difuso do soluto. Os primeiros, mais comumente
utilizados industrialmente, so denominados de processos de osmose e envolvem a

microfiltrao (MF), a ultrafiltrao (UF), a nanofiltrao (NF) e a osmose inversa (OI); os
demais se denominam processos de dilise (D) e envolvem a eletrodilise (ED), a
pervaporao (PV) e a permeao gasosa (PG) (MULDER, 1996).
A Tabela 2.10 apresenta a faixa de tamanhos de poros das membranas para os PSM
que envolvem a difuso do solvente e as faixas de presso aplicveis para cada processo.
Tabela 2.10: PSM relacionados pelo tamanho de poros das membranas e respectivas presses de
operao.
PSM Tamanho de poros (nm) Limites de presso (bar)
Microfiltrao 50 - 10000 0,1 - 2,0
Ultrafiltrao 1 - 100 1,0 - 5,0
Nanofiltrao < 1 5,0 20
Osmose Inversa Sem poros 10 100
Fonte: MULDER (1996).

A NF um processo de separao que permite separar alguns tipos de ons salinos,
como Na
+
, K
+
e Cl
-
, de molculas orgnicas com massa molar na faixa de 100 Da a 500 Da,
com base na carga e no tamanho destas partculas. Os ons permeiam a membrana segundo
suas caractersticas de difuso e carga. A membrana de NF pode ser considerada uma
membrana de UF mais densa ou uma membrana de OI mais aberta. Assim, o dimetro de
corte das membranas de NF situa-se entre o da OI e o da UF. As NF operam na faixa de 10 a
20 bar.
Os processos que envolvem a OI visam gerar tanto gua pura (permeado) quanto
solues aquosas ricas em sais minerais e outras molculas de massa molar maior
(concentrado). As membranas de OI operam a uma presso de aproximadamente de 100 bar e
retm ons como Na
+
, K
+
e Cl
-
.
A ED uma tcnica de separao com membranas, cujo critrio de separao no o
tamanho do composto, mas sim a carga eltrica. Fundamenta-se no princpio da
movimentao de ons, sob um campo eltrico, em solues aquosas e atravs de membranas
carregadas positiva ou negativamente, resultando em solues concentradas em ons e em
solues diludas.
Entre os processos de separao por membranas se dar nfase nos sub-captulos 2.7.2
e 2.7.3 aos processos de MF e UF que foram utilizados neste trabalho, para a concentrao de
protena do soro de queijo e para o fracionamento destas protenas.
2.7.2 Microfiltrao (MF)
O processo de MF promove a separao de partculas de diferentes tamanhos atravs
da aplicao de um gradiente de presso como fora motriz e se caracteriza como o PSM mais
parecido com o processo convencional de filtrao.

O dimetro de poro destas membranas varia entre 10 e 0,05 m, o que o torna um
processo capaz de reter suspenses e emulses. Assim, as partculas retidas pelas membranas
de MF so, normalmente, maiores que as retidas nos processos de UF e OI. Alm disso, nos
processos de MF, a presso osmtica pode ser desprezada e a diferena de presso aplicada
normalmente varia entre 0,1 e 3,5 bar.
O principal problema decorrente da utilizao de membranas de MF o declnio no
fluxo, causado pelos fenmenos de polarizao por concentrao e fouling, que sero
revisados no sub-captulo 2.9 . A fim de reduzir este problema, um controle cuidadoso do
modo de operao do sistema deve ser exercido.
As principais aplicaes industriais das membranas de MF envolvem a esterilizao de
solues farmacuticas, a clarificao de bebidas, a purificao de fluidos na indstria de
semicondutores, alm de algumas aplicaes analticas e biotecnolgicas.
2.7.3 Ultrafiltrao (UF)
A UF um PSM usado para concentrar ou fracionar macromolculas, onde estas so
retidas total ou parcialmente pela membrana, enquanto as pequenas molculas atravessam a
membrana livremente. O processo de UF utiliza como fora motriz a diferena de presso.
Semelhantemente ao processo de MF, o PSM de UF um processo baseado na
separao atravs da diferena de tamanho entre as partculas e na utilizao do gradiente de
presso como fora motriz. Este processo geralmente utilizado para a reteno de
macromolculas e colides presentes em soluo e pode ser considerado como um processo
intermedirio entre os processos de MF e NF, uma vez que o dimetro de poro das
membranas de UF varia entre 0,05 m e 0,001 m (HO e SIRKAR, 1992; MULDER, 1996).
As membranas de UF comerciais so especificadas atravs da sua massa molar de
corte (MMC) cuja unidade mais utilizada o Dalton (Da). A MMC definida como a massa
molar para a qual a membrana apresenta uma reteno igual a 95%.
A UF adequada concentrao de solues, em presses transmembranas inferiores
a 10 bar. As membranas de UF so capazes reter partculas cuja massa molar varia entre 300 e
500.000 Da. Assim, compostos tipicamente retidos neste processo incluem os acares,
biomolculas, polmeros e partculas coloidais.
A principal diferena entre os processos de MF e UF situa-se na resistncia
hidrodinmica que maior na UF, pois esta possui uma camada superior mais densa (menor
dimetro de poro e porosidade menor na superfcie) e, conseqentemente, uma resistncia
hidrodinmica muito maior (MULDER, 1996).
As membranas de UF so comumente utilizadas na indstria alimentcia, de bebidas e
lctea, em sistemas de tratamento de efluentes, em aplicaes mdicas e biotecnolgicas.

Uma extenso do emprego da UF a adio de gua em alguma fase durante o
processo de concentrao, processo denominado de diafiltrao (DF). O objetivo da DF
lavar os componentes de mais baixa massa molar, e conseqentemente aumentar a purificao
do retido (GRANDISON & LEWIS, 1996).
As indstrias que utilizam essa operao so as de alimentos, bebidas, biotecnolgica
e farmacutica com finalidade de purificar produtos de interesse. A DF est associada com
alto consumo de lquido diafiltrante, normalmente gua, com alto teor de pureza. Na indstria
de laticnios, por exemplo, a DF normalmente empregada aps a pr-concentrao do soro
por MF, UF ou NF que permite maior separao de lactose e sais minerais elevando a
proporo e conseqentemente a pureza de protenas no retido.
2.7.4 Mdulos
As menores unidades responsveis pelo acondicionamento das membranas de
qualquer PSM denominam-se mdulos e podem ser definidas como a parte central de
qualquer sistema de membranas, ou seja, o arranjo tcnico destas (MULDER, 1996;
RAUTENBACH e ALBRECHT, 1989).
Os mdulos podem apresentar basicamente quatro geometrias diferentes: placa e
quadro, tubular, fibra oca e espiral. A escolha do mdulo para uma determinada separao
depende de uma srie de fatores, tais como: densidade de empacotamento (m
2
.m
-3
), custo,
resistncia ao fouling, consideraes operacionais, caractersticas da mistura a ser fracionada,
facilidade de operao, limpeza e manuteno.
2.7.4.1 Mdulo Placa e Quadro
Os mdulos placa e quadro possuem configurao fsica similar ao filtro prensa, pois
so constitudos por sanduches de membranas intercaladas por espaadores e suportes, onde
as membranas esto dispostas paralelamente. Camadas do conjunto podem ser empilhadas, tal
que o concentrado de uma placa alimente a prxima, at atingir a recuperao desejada. Estes
mdulos so adequados para experimentos onde o volume a ser tratado pequeno, pois
apresentam uma densidade de empacotamento baixa e mdulos com essa concepo tm
custo de fabricao elevado. Entretanto, as condies de escoamento da alimentao e do
permeado podem ser facilmente controladas, bem como as membranas que forem danificadas
durante a operao podem ser substitudas sem a perda do mdulo (RAUTENBACH e
ALBRECHT, 1989).
2.7.4.2 Mdulo Fibra-oca
Os mdulos em fibra-oca so constitudos por um feixe de membranas polimricas, na
forma de cilindros finos e longos, com dimetros menores de 0,5 mm, presos nas
extremidades por placas, inseridos em um tubo maior de modo semelhante configurao de
um trocador de calor casco e tubos. A alimentao bombeada para o interior do tubo e o
permeado coletado na extremidade aps percorrer pelo interior das fibras ou vice-versa. As
principais vantagens desta configurao so: a alta superfcie de membrana por unidade de
volume, facilidade de operao e manuteno e baixo consumo de energia (MULDER, 1996).

2.7.4.3 Mdulo Espiral
Este mdulo pode ser considerado uma evoluo do mdulo placa e quadro, ou seja,
nada mais do que um mdulo placa e quadro envolto, de forma espiralada, em torno de um
tubo central perfurado de coleta de permeado. Este mdulo caracteriza-se por um projeto
relativamente simples e por uma elevada densidade de empacotamento (300 1000 m
2
.m
-3
), a
qual depende fortemente da altura do canal, determinada pelo material do espaador utilizado
(RAUTENBACH e ALBRECHT, 1989; MULDER, 1996) .
Neste mdulo, dois ou mais envelopes, contendo, cada um, duas membranas
separadas por um espaador, podem estar envoltos no tubo coletor; a alimentao escoa
axialmente atravs do mdulo cilndrico paralelamente ao tubo central, no qual o permeado
escoa radialmente (MULDER, 1996).
Normalmente, vrios mdulos espirais podem ser utilizados em conjunto, em um
mesmo vaso. Estes so dispostos em srie, ligados pelo tubo coletor central. Neste tipo de
mdulo, a velocidade de escoamento praticamente uniforme e mecanismos promotores de
turbulncia esto presentes ao longo da superfcie da membrana, reduzindo a tendncia
formao do fouling e facilitando a limpeza da mesma (MULDER, 1996).
Algumas vantagens do mdulo em espiral so a boa resistncia ao fouling, devido aos
canais de alimentao relativamente abertos, a facilidade de limpeza, a facilidade de
substituio, a disponibilidade do mdulo com membranas de diferentes materiais e a
disponibilidade comercial de diversos fornecedores. Dentre as desvantagens, pode-se citar
uma rea superficial moderada em relao ao volume da membrana, alguma tendncia ao
fenmeno de polarizao por concentrao e a dificuldade de obteno de altas taxas de
recuperao em sistemas pequenos.
2.7.4.4 Mdulo Tubular
Nos mdulos tubulares, a membrana suportada na superfcie interna ou externa de
um tubo poroso. Este tubo pode ser de material polimrico, fibra de vidro, cermica, carbono
ou ao inoxidvel. O nmero de tubos em cada mdulo tambm pode variar (entre 4 e 18),
sendo dispostos em srie e ligados, um ao outro, a fim de atingir a taxa de recuperao
desejada (MULDER, 1996; RAUTENBACH e ALBRECHT, 1989).
A densidade de empacotamento do mdulo tubular relativamente baixa (< 300 m
2
.m
-
3
) e, embora ele se caracterize como a configurao de custo mais elevado, bastante aplicado
nos casos de elevada tendncia ao fouling, devido ao seu eficiente controle de processo e
facilidade de limpeza das membranas. Assim, suas aplicaes atuais resumem-se,
praticamente, s guas de alimentao com elevado teor de slidos suspensos, tais como
correntes de efluentes e provenientes da fabricao de produtos alimentcios (MULDER, 1996).
O mdulo tubular tem como principais vantagens: a baixa tendncia ao fouling, devido
possibilidade de operar com alta velocidade de escoamento tangencial, facilidade de limpeza
e podem operar em altas presses. Dentre as desvantagens, podem-se citar a baixa rea

superficial em relao ao volume da membrana, o custo elevado e a possibilidade mnima de
escolha do material da membrana.
2.8 Princpios dos PSM
A seguir so apresentadas algumas definies comumente utilizadas em PSM para
melhor entendimento da leitura deste trabalho. As equaes apresentadas foram retiradas de
MULDER (1996).
Nos sistemas de PSM, basicamente, duas configuraes de escoamento so utilizados:
o modo convencional ou dead-end e o modo tangencial ou cross-flow. No primeiro, a soluo
de alimentao escoa perpendicularmente superfcie da membrana, promovendo a formao
de uma camada na superfcie da membrana semelhante a uma torta, devido ao acmulo das
partculas retidas. No modo tangencial, a alimentao escoa ao longo da superfcie da
membrana, gerando o acmulo de apenas parte das partculas retidas. Um desenho
esquemtico do escoamento tangencial apresentado na Figura 2.4 (MULDER, 1996).
Alimentao
Permeado
Retido
Membrana

Figura 2.4: Representao esquemtica do modo de operao tangencial (Fonte: BRANS, 2006).
A corrente que atravessa a membrana denominada permeado ou filtrado e a que fica
retida pela membrana, que a corrente enriquecida em um ou mais componentes, chamada
de retido ou concentrado.
2.8.1 Fluxo Permeado
O fluxo permeado representa a vazo (volumtrica, mssica ou molar) de permeado
por unidade de rea da membrana e determinado pela fora motriz aplicada e pela
resistncia apresentada pela membrana (ou por sua permeabilidade), que muitas vezes, so
proporcionais.
O movimento de qualquer espcie atravs da membrana causado pela ao de uma
ou mais foras motrizes sobre os componentes da alimentao. A maioria dos processos
utiliza como fora motriz, o gradiente de potencial qumico que pode ser expresso em
funo do gradiente de presso, de concentrao ou de temperatura ou o gradiente de
potencial eltrico.
A fora motriz utilizada, bem como a morfologia da membrana, determinam o
mecanismo de transporte atravs desta, que pode ser convectivo e/ou difusivo. No caso de

membranas de MF e UF, o fluxo essencialmente convectivo, uma vez que estas membranas
utilizam como fora motriz o gradiente de presso atravs da membrana.
O volume que escoa atravs destas membranas pode ser descrito pela Lei de Darcy,
sendo o fluxo atravs da membrana (J) diretamente proporcional presso aplicada (p):
J = P p (2.1)
onde a constante de permeabilidade (P) engloba fatores estruturais, tais como a porosidade da
membrana, o dimetro de poro e a distribuio destes; alm disso, esta constante inclui,
tambm, a viscosidade do lquido que permeia.
O fluxo atravs da membrana pode simplesmente ser definido como o volume de
permeado que flui atravs da membrana por unidade de rea e tempo, como mostrado na
Equao 2.2:

dt
dV
A
J
p
1
= (2.2)
onde J
p
o fluxo do permeado (L.m
-2
h
-1
); A a rea da membrana (m
2
); dV/dt o volume de
permeado recolhido (L) em funo do tempo para permeao (h).
O fluxo permeado depende das propriedades da membrana, do produto a ser separado
e das condies de operao tais como a presso transmembrana, velocidade de escoamento
tangencial e fator de concentrao. Tambm fortemente influenciado pela temperatura da
soluo de alimentao. Isso se d, pois o fluxo funo da viscosidade dinmica da soluo
que, por sua vez, funo da temperatura. Assim, quanto maior a temperatura, menor a
viscosidade e maior o fluxo de permeado.
Outros parmetros importantes que afetam o fluxo atravs da membrana so o pH e a
fora inica; o efeito de cada um deles, entretanto, varia muito em funo da soluo de
alimentao e da membrana utilizada. Estes parmetros influenciam, principalmente, na
solubilidade dos componentes da alimentao, alterando as interaes entre essa soluo e a
membrana.
Na separao de uma soluo protica, por exemplo, quanto mais o pH da soluo se
aproximar do pH isoeltrico das protenas presentes, menos solveis estas se encontraro e
maior ser a tendncia ao fouling, diminuindo, por conseqncia, o fluxo permeado (BACCHIN
et al., 2006).
2.8.2 Seletividade
A seletividade de uma membrana a determinada soluo pode ser expressa por dois
parmetros: a reteno (R) ou o fator de separao (). Para misturas aquosas diludas, que
consistem em um solvente (gua, na maioria das vezes) e um soluto, mais conveniente
expressar a seletividade em funo da reteno em relao ao soluto. Nestes casos, o soluto

parcialmente, ou totalmente, retido pela membrana, enquanto que as molculas de solvente
passam livremente por ela (MULDER, 1996; HO e SIRKAR, 1992).
A reteno observada (R
obs
) pode ser estimada pela seguinte equao:

f
p
f
p f
obs
c
c
c
c c
R =
= 1 (2.3)
onde c
f
e c
p
(g.L
-1
); so, respectivamente, as concentraes de soluto na soluo de
alimentao e no permeado. O valor de R varia entre 100 % reteno completa do soluto e
0 % soluto e solvente atravessam livremente a membrana.
2.8.3 Fator de Concentrao
O fator de concentrao (FC) uma varivel limitante do processo porque est
diretamente ligado ao fluxo permeado, isto , a medida que a soluo concentrada o fluxo
permeado diminui. O FC definido conforme a Equao 2.4.

( )
F R
V V
V
V
V
FC
= =
0
0 0
(2.4)
onde FC fator de concentrao de uma dada espcie; V
0
o volume inicial da soluo (L);
V
R
o volume do retido (L); V
F
o volume da soluo permeada (L).
No processo de concentrao de um dado componente atravs da membrana a
concentrao de um soluto durante o processo varia em funo tanto da reduo de volume,
como da reteno (R) do soluto pela membrana.
2.9 Problemas que afetam os PSM
As alteraes no desempenho da membrana podem ser causadas por diversos fatores,
tais como a polarizao por concentrao e fouling. Todos estes fatores induzem a resistncias
adicionais ao transporte atravs da membrana no lado da alimentao. A extenso deste
fenmeno fortemente dependente do tipo de PSM e da soluo de alimentao (MULDER,
1996).
Quando uma soluo, contendo solutos dissolvidos, total ou parcialmente, e sob
presso, entra em contato com uma membrana, o soluto levado superfcie desta pelcula
seletiva por transporte convectivo. O solvente e as partculas de dimenses menores do que o
dimetro dos poros da membrana a atravessam, enquanto os macrosolutos so retidos na
superfcie. Observa-se que h um aumento da concentrao de solutos na regio prxima
superfcie da membrana (interface membrana/soluo), que superior em relao
concentrao no seio da soluo que est sendo filtrada. Este fenmeno conhecido como
polarizao por concentrao. Isto cria um gradiente de concentrao que compensado,

em parte, por uma difuso destes solutos no sentido contrrio ao do solvente que permeia a
membrana.
A seguir, so apresentadas as principais conseqncias deste fenmeno (MULDER,
1996; PLATT et al., 2002):
diminuio na reteno: devido ao aumento da concentrao de soluto na
superfcie da membrana a reteno observada pode diminuir; isso ocorre,
principalmente, na separao de solutos de baixa massa molar (sais);
aumento na reteno: isso pode ocorrer na separao de misturas contendo solutos
macromoleculares, onde a polarizao por concentrao pode ter influncia
decisiva na seletividade do processo; ou seja, as partculas de maior massa molar,
retidas completamente, acabam por formar uma camada extra na superfcie da
membrana, que acaba retendo um nmero maior de partculas menores;
diminuio do fluxo atravs da membrana: o fluxo proporcional fora motriz
exercida sobre o processo, e a constante de proporcionalidade pode ser
considerada como o inverso da soma das resistncias.
Pode-se considerar este fenmeno bem mais severo em membranas de MF e UF, pois
nestas, o coeficiente de difuso das macromolculas retidas, ou das partculas suspensas,
pequeno, quando comparado aos valores aplicados aos componentes retidos nos processos de
OI e PV. Alm disso, o fluxo, atravs das membranas de MF e UF, consideravelmente
maior, aumentando as conseqncias deste fenmeno (MULDER, 1996).
Segundo BACCHIN et al. (2006), a zona de polarizao no pode ser evitada, mas os
seus efeitos na reduo do fluxo permeado podem ser controlados atravs das condies
operacionais, como baixa presso e alta turbulncia junto superfcie da membrana. Este
fenmeno particularmente importante em membranas sujeitas a alto fluxo, como aquelas
utilizadas na UF e na MF.
A polarizao por concentrao um fenmeno reversvel, ou seja, quando o estado
estacionrio atingido, o fluxo atravs da membrana menor do que o existente inicialmente,
mas este no diminui mais com o passar do tempo e cessa quando o processo deixa de operar.
O que se observa, normalmente, em um PSM, entretanto, um declnio contnuo do fluxo,
mesmo aps o estado estacionrio ser atingido. Este declnio contnuo decorre da existncia
de outro fenmeno: o fouling (MULDER, 1996).
O fouling pode ser definido como a deposio indesejvel e (ir)reversvel de partculas
dissolvidas, suspensas ou coloidais na superfcie da membrana. O fouling inclui os fenmenos
de adsoro, bloqueio de poros, precipitao e formao de torta e ocorre, principalmente, nos
processos de MF e UF, onde membranas porosas, mais susceptveis ao fenmeno, so
utilizadas (MULDER, 1996; RAUTENBACH e ALBRECHT, 1989).
A deposio de alguns componentes da alimentao na superfcie da membrana ou
dentro de seus poros acaba formando uma camada delgada. Neste estgio, geralmente a

concentrao de partculas prxima superfcie filtrante no varia mais e estabelece-se, ento,
a camada gel, conhecida tambm como membrana dinmica secundria. O transporte da
soluo permeante atravs da membrana perturbado pelo aparecimento de uma resistncia
adicional a resistncia devido camada de gel, alm daquelas j oferecidas pela membrana e
pelo fenmeno de polarizao por concentrao. medida que a espessura da camada de gel
aumenta esta resistncia ao fluxo permeado torna-se maior (BACCHIN et al., 2006).
O fouling definido como um fenmeno de camada limite em que os solutos se
depositam e/ou so adsorvidos na superfcie e nos poros da membrana modificando a sua
estrutura e as propriedades de separao da mesma. Os principais fenmenos que contribuem
para o fouling esto apresentados a seguir:
adsoro das molculas de soluto na superfcie da membrana e/ou no interior de
seus poros devido interaes fsico-qumicas com o material da membrana;
entupimento de poros por molculas ou partculas em suspenso, trata-se da ao
mecnica de bloqueio de poros, que pode ocorrer tanto na superfcie como no
interior da membrana, dependendo de sua morfologia;
depsito de material em suspenso sobre a superfcie da membrana com formao
de uma torta de filtrao (camada gel).
A natureza e a extenso do fouling so influenciadas consideravelmente pela
composio qumica da membrana e pelas interaes soluto-membrana.
Medidas que visem reduo da incidncia destes fenmenos so bastante
importantes, uma vez que o declnio de fluxo pode ser responsvel por perdas econmicas.
Mais importante, entretanto, o discernimento entre o fator causador deste fenmeno,
principalmente entre os fenmenos de polarizao por concentrao e fouling (embora ambos
no possam ser considerados independentes, pois um fator - polarizao por concentrao,
pode ser o causador do outro - fouling) (MULDER, 1996).
A fim de reduzir o fenmeno de polarizao por concentrao algumas aes podem
ser tomadas, tais como a manipulao das condies de operao. Ou seja, pode-se tentar
diminuir a presso transmembrana, aumentar a velocidade de escoamento ao longo da
membrana, alterar a configurao do mdulo (diminuindo seu comprimento, aumentando o
dimetro hidrulico ou testando uma configurao diferente, geometria dos espaadores) ou,
at mesmo, aumentar a temperatura da alimentao (MULDER, 1996).
O controle da camada de gel pode ser feito atravs do aumento da velocidade
tangencial, provocando maior turbulncia. A agitao e a mistura da soluo, prxima
superfcie da membrana, arrasta parte significativa dos slidos acumulados, na maioria das
vezes por adsoro, reduzindo a espessura da camada de gel e aumentando a taxa de
permeao. Alm deste mtodo, a aplicao de baixas presses e a escolha do material
constituinte da membrana so outros fatores bastante efetivos, que reduzem a adsoro de
solutos (BACCHIN et al., 2006).

Para prevenir a formao de fouling diferentes estratgias foram avaliadas na
literatura. BRANS et al. (2004) expem que o mtodo de backpulsing mais eficiente que
outros mtodos, tais como promotores de turbulncia e backwashing, pois a remoo dos
componentes da superfcie da membrana se mostrou mais eficiente podendo ser controlada
em larga escala.
Embora todos os mtodos citados acima reduzam o fouling de alguma maneira, os
mtodos que visam limpeza da membrana devem sempre ser utilizados, porque a
diminuio do fluxo atravs da membrana pode ocorrer mesmo que as condies de operao
escolhido sejam apropriadas. Isso se d, pois a diminuio do fluxo um fenmeno inerente
ao processo, o que torna necessrio uma limpeza peridica da membrana (MULDER, 1996).
A limpeza hidrulica, a limpeza mecnica e a limpeza qumica so os mtodos de
limpeza que podem ser utilizados. Dentre estes mtodos, a limpeza qumica o mais
importante, envolvendo uma grande variedade de agentes qumicos que podem ser usados
separadamente ou em conjunto. Alguns exemplos so cidos (como o H
3
PO
4
e o cido
ctrico), bases (NaOH), detergentes (alcalinos, no inicos), enzimas (proteases, amilases,
glicanases), agentes complexantes (EDTA), desinfetantes (H
2
O
2
, NaOCl) e vapor de gua
(MULDER, 1996).
Os agentes qumicos utilizados na limpeza dos mdulos devem ser compatveis com o
material da membrana e devem ser escolhidos de acordo com as substncias causadoras do
fenmeno. Os limites das condies normais de operao (presso, temperatura e fluxo) no
devem ser excedidos durante a operao de limpeza, a fim de evitar qualquer dano irreversvel
membrana. A concentrao do reagente e o tempo de limpeza so tambm bastante
importantes em relao resistncia qumica da membrana (RAUTENBACH e ALBRECHT, 1989;
MULDER, 1996).
2.10 Aplicao dos PSM na Indstria Alimentcia
Os PSM so amplamente utilizados na indstria de alimentos em aplicaes que
envolvem desde tratamento de efluentes at concentrao e purificao de substncias
presentes em soluo.
GIRALDO-ZUIRA et al. (2004) relatam que MF pode ser utilizada industrialmente
como uma alternativa para a pasteurizao ou a esterilizao (a frio) parcial de alimentos, pois
retm microrganismos durante a operao. Como no necessita de calor para a operao, no
ocorre alterao de estado fsico da soluo e as caractersticas sensoriais e nutricionais dos
compostos processados so mantidas.
Segundo VAN REIS & ZYDNEY (2001), as membranas sempre foram uma parte
integrante dos processos de biotecnologia. A filtrao estril dos meios de fermentao, a
purificao de solues tampo e a produo de produtos proticos so praticadas na indstria
utilizando membranas. A MF extensivamente usada para clarificao de solues. A UF

pode ser encontrada em muitos processos biotecnolgicos. As membranas tambm tm o seu
uso difundido para eliminar bactrias de alimentos lquidos.
AFONSO et al. (2004) avaliaram a viabilidade econmica e tcnica da utilizao de
membranas de UF e NF para a recuperao da protena presente no efluente da produo de
pescados. Os autores puderam observar que a reteno de protena pela membrana de UF
variou entre 49 e 62 %, dependendo das condies de operao; a membrana de NF reteve em
torno de 66 % de protena. Os autores concluram, ainda, que a aplicao deste sistema em
nvel industrial vivel economicamente.
CHOVE et al. (2007) mostraram em seu estudo algumas propriedades funcionais de
fraes de isolado de protena de soja obtido por MF. Cinco fraes de isolados de protena de
soja (SPI) foram produzidas usando duas membranas de MF com tamanhos de poro
diferentes. A MF no usada extensivamente para separar o SPI em fraes distintas, mas isto
pode ser usado para enriquecer espcies de protenas de altas e baixas massas molares, que
possuem propriedades, como solubilidade, emulsificao e capacidade de formar espuma,
diferentes. Membranas podem ser utilizadas como um mtodo competitivo precipitao
seletiva das espcies de protena por mudanas de pH, resultando em uma frao de
determinada espcie de protena mais pura e conseqentemente caractersticas funcionais
realadas.
REIMANN (2005) cita um processo resultante de sucessivos passos para obteno do
cido ltico purificado aps um processo fermentativo. Foram utilizados no estudo os
processos de UF, eluio em resina de troca inica, eletrodilise com membrana monopolar e
com membrana bipolar e evaporao, e o grau de purificao do cido ltico aumentou
quando os PSM foram empregados.
Na indstria de alimentos, segundo CALLE et al. (2002), a ED largamente empregada
por possibilitar a separao de eletrlitos em processos como a desmineralizao de vinhos, a
neutralizao cida de sucos de frutas. Modificada a ED tambm utilizada para separar
misturas de aminocidos e protenas. Normalmente, os aminocidos so obtidos por hidrlise
protica e sntese microbiolgica e qumica, onde so contaminados por componentes
minerais. De acordo com BOBRESHOVA et al. (2002), uma alternativa de desmineralizao e
fracionamento de aminocidos o processo de ED. ELISSEEVA et al. (2002), utilizaram a ED
para separar aminocidos, produzidos por processo biotecnolgico, de sais minerais e acar.
Freqentemente membranas polimricas de UF so usadas, mas as membranas
cermicas esto ganhando mais ateno, por causa da melhor resistncia frente limpeza e
desinfeco. ALICIEO et al (2002) estudaram a aplicao de membranas de UF na produo de
leo de soja. O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da temperatura e do gradiente de
presso no fluxo permeado atravs de dois tipos de membranas de UF: uma membrana tubular
cermica e uma membrana fibra-oca polimrica. Os autores perceberam que o fluxo atravs
da membrana tubular aumentou com o aumento da presso, mas no variou com a
temperatura; na membrana fibra-oca, por sua vez, o fluxo aumentou com o aumento de ambos
os parmetros.

BABU & GAIKAR (2001) estudaram as caractersticas de membranas de UF
determinantes de fouling. Atravs de experimentos de ultrafiltrao de solues de albumina
de soro bovinas utilizando membranas de triacetato de celulose (CTA) e celulose regenerada
(RC), foi demonstrado que as membranas de CTA eram mais vulnerveis ao fouling que as
membranas hidroflicas de RC. O declnio do fluxo para ambas as membranas, mais
significante no incio, foi atribudo a uma polarizao por concentrao prxima superfcie
da membrana e adsoro de protena. O fouling das membranas foi caracterizado pela
resistncia permeao de gua pura. A resistncia dos depsitos de protena associada com
as membranas CTA foi mais alta quando comparada com a resistncia da protena adsorvida
nas membranas RC. Outras concluses dos autores foram que a presena de eletrlitos na
soluo de alimentao (como sais, por exemplo) aumenta o fouling e ocasiona uma
conseqente reduo no fluxo permeado, enquanto o aumento da temperatura reduz a
formao deste fenmeno. Cargas eltricas introduzidas na superfcie da membrana podem
reduzir a afinidade das protenas pela superfcie da membrana e, desta forma, diminuir o
fouling.
DOYEN et al. (1996) fizeram um estudo comparativo no tratamento do leite com
membranas de polmero (PSF/PVP), cermico (ZrO
2
) e orgno-mineral (ZrO
2
/PSf). Os
valores de massa molar de corte estavam entre 25 e 50 kDa. Embora a permeabilidade das
membranas fosse diferente, os fluxos eram comparveis, porque os experimentos foram
realizados com presses independentes do regime de fluxo. Em uma velocidade tangencial de
6 m.s
-1
, foram alcanados fluxos de 5,610
5
e 6,810
5
m.s
-1
, dependendo do fator de
concentrao. Os autores concluram que o fouling o fator limitante na concentrao de
protena do leite e no a permeabilidade da membrana.
BACCHIN et al. (2006) fazem uma reviso sobre o fluxo crtico. Entre as suas
concluses os autores relatam que a estabilidade da soluo (envolvendo pH e fora inica),
assim como a concentrao e a massa molar das partculas em soluo so fatores relevantes
para determinar o fluxo crtico. Normalmente, um aumento de pH acima do ponto isoeltrico
de solues proticas, aumenta o fluxo crtico. Por exemplo, nas solues de concentrados
proticos do soro e suspenses de caseinatos de sdio h um aumento do fluxo crtico com o
aumento de pH.
CHAN et al (2002) estudaram a determinao de um fluxo limite aparente, a partir do
qual a formao de fouling em membranas de UF, utilizadas na separao de diferentes
misturas proticas (binrias), era relevante ao processo. O fluxo limite aparente foi
determinado atravs da observao da linearidade da curva entre a variao de presso e o
fluxo aplicado, onde o ltimo valor que mantinha a linearidade foi tomado como o fluxo
limite aparente. Os autores perceberam, durante os experimentos, que a reteno das protenas
de maior tamanho era determinante para o fluxo limite aparente, devido formao de uma
camada dinmica pelas partculas retidas, que causava o aumento da presso transmembrana
(P).
CHOI et al. (2005) executaram experimentos bem controlados de filtrao para estudar
os efeitos do fluxo permeado e do escoamento tangencial no fouling de membranas no

tratamento de efluentes. Os resultados foram analisados pelo modelo de resistncias-em-srie
onde a razo para o declnio do fluxo foi subdividida em adsoro, polarizao por
concentrao, fouling reversvel e irreversvel. As experincias de filtrao demonstraram que
o fluxo permeado decai mais rapidamente com o aumento da concentrao de alimentao e
tamanho de poro de membrana, e com fluxo tangencial decrescente. Os resultados de limpeza
da membrana revelaram que o declnio do fluxo permeado era dominantemente causado pelo
fouling reversvel. A autpsia das membranas sugeriu que um fouling irreversvel havia sido
formado, inicialmente pelo bloqueio de poros por pequenas partculas e mais tarde pela
compactao de uma camada de incrustantes, onde a velocidade do escoamento no foi
suficiente para arrast-la, provocando, desta forma, o acmulo de material e a diminuio do
fluxo permeado.
ZYDNEY & PUJAR (1998) tratam em seu trabalho do transporte de protenas por
membranas porosas e os efeitos de interaes coloidais. Eles afirmam que anlises
tradicionais do transporte de solutos atravs da membrana geralmente consideram somente as
interaes estricas (baseadas no tamanho) entre o soluto e os poros, porm eles demonstram
a importncia de considerar interaes coloidais na taxa de transporte dos solutos. Estas
interaes podem afetar o desempenho da membrana drasticamente, mudando as
caractersticas de reteno da membrana de completamente permevel para completamente
retentiva, para um determinado soluto. Para uma mistura de protenas, os sistemas de
membrana devem ser operados sobre certas condies j que a magnitude das foras coloidais
diferente para protenas diferentes. Isto alcanado facilmente para interaes eltricas
operando no ponto isoeltrico (ou prximo deste) de uma das protenas, isto pode ser usado,
por exemplo, na separao de BSA e IgG em solues a pH 4,7, prximo ao pI do BSA.
Tambm possvel, explorar as diferenas das interaes por foras de van der Waals em
sistemas de membranas devido ao diferente carter de hidrofilicidade/hidrofobicidade das
protenas, por exemplo, possvel aproveitar as interaes entre grupos hidrofbicos das
protenas com grupos correspondentes nas membranas.
YUNOS & FIELD (2006) estudaram o efeito de membranas empilhadas para o
fracionamento de protenas. O fracionamento da protena que usa a UF praticvel aps a
extensiva otimizao do processo, contudo a baixa seletividade das membranas ainda um
dos fatores crticos que limitam a aplicao de sistemas da membrana ao fracionamento da
protena. O uso de membranas empilhadas visa melhorar a seletividade da separao
conseguindo um produto puro da protena no permeado de uma mistura binria de protenas.
Duas membranas planas so prensadas em vrias combinaes e configuraes sem espaador
entre elas. Foram utilizadas membranas de similares ou diferentes combinaes de MMC (30,
50 e 100 kDa) em vrios arranjos e protenas com massa molar entre 10 e 70 kDa como
protenas modelo em solues simples ou misturas binrias. As transmisses observadas de
Lisozima (14 kDa) com membranas empilhadas de 30/30, 50/50, e 100/100 kDa so 78, 85
e 97 %, respectivamente; e estes valores so comparveis transmisso para o processo com a
nica membrana, sendo ligeiramente mais baixos. Os resultados do estudo podem ser teis
para compreender as propriedades do transporte das membranas empilhadas e em predizer o
efeito da massa molar da protena e do tamanho do poro sobre transmisso e reteno da
protena.

KAPPLER & POSTEN (2007) estudaram o fracionamento de protenas baseado no
tamanho e na carga destas molculas. Para tanto, fizeram uso de uma clula de eletro-
ultrafiltrao, onde alimentada a soluo contendo protenas e um campo eltrico aplicado
visando separ-las atravs da carga eltrica. De certa forma um mtodo semelhante
eletrodilise, j que se pretende transportar as protenas baseado na sua carga, mas ao invs de
se utilizar membranas de troca inica utilizam-se membranas com MMC adequada. Esta
tcnica pode ser usada para obter produtos com alto teor de pureza e tempos de separao
curtos, devendo ser mais estudada para estender sua utilizao para misturas multi-
componentes e biomolculas.
2.10.1 Aplicao dos PSM na Indstria de Laticnios
As diversas tcnicas de separao por membranas existentes hoje em dia permitem
extrair do leite e/ou do soro certos componentes com atividades biolgicas, funcionais e
nutricionais de interesse. Neste sub-captulo foi realizada uma reviso bibliogrfica a respeito
dos PSMs que vm sendo aplicados na indstria de laticnios.
LEITE et al. (2006) relatam que os PSMs esto sendo utilizados desde a dcada de 70
na indstria de laticnios, destacando-se a MF e a UF, mas, existe aplicao em potencial para
todos os tipos de processos com membranas. De acordo com SMITH (2003), hoje, a separao
por membranas uma tecnologia estabelecida. Estima-se que a rea superficial de membranas
instalada mundialmente na indstria de laticnios atinja 500.000 m
2
; cerca de 70 % desta rea
usada para o tratamento de soro lcteo.
BRANS et al. (2004) fizeram um estudo sobre o fracionamento do leite utilizando
membranas, e concluram que esta tecnologia uma escolha adequada para o fracionamento
do leite, pois muitos dos seus componentes podem ser separados por diferenas de tamanho.
A UF, por exemplo, uma tecnologia que pode ser aplicada na indstria de laticnios para o
processamento do leite integral, semi-desnatado ou desnatado, sendo inclusive utilizada,
segundo ERDEM et al. (2006), CHEANG E ZYDNEY (2004), GUADIX et al. (2004) e AKOUM et
al. (2004), na separao de lactose do leite, na padronizao do valor nutricional de diferentes
tipos de leite, na concentrao do leite para a fabricao de queijos, na recuperao de
protenas e na pr-concentrao do leite para a produo de iogurte.
De acordo com GIRALDO-ZUIRA et al. (2004), YADA (2004) e BRANS et al. (2004), a
MF pode ser empregada na indstria de laticnios adequando-se ao fracionamento de
protenas do soro e separao de microorganismos e glbulos de gordura do leite e do soro.
A MF reduz a quantidade de bactrias e esporos sem afetar o sabor do leite e promove a
durabilidade do produto tanto quanto a pasteurizao do leite, alm de promover a separao
dos glbulos de gordura de leite que possuem dimetro entre 0,1 m a 15 m. Segundo estes
autores, a MF em comparao com os mtodos convencionais, tal como a centrifugao, para
a remoo de glbulos de gordura, mais eficiente, pois no ocorre a quebra de molculas
que fornecem o sabor aos alimentos. GIRALDO-ZUIRA et al. (2004) ainda relatam que no
processo de concentrao por UF conveniente remover previamente os glbulos de gordura
por MF para evitar a obstruo dos poros das membranas de UF, e desta forma aumentar a

eficincia do processo. Segundo YADA (2004), a MF tambm pode ser utilizada para reter as
micelas de casena, para isto membranas cermicas podem ser utilizadas obtendo-se a casena
concentrada e pura. No entanto, para se obter um concentrado com as protenas totais do leite
membranas de UF so mais adequadas, porque retm, alm das casenas, as protenas
solveis.
CHOLLANGI & HOSSAIN (2006) examinaram o fracionamento do efluente da indstria
leiteira rico em lactose e protena usando membranas de UF. Trs membranas de MMC de 3,
5 e 10 kDa foram testadas para determinar a eficincia do processo. A recuperao da lactose
no permeado de aproximadamente 70-80 % pode ser conseguida usando a membrana de 3
kDa, 85 a 90 % com a membrana de 5 kDa e aproximadamente 100 % usando uma
membrana de 10 kDa. Segundo BUTYLINA et al. (2006), a UF e a NF so aplicadas no
processamento de leite a fim de aumentar a quantidade de protena no concentrado de protena
do leite.
De acordo com BALANNEC et al. (2005), AKOUNM et al. (2004) e KHIDER et al.
(2004), a NF vem sendo usada no tratamento de guas residuais na indstria de laticnios.
REKTOR E VATAI (2004) e ATRA et al. (2005) expem que a NF pode ser usada para
concentrar o permeado da UF do leite ou do soro. ATRA et al. (2005) obtiveram na NF alta
concentrao de lactose no concentrado com uma recuperao de 90 % e o permeado propcio
para a reutilizao na linha de produo. KHIDER et al (2004) estudaram a aplicao de
membranas de UF e NF para o tratamento do efluente proveniente da indstria leiteira. Nos
experimentos de UF, os autores puderam observar que quanto maior a diferena de presso
utilizada, maior a reteno de protena e lactose (sendo a reteno de protena maior que a de
lactose, para qualquer P); a reteno mxima obtida ficou em torno de 80 %.
MINHALMA et al. (2007) utilizaram a NF para a recuperar os nutrientes orgnicos do
soro do queijo Serpa. Segundo os autores, a NF tem uma vantagem quanto aos outros
processos, j que proporciona simultaneamente a concentrao e desmineralizao do soro,
levando a uma reduo nos custos finais e reduo do desperdcio de gua. O experimento
de concentrao mostrou que o processo permitiu uma recuperao de 80 % de gua, e
concentrao de nutrientes em cinco vezes em relao ao valor inicial.
Processos como eletrodilise e osmose inversa tambm encontram aplicaes na
indstria leiteira. Segundo STRATHMANN (2001), na indstria de laticnios, a ED pode ser
largamente empregada por possibilitar a separao de eletrlitos em processos como a
desmineralizao do soro do leite. GREITER et al. (2004) compararam o desempenho de uma
unidade de ED com uma de troca inica na desmineralizao do soro e relataram o melhor
desempenho da primeira tcnica em relao separao de ons e o menor consumo de
energia na operao. Uma etapa de pr-concentrao do soro, anterior a desmineralizao,
eleva o contedo de slidos para 20 % a 30 %, como conseqncia aumenta a capacidade de
utilizao da unidade e reduz o consumo de energia. Conforme YADA (2004) e GRANDISON &
LEWIS (1996), uma importante aplicao da ED na indstria de laticnios o fracionamento de
protenas baseado no seu ponto isoeltrico.

A OI, de acordo com BRANS et al. (2004), usada na remoo de gua do soro.
GIRALDO-ZUIGA et al. (2004) indicam que a OI pode ser usada na pr-concentrao ou
concentrao do leite e do soro, da lactose e de protenas do soro, e, tambm pode ser
utilizada no tratamento de efluentes da indstria de laticnios. BALANNEC et al (2005)
estudaram a aplicao de membranas de NF e OI (em um nico estgio) no tratamento do
efluente proveniente da indstria leiteira. Em todos os experimentos, o fluxo diminuiu
severamente logo no incio da filtrao, mas uma lavagem com gua a 25 C mostrou-se
eficiente para o restabelecimento do mesmo na maioria dos casos. As membranas de OI se
mostraram mais eficientes na reduo da carga orgnica. A reteno de lactose ficou entre
98,2 e 99,9 %.
Parmetros como temperatura, presso transmembrana, fluxo e pH vem recebendo
ateno dos pesquisadores. CHOLLANGI & HOSSAIN (2006) testaram a influncia da P na
reteno, em solues contendo protena e lactose. Constataram que para uma membrana de
UF de 10 kDa a reteno da protena baixa (aproximadamente 60%) em P menores que 2
bar, isto pode ser melhorado para aproximadamente 95 % em P de 2,5 a 3 bar. Ainda
concluem que a membrana de UF de 10 kDa eficiente para produzir duas fraes: o
permeado com teor elevado de lactose (aproximadamente 100 %) e o retido com elevado teor
de protena (aproximadamente 95 %).
CHEISON et al. (2007) realizaram a hidrlise com enzima protease, do isolado protico
do soro de leite, atravs de escoamento tangencial utilizando um reator de membranas. Os
resultados mostraram que o fluxo permeado no reator aumentou com o aumento da
temperatura do retido e com a concentrao da enzima.
SIMMONS et al. (2007) estudaram o efeito da temperatura na agregao das protenas
do soro e suas implicaes no fouling do leite. No leite a composio e a produo da camada
de fouling so controladas pelas reaes que formam os agregados das protenas do soro. Em
temperaturas inferiores a 75 C os agregados formados so pequenos e possuem ligaes
fracas, enquanto os agregados formados em temperaturas mais elevadas so densos e mais
rgidos. Isto foi atribudo a ligaes fracas, por foras de van der Waals, entre as partculas em
baixas temperaturas e ligaes covalentes fortes, por pontes dissulfito, em temperaturas mais
elevadas. O crescimento dos agregados ocorre em dois estgios, primeiro ocorre a formao
de pequenas partculas devido desnaturao da protena nativa, depois ocorre a aglomerao
e a agregao destas partculas devido a colises que ocorrem durante o escoamento e que
acabam formando partculas maiores. A adio de minerais em uma soluo de concentrado
protico 35 % resultou na formao de agregados menores e depsitos maiores, isto
explicado pelos autores por ligaes de clcio com a -Lg.
LEITE et al. (2006) afirmam que o sistema de filtrao tangencial largamente
utilizado em processamento do leite e soro de queijo, porque facilita o arraste dos solutos,
evitando que estes se acumulem sobre a superfcie da membrana.
RAO (2002) constatou que os fluxos permeados dos soros doce e cido foram
fortemente influenciados pelo pH. O autor descreveu que, para o soro doce, o fluxo aumenta

inicialmente com o aumento do pH, mas tambm aumenta o fouling posterior, provocando
uma reduo posterior do fluxo. A diminuio do pH implica em uma reduo do fluxo
inicial, mas tambm diminui o fouling posterior. O aumento no fluxo inicial em altos valores
de pH, para o soro, pode ser explicado por mudanas no estado das protenas do soro.
MOUROUZIS & KARABELAS (2006) estudaram o declnio do fluxo permeado de
solues de protenas isoladas do soro em membranas cermicas de MF com configurao de
escoamento transversal (dead end). Os testes envolveram cinco ciclos sucessivos de filtrao,
sob presso de filtrao fixa com retro lavagem intermdiaria. A anlise do declnio do fluxo
e a resistncia da membrana permeao foram utilizados para determinar mecanismos de
fouling. H evidncias de que fouling irreversvel se desenvolve efetivamente durante o
primeiro ciclo de testes e aparentemente no aumenta significativamente no decorrer do
experimento, no entanto, o fouling reversvel ocorre atravs de toda a srie de filtrao, sendo
mais intenso durante os primeiros minutos de cada ciclo. Os autores concluem que os
agregados de protenas do soro presentes na soluo de alimentao so responsveis, quase
exclusivamente, pelo fouling observado na membrana. E, ainda, sugerem que ao se trabalhar
com membranas de poros grandes, como no caso da MF o processo deve ser operado em
baixas presses.
BRANS (2006) enfatiza em seu trabalho que na produo de CP ou de IP utilizando
PSM, o controle do fouling crucial, porque todas as protenas so retidas, e a formao da
torta e de uma camada gel ocorrem facilmente. Para isolar as protenas do soro, a
seletividade muito importante, porque a pureza determina o valor comercial dos produtos,
especialmente para aplicaes farmacuticas. O valor mais elevado permite o uso de mdulos
mais caros, tipos de membrana e mtodos de controle de fouling, para obter um mximo de
seletividade no processo do fracionamento.
VAN REIS et al. (1999) demonstraram que uma seletividade tima pode ser obtida na
regio do fluxo dependente da presso. A seletividade tambm pode aumentar escolhendo o
projeto apropriado do mdulo e as condies de processo adequadas. Fatores tais como pH e
fora inica tambm tm um impacto significativo em sistemas de concentrao e separao
de protenas por membranas.
URIBE et al. (2007) realizaram um trabalho para predizer a reteno da lactose atravs
de dois modelos: Donnan Steric Partioning Model (DSPM) e Kedem-Spiegler Model (KSM).
A reteno e o fluxo permeado foram medidos utilizando solues de alimentao de lactose
pura e de soro ultrafiltrado; os experimentos foram realizados em pH constante e com
membranas de NF. Os dois modelos foram capazes de prever razoavelmente bem, tanto para o
padro quanto para o soro ultrafiltrado, as tendncias de reteno da lactose em funo do
fluxo permeado, porm que os melhores resultados foram previstos pelo modelo KSM. Vale
ressaltar que no modelo KSM a reteno de lactose pode ser predita na presena ou na
ausncia de ons, mas no fornecida qualquer informao sobre a estrutura da membrana. J
o modelo DSPM fornece informaes sobre a carga, a espessura, a porosidade e tamanho dos
poros das membranas. Este estudo contribui para um melhor entendimento do mecanismo de
transporte em processos de nanofiltrao; por exemplo, no caso do estudo realizado os autores

concluram que na presena de sais o valor de raio mdio dos poros aumentou e que para
todas as membranas testadas a reteno de lactose foi menor no caso do soro ultrafiltrado, o
que mostra o efeito da presena de sais no desempenho da membrana.
Diversas configuraes de membranas podem ser utilizadas no processamento de leite
e de soro. CHEANG & ZYDNEY (2004) apresentaram uma proposta para obteno de protena
isolada de soro em uma unidade de produo com dois estgios de UF com recirculao total
do concentrado. GUADIX et al. (2004) projetaram a instalao de uma unidade de UF de soro
de queijo em processo contnuo. AKOUM et al. (2004) aplicaram sistemas de membranas
vibratrias de UF e OI no tratamento de guas de processos da indstria de laticnios.
BHATTACHARJEE et al. (2006) tambm utilizaram sistemas de membranas vibratrias e um
aumento de 33 % do fluxo foi observado em 1 minuto com o disco da membrana girando a
300 rpm comparados ao valor correspondente da membrana estacionria. Os autores
atriburam este resultado reduo da polarizao por concentrao, um dos principais fatores
limitantes dos PSM.
A tecnologia de membranas uma aliada da indstria de laticnios porque os
componentes fracionados do leite permitem uma qualidade mais constante de produtos de
consumidor (por exemplo, queijo) e do desenvolvimento de produtos novos, tais como
revestimentos comestves e peptdios bioativos. Conseqentemente, o fracionamento do leite
conduz a um mais eficiente e diversificado uso do leite. As tcnicas de separao com
membranas so uma parte essencial da maioria das novas tcnicas desenvolvidas para a
produo de produtos lcteos funcionais como os peptdeos bioativos.
BUTYLINA et al. (2006) afirmam que a NF, devido MMC apropriada, til para
separao de peptdeos do leite com massas molares entre 1 a 2 kDa que possuem atividade
biolgica (so apropriados para uso em alimentos infantis devido ausncia de
alergenicidade). As membranas negativamente carregadas foram aplicadas para enriquecer
peptdeos catinicos com propriedades antibacterianas no soro de queijo. Os autores
concluram que a melhor maneira de faz-lo era pela filtrao atravs da membrana de UF
com uma massa molar de corte razoavelmente baixa (2,5 kDa) e, ento, usar a NF para a
purificao. No processo de UF ficaram retidas molculas maiores que os peptdeos de at 2
kDa e usando a NF os peptdeos foram separados da lactose.
A NF, de acordo com MARTINEZ-FEREZ et al. (2006), pode ser usada na produo de
derivados de lactose como os oligossacardeos do leite de cabra atravs da filtrao tangencial
usando dois estgios com membranas cermicas de UF e NF obtendo um concentrado de mais
de 80 % em oligossacardeos que so usados em formulaes de produtos para crianas a fim
de combater doenas. RICHARDS (2002) relata que possvel fabricar iogurte com baixo teor
de lactose atravs dos PSM como UF e NF, e assim atender consumidores que apresentam m
absoro ou intolerncia lactose.
Os PSMs tambm podem ser utilizados na produo de queijos. Segundo CASTRO E
GERLA (2005) e ATRA et al. (2005) as principais vantagens atribudas utilizao da UF para
produo de queijos, em relao ao processo tradicional, consistem em um aumento de

rendimento, possibilidade de fabricao contnua e automatizada de queijos, economia de mo
de obra e ingredientes, e a produo do soro com menor poder poluente. A UF usada na
recuperao e no fracionamento das protenas do soro e na produo de queijos de leite
ultrafiltrado, como Minas Frescal, Cottage, Feta e cream cheese. Segundo LEITE et al. (2006),
o Brasil, apesar de ser um pas relativamente novo, na implementao de PSM, j possui
plantas de membranas de UF, inclusive no processamento de queijos. O queijo Minas Frescal,
por exemplo, produzido com auxlio da tcnica de UF e vem sendo comercializado no Brasil
desde 1988, podendo ser encontrado na forma tradicional e tambm com baixo teor de
gordura. VEIGA E VIOTTO (2001) estudaram a fabricao de queijo Petit Suisse por UF de leite
coagulado; tambm mencionam a produo do queijo Quark por UF, que resulta em
economia de energia, maior rendimento e maior valor nutritivo.
Existem diversos mtodos que podem ser usados para o aproveitamento do soro.
Muitos destes mtodos so baseados na tecnologia de separao com membranas, para
produzir novos produtos que respondam melhor s expectativas atuais dos consumidores. De
acordo com LEITE et al. (2006) e SMITH (2003) a UF pode ser usada para se obter
concentrados de protenas a partir do soro de queijo, que posteriormente sero adicionados a
iogurtes, queijos, carnes processadas, alimentos infantis e bebidas. A MF serve para controlar
o contedo de gordura do soro de queijo antes da UF, e remover microrganismos do leite e do
soro de queijo sem necessidade da alta temperatura de pasteurizao.
REKTOR E VATAI (2004) aplicaram mtodos de filtrao por membranas para tratar o
soro de queijo Mussarela e encontrar uma aplicao potencial. Os autores utilizaram a MF
para remover gorduras e bactrias, a NF foi usada para a concentrao do soro microfiltrado, a
UF foi usada para a concentrao de protenas e associada a DF obtiveram protena purificada
e concentrada e, finalmente, a OI foi usada para reduzir o teor de gua do soro.
Segundo SMITH (2003), o soro em p produzido por evaporao no possui
composio balanceada, visto que alguns componentes so degradados devido exposio ao
calor, enquanto outros se apresentam em grandes concentraes (lactose e sais). A introduo
da tecnologia de separao por membranas, especialmente a UF e em alguns casos a NF, tem
resultado na produo de soro em p com alto valor funcional e nutricional. De acordo com
GIRALDO-ZUIRA et al. (2004) a UF no promove a desnaturao das protenas do soro
mantendo as propriedades funcionais dos CPs inalteradas. A concentrao e desmineralizao
simultneas do soro pela NF desenvolvem produtos que podem ser utilizados em vrias
indstrias de alimentos, porm, neste caso, a lactose tambm retida. Por este motivo, desde
1981, a UF se tornou a tcnica mais utilizada para recuperar as protenas solveis do soro. A
vantagem de se aplicar a UF reforada pela sua relativa simplicidade, baixo consumo
energtico e, segundo ATRA et al. (2005) pela elevada eficcia na separao de protenas do
soro.
ANTUNES (2003) conclui em seu trabalho que para o processo de obteno de CP com
80 % de protena necessrio o emprego da DF para promover uma remoo mais eficiente
de lactose e sais minerais. A DF alm de proporcionar a produo de um concentrado protico
mais puro, permite tambm melhor controle da composio final do CP. CHEANG E ZYDNEY

(2004) obtiveram uma recuperao acima de 90 % para as protenas -La e -Lg quando a DF
foi utilizada; XU et al. (2000) usaram duas etapas de DF no concentrado do soro de queijo da
UF para concentrar as protenas como as Igs e glicomacropeptdios, esses dois compostos
passaram pelo processo de secagem por spray drier e no permeado restaram protenas como
-La, -Lg e BSA.
YEE et al. (2007) investigaram o uso de uma planta de UF multi-estgios, com
produo contnua, para obter uma concentrao de protenas por volta de 80 %. Parte do
retido de cada estgio foi reciclada para manter a corrente de entrada desejada naquele
mdulo de membrana. Os permeados de todas as correntes foram combinados e parte foi
reciclada e misturada com a corrente nova de alimentao. A proporo de permeado
reciclado foi usada para controlar a vazo do retido e a sua composio ao nvel desejado. A
adio de gua capacita que espcies no proticas, que no so desejadas no retido,
permeiem pela membrana, aumentando a concentrao de protena nos slidos totais do
retido. No entanto, quanto mais espcies no proticas permeiam pela membrana, a
quantidade de slidos totais presente no retido diminui.
MORTENSON et al. (2008) realizaram testes cromatogrficos e sensoriais para
determinar se o tipo de queijo e as diferentes tcnicas de processamento influenciam no flavor
de produtos derivados de soro como CPs e IPs. Segundo os autores o flavor de concentrados e
isolados proticos tem sido considerado o principal fator limitante do uso destes produtos na
indstria alimentcia. Aps a fabricao do queijo, o soro foi drenado, separado, pasteurizado
e fracionado por UF. A UF foi utilizada para reduzir a massa do produto e para remover
lactose e sais a fim de que a massa de protenas representasse pelo menos 35 % da massa seca
do CP. Os autores encontraram que o flavor no foi afetado pelas diferentes tcnicas de
processamento do CP e IP, porm, no teste sensorial as amostras de CPs foram classificadas
como mais doces do que as de IP, provavelmente devido a uma maior concentrao de
lactose, por este motivo o IP foi classificado com menos flavor que o CP. Os testes
cromatogrficos indicaram que o CP tem um nmero maior de substncias aromticas, em
particular molculas de baixa massa molar, o que pode limitar a sua utilizao em produtos
alimentcios, por isso uma maior purificao protica amplia as possibilidades de utilizao
deste produto.
Alm de concentrar as protenas do leite interessante separ-las a fim de realar as
suas propriedades funcionais. Os mtodos relatados para isolar as protenas so baseados na
agregao trmica da -La, a cromatografia de troca inica, a precipitao e a UF ou uma
combinao destes mtodos. Usando a precipitao e a UF, GESAN-GUIZIOU et al. (1999)
apud BRANS et al. (2004), relatam uma purificao de 52-83 % para -La e 85-94 % para a -
Lg.
BHATTACHARJEE et al. (2006) realizaram um estudo com o objetivo de obter uma
separao relativa da -Lg do concentrado de protena do leite pelo fracionamento da protena
usando a UF em dois estgios com membranas planas na forma de discos, com MMC de 30 e
10 kDa sob agitao, seguido por cromatografia de membrana de troca inica (IEMC). Antes
do fracionamento foram realizadas uma centrifugao, MF e UF, esta ltima operando no

modo de DF descontnua em quatro estgios, para obter o concentrado de protena do leite
livre de lactose. A centrifugao e a MF foram realizadas para remover os principais
poluentes como matrias coloidais, partculas suspensas de casena e lipdios. Na DF os
autores usaram uma membrana de polietersulfona de 5 kDa, com objetivo de obter um
concentrado rico em protenas e remover a maioria da lactose e dos minerais. Os efeitos de
vrios parmetros, como o pH da soluo, a presso transmembrana, a velocidade de agitao
e a velocidade de rotao da membrana, no fluxo permeado e na reteno da UF foram
estudados. Um fluxo 36 % mais elevado foi obtido com uma alimentao em pH 2,8
comparado quele em pH de 5,6 com uma presso transmembrana fixa de 5,010
5
Pa, este
resultado decorrncia do efeito do pH no equilbrio do monmero-dmero da -Lg. Uma
pureza de 87,6 % da -Lg foi obtida no filtrado da cromatografia de membrana de troca
inica.
CHEANG & ZYDNEY (2004) fizeram um estudo para examinar o uso de um sistema de
filtrao em dois estgios com fluxo tangencial para a purificao de -La e -Lg da protena
isolada do soro. Para a separao foram usadas membranas de 100 e 30 kDa em srie. Duas
estratgias de purificao foram examinadas: na primeira estratgia, uma membrana de 100
kDa foi usada na primeira etapa para remover BSA enquanto -La e -Lg permeavam. O
permeado desta primeira etapa foi ento usado como alimentao para a etapa 2, onde a -La
e -Lg eram separadas usando uma membrana de 30 kDa; na segunda estratgia a
combinao de membranas foi invertida, a membrana de 30 kDa foi utilizada na etapa 1 para
obter -La pura no permeado da soluo, enquanto ficavam retidas -Lg e BSA; o retido
coletado era, ento, separado na etapa 2 usando a membrana de 100 kDa. Para alcanar
elevada purificao e rendimento, as filtraes nas etapas 1 e 2 foram operadas no modo de
DF para lavar a protena mais permevel pela membrana. Como resultado foi obtido um
rendimento de -La de 95 % na Estratgia I e 85 % na Estratgia II, porm, na Estratgia II
obtiveram um produto de -La significativamente mais concentrado porque a -La foi
recuperada diretamente da primeira etapa usando uma nica DF. Os rendimentos para -Lg, o
componente com massa molar intermediria, ficou em torno de 70 % em ambas as estratgias.
O rendimento menor de -Lg foi relacionado presena de -La residual da primeira etapa,
juntamente com uma transmisso relativamente alta de BSA pela membrana.
ZYDNEY & VAN REIS (2001) utilizam o conceito de fluxo tangencial de alto
desempenho (HPTFF), que uma tecnologia emergente que possibilita a separao de
protenas com massas molares semelhantes. HPTFF promove a separao de protenas com
alta resoluo, explorando interaes estricas (tamanho) e eletrostticas (carga). Segundo os
autores, seletividades de mais de 100 vezes podem ser alcanadas facilmente para modelos de
sistemas binrios com protenas com cargas superficiais muito diferentes, quando
caractersticas de pH e fora inica da soluo so ajustadas e usando membranas carregadas
para aumentar a reteno da protena tambm carregada. O modo DF empregado para
separao das protenas a fim de eliminar problemas de associao em altas concentraes no
produto retido, gerando alta purificao e ao mesmo tempo bons fatores de rendimento.
Segundo EBERSOLD & ZYDNEY (2004), estudos experimentais recentes demonstram
que sistemas de membrana podem ser usados para separar variantes de protena que diferem
em um nico resduo de aminocido, embora a seletividade e o fator de purificao sejam

relativamente baixos. O objetivo do trabalho foi examinar teoricamente os efeitos da carga da
membrana e a distribuio de tamanhos de poros na separao de variantes de protena por
HPTFF. Uma seletividade significativamente maior obtida reduzindo o tamanho de poro e
aumentando a densidade de carga da superfcie da membrana. As interaes eletrostticas que
surgem fazem diferena nas pequenas mudanas de carga que ocorrem entre uma protena
nativa e sua variante. Com a seleo das propriedades da membrana os autores conseguiram,
teoricamente, uma purificao de 100 vezes e um rendimento de 90% para a separao de
variantes que diferem em um nico grupo de lisina.
ALVAREZ et al. (2006) utilizaram um concentrado protico de soro comercial com 65
% de protena como matria-prima para obteno de uma soluo enriquecida com -La. O
processo proposto consiste das seguintes etapas: (1) precipitao, (2) centrifugao (I), (3)
lavagem do precipitado, (4) centrifugao (II) e, finalmente, (5) solubilizao do precipitado.
Na etapa 1, -La, Ig e BSA foram precipitadas simultaneamente acrescentando cido ltico
como seqestrante do on Ca
2+
em pH de 4,0. A precipitao de -La neste caso reversvel,
ou seja, quando o pH original foi restabelecido a protena tornou-se solvel novamente. A
soluo obtida nesta etapa continha basicamente -La e -Lg, com variaes da temperatura
de lavagem (etapa 3), foi removida boa parte da -Lg. A soluo obtida no final apresentou
uma pureza de 74 % de -La, alm disso, mais de 99 % da -Lg presente na soluo de
alimentao foi removida do processo.
BRANS et al. (2004) relatam que possvel empregar propriedades especficas da
protena para aumentar a seletividade do processo de UF. O ajuste do pH e adio de sal
influenciam nas interaes eletrostticas e estricas entre as protenas e a membrana. VAN
REIS et al. (1999) examinaram quantitativamente os efeitos de carga na membrana em
combinao com o pH, em separaes de protena, usando HPTFF. Foram realizados
experimentos de filtrao com membranas de polietersulfona com MMC de 100 kDa
carregadas positiva ou negativamente, utilizando uma mistura de BSA e um fragmento de
anticorpo (Fab) derivado de DNA recombinante; estas duas protenas tm massas molares
semelhantes (69 kDa para BSA e 45 kDa para o Fab) mas diferem significativamente nas
caractersticas eltricas (o PI do BSA 4,8 enquanto que para o Fab 8,5). Os autores
conseguiram, atravs de uma membrana carregada negativamente, e uma soluo com pH 8,4,
purificao de BSA com rendimentos de 94 %..
A identificao de alternativas para um adequado aproveitamento do soro de leite de
fundamental importncia em funo de sua qualidade nutricional e funcional, do seu volume e
de seu poder poluente. Ao mesmo tempo, o processamento do soro em produtos diversos
contribui para a melhoria do meio ambiente e proporciona ganhos s indstrias. O Brasil um
pas que apresenta um enorme potencial para o aproveitamento do soro lcteo. A expressiva
produo brasileira de queijo gera grande quantidade dessa matria-prima, porm a maioria
do soro gerado ainda indevidamente descartada. Tendo em vista a grande e recente
quantidade de trabalhos realizados visando o aproveitamento do soro, alguns com resultados
muito bons, verificam-se a importncia e aplicabilidade nas mais diversas reas da indstria
de alimentos e farmacutica dos concentrados e isolados proticos obtidos a partir do soro de
queijo. A tecnologia de membranas associada a outros processos de separao representa uma

estratgia promissora para aproveitar os componentes do soro, gerar produtos de elevada
qualidade, e ainda, diminuir o problema ambiental das indstrias de laticnios.

Captulo 3
Materiais e Mtodos

Neste captulo so apresentados os equipamentos, as membranas e os reagentes
qumicos utilizados na realizao dos experimentos. Ainda, so descritos os mtodos
analticos para anlise das amostras e a metodologia experimental para a realizao dos
experimentos de concentrao, purificao e fracionamento das protenas.
3.1 Preparao do soro
O soro de queijo em p utilizado neste trabalho foi doado pela Eleg Alimentos
(Teutnia, RS), proveniente da fabricao do queijo Mussarela com um teor de slidos totais
de aproximadamente 6 %.
O soro de leite em p a fase lquida resultante da produo de queijo que
concentrado em evaporadores e posteriormente, seco em spray drier (torre de secagem) sendo
envasado em embalagens de 25 kg.
O soro em p foi utilizado por ser a forma mais estvel e homognea para o uso do
soro de leite, pois contm todos os constituintes nas mesmas propores relativas ao soro
original; desta forma podemos garantir uma homogeneidade inicial em todos os experimentos,
sem contar com variabilidades que ocorreriam se trabalhssemos com amostras in natura e,
portanto heterogneas de soro. Alm disso, pode ser armazenado por um tempo maior (12
meses) sem danos para suas propriedades fsicas ou nutricionais, minimizando, desta forma, o
fator microbiolgico, e reduzindo os custos de transporte e armazenamento.
O soro de queijo em p se caracteriza por ser um p fino e homogneo de cor
amarelada, sabor suave e odor prprio do produto. As caractersticas fsico-qumicas e
nutricionais do soro so mostradas na Tabela 3.1 e na Tabela 3.2, respectivamente, segundo a
especificao tcnica do produto fornecida pela empresa.
MATERIAIS E MTODOS 57

Tabela 3.1: Caractersticas fsico-qumicas do soro em p.
Anlises
Unidade
Mnimo Mximo
Umidade % - 3
Acidez % 0,02 0,1
pH - 6 6,6
Massa especfica g. cm
-3
0,5 0,61
% percentual mssico
Fonte: a tabela adaptada de Eleg Alimentos (2007)

Tabela 3.2: Caractersticas nutricionais do soro em 100 g.
Composio Unidade Valores
Carboidratos (lactose) g 77
Protenas g 12
Gorduras Totais g < 1
Colesterol mg < 5
Fibra Alimentar g 0
Clcio mg 440
Sdio mg 675
Valor energtico kcal 350
Fonte: Eleg Alimentos (2007)

De acordo com a Tabela 3.2 os carboidratos correspondem quantidade total de
lactose presente no soro.
Para a realizao dos experimentos, o soro foi reconstitudo dissolvendo manualmente
o soro em p em gua destilada na temperatura de 50 C.
Na etapa de concentrao do soro o volume inicial a ser ultrafiltrado foi de
aproximadamente 30 L (27 L de gua no tanque + 2,6 L de gua de volume morto + 1,86 kg
de soro em p). As concentraes mdias iniciais e o percentual em base seca de lactose e de
protena foram iguais a 42 g.L
-1
(72,4 %) e 9 g.L
-1
(15,6 %), respectivamente, tomando a
massa especfica do soro reconstitudo como 1,04 g.L
-1
. As quantidades de gorduras para fins
de clculos foram consideradas desprezveis por apresentarem valores muito baixos. Dessa
forma, considerou-se que o soro constitudo somente por protenas, lactose e sais. Portanto,
a concentrao de sais no soro reconstitudo foi determinada pela diferena da concentrao
de slidos totais pelo somatrio de protenas e lactose correspondendo a 7 g. L
-1
(12 %) de
sais.
3.2 Reagentes Analticos

Tabela 3.3 apresenta os reagentes utilizados para a realizao das anlises e da
limpeza das membranas. Para o preparo de todas as solues aquosas foi utilizada gua
destilada; exceto para as anlises de eletroforese, onde foi utilizada gua deionizada.
58 MATERIAIS E MTODOS

Tabela 3.3: Reagentes utilizados, frmula, grau de pureza e fornecedor.
Reagente Frmula molecular Pureza Fornecedor
Anlise de acar - Mtodo do DNS
Hidrxido de Sdio NaOH 95,0% - 100,5% CAQ
cido 3,5 - dinitrosaliclico C
7
H
4
N
2
O
7
Mn. 99% VETEC
Tartarato de sdio e
potssio
KNaC
4
H
4
O
6
.4H
2
O 99% - 100% VETEC
Anlise de acar - Mtodo de Dubois
Fenol (80%) C
6
H
5
OH Mn. 99% VETEC
cido Sulfrico

H
2
SO
4
95,0% - 98% Quimex
Anlise de Slidos Totais
cido Ntrico HNO
3
Mn. 65% Dinmica
Areia fina - comercial -
Anlise de protena - Mtodo de Lowry
Sulfato de Cobre CuSO
4
.5H
2
O
Citrato de sdio C
6
H
5
Na
3
O
7
.2H
2
O 99% - 100,5% Cromato
Carbonato de sdio NaCO
3
99,5% Dinmica
Folin Ciocalteu W + Mo + H
3
PO
4
N.I* Cromato
Anlise de Protena - Eletroforese
Acrilamida CH
2
.CHCONH
2
99%
Amersham
Biosciences
Bisacrilamida CH
2
.(CHCONH)
2
CH
2
99%
Amersham
Biosciences
Temed - 99%
Amersham
Biosciences
Persulfato de Amnio - 99%
Amersham
Biosciences
Glicina H
2
NCH
2
CO
2
H 99% USB Corporation
Tris
(Tris[hydroxymethyl]amino
methane)
NH
2
C(CH
2
OH)
3
99,8% - 100,1% USB Corporation
Sodium Dodecyl Sulfate
(SDS)
CH
3
(CH
2
)
11
OSO
3
Na 99% USB Corporation
cido actico CH
3
COOH P.A Merck
Metanol CH
3
OH P.A. Sigma
Comassie blue R250 - - Sigma
-mercaptoetanol HS-CH2-CH2-OH P.A.
Amersham
Biosciences


Tabela 3.3: Reagentes utilizados, frmula, grau de pureza e fornecedor (cont.).
Reagente Frmula molecular Pureza Fornecedor
Cromatografia Gel
Fosfato de sdio
monobsico
NaH
2
PO
4
P.A. Merck
Fosfato de sdio dibsico Na
2
HPO
4
P.A. Merck
Acetato de sdio anidro CH
3
COONa

P.A. Merck
cido actico CH
3
COOH P.A Merck
Blue Dextran 2000 - -
Amershan
Biosciences UK
Limited
Coluna Superose
TM
12 - - General Eletric
Limpeza
cido Ctrico C
6
H
8
O
7
99,5% VETEC
Hipoclorito de sdio NaOCl Comercial ALZ
Kit p/ determinao de
Cloro
- Comercial Lamotte Company
Padres moleculares
Lactose C
12
H
22
O
11
H
2
O P.A CAQ
- lactoglobulina -Lg 99 % Sigma
lactoalbumina -La 99 % Sigma
Albumina do soro bovina
(BSA)
BSA Mn. 96% Sigma
Ferritina
- 99 % General Eletric
Aldolase
Conalbumina
Ovalbumina
Anidrase Carbnica

3.3 Membranas
A Tabela 3.4 apresenta as membranas utilizadas durante os experimentos, juntamente
com suas respectivas caractersticas. Cada uma delas recebeu uma sigla para facilitar a citao
no decorrer do trabalho.


Tabela 3.4: Caractersticas das membranas utilizadas nos experimentos.
Membrana
Tamanho
de poro/
MMC
Material
rea
(m)
Espaa-
dor
(mil)
Mdulo
T
mxima

(C)
Faixa
de pH
Fabricante
UF - 6001 5.000 Da
Polieter-
sulfona
0,28 80 Espiral 55 1,8-11
Koch
membrane
Systems
UF - 6002 5.000 Da
Polieter-
sulfona
0,22 43 Espiral 55 1,8-11
Koch
membrane
Systems
UF - 7001 10.000 Da
Polieter-
sulfona
0,28 80 Espiral 55 1,8-11
Koch
membrane
Systems
MF - 7002 0,1 m
Polieter-
sulfona
0,22 80 Espiral 55 1,8-11
Koch
membrane
Systems
RZ04 70.000 Da NI 0,0061 - Plana 100 0,5-13
Sepa
membranes
HNO6 20.000 Da NI 0,0061 - Plana 100 0,5-13
Sepa
membranes
VCWP 0,1 m NI 0,0061 - Plana NI NI -
UF - C20 20.000 Da
ZrO
2

TiO
2

0,0047 - Tubular 120 1-14
Andritz
Separation
UF - C50 50.000 Da
ZrO
2

TiO
2

0,0047 - Tubular 120 1-14
Andritz
Separation
*NI - no informada pelo fabricante.

A Figura 3.1 mostra as fotografias dos trs mdulos de membranas utilizados para
realizao dos experimentos.

Figura 3.1: Fotografias das membranas: espiral (A), tubular(B) e plana (C).
Para o processo de concentrao e purificao (UF e DF) das protenas do soro foram
testadas trs membranas: UF-7001, UF-6001 e UF-6002.
A
C
B

Para as tentativas de fracionamento foram utilizadas as membranas: MF-7002, RZ04,
HN06, VCWP, UF-C20 e UF-C50.
3.4 Equipamento
O processo de UF foi realizado numa planta piloto WGM-KOCH PROTOSEP IV
localizada no Laboratrio de Tecnologia Qumica LATEQ da UFRGS. A unidade piloto de
UF/MF est esquematizada na Figura 3.2.

Figura 3.2: Representao esquemtica simplificada da unidade piloto de UF.
A unidade piloto possui os seguintes equipamentos, de acordo com a Figura 3.2:
tanque de alimentao (1) - dois tanques foram usados dependendo do volume de
soro a ser tratado, a Figura 3.3 apresenta as fotografias dos tanques utilizados.
o (A) tanque de alimentao encamisado de ao inoxidvel 304, com volume
de 75 L, fabricado pela SULINOX; possui um agitador e um sistema de
controle de temperatura que opera na faixa de temperatura de 25 a 150C;
o (B) tanque de alimentao de ao inox com capacidade de 12 L; possui
uma serpentina de aquecimento ligada a um banho termosttico, marca
Lauda, o qual possui controle analgico de temperatura;

Figura 3.3:Fotografias dos tanques de alimentao (A) e (B).
bomba pneumtica (2) tipo diafragma, modelo VERSAMATIC VM.50, opera com
ar comprimido que passa pelo sistema composto por um Kit FLR (filtro,
lubrificador e regulador de ar);
pr-filtro de cartucho (3), fabricado pela CUNO, constitudo de uma carcaa de
PVC e elemento filtrante de polipropileno com tamanho de poro nominal de 1m;
manmetros (4) e (6) de ao inoxidvel 316, que esto instalados num t Sanitech
com uma cmara com diafragma, que evita contato do manmetro com o fluido de
processo. Os manmetros possuem escala de 0 a 10,5 kgf. cm
-2
;
carcaa para mdulo da membrana (5), trs carcaas diferentes foram usadas,
dependendo do tipo de membrana requerida para o processo. A Figura 3.4
apresenta as fotografias das carcaas utilizadas neste trabalho.
o (A) carcaa para mdulo espiral, com 30 cm de comprimento e 5,8 cm de
dimetro, feito em ao inoxidvel 316;
o (B) carcaa para mdulo de membrana cermica cilndrica com 25 cm de
comprimento, 10 e 25 mm de dimetro interno e externo, respectivamente,
feito em ao inoxidvel 340;
o (C) carcaa para membrana plana, construda de ao inoxidvel 316,
permite a instalao de membranas com rea til de 61 cm
2
.

Figura 3.4: Fotografias das carcaas para mdulos de membrana: (A) espiral, (B) tubular e
(
C) plana.
A B C
A B

A utilizao de uma bomba pneumtica tipo diafragma VERSAMATIC tem como
objetivo evitar o contato do fluido com as partes metlicas da bomba, reduzindo a
possibilidade de contaminao do fluido.
O ar comprimido para o acionamento da bomba foi fornecido por um compressor
SCHULZ com capacidade de 175 L e potncia de 2 hp com vazo volumtrica de 0,00472
m
3
.s
-1
. A presso no equipamento foi ajustada, primeiramente, na vlvula reguladora de ar da
bomba pneumtica e, aps, atravs da vlvula de contrapresso com diafragma que se localiza
na sada do concentrado do mdulo de UF.
As presses nas extremidades do mdulo de UF foram medidas pelos manmetros
instalados na entrada (4) e na sada (6).
O pr-filtro (3), instalado antes do mdulo de UF, tem o objetivo de reter as impurezas
em suspenso da corrente de alimentao, evitando o entupimento do mdulo e,
conseqentemente, aumentando a sua durabilidade.
3.5 Metodologia Experimental
Os ensaios so constitudos inicialmente por testes de compactao e medidas de fluxo
permeado de gua, com o objetivo de preparar e caracterizar as membranas para os ensaios de
UF e MF para permeao do soro. Todos os experimentos foram realizados, no mnimo, em
duplicata.
3.5.1 Compactao das Membranas e Medidas de Fluxo de gua
Os testes de compactao so executados atravs da imposio de uma presso maior
do que a de operao at que o fluxo permeado de gua torne-se constante com o tempo. O
objetivo realizar o adensamento da microestrutura das membranas, para que durante os
ensaios posteriores tal fenmeno no acontea (ou ocorra de forma insignificante), o que
poderia levar a concluses errneas sobre fouling, por exemplo.
Foram colocados no tanque de alimentao aproximadamente 10 litros de gua
destilada na temperatura de 25
o
C. A bomba foi acionada e regulou-se a vlvula de contra
presso at alcanar a maior P possvel a fim de que o adensamento da microestrutura fosse
garantido. A gua ficou recirculando de 10 a 150 minutos (dependendo da membrana) para
estabilizar o sistema, ou seja, para que o sistema entrasse em equilbrio operacional. A
compactao era encerrada quando o fluxo de gua tornava-se constante.
Medidas de fluxo de gua foram realizadas antes e aps cada experimento com o
objetivo de avaliar a permeabilidade hidrulica da membrana. Testes de permeao hidrulica
tm como enfoque principal avaliar o comportamento das membranas em relao gua com
respeito aos valores de fluxo de permeado, obtidos em diferentes presses. Alm disso, serve
de referncia para a avaliao do estado das membranas aps a passagem do efluente pelas
mesmas.

As medidas de fluxo de permeado foram realizadas atravs do mtodo volumtrico
direto. O mtodo consiste em calcular os dados de fluxo a partir da medida do tempo que um
fluido leva para preencher o volume fixo de uma proveta.
3.5.2 Concentrao e Purificao das Protenas do Soro
Trs membranas foram testadas para utilizao nos experimentos de concentrao e
purificao das protenas do soro: a UF-7001, a UF-6001 e a UF-6002. A escolha da
membrana depende da qualidade do fluxo permeado e das caractersticas de reteno, porque
a membrana deve reter todas as protenas e ser permevel lactose e aos sais.
Membranas de ultrafiltrao so comercializadas pela sua massa molar de corte
(MMC), a qual geralmente definida, como a massa molar do menor componente que ser
retido pela membrana com uma eficincia de 95 %. Assim uma membrana com MMC de
10.000 Da deve reter pelo menos 95 % das molculas com esta massa molar. A massa molar
de corte de uma membrana normalmente determinada atravs de medidas de rejeio
utilizando-se solues homogneas de solutos (por exemplo, polietilenoglicol PEG ou
dextranas) com massa molar variada e conhecida.
Para avaliar a reteno realizamos uma caracterizao das membranas verificando a
reteno da membrana para molculas com massa molar conhecida (dextranas) e superior a
MMC informada pelo fabricante. Passamos pelas membranas uma soluo de 0,15 % ou 1,5
g/L de dextrana com massa molar de 15 a 20 kDa nas membranas UF-7001, UF-6001 e UF-
6002. A concentrao de dextrana foi avaliada no permeado e no concentrado atravs do
mtodo fenol sulfrico, e realizamos o clculo de reteno da membrana atravs destes dados.
A melhor membrana aquela que apresentar 100 % ou a maior reteno possvel para as
molculas de dextrana, que possuem massa molar similar a menor protena de interesse neste
trabalho (-La, 14 kDa).
Aps a escolha da melhor membrana iniciaram-se os testes de concentrao e
purificao das protenas propriamente ditas. O primeiro passo foi realizar a compactao e
medidas de fluxo de gua em diversas presses transmembrana.
A seguir, dissolveu-se soro em p em gua destilada, obtendo-se 30 L de soluo de
soro, conforme explicado na seo 3.1 Preparao do soro.
A soluo de soro foi colocada no tanque de alimentao da unidade, e ento foram
realizados testes de permeao do efluente; estes testes foram realizados da mesma forma que
os testes de permeao hidrulica, porm o fluido o soro. O objetivo analisar a influncia
da presso no fluxo de permeado e verificar a existncia ou no de um fluxo limite dentro do
intervalo de presses testado.
Os experimentos realizados na unidade piloto de UF foram efetuados em duas etapas
distintas. A primeira etapa teve como objetivo concentrar as protenas do soro de queijo
atravs do processo de UF e a segunda etapa consiste em purificar estas protenas usando a

DF. Para cada uma destas etapas foram obtidos concentrados com caractersticas diferentes,
os quais possuem aplicaes de acordo estas caractersticas.
A presso transmembrana foi mantida em 2 bar e a vazo da corrente de alimentao
do soro de queijo foi de aproximadamente 840 L.h
-1
, condies determinadas em trabalhos
anteriores (BOSCHI, 2006) e confirmadas neste trabalho. A temperatura do soro foi mantida
constante em 50 C, tendo em vista a temperatura de sada do soro do processo de fabricao
do queijo (~ 60 C) e a temperatura mxima admissvel para a membrana (~ 55 C).
Nos primeiros dez minutos, o sistema operou em reciclo total, isto , as correntes de
permeado e concentrado retornavam para o tanque de alimentao, para homogeneizar a
soluo e para o sistema entrar em equilbrio trmico: aps, somente a corrente concentrada
retornava ao tanque, e o permeado foi sendo recolhido at que se obtivesse a concentrao
desejada. Medidas diretas de fluxo permeado foram realizadas a cada 15 minutos. A cada
meia hora de operao foram coletadas, simultaneamente, amostras das correntes de
permeado e de concentrado em frascos de vidro mbar. As anlises feitas nas amostras foram:
pH, condutividade eltrica, extrato seco total e as concentraes de lactose e de protena.
Para a concentrao das protenas do soro de queijo o seguinte processo pode ser
visualizado: o soro flui, sob presso, atravs da membrana, a qual permite a passagem de
gua, sais e lactose, que iro constituir a soluo chamada de permeado cujas partculas so de
tamanho inferior aos poros da membrana; as protenas so partculas de tamanho superior em
relao aos outros constituintes mencionados do soro, logo, so retidos pela membrana e esta
soluo denominada de concentrado. A Figura 3.5 apresenta, de forma esquematizada, o
processo de concentrao do soro por UF.

Figura 3.5: Representao esquemtica do processo de UF.
A UF foi operada associada a DF que consiste em adicionar gua durante o processo
de concentrao, para lavar os componentes de mais baixa massa molar (lactose e sais), e
conseqentemente aumentar a purificao do retido (protenas), o mesmo volume de gua que
adicionado na DF retirado no permeado. A Figura 3.6 apresenta de forma esquematizada
os processos de DF no concentrado da UF.

SORO
Permeado
Concentrado
UF
Legenda:

Protena
Lactose
Sais

Figura 3.6: Representao esquemtica do processo de DF.
Quatro experimentos diferentes foram realizados para verificar quais condies
permitiriam uma maior purificao das protenas, os quais esto descritos a seguir.
Experimento 1 a soluo inicial foi concentrada at um volume final de 6 L no tanque
de alimentao (FC = 5); a seguir duas DF foram realizadas utilizando-se 6 L de gua para
cada uma (DF1 e DF2).
Experimento 2 a soluo inicial foi concentrada at um volume final de 6 L no tanque
de alimentao (FC = 5); a, seguir cinco DF foram realizadas: as duas primeiras ( DF1 e DF2)
com 6 L cada e mais trs (DF3, DF4 e DF5) com 3 L cada.
Experimento 3 a soluo de soro foi concentrada at um volume final de 5 L (FC = 6);
em seguida realizaram-se duas DF (DF1 e DF2) com 5 L de gua para cada uma.
Experimento 4 a soluo de soro foi concentrada at um volume final de 5 L (FC = 6).
Em seguida realizaram-se quatro DF: a DF1 e a DF2 de 5 L e a DF4 e a DF5 de 2,5 L.
Vale ressaltar que entre a etapa de concentrao e as DFs no foi realizado enxge
nem limpeza da membrana, isto , o processo foi contnuo. A Figura 3.7 traz o esquema geral
das etapas de concentrao e purificao das protenas do soro realizadas neste trabalho.

Concentrado Protico
Purificado
Permeado
DF
gua
Concentrado 1
+

Figura 3.7: Resumo esquemtico das estratgias utilizadas para concentrao e purificao das protenas do
soro.
3.5.3 Fracionamento das protenas do soro
O concentrado protico obtido foi separado em alquotas para a realizao dos
experimentos com membranas de UF e de MF, em mdulos plano, espiral e tubular, com
tamanho de poro nominal ou MMC selecionados para a separao.
Nesta etapa foram monitorados o pH e a temperatura, fatores importantes para que
ocorram mudanas conformacionais na molcula de Lg, ou seja, para que esta molcula
forme dmeros e octmeros e assim ocorra o fracionamento, com a -Lg ficando retida,
enquanto a La passa para o permeado. O esquema para o fracionamento pode ser observado
na Figura 3.8.

Figura 3.8: Representao esquemtica do processo de fracionamento desejado.
Concentrado
Protico
Purificado
Permeado
Concentrado
UF / MF

-Lg
-La
Lactose

CONCENTRADO
PROTICO
PURIFICADO

Todas as membranas testadas para a separao de protenas foram compactadas, e
caracterizadas em relao ao fluxo permeado de gua e de soro em no mnimo quatro presses
transmembrana. A presso transmembrana de operao foi determinada fazendo a curva J
p
vs
P; a vazo de alimentao utilizada foi a vazo correspondente ao melhor P. Os
experimentos de separao das protenas para cada membrana foram realizados conforme o
descrito a seguir.
Membrana MF-7002
Quando o mdulo utilizado era o MF-7002 devido maior taxa de permeado, o
volume inicial de concentrado protico usado foi de 6 L no tanque de alimentao.
Um volume inicial de 6 L de concentrado protico, obtido nas etapas anteriores, foi
adicionado ao tanque de alimentao, aquecido a 40 C. A temperatura foi reduzida, porque
em concentrados proticos, em temperaturas prximas a 55 C existe uma tendncia das
molculas de -La polimerizarem (FOX & MCSWEENEY, 1998; WIT, 1998). O pH da soluo
foi ajustado para 4,6 (pH onde a -Lg forma octmero) com a adio de uma soluo 20 % de
cido ctrico. O volume inicial de 6 L foi reduzido a 3 L, e em seguida quatro DFs de 3 L
foram realizadas com gua destilada pr-aquecida a 40 C, acidificada ao pH de 4,6 atravs da
soluo de cido ctrico; a vazo de alimentao foi mantida em 700 L.h
-1
; a presso
transmembrana utilizada para a separao foi de 1,75 bar; o fluxo permeado foi medido a cada
15 minutos e amostras foram coletadas ao final de cada etapa.
Membranas VCWP, RZO4 e HN06
Os testes com estas membranas foram realizados com o mdulo plano (61 cm
2
de rea
til) e com dois litros de concentrado protico purificado obtido na etapa de concentrao e
purificao.
Para as membranas VCWP e RZ04 o concentrado foi aquecido a 40 C, e acidificado
ao pH de 4,6 com cido ctrico 20 %, assim como o realizado para a MF-7002.
Para a membrana HN06, optou-se por realizar o experimento a temperatura ambiente
(25 C). Nesta membrana tambm no foi necessrio adicionar cido, pois a soluo se
encontrava no pH 6,3. Segundo WONG et al. (1999), para valores de pH compreendidos entre
5,20 e 7,50 (faixa que compreende o pH do soro) e temperatura ambiente, todas as variantes
genticas de -Lg existem principalmente como um dmero estvel de dois monmeros
unidos por ligaes no covalentes.
Os experimentos foram realizados com uma vazo de alimentao de 620 L.h
-1
, e
presso transmembrana de 1,75 bar. Inicialmente, o sistema operou em modo de reciclo total,
durante 20 minutos, para garantir homogeneidade na concentrao e equilbrio de
temperatura, somente ento, passou-se a operar em modo batelada com retorno para o tanque
de alimentao apenas da corrente retida, sendo o permeado recolhido em outro tanque. Aps

30 minutos de operao em modo batelada amostras de permeado e concentrado foram
coletadas.
Para estas membranas, no foi possvel reduzir o volume inicial metade ou realizar
DF devido a limitaes do equipamento tais como: volume insuficiente no tanque de
alimentao, rea de membrana limitada, conduzindo a uma taxa de permeado muito baixa.
Foram analisados apenas o fluxo permeado e as concentraes de protena na corrente
permeada e concentrada.
Membranas UF-C20 e UF-C50
Para a membrana UF-C20 (tubular) o volume inicial de concentrado protico
purificado no tanque de alimentao foi igual a 3 L. O fluxo permeado foi medido a cada 100
mL de permeado coletados, e amostras retiradas a cada 500 mL. O experimento foi conduzido
at que 1000 mL de permeado fossem coletados. O pH da soluo foi mantido em 6,3 e a
temperatura em 25 C; a P foi mantida em 2,25 bar e a vazo de alimentao em 620 L.h
-1
.
Para a membrana UF-C20 ainda foi testada a tentativa de fracionamento com a
soluo do soro reconstitudo, i.e., antes da concentrao e purificao das protenas , para
verificar se no havia interferncias no fracionamento devido ao processo de concentrao e
purificao. O pH da soluo foi mantido em 6,3; a temperatura em 25 C, a P foi mantida
em 2,25 bar e a vazo de alimentao em 620 L.h
-1
; o volume inicial no tanque de
alimentao foi de 3 L e amostras foram coletadas a cada 500 mL de permeado recolhido e o
experimento foi conduzido at que 1000 mL de permeado houvessem sido recolhidos.
Para a membrana UF-C50 foram realizadas duas estratgias. Na estratgia 1 o pH da
soluo foi mantido em 6,3; a temperatura em 25 C. Na estratgia 2 o pH da soluo foi
acidificado at 4,6; e a temperatura utilizada foi de 40 C. Para ambas estratgias a P foi
mantida em 2,25 bar e a vazo de alimentao em 400 L.h
-1
, o volume inicial no tanque era de
3 L e o experimento era interrompido no momento que 1000 mL de permeado tivessem sido
coletados. O fluxo permeado era medido a cada 250 mL e amostras coletadas a cada 500 mL.
A Figura 3.9 traz o resumo das estratgias utilizadas para o fracionamento das
protenas do soro a partir do concentrado protico obtido do soro.


Figura 3.9: Representao esquemtica das estratgias utilizadas para fracionamento das
protenas do concentrado protico obtido do soro.

3.6 Mtodos Analticos
As caractersticas das amostras do concentrado e do permeado dos processos da UF,
DF e fracionamento foram analisadas conforme descrito nos procedimentos a seguir.
Informaes mais detalhadas das tcnicas utilizadas esto apresentadas no Anexo A.
3.6.1 Anlise de Extrato Seco Total - Mtodo Gravimtrico
O valor de extrato seco total ou de slidos totais (ST) o parmetro adotado para a
verificao da concentrao total de matria seca no voltil das amostras de concentrado e
permeado de soro de queijo. A medida de slidos totais foi realizada atravs da tcnica
gravimtrica de acordo como mtodo apresentado pelo Laboratrio Nacional de Referncia
Animal (LANARA, 1981), Portaria 001/81; a preciso do mtodo de 5 %.
3.6.2 Anlise de pH
Este parmetro importante como medida de precauo em relao faixa de pH
permitida pelas membranas. Alm disso, proporciona a observao do comportamento do
soro, em relao ao pH, durante os experimentos.
As anlises de pH foram realizadas atravs do pHmetro DIGIMED, modelo DM20. O
eletrodo utilizado do tipo DME CV4 com ponte eletroltica de KCl e provido de termo-
compensador DMF-NI. As medidas de pH foram realizadas na preparao de solues de
limpeza da membrana e das amostras de concentrado e permeado. A preciso da medida
apresenta incerteza de 0,1 e confiana de 95 %. O equipamento foi calibrado regularmente
com padres de pH 4 e 6,86 conforme as instrues do fabricante.
MF-7002

pH=4,6
T=40 C
Vazo=700 L.h
-1
P=1,75 bar
4 DF de 3L

HN06

pH=6,3
T=25 C
Vazo=620 L.h
-1
P=1,75 bar

RZ04

pH=4,6
T=40 C
Vazo=620 L.h
-1
P=1,75 bar

VCWP

pH=4,6
T=40 C
Vazo=620 L.h
-1
P=1,75 bar

UF-C50

1. pH=6,3
T=25 C
2. pH=4,6
T=40 C
Vazo=400 L.h
-1
P=2,25 bar

UF-C20

pH=6,3
T=25 C
Vazo=620 L.h
-1
P=2,25 bar

CONCENTRADO
PROTICO
PURIFICADO

3.6.3 Anlise de Condutividade Eltrica
A presena de substncias com carga nas amostras lquidas detectada pela medida de
condutividade eltrica. Solues que apresentam grande quantidade de compostos inorgnicos
conduzem eletricidade, enquanto que substncias orgnicas no dissociadas conduzem
pobremente a corrente eltrica. Sendo assim, a anlise de condutividade eltrica auxiliou na
avaliao da reteno de sais na UF do soro.
A medida da condutividade eltrica uma medida indireta da concentrao de ons na
soluo. A condutividade eltrica foi determinada para as solues de alimentao e de
permeado. O equipamento utilizado para esta anlise foi o condutivmetro DIGIMED DM-31,
com eletrodo modelo DMC-010M e K=1 cm
-1
. A preciso da medida tem uma incerteza de
3,16 %, sendo que o equipamento era calibrado com uma soluo padro de 1413 S a 25C,
fornecida pela OAKTON.
3.6.4 Anlise de Lactose - Mtodo do cido Dinitrossaliclico - DNS
As anlises de lactose foram realizadas segundo MILLER (1959). Os acares redutores
foram quantificados por espectrofotometria com comprimento de onda de 570 nm, utilizando-
se uma curva padro de lactose cuja concentrao varia no intervalo de 1 a 5 mg.mL
-1
.
O mtodo do DNS pode ser usado para determinao de acares totais devido ao seu
dinamismo, pois permite analisar vrias amostras ao mesmo tempo.
3.6.5 Anlise de Acar - Mtodo Fenol Sulfrico
As anlises de concentrao de dextrana nas amostras de concentrado e de permeado
para caracterizao das membranas, da etapa de concentrao e purificao do soro, foram
realizadas pelo mtodo fenol sulfrico.
Este mtodo consiste na determinao espectrofotomtrica de acares atravs da
reao com o fenol em meio cido e baseia-se na determinao de acares simples,
polissacardeos e seus derivados incluindo os metil-steres com grupos redutores livres, aps
a desidratao dos mesmos pelo cido sulfrico e subseqente complexao dos produtos
formados com o fenol. A mudana da cor da soluo medida na regio do visvel e
proporcional quantidade de acares presentes na amostra. A reao sensvel e de cor
estvel. As anlises foram feitas de acordo com DUBOIS et al. (1956). Os teores de dextrana
foram determinados por espectrofotometria em um comprimento de onda de 490 nm
utilizando uma curva padro de dextrana (1%) no intervalo de 10 a 70 mg.
De acordo com DUBOIS et al. (1956), o mtodo simples, rpido e sensitivo
fornecendo resultados com uma boa reproduo.
O reagente estvel, porm a soluo necessita de uma curva padro para cada acar
a ser analisado (SILVA et al., 2003).

3.6.6 Determinao da Protena Total - Mtodo de Lowry
O mtodo de Lowry (LOWRY et al. 1951) um mtodo colorimtrico para estimao
quantitativa de protenas totais. O princpio do mtodo baseia-se numa mistura contendo
molibdato, tungstato e cido fosfrico, (reagente Folin-Ciocalteau), que sofre uma reduo
quando reage com protenas, na presena do catalisador cobre (Cu
+2
), e produz um composto
com absoro mxima em 750 nm.
O mecanismo de reduo do reagente de Folin-Ciocalteau por protenas ocorre
diretamente atravs das cadeias laterais de alguns aminocidos (tirosina, triptfano, cistena,
asparagina e histidina), que contribuem com quatro eltrons, ou atravs da retirada de dois
eltrons de cada unidade tetrapeptdica dos peptdeos e protenas, que facilitada pela
formao do quelato entre o cobre e os peptdeos/protenas.
O mtodo de Lowry empregado por se tratar de um mtodo de leitura direto e, por
isso, expedito. Opta-se por um mtodo de leitura direta, porque nas experincias com as
protenas comerciais se tem de lidar com um elevado nmero de amostras. Os teores de
protenas totais foram determinados por espectrofotometria em um comprimento de onda de
750 nm utilizando uma curva padro de BSA no intervalo de 0,1 a 0,5 mg.mL
-1
.
A principal vantagem do mtodo de Lowry a sua alta sensibilidade e, por isto, tem
sido utilizado para a determinao da concentrao de protenas totais em diversos meios,
sendo eles: plasma sangneo, saliva humana, tecido animal, plantas, suco biliar, membranas,
leite, derivados do leite e produtos alimentcios (ZAIA et al., 1998).
Segundo os mesmos autores, o mtodo de Lowry recomendado, pois no estudo
comparativo de metodologias o mesmo mostrou-se sensvel, com melhor exatido, menor
consumo de amostra e, dependendo do caso, menos suscetvel a alguns tipos de interferentes.
3.6.7 Anlise de Protena - Eletroforese SDS PAGE (Sodium
Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis of
Proteins)
A eletroforese uma tcnica que se baseia no fato de todas as protenas apresentarem
carga quando colocadas a um pH diferente do seu ponto isoeltrico, permitindo deste modo
analisar amostras proticas heterogneas. Devido carga que possuem, as protenas migram
por ao de um campo eltrico; esta migrao diferente para cada protena sendo funo da
respectiva densidade de carga (razo carga/massa).
A eletroforese normalmente efetuada num suporte que pode ser slica gel, gis de
amido, gar, papel de filtro, acetato de celulose, poliacrilamida, etc. Os gis apresentam
vantagens em relao a outros suportes porque so meios porosos em que o tamanho dos
poros da mesma ordem de grandeza do tamanho das molculas de protena. Assim, eles
funcionam como uma peneira molecular e a separao acontece em funo da massa molar.

O gel de poliacrilamida o mais utilizado no s porque a sua porosidade permite uma
melhor separao relativamente a outros gis, como tambm por ser um polmero sinttico,
preparado a partir de reagentes de elevado grau de pureza. Este tipo de gel tem tambm a
vantagem de ser quimicamente inerte, estvel numa gama extensa de pH, temperatura e fora
inica (SAMBROOK et al., 1989).
A polimerizao da acrilamida inicia-se pela adio de persulfato de amnio ou
riboflavina. O TEMED (N, N, N,N-tetrametiletilenodiamina) adicionado para acelerar o
processo de polimerizao. No sistema persulfato de amnio - TEMED, este ltimo catalisa a
formao de radicais livres no persulfato e este por sua vez inicia a polimerizao da
acrilamida (SAMBROOK et al., 1989).
A maior parte das eletroforeses de protenas em gis de acrilamida efetuada em
condies desnaturantes (SDS-PAGE). Utiliza-se uma soluo tamponada para dissolver a
amostra conseguindo-se deste modo a dissociao de todas as protenas nas suas sub-unidades
polipeptdicas. O composto utilizado para efetuar a dissociao o detergente inico dodecil
sulfato de sdio (SDS). A amostra desnaturada por aquecimento, cerca de 95C durante 10
minutos, na presena de um excesso de SDS e de reagente tilico (-mercaptoetanol) para
quebrar as ligaes dissulfeto. Assim, nestas condies o SDS liga-se aos polipeptdios
segundo uma razo de massas constante (1,4 gramas de SDS por grama de polipeptdio). As
cargas intrnsecas do polipeptdio tornam-se insignificantes quando comparadas com as
cargas negativas provenientes das molculas de detergente ligadas. Desta forma, todos os
complexos SDS - polipeptdio possuem densidades de carga idnticas e migram em gis de
poliacrilamida com porosidade adequada estritamente em funo da sua massa molar
(SAMBROOK et al., 1989).
A revelao dos gis pode ser feita pelo mtodo de colorao utilizando Coomassie
blue.
Esta tcnica foi utilizada para verificar a eficincia dos experimentos de fracionamento
das protenas na ltima etapa do trabalho.
3.6.8 Cromatografia gel
A cromatografia gel tambm conhecida como cromatografia de excluso em gel,
cromatografia de filtrao em gel e filtrao gel. O princpio do mtodo baseia-se na partio
de molculas entre a fase mvel e uma fase estacionria. A fase estacionria tem o efeito de
uma peneira molecular, um mtodo usado para a separao de substncias de acordo com o
tamanho e forma moleculares. Estas peneiras moleculares so redes porosas tridimensionais,
constitudas por cadeias lineares de polmeros que se entrecruzam e formam a matriz do gel.
Os gis mais usados so os obtidos pela polimerizao de cadeias de polissacardeos ou os
constitudos pela polimerizao de cadeias de poliacrilamida. As partculas que formam o gel
tm poros e o tamanho dos poros funo do grau de entrecruzamento das cadeias de
polmeros. A possibilidade de variar o tamanho do poro torna este mtodo til para a

separao de diferentes substncias e a sua utilizao na determinao das massas molares das
mesmas (YADA, 2004).
A facilidade de uma molcula de soluto penetrar na rede do gel funo do seu
tamanho e forma molecular: as molculas menores penetram nos poros da matriz, tendo um
movimento mais lento atravs da coluna; enquanto as molculas maiores passam pela coluna
juntamente com a fase mvel e so eludas primeiro. Quando uma mistura de macromolculas
colocada na parte superior de uma coluna de gel, ao se adicionar uma soluo tampo para
provocar a eluio, as molculas comeam a sair da coluna com o tampo em fraes
diferentes e por ordem decrescente da sua massa molar. Podem ser estabelecidas relaes
empricas entre o volume de solvente necessrio para a sua eluio e a respectiva massa
molar; estas relaes variam para as diferentes classes de macromolculas (polissacardeos,
protenas globulares, etc).
A filtrao em gel uma tcnica bastante utilizada na separao de misturas de
macromolculas de massas molares diferentes e tambm para o isolamento e purificao de
protenas. Este mtodo foi utilizado para verificar a agregao da -Lg em dmeros e
octmeros nas amostras de soro, para as condies dos experimentos.
3.7 Limpeza do Sistema de Membranas
Um procedimento de limpeza foi utilizado para restituir as caractersticas de fluxo e
reteno da membrana e prevenir o desenvolvimento de microrganismos no sistema. A
limpeza qumica consistiu nas seguintes etapas: enxge com gua destilada, limpeza alcalina,
limpeza cloro alcalina (somente no caso das membranas polimricas: UF-7001, UF-6001, UF-
6002, MF-7002) e limpeza cida. Estas etapas foram realizadas sempre respeitando os limites
de pH e temperatura da membrana recomendados pelo fabricante.
A limpeza realizada ao final de cada experimento, conforme a recomendao do
fabricante consistiu de sete etapas conforme descrito a seguir.
1. Enxge do sistema com gua destilada: aps a remoo do concentrado do
sistema, gua destilada entre 45 a 50
o
C e 0,5 bar na entrada, em pequenos
volumes (5 L), foi adicionada e rapidamente recirculada. Este procedimento foi
efetuado 6 a 7 vezes com o objetivo de remover a soluo residual do processo de
concentrao de uma maneira rpida e eficiente. A seguir foi adicionada gua
destilada, nas mesmas condies descritas acima, porm com intervalos maiores
de recirculao. Este procedimento realizado at o momento em que o permeado
se apresente visualmente limpo.
2. Limpeza alcalina: nesta etapa o sistema preenchido com gua destilada
ajustando-se o pH entre 10 e 10,5 com hidrxido de sdio (NaOH) na temperatura
de aproximadamente 50
o
C; esta soluo recirculada no sistema sob ausncia de
presso manomtrica por 15 a 20 minutos.

3. Enxge com gua destilada: gua recirculada no sistema por 20 minutos para
remoo da soluo alcalina, mantendo-se a temperatura de 50 C e sob ausncia
de presso.
4. Limpeza cloro-alcalina: o sistema preenchido com gua destilada, ajustando-se o
pH entre 10 e 10,5 com hidrxido de sdio (NaOH) e adicionando-se de modo
controlado hipoclorito de sdio (NaOCl) at, no mximo, 200ppm de cloro. Para
verificar a concentrao de cloro durante a limpeza, foi usado um kit La Motte
mod. PCT-DR com escala 0 a 200 ppm.
5. Enxge com gua destilada gua recirculada no sistema por 20 minutos para
remoo da soluo cloro-alcalina, mantendo-se a temperatura de 50 C e sob
ausncia de presso.
6. Limpeza cida: o sistema preenchido com gua destilada, adicionando-se cido
ctrico at atingir pH 2, esta soluo mantida no sistema por 10 minutos na
temperatura de aproximadamente 50C a uma presso de 0,5 a 1,5 bar.
7. Enxge com gua destilada e medida de fluxo de gua para verificar se as
condies iniciais foram restitudas.

Captulo 4
Resultados e Discusso
Neste captulo so apresentados e discutidos os resultados da etapa experimental onde
primeiramente foram realizados testes para determinar a membrana adequada para ser
utilizada nos experimentos de UF e DF nos testes de concentrao e purificao das protenas
do soro de queijo. Na segunda etapa verificou-se a melhor estratgia em termos de FC e
quantidade e volume de DF para se obter a maior concentrao e purificao protica. Por
fim, foram testadas as membranas para o fracionamento das protenas. Todos os dados
experimentais apresentados neste captulo encontram-se tabelados no Apndice B.
4.1 Concentrao e Purificao das protenas
Esta seo divida em quatro partes: seleo da membrana; apresentao dos
resultados de medidas do fluxo de gua e de soro para a membrana selecionada; resultados
dos experimentos de UF e DF para obter a maior purificao protica; resultados detalhados
da estratgia que apresentou melhores resultados para os parmetros analisados.
4.1.1 Seleo da membrana
No primeiro momento realizamos a escolha da membrana apropriada para realizao
dos experimentos de concentrao e purificao de protenas, ou seja, uma membrana que
apresentasse uma reteno alta para as protenas, e baixa para a lactose e os sais. Alm do
mais, era necessrio que o fluxo de permeado fosse adequado para realizao dos
experimentos de concentrao. As membranas disponveis no laboratrio para esta etapa
foram: UF-7001, UF-6001 e UF-6002.
O primeiro procedimento foi realizar as medidas de fluxo permeado (J
p
) de gua pura.
Este experimento foi realizado a temperatura de 30 C. A vazo de alimentao mdia para as
membranas testadas foi 700 L.h
-1
. O modo de operao foi o reciclo total, buscando manter as
propriedades do sistema constantes. Comeamos empregando a P mais alta, deixamos o
sistema estabilizando trmica e hidrodinamicamente por 25 minutos e a seguir medimos o
fluxo de gua nas seguintes presses transmembrana: 4, 3, 2, 1 bar; os resultados obtidos
esto apresentados na Figura 4.1.
RESULTADOS E DISCUSSO 77

0
100
200
300
400
500
600
700
800
0 1 2 3 4 5
J
p
(
L
.
m
-
2
.
h
-
1
)
P(bar)
UF-6001
UF-6002
UF-7001

Figura 4.1: Fluxo de gua vs presso transmembrana, para as membranas UF-6001, UF-6002 e UF-7001, a 30
C e vazo de alimentao mdia de 700 L.h
-1
.
Pela anlise da Figura 4.1 observa-se que o fluxo de gua para as trs membranas tem
um comportamento semelhante, quanto maior a P maior o fluxo de gua. Porm, a UF-
7001 e a UF-6002, possuem fluxos de gua semelhantes para todas as P, mesmo possuindo
MMC diferentes (10 e 5 kDa, respectivamente). A UF-6001 possui fluxos de gua menores
que as outras duas membranas em todas as P, mesmo possuindo MMC igual a da UF-6002.
Esta grande diferena de fluxo permeado tem a ver com modificaes que a membrana do
mdulo UF-6002 sofreu na sua estrutura devido a uso intensivo ou limpezas qumicas
agressivas.
Neste primeiro momento o que ficou evidente que o fluxo de gua na presso
transmembrana de 2 bar estava acima do valor mdio declarado pelo fabricante que era de 100
L.m
-2.
h
-1
para UF-7001 e 80 L.m
-2.
h
-1
para a UF-6001 e para a UF-6002, porm para a UF-
6002 esta diferena foi muito mais expressiva do que para a UF-6001. Este fato foi um alerta
para uma possvel degradao das membranas UF-7001 e UF-6002.
Aps a medida de fluxo de gua, foram realizados testes com solues de dextrana
com massa molar na faixa de 15 a 20 kDa e percentual mssico de 0,15 %. Utilizou-se o
modo de operao de reciclo total, temperatura de 30 C, mediu-se o fluxo e amostras de
permeado e concentrado em quatro presses: 1, 2, 3 e 4 bar foram coletadas. O fluxo
permeado da soluo com dextrana foi semelhante ao fluxo de gua para todas as membranas
em todas as presses, uma vez que a soluo de alimentao estava bastante diluda.
A partir das amostras coletadas em cada presso realizou-se a anlise de concentrao
de dextrana atravs do mtodo de fenol sulfrico e avaliou-se a reteno da membrana,
obtendo os resultados que esto apresentados na Figura 4.2.
78 RESULTADOS E DISCUSSO

0
20
40
60
80
100
120
0 1 2 3 4 5
R
e
t
e
n
o

(
%
)
P(bar)
UF-6001
UF-6002
UF-7001

Figura 4.2: Reteno de dextrana vs presso transmembrana, para as membranas UF-6001, UF-6002 e UF-
7002, a 30 C e vazo de alimentao mdia de 700 L.h
-1
.
Pode-se observar no grfico que para a membrana UF-6001 a reteno foi de 100 %,
porm para a UF-7001 no foi superior a 30 %, e no houve reteno de dextrana para a UF-
6002, este resultado evidencia que estas duas ltimas membranas no so adequadas para a
realizao dos experimentos de concentrao, pois apresentaram baixa reteno para
molculas com massa molar de 15 a 20 kDa, que superior a MMC das membranas, e por
isso, deveriam ficar retidas.
Aps estes experimentos de caracterizao, a membrana UF-6001 que reteve 100 %
das molculas de referncia, foi selecionada para a realizao dos experimentos de
concentrao e purificao protica. A membrana devido a usos anteriores pode encontrar-se
com MMC superior a original (5 kDa), mas este fato no interfere na realizao dos
experimentos, porque a menor protena de interesse tem 14 kDa e como foi demonstrado esta
membrana capaz de reter molculas com massa molar semelhante.
4.1.2 Fluxos permeados para a gua e para o soro

Primeiramente foram realizados experimentos medindo-se o fluxo permeado em
diferentes presses transmembranas com gua e, posteriormente, com soro. A presso
transmembrana corresponde diferena entre a mdia aritmtica das presses de entrada e
sada do mdulo de membrana e a presso da corrente permeada.
A Figura 4.3

apresenta o fluxo permeado para a gua e para o soro em funo da
presso transmembrana.

0
10
20
30
40
50
60
70
80
0
50
100
150
200
250
0 1 2 3 4
J
p

s
o
r
o

(
L
.
m
-
2
.
h
-
1
)
J
p
g
u
a

(
L
m
-
2
h
-
1
)
P (bar)
gua
soro

Figura 4.3: Fluxo de gua e de soro vs presso transmembrana para a membrana UF-6001, T=50 C, vazo de
-1
.
Atravs da Figura 4.3 observa-se que o fluxo de gua aumentou linearmente com a
presso transmembrana, enquanto que o fluxo para o soro no possui comportamento to
linear. Alm disso, para as mesmas condies operacionais ocorreu uma diferena
significativa nos fluxos permeados do soro e da gua. Esse mesmo comportamento foi
encontrado por REKTOR & VATAI (2004), ATRA et al. (2005) e CHOLLANGI & HOSSAIN (2006)
e BUTYLINA et al. (2006) em seus trabalhos, isto , os fluxos da soluo do soro eram mais
baixos do que os fluxos da gua pura em todas as presses; possveis causas para este fluxo
mais baixo incluem a interaes entre a membrana e a soluo, efeitos de viscosidade
cinemtica e difusividade mssica.
O fluxo permeado do soro menor do que o fluxo de gua evidencia que o efeito de
polarizao por concentrao bastante significativo para o soro na concentrao inicial e
este efeito tende a se agravar medida que o soro vai sendo concentrado. Neste caso pode-se
afirmar que o aumento de fluxo limitado pelo aumento da camada polarizada, isto , o
aumento de presso transmembrana contra balanceado pelo aumento da resistncia total.
Cabe ressaltar que devido a limitaes do equipamento, no foi possvel operar em presses
superiores a 3,75 bar.
Como resultado destas medidas e tendo em vista trabalhos anteriores (BOSCHI, 2006)
decidiu-se trabalhar na presso de 2 bar. Sabe-se que quanto maior a presso aplicada maior a
quantidade de soluto que chega superfcie da membrana o que pode intensificar ainda mais o
fenmeno de polarizao por concentrao e a tendncia de formao de fouling na
membrana. Segundo BRANS (2006), o aumento de P acarreta em um aumento inicial do
fluxo, entretanto, acelera a formao de fouling, prejudicando o fluxo em operaes de longa
durao.

4.1.3 Comparao das estratgias para concentrao e purificao
protica
Nesta seo so apresentados os resultados para as quatro estratgias de concentrao
e purificao testadas, levando-se em conta o FC inicial e o nmero e os volumes para cada
DF.
Nos experimentos 1 e 3 foram testados os fatores de concentrao (FC) 5 e 6,
respectivamente. Em cada um dos experimentos realizaram-se duas DF, para o Experimento 1
a DF1 e a DF2 com volumes iguais a 6 litros cada uma e a para o Experimento 3 a DF1 e a
DF2 o volume foi de 5 litros para cada uma. Estes dois experimentos iniciais foram
exploratrios, para que consegussemos programar experimentos mais longos, ou seja, com
mais etapas de DF, mas que pudessem ser realizados em um nico dia, devido a problemas de
deteriorao do soro; alm do mais, precisvamos identificar qual seria o menor volume que
poderia ficar no sistema, sem prejudicar o funcionamento da bomba. Em trabalhos anteriores
o volume havia sido determinado igual a 6 litros (BOSCHI, 2006). Os experimentos 2 e 4 so
idnticos ao 1 e 3, respectivamente, porm, realizaram-se mais etapas de DF, no Experimento
2 alm da DF1 e DF2 de 6 L, foram realizadas a DF3, a DF4 e a DF5 com volumes iguais a 3
L para cada; no Experimento 4 alm da DF1 e DF2 de 5 L, realizaram-se a DF3 e a DF4 com
2,5 L para cada uma. Portanto, os Experimentos 1 e 2 possuem semelhana nos resultados at
a segunda diafiltrao, assim como os Experimentos 3 e 4.
A Figura 4.4 apresenta o percentual de protena em base seca em funo da etapa do
processo. Nos grficos o incio da ultrafiltrao identificado por UFi, e o final por UFf. As
diafiltraes so identificadas por DF e pela etapa que correspondem (1, 2, 3, 4 ou 5).
0
10
20
30
40
50
60
70
80
UF i UF f DF1 DF2 DF3 DF4 DF5
P
r
o
t
e
n
a

(
%
)
Etapas
1
2
3
4

Figura 4.4: Percentual protico no concentrado (base seca) vs etapas do processo para os experimentos 1, 2, 3 e
4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
O percentual mssico inicial de protena para os quatro experimentos o mesmo,
cerca de 15 %, ao final da UF este valor atinge 35 % para os Experimentos 1 e 2. Para o

Experimento 1, ao final da DF1, chegou-se a 40 % de protena, e no Experimento 2 o
percentual protico atingiu 37 %. Ao final da DF2 o concentrado atingiu 43 e 41 % de
protena, para os Experimentos 1 e 2 respectivamente. O Experimento 1 foi encerrado nesta
etapa. Enquanto para o Experimento 2 foram realizadas as DF3, DF4 e DF5 de 3 L cada,
obtendo-se 46, 52 e 62 % de protena, respectivamente.
Para os Experimentos 3 e 4 ao final da UF atingiu-se 42 % de protena, para ambos
experimentos. No Experimento 3 e 4 aps as DF1 atingiu-se 53 e 51 % e aps a DF2 atingiu-
se 59 e 57 % de protena, respectivamente. O Experimento 3 foi encerrado nesta etapa, no
Experimento 4 foram realizados a DF3 e DF4 obtendo-se 61 e 70 % de protena.
Em geral o que se observa que para os experimentos com maior FC (Experimentos 3
e 4) foram obtidos percentuais proticos ligeiramente maiores ao final da UF; esta diferena
acentuada com as DF, sendo expressivas tanto para as DF de volume maior, quanto para as de
menor volume.
As Figuras 4.5 e 4.6 apresentam o percentual mssico de lactose e sais, em base seca,
no concentrado em funo das etapas do processo.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
L
a
c
t
o
s
e

(
%
)
Etapas
1
2
3
4

Figura 4.5: Percentual de lactose no concentrado (base seca) vs etapas do processo para os Experimentos 1, 2, 3
e 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
No incio dos experimentos o percentual mssico (base seca) de lactose em torno de
72 a 73 %; ao final da UFf, para os Experimentos 3 e 4 os percentuais de lactose caem para 57
%, enquanto que para os Experimentos 1 e 2 para 64 %. Durante as diafiltraes estes
percentuais vo sendo reduzidos chegando a 57 % para o Experimento 1 e 42% para o
Experimento 3, onde foram realizadas apenas duas DFs. Para os experimentos 2 e 4 foram
alcanados valores bem mais baixos, de 35 e 29 %, respectivamente.

Em relao ao teor salino, observa-se na Figura 4.6 que nos Experimentos as amostras
iniciam com 12 % de sais. Para todos os quatro experimentos o processo mostra-se eficiente
na remoo de sais, sendo que ao final da UF, o percentual se aproxima de zero, mostrando
que boa parte do sal havia sido removida do concentrado protico.
0
5
10
15
20
25
30
S
a
i
s

(
%
)
Etapas
1
2
3
4

Figura 4.6: Percentual de sais no concentrado (base seca) vs etapas do processo para experimento 1, 2, 3 e 4,
para a membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
Percebe-se que no Experimento 4 os resultados de concentrao protica so melhores
do que os obtidos para os experimentos 1, 2 e 3. Vale ressaltar que no Experimento 4 o
concentrado da UF, antes da DF, foi de 5 L, e esta diminuio de volume implicou em uma
maior concentrao protica final e em um menor volume de gua para a etapa de DF. Para o
Experimento 2 utilizou-se 21 L de gua para a etapa de DF e obteve-se um concentrado
protico com 62 % em base seca; enquanto que para o Experimento 4 foram utilizados 15 L
de gua para a DF e o percentual protico foi de 70 % em base seca.
Verificou-se que as DF de volumes menores so bastante efetivas na remoo de sais e
lactose, para o Experimento 4, por exemplo, houve uma grande reduo da concentrao dos
outros elementos, em relao quantidade de protena, nas ltimas duas DFs de 2,5 L.
Com base nestes resultados, as condies de trabalho do Experimento 4 foram
escolhidas como sendo a melhor estratgia a ser utilizada para se obter uma maior purificao
protica. Neste experimento se obteve um concentrado com70 % de protena em base seca,
com um teor de lactose inferior a 30 %, e livre de sais, com menos etapas de DF e com menor
volume de gua.


4.1.4 Resultados para a melhor estratgia de purificao protica
Nesta seo so apresentados os resultados obtidos para o Experimento 4, j que os
resultados para os outros trs experimentos apresentaram o mesmo comportamento, apenas
atingindo concentraes finais diferentes.
A Figura 4.7 mostra o comportamento do fluxo permeado de soro em funo do fator
de concentrao volumtrico para a etapa de UF.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
1 2 3 4 5 6 7
J
p
(
L
.
m
-
2
h
-
1
)
FC

Figura 4.7: Fluxo permeado vs fator de concentrao volumtrico para Experimento 4 na etapa de UF,
membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
Observa-se que o fluxo permeado diminui medida que o fator de concentrao
aumenta at o FC de 3,5; em FCs maiores h uma tendncia do fluxo permeado se manter
constante. O fator de concentrao volumtrico mximo alcanado de 6 foi em funo das
limitaes da unidade experimental (soma do volume mnimo de soro no tanque de
alimentao com o volume morto, perfazendo um volume de aproximadamente 5 L).
Os dados do grfico confirmam o que alguns autores j haviam observado. Segundo
SMITH (2003), geralmente o fluxo permeado diminui com o aumento do FC. Segundo
AFONSO et al (2004), REKTOR & VATAI (2004) e BACCHIN et al. (2006) quanto mais
concentrada a soluo de alimentao, menor o fluxo permeado; isso se deve presso
osmtica mais elevada e ao maior acmulo de molculas do soluto na camada polarizada,
aumentando sua espessura e, por conseqncia, sua resistncia permeao. Segundo ATRA et
al. (2005), em fatores de concentrao mais elevados h um depsito maior e mais denso da
camada que reduz o fluxo permeado at que ele alcance a condio de estado estacionrio.
A Figura 4.8 apresenta o fluxo permeado de soro em funo do tempo; observa-se que
o fluxo diminui com o tempo de operao sendo que estes resultados esto de acordo com os
apresentados nos trabalhos de VEIGA & VIOTTO (2001), RAO (2002), CASTRO E GERLA (2004),
REKTOR & VATAI (2004) e KHIDER et al. (2004).

O fluxo permeado inicia em 35 L.m
-2
.h
-1
e aps os primeiros 80 minutos vai
diminuindo at atingir 18 Lm
-2.
h
-1
, e assim permanece at os 170 minutos, quando, ento,
decai para aproximadamente 15 L.m
-2
.h
-1
e se mantm assim at o final da UF (~ 265
minutos). A queda inicial mais acentuada foi devida formao da camada de polarizao por
concentrao e ao fouling; o decaimento final se deve ao aumento da concentrao e
conseqentemente s mudanas nas propriedades de transporte e nas propriedades da soluo,
tais como massa especfica e viscosidade dinmica. Vale ressaltar que a reduo de fluxo
permeado um dos fatores limitantes do processo, do ponto de vista tcnico e econmico.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
0 100 200 300 400 500
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
Tempo (min)
UF
DF1
DF2
DF3
DF4

Figura 4.8: Fluxo permeado vs tempo para o Experimento 4, para a membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar,
vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
CHOLLANGI & HOSSAIN (2006), fizeram experimentos com solues de lactose com e
sem protena e observaram que com o aumento da presso transmembrana o fluxo permeado
aumentou para ambas as solues, entretanto, o fluxo para a soluo sem protena foi maior
do que a com protena em todas as presses. A presena da protena aumenta o potencial para
fouling e em conseqncia diminui o fluxo permeado.
Para a produo de CP com alto teor de protena utilizou-se a DF; segundo EBERSOLD
& ZYDNEY (2004), o modo DF empregado para separaes de protena para eliminar
problemas de associao em concentraes altas no produto retido, gerando alta purificao e
ao mesmo tempo bons fatores de rendimento. Este processo promove a produo de um
concentrado protico mais puro, pois remove sais e lactose que so permeveis membrana.
Nas DF o fluxo permeado ficou abaixo do fluxo inicial da UF, devido ao fouling formado na
etapa de concentrao das protenas e ao fator de diluio que no muito elevado, e, aps
diminuiu com o tempo. No momento em que iniciamos as DF o fluxo permeado aumenta para
cerca de 18 L.m
-2.
h
-1
, devido ao efeito de diluio, e ao final da DF volta para os 15 L.m
-2
h
-1

obtidos no final da etapa de concentrao. importante salientar que no foi realizada
limpeza qumica, nem tampouco enxge com gua aps o experimento de concentrao.

Como a protena totalmente retida pela membrana, o aumento da concentrao de
protena exerce um efeito maior sobre o fluxo (polarizao). Alm disso, a polarizao por
concentrao tem um efeito sobre o fouling, quanto maior a polarizao por concentrao
maior a tendncia de ocorrer fouling.
A Figura 4.9 apresenta o teor de slidos totais (ST) em funo do tempo de
experimento para o concentrado e para o permeado das etapas de concentrao e diafiltrao.
Observa-se que houve um aumento de ST na corrente de concentrado durante a UF devido
principalmente ao aumento de concentrao de protena. No permeado a concentrao de ST
aproximadamente constante at o final da UF, aumentando ligeiramente na ltima hora de
experimento. O retido possui concentraes mais elevadas de ST tanto para a etapa de UF
quanto na etapa de DF. Durante as DF ocorreu a reduo de ST para ambas correntes, no
concentrado devido remoo de lactose e sais no permeado devido diluio.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 100 200 300 400 500
S
l
i
d
o
s

t
o
t
a
i
s

(
g
.
L
-
1
)
Tempo (min)
Permeado UF
Concentrado UF
Permeado DF
Concentrado DF

Figura 4.9: Concentrao de slidos totais das amostras de permeado e concentrado vs tempo para o
Experimento 4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.


A Figura 4.10 apresenta a concentrao de protena em funo do tempo de
experimento para o concentrado e para o permeado das etapas de concentrao e diafiltrao.
Analisando os resultados apresentados observa-se que a concentrao de protenas no retido
aumenta ao longo do experimento de UF. A concentrao inicial de protenas de cerca de
9,5 g.L
-1
e no final da UF cerca de 36 g.L
-1
.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
0 100 200 300 400 500
P
r
o
t
e
n
a

(
g
.
L
-
1
)
Tempo (min)
Permeado UF
Concentrado UF
Permeado DF
Concentrado DF

Figura 4.10: Concentrao de protena das amostras de permeado e concentrado vs tempo para o Experimento
4, membrana UF-6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
Nota-se que a concentrao de protena durante as DF no sofre grande variao
(inicia com aproximadamente 36,8 g.L
-1
e termina com 36,9 g.L
-1
), no entanto o teor de
contaminantes, sais e lactose, diminui significativamente nas DF, o que resulta em uma
purificao das protenas. Comportamento similar apresentado por LEITE et al. (2006).
Em alguns casos, foram detectadas, no incio dos experimentos, baixas concentraes
de protena no permeado (< 1 g.L
-1
), que devem corresponder a resduos proticos derivados
da ao da renina nas molculas de casena durante a fabricao de queijo. Mas, a presena de
protena no permeado insignificante quando comparada concentrao protica no
concentrado, e ocorreu somente nos primeiros momentos da UF, indicando que a reteno
protica foi de aproximadamente 100 %.


A variao da concentrao de lactose em funo do tempo pode ser observada na
Figura 4.11. A curva mostra um comportamento similar ao encontrado para os slidos totais,
porque a lactose, sendo o componente mais abundante no soro, e com massa molar menor que
a MMC da membrana, apresenta uma reteno baixa deve permear e ter impacto decisivo no
comportamento dos slidos totais ao longo do tempo tanto no permeado quanto no
concentrado.
0
10
20
30
40
50
60
0 100 200 300 400 500
L
a
c
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o
s
e

(
g
.
L
-
1
)
Tempo (min)
Permeado UF
Concentrado UF
Permeado DF
Concentrado DF

Figura 4.11: Concentrao de lactose para as amostras de permeado e concentrado vs tempo para o Experimento
4, membrana UF-6001, T=50C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840L.h
-1
.
No permeado, durante a etapa de UF, a concentrao de lactose permanece ao redor de
40 g.L
-1
; no retido inicia com 42 g.L
-1
e atinge 50 g.L
-1
ao final da etapa de UF. Quando
iniciada a DF a concentrao de lactose diminui significativamente tanto no retido quanto no
permeado. Ao final das quatro DF a concentrao de lactose no retido atinge 15 g.L
-1
,
enquanto que no permeado a concentrao de lactose fica em torno de 10 g.L
-1
, quase o
mesmo valor da concentrao de slidos totais, evidenciando que praticamente todo sal
removido, e todos os slidos que esto sendo retirados no permeado correspondem lactose.
O pH do soro de queijo foi monitorado com o intuito de verificar possveis alteraes
ocasionadas durante o processo de concentrao e purificao do soro. Conforme os
resultados mostrados na Figura 4.12 verifica-se que o pH no sofreu alteraes significativas
durante todo o processo. O pH das amostras de concentrado e permeado permaneceu em 6,4
durante todo tempo do experimento baixando ligeiramente para 6,3 nos ltimos minutos; este
comportamento foi um bom indicativo de que a soluo no foi degradada durante o tempo de
durao do experimento.


1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
0 100 200 300 400 500
p
H

Tempo (min)
Permeado UF
Concentrado UF
Permeado DF
Concentrado DF

Figura 4.12: pH para as amostras de permeado e concentrado vs tempo para Experimento 4, membrana UF-
6001, T=50 C, P=2 bar, vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
A medida da condutividade eltrica no concentrado do soro de queijo foi realizada
para verificar se houve alterao das espcies eletricamente ativas, que, em sua grande
maioria, compreendem os sais de clcio e sdio dissolvidos. Pode-se observar na Figura 4.13
que a condutividade eltrica permaneceu praticamente a mesma para o permeado e o
concentrado durante toda a etapa de UF, pois a membrana no seletiva para os sais, que so
os compostos que mais contribuem para a condutividade eltrica; durante a etapa de DF a
condutividade eltrica do concentrado e do permeado foi decaindo aps a adio da gua
destilada em cada DF (efeito de diluio).
0
1
2
3
4
5
6
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0 100 200 300 400 500
C
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d
a
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e

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t
r
i
c
a

(
m
S
.
c
m
-
1
)
Tempo (min)
Permeado UF
Concentrado UF
Permeado DF
Concentrado DF

Figura 4.13: Condutividade eltrica das amostras de permeado e concentrado vs tempo para Experimento 4,
-1
.

Os resultados encontrados esto de acordo com os apresentados na literatura; ZYDNEY
(1998), CHOLLANGI & HOSSAIN (2006), BUTYLINA et al. (2006), REKTOR E VATAI (2004)
realizaram trabalhos mostrando que os componentes de baixa massa molar (lactose e sais)
permeiam preferencialmente as membranas de UF, as quais retm as molculas de protena.
A Figura 4.14 mostra o grfico da reteno de slidos totais, lactose e protena com o
tempo para a membrana UF-6001.
0
20
40
60
80
100
120
0 100 200 300 400 500
R
e
t
e
n
o

(
%
)
Tempo (min)
Protena
Lactose
Slidos totais

Figura 4.14: Reteno de protena, lactose e slidos totais em funo do tempo para o Experimento 4,
-1
.
Os resultados apresentados no grfico da Figura 4.14 indicam que a reteno das
protenas total, enquanto que a reteno de slidos totais aumenta com tempo de
experimento, e este aumento mais expressivo depois do incio das DF (aps os 265 minutos
iniciais). O aumento da reteno de slidos ocorre porque os componentes permeveis vo
sendo removidos e as protenas que so completamente retidas passam a ter um peso maior na
reteno. Em relao lactose, observa-se que a reteno oscila em torno de 0 e 20 % at os
265 minutos (etapa de UF), no momento que iniciam as DF a reteno de lactose aumenta.
Isto leva a crer que a membrana apresenta uma reteno parcial a lactose o que propicia uma
maior dificuldade na purificao das protenas, principalmente ao final do experimento.
Segundo REKTOR & VATAI (2004), a reteno da lactose pela membrana de UF ocorre devido
camada gel formada durante o processo.


4.2 Fracionamento das Protenas Majoritrias
A partir do concentrado obtido na etapa anterior (4.1 Concentrao e Purificao das
protenas) tentativas de fracionar as protenas majoritrias do soro foram testadas. Os
primeiros procedimentos realizados foram as medidas de fluxo de gua e do concentrado
protico em cada membrana testada. A compactao da membrana foi realizada previamente a
fim de evitar um declnio de fluxo permeado devido ao adensamento da microestrutura da
membrana durante o processo UF; este procedimento foi realizado presso superior a de
operao, com gua pura at o fluxo de permeado se estabilizar.
Aps a identificao da melhor presso para se realizar o experimento, e ajustes de pH
e temperatura da soluo de alimentao realizou-se o experimento de fracionamento onde
amostras de permeado e concentrado foram coletadas para anlise de protena atravs do
mtodo de Lowry e por eletroforese, para verificar se houve a separao das protenas. Os
resultados desta etapa sero mostrados conforme a semelhana de geometria: as membranas
planas (HN06, RZ04 e VCWP), a membrana espiral (MF-7002) e as membranas tubulares
(UF-C20 e UF-C50).
4.2.1 Membranas HN06, RZ04 e VCWP
Em cada experimento foram utilizados dois litros de concentrado protico purificado
obtido na etapa de concentrao e purificao. Nos testes com as membranas VCWP e RZ04
o concentrado foi aquecido a 40 C, e acidificado ao pH de 4,6; para a membrana HN06,
realizou-se o experimento a temperatura ambiente (25 C) e pH de 6,3, nestas condies,
segundo WONG et al. (1999), todas as variantes genticas de -Lg existem principalmente
como um dmero estvel de dois monmeros unidos por ligaes no covalentes.
Os experimentos com as membranas RZ04, VCWP e HN06 foram realizadas com uma
vazo de alimentao de 620 L.h
-1
, e presso transmembrana de 1,75 bar. A soluo
recirculou pelo sistema durante 20 minutos em modo de reciclo total, para garantir
homogeneidade na soluo e equilbrio de temperatura ento, a corrente de permeado foi
retirada para outro tanque, e, aps 30 minutos amostras de permeado e concentrado foram
coletadas. No foi possvel reduzir o volume inicial metade ou realizar DF devido s
limitaes do equipamento tais como: volume insuficiente no tanque de alimentao, rea de
membrana pequena, conduzindo a uma taxa de permeado muito baixa. Para estas membranas
foram analisados apenas o fluxo permeado e a reteno.
Em um primeiro momento realizou-se a compactao das membranas com gua
destilada, os resultados esto apresentados na Figura 4.15. A presso transmembrana utilizada
foi de 3,25 bar, que foi a maior presso que se conseguiu atingir para as trs membranas. A
compactao ocorreu durante o tempo suficiente para que as membranas apresentassem fluxo
permeado constante: a membrana VCWP iniciou com um fluxo de 365 L.m
-2
h
-1
e aps 25
minutos o fluxo baixou para 350 L.m
-2
h
-1
, e assim permaneceu at o tempo de 40 minutos,
onde foi considerado que a compactao havia ocorrido. A HN06 iniciou com um fluxo de 72
L.m
-2
h
-1
e aps 30 minutos estabilizou-se em torno de 50 L.m
-2
h
-1
. A RZ04 iniciou com um

fluxo de 250 L.m
-2
h
-1
e aps 20 minutos estabilizou-se em 210 L.m
-2
h
-1
, e assim permaneceu
at os 30 minutos onde, a compactao para esta membrana foi dada como encerrada.
Houve uma reduo de fluxo inicial de 4; 30 e 16 % para as membranas VCWP,
HN06 e RZ04, respectivamente. Este resultado evidencia diferenas na estrutura de cada
membrana, que de certa forma influenciam os resultados de separao.
0
100
200
300
400
500
0 10 20 30 40 50
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
Tempo (min)
VCWP
HN06
RZ04

Figura 4.15: Fluxo permeado em funo do tempo para os experimentos de compactao das membranas
VCWP, HN06 e RZ04, vazo de alimentao 620 L.h
-1
, P = 3,25 bar, T = 25 C.
A Figura 4.16 apresenta os resultados dos fluxos permeados da gua e do concentrado
protico em funo da presso transmembrana para as membranas HN06, RZ04 e VCWP.
Observa-se uma reduo significativa do fluxo de concentrado protico em relao ao fluxo
de gua pura para todas as membranas nas condies de operao empregadas, devido aos
efeitos de polarizao por concentrao e fouling.
0
50
100
150
200
250
300
350
400
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0
J
p
(
L
m
-
2
h
-
1
)
P(bar)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
0,0 1,0 2,0 3,0 4,0
J
p
(
L
m
-
2
h
-
1
)
P(bar)
VCWP
HN06
RZ04

Figura 4.16: Fluxo permeado de gua (esquerda) e de fluxo permeado de concentrado protico (direita) em
funo da presso transmembrana para as membranas VCWP, HN06 e RZ04, vazo de
alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C e pH = 4,6 (VCWP e RZ04) e T = 25 C e pH = 6,3 (HN06).

Os fluxos permeados de concentrado protico foram semelhantes para as membranas
RZ04 e VCWP, sendo ligeiramente maior para a RZ04, em presses mais elevadas; a
membrana HN06 apresentou os menores fluxos permeados. Pode-se perceber a partir destes
resultados, que apesar da membrana de MF apresentar maior tamanho de poro que a RZ04,
para esta o fluxo permeado atingido foi relativamente elevado, ainda mais quando comparado
com a membrana HN06. Estes resultados mostram que, alm da geometria do mdulo, do
tamanho de poro nominal e MMC, outros fatores como o material da membrana, a
distribuio dos tamanhos de poros, a porosidade, a espessura e a morfologia da membrana
exercem uma grande influncia sobre o fluxo permeado.
O fluxo permeado de gua, aps a realizao dos experimentos, ou seja, com as
membranas sujas, foi de 6,9; 40,4 e 51,6 L.m
-2
.h
-1
para a HN06, RZ04 e VCWP,
respectivamente; como o objetivo destes experimentos foi apenas verificar a reteno, no foi
realizada limpeza nestas membranas.
A Tabela 4.1, apresenta os dados de concentrao de lactose e protena para as
amostras de concentrado e permeado recolhidas dos experimentos com as membranas HN06,
VCWP e RZ04. As amostras so identificadas com o nome da membrana seguida da letra C
de concentrado e P de permeado. A amostra inicial comum para todos os experimentos.
Tabela 4.1: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de concentrado e
permeado das membranas VCWP, HN06 e RZ04.
Amostras
Concentrao de
Lactose (g.L
-1
) *
Concentrao de
Protena (g.L
-1
) *
Inicial 17,8 30,9
HN06 C 15,4 29,9
HN06 P 13,4 0,5
VCWP C 16,5 26,5
VCWP P 7,6 5,7
RZ04 C 16,9 28,4
RZ04 P 15,9 1,5
*preciso das medidas = 6 %.
Observa-se na Tabela 4.1 que as concentraes de lactose nas amostras de concentrado
e permeado para a membrana HN06, so semelhantes e levemente inferiores ao teor da
amostra inicial (que pode ser explicado pela preciso das medidas) mostrando que a
membrana no seletiva para a lactose - a reteno fica em torno de 13 %. A RZ04 apresenta
uma reteno de aproximadamente 6 % para a lactose. Enquanto a VCWP, apesar de ter maior
tamanho de poro nominal entre as trs membranas testadas, aquela que apresenta maior
reteno para a molcula de lactose, cerca de 50 %; este resultado pode indicar que alguma
interao membrana-lactose, possa estar ocorrendo. A influncia do pH da soluo poderia ser
levantada como causa provvel, no entanto a soluo utilizada nos experimentos com a RZ04
tambm foi acidificada e a reteno para a lactose foi baixa.

Quanto s protenas, as membranas HN06 e RZ04 mostraram alta reteno de
protenas mesmo possuindo MMC diferentes. Para a HN06 a reteno foi de 98 %, mas como
a membrana possua MMC de 20 kDa e a menor protena que deveria permear possua massa
molar de 14 kDa, pode ter ocorrido fouling (bloqueio de poros, adsoro). Para a RZ04 apesar
desta possuir MMC de 70 kDa, tambm houve reteno elevada para as protenas, 94 %,
evidenciando que, alm do fouling, ainda podem estar ocorrendo interaes entre os
diferentes solutos presentes na soluo, isto , uma agregao das diferentes molculas de
protena entre si ou com a lactose, o que impede a sua passagem para o permeado. A VCWP
mostrou uma reteno de protena um pouco inferior s outras duas membranas, 78 %. Esta
era a membrana com maior tamanho de poro cerca de 0,1 m (equivalente a 100 kDa), o que
pode explicar a diferena de reteno. Assim como para as outras membranas planas, o
experimento no foi levado por longo tempo, pois esta membrana apesar de ter tamanho de
poro maior teve fluxos de permeado comparveis a RZ04, mostrando que pode ter ocorrido
alguma interao do material da membrana com a soluo.
Todas as amostras de permeado e concentrado foram analisadas qualitativamente,
atravs de eletroforese, para verificar se havia ocorrido separao das protenas, mesmo que
esta fosse mnima, os dados de concentrao de protena no permeado indicaram que o teor
deste componente era baixo nesta frao. A Figura 4.17, mostra a fotografia do gel de
eletroforese para as membranas planas, juntamente com a amostra inicial e ainda com uma
amostra contendo os padres proticos (BSA, -Lg e -La) em quantidades conhecidas (50 g
por banda).

Figura 4.17: Fotografia dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para as amostras de
concentrado e permeado da membrana HN06, RZ04, VCWP (100 V e 30 mA). Legenda: (1)
Inicial; (2) HNO6C; (3) HN06P, (4) RZ04C, (5) RZ04P, (6) VCWPC, (7) VCWPP, (8) padro.
Todas as amostras foram dissolvidas em tampo de corrida na proporo de 2:1, e
foram realizadas diluies para que todas as canaletas tivessem a mesma quantidade de
protena. Por isso, as amostras de concentrado tiveram que ser diludas para no saturar as
canaletas da eletroforese em volume, e nem as bandas da canaleta em quantidade protica, o
que impediria a visualizao das diferentes regies onde cada protena fixa-se no gel de
eletroforese. Vrias tentativas foram realizadas e concluiu-se que a melhor quantidade de
protena para visualizao no gel seria de 50 g e que o melhor volume a ser aplicado por
canaleta seria de 15 L, neste volume esto inclusos os 5 L de tampo de corrida, portanto, o
1 2 3 4 5 6 7 8
BSA - 69kDa
Lg - 18 kDa
La - 14 kDa

volume de amostra aplicado por canaleta foi de 10 L. Ento, se a concentrao de protena
na amostra era de 30 g.L
-1
ou 30 g.L
-1
, a amostra deveria ser diluda 6 vezes, para se obter
uma concentrao de 5 g.L
-1
, ou 50 g de protena em um volume de 10 L. As amostras
de permeado no precisaram ser diludas porque se encontravam nesta faixa de concentrao,
ou abaixo desta.
A concentrao do gel de poliacrilamida permite visualizao das protenas na faixa
de interesse (14 a 80 kDa), as protenas com massa molar maior que esta faixa so
empilhadas no incio do gel (parte superior), por isto, alm do sinal do BSA, percebe-se
outros sinais bem prximos indicando a existncia de outras protenas conforme foi
apresentado na reviso bibliogrfica; como neste trabalho o interesse era identificar
preferencialmente as protenas -La e -Lg o fato de protenas maiores apresentarem-se
acumuladas no interfere nos resultados, mas no caso de separaes de todas as protenas, as
amostras devem ser analisadas em gis com concentraes menores.
Observa-se no gel de eletroforese da Figura 4.17 que a amostra HN06P apresenta um
sinal fraco para ambas as protenas, -Lg e -La, indicando que no ocorreu uma separao
efetiva destas, ou seja, as duas protenas permearam pela membrana. Este sinal fraco tambm
pode ocorrer devido a contaminao lateral das amostras das diferentes canaletas. A amostra
RZ04P no apresenta sinal de nenhuma das protenas de interesse, apesar de ter apresentado
concentrao de protenas total levemente maior que a HN06 na quantificao pelo mtodo de
Lowry. Nenhuma destas duas membranas foi permevel ao BSA visto que a membrana HN06
possui MMC (20 kDa) inferior a massa molar da molcula de BSA (69 kDa); mas para a
membrana RZ04 este resultado no to bvio, pois a membrana possui MMC praticamente
igual a massa molar do BSA, este resultado pode indicar que nos experimentos com a RZ04
todas as molculas de protena interagiram com a membrana ou entre si, j que nenhuma das
trs foi detectada no permeado, por esta anlise. A membrana VCWP mostrou-se permevel
as trs protenas, porm para a protena BSA o sinal foi fraco quando comparado ao da
amostra inicial, as outras duas molculas mostraram concentraes semelhantes na amostra
VCWPP. Mas como a -Lg duas vezes mais abundante que a -La no concentrado, e isto
pode ser visualizado no VCWPC, pode haver uma reteno menor da molcula de -La pela
membrana. Vale relembrar que o objetivo era que a reteno da -Lg pela membrana fosse
superior a da -La, e que, portanto, a -La predominasse no permeado, porm houve uma
passagem de uma quantidade considervel da molcula de -Lg, indicando que estas
molculas no esto se agregando em octmeros nas condies do experimento.
4.2.2 Membrana MF - 7002
Inicialmente realizou-se a compactao da membrana com gua destilada, e como
mostra a Figura 4.18, a presso transmembrana utilizada foi de 3,25 bar, a maior presso de
operao que se conseguiu atingir para a MF-7002. A compactao ocorreu durante tempo
suficiente para que a membrana apresentasse fluxo permeado constante. O experimento
comeou com um fluxo permeado de aproximadamente 640 L.m
-2
h
-1
e aps 100 minutos o
fluxo baixou para 530 L.m
-2
h
-1
, e assim permaneceu at os 140 minutos, onde assumiu-se que
no haveria diminuies significativas do fluxo, e que portanto a membrana estava
compactada.

200
300
400
500
600
700
0 20 40 60 80 100 120 140 160
J

p
(
L
m
-
2
h
-
1
)
Tempo (min)

Figura 4.18: Compactao da membrana MF-7002, vazo de alimentao 700 L.h
-1
, P = 3,25 bar, T = 25 C.
A Figura 4.19 apresenta o grfico do fluxo permeado da gua e do concentrado
protico em funo da presso transmembrana para a membrana MF-7002. Observa-se que o
fluxo de concentrado protico menor do que o fluxo de gua pura para todas as presses.
Ainda possvel verificar comparando a Figura 4.16 e a Figura 4.19 que os fluxos de gua da
MF-7002 so comparveis a VCWP - as duas membranas so de MF com tamanho de poro
nominal de 0,1 m, apresentando diferenas na geometria do mdulo, no material e na
estrutura. Segundo ATRA et al. (2005), as membranas com MMC maior do um fluxo mais
elevado, porm so mais suscetveis polarizao por concentrao.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
550
0 1 2 3 4
J
p
c
o
n
c
e
n
t
r
a
d
o

(
L
m
-
2
h
-
1
)
J
p
g
u
a

(
L
m
-
2
h
-
1
)
P(bar)
gua
concentrado

Figura 4.19: Fluxo de gua e de concentrado protico em funo da presso transmembrana para a membrana
MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6 (concentrado).

Um volume inicial de 6 L de concentrado protico foi adicionado ao tanque de
alimentao, aquecido a 40 C e o pH ajustado para 4,6; o volume inicial de 6 L foi reduzido
a 3 L, e em seguida quatro DFs de 3 L foram realizadas. A vazo de alimentao foi mantida
em 700 L.h
-1
e P em 1,75 bar, regio em que podamos garantir que o fluxo limite no havia
sido atingido. O resultado de fluxo permeado em funo do tempo est apresentado na Figura
4.20.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
0 50 100 150 200 250
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
Tempo (min)
MF
DF1
DF2
DF3
DF4

Figura 4.20: Fluxo permeado de concentrado protico em funo do tempo para a membrana MF-7002 , vazo
-1
, T = 40 C, pH = 4,6 e P = 1,75 bar.
Este foi um experimento rpido, sendo que em menos de 40 minutos havamos
reduzido o volume do tanque a metade. Durante as DF o fluxo inicial no foi restitudo e o
decrscimo permaneceu e se acentuou a cada etapa do processo. No final do experimento o
fluxo de permeado caiu metade do fluxo inicial, o que ocorre devido formao de fouling e
ainda devido a mudanas de propriedades da soluo. Estes resultados podem ser atribudos
deposio gradual de protena e de molculas similares na superfcie da membrana que
diminuem a transferncia de massa atravs da membrana. As maiores molculas podem ter
adsorvido na superfcie da membrana e protenas menores podem ter adsorvido dentro dos
poros, todos estes fatores podem modificar a reteno do processo.
A Tabela 4.2 apresenta os dados de concentrao de lactose e protena para a MF-
7002, para a etapa de concentrao MF e de DF. As amostras MFC1 e MFP1 correspondem,
respectivamente, as amostras de concentrado e permeado no incio da MF e as amostras
MFC2 e MFP2 correspondem s amostras de concentrado e de permeado ao final da MF
(quando haviam sido recolhidos 3 L de pemeado). As amostras DFnC e DFnP, com n
variando de 1 a 4, correspondem as amostras de concentrado e de permeado obtidas nas
diafiltraes.

Tabela 4.2: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de concentrado e
permeado da membrana MF-7002.
Amostras
Concentrao de
Lactose (g.L
-1
)*
Concentrao de
Protena (g.L
-1
)*
MFC1 17,5 21,4
MFP1 12,3 7,6
MFC2 19,6 22,4
MFP2 3,6 6,9
DF1C 18,1 22,1
DF1P 9,4 6,7
DF2C 11,6 19,8
DF2P 7,1 7,3
DF3C 9,5 18,2
DF3P 5,0 4,9
DF4C 6,7 12,6
DF4P 4,6 5,6
Na Tabela 4.2 observa-se que h reteno parcial de lactose, tanto nas amostras da
MF, quanto da DF, variando de 80 %, na MF at 30 % ao final da DF4. Quanto protena na
MF h reteno de 65 %, nas DFs a reteno diminui gradativamente atingindo ao final destas
etapas 55 %.
A Figura 4.21 mostra a fotografia do gel de eletroforese feito para analisar a presena
das diferentes protenas nas amostras de concentrado e permeado do experimento com a
membrana MF-7002. A exemplo do que foi realizado para as membranas planas, as amostras
tiveram que ser diludas para se obter uma boa visualizao das protenas no gel. A canaleta 1
corresponde ao padro, formado por 50 g das protenas BSA, -Lg e -La em cada banda
correspondente.

Figura 4.21: Fotografia dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para as amostras de
concentrado e permeado da membrana MF-7002 (100 V e 30 mA). Legenda: (1) padro; (2)
MFC1, (3) MFP1, (4) MFC2, (5) MFP2, (6) DF1C, (7) DF1P, (8) DF2C, (9) DF2P, (10) DF3C,
(11) DF3P, (12) DF4C, (13) DF4P.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
BSA - 69 kDa
Lg - 18 kDa
La - 14 kDa

As canaletas 2 a 13 mostram as amostras obtidas no experimento, mostrando as etapas
de concentrao e de DF. Em um primeiro momento, em alguns casos, tem-se a impresso de
que as concentraes das duas protenas esto iguais, porm analisando cuidadosamente
observa-se que as quantidades esto variando. O software do programa Kodak 1D
para
anlise de gis eletroforticos foi utilizado para realizar a densitometria de cada banda, e
assim obter uma noo de quanto de cada protena estava presente no permeado. O princpio
do programa baseia-se em transformar a intensidade de cor de cada banda em uma curva
gaussiana, e a partir do clculo da rea desta curva, permite identificar qual a protena que
predomina em cada canaleta. Os resultados de intensidade do modelo e intensidade relativa
encontram-se no Anexo B. Os resultados da densitometria realizada no gel de eletroforese
encontram-se na Tabela B.21.
Tabela 4.3: Dados de intensidade relativa (em porcentagem) correspondendo a quantidade de
protena em cada banda eletrofortica das amostras de concentrado e permeado da membrana
MF-7002.
Protenas Intensidade Relativa (%)
MFC1 MFP1 MFC2 MFP2
outras protenas 16 3 14 3
-Lg 51 47 53 39
-La 33 50 33 58
DF1C DF1P DF2C DF2P
-Lg 56 65 70 73
-La 36 31 21 19
DF3C DF3P DF4C DF4P
-Lg 73 66 58 70
-La 19 29 23 25
A amostra MFC1 apresentou os seguintes percentuais: 51 % de -Lg; 33 % de -La e
16 % de outras protenas, representadas no gel de eletroforese pelo BSA. Estes valores esto
prximos ao da teoria, pois segundo MILLER et al. (2000) metade das protenas totais do soro
correspondem a -Lg, e 25 % correspondem a -La. Na amostra MFP1, que o primeiro
permeado recolhido da MF-7002, encontramos 47 % de -Lg; 50 % de -La e 3 % de outras
protenas, mostrando que a -La apesar de estar presente em menor concentrao no retido,
teve sua passagem preferencial para o permeado no incio do experimento, indicando que a
mudana de pH beneficiou a agregao da -Lg mesmo que esta agregao tenha sido parcial,
porque esta protena tambm foi encontrada no permeado.
Comportamento semelhante ao anterior foi encontrado para amostra MFC2 (53 % de
-Lg; 33 % de -La e 14 % de outras) e para a amostra MFP2 (38 % de -Lg; 58 % de -La e
3 % de outras).

Quando iniciaram as diafiltraes, porm observou-se que a passagem de -Lg
aumentou no permeado: na DF1P encontramos 65 % de -Lg; 31 % de -La e 43 % de outras
protenas; enquanto na DF1C temos 56 % de -Lg; 36 % de -La e 8 % de outras protenas.
Observa-se que a -Lg est em maior quantidade no permeado do que a -La, mostrando que
a partir deste momento a membrana no retm nenhuma das duas protenas o que torna o
processo de fracionamento ineficiente. Para as diafiltraes 2, 3 e 4 o mesmo comportamento
observado chegando-se a encontrar no permeado mais de 70 % de -Lg.
Este fato pode ter ocorrido devido ao efeito de diluio, porque enquanto estvamos
apenas concentrando a soluo havia uma passagem maior de -La. Alguns mecanismos da
agregao da -Lg em octmeros podem sofrer interferncia devido adio de gua.
4.2.3 Membrana UF - C50
Inicialmente realizou-se a compactao da membrana com gua destilada, como
mostra a Figura 4.22, a presso transmembrana utilizada foi de 3,75 bar, a maior presso que
se conseguiu atingir para a UF-C50. Aps os primeiros 15 minutos o fluxo permeado inicial
de 2.200 L.m
-2
h
-1
, baixou para 2.100 L.m
-2
h
-1
, e assim permaneceu at os 35 minutos,
considerou-se que o fluxo permeado era constante e que a compactao havia ocorrido.
1000
1200
1400
1600
1800
2000
2200
2400
2600
2800
0 10 20 30 40
J

(
L
m
-
2
h
-
1
)
Tempo (min)

Figura 4.22: Fluxo permeado de gua versus tempo do experimento de compactao da membrana UF-C50;
vazo de alimentao 400 L.h
-1
, P = 3,75 bar, T = 25 C.
A Figura 4.23 apresenta os grficos do fluxo permeado da gua e o grfico do fluxo de
concentrado protico (em dois pHs diferentes) em funo da presso transmembrana para a
membrana UF-C50.

0
20
40
60
80
100
120
0 1 2 3 4
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
P (bar)
pH 6,3
pH 4,6
0
500
1000
1500
2000
2500
0 1 2 3 4
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
P (bar)

Figura 4.23: Fluxos permeados de gua (esquerda) e de concentrado protico (direita) em dois pHs (4,6; 6,3)
em funo da presso transmembrana para a membrana UF-C50, vazo de alimentao 400 L.h
-1
,
T = 40 e 25 C (concentrado).
Para a membrana UF-C50 foram realizadas duas estratgias: na estratgia 1 o pH da
soluo foi mantido em 6,3; a temperatura em 25 C; na estratgia 2 o pH da soluo foi
acidificado at 4,6; e a temperatura utilizada foi de 40 C.
Pela comparao dos resultados apresentados na Figura 4.23 observa-se que o fluxo de
concentrado protico menor do que o fluxo de gua pura para todas as presses e para as
duas solues de concentrado protico; alm disso, o fluxo permeado de gua tem valor
superior ao fluxo de todas outras membranas testadas, mesmo das membranas de MF,
indicando que esta membrana possui uma porosidade elevada. Os fluxos permeados de
concentrado protico so muito menores que os fluxos de gua, cerca de 20 vezes menores
para o concentrado com pH 4,6 (40 C) e 50 vezes menores para o pH 6,3 (25 C).
A diferena de fluxo entre as solues de concentrado protico, que so idnticas nas
concentraes iniciais dos seus componentes slidos, se deve ao pH e temperatura, que
ocasionam um fluxo no mnimo duas vezes maior da soluo de pH mais cido e temperatura
mais elevada. Esta diferena pode ser explicada pelo efeito combinado de pH e temperatura
que implica em diferentes interaes entre os componentes do soro e entre os componentes do
soro e a membrana, alm de influenciar tambm nas propriedades fsicas (viscosidade
dinmica, massa especfica) e nas caractersticas reolgicas da soluo (propriedades de
transporte como a viscosidade cinemtica e a difusividade mssica).
CHOLLANGI & HOSSAIN (2006) encontraram em seu trabalho que o fluxo permeado a
40 C ligeiramente mais elevado do que o fluxo permeado na temperatura ambiente. O
efeito da temperatura no fluxo permeado pode ser compreendido avaliando-se as propriedades
da alimentao. Aumentando-se a temperatura h uma diminuio na viscosidade dinmica do
soro, tendo por resultado um aumento no fluxo de permeado, alm disso, a temperatura exerce
um efeito sobre a difusividade mssica do soluto e a taxa do transporte dos solutos da
superfcie da membrana para o seio da soluo.

Ainda possvel perceber que para a soluo com pH 4,6 (40C) a partir da presso
transmembrana de 3,25 bar, e para a soluo com pH 6,3 (25C) a partir da presso de 2,75
bar, um aumento na presso no ocasiona aumento do fluxo permeado indicando que o fluxo
limite pode ter sido atingido. Este fenmeno est no acordo com dados da literatura, ATRA et
al. (2005), nas suas pesquisas, observaram que acima de uma presso transmembrana limite (2
- 4 bar) o fluxo tornou-se independente da presso. Segundo estes autores, as molculas da
protena depositadas na superfcie da membrana causaram uma concentrao de polarizao
controlada por dois fatores: tipo de membrana e velocidade do fluxo de alimentao.
CHOLLANGI & HOSSAIN (2006) observaram que o fluxo permeado aumentou at uma presso
transmembrana de 2 bar, em seguida diminuiu quando a presso aumentou de 2 para 3 bar.
O grfico de fluxo permeado em funo do tempo apresentado na Figura 4.24. Para
ambas as estratgias a P foi mantida em 2,25 bar e a vazo de alimentao em 400 L.h
-1
. A
presso transmembrana de operao foi escolhida de forma a garantir que o fluxo limite no
seja atingido. O volume inicial no tanque era de 3 L e o experimento foi encerrado quando um
litro de permeado foi coletado.
0
20
40
60
80
100
120
140
160
0 100 200 300 400
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
Tempo (min)
pH 4,6
pH 6,3

Figura 4.24: Fluxo permeado de concentrado protico em pHs e temperaturas diferentes em funo do tempo
para a membrana UF-C50, vazo de alimentao 400 L.h
-1
e P =, 2,25 bar.
O fluxo para a soluo com pH 6,3 (25C) menor que o fluxo da soluo com pH 4,6
(40C) durante todo perodo do experimento. A soluo com pH 6,3, mantm o fluxo entre 50
e 35 L.m
-2
.h
-1
, e o experimento foi mantido durante cerca de 350 minutos, o tempo necessrio
para que se coletasse o volume de permeado pr-estabelecido. A soluo cida, iniciou o
experimento com fluxo de 145 L.m
-2
.h
-1
e aps 210 minutos, ao coletarmos um litro de
amostra, o fluxo decaiu para 90 L.m
-2
.h
-1
, mostrando que apesar de o fluxo ser maior neste
pH, os fenmenos de fouling e concentrao por polarizao foram mais acentuados
provocando o decaimento de fluxo permeado mais expressivo.
A Tabela 4.4 apresenta os dados de pH, temperatura, concentrao de lactose e
protena para a UF-C50.

concentrado para o experimento com concentrado protico para a membrana UF-C50, P =
2,25 bar, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
.
Tempo de
experimento(min)
Amostras
Concentrao de
Protena (g.L
-1
)*
Concentrao de
Lactose (g.L
-1
)*
pH T (C)
0 50 inicial 1 27,6 10,1 6,3 25
175 50 C11 27,2 12,4 6,2 25
175 50 P11 1,5 4,8 6,3 25
355 50 C12 28,1 13,0 6,3 25
355 50 P12 1,4 5,4 6,3 25
0 50 inicial 2 28,2 14,3 4,6 40
98 50 C21 28,2 12,1 4,6 40
98 50 P21 1,2 10,5 4,8 40
221 50 C22 28,9 14,5 4,6 40
221 50 P22 1,1 11,9 4,6 40
Legenda: 50 inicial 1- amostra inicial em pH 6,3; 50C11 e 50P11 primeiras amostras de concentrado e
de permeado coletadas em pH 6,3; 50C12 e 50P12 ltimas amostras de concentrado e de permeado
coletadas em pH 6,3; 50 inicial 2- amostra inicial em pH 4,6; 50C21 e 50P21 primeiras amostras de
concentrado e de permeado coletadas em pH 4,6; 50C22 e 50P22 ltimas amostras de concentrado e de
permeado coletadas em pH 4,6.
Observa-se na Tabela 4.4 que a concentrao de lactose no permeado das solues a
pH 6,3 (50P11 e 50P12) de cerca de 5 g.L
-1
, enquanto no retido (50C11 e 50 C12) e na
amostra inicial (50 inicial 1), a concentrao cerca de 12 g.L
-1
, indicando uma reteno de
cerca de 60 %. Nas amostras em pH 4,6 a lactose encontra-se igualmente distribuda entre o
retido (50C21 e 50C22) e permeado (50P21 e 50P22), mostrando que a reteno para esta
molcula est prxima de zero. Quanto concentrao de protenas, tanto para a soluo a pH
4,6 quanto para a soluo a pH 6,3, a concentrao no permeado ficou em torno de 1,5 g.L
-1
,
enquanto nas amostras iniciais e de concentrado ela cerca de 28 g.L
-1
.
A Figura 4.25 mostra a fotografia do gel de eletroforese das amostras de concentrado e
permeado para a UF-C50. Assim como foi realizado para as outras membranas, as amostras
de concentrado foram diludas para melhor visualizao das protenas no gel. A canaleta 1
corresponde ao padro, formado por 50 g de cada uma das trs protenas, as canaletas 2, 3 e
4 correspondem s amostras da soluo com pH 6,3 e as canaletas 5, 6 e 7 correspondem s
amostras da soluo com pH 4,6.


Figura 4.25: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para as amostras de
concentrado e permeado obtidos nos experimentos com a membrana UF-C50 (100 V e 30 mA).
Legenda: (1) padro; (2) 50 inicial 1, (3) 50C12, (4) 50P12, (5) 50 inicial 2, (6) 50C22, (7)
50P22.
A primeira observao que pode ser feita que h uma passagem de protena
irrelevante nas amostras de permeado tanto para a soluo com pH 6,3 (canaleta 4 50P12)
quanto para o permeado da soluo a pH 4,6 (canaleta 7 50P22), mostrando que a mudana
de pH combinada com a temperatura no influenciou a passagem de protena, ocorrendo em
ambos os casos reteno protica total. Este fato comprovado, comparando a canaleta 2 com
a 3, observa-se que as bandas das duas canaletas referidas possuem grande semelhana apesar
de representarem amostras diferentes, uma a amostra inicial de concentrado protico, antes
de ser iniciado o experimento, e a outra representa a amostra de retido ao final do experimento
onde haviam sido coletados 1000 mL de permeado. O mesmo comentrio vlido para as
amostras 50inicial2 e 50C22 (canaletas 5 e 6).
Um fato interessante a respeito das amostras em pH cido que no gel de eletroforese
entre as bandas correspondentes ao BSA e a -Lg no so observados sinais de outras
protenas como observado no pH 6,3. Como as amostras para ambos os pHs foram
analisadas no mesmo gel e, portanto, com condies idnticas de corrente e voltagem, alm de
mesmo tempo de corrida; de revelao com o mesmo corante e ao mesmo tempo; amostras
iniciais para os dois experimentos idnticas em composio, diferenciadas apenas pela
mudana de pH (realizada para acidificar uma delas a 4,6), verifica-se que existe uma
mudana da conformao protica entre as amostras devido a influncia do pH. HONG et al.
(2002) tambm encontraram estes sinais intermedirios entre as bandas do BSA e da -Lg no
pH de 6,3, e consideraram que eles correspondem a conformaes que as protenas adquirem
no soro, como por exemplo, os dmeros da -Lg, que possuem estabilidade maior do que o
monmero e que mesmo sob condies desnaturantes, como no caso do gel com SDS,
permanecem em forma de dmeros neste pH. Por isso, no gel de eletroforese a molcula de -
Lg forma um rastro na regio correspondente a 30 e 40 kDa, porque os dmeros possuem
massa molar de 36 kDa. Em pHs cidos (abaixo de 5,0) as molculas tendem a se agrupar em
octmeros que so menos estveis e, por isso, tornam-se mais suscetveis a se romperem, o
que faz com que no gel de eletroforese haja poucos sinais entre a banda do BSA e da -Lg,
porque neste caso a desnaturao do gel SDS suficiente para que as molculas de -Lg
fiquem na forma de monmeros e, portanto, empacotadas na regio correspondente a esta
molcula.
1 2 3 4 5 6 7
BSA - 69 k Da
Lg - 18 kDa
La - 14 k Da
30 a 40
kDa

4.2.4 Membrana UF - C20
Na membrana UF-C20 a exemplo das outras membranas realizou-se a compactao da
membrana com gua destilada, os resultados esto apresentados na Figura 4.26, a presso
transmembrana utilizada foi de 3,75 bar. Aps 20 minutos o fluxo permeado inicial de 750
L.m
-2
h
-1
, baixou para 690 L.m
-2
h
-1
, permanecendo assim at os 40 minutos, quando assumiu-
se que a compactao havia ocorrido.
Para a membrana UF-C20 o volume inicial de concentrado purificado no tanque de
alimentao foi igual a 3 L e o experimento foi conduzido at que 1 L de permeado fosse
coletado. O pH da soluo foi mantido em 6,3 e a temperatura em 25 C, a P foi mantida em
2,25 bar e a vazo de alimentao em 620 L.h
-1
. Para verificar se no havia interaes que
interfeririam no fracionamento devido ao fator de concentrao foi testada ainda na
membrana UF-C20 a tentativa de fracionamento com a soluo do soro diluda, (sem ser soro
concentrado e purificado). Os parmetros operacionais de pH, temperatura da soluo, P,
vazo de alimentao, volume inicial e quantidade permeado coletado utilizados nesta
estratgia foram idnticos aos usados no experimento com concentrado protico.
500
550
600
650
700
750
800
0 10 20 30 40 50
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
Tempo (min)

Figura 4.26: Compactao da membrana UF-C20, vazo de alimentao 620 L.h
-1
, P = 3,75 bar, T = 25 C.
Os grficos de fluxo de gua e fluxo de soro e concentrado protico em funo da
presso transmembrana so apresentados na Figura 4.27. Pela anlise da figura observa-se que
o fluxo de gua maior que o fluxo de soro e de concentrado protico para todas as presses,
alm disso, o comportamento do fluxo de soro e de concentrado protico o mesmo, porm o
fluxo de soro maior que o de concentrado protico em todas as presses transmembranas
testadas. Este fato pode ser explicado pelas diferenas de propriedades, como viscosidade
dinmica e massa especfica existentes entre estas duas solues.

0
100
200
300
400
500
600
700
800
0 1 2 3 4
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
P (bar)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
0 1 2 3 4
J
p

(
L
m
-
2
h
-
1
)
P (bar)
Concentrado
Soro

Figura 4.27: Fluxo permeado de gua (esquerda) e de concentrado protico e de soro (direita) em funo da
presso transmembrana para a membrana UF-C20, vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 25 C,
pH = 6,3.
O grfico de fluxo permeado em funo do tempo apresentado na Figura 4.28. Os
experimentos foram conduzidos nas mesmas condies de operao: 620 L.h
-1
, T = 25 C, pH
= 6,3 e P = 2,25 bar.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 100 200 300 400
J
p

(
L
.
m
-
2
.
h
-
1
)
Tempo (min)
Concentrado
Soro

Figura 4.28: Fluxo permeado de soro diludo e de concentrado protico em funo do tempo para a membrana
UF-C20; condies de operao: vazo de alimentao = 620 L.h
-1
, T = 25 C, pH = 6,3 e P =
2,25 bar.
possvel observar que o fluxo de concentrado protico menor que o de soro em
todo o experimento, portanto para coletar um litro de permeado o experimento com soro
demorou menos de 200 minutos, j para o concentrado durou cerca de 350 minutos. O fluxo
permeado de soro variou bastante entre 60 e 70 L.m
-2
.h
-1
, e no apresentou o comportamento
que vinha sendo observado para os outros casos. Este fato pode ser explicado porque a
soluo de soro possui viscosidade dinmica menor que a do concentrado. A soluo de

concentrado apresenta fluxo inicial de 45 L.m
-2
h
-1
, este fluxo vai diminuindo e no final do
experimento este fluxo decai para 30 L.m
-2
h
-1
.
A Tabela 4.5 apresenta os dados de pH e concentrao de lactose e protena para as
amostras de concentrado e permeado da soluo de concentrado protico e da soluo de soro,
para a membrana UF-C20.
concentrado para o experimento com concentrado protico e para o soro diludo para a
-1
.
Tempo de
experimento (min)
Amostras
Concentrao de
Protena (g.L
-1
)
Concentrao de
Lactose (g.L
-1
)
pH
Concentrado protico
0 C01 15,5 9,6 6,28
172 CC1 18,7 11,8 6,28
172 CP1 0,1 7,2 6,28
360 CC2 17,7 13,1 6,28
360 CP2 0,7 8,2 6,16
Soro diludo
0 UFC01 10,7 58,3 6,28
75 UFC1 10,5 59,3 6,26
75 UFP1 0,1 51,2 6,26
175 UFC2 11,7 57,4 6,29
175 UFP2 0,2 47,9 6,21
Legenda: C01- amostra inicial de concentrado protico; CC1 e CP1 primeiras amostras de concentrado
e de permeado coletadas do concentrado protico; CC2 e CP2 ltimas amostras de concentrado e de
permeado coletadas do concentrado protico; UFC01- amostra inicial de soro diludo; UFC1 e UFP1
primeiras amostras de concentrado e de permeado coletadas do soro diludo; UFC2 e UFP2 ltimas
amostras de concentrado e de permeado coletadas do soro diludo.
Observa-se, quanto lactose, para o concentrado protico, que a concentrao no
permeado e no retido semelhante, mostrando que a membrana no seletiva para esta
substncia. O mesmo observado para o soro, ou seja, a reteno da lactose baixa, porm
esta concentrao mais elevada que na soluo de concentrado, pois esta soluo no passou
pelas etapas de purificao. Quanto protena, para ambos os casos, observamos que no
permeado a concentrao muito baixa, menor que 1 g.L
-1
, indicando que no houve a
passagem significativa de protena para esta corrente.
A Figura 4.29 apresenta a fotografia do gel de eletroforese das amostras de
concentrado e permeado da membrana UF-C20. Assim como foi realizado para as outras
membranas, as amostras de concentrado foram diludas. A canaleta 1 corresponde ao padro,
a canaleta 2 refere-se amostra inicial de concentrado protico (C01) e as canaletas 3 e 4
correspondem s amostras de concentrado (CC2) e permeado (CP2) ao fim do experimento; a
canaleta 5 corresponde amostra inicial de soro (UFC01) e as canaletas 6 e 7 correspondem

s amostras de concentrado (UFC2) e permeado (UFP2) desta soluo. Como no houve
passagem expressiva de protena durante o experimento optou-se por apresentar apenas nos
gis de eletroforese as amostras inicial, da soluo original, e as finais de concentrado e
permeado omitindo as anlises eletroforticas das amostras intermedirias (CC1 e CP1; UFC1
e UFP1).

Figura 4.29: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para as amostras de
concentrado e permeado da membrana UF-C20 (100 V e 30 mA). Legenda: (1) padro; (2) C01,
(3) CC2, (4) CP2, (5) UFC01, (6) UFC2, (7) UFP2.
Pela anlise da Figura 4.29 observa-se que no ocorreu a passagem das protenas -Lg
e -La, indicando que o fracionamento no ocorreu nesta membrana. Estes dados corroboram
os resultados apresentados na Tabela 4.5.
4.2.5 Comentrios gerais sobre o fracionamento das protenas
Como pde ser observado anteriormente o processo de fracionamento no ocorreu
para as membranas HN06, RZ04, UF-C50 e UF-C20, e ocorreu parcialmente para as
membranas MF-7002 e VCWP. Como o fracionamento esperado era baseado na
polimerizao da -Lg em dmeros no pH neutro e em octmeros no pH cido (4,6), fez-se
necessrio a confirmao desta hiptese pela anlise das amostras de soro por cromatografia
gel. A Figura 4.30 apresenta o resultado da cromatografia gel para a amostra de soro em pH
7,0, enquanto a Figura 4.31 apresenta o resultado da cromatografia gel em pH 4,6.

1 2 3 4 5 6 7
Lg - 18 kDa
La - 14 kDa
BSA - 69 kDa

Figura 4.30: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina Superose
TM
12,
equilibrada com tampo fosfato de sdio 10 mM, pH 7,0; vazo de eluio = 0,5 mL.min
-1
;
amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm. Legenda: (1) BSA. (2) -Lg, (3) -Lg, (4) -
La
Figura 4.31: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina Superose
TM
12,
equilibrada com tampo acetato de sdio 10 mM, pH 4,6; vazo de eluio = 0,5 mL.min
-1
,
amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm. Legenda: (1) -Lg, (2) -Lg, (3) -La.
Devido baixa fora inica do eluente usado, interaes hidrofbicas significativas
ocorreram entre a matriz da coluna e as protenas, tendo por resultado um tempo mais longo
de eluio e menor massa molar observada. No foi possvel obter a massa molar exata pela
cromatografia gel, por isso, as fraes obtidas nesta tcnica foram analisadas por eletroforese
como mostra a Figura 4.32.

1
2
3
4
1
2
3

Figura 4.32: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para a amostra de soro
analisada por cromatografia gel (100 V e 30 mA). Legenda: (1) padro; (2) pico 1, (3) pico 2, (4)
picos 3 e 4 (referentes Figura 4.30).
A Figura 4.30 e a Figura 4.31 possuem o mesmo comportamento, porm ocorre na
ltima um deslocamento dos sinais, que se deve aos diferentes tampes utilizados em cada
corrida e as diferentes interaes destes com a resina da coluna cromatogrfica, por este
motivo, na eletroforese s foi analisado uma das amostras. Na Figura 4.30 o pico 1
corresponde ao BSA, os picos 2 e 3 podem corresponder -Lg em forma de dmero e
monmero, respectivamente, e o pico 4 pode corresponder -La, resultado que
corroborado na eletroforese mostrada na Figura 4.32. Na Figura 4.31, os picos 1 e 2
possivelmente correspondam -Lg em forma de dmero e monmero, respectivamente, e o
pico 3 -La.
Segundo CHEANG & ZYDNEY (2004), o duplo pico da -Lg (que pode ser observado
no sinal 2 da Figura 4.30 e no sinal 1 da Figura 4.31) acontece devido pequena diferena das
duas variantes desta protena.
No pH 7,0, Figura 4.30, observa-se que possivelmente a -Lg se apresente parte em
dmeros e parte em monmeros, ou seja, uma parte desta protena pode estar desnaturada, e,
por isso, nem todas as suas molculas encontram-se em dmeros (a sua configurao mais
estvel neste pH).
No pH 4,6, Figura 4.31, observa-se que no foram registrados octmeros da protena
-Lg pela anlise da cromatografia gel assim como no pH 7,0 esta provavelmente se encontra
em forma de dmeros e monmeros. Tambm possvel observar que no existe o pico do
BSA, que deve ter precipitado neste pH, que prximo ao seu ponto isoeltrico e
adicionalmente, segundo KEHOE et al. (2007) a taxa de desnaturao do BSA aumenta com o
aumento da concentrao das protenas do soro.
No entanto, alguma agregao das protenas de -Lg deve ocorrer no pH 4,6, porque
as membranas MF-7002 e VCWP apresentaram reteno parcial para esta molcula. A
ausncia de octmeros na cromatografia gel pode indicar que esta conformao menos
estvel que a de dmeros, fato que foi observado anteriormente na anlise do gel da Figura
4.25. Portanto, efeitos de diluio e aumento da concentrao de protenas na soluo podem
ter ocasionado a desagregao da -Lg, pois aps o incio da DF foi observado um aumento
BSA - 69 k Da
Lg - 18 kDa
La - 14 kDa
1 2 3 4

da concentrao de -Lg no permeado, para os experimentos com a membrana MF-7002.
Caso no ocorra a formao de octmeros, podem ocorrer interaes entre os diferentes
componentes da soluo provocando reteno maior de um ou outro componente.
O que de fato pode ser observado na cromatografia gel, que parte da -Lg pode
encontrar-se em forma de monmeros, o que indica que uma prvia desnaturao protica
irreversvel das molculas de -Lg pode ter ocorrido em algum momento do processamento
do soro em p. Mudanas fsico-qumicas nas diferentes fraes proticas so conduzidas por
tratamentos trmicos, o soro em p sofre trs tipos de tratamento de calor: pasteurizao,
concentrao por evaporao e secagem por spray drier. Segundo SGARBIERI (1996), as
protenas so relativamente termolbeis, mas a pasteurizao no desnatura as protenas, pois
o leite aquecido a 72
o
C por apenas 15 segundos. Porm, provavelmente algumas protenas
so inativadas e desnaturadas por tratamentos de calor mais severos, como por exemplo, a
concentrao por evaporao e a secagem por spray drier. KEHOE et al. (2007), afirmam que
as protenas devem ser liofilizadas ao invs de secas em spray drier, porque este processo
evita qualquer desnaturao das protenas.
Se algumas molculas estavam desnaturadas, elas poderiam passar para o permeado
das membranas investigadas com MMC menores, como a UF-C20 e a UF-C50, por exemplo,
mas, segundo KEHOE et al. (2007), as molculas desnaturadas tem maior possibilidade de
formar aglomerados de protenas, impedindo a passagem destes monmeros para o permeado.
Conforme WIT (1998), a -La uma protena com forte ligao ao clcio, porm h baixas
concentraes deste elemento, como no caso do concentrado protico deste trabalho, pode
polimerizar com outras protenas formando aglomerados. Se, por exemplo, existir um grupo -
SH livre em outra molcula (como por exemplo em monmeros desnaturados de -Lg), este
reage com uma das pontes S-S presente na -La originando uma associao de protenas.
WONG et al. (1999) afirmam que associao entre duas protenas de -La deve ocorrer abaixo
do pH 4, fato atribudo a mudana conformacional da molcula da protena, mas este no foi
o caso deste trabalho. FOX & MCSWEENEY (1998) relatam que com a desnaturao por calor,
o grupo -SH da -Lg exposto e reage com a casena (e provavelmente com a -La) com
efeitos muito significativos em algumas das propriedades fsico-qumicas tecnologicamente
importantes do leite e do soro. Ainda, possvel acrescentar, segundo HAVEA et al. (2001),
que o BSA pode formar pontes intermoleculares dissulfito com molculas de -Lg e a -La,
quando estas no se encontram nas suas formas mais estveis. Para evitar a desnaturao das
protenas o ideal seria utilizar o soro in natura, porm haveria variabilidade das amostras
iniciais, dificultando experimentos comparativos.
Alguns autores relatam em seus estudos a dificuldade de fracionar protenas atravs de
sistemas de membranas. Segundo LEITE et al., 2006 a eficincia da separao de protenas
por sistemas de membranas limitada pela polarizao por concentrao. No fracionamento
de protenas, a permeabilidade de uma protena aumenta com a sua concentrao superfcie
da membrana. A protena menos permevel rejeitada e forma-se uma camada limite de
transferncia de massa. A permeabilidade da protena menos permevel aumenta com a sua
concentrao e a seletividade da membrana diminui. De acordo com FOX & MCSWEENEY
(1998) duas principais razes ainda impedem o uso de tcnicas de ultrafiltrao para obteno

de fraes puras de protenas do soro: valores prximos dos tamanhos de protenas do soro e,
distribuio larga dos tamanhos dos poros das membranas.
Segundo SMITH (2003), vrios processos foram desenvolvidos para se obter fraes
das protenas -La e -Lg. Em alguns casos ocorre a purificao de somente uma das fraes.
Para a produo de duas fases purificadas podem ser distintas duas categorias de processo de
produo: uma que usa transio de fase (precipitao de -La e -Lg), e outra sem transio
de fase.
Um processo de separao das protenas sem transio de fase tem a vantagem de
reduzir a probabilidade de desnaturao das protenas. O uso de membranas para este
processo foi estudada extensivamente por TIMMER & VAN DER HORST (1998) apud SMITH
(2003). Os autores concluram que a filtrao com membranas no resulta em um produto
com alto grau de pureza. Isto ocorre devido a diferenas relativamente pequenas das massas
molares das protenas e dos seus pI. Ento, a diferena por excluso de tamanho e/ou por
excluso de Donnan para estes componentes muito pequena para obter eficincia de
separao suficiente e produo de fraes com alto grau de pureza das duas fraes, -La e
-Lg, simultaneamente. Segundo estes autores, membranas de filtrao podem ser usadas
como parte do processo de separao em combinao com um processo de precipitao, por
exemplo, para se obter fraes de protena com elevado teor de pureza.
Alguns estudos demonstram a viabilidade de utilizar membranas para separaes de
protenas, os dados so obtidos com sistemas que consistem em uma mistura artificial de duas
protenas previamente purificadas. CHEANG E ZYDNEY (2003) apud BHATTACHARJEE et al.
(2006), por exemplo, obtiveram uma recuperao de 90 % da -Lg de uma mistura binria
com -La. Estudos experimentais com misturas multi-componentes complexos na
alimentao mostram-se muito mais limitados, e o desempenho total destes sistemas muito
menos impressionante. Por exemplo, com o objetivo de purificar -La do soro cido de
casena, MULLER et al. (1999) utilizaram processo de UF combinando os modos de operao
concentrao batelada e DF, e como resultado, obtiveram uma pureza de somente 50 % de -
La no permeado final. BOTTOMLEY (1991) apud CHEANG & ZYDNEY (2004), descreveu um
processo de membrana em dois estgios para a purificao de -La do soro do queijo
Cheddar, mas o produto final continha apenas 25 % de -Lg. Segundo ZYDNEY (1998), o
fracionamento protico pode ocorrer utilizando membranas carregadas, assim como, associar
separao com membranas com outras metodologias como cromatografia e precipitao
seletiva.
4.3 Limpeza das membranas
Aps cada um dos experimentos 1, 2, 3 e 4 de concentrao e purificao das
protenas, o equipamento foi higienizado de acordo com o item 3.6.4. O procedimento foi
realizado em trs etapas de limpeza qumica e aps cada uma dessas etapas a membrana foi
submetida ao enxge com gua destilada. O objetivo foi restituir o fluxo de gua inicial, e
observar o comportamento do fluxo ao final de cada etapa da limpeza qumica.

A Figura 4.33 apresenta a mdia aritmtica das medidas do fluxo permeado de gua
aps os experimentos 1, 2, 3 e 4 ao final de cada etapa do tratamento qumico em que a
membrana UF-6001 foi submetida. Essas medidas de fluxo foram realizadas na presso
transmembrana mdia de 2 bar e na temperatura de 50 C.
0
20
40
60
80
100
120
UF-6001
J
p

(
L
.
m
-
2
h
-
1
)
Inicial Aps enxge com gua
Aps limpeza alcalina Aps limpeza cloro-alcalina
Aps limpeza cida

Figura 4.33: Fluxos de gua aps realizao dos experimentos e em cada etapa da limpeza qumica para a UF-
6001, P = 2 bar e T = 50 C, vazo de alimentao 840 L.h
-1

Atravs da Figura 4.33 pode-se observar que aps o enxge com gua para remoo
do restante de soro do sistema o fluxo ficou bastante baixo (21,3 L.m
-2
.h
-1
) cerca de 20 % do
fluxo inicial de gua, mas com as etapas de limpeza alcalina e cloro-alcalina ocorreu uma
recuperao expressiva (38 e 72 %) no fluxo de gua. Aps a limpeza cida, o fluxo de gua
inicial foi quase completamente restitudo, que nestas condies de operao era de 102,7
L.m
-2
.h
-1
. Somente a limpeza alcalina e cloro-alcalina no foram suficientes para restituir o
fluxo permeado, o fluxo foi restitudo em 96 % aps a limpeza cida. Os valores obtidos
foram utilizados como referncia para cada incio de um novo experimento de concentrao
do soro.
Aps cada experimento de fracionamento das protenas, em cada uma das membranas
testadas realizou-se o procedimento de limpeza. O procedimento foi realizado em trs etapas
de limpeza qumica para a MF-7002 e em duas etapas de limpeza para as UF-C50 e UF-C20,
segundo indicaes do fabricante, e aps cada uma dessas etapas a membrana foi submetida
ao enxge com gua destilada.


A Figura 4.34 apresenta as medidas do fluxo permeado de gua para a MF-7002 aps
o final de cada etapa do tratamento qumico. Essas medidas de fluxo foram realizadas na P
de 1,75 bar e na temperatura de 40 C.
0
50
100
150
200
250
300
MF-7002
J
p

(
L
.
m
-
2
h
-
1
)
Aps limpeza alcalina Aps limpeza cloro-alcalina
Aps limpeza cida

Figura 4.34: Fluxos de gua aps realizao dos experimentos e em cada etapa da limpeza qumica para a MF-
7002, P = 1,75 bar e T = 40 C, vazo de alimentao 700 L.h
-1

Na Figura 4.34 pode-se observar que o fluxo permeado de gua aps o enxge, foi de
70,3 L.m
-2
.h
-1
cerca de 26 % do fluxo inicial. Aps as etapas de limpeza alcalina e cloro-
alcalina ocorreu uma recuperao de 37 e 71 % no fluxo de gua. Aps a limpeza cida, o
fluxo de gua inicial foi restitudo em 96 %.
A Figura 4.35 apresenta as medidas do fluxo permeado de gua para a UF-C20 e a
Figura 4.36 para a membrana UF-C50, aps o final de cada etapa do tratamento qumico.
Essas medidas de fluxo foram realizadas na presso transmembrana de 2,25 bar e na
temperatura de 25 C.


0
200
400
600
800
1000
1200
1400
UF-C50
J
p

(
L
.
m
-
2
h
-
1
)
Aps limpeza alcalina Aps limpeza cida

C20, P = 2,25 bar e T = 25 C, vazo de alimentao 620 L.h
-1
.
0
100
200
300
400
500
UF-C20
J
p

(
L
.
m
-
2
h
-
1
)
Aps limpeza alcalina Aps limpeza cida

C50, P = 2,25 bar e T = 25 C, vazo de alimentao 400 L.h
-1
.
Para a membrana UF-C20, na Figura 4.35, observa-se que o fluxo aps o enxge com
gua, foi de 56 L.m
-2
.h
-1
, cerca de 12 % do fluxo de gua inicial. Aps a limpeza alcalina
houve uma recuperao de 48 % do fluxo e ao final da limpeza cida o fluxo foi
completamente restitudo. J, para a membrana UF-C50, na Figura 4.36 pode-se observar que
o fluxo permeado de gua aps o enxge, foi de 40,4 L.m
-2
.h
-1
, o que corresponde a 3,5 % do
fluxo inicial. Aps as etapas de limpeza alcalina ocorreu uma recuperao de 76 % no fluxo
de gua. Aps a limpeza cida, o fluxo de gua inicial foi restitudo em 100 %.

Captulo 5
Concluses e Sugestes para trabalhos
futuros
Com base nos resultados obtidos no desenvolvimento deste trabalho, pde-se formular
as concluses listadas a seguir.
Concentrao e Purificao Protica
O fluxo de gua aumenta linearmente com o aumento da presso transmembrana para
todas as membranas testadas, isto , quanto maior a presso transmembrana, maior o fluxo
permeado. Para as mesmas condies operacionais, ocorre uma diferena significativa nos
fluxos permeados do soro e da gua; para todas as membranas testadas o fluxo de gua foi
maior que o fluxo permeado de soro.
O fluxo permeado de soro diminui com o tempo de operao devido formao da
camada de polarizao por concentrao e fouling, e ainda, devido ao aumento da
concentrao da soluo e conseqentemente s mudanas nas propriedades de transporte,
difusividades mssica e de transferncia de quantidade de movimento e nas propriedades
da soluo, tais como massa especfica e viscosidade dinmica.
Nas DF o fluxo permeado fica abaixo do fluxo inicial da UF, devido ao fouling j formado
na etapa de concentrao das protenas e, tambm, devido ao baixo fator de diluio.
Quanto maior o FC na etapa de concentrao melhores resultados de purificao protica
so obtidos. Para o Experimento 2 com FC igual a 5 aps as cinco DFs atingiu-se 62 %
em massa de protena (base seca), enquanto que para o Experimento 4 com FC igual a 6
aps as quatro DFs o percentual mssico de protena em base seca foi de 70 %.
importante ressaltar que o fluxo permeado, no Experimento 4 no diminuiu com o
aumento do FC de 5 para 6.
Na etapa de DF, a quantidade de lactose e sais no concentrado diminui significativamente.
O percentual de lactose no concentrado, em base seca, para o Experimento 2 ao final das
DFs atingiu 35 %, enquanto, para o Experimento 4 atingiu 29 %. Para todos os quatro
116 CONCLUSES E SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS

experimentos de concentrao, o processo mostra-se eficiente na remoo de sais, pois, ao
final da UF o percentual se aproxima de zero, ou seja, boa parte do sal havia sido
removida do concentrado.
No Experimento 4 o concentrado da UF, antes da DF, foi de 5 L, e esta diminuio de
volume implicou em uma maior concentrao protica final e em um menor volume de
gua para a etapa de DF. Para o Experimento 2 utilizou-se 21 L de gua para a etapa de
DF e obteve-se um concentrado protico com 62 % em base seca; enquanto que para o
Experimento 4 foram utilizados 15 L de gua para a DF e o percentual protico foi de 70
% em base seca.
A diafiltrao mais eficiente quando realizada com pequenos volumes e em um nmero
maior de vezes; verificou-se que as DFs com volumes menores so bastante efetivas na
remoo de sais e lactose, para o Experimento 4, por exemplo, houve uma grande reduo
da concentrao dos outros elementos, em relao quantidade de protena, nas ltimas
duas DFs de 2,5 L.
Os resultados obtidos no Experimento 4 de concentrao protica so melhores do que os
obtidos para os experimentos 1, 2 e 3, e, portanto, as condies de trabalho do
Experimento 4 foram escolhidas como sendo a melhor estratgia a ser utilizada para se
obter uma maior purificao protica.
H um aumento de ST na corrente de concentrado durante a UF devido principalmente ao
aumento de concentrao de protena; no permeado a concentrao de ST
aproximadamente constante at o final da etapa de concentrao.
O retido possui concentraes mais elevadas de ST tanto na etapa de concentrao quanto
na etapa de DF; durante as DF ocorreu a reduo de ST para ambas as correntes, no
concentrado devido remoo de lactose e sais, no permeado devido diluio.
A concentrao de protenas no retido aumenta ao longo da etapa de concentrao;
durante as DFs no sofre grande variao, no entanto o teor de contaminantes, sais e
lactose, diminui significativamente nas DFs, o que resulta na purificao do concentrado
protico.
O aumento da concentrao de protena exerce um efeito maior sobre o fluxo do que a
remoo de lactose e sais. A concentrao de lactose possui comportamento similar ao de
ST e apresenta baixa reteno; ao final das DFs a concentrao de lactose no permeado
fica prxima a concentrao de slidos totais, ou seja, todo sal foi removido, e todos os
slidos que esto sendo retirados no permeado correspondem lactose.
O pH das amostras de concentrado e permeado permanece constante, ou seja, a soluo
no degradada durante o tempo de durao do experimento.
CONCLUSES E SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS 117

A condutividade eltrica permanece praticamente a mesma para o permeado e o
concentrado durante toda a etapa de UF, durante a etapa de DF a condutividade eltrica do
concentrado e do permeado foi decaindo aps a adio da gua destilada em cada DF.
A reteno das protenas total, a reteno de slidos totais aumenta com tempo de
experimento, e este aumento mais expressivo depois do incio das DFs; a membrana
apresenta uma reteno parcial a lactose o que ocasiona uma maior dificuldade na
purificao das protenas.
Fracionamento das Protenas Majoritrias
O fluxo de concentrado protico menor que o fluxo de gua pura para todas as todas as
membranas nas condies de operao empregadas, devido aos efeitos de polarizao por
concentrao e fouling.
Os fluxos permeados de concentrado protico foram semelhantes para as membranas
RZ04 e VCWP, sendo ligeiramente maior para a RZ04, em presses mais elevadas; a
membrana HN06 apresentou os menores fluxos permeados.
O fluxo permeado do concentrado protico foi semelhante para as membranas de MF e
para a RZ04; medida que a presso transmembrana aumentou o fluxo permeado da
RZ04 foi maior, mostrando que alm da geometria do mdulo, do tamanho de poro
nominal e da MMC, o material da membrana, a distribuio dos tamanhos de poros, a
porosidade, a espessura e a morfologia da membrana exercem uma grande influncia
sobre o fluxo permeado.
A reteno de lactose para a membrana HN06 fica em torno de 13 %; a RZ04 apresenta
uma reteno de aproximadamente 6 % para a lactose, enquanto a VCWP apresenta
reteno de 50 %; este resultado pode indicar que interaes membrana-soluo possam
estar ocorrendo.
A membrana VCWP reteve 78 % das protenas, enquanto a HN06 e a RZ04 mostraram
alta reteno protica, 98 % e 94 %, respectivamente. Como as membranas mencionadas
possuem MMC maiores que as protenas, pode ter ocorrido fouling (bloqueio de poros,
adsoro) e interaes entre os diferentes solutos presentes na soluo, isto , uma
agregao das diferentes molculas de protena entre si ou com a lactose, o que impediu a
sua passagem para a corrente permeada.
Para a membrana HN06 no ocorreu separao efetiva da -Lg e da -La, as duas
protenas permearam pela membrana.
No permeado da RZ04 no foi detectada nenhuma das protenas de interesse, este
resultado pode indicar que nos experimentos com a RZ04 todas as molculas de protena
interagiram com a membrana ou entre si, pois nenhuma das trs foi detectada no
permeado.

A membrana VCWP mostrou-se permevel s duas protenas, a -Lg e a -La, mostraram
concentraes semelhantes na amostra de permeado, e como a -Lg duas vezes mais
abundante que a -La no concentrado pode haver uma reteno menor da molcula de -
La pela membrana.
O fluxo de gua da MF-7002 comparvel ao da VCWP, apesar das duas membranas
possuirem diferenas na geometria do mdulo, no material e na estrutura.
H reteno parcial de lactose para a membrana MF-7002, tanto nas amostras da MF,
quanto da DF, variando de 80 % na MF at 30 % ao final da DF4; quanto protena na
MF h reteno de 65 %, nas DFs a reteno diminui gradativamente atingindo ao final
destas etapas 55 %.
No permeado recolhido da MF-7002 na etapa de concentrao, encontrou-se mais de 50 %
de -La, apesar desta estar presente em menor concentrao no retido apresentou
passagem preferencial para o permeado, ou seja, a mudana de pH beneficiou a agregao
da -Lg mesmo que esta agregao tenha sido parcial, pois esta protena tambm foi
encontrada no permeado.
No permeado das DFs da MF-7002 a -Lg est em maior quantidade no permeado do que
a -La, ou seja, a membrana no retm nenhuma das duas protenas, este fato pode ter
ocorrido devido ao efeito de diluio.
O fluxo permeado de gua para a UF-C50 tem valor superior ao fluxo de todas outras
membranas testadas, provavelmente esta membrana possui uma porosidade elevada.
Para a membrana UF-C50, os experimentos com a soluo de concentrado protico em pH
4,6 (40 C) apresentam fluxos no mnimo duas vezes maior que aqueles obtidos em pH
6,3 (25 C). Acredita-se que o efeito combinado de pH e temperatura deve ocasionar
diferentes interaes entre os componentes do soro e entre os componentes do soro e a
membrana, alm de influenciar tambm nas propriedades fsicas (viscosidade dinmica,
massa especfica) e nas caractersticas reolgicas da soluo (propriedades de transporte
como a viscosidade cinemtica e a difusividade mssica). Para a soluo com pH cido os
fenmenos de fouling e concentrao por polarizao foram mais acentuados, quando
comparados ao pH 6,3, provocando o decaimento de fluxo permeado maior. Para a
membrana UF-C50 a reteno de lactose no pH 6,3 de 60 %; e no pH 4,6 praticamente
nula.
Quanto as protenas, na UF-C50, para ambos pHs, a reteno foi quase de 100 %,
indicando que no ocorreu fracionamento das protenas.
Para a membrana UF-C20 o comportamento do fluxo de soro e de concentrado protico
o mesmo, porm o fluxo de soro maior que o de concentrado protico em todas as
presses transmembrana testadas devido a diferenas de propriedades, como viscosidade
dinmica e massa especfica existentes entre estas duas solues.
CONCLUSES E SUGESTES PARA TRABALHOS FUTUROS 119

A membrana UF-C20 no seletiva para a lactose, e reteve toda a protena, mostrando-se
ineficiente para o fracionamento.
Os resultados da cromatografia gel revelaram que, tanto no pH 7,0 quanto no pH 4,6 as
molculas de -Lg podem estar se apresentando parte em dmeros e parte em monmeros,
ou seja, parte destas molculas pode estar desnaturada, fato que pode ter ocorrido devido
aos tratamentos trmicos empregados durante o processamento do soro, como
concentrao por evaporao e secagem por spray drier.
Alguma agregao das protenas de -Lg deve ocorrer no pH 4,6, porque as membranas
MF-7002 e VCWP apresentaram reteno parcial a esta molcula; os octmeros tem uma
conformao menos estvel que os dmeros, e devem perder facilmente esta configurao.
Limpeza
Os fluxos permeados de todas as membranas que sofreram limpeza qumica foram
recuperados aps os procedimentos de limpeza.
Sugestes para trabalhos futuros
Testes com o soro in natura, para verificar se ocorrem diferenas nas propriedades do soro
seco que interfiram no fracionamento das protenas.
Fracionamento das principais protenas do soro atravs de tcnicas de separao com
membranas, como: MF, UF, NF e ED - gerar produtos com alto teor protico que possam
ser utilizados para fortificar produtos alimentcios;
Combinao de pH, fora inica e temperatura para maximizar diferenas do volume
hidrodinmico do produto (protena de interesse) e impurezas;
Recuperao da lactose do permeado da UF - gerar produto com elevada concentrao e
pureza de lactose, para ser usada em indstrias de alimentos, biotecnolgica e
farmacutica;
Recuperao de sais e da gua do soro do permeado do soro livre de lactose e protenas;
Utilizar os processos de separao com membranas associados entre si ou com outras
tcnicas de separao para aproveitar todos os componentes do soro.
Comparao das tcnicas com membranas com outras tecnologias de separao
tradicionais.
Estudo da viabilidade econmica para construo de uma planta industrial;

Modelagem e otimizao do processo de concentrao, purificao e fracionamento dos
componentes do soro.
Testes de diferentes tcnicas de limpeza, com diferentes concentraes de reagentes e
utilizao de ultrassom.
Avaliao de tcnicas para minimizar fouling e polarizao por concentrao: aplicao de
ultra-som, emprego de membranas carregadas positiva ou negativamente.

Captulo 6
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Apndice A
A.1 Mtodos Analticos
Neste anexo esto descritos os mtodos analticos utilizados para a realizao das
anlises das amostras do concentrado e do permeado dos processos da UF, DF e
fracionamento do soro de leite.
A.1.1 Anlise de Extrato Seco Total - mtodo gravimtrico
Materiais:
cpsula de fundo chato de porcelana;
areia tratada;
dessecador com slica gel ou cloreto de clcio;
pipeta volumtrica de 10 mL;
banho-maria;
estufa a 85 C;
balana analtica.
Procedimento
1. Cobrir as cpsulas de fundo chato com 10 g de areia tratada;
2. Levar a estufa a 105
o
C por 1 hora;
3. Esfriar em dessecador por 45 minutos e pesar;
4. Pipetar volumetricamente 10 mL de amostra distribuindo a soluo em toda a
superfcie da areia;
5. Levar ao banho-maria por 30 minutos;
6. Secar em estufa a 85
o
C por 2 horas;
7. Esfriar em dessecador e pesar;
8. Repetir os procedimentos 6 e 7 at peso constante ou mnimo.
Obs.: Quando a quantidade de slidos totais muito pequena aconselha-se tomar 20
mL de amostra.
132 A.1 MTODOS ANALTICOS

Clculo do extrato seco total:
V
m
ST

= (A1.1)
onde: ST = slidos totais (g.L
-1
); m = diferena de massa antes e aps a secagem (g); V =
volume da amostra (L).
A.1.2 Anlise de Lactose - Mtodo do cido dinitrossaliclico - DNS
Materiais:
estufa a 85 C;
reagente DNS;
tubos de ensaio;
lactose (padro).
Mtodo
1. Preparar uma soluo de DNS:
a. 0,25 gramas de cido 3,5-dinitrosaliclico
b. 75,0 gramas de Tartarato de sdio e potssio dissolvidos em 50 mL de NaOH 2
M.
c. 250 mL de gua.
2. Adicionar 200 L de padro, amostra ou controle a 2 mL de soluo DNS.
3. Aquecer a mistura em banho-maria a 100
o
C por 10 min.
4. Esperar esfriar e ler a absorbncia temperatura ambiente e a 570 nm.
5. Aplicar o valor da leitura na respectiva equao da curva-padro previamente
elaborada para o aparelho.
Obs: Sensibilidade do mtodo de 0,3 a 30 mM de lactose.
Metodologia para obteno da curva-padro para acares redutores
1. Preparar uma soluo de lactose 5 g.L
-1
.
2. Diluir para concentraes desejadas (Ex: 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 e 5,0 g.L
-1
).
3. Colocar em tubo de ensaio: 200 L da soluo contendo o acar + 2 mL do reagente
DNS.
4. Preparar uma soluo sem lactose, contendo H
2
O e DNS para zerar o aparelho.
5. Deixar em banho-maria a 100
o
C por 10 minutos.
6. Esperar esfriar at atingir a temperatura ambiente.
7. Ler a absorbncia em espectrofotmetro a 570 nm.
Obs: A curva-padro somente se aplica para leituras no aparelho em que foi
estabelecida.
A.1 MTODOS ANALTICOS 133

A.1.3 Anlise de acar - Mtodo fenol sulfrico
Materiais:
cido sulfrico 95,5;
fenol 80 % em peso;
micropipetas;
tubos de ensaio;
vrtex.
Mtodo analtico
1. Diluir amostras (normalmente entre 100 e 500 x)
2. Preparar amostras de acar (lactose, glicose, dextrose) com concentraes entre 10 e 70
mg.L
-1

3. Em tubos de ensaio adicionar 50 L de amostra e 450 L de gua destilada.
4. Preparar um tubo com 500 L de gua destilada (branco).
5. Adicionar 500 L de fenol 5 %.
6. Adicionar 2,5 mL de cido sulfrico. Deixar escorrer lentamente pela parede do tubo.
7. Agitar o tubo e esperar esfriar por aproximadamente 30 minutos.
8. Medir a absorbncia a 490 nm em cubeta de quartzo, mantendo cuidado na manipulao
das amostras devido ao alto teor cido.
Pontos crticos: diluio, homogeneizao, no deve-se expor todo contedo do cido
umidade ambiente devido a caracterstica higroscpica do cido.
A.1.4 Determinao da protena total - Mtodo de Lowry
Reagentes:
reagente A: dissolver 0,5 g de sulfato de cobre (CuSO
4
.5H
2
O) e 1,0 g de citrato de sdio
em 100 mL de gua destilada; (esta uma soluo estvel e pode ser preparada com
antecedncia);
reagente B: dissolver 20,0 g de carbonato de sdio (Na
2
CO
3
) e 4,0 g de hidrxido de sdio
(NaOH) em 1,0 L de gua destilada; (esta soluo no estvel e deve ser preparada na
hora da anlise);
reagente C: misturar 1 mL do reagente A e 50 mL do reagente B;
reagente D: Reagente Folin-Ciocalteus 2 N e gua destilada preparados na proporo 1:1;
(soluo estvel);
soluo padro de BSA (0,5 mg.mL
-1
).
Procedimentos
1. Para determinar a concentrao de protenas da amostra, construir uma curva padro
de calibrao com cinco concentraes diferentes de protena, BSA 0; 0,1; 0,2; 0,3;
0,4; 0,5 mg.mL
-1
.

2. Adicionar 2,5mL do reagente C a um tubo de ensaio contendo 500 mL de amostra
diluda apropriadamente (contendo at 0,5mg.mL
-1
) de protenas e misturar bem. A
amostra deve ser diluda de forma que sua concentrao fique dentro da amplitude da
curva de calibrao. Normalmente, diluies de 40 vezes so suficientes (50 mL de
amostra + 1950 mL de gua destilada);
3. Incubar a temperatura ambiente por 5-10 minutos;
4. Adicionar a seguir 250mL do reagente D, misturar bem e incubar novamente por 30
minutos;
5. Ler a absorbncia 750 nm.
6. A concentrao das amostras determinada pela interpolao dos valores de
absorbncia na curva padro.
Obs.: A curva de calibrao deve ser feita todas as vezes em que a metodologia for
utilizada, j que alguns reagentes no so estveis e devem ser preparados no momento da
anlise.
A.1.5 Anlise de protena - Eletroforese SDS PAGE (Sodium
Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis of Proteins)
Materiais:
resolving gel 10 % (Gel fracionador, de separao, resoluo ou corrida);
stacking gel 5 % (Gel de entrada, concentrador ou empilhamento);
tampo para aplicao da amostra (Tris-HCl pH 6,8, contendo SDS, glicerol, corante
Comassie Blue e -mercaptoetanol);
tampo de corrida (Tris-Glicina-SDS pH 8,3);
soluo corante Comassie Blue R250;
soluo descorante (Metanol 20%; cido actico glacial 30% e 50% gua deionizada).
Procedimentos
As amostras devem ser diludas at que se encontrem na concentrao ideal para fazer
a aplicao no gel, ou seja, se for aplicado 10 L de amostra deve-se ter uma concentrao de
5 g.L
-1
, o que vai resultar em 50 g de protena por banda eletrofortica.
Deve-se adicionar a cada eppendorf 5 L de tampo para aplicao da amostra. As
amostras devem ser aquecidas a 90 C por 5 minutos e centrifugadas a 10.000 rpm por 5
minutos.
Os gis stacking e resolving devem ser preparados conforme mostra a Tabela A.1. O
sistema de eletroforese deve ser montado como mostra a Figura A.1, e as amostras devem ser
aplicadas.
A eletroforese deve ser iniciada aplicando uma voltagem de 80 V at a frente de
corrida atingir o gel de migrao, ento se deve aumentar a voltagem para 120 V. Quando a
migrao das amostras atinge o fim do gel de resoluo, deve-se desligar a fonte e retirar o gel
da cmara, despejar a soluo de eletroforese e remover o gel, que deve ser corado.
A.1 MTODOS ANALTICOS 135

Para corar o gel deve-se utilizar uma mistura de Comassie Blue com metanol, cido
actico e gua, o gel deve permanecer durante aproximadamente 12 horas nesta soluo. Aps
este perodo, deve-se descorar o gel com a soluo descorante, at que o gel apresente as
bandas proticas bem definidas, enquanto o restante do gel deve ficar o mais transparente
possvel.
A Tabela A.1 mostra a quantidade de cada componente utilizado para preparao dos
gis de eletroforese. A Figura A.1 mostra o esquema de montagem da unidade de eletroforese.
Tabela A.1: Componentes das Solues para preparao dos gis de eletroforese
Componentes da Soluo *
Resolving gel - 15%
(mL)
Stacking gel - 5%
(mL)
Soluo Acrilamida/Bis-Acrilamida (30 %) 5,00 1,30
Soluo Tampo Tris HCl 0,5 M, pH 6,8 - 2,00
Soluo tampo Tris HCl 1,5 M, pH 8,8 2,50 -
SDS 10 % 0,10 0,08
gua Deionizada 2,30 4,50
TEMED 0,004 0,008
Persulfato de amnio - APS 10 % 0,10 0,08
Volume total (mL) 10,00 8,00
* Quantidades suficientes para 2 gis.

Figura A.1: Esquema da preparao do sistema de eletroforese.
A.1.6 Anlise de Protena Cromatografia Gel
Materiais:
coluna Superose
TM
12;
tampo fosfato pH 7.0;
tampo acetato pH 4,6;
protenas com massa molar conhecida (Ferritina 440 kDa, Aldolase 158 kDa,
Conalbumina 75 kDa, Ovalbumina - 43 kDa, Anidrase Carbnica 29 kDa);

soluo de soro com concentrao protica de 9 g.L
-1
.
Procedimentos
A etapa de gel filtrao foi realizada em coluna de 10 x 300 mm (General Eletric
Company) empacotada com a resina Superose
TM
12 (General Eletric Company) e equilibrada
com tampo acetato de sdio 10 mM pH 3,5 (8,203 g de acetato de sdio anidro, 100 mL de
cido actico e gua destilada) e o pH foi acertado para 4,6 com NaOH. Para o pH 7,0 a
coluna foi equilibrada tampo fosfato de sdio 10 mM (0,38 g de fosfato monobsico, 0,51 g
de fosfato dibsico e gua destilada) o pH foi acertado para 7,0 com NaOH.
A coluna equilibrada com soluo tampo, primeiro a uma vazo de 60 mL.min
-1

durante 1h e, depois de ajustado o leito, a uma vazo de 20 mL.min
-1
at completa
estabilizao (12h). A coluna calibrada com blue dextran de 2 kDa. Em seguida, realiza-se o
perfil de eluio da coluna com as protenas de massa molar conhecida. So aplicados 200 L
da amostra de soro e aps a entrada da amostra, a eluio das protenas feita com tampo
fosfato ou acetato com uma vazo de 0,5 mL.min
-1
. As leituras da absorbncia em 280 nm so
realizadas para a avaliao do perfil de eluio das protenas.

Apndice B
Dados Experimentais
Neste apndice esto documentadas as tabelas de dados dos experimentos realizados
ao longo deste trabalho, assim como, as duplicatas de todos os experimentos.
B.1 Concentrao e Purificao de Protenas - tabelas
Tabela B.1: Dados de fluxo mdio de gua e reteno mdia de dextrana em funo da P, para
as membranas UF-6001, UF-6002 e UF-7001, a 30 C.
UF-6001 UF-6002 UF-7001
P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) Reteno (%) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) Reteno (%) J
p
(L.m
-2
.h
-
1
)
Reteno (%)
1 59,83 99,98 230,23 0,99 243,64 26,74
2 102,68 100,05 350,89 0,40 387,79 21,38
3 156,43 100,35 452,03 0,59 506,08 20,58
4 208,38 100,50 601,39 0,68 700,08 23,45

Tabela B.2: Dados de fluxo mdio de soro em funo da P, para a membrana UF-6001, a 50 C
e vazo de alimentao de 840 L.h
-1
.
P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
3,75 45,71
3,25 39,35
2,70 33,90
2,15 26,88
1,75 22,97
1,25 18,89
0,75 11,25
138 DADOS EXPERIMENTAIS

Tabela B.3: Resumo dos dados mdios de concentrao, massa e percentual (*base seca) de protena, lactose e sais para o concentrado dos
Experimentos 1, 2, 3,e 4 em funo da etapa do processo utilizando a membrana UF-6001, T= 50 C, P= 2 bar e vazo de alimentao mdia de 840
L.h
-1
.
Etapa ST Protena Lactose Sais

Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
%*
Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
%*
Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
%*
Experimento1
UF i 58,6 1758,0 9,3 279,0 15,9 42,3 1269,0 72,2 7,0 210,0 11,9
UF f 82,8 496,8 29,0 174,0 35,0 53,6 321,6 64,7 0,1 0,6 0,1
DF1 76,3 457,8 30,6 183,6 40,1 45,6 273,6 59,8 0,1 0,6 0,1
DF2 70,8 424,8 30,5 183,0 43,1 40,3 241,8 56,9 0,0 0,0 0,0

Experimento 2
UF i 59,3 1779,0 9,1 273,0 15,3 43,2 1296,0 72,8 7,2 216,0 12,1
UF f 81,3 487,8 28,9 173,4 35,5 52,3 313,8 64,3 0,1 0,6 0,1
DF1 80,5 483,0 29,9 179,4 37,1 50,6 303,6 62,9 0,0 0,0 0,0
DF2 72,9 437,4 29,3 175,8 40,2 42,6 255,6 58,4 0,0 0,0 0,0
DF3 66,3 397,8 30,6 183,6 46,2 35,7 214,2 53,8 0,0 0,0 0,0
DF4 58,8 352,8 30,8 184,8 52,4 28,0 168,0 47,6 0,0 0,0 0,0
DF5 47,8 286,8 30,8 184,8 64,4 17,0 102,0 35,6 0,0 0,0 0,0

Experimento 3
UF i 60,3 1809,0 9,2 276,0 15,3 44,1 1323,0 73,1 7,3 219,0 12,1
UF f 86,3 431,5 36,7 183,5 42,5 49,6 248,0 57,5 0,0 0,0 0,0
DF1 69,4 347,0 36,8 184,0 53,0 32,6 163,0 47,0 0,0 0,0 0,0
DF2 62,4 312,0 36,8 184,0 59,0 25,6 128,0 41,0 0,0 0,0 0,0

Experimento 4
UF i 58,1 1743,0 9,3 279,0 16,0 41,8 1254,0 71,9 7,2 216,0 12,4
UF f 85,9 429,5 36,8 184,0 42,8 49,1 245,5 57,2 0,0 0,0 0,0
DF1 71,5 357,5 36,5 182,5 51,0 35,0 175,0 49,0 0,0 0,0 0,0
DF2 64,7 323,5 36,8 184,0 56,9 27,9 139,5 43,1 0,0 0,0 0,0
DF3 59,5 297,5 36,6 183,0 61,5 22,9 114,5 38,5 0,0 0,0 0,0
DF4 52,5 262,5 36,9 184,5 70,3 15,6 78,0 29,7 0,0 0,0 0,0
DADOS EXPERIMENTAIS 139

Tabela B.4: Resumo dos dados mdios de concentrao, massa e percentual (*base seca) de protena, lactose e sais para o concentrado dos
Experimentos 2 e 4 em funo da etapa do processo utilizando a membrana UF-6001, T= 50 C, P= 2 bar e vazo de alimentao mdia de 840
L.h
-1
(duplicatas dos experimentos 2 e 4).
Etapa ST Protena Lactose Sais

Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
%*
Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
%
Concentrao
(g.L
-1
)
Massa
(g)
%*
Experimento 2'
UF i 58,3 1749,0 9,1 273,0 15,6 43,2 1296,0 74,1 7,0 210,0 12,0
UF f 97,3 583,8 29,6 177,6 34,4 48,6 291,6 56,4 0,1 0,6 0,1
DF1 86,1 516,6 29,9 179,4 39,3 44,1 264,6 58,0 0,0 0,0 0,0
DF2 76,0 456,0 30,0 180,0 45,9 40,3 241,8 61,7 0,0 0,0 0,0
DF3 65,3 391,8 30,2 181,2 50,7 35,7 214,2 59,9 0,0 0,0 0,0
DF4 59,6 357,6 30,6 183,6 52,6 28,0 168,0 48,1 0,0 0,0 0,0
DF5 50,4 302,4 30,6 183,6 60,7 19,8 118,8 39,3 0,0 0,0 0,0

Experimento 4'
UF i 58,2 1746,0 9,2 276,0 15,8 42,0 1260,0 72,2 7,0 210,0 12,0
UF f 90,2 451,0 35,6 178,0 39,5 54,6 273,0 60,5 0,0 0,0 0,0
DF1 69,9 349,5 35,9 179,5 51,4 34,0 170,0 48,6 0,0 0,0 0,0
DF2 65,4 327,0 36,5 182,5 55,8 28,9 144,5 44,2 0,0 0,0 0,0
DF3 61,8 309,0 36,2 181,0 58,6 25,6 128,0 41,4 0,0 0,0 0,0
DF4 52,3 261,5 36,5 182,5 69,8 15,8 79,0 30,2 0,0 0,0 0,0
*base seca

Tabela B.5: Dados detalhados do Experimento 1, incluindo concentraes de slidos totais, protena, lactose, condutividade eltrica, pH para as
amostras de concentrado e permeado monitoradas conforme o tempo e etapa dos processos de concentrao e purificao do soro utilizando a
membrana UF-6001, T= 50 C, P= 2 bar e vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
Concentrado Permeado
Etapa
Tempo
(min)
Amostra
J
p

(L.m
-2
.h
-1
)
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. Eltrica
(S.cm
-1
)
pH
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Condutividade
(S.cm
-1
)
pH
UF 0 1 38,5
58,6 9,3 42,3
6,78E-03 6,7 44,1 0,3 36,6 6,67E-03 6,8
UF 30 2 38,3
55,2 9,3 39,9
6,77E-03 6,7 45,3 0,3 35,7 6,69E-03 6,7
UF 60 3 33,2
57,8 11,5 41,3
6,81E-03 6,7 41,6 0,0 35,7 6,78E-03 6,7
UF 90 4 32,4
65,8 19,7 42,1
6,87E-03 6,7 47,5 0,0 40,7 6,75E-03 6,7
UF 120 5 29,0
69,5 23,8 42,7
6,88E-03 6,7 45,1 0,0 38,2 6,82E-03 6,8
UF 150 6 22,5
73,1 24,5 46,6
6,91E-03 6,7 43,5 0,0 38,2 6,98E-03 6,8
UF 180 7 18,0
76,5 26,8 48,7
6,92E-03 6,7 48,1 0,0 38,8 6,97E-03 6,8
UF 210 8 15,4
76,6 27,1 48,5
6,94E-03 6,7 42,7 0,0 39,7 7,01E-03 6,8
UF 240 9 16,2
79,7 27,8 51,4
6,95E-03 6,7 52,5 0,0 40,5 7,05E-03 6,8
UF 268 10 20,2
82,8 29 53,6
6,96E-03 6,8 52,7 0,0 40,7 7,14E-03 6,8
DF1 341 11 16,1
76,3 30,6 45,6
4,50E-03 6,9 27,9 0,0 25,9 4,50E-03 6,8
DF2 415 12 18,5
70,8 30,5 40,3
2,91E-03 6,9 15,6 0,0 14,8 2,69E-03 6,8


-1
.
Etapa
Tempo
(min)
Amostra
J
p

(L.m
-2
.h
-1
)
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. eltrica
(S.cm
-1
)
pH
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. eltrica
(S.cm
-1
)
pH
UF 0 1 34,7
59,3 9,1 43,2
6,39E-03
6,3
36,6 1,2 33,3 5,78E-03
6,3
UF 10 2 32,8
54,8 10,3 38,5
6,36E-03
6,3
33,1 0,9 34,1 5,76E-03
6,3
UF 28 3 30,1
55,4 11,4 39
6,43E-03
6,3
39,8 0,5 37,0 5,60E-03
6,3
UF 43 4 28,6
59,6 16,8 38,8
6,40E-03
6,3
39,5 0,1 34,8 5,78E-03
6,3
UF 58 5 27,2
60,4 18,6 38,8
6,42E-03
6,3
36,0 0,0 35,6 5,78E-03
6,3
UF 73 6 26,2
63,4 21,5 39,9
6,35E-03
6,6
33,4 0,0 36,2 5,78E-03
6,6
UF 103 7 25,9
65,9 23,6 41,3
6,52E-03
6,3
38,9 0,0 36,6 5,78E-03
6,3
UF 133 8 25,3
69,3 25,8 42,5
6,54E-03
6,3
35,4 0,1 37,0 5,78E-03
6,3
UF 163 9 24,8
70,4 26,9 43
6,63E-03
6,3
37,1 0,0 38,7 6,01E-03
6,3
UF 193 10 23,9
74,5 27,6 46,7
6,60E-03
6,3
27,2 0,0 39,9 6,14E-03 6,3
UF 223 11 22,7
81,3 28,9 52,3
5,60E-03
6,3
27,9 0,0 39,8 6,04E-03 6,2
DF1 293 12 22,2
80,5 28,9 51,6
5,56E-03
6,3
25,2 0,0 27,0 4,52E-03 6,2
DF2 333 13 22,5
71,9 29,3 42,6
4,28E-03
6,3
21,0 0,0 20,0 3,20E-03 6,4
DF3 373 14 20,2
66,3 30,6 35,7
3,79E-03
6,6
16,0 0,0 17,3 3,15E-03 6,4
DF4 413 15 25,5
58,8 30,8 28
3,30E-03
6,6
14,4 0,0 16,3 2,31E-03 6,5
DF5 443 16 25,6
47,8 30,8 17
2,91E-03
6,7
13,1 0,0 11,1 1,90E-03 6,4
142 2. DADOS EXPERIMENTAIS

-1
.
Etapa
Tempo
(min)
Amostra
J
p

(L.m
-2
.h
-1
)
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. Eltrica
(S.cm
-1
)
pH
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. eltrica
(S.cm
-1
)
pH
UF 0 1 28,8
60,3 9,2 44,1
6,78E-03 6,5 46,3 0,0 42,3 4,23E-02 6,4
UF 35 2 25,1
65 11,2 47,8
6,82E-03 6,5 45,9 0,3 42,4 4,24E-02 6,4
UF 65 3 20,8
68,2 16,8 48,4
6,85E-03 6,5 46,0 0,0 43,6 4,36E-02 6,4
UF 95 4 18,9
74,5 23,6 48,9
6,89E-03 6,5 0,0 0,0 44,5 4,45E-02 6,4
UF 125 5 19,1
77,6 26,8 49,8
6,91E-03 6,5 47,0 0,1 43,6 4,36E-02 6,4
UF 155 6 19,5
74,4 27,9 46
6,92E-03 6,5 48,9 0,0 45,9 4,59E-02 6,4
UF 185 7 18,4
77,7 32,5 45
6,94E-03 6,5 48,9 0,0 46,1 4,61E-02 6,4
UF 215 8 17,7
83,1 35,6 47,4
6,98E-03 6,5 0,0 0,0 45,3 4,53E-02 6,3
UF 239 9 16,6
86,3 36,7 49,6
6,97E-03 6,5 52,6 0,0 49,6 4,96E-02 6,3
DF1 356 10 19,1
69,4 36,8 32,6
3,36E-03 6,7 18,0 0,0 18,3 1,83E-02 6,5
DF2 415 11 17,5
62,4 36,8 25,6
2,23E-03 6,6 12,0 0,0 10,9 1,09E-05 6,5


-1
.
Etapa
Tempo
(min)
Amostra
J
p

(L.m
-2
.h
-1
)
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. eltrica
(S.cm
-1
)
pH
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. eltrica
(S.cm
-1
)
pH
UF 0 1 35,2
58,1 9,3 41,8
6,45E-03 6,4 47,3 0,4 39,2 6,30E-03 6,4
UF 35 2 28,4
60,7 12,5 42,2
6,45E-03 6,4 46,7 0,0 41,9 6,29E-03 6,4
UF 65 3 24,1
62 15,6 43,4
6,49E-03 6,4 46,2 0,0 41,5 6,35E-03 6,4
UF 95 4 18,3
67,6 21,6 44
6,47E-03 6,4 45,2 0,0 39,0 6,37E-03 6,4
UF 125 5 18,5
72,3 26,8 44,5
6,49E-03 6,4 45,0 0,0 38,4 6,42E-03 6,3
UF 155 6 18,6
76,1 29,6 46
6,50E-03 6,4 45,0 0,0 41,2 6,40E-03 6,3
UF 185 7 16,5
79 31,5 47,3
6,63E-03 6,4 44,2 0,0 41,9 6,40E-03 6,3
UF 215 8 16,0
82,7 33,9 48,7
6,59E-03 6,4 49,6 0,0 41,2 6,58E-03 6,3
UF 265 9 15,4
85,9 36,8 49,1
6,64E-03 6,4 50,9 0,0 42,8 6,64E-03 6,3
DF1 329 10 16,0
71,5 36,5 35
4,63E-03 6,4 32,3 0,0 27,9 4,56E-03 6,3
DF2 395 11 16,5
64,7 36,8 27,9
3,28E-03 6,5 19,3 0,0 19,4 3,09E-03 6,3
DF3 430 12 16,6
59,5 36,6 22,9
2,68E-03 6,4 14,8 0,0 15,1 2,47E-03 6,3
DF4 465 13 15,5
52,5 36,9 15,6
2,23E-03 6,3 12,1 0,0 10,7 1,96E-03 6,2


Tabela B.9: Dados detalhados da duplicata do Experimento 2, incluindo concentraes de slidos totais, protena, lactose, condutividade eltrica, pH
para as amostras de concentrado e permeado monitoradas conforme o tempo e etapa dos processos de concentrao e purificao do soro utilizando
a membrana UF-6001, T= 50 C, P= 2 bar e vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
Etapa
Tempo
(min)
Amostra
J
p

(L.m
-2
.h
-1
)
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose (g.L
-
1
)
Cond. Eltrica
(S.cm
-1
)
pH
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. Eltrica
(S.cm
-1
)
pH
UF 0 1
32,7 58,3 9,1 43,2 6,91E-03
6,5 44,1 0,3 35,6 6,67E-03 6,5
UF 30 2
24,4 61,6 11,4 39,0 6,92E-03
6,5 45,3 0,0 36,7 6,69E-03 6,5
UF 60 3
22,2 66,0 17,0 38,8 6,94E-03
6,5 41,6 0,0 35,7 6,78E-03 6,5
UF 90 4
21,0 68,3 19,6 38,8 6,95E-03
6,5 47,5 0,0 41,7 6,75E-03 6,5
UF 120 5
21,2 74,6 21,6 39,9 6,96E-03
6,5 45,1 0,0 38,2 6,82E-03 6,6
UF 150 6
19,4 76,9 22,6 41,3
6,78E-03 6,5 43,5 0,0 38,2 6,98E-03 6,6
UF 180 7
17,9 79,8 25,9 42,5
6,77E-03 6,5 48,1 0,0 38,8 6,97E-03 6,6
UF 210 8
19,9 80,8 27,0 43,0
6,81E-03 6,6 42,7 0,0 39,7 7,01E-03 6,6
UF 240 9
19,8 81,8 28,6 52,3
6,87E-03 6,7 52,5 0,0 41,5 7,05E-03 6,6
UF 268 10
20,1 97,3 29,6 48,6
6,88E-03 6,8 52,7 0,0 40,7 7,14E-03 6,8
DF1 341 11
20,3 86,1 29,9 44,1
4,50E-03 6,9 27,9 0,0 26,0 4,50E-03 6,8
DF2 415 12
19,7 76,0 30,0 40,3 3,79E-03
6,9 15,6 0,0 14,8 2,69E-03 6,8
DF3 443 13 20,2
65,3 30,2 35,7 3,30E-03
6,4 16,0 0,0 17,3 3,15E-03 6,4
DF4 510 14 20,5
59,6 30,6 28,0
2,91E-03 6,4 14,4 0,0 16,3 2,31E-03 6,5
DF5 549 15 19,6
50,4 30,6 19,8
2,91E-03 6,7 13,1 0,0 11,1 1,90E-03 6,4


Tabela B.10: Dados detalhados da duplicata do Experimento 4, incluindo concentraes de slidos totais, protena, lactose, condutividade eltrica,
pH para as amostras de concentrado e permeado monitoradas conforme o tempo e etapa dos processos de concentrao e purificao do soro
utilizando a membrana UF-6001, T= 50 C, P= 2 bar e vazo de alimentao mdia de 840 L.h
-1
.
Etapa
Tempo
(min)
Amostra
J
p

(L.m
-2
.h
-1
)
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. eltrica
(S.cm
-1
)
pH
ST
(g.L
-1
)
Protena
(g.L
-1
)
Lactose
(g.L
-1
)
Cond. Eltrica
(S.cm
-1
)
pH
UF 0 1
28,8 58,2 9,2 42
6,45E-03
6,5
47,3 0,5 39,2 6,30E-03
6,4
UF 30 2
25,1 60,1 11,9 42,2
6,45E-03
6,5
46,7 0,0 41,9 6,29E-03
6,4
UF 60 3
20,8 63,2 16,8 43,4
6,49E-03
6,5
46,2 0,0 41,5 6,35E-03
6,4
UF 90 4
18,9 67,5 20,9 44,6
6,47E-03
6,5
45,2 0,0
42,3
6,37E-03
6,4
UF 120 5
19,1 69,1 23,6 44,5
6,49E-03
6,5 46,3
0,0
42,4
6,42E-03
6,4
UF 150 6
19,5 74,4 27,9 46
6,50E-03
6,5 45,9
0,0
43,6
6,40E-03
6,4
UF 180 7
18,4 79,8 31 48,6
6,63E-03
6,5 46,0
0,0
44,5
6,40E-03
6,4
UF 210 8
17,7 85,6 34,9 50,6
6,59E-03
6,5 0,0
0,0
43,6
6,58E-03
6,3
UF 260 9
16,6 90,2 35,6 54,6
6,64E-03
6,5 47,0
0,0
45,9
6,64E-03
6,3
DF1 325 10 16,0
69,9 35,9 34
4,63E-03
6,7 48,9
0,0
45,3
4,56E-03
6,5
DF2 395 11 16,5
65,4 36,5 28,9
3,28E-03
6,6 52,6
0,0
29,7
3,09E-03
6,5
DF3 430 12 16,6
61,8 36,2 25,6
2,55E-03 6,4
18,0
0,0
15,2
2,47E-03 6,3
DF4 465 13 15,5
52,3 36,5 15,8
1,98E-03 6,3
12,0
0,0 10,7 1,96E-03 6,2


B.2 Fracionamento das Protenas tabelas
Tabela B.11: Dados de fluxo permeado de gua em funo do tempo para compactao das
-1
, T = 25 C , P =3,25 bar.
VCWP HN06 RZ04
tempo(min) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
0
365,56 72,40 250,68
5
362,30 71,08 243,08
10
361,70 70,60 233,60
15
360,89 65,90 225,60
20
358,32 60,99 210,80
25
355,26 52,60 210,66
30
350,20 50,38 210,80
35
350,50 50,40

40
350,60 50,60

Tabela B.12: Dados de fluxo permeado de gua para as membranas VCWP, HN06 e RZ04 vazo
-1
, T = 40 C (VCWP e RZ04) e 25 C (HN06).
VCWP HN06 RZ04
P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
3,3 354,2 3,2 38,6 3,3 212,4
2,5 294,7 2,5 30,2 2,5 181,9
2,0 252,5 2,0 26,3 2,0 148,9
1,5 200,7 1,5 20,9 1,5 112,0
1,0 156,0 1,0 15,9 1,0 73,8

Tabela B.13: Duplicata dos dados de fluxo permeado de gua para as membranas VCWP, HN06
e RZ04 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C (VCWP e RZ04) e 25 C (HN06).
VCWP HN06 RZ04
P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
3,3 316,9 3,2 40,6 3,3 205,4
2,5 270,7 2,5 30,6 2,5 190,9
2,0 233,1 2,0 27,2 2,0 155,9
1,5 207,1 1,5 22,3 1,5 110,0
1,0 154,5 1,0 13,9 1,0 75,8


Tabela B.14: Dados de fluxo permeado de concentrado protico para as membranas VCWP,
HN06 e RZ04 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6 (VCWP e RZ04) e 25 C, pH =
6,3 (HN06).
VCWP HN06 RZ04
P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
3,2 48,3 2,8 10,9 3,0 57,6
2,8 42,2 2,2 8,7 2,4 47,3
2,2 36,1 1,7 6,8 2,0 38,5
1,8 30,8 1,3 5,8 1,5 31,4
1,3 25,3 1,0 22,4

Tabela B.15: Duplicata dos dados de fluxo permeado de concentrado protico para as
-1
, T = 40 C, pH = 4,6 (VCWP e
RZ04) e 25 C, pH = 6,3 (HN06).
VCWP HN06 RZ04
P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) P(bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
3,2 69,0 2,8 10,1 3,0 55,6
2,8 61,0 2,2 8,3 2,4 45,5
2,2 53,2 1,7 6,4 2,0 35,2
1,8 48,3 1,3 5,5 1,5 30,5
1,0 32,5 1,0 20,1

Tabela B.16: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de concentrado e
permeado das membranas VCWP, HN06 e RZ04 (duplicata).
Amostras
Concentrao de Lactose
(g.L
-1
)
Concentrao de Protena
(g.L
-1
)
HN06 C 18,1 31,5
HN06 P 12,0 0,4
VCWP C 18,1 31,5
VCWP P 6,8 1,8
RZ04 C 18,1 31,5
RZ04 P 16,2 1,1

Figura B.1: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) do experimento de
duplicata para as amostras de concentrado e permeado da membrana HN06, RZ04,
VCWP (100 V e 30 A). Legenda: (1) HNO6C; (2) HN06P, (3) RZ04C, (4) RZ04P,
(5) VCWPC, (6) VCWPP, (7) padro.

Tabela B.17: Dados de fluxo permeado de gua em funo do tempo para compactao da
membrana MF-7002 vazo de alimentao 700 L.h
-1
, T = 25 C , P =3,25 bar.
Tempo (min) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
0 636,7
5 642,3
10 633,0
15 634,2
20 624,6
35 628,8
45 595,6
55 597,2
65 575,0
75 575,1
85 565,3
100 555,4
115 530,2
130 531,3
140 532,6
150 531,5

Tabela B.18: Dados de fluxo permeado de gua e de concentrado protico em funo da presso
transmembrana para a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6 (concentrado).
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
gua Concentrado Protico
3,25 400,09 41,98
2,75 365,26 41,68
2,25 327,27 38,11
1,75 269,14 31,17
1,25 178,64 25,99
0,75 110,27 16,33
1 2 3 4 5 6 7

Tabela B.19: Duplicata dos dados de fluxo permeado de gua e de concentrado protico em
funo da presso transmembrana para a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH =
4,6 (concentrado).
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
gua Concentrado Protico
3,25 405,91 41,99
2,75 370,03 41,05
2,25 330,73 35,44
1,75 270,98 32,17
1,25 180,80 26,70
0,75 110,17 15,40

Tabela B.20: Dados de fluxo permeado de concentrado protico em funo do tempo para a
membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6, P = 1,75 bar.
Etapa tempo (min) Amostra J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
UF 0 MC1 / MP1 27,80
UF 15 25,62
UF 30 22,52
UF 35 MP2 / MC2 23,51
DF1 36 23,51
DF1 40 18,31
DF1 50 19,12
DF1 65 17,41
DF1 80 DF1C/ DF1P 17,10
DF2 81 15,85
DF2 95 16,18
DF2 110 15,27
DF2 125 15,26
DF2 130 DF2C/DF2P 13,95
DF3 131 13,40
DF3 150 13,99
DF3 170 13,96
DF3 186 13,52
DF3 187 DF3C/ DF3P 13,25
DF4 200 14,65
DF4 215 15,18
DF4 230 13,33
DF4 245 DF4C/DF4P 13,53

Tabela B.21: Dados de intensidade do modelo (pixel) e de intensidade relativa, correspondendo
a quantidade de protena em cada banda eletrofortica das amostras de concentrado e
permeado da membrana MF-7002.
Protenas
Intensidade
Relativa
Intensidade do
Modelo (pix)
Intensidade
Relativa
Intensidade do
Modelo (pix)
MC1 MP1
outras protenas 0,1628 62220,86 0,0303 12606,42
-Lg 0,5065 156174,65 0,4685 125947,92
-La 0,3307 100117,65 0,5012 219824,19

MC2
MP2
outras protenas 0,1408 70655,24 0,0337 14024,63
-Lg 0,5267 434248,39 0,3885 247550,38
-La 0,3324 139611,69 0,5778 226559,39
DF1C DF1P
outras protenas 0,0804 34974,04 0,0372 18685,97
-Lg 0,5575 193623,66 0,6525 290561,54
-La 0,3621 169151,96 0,3102 207654,58

DF2C
DF2P
outras protenas 0,085 56752,83 0,0752 23515,14
-Lg 0,7017 369991,09 0,7333 271759,08
-La 0,2132 84666,19 0,1915 141405,32

DF3C
DF3P
outras protenas 0,0752 57234,58 0,0498 30066,97
-Lg 0,7333 472855,84 0,6555 220988,12
-La 0,1915 67054,11 0,2947 96629,84

DF4C
DF4P
outras protenas 0,193 72161,86 0,0442 27693,49
-Lg 0,581 172613,99 0,7082 237605,86
-La 0,2261 76670,65 0,2476 65018,94


Tabela B.22: Dados do experimento de fluxo permeado de concentrado protico em funo do
tempo para a membrana MF-7002, vazo 700 L.h
-1
, T = 40 C, pH = 4,6, P = 1,75 bar
(duplicata).
Etapa tempo (min) Amostra J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
UF 0 MC1' / MP1' 30,10
UF 22 27,92
UF 37 24,82
UF 42 MP2' / MC2' 25,81
DF1 43 25,81
DF1 47 20,61
DF1 57 21,42
DF1 72 19,71
DF1 87 DF1C' / DF1P ' 19,40
DF2 88 18,15
DF2 102 18,48
DF2 117 17,57
DF2 132 17,56
DF2 137 DF2C' / DF2P' 14,25
DF3 138 13,70
DF3 157 14,29
DF3 177 14,26
DF3 193 13,82
DF3 194 DF3C' / DF3P' 13,55
DF4 207 14,95
DF4 222 15,48
DF4
237
13,63
DF4
252
DF4C' / DF4P' 13,83


Tabela B.23: Dados de concentrao de protena e lactose para as amostras de concentrado e
permeado da membrana MF-7002 (duplicata).
Amostras
(g.L
-1
)
(g.L
-1
)
MC1 19,6 25,2
MP1 14,4 8,2
MC2 21,7 25,4
MP2 5,7 7,6
DF1C 20,2 23,0
DF1P 11,5 7,7
DF2C 13,7 20,5
DF2P 9,2 8,5
DF3C 11,6 17,2
DF3P 7,1 4,4
DF4C 8,8 15,6
DF4P 6,7 8,6

Figura B.2: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para as amostras do
expermimento de duplicata para o concentrado e o permeado da membrana MF-7002 (100 V e 30
A). Legenda: (1) padro; (2) MC1, (3) MP1, (4) MC2, (5) MP2, (6) DF1C, (7)
DF1P, (8) DF2C, (9) DF2P, (10) DF3C, (11) DF3P, (12) DF4C, (13) DF4P.
membrana UF-C50 vazo de alimentao 400 L.h
-1
, T = 25 C , P =3,75 bar.
tempo(min) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
0 2250,56
5 2246,03
10 2236,32
15 2100,08
20 2120,36
25 2102,66
30 2100,56
35 2101,64
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

Tabela B.25: Dados de fluxo permeado de gua em funo da presso transmembrana para a
membrana UF-C50, T = 40 C, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
.
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
mdio (L.m
-2
.h
-1
)
3,75 2096,60 2246,21 2168,83
3,25 1669,97 1800,84 1732,94
2,75 1467,35 1465,48 1466,42
2,25 1094,75 1234,75 1160,54
1,75 860,95 842,64 851,69
1,25 677,24 703,36 665,05
0,75 205,13 224,23 214,25

transmembrana para a membrana UF-C50, T =25 C, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
.
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
3,75 41,80 40,38 41,09
3,25 40,21 41,20 40,70
2,75 37,51 39,50 38,51
2,25 35,13 34,30 34,71
1,75 29,90 30,10 30,00
1,25 27,88 26,80 27,34
0,75 23,06 22,90 22,98

transmembrana para a membrana UF-C50, T = 40 C, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
.
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
3,75 99,83 101,23 100,53
3,25 97,60 99,80 98,70
2,75 82,54 84,69 83,62
2,25 70,89 72,89 71,89
1,75 54,32 56,98 55,65
1,25 35,45 37,81 36,63
22,50 20,80 21,65 22,50


membrana UF-C50, pH= 6,3; T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
.
Tempo
(min)
Amostra Volume coletado (mL)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 50inicial1 0 45,04
80 250 42,36
175 50C11 / 50P11 500 36,50
261 750 34,80
355 50C12 / 50P12 1000 32,11

-1
(duplicata).
Tempo
(min)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 50inicial1' 0 48,83
77 250 46,15
172 50C11' / 50P11' 500 40,29
258 750 38,59
352 50C12' / 50P12' 1000 35,90

Tabela B.30: Dados de concentrao de protena, lactose e pH das amostras de permeado e
concentrado para o experimento com concentrado protico para a membrana UF-C50, pH =6,3,
T = 25 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
(duplicata).
Amostras
Concentrao de
Protena (g.L
-1
)
Concentrao de
Lactose (g.L
-1
)
pH
50 inicial 1' 25,9 11,6 6,3
50 C11' 25,5 13,9 6,28
50 P11' 1,5 6,3 6,3
50 C12' 26,4 14,5 6,3
50 P12' 1,4 6,9 6,3

-1
.
Tempo
(min)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 50inicial2 0 143,01
41 250 123,50
98 50C21/ 50P21 500 113,16
158 750 110,98
221 50C22/ 50P22 1000 91,47

-1

(duplicata).
Tempo
(min)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 50 inicial2' 0 145,51
40 250 126,00
97 50C21' / 50P21' 500 115,66
157 750 113,48
220 50C22' / 50P22' 1000 93,97

concentrado para o experimento com concentrado protico para a membrana UF-C50, pH =4,6,
T = 40 C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 400 L.h
-1
(duplicata).
Amostras
Concentrao de
Protena (g.L
-1
)
Concentrao de
Lactose (g.L
-1
)
pH
50 inicial 2' 29,6 13,4 4,6
50 C21' 29,6 9,2 4,6
50 P21' 1,2 7,6 4,55
50 C22' 30,3 11,6 4,69
50 P22' 1,2 9,0 4,6

Figura B.3: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para as amostras
de concentrado e permeado da membrana UF-C50 (100 V e 30 A). Legenda: (1)
padro; (2) 50inicial1, (3) 50C12, (4) 50P12, (5) 50inicial2, (6) 50C22, (7) 50P22.

1 2 3 4 5 6 7

membrana UF-C20 vazo de alimentao 620 L.h
-1
, T = 25 C , P =3,75 bar.
Tempo (min) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
0
742,40
5
741,08
10
700,60
15
695,36
20
690,63
25
688,95
30
688,40
35
688,33
40
687,99

Tabela B.35: Dados de fluxo permeado de gua em funo da presso transmembrana para a
membrana UF-C20, T = 25 C, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
.
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
mdio (L.m
-2
.h
-1
)
3,75 683,89 688,19 686,03
3,20 553,84 555,85 554,84
2,75 491,16 507,59 499,24
2,15 375,38 372,19 373,77
1,75 299,55 305,47 302,48
1,15 163,44 160,02 161,71
0,75 123,07 106,69 114,30

Tabela B.36: Dados de fluxo permeado de concentrado protico em funo da presso
transmembrana para a membrana UF-C20, T = 25 C, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
.
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
3,75 64,59 64,54 64,57
3,25 65,01 64,46 64,74
2,70 56,62 55,40 56,01
2,25 44,55 47,30 45,92
1,75 38,47 38,28 38,38
1,25 23,26 23,18 23,22


-1
.
Tempo
(min)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 C01 0 44,55
35 100 44,68
68 200 45,21
97 300 42,54
130 400 42,10
172 CC1 / CP1 500 41,07
204 600 40,54
238 700 40,68
278 800 36,43
318 900 36,25
360 CC2 / CP2 1000 33,19

-1
(duplicata).
Tempo
(min)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 C01 0 43,15
28 100 43,15
60 200 43,14
92 300 44,71
127 400 44,31
162 CC1 / CP1 500 42,18
190 600 43,98
230 700 39,46
269 800 38,67
305 900 35,97
348 CC2 / CP2 1000 32,24


concentrado para o experimento com concentrado protico para a membrana UF-C20, T = 25
C, P = 2,25 bar, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
(duplicata).

Amostras
Concentrao de
Protena (g.L
-1
)
Concentrao de
Lactose (g.L
-1
)
pH
C01' 15,0 12,6 5,98
CC1' 17,3 12,3 5,95
CP1' 0,4 9,6 5,73
CC2' 18,2 13,8 5,93
CP2' 0,3 14,5 5,91

Tabela B.40: Dados de fluxo permeado de soro diludo em funo da presso transmembrana
-1
.
P (bar) J
p
(L.m
-2
.h
-1
) J
p
(L.m
-2
.h
-1
)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
3,75 78,96 78,60 78,78
3,20 78,56 78,50 78,53
2,75 71,20 72,23 71,71
2,15 56,17 57,61 56,89
1,60 43,68 42,50 43,09
1,00 30,72 31,56 31,14

Tabela B.41: Dados de fluxo permeado de soro diludo em funo do tempo para a membrana
-1
.
Tempo
(min)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 UFC01 0 60,62
20 230 56,86
45 350 59,42
75 UFC1 / UFP1 500 69,24
106 700 65,80
155 900 64,63
175 UFC2 / UFP2 1000 61,76


Tabela B.42: Dados de fluxo permeado de soro diludo em funo do tempo para a membrana
-1
(duplicata).
Tempo
(min)
J
p
mdio
(L.m
-2
.h
-1
)
0 UFC01 0 65,62
25 230 61,86
50 350 64,42
80 UFC1 / UFP1 500 74,24
111 700 70,80
160 900 69,63
180 UFC2 / UFP2 1000 66,76

concentrado para o experimento com soro diludo para a membrana UF-C20, T = 25 C, P =
2,25 bar, vazo de alimentao = 620 L.h
-1
(duplicata).
Amostras
(g.L
-1
)
(g.L
-1
)
pH
UFC01' 11,8
53,3
6,28
UFC1' 10,6
54,3
6,26
UFP1' 0,0
46,2
6,26
UFC2' 11,7
52,4
6,29
UFP2' 0,3
42,9
6,21

Figura B.4: Fotografias dos gis de eletroforese SDS-PAGE (poliacrilamida 15 %) para as amostras
de concentrado e permeado da membrana UF-C20 (100 V e 30 A). Legenda: (1)
padro; (2) C01, (3) CC2, (4) CP2, (5) UFC01, (6) UFC2, (7) UFP2.

1 2 3 4 5 6 7

Tabela B.44: Dados para construo da curva de calibrao da coluna de cromatografia gel.
Padres Moleculares MW (kDa) Ve (mL) Kav Log MW
Ferritina 440,0 8,2 0,0 2,6
Aldolase 158,0 10,8 0,2 2,2
Conalbumina 75,0 11,2 0,2 1,9
Ovalbumina 43,0 12,2 0,3 1,6
Anidrase Carbnica 29,0 13,0 0,3 1,5

Figura B.5: Curva de calibrao da coluna de cromatografia gel.


Figura B.6: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina Superose
TM
12,
equilibrada com tampo fosfato de sdio 10 mM, pH 7,0; vazo de eluio = 0,5
mL.min
-1
; amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm.

Figura B.7: Duplicata da cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina
Superose
TM
12, equilibrada com tampo fosfato de sdio 10 mM, pH 7,0; vazo de
eluio = 0,5 mL.min
-1
; amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm.


Figura B.8: Cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina Superose
TM
12,
equilibrada com tampo acetato de sdio 10 mM, pH 4,6; vazo de eluio = 0,5
mL.min
-1
, amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm.

Figura B.9: Duplicata da cromatografia gel em coluna de 10 x 300 mm empacotada com a resina
Superose
TM
12, equilibrada com tampo acetato de sdio 10 mM, pH 4,6; vazo de
eluio = 0,5 mL.min
-1
, amostras monitoradas pela absorbncia a 280 nm.

B.3 Limpeza das membranas - tabelas

Tabela B.45: Mdias dos fluxos de gua aps realizao dos experimentos e em cada etapa da
limpeza qumica para a UF-6001, P = 2 bar e T = 50 C, vazo de alimentao 840 L.h
-1
.
Limpeza qumica
Fluxo permeado de gua
(L. m
-2
h
-1
)
Percentual equivalente do
fluxo comparado
ao inicial (%)
Aps enxge com gua 21,3 20,7
Aps limpeza alcalina 38,9 37,8
Aps limpeza cloro-alcalina 73,6 71,6
Aps limpeza cida 98,5 95,9

limpeza qumica para a MF-7002, P = 1,75 bar e T = 40 C, vazo de alimentao 700 L.h
-1
.
Limpeza qumica
(L. m
-2
h
-1
)
Fluxo comparado
ao inicial (%)
Aps enxge com gua 70,36 26,0
Aps limpeza alcalina 101,23 37,5
Aps limpeza cloro-alcalina 193,21 71,5
Aps limpeza cida 260,84 96,3

limpeza qumica para a UF-C50, P = 2,25 bar e T = 25 C, vazo de alimentao 400 L.h
-1
.
Limpeza qumica
(L. m
-2
h
-1
)
Fluxo comparado
ao inicial (%)
Aps enxge com gua
40,44
3,5
Aps limpeza alcalina
881,75
76,0
Aps limpeza cida
1326,99
114,3

alimentao 620 L.h
-1
.
Limpeza qumica
(L. m
-2
h
-1
)
Fluxo comparado
ao inicial (%)
Aps enxge com gua
56,02
12,5
Aps limpeza alcalina
197,73
48,8
Aps limpeza cida
444,50
110,0

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C, por exemplo, o grupo -SH da -Lg exposto e reage com a casena (e

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