Qumica Orgnica II 1

Carbohidratos

OBJETIVOS

Estudiar y observar el reconocimiento de los carbohidratos

Reconocimiento de los monosacridos, disacridos y de los polisacridos.

Diferenciar mediante reactivos si la muestra es una cetosa o una aldosa

Identificar por mtodos cualitativos los principales monosacridos, disacridos y

polisacridos.

Estudio y reconocimiento de la inversin de la sacarosa.

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Carbohidratos

INTRODUCCION
Los carbohidratos se forman en la fotosntesis y junto con la oxidacin de ellos en el
metabolismo constituyen el principal ciclo energtico de la vida.
Por crucial que resulte la generacin de energa no es la nica funcin de los
carbohidratos muchos materiales estructurales biolgicos son polmeros de carbohidratos
como la celulosa de las plantas, las paredes celulares de las bacterias y las exoesqueletos
de los insectos y artrpodos.

Los carbohidratos son molculas biolgicas muy verstiles en sus tamaos, hay
monosacridos, oligosacridos y polisacridos, as como en su estructura qumica y sus
propiedades.

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Carbohidratos

MARCO TEORICO
Los carbohidratos o hidratos de carbono estn formados por carbono ( C ) , hidrogeno (H)
y oxigeno ( O ) , con la formula ( CH2O)n . Desde el punto de vista qumico son aldehdos o
cetonas polihidroxilados, o productos derivados de ellos por oxidacin, reduccin,
sustitucin o polimerizacin.

Los carbohidratos incluyen azucares, almidones, celulosa y muchos compuestos que se

encuentran en los organismos vivientes. Los carbohidratos bsicos o azucares simples se
denominan monosacridos
Los carbohidratos con dos azucares simples pueden combinarse para conformar a los
disacridos. Los carbohidratos que consisten de dos a diez azucares simples se llaman
oligosacridos y los que tienen un nmero mayor se llaman polisacridos.

Los azcares son hidratos de carbonos generalmente blancos y cristalinos,

solubles en agua y con sabor dulces.

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Carbohidratos

Clasificacin :
Los carbohidratos se clasifican en monosacridos, oligosacridos y polisacridos.
Un monosacrido, es una unidad, ya no se subdivide ms por hidrlisis cida o enzimtica,
por ejemplo glucosa, fructosa o galactosa.
Los oligosacridos estn constituidos por dos a diez unidades de monosacridos. La
palabra viene del griego, oligo = pocos. Digamos el azcar que utilizamos es un disacrido
y por tanto un oligosacrido.

Los polisacridos son macromolculas, por hidrlisis producen muchos monosacridos,

entre 100 y 90 000 unidades.

Como primera aproximacin, desde el punto de vista qumico, los carbohidratos son
polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas o compuestos que los producen por hidrlisis
cida o enzimtica. Esto es solo parcialmente cierto, pues en solucin acuosa, las
estructuras de polihidroxialdehdos o de polihidroxicetonas, permanecen en pequea
proporcin en equilibrio con sus formas cclicas, que son las ms abundantes.

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Carbohidratos

1.

MONOSACARIDOS
Son las unidades ms sencillas de los carbohidratos, los monosacridos se clasifican
en base a dos criterios.
Grupo funcional
Numero de tomos de carbono
En base al grupo funcional los monosacridos se clasifican en 2 grupos
a) ALDOSAS: Contienen en su estructura un grupo formilo ( grupo de aldehdo)
b) CETOSAS: Contienen en su estructura un grupo oxo ( grupo de cetonas )

Por el nmero de tomos de carbono se clasifican en:

La fructosa es un monosacrido, o azcar simple,

que tiene la misma frmula qumica que la glucosa
pero con estructura molecular diferente.

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2. DISACARIDOS
Estn formados por dos molculas de monosacridos que pueden ser iguales o diferentes.
Los disacridos no se utilizan como tales en el organismo, sino que este los convierte a
glucosa. En este proceso participa una enzima especfica para cada disacrido, lo rompen y
se producen los monosacridos que los forman.

Sacarosa Glucosa + Fructosa

Lactosa

Glucosa + Galactosa

Malosa Glucosa + Glucosa

Los 3 disacridos sealados son ismeros.

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3. POLISACARIDOS
Son carbohidratos ms complejos formados cadenas largas de monosacridos, de varios
cientos o miles y que pueden ser ramificados o lineales. Los polisacridos, a diferencia de
las protenas. no tienen un peso molecular definido, ya que no son sintetizadas a partir de
un molde (RNAm) como las protenas.
Las que determinan el peso de un polisacrido son las enzimas responsables de todos los
pasos de la sntesis que actan secuencialmente. Existe una enzima para cada tipo de
unin de cada monosacrido diferente.
Los mecanismos que determinan el peso mximo de un polisacrido son desconocidos.

Almidn y Glicgeno
Celulosa y quitina
Los glicosaminoglicanes y protroglicanes de la matriz extracelular
Las glicoprotenas

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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Materiales:

Tubo de ensayo

Gradilla

Vaso precipitado

Pinza de Madera

Rejillas

Pipeta graduada

Bagueta

Reactivos:

Muestra Problema (D-sacarosa, D- galactosa, D-fructosa, D-glucosa)

Mollish ( naftol en alcohol)

Acido Sulfrico (H2SO4)

Seliwanoff (resorcinol en Ac. Clorhdrico diluido)

Tollens (NH4OH+AgNO3+NaOH)
Barfoed (solucin de acetato de cobre en medio actico)

Lugol (solucin de KI y I2 en agua destilada)

Felling (f.a +f.b)

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PRUEBAS DE IDENTIFICACION:

Prueba de Tollens ([Ag(NH3)2]NO3 (ac))

La prueba de Tollens es un procedimiento de laboratorio para distinguir un aldehdo de
una cetona: se mezcla un agente oxidante suave con un aldehdo o una cetona
desconocida; si el compuesto se oxida, es un aldehdo, si no ocurre reaccin, es una
cetona. El complejo de plata amoniacal [Ag(NH3)2]+ en solucin bsica es el agente
oxidante utilizado en la prueba de Tollens. Si hay un aldehdo presente, ste se oxida a la
sal del cido RCOO-. Al mismo tiempo, se produce plata metlica Ag(s) por la reduccin del
complejo de plata amoniacal. La glucosa de la prueba positiva ya que tiene la funcin
aldehdo

* Para la D-Glucosa:
Tomar 1ml de muestra problema (D-glucosa) y aadir 3ml de reactivo Tollens. Caliente en
bao Mara a 60C sin agitar por unos 5 minutos. Si la reaccin no se llevase a cabo aadir
1 gota de NaOH sin agitar observndose as la presencia de un espejo de plata.

Reaccin:

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En su silla abierta, la aldosa tiene un grupo aldehdo, que reacciona con el reactivo de tollens
para dar lugar a un cido aldnico y la formacin de un espejo de plata indicando POSITIVO
para la D-glucosa.

* Para la D-Sacarosa:
Tomar 1ml de muestra problema (Sacarosa) y aadir 3ml de reactivo Tollens. Caliente en
bao Mara a 60C sin agitar por unos 5 minutos.

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Carbohidratos

Debido a que la D-sacarosa en su molcula contiene el grupo aldehdo se genera la formacin

de un espejo de plata indicando POSITIVO para la D-sacarosa.

Recomendacin:
La aparicin del espejo de plata indica prueba positiva para el azcar reductor
(azucares que reducen el reactivo de tollens), una vez terminada la prueba el tubo de
ensayo se deber limpiar con cido ntrico para destruir el espejo de plata.

Prueba de Fehling:
Empezamos con preparacin del reactivo de Fehling agregando:
2.5 ml de Fehling A + 2.5ml de Fehling B + 1ml de NaOH

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* Para la D-Galactosa:
Tomar 3ml de la muestra problema (D-galactosa) y 3ml de Fehling preparado y luego
caliente hasta ebullicin (por 5-10 minutos).

Se evidencia la reaccin entre la D-galactosa y el reactivo de Fehling debido a la coloracin

ladrillo, por lo tanto el resultado es POSITIVO para la D-galactosa.

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* Para la D-Sacarosa:
Tomar 3ml de la muestra problema (D-sacarosa) y 3ml de Fehling preparado y luego
caliente hasta ebullicin (por 5-10 minutos) en Bao Mara.
No hay reaccin.

La muestra queda azul indicando que la reaccin es negativa para disacridos (D-sacarosa). En
nuestra experiencia se evidencia un cambio de coloracin oscura (negruzco) debido a la
presencia de impurezas en el azcar de mesa usado, por lo tanto el resultado es NEGATIVO
para la D-sacarosa.

Prueba de Molisch (Reconocimiento de los Carbohidratos):

* Para la D-Galactosa:
En un tubo de ensayo, colocar 2ml de la muestra problema (D-galactosa) y se le agrega 10
gotas del reactivo de Molish (
) y sobre las paredes del tubo se
aade
. De tal modo que se deposite en el fondo del recipiente, en la interfase
se va a producir la formacin de un anillo de color purpura-violceo.

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Carbohidratos

Al producirse la formacin de un anillo de color purpura-violceo indica que la reaccin es

positiva para monosacridos (D-galactosa), en nuestra experiencia se evidencia dicha
coloracin en el centro de la solucin indicando POSITIVO para la D-galactosa.

* Para la D-Fructosa:
En un tubo de ensayo, colocar 2ml de la muestra problema (D-fructosa, solucin de
caramelo de limn) y se le agrega 10 gotas del reactivo de Molish
(
) y sobre las paredes del tubo se aade
. De tal modo

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Carbohidratos

que se deposite en el fondo del recipiente, en la interfase se va a producir la formacin de

un anillo de color purpura-violceo.

La reaccin de Molisch es una prueba que tie cualquier carbohidrato en una solucin. De esta
manera en nuestra experiencia se evidencia dicha coloracin purpura-violceo en el centro de
la solucin indicando POSITIVO para la D-fructosa.

Prueba de Seliwanoff:
La prueba de Seliwanoff es una prueba qumica que se usa para distinguir entre aldosas y
cetosas. Los azucares son distinguidos a travs de su funcin como cetona o aldehdo. Si el
azcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si contienen un grupo aldehdo, es una

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aldosa. Esta prueba est basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son
deshidratadas ms rpido que las aldosas.
El reactivo consiste en resorcinol y cido clorhdrico concentrado:
- La hidrlisis cida de polisacridos y oligosacridos da azucares simples
-Entonces la cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol para producir un color rojo.
Es posible que las aldosas reaccionen produciendo un leve color rosa.

* Para la D-Glucosa:
En un tubo de ensayo, colocar 2ml de la muestra problema y se le agrega 2ml del reactivo
de Seliwanoff, caliente en bao Mara a ebullicin por 2 minutos.

Al trabajar con la glucosa obtenida de la prueba de inversin de la sacarosa la reaccin indico

positivo ya que se form una coloracin roja, indicando POSITIVO para la D-glucosa.

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* Para la D-Fructosa:
En un tubo de ensayo, colocar 2ml de la muestra problema y se le agrega 2ml del reactivo
de Seliwanoff, caliente en bao Mara a ebullicin por 2 minutos.

Al trabajar con la fructuosa obtenida por la solucin de

caramelo de limn se torna levemente rosceo, prueba
POSITIVA, de esta manera se comprueba que los
caramelos NO estn conformados por fructosa ms bien
por alguna aldosa (generalmente glucosa y sacarosa),
indicndose as que la prueba de Seliwanoff es NEGATIVA
para solucin de caramelo de limn

Por el contrario, al trabajar con la fructuosa obtenida

por la solucin de caramelo obtenida de la prueba de
inversin de la sacarosa la reaccin indico positivo ya
que se form una coloracin roja, indicando POSITIVO
para la D-fructosa.

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* Para la D-Sacarosa:
En un tubo de ensayo, colocar 2ml de la muestra problema y se le agrega 2ml del reactivo
de Seliwanoff, caliente en bao Mara a ebullicin por 2 minutos.

No hay reaccin por lo que la prueba es negativa para la sacarosa.

La sacarosa da NEGATIVA a esta prueba ya que la molcula, si bien est constituida por glucosa
y fructosa, en la unin alfa (1-2) se anulan las propiedades reductoras de la glucosa y la
fructosa.

Prueba de Barfoed ( Prueba de diferenciacin entre Monosacridos y

Disacridos):
* Para la D-Fructosa:
Coloque en un tubo de ensayo 2ml de la muestra problema (D-fructosa) y agregue 2ml del
reactivo de Barfoed (acetato cprico) y caliente en bao Mara a ebullicin entre 5-7
minutos.

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Carbohidratos

El precipitado rojizo que presenta nuestra solucin resultante evidencia la formacin de Cu 2O,
por lo tanto la prueba es POSITIVA, la D-fructosa es un monosacrido.

* Para la D-Sacarosa:
Coloque en un tubo de ensayo 2ml de la muestra problema (D-fructosa) y agregue 2ml del
reactivo de Barfoed (acetato cprico) y caliente en bao Mara a ebullicin entre 5-7
minutos.

No hay reaccion entre la sacarosa y la reactivo de Barfoed.

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Carbohidratos

El precipitado rojizo que presenta nuestra solucin resultante evidencia la formacin de Cu2O,
prueba POSITIVA, debido a que la muestra de D-sacarosa NO es qumicamente pura, el
resultado real debera ser NEGATIVO.

Prueba de Lugol ( Reconocimiento de Polisacridos):

* Para el almidn:
Coloque en un tubo de ensayo 1ml de la muestra problema y agregue 5 gotas del reactivo
de Lugol, mezcle y observe la coloracin.

La reaccin que se llev a cabo con el almidn form un

complejo color azul oscuro llamado yoduro de almidona
resultante de la unin del yodo con las cadenas de almilosa y
amilopectina que lo conforman, demostrndose as que el
almidn es un polisacrido, el resultado fue POSITIVO.

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Prueba de Inversin de la Sacarosa:

Coloque en un tubo de ensayo 8ml de una solucin de sacarosa al 1% y 1ml de HCl cc. Y
caliente en bao Mara a ebullicin por 10-15 minutos. Despus de 15 minutos se saca
2ml de la solucin y se determina la prueba se Seliwanoff.

Cuando se hidroliza (+)-sacarosa con cido acuoso diluido, se obtienen cantidades de D-(+)glucosa y D-(-)-fructosa, esta hidrolisis va acompaada de un cambio en el signo de la rotacin,
de positivo a negativo; por eso se le suele llamar la inversin de la sacarosa, y la mezcla levgira
de D-(+)-glucosa y D-(-)-fructosa se le llama azcar invertido, ahora si indicndose POSITIVA la
prueba de Seliwanoff.

Observacin:
La sacarosa presenta una rotacin especfica de +66.5, pero despus de tratarla con
solucin acuoso acido, varia su rotacin a -39, es decir su signo se invierte El fenmeno se
explica porque la sacarosa que es un disacrido formado por la glucosa (+52.6) y
fructuosa (-91.3), que por hidrlisis se desdobla en fructuosa y glucosa y por lo tanto
predomina el poder rotatorio de la fructuosa.

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Carbohidratos

CONCLUSIONES
En la prueba de Tollens para la glucosa es necesario usar HNO3 para eliminar el espejo
de plata formado.
La prueba de Selivwanoff es especfica para cetosas que contengan 5 o ms tomos de
carbono, pero se usa casi exclusivamente para identificar fructosa.
La fructosa aparece juntamente con la glucosa y de las mismas reacciones; para
diferenciarlas puede emplearse la reaccin de Seliwanoff. Esta se basa en la formacin de
un precipitado de color rojo cuando la levulosa se calienta a una solucin fuertemente
cida de resorcina, por la formacin de oximetilfurfurol.
En resumen, con las diferentes pruebas realizadas tenemos los siguientes resultados, en
el cuadro adjunto.

IDENTIFICACION DE
CARBOHIDRATOS
Prueba de Tollens
Prueba de Fehling
Prueba de Molish
Prueba de Seliwanoff
Prueba de Barfoed
Prueba de Lugol

RESULTADO
D-glucosa
D-sacarosa
D-galactosa
D-sacarosa
D-galactosa
Fructosa
D-glucosa
D-glucosa
Fructosa
D-sacarosa
Almidn

(+)
(+)
(+)
(-)
(+)
(+)
(+)
(-)
(+)
(-)
(+)

RECOMENDACIONES

Tener mucho cuidado al trabajar con los cidos, y procurar no inhalar los gases que
emanan algunas reacciones, pues son nocivas para la salud.

Se recomienda que al usar los reactivos (tollens, fehling, etc) los frascos
permanezcan cerrados y utilizarlos con diferentes probetas.

El uso de Tollens es bueno para identificar si es monosacrido o polisacrido.

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Carbohidratos

CUESTIONARIO
1. Indique una prueba de identificacin de la galactosa.
Ya que la galactosa es un monosacrido utilizaramos Fehling para su identificacin.

Se evidencia la reaccin entre la D-galactosa y el reactivo de Fehling debido a la coloracin

ladrillo, por lo tanto el resultado es POSITIVO para la D-galactosa.

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Carbohidratos

2. Indique una prueba de reconocimiento de la fructuosa.

Para la identificacin dela fructosa usaremos el proceso de inversin de la sacarosa y
luego realizaramos la prueba de Seliwanoff.

Cuando se hidroliza (+)-sacarosa con cido acuoso diluido, se obtienen cantidades de D(+)-glucosa y D-(-)-fructosa, esta hidrolisis va acompaada de un cambio en el signo de la
rotacin, de positivo a negativo; por eso se le suele llamar la inversin de la sacarosa, y la
mezcla levgira de D-(+)-glucosa y D-(-)-fructosa se le llama azcar invertido, resultando
POSITIVA la prueba de Seliwanoff.

3. Presente la reaccin de inversin de la sacarosa. Utilice frmulas de Haworth.

El proceso de inversin del azcar es la descomposicin hidrolitica de glucosa y fructosa y
se acompaa con la variacin de la direccin plano de polarizacin.

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Carbohidratos

Esta reaccin es prcticamente irreversible y por su mecanismo biomoleculares. Por

consiguiente, su velocidad puede puede ser
Esta reaccin es prcticamente irreversible y por su mecanismo pertenece a las reacciones
biomoleculares. Por consiguiente, su velocidad puede ser calculada por la ecuacin:
. (1)
La cual sera una reaccin de segundo orden, ahora bien tomemos en cuenta las siguientes
consideraciones:
1. La inversin se verifica en solucin acuosa en donde la concentracin molar de agua es
considerablemente mayor que la concentracin molar de la sacarosa.
2. La disminucin del agua por cuenta de la reaccin es pequea en comparacin con la
cantidad total del agua en el sistema, y su contenido puede tomarse como constante
incluso en las soluciones relativamente concentradas.
Por lo cual la ecuacin (1) se transforma en una expresin de primer orden respecto a la
concentracin de la sacarosa:

Cuya constante de velocidad puede ser calculada por la ecuacin:

= concentracin inicial de la sacarosa

= concentracin de la sacarosa en un tiempo t
T = tiempo que ha trascurrido desde el inicio de la reaccin

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Carbohidratos

4. Presente la reaccin que indique que la hidrlisis de la sacarosa tuvo lugar.

La inversin de la sacarosa es la disgregacin por hidrolizacin de la sacarosa en

glucosa y fructosa. Su nombre hace referencia a que el poder rotatorio de la solucin
frente a la luz polarizada es invertido por el proceso de hidrlisis que separar la sacarosa
en sus dos subunidades.
Cuando se hidroliza (+)-sacarosa con cido acuoso diluido, se obtienen cantidades de D(+)-glucosa y D-(-)-fructosa, esta hidrolisis va acompaada de un cambio en el signo de la
rotacin, de positivo a negativo; por eso se le suele llamar la inversin de la sacarosa, y la
mezcla levgira de D-(+)-glucosa y D-(-)-fructosa se le llama azcar invertido.
Se obtiene a partir de la hidrlisis del azcar comn (sacarosa). Esta hidrlisis puede
llevarse a cabo mediante tres mtodos:
1. Por enzima invertasa.
2. Por accin de un cido a temperatura elevada (esto sucede espontneamente
durante el almacenamiento de jugos de fruta).
3. Pasando la solucin por resinas sulfnicas.

En el caso de hidrlisis por accin de un cido. Se prepara

un almbar (jarabe de sacarosa) y se lo acidifica
utilizando cido ctrico. Como resultado de esto, se elimina
un puente de oxgeno, transformando la solucin acuosa
de sacarosa en una solucin acuosa de glucosa + fructosa.
Cuando la solucin reduce su temperatura a 80 C se puede
neutralizar el pH con bicarbonato de sodio, hecho que
genera una efervescencia, aunque esto no es obligatorio.

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Carbohidratos

BIBLIOGRAFIA

WADE, L. G. Qumica Orgnica. Editorial Pearson. Educacin Mxico. 2002.

Experimentos de Qumica Orgnica - Anderson Guarnizo Franco, Pedro Nel

Martnez Yepes.

Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica- Silvia Quesada Mora

CARRASCO VENEGAS, Qumica Experimental Editorial Amrica Per, 1994.

http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp06.pdf

http://es.wikipedia.org/wiki/Hidratos_de_carbono