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microscpio de fluorescncia- Quando o corante est ligado ou conjugado com um anticorpo, os locais de
reao entre o antgeno e o anticorpo conjugado podem facilmente ser visualizados.
Imunofluorescncia indireta: fixadas em lminas de microscpio, as clulas infectadas (portadoras de
antgenos) so incubadas com o soro que se deseja testar. Depois, so tratadas com outro soro que contenha
anticorpos especficos para imunoglobulina humana (anti-lg) conjugados a um fluorocromo. A presena dos
anticorpos revelada por meio de microscopia de fluorescncia. Tambm utilizada como teste
confirmatrio.
Western-blot: este ensaio envolve inicialmente a separao das protenas virais por eletroforese em gel de
poliacrilamida, seguida da transferncia eletrofortica dos antgenos para uma membrana de nitrocelulose. Em
um terceiro momento, a membrana bloqueada com protenas que so adsorvidas por stios no ocupados
pelos antgenos. Posteriormente a membrana colocada em contato com o soro que se deseja pesquisar
ELISA (teste imunoenzimtico): este teste utiliza antgenos virais (protenas) Os antgenos virais so
adsorvidos por cavidades existentes em placas de plstico e, a seguir, adiciona-se o soro do paciente. Se o
soro possuir anticorpos especficos, estes sero fixados sobre os antgenos. Tal fenmeno pode ser verificado
com a adio de uma antiimunoglobulina humana conjugada a uma enzima como, por exemplo, a peroxidase.
Em caso positivo ocorre uma reao corada ao se adicionar o substrato especfico da enzima.
Testes de deteco de antgeno VIRAL Pesquisa de Antgeno p24: este teste quantifica a concentrao da
protena viral p24 presente no plasma ou no sobrenadante de cultura de tecido. Embora esta protena esteja
presente no plasma de pacientes em todos os estgios da infeco pelo HIV, sua maior prevalncia ocorre
antes da soroconverso e nas fases mais avanadas da doena; o teste realizado mediante a utilizao da
tcnica de ELISA (imunoenzimtico).
DIAGNSTICO SOROLGICO DE INFECES VIRAIS
SARAMPO: Doena infecciosa aguda, de natureza viral, transmissvel e extremamente contagiosa. A viremia
decorrente da infeco provoca uma vasculite generalizada, responsvel pelo aparecimento das diversas
manifestaes clnicas;
Agente etiolgico - Vrus RNA, pertencente ao gnero Morbillivirus, famlia Paramyxoviridae.
Modo de transmisso - Diretamente de pessoa a pessoa, atravs das secrees nasofarngeas,
expelidas ao tossir, espirrar, falar ou respirar
Perodo de incubao - Geralmente, dura 10 dias (variando de 7 a 18 dias), desde a data da
exposio fonte de infeco at o aparecimento da febre, e cerca de 14 dias at o incio do exantema.
Perodo de transmissibilidade - De 4 a 6 dias antes do aparecimento do exantema e at 4 dias
aps. O perodo de maior transmissibilidade ocorre 2 dias antes e 2 dias aps o incio do exantema
A EVOLUO DA DOENA APRESENTRA 3 PERODOS BEM DEFINIDOS
Perodo prodrmico ou catarral :Tem durao de 6 dias: no incio da doena, surge febre,
acompanhada de tosse produtivaNas ltimas 24 horas deste perodo, surge, na altura dos pr-molares,
o sinal de Koplik pequenas manchas brancas com halo eritematoso,
Perodo exantemtico Ocorre acentuao de todos os sintomas anteriormente descritos, com
prostrao importante do paciente e surgimento do exantema caracterstico
Perodo de convalescena ou de descamao furfurcea As manchas tornam-se escurecidas e
surge descamao fina, lembrando farinha
DIAGNSTICO
ELISA indireto e de captura de anticorpos IgM especficos(encontrados durante o rash ou at 1 ms
aps) e IgG (til para definir indivduos imunes). O teste de avidez do IgG pode ser til para diferenciar
resposta primria de segundria
VACINAO: A VPO-Sabin, ou vacina da gotinha, faz parte do Calendrio Bsico de Vacinao. Ela deve ser
aplicada aos 2, 4, 6 e 15 meses de idade. At os cinco anos, as crianas devem receber doses de reforo
anualmente. vacina Salk, administrada por via intramuscular, indicada para pessoas expostas, com baixa
imunidade, ou que viajaro para regies onde o vrus ainda est ativo.
MONONUCLEOSE INFECCIOSA (MI)
Causada pelo vrus Epstein-Barr (EBV) da famlia Herpesviridae, um dos mais comuns nos humanos, sendo
uma doena benigna e autolimitada;transmisso se d pela saliva contaminada num contato ntimo entre as
pessoas,
SINTOMAS: - Febre; Dor de garganta (faringite) Alterao do apetite; Aumento dos gnglios linfticos
(linfadenopatia cervical).Pode haver envolvimento do bao (esplenomegalia), pulmo (pneumonite), corao
(pericardite), sistema nervoso central (meningoencefalite), rins, medula,olhos, Complicaes: hepatite com
ectercia, alteraes de enzimas hepticas.
Os portadores dessa doena apresentam anticorpos que reagem com hemcias de carneiro ou de cavalo
anticorpos heterfilos). A maioria dos casos diagnosticada pela presena desses anticorpos heterfilos, que
aparecem no soro dos pacientes entre o 6 e 10 dia da doena, com pico entre a 2 e 3 semana, e persistem
positivos por perodo de oito a 12 semanas. Entretanto, de 10% a 20% dos adultos e um percentual ainda
maior de crianas no desenvolvem esses anticorpos, presentes em apenas 10% a 30% de crianas com
menos de dois anos e em 75% de dois a quatro anos. Em pacientes de origem japonesa de qualquer idade
eles tambm so raros.
DIAGNSTICO: sintomas e na idade do paciente, mas os exames laboratoriais so necessrios para
confirmao
O diagnstico por exame de sangue contagem elevada de clulas brancas do sangue com um
percentual maior de linfcitos atpicos e uma reao positiva em um teste "monospot".
Tcnicas de Southern blot, dot-blot, PCR e hibridizao in situ para deteco do genoma viral (DNA)
em leuccitos, secrees da nasofaringe e materiais de bipsia obtidos de leses proliferativas.
DIAGNSTICO SOROLGICO
Os anticorpos heterfilos so da classe IgM, no especficos da mononucleose, e podem surgir em outras
patologias. Anticorpos semelhantes tambm so detectados em indivduos normais (anticorpos de Forssman) e
na doena do soro, o que torna importante distingui-los dos da mononucleose infecciosa. imperativa a
correlao com a clnica, visto que podem ocorrer falso-positivos e negativos.
Hemaglutinao de hemcias de carneiro ou de cavalo- empregado, princ., antes da introduo de
imunoensaios com antgenos virais especficos
Deteco de anticorpos heterfilos (que reagem com hemcias de carneiro). Sensibilidade do mtodo:
80-90%.
ACs heterfilos: Igs da classe IgM, encontrados em altos ttulos entre 2 e 3 semanas aps o incio da
doena, e que persistem at 2-3 semanas da resoluo da doena
O diagnstico sorolgico da mononucleose infecciosa, portanto, feito pela avaliao de dois tipos de
anticorpos:
ANTICORPOS INESPECIFICOS
MONOTESTES: teste de hemaglutinao em lmina, com hemcias de cavalo formalizadas, tambm
chamado de reao de Hoff e Bauer. Extremamente sensvel, positiva precocemente na primeira ou
segunda semana da doena, perdura assim por oito a 12 semanas;
REAO DE PAUL-BUNNELL Este teste pesquisa a presena de anticorpos heterfilos contra
hemcias de carneiro. Ttulos superiores a 1/56 sugerem positividade para mononucleose infecciosa; A
confirmao da mononucleose feita pela reao de Paul-Bunnell-Davidsohn
Na lamina de reao colocar uma gota da amostra(0,5ml), controle positivo e controle negativo;
Colocar uma gota do reagente ltex homogeneizado na amostra e nos controles;
Homogeneizar a amostra e os controles com o ltex;
Agitar a lamina por 2 minutos, com movimentos circulares, suaves;
Analisar os resultados a olho nu, sob luz branca;
O controle positivo dever apresentar aglutinao; o controle negativo no dever apresentar
aglutinao; as amostra que no apresentarem aglutinao sero consideradas no reagentes, as
amostras que apresentarem aglutinao sero consideradas reagentes, deveram ser submetidas ao
processo quantitativo para ter seu titulo determinado.
Prova quantitativa
1- Pipetar 0,05ml de soluo salina em 6 circunferncias delimitadas (1/2,1/4,1/8,1/16)
2- Pipetar 0,05ml da amostra no primeiro crculo homogeneizar e transferir 0,05ml para o segundo crculo,
assim por diante desprezando a ultima alquota;
3- Considerar amostra como sendo reagente at a ltima que apresentou aglutinao