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Orientador:
Dr. Ademar Benvolo Lugo
SO PAULO
2009
Orientador:
Dr. Ademar Benvolo Lugo
SO PAULO
2009
Agradecimentos
SUMRIO
Pgina
1 INTRODUO
10
2 OBJETIVOS
12
3 REVISO DA LITERATURA
13
13
3.1.1 Epiderme
14
3.1.2 Derme
16
17
3.2 Cicatrizao
18
3.3 Polmeros
20
20
22
25
3.3.4 Hidrogis
27
29
3.3.6 Poli(N-vinil-2-pirrolidona)
30
3.3.7 gar
32
3.3.8 Poli(etilenoglicol)
32
3.4 Arctalg
33
34
3.6 Citotoxicidade
39
40
4 MATERIAIS E MTODOS
42
4.1 Materiais
42
42
42
4.2 Mtodos
42
42
43
43
4.2.2.2 Intumescimento
44
45
4.2.2.4 Citotoxicidade
46
47
4.2.3.1 Citoestimulao
47
51
52
53
53
5 RESULTADOS E DISCUSSO
55
55
56
56
5.2.2 Intumescimento
57
5.2.3 Citotoxicidade
59
61
64
5.4 Citoestimulao
65
67
69
70
79
6 CONCLUSO
81
7 APNDICE
82
8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
91
LISTA DE FIGURAS
Pgina
FIGURA 1. Camadas da pele
13
14
17
23
24
29
FIGURA 7. Poli(N-vinil-2-pirrolidona)
30
31
FIGURA 9. Poli(etilenoglicol)
33
34
35
44
45
47
na microplaca.
FIGURA 15. Esquema da distribuio das diferentes concentraes de
50
ArctAlg na microplaca 3.
FIGURA 16. Sistema de HPLC da Shimadzu
52
55
56
59
60
62
62
65
66
68
68
70
70
71
72
72
73
73
74
76
dispositivo de PVP
FIGURA 36. Perfil de liberao do citrulil-arginina contido no
77
79
82
83
84
85
86
87
88
89
90
10
1 INTRODUO
Hidrogis, ou gis contendo gua, so polmeros caracterizados pela
hidrofilicidade e insolubilidade em gua (Kudela, 1990).
Os hidrgeis tm despertado grande interesse devido apresentarem
caractersticas interessantes como, por exemplo, a biocompatibilidade. A utilidade
dos
hidrogis
como
biomateriais
encontra-se
na similaridade
de
suas
propriedades fsicas com aquelas dos tecidos vivos, fazendo-os teis para uma
grande variedade de aplicaes biomdicas, como curativos, implantes, lentes de
contato, matriz para imobilizao de enzimas e sistemas de liberao controlada
e/ou sustentada de princpios ativos (Peppas, 1996).
Bandagem de hidrogel base de poli(N-vinil-pirrolidona) (PVP) e
poli(etilenoglicol) (PEG) foi originalmente inventada como curativo para o
tratamento de queimadura por Rosiak e colaboradores (1989). No entanto,
atualmente, este sistema polimrico amplamente aplicado como sistema de
liberao de frmacos entre outros. O sucesso desses sistemas est relacionado
com as propriedades da matriz e a tecnologia de fabricao das mesmas.
Inicialmente os sistemas de liberao de frmacos foram desenvolvidos
para rotas tradicionais de administrao, como oral e intravenoso, porm,
recentemente ocorreu um aumento nas pesquisas que visam utilizao de rotas
consideradas no tradicionais como nasal, ocular, pulmonar, vaginal, retal e
transdrmica (ZHANG et al., 2004).
Durante dcadas a pele tem sido utilizada como via de administrao
de substncias dermatologicamente ativas, ou seja, com ao farmacolgica nos
tecidos da pele. Nessas terapias considera-se que as molculas do frmaco
difundem-se para o tecido no local da aplicao para produzir seus efeitos
teraputicos (Chien, 1987).
Uma das principais aplicaes das membranas de hidrogel sobre o
tecido cutneo lesionado, por serem flexveis, no txicas e possibilitarem a
aplicao tpica de frmacos por meio da membrana (Rosiak, 1991).
11
12
2 OBJETIVOS
13
3 REVISO DA LITERATURA
14
15
ciclo
de
queratinizao,
ou
corneificao,
consiste
nesta
16
17
18
capilares com sangue arterial que ascendem at o topo de cada papila drmica e
retornam como papilares venosos (Sousa & Vargas, 2004).
O plexo profundo situa-se na base da derme reticular e composto por
arterolas e vnulas de parede muscular contnua. H ntima ligao dos dois
plexos, pois das arterolas do plexo profundo, sobem vasos que se ligam no plexo
superficial (Sousa & Vargas, 2004).
3.2 Cicatrizao
O processo de cicatrizao se d fundamentalmente no tecido
conjuntivo, no qual diversos fatores de ordem geral ou local intervm em sua
constituio e funo. A cicatriz consiste na substituio do tecido lesado por
tecido conjuntivo neoformado, indicado como cicatricial (Guirro, 2002).
A reparao cutnea constituda por uma sucesso de fenmenos
complexos e estreitamente ligados, que podem ser classificados em diferentes
etapas ou fases (Guirro, 2002):
19
20
3.3 Polmeros
3.3.1 Ao da radiao ionizante sobre a matria e polmeros
A qumica das radiaes consiste no estudo dos efeitos qumicos
produzidos quando a matria exposta radiao de energia alta, ou tambm
denominada, radiao ionizante. Geralmente, os tipos de radiao mais
conhecidos so aqueles produzidos pela decomposio de ncleos radioativos
(radiao , e ), partculas reativas de alta energia (eltrons, prtons, etc.) e
radiao eletromagntica de onda curta (raios X) (Spinks & Woods, 1990).
Quando a radiao eletromagntica interage com a matria ocorrem
vrios processos de atenuao, sendo os trs principais: efeito fotoeltrico, efeito
Compton e produo de pares (Spinks & Woods, 1990).
Efeito Compton: ocorre quando um fton interage com um eltron que pode
estar fracamente ligado ou livre, sendo que o eltron acelerado e o fton
defletido com energia reduzida. A energia do fton incidente dividida
entre o fton espalhado e o eltron. A interao Compton ocorre
21
22
23
processos
podem
ocorrer
de
forma
individual
ou
fator
mais
importante
que
influencia
na
capacidade
de
24
25
teraputica
cirrgicos
Externamente
Internamente
Lentes de contato
Prteses
ortopdicas
Coraes artificiais
Implantes
cardiovasculares
Bombas de insulina
"Stents"
Rins artificiais
Mamoplastia
Fgados artificiais
Reconstruo maxilofacial
Peles artificiais
Seringas
Catteres
Sistema de liberao de
frmacos
Biosensores
Curativos
Bombas de insulina
Reconstruo de rgos
Sexuais
Suturas
Tendes artificiais
Cartilagem articular
26
Propriedades fsicas e/ou qumicas do produto final podem ser obtidas pelo
ajuste da intensidade e tipo de radiao, tempo de irradiao (dose), etc.
O curativo de hidrogel a base de PVP utilizado em queimaduras e
27
a reao de
28
produtos reativos como ons e estados excitados, que perdem sua energia
formando radicais livres. Se estes radicais estiverem localizados em cadeias
polimricas
diferentes
posicionados
favoravelmente,
podem
sofrer
29
hidrogis
tambm
tm
sido
utilizados
amplamente
no
desenvolvimento de sistema de liberao controlada de frmacos, podendo liberlo de acordo com os estmulos do ambiente, devido a uma mudana de pH ou de
temperatura, por exemplo. Esta classe de hidrogis sensveis a estmulos,
tambm chamada de hidrogis inteligentes. Hidrogis de poliacrilameda e
quitosana sensveis a variao de pH (Bonina et al., 2004) e hidrogis de gelatina
e dextrano sensveis a estmulos duplos (Kurissawa & Yui, 1998) so alguns
exemplos.
3.3.5 Poli(vinil lcool)
O poli(vinil lcool) (PVA) produzido pela hidrlise controlada do
poli(vinil acetato). So produzidos PVA de massa molar varivel e com diferentes
graus de hidrlise, sendo que este ir determinar a solubilidade em gua do
polmero resultante (Ulrich, 1982).
A descoberta do PVA (FIG. 6) foi em 1924 quando Herrman e Haehnel
adicionaram lcali em uma soluo de poli(vinil acetato) e obtiveram o poli(vinil
lcool), mas foi em 1927 que foi realizado a sua primeira publicao cientfica
(Marten, 1989).
30
FIGURA 7. Poli(N-vinil-2-pirrolidona)
31
podem
ser
estocadas
por
um
longo
perodo
se
estocadas
Direto
(formao do radical)
(reticulao)
32
Indireto
(formao do radical)
(abstrao do H do polmero)
(reticulao)
FIGURA 8. Formao do radical polimrico.
3.3.7 gar
O gar uma mistura complexa de polissacardeos extrados de
espcies de algas vermelhas, conhecidas como agarofitas (espcies de Gelidium,
Gracilaria, Pterocladia, Acanthopeltis e Ahnfeltia) (Bridson, 2006). insolvel em
gua e solvel em gua fervente. Quando fervido (no funde abaixo de 85C)
torna-se um lquido lmpido e na temperatura entre 32C e 38C ele torna-se
slido para resultar em um gel firme (Farmacopia Brasileira, 1977).
Agarose o componente responsvel pelas propriedades de
geleificao forte do gar, enquanto a agaropectina responsvel pelas
propriedades de viscosidade. A proporo entre agarose e agaropectina em gar
varia de acordo com a alga de origem (Bridson, 2006).
3.3.8 Poli(etilenoglicol)
O
poli(etilenoglicol)
(PEG)
(FIG.
9)
um
homopolmero
33
FIGURA 9. Poli(etilenoglicol)
O PEG miscvel em gua, possui baixa toxicidade e consegue ser
compatvel com uma grande variedade de formulaes. Possui uma boa
estabilidade e pode ser misturado com gua (ou outros solventes) para obter uma
ampla faixa de viscosidade (Clinton & Matlock, 1990).
Este polmero utilizado como surfactante, lubrificante, plastificante
(Ulrich, 1982), em formulaes cosmticas, solues de lentes de contato, etc.
(Clinton & Matlock, 1990).
3.4 Arctalg
Observando a vida selvagem na regio subrtica do Atlntico,
pesquisadores verificaram que as algas vermelhas resistiam s baixas
temperaturas do inverno extremo, assim como a pouca luminosidade devido os
dias serem mais curtos. Estas algas, como a Chondrus crispus, quando
submetidas em situao de stress, como no inverno intenso, sintetizam em
grande quantidade o dipeptdeo citrulil-arginina, que utilizado como uma reserva
energtica (fonte de nitrognio) para este perodo do ano (Christophe, 2006).
Baseado nesses fatos foi estudado e desenvolvido um extrato natural
padronizado desta alga vermelha do mar rtico, o qual foi registrado como
ArctAlg. Este extrato derivado da biomassa da Chondrus crispus que
selecionada sob condies controladas de frio intenso, pouca luminosidade e
processo de extrao especfico que permite a padronizao dos principais
constituintes
(dipeptdeo
citrulil-arginina,
aminocido
taurina
agentes
34
35
36
37
MECANISMO DE LIBERAO
Dispositivos monolticos
Controlado Quimicamente
Sistemas monolticos
38
frmaco com o hidrogel e sua posterior reticulao, fazendo com que o princpio
ativo fique preso dentro da matriz. No segundo mtodo, primeiramente, o hidrogel
seco e assim obtido o dispositivo. Este mergulhado em uma soluo
contendo o princpio ativo que incorporado atravs da capacidade de
intumescimento do hidrogel. Este ltimo mtodo possui algumas vantagens em
relao ao primeiro, pois durante o processo de reticulao pode haver uma
alterao nas propriedades teraputicas do princpio ativo (Kim et.al., 1992).
Os hidrogis devem possuir propriedades fundamentais para que
possam ser utilizados como matrizes para compor dispositivos de liberao
controlada, sendo elas a biocompatibilidade, permeabilidade e capacidade de
intumescimento. Embora esta ltima propriedade seja a mais importante, a
permeabilidade que faz com que ele possa ser utilizado como um sistema de
liberao de frmacos (Gehrke &Lee, 1990).
Os hidrogis podem ser impermeveis, semipermeveis e totalmente
permeveis em relao a um soluto. Sua permeabilidade pode ser alterada em
relao ao tempo ou devido resposta a um estmulo externo (Gehrke & Lee,
1990).
A capacidade de intumescimento de um hidrogel tambm pode ser
interferida por um estmulo externo. Assim, nos ltimos 30 anos houve um grande
interesse no desenvolvimento dos hidrogis que respondem a estmulos do
ambiente. O uso de hidrogis inteligentes tem sido proposto, principalmente pelo
fato desses gis absorverem uma grande quantidade de gua, de possurem uma
natureza
elstica
similar
de
tecidos
naturais,
por
apresentarem
39
3.6 Citotoxicidade
A biocompatibilidade pode ser definida como a capacidade de um
material funcionar com uma resposta apropriada do hospedeiro em uma aplicao
especfica (Williams, 1986). Esta resposta apropriada, na maioria dos casos,
significa que um sistema vivo na presena de tal material no apresenta resposta
adversa. O material no pode ser afetado pelo meio fisiolgico, e os tecidos locais
e remotos no podem sofrer danos pela presena deste material (Ratner, 1996).
A seleo e avaliao de qualquer material ou dispositivo com inteno
de uso em humanos requer um programa estruturado de avaliao. Num
processo descrito, deve ser feita uma descrio informada que pesa as vantagens
e desvantagens dos vrios materiais e escolhas de procedimentos de testes. Para
se ter segurana de que o produto final ir realizar/efetuar como desejado e ser
seguro para uso humano, o programa dever incluir uma avaliao biolgica (ISO
10993-1, 2003).
A
caracterizao
de
materiais
biocompatveis
implica
na
40
41
42
4 MATERIAIS E MTODOS
4.1 MATERIAIS
4.2 MTODOS
43
COMPOSIO
PVP K90
PVP
PVA
CONCENTRAO (%)
6,0
PEG 300
1,5
GAR
0,5
GUA DESTILADA
92,0
PVA
GAR
GUA DESTILADA
91
44
woven e colocadas para remoo da frao solvel, por 36h, no extrator Soxhlet
(FIG. 12), utilizando como solvente a gua. Decorrido este tempo as amostras
foram novamente secas em estufa na temperatura de 60 C at atingirem peso
constante.
(1)
FG = 100% - Fs
(2)
45
cerca de 0,15g foi colocada em frasco contendo 20mL de tampo fosfato salina
(PBS) 0,1M pH = 5,0 e durante um perodo de 24 horas, foi verificada a massa a
cada hora durante as primeiras 6 horas do ensaio e aps 24 horas.
O grau de intumescimento foi calculado utilizando a Equao 3 de
acordo com a norma ASTM D 570 (ASTM, 1998).
I% = (mf mi) / mi x 100
(3)
46
(ISO
10993-1,
10993-5
1992)
metodologia
publicada
anteriormente (Rogero, et. al., 2003). Os extratos das amostras das membranas
de hidrogel e do controle negativo foram preparados pela imerso dos mesmos
em meio mnimo de Eagle (MEM) e incubados em estufa durante 24h a 37C. Foi
utilizado 1/8 de cada membrana de hidrogel, equivalente a 4,5cm2 em 9mL de
MEM, ou seja, 0,5cm2/mL. Como controle negativo foi utilizado pellets de PVC
(policloreto de vinila) atxico (1cm2/mL) e como controle positivo soluo de fenol
0,02%. Aps este perodo, foram feitas diluies seriadas (100, 50, 25, 12,5 e
6,25%) dos extratos obtidos das amostras e do controle negativo assim como da
soluo de fenol. Em seguida, 200 L de cada diluio dos extratos e dos
controles, em triplicata, foram colocados em contato com uma cultura de clulas
de tecido conectivo de camundongo, a linhagem NCTC clone 929 do ATCC
(American Type Culture Collection), cultivadas em microplaca de 96 poos (FIG.
14). A microplaca preparada foi colocada a 37C por 24h em estufa incubadora de
CO2, modelo CB150, marca Binder, com atmosfera mida e 5% de CO2. O cultivo
das clulas e a distribuio da suspenso celular na microplaca foram realizados
na Seo de Culturas Celulares do Instituto Adolfo Lutz.
Esta primeira etapa do ensaio foi realizada em capela de fluxo laminar
utilizando tcnicas asspticas e todo material estril.
Aps 24h, a microplaca foi retirada da estufa e os extratos foram
substitudos por 200 L de soluo do corante vermelho neutro e incubada
novamente a 37C por 3h para incorporao do corante nas clulas. Decorrido
este perodo o corante foi desprezado e a microplaca lavada com soluo tampo
fosfato pH 7,4 e posteriormente com soluo de lavagem (1% de CaCl2 10% em
soluo de formaldedo 0,5%). Aps a lavagem os poos da microplaca foram
preenchidos com 200 L de soluo de extrao (50% de cido actico 2% e
etanol 50%) para a lise das clulas vivas e liberao do corante.
47
10
11
12
100%
100%
100%
100%
100%
100%
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25%
25%
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25%
25%
25%
25%
25%
25%
25%
25%
12,5%
12,5% 12,5%
6,25%
6,25% 6,25%
MEM MEM
100%
50%
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12,5% 6,25%
MEM MEM
100%
50%
25%
50%
25%
12,5% 6,25%
MEM MEM
100%
50%
25%
50%
25%
12,5% 6,25%
Amostra 2
Controle de clulas
Amostra 3
Controle negativo
Amostra 4
Controle positivo
48
49
50
microplaca para MEM e L-15 (v/v) mais 2% SFB; outra para MEM e L-15 (v/v)
mais 10% SFB e outra para o princpio ativo. Foram realizados mais 3 ensaios
utilizando esta metodologia e os mesmos apresentaram reprodutibilidade. Este
resultado est apresentado no item 5.4 em resultados e discusso.
Portanto, de acordo com a metodologia desenvolvida, em cada ensaio
foram utilizadas 3 microplacas com linhagem celular FPC IAL onde foram
distribudos 200 L de uma suspenso de 100.000 clulas/mL. A cultura celular e
a preparao da microplaca foi realizada na Seo de Culturas Celulares do
Instituto Adolfo Lutz. Na microplaca 1 - placa controle do ensaio - as clulas
ficaram em dficit nutricional parcial (MEM e L-15 (v/v) contendo 2% SFB);
microplaca 2 - as clulas em condio nutricional total (MEM e L-15 (v/v)
contendo 10% SFB); microplaca 3 as clulas em contato com o princpio ativo
em diferentes concentraes (2; 1; 0,5 e 0,25%) sendo esta diluio seriada feita
em meio MEM e L-15 (v/v) contendo 2% SFB. A distribuio das diferentes
concentraes do princpio ativo est ilustrada na FIG. 15.
10
2%
2%
2%
1%
1%
1%
0,5%
0,5%
0,5% 0,25%
0,25% 0,25%
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0,25%
0,25% 0,25%
0,25%
11
12
0,25% 0,25%
1% de ArctAlg
0,5% de ArctAlg
0,25% de ArctAlg
51
metodologia
descrita
pelo
fabricante
(Exsymol)
com algumas
52
53
54
Microplaca 1: meio com dficit nutricional parcial - MEM e L-15 (v/v) com 2%
SFB, para o controle do ensaio;
Microplaca 2: meio com condio nutricional total - MEM e L-15 (v/v) com 10%
SFB;
55
5 RESULTADOS E DISCUSSO
5.1 Obteno das matrizes de hidrogel
As matrizes de hidrogel de PVP e PVA foram obtidas por meio da
radiao ionizante conforme descrito no item 4.2.1 em materiais e mtodos.
O critrio para considerar as membranas adequadas ou no para
serem submetidas aos ensaios de caracterizao foi a formao de um filme
homogneo, transparente e elstico, parmetros avaliados visualmente e
manualmente. Ambas as matrizes formaram um filme homognio, transparente,
com boa adesividade e mostraram uma resistncia adequada para a
manipulao. A matriz de PVP apresentou uma transparncia mais acentuada
que a de PVA, como pode ser observado nas FIG. 17 e 18.
56
57
PVA
mi (g)
mf(g)
0,1433
0,1075
0,1490
0,1123
0,1267
0,0901
0,1309
0,1107
0,1492
0,1253
0,1550
0,1310
% frao gel
73,8 2,4
84,4 0,3
58
INTUMESCIMENTO (%)
PVP
PVA
847,58 16
325,03 14
1180,38 18
680,88 13
1355,07 20
839,65 19
1470,38 13
988,26 19
1564,70 16
1020, 89 20
1593,59 19
1105, 54 18
1658,99 14
1309,12 18
59
1800
1600
% Intumescimento
1400
1200
1000
800
600
PVP
PVA
400
200
0
0
10
15
20
25
Tempo (h)
FIGURA 19. Perfil de intumescimento dos hidrogis de PVP e PVA
5.2.3 Citotoxicidade
Para a avaliao da biocompatibilidade dos hidrogis obtidos foi
realizado o ensaio in vitro de citotoxicidade pelo mtodo de incorporao do
vermelho neutro. Este teste permite analisar a citotoxicidade ou reatividade
biolgica induzida pelo material testado em culturas celulares, tomando como
parmetro a viabilidade celular. Segundo Eisenbrand e colaboradores (2002),
mtodos que avaliam a citotoxicidade basal detectam a capacidade de um
material em causar morte celular como conseqncia de danos na funo bsica
da clula e apresentam boa correlao com a toxicidade aguda em animais e no
homem.
Com os resultados de DO obtidos neste ensaio foi calculada a
viabilidade celular em relao ao controle de clulas no ensaio, a qual foi
considerada 100%. Os resultados de viabilidade celular esto apresentados na
TAB. 6. Projetando-se os valores de viabilidade celular em relao
concentrao dos extratos foram obtidas as curvas de viabilidade celular,
apresentadas na FIG. 20. O ndice de citotoxicidade IC50% determina
60
Controle
Positivo
00
22 21
80 14
97 12
93 7
DE EXTRATO (%)
100
50
25
12,5
6,25
PVA
83 8
93 4
97 9
98 2
82 5
100
50
IC50%
PVP
PVA
Controle negativo
Controle positivo
0
10
100
61
Conforme
estudos
anteriores
encontrados
na
literatura,
62
3,5
A1
A2
A3
3,0
Fora (N)
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
Deformaao (mm)
FIGURA 21. Performance da fora de trao aplicada membrana de PVP
3,5
3,0
Fora (N)
2,5
2,0
1,5
1,0
PVA1
PVA2
PVA3
0,5
0,0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
Deformao (mm)
FIGURA 22. Performance da fora de trao aplicada membrana de PVA
63
Alongamento
()
Mdulo Elstico
(E)
(N)
(%)
(N)
PVA1
PVA2
PVA3
Mdia
DP
3,10
2,91
3,09
3,03
0,11
160,80
136,27
152,78
149,95
12,51
0,56
0,62
0,58
0,59
0,03
PVP1
PVP2
PVP3
Mdia
DP
1,24
1,05
1,11
1,13
0,10
104,18
54,60
65,23
74,67
26,10
0,43
0,38
0,37
0,39
0,04
AMOSTRAS
()
64
desses estudos pode-se observar que os hidrogis de PVA obtidos pela radiao
ionizante apresentam melhores propriedades mecnicas.
5.3 Citotoxicidade do ArctAlg
O ensaio de citotoxicidade do ArctAlg foi realizado para determinar a
faixa de concentrao a ser utilizada, deste princpio ativo, no ensaio de
citoestimulao.
Este ensaio foi realizado conforme descrito no item 4.2.2.4 em
materiais e mtodos. Foi utilizado concentraes de 1, 2,5, 5 e 10% do princpio
ativo para a verificao de sua citotoxicidade e os resultados esto apresentados
na TAB. 8.
TABELA 8. Resultados da viabilidade celular do ensaio de citotoxicidade do
ArctAlg .
CONCENTRAO (%)
Controles
100
50
25
12,5
-6,25
----
ArctAlg
----10
-5
2,5
1
65
100
50
IC50%
Arct'Alg
Controle negativo
Controle positivo
0
0
10
12
30
45
60
75
90
105
66
170
Viabilidade celular(%)
160
150
140
10%SFB
130
120
110
2%SFB
100
90
0,00
0,25
0,50
0,75
1,00
1,25
1,50
1,75
2,00
2,25
Concentraao de Arct'Alg
FIGURA 24. Viabilidade celular em funo da concentrao de ArctAlg.
67
68
69
tempo de reteno
(min)
rea do pico
no-irradiado
Irradiado
8.02
8.99
1834301
299607
transparente,
flexvel,
macia,
com
propriedades
mecnicas
70
71
foram utilizadas para uma anlise comparativa dos cromatogramas dos mesmos
com os do ArctAlg liberado.
Para verificar a liberao do ArctAlg (extrato composto por vrias
substncias) foi utilizado como padro o dipeptdeo citrulil-arginina, um de seus
principais constituintes. A quantificao do citrulil-arginina contido no ArctAlg
liberado foi obtida pela comparao da rea do pico de uma soluo padro de
0,2 mg/mL do citrulil-arginina com a rea do pico da citrulil-arginina liberado do
dispositivo contendo o ArctAlg.
A rea do pico do citrulil-arginina foi obtida pela injeo de 5 L da
soluo padro em uma coluna de fase reversa C18 conforme descrito no item
4.2.3.2. Na FIG. 29 apresenta-se o cromatograma do padro em que se observa o
pico no tempo de reteno de aproximadamente 8 min.
72
73
74
Nos
cromatogramas
das
alquotas
de
cintica
de
liberao
ArctAlg
foi
calculada
pela
comparao
das
reas
dos
picos
75
PVP
PVA
TEMPO DE
LIBERAO
(h)
1
2
3
4
5
6
7
24
1
2
3
4
5
6
7
24
TEMPO DE
RETENO
(min)
7,94
7,48
8,02
7,59
7,96
7,56
7,51
7,6
7,55
7,66
7,59
7,64
7,59
7,61
7,61
7,59
REA DO
PICO
1102231
938004
916417
824082
839009
828229
818832
842494
667615
653028
626414
621342
616679
503148
509028
493516
CITRULIL-ARGININA
(g/mL)
6,009
5,114
4,996
4,493
4,574
4,515
4,464
4,593
3,639
3,56
3,415
3,387
3,362
2,743
2,775
2,69
76
10
Concentrao (g/mL)
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
20
22
24
Tempo (h)
77
Concentrao (g/mL)
0
0
20
22
24
Tempo (h)
78
PVP
PVA
TEMPO DE LIBERAO
(h)
1
2
3
4
5
6
7
24
1
2
3
4
5
6
7
24
79
200
180
160
140
10%SFB
120
2%SFB
100
Tempo (h)
FIGURA 37. Viabilidade celular do ArctAlg liberado na primeira hora dos
dispositivos de hidrogis de PVP e PVA
80
81
6 CONCLUSO
82
APNDICE
CONCENTRAO DE ARCTALG
(%)
0,25
0,5
1
2
92 15
85 19
87 19
91 12
105
5%SFB
100
95
90
10%SFB
85
80
0,0
0,5
1,0
1,5
Concentrao de Arct'Alg
2,0
2,5
83
106 13
111 12
105 15
104 14
115
110
105
5%SFB
100
10%SFB
0,0
0,5
1,0
1,5
Concentrao de Arct'Alg
2,0
2,5
84
CONCENTRAO DE ARCTALG
(%)
0,25
0,5
1
2
102 18
109 18
112 14
96 15
120
115
110
105
5%SFB
100
95
90
85
80
75
10%SFB
70
0,0
0,5
1,0
1,5
Concentrao de Arct'Alg
2,0
2,5
85
CONCENTRAO DE ARCTALG
(%)
0,25
0,5
1
2
120 15
125 11
122 18
118 16
130
125
120
115
110
105
5%SFB
100
10%SFB
95
0,0
0,5
1,0
1,5
Concentrao de Arct'Alg
2,0
2,5
86
125
120
115
110
105
100
0
10
15
20
87
130
125
120
115
110
105
100
0
10
15
20
88
CONCENTRAO DE ARCTALG
(%)
0,25
0,5
1
2
102 17
109 19
107 17
103 19
110
108
106
104
10%SFB
102
2%SFB
100
98
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
89
127 12
147 13
122 19
109 16
150
145
140
135
130
125
10%SFB
120
115
110
105
2%SFB
100
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
90
CONCENTRAO DE
SFB (%) em MEM + L-15
10
2
CONCENTRAO DE ARCTALG
(%)
0,25
0,5
1
2
109 10
105 12
102 14
98 12
115
110
105
10%SFB
2%SFB
100
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
91
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
AJJI, Z.; OTHMAN, I.; ROSIAK, J.M. Production of hydrogel wound dressings
using gamma radiation. Nucl. Instrum. Methods Phys. Res., v. 229, p. 375380, 2005. Section B.
92
93
94
95
96
97