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AO DE LA INDUSTRIA RESPONSABLE Y DEL

COMPROMISO CLIMATICO

TEMA: PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVOS Y


TECNICAS DE SIEMBRA.

CURSO: MICROBILOGIA. GRAL.

DOCENTE: BLGO. HENRY ROBLES CUEVA.

FACULTAD:

ING.

INDUSTRIAL

ESCUELA

DE

AGROINDUSTRIAL.

FECHA DE ENTREGA: 19 DE MARZO DEL 2014.

ALUMNO: JHON FRANCHESCO MRQUEZ SUAREZ.

ING

I.

INTRODUCCIN:

SI bien hoy en da la ciencia y la tecnologa nos estn permitiendo


reconocer muchos microorganismos, o cualquier otra forma de vida
que exista. Por lo tanto en esta prctica que hemos realizado nos
ha servido para muchos aspectos que nos son necesarios para la
manipulacin de estos instrumentos que ms adelante ya sern
necesarios, con los cuales podemos reconocer y realizar, muchos
aspectos importantes en la microbiologa.
Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una buena
tcnica asptica y por tanto se requiere un ambiente limpio y
ordenado. Cuando manejamos cualquier tipo de muestra debemos
evitar que microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes
en el ambiente se introduzcan en ellos contaminndolos, o que los
microorganismos de la muestra nos contaminen a nosotros. Por
ello

se

debe

trabajar

en

condiciones

de

estabilidad.

En

el

laboratorio de microbiologa encontraremos estas condiciones bien


en campanas de seguridad biolgica o bien en la proximidad de la
llama

de

un

microorganismos

mechero
que

se

de

alcohol

manipulan

o
no

de

gas.

Aunque

los

se

han

considerados

patgenos todos los cultivos de todos los microorganismos deben


ser manejados con precaucin por su potencial de patogenicidad.

II.

OBJETIVO:
- Reconocimiento y utilidad de los instrumentos de uso
frecuente en el laboratorio.

III.

FUNDAMENTO TEORICO:
La microbiologa surgi como ciencia tras el descubrimiento
del

microscopio

holands

Antoni

su

van

perfeccionamiento.
Leeuwenhoek

fue

El
el

naturalista
primero

en

describir, en 1683, estos organismos (a los que bautiz


como "animlculos"), que observ con

la ayuda de un

microscopio construido por l mismo.


Microbiologa, ciencia que estudia los organismos de tamao
microscpico, entre los que se incluyen las bacterias, los
protozoos y los virus, as como ciertos hongos (levaduras) y
algas unicelulares de pequeo tamao.
En el laboratorio de microbiologa todas las personas que
trabajan con materiales que contengan agentes infecciosos
deben estar conscientes de los peligros potenciales asociados
a estos agentes, adems deben estar entrenadas en las
prcticas y tcnicas requeridas para manejar estos materiales
de una manera segura. Es por ello que antes de comenzar
con las actividades prcticas, todas las personas involucradas
(estudiantes y profesores) tenemos la obligacin de conocer
cules son las normas de seguridad a seguir en el laboratorio
de manera tal, que el trabajo se realice con un riesgo
mnimo de exposicin, tanto para las personas que lo
ejecutan como para el medio ambiente. El objetivo de
conocer las normas de seguridad es para que realicemos las
actividades prcticas en el Laboratorio de Microbiologa de
una manera adecuada y segura.

El uso adecuado de los instrumentos que utilizaremos en las


prcticas microbiolgicas: como el microscopio, la autoclave,
incubadora, horno, refrigeradora, cmara de reencuentro de
microorganismos.
Dentro del laboratorio de microbiologa, nos encontramos
con distintos tipos de materiales: vidrio, plstico, pipetas,
probetas, placas, tubos de ensayo, materiales de vidrio.
Se tendr que elegir en cada momento el material segn el
uso que le queramos dar, ningn utensilio es perfecto.

IV.

MATERIALES Y REACTIVOS:
El profesor solo nos capacito para el uso adecuado de ellos,
por esta razn no se utilizaron.

V.

PROCEDIMIENTO
Se

explicaron

los

principios

fundamentales

seguridad y del uso de

de

materiales y

equipos en el laboratorio de microbiologa: material de vidrio,


el microscopio, autoclave, horno o incubadora, refrigeradora,
cmara de reencuentro de microorganismos, bao mara, etc.

AUTOCLAVE
Es

el

procedimiento

esterilizacin.

ms

utilizado

fiable

para

la

A travs de ella podemos esterilizar medios de

cultivo, agua, jeringas, instrumental vario, objetos de goma y


tela.
Este tipo de esterilizacin se realiza por vapor a presin y es
una

forma muy efectiva de realizar la destruccin de

grmenes y de esporas. Se mantiene a una temperatura de


121 C, durante

unos 15 a 20 minutos.

Material de uso para la autoclave:

Vidrio

Pipetas

Probetas

Placas

Tubos de ensayo

Material de vidrio. etc.

REFRIGERADORA:
Se usa para conservar los medios de cultivos preparados.

Tiene

varias

funciones,

tiene

dos

etapas

importantes.

La

primera que se da a 4c y la segunda donde se congela a 6c.


Cuando no se tuviera que trabajar los medios de cultivo, se
conservan a 4c, si es que se tuviese conservada alguna
hormona en especial, esta se conserva siempre a temperaturas
ms bajas.

HORNO O ENCUBADORA:
Tiene varias funciones:
Se utiliza para esterilizar material de vidrio, porcelana y tambin
para objetos metlicos.

El material deber introducirse en el horno

una vez limpio y seco,

una vez introducido hay que procurar que

estos

no

toquen

las

paredes

de

la

estufa,

porque

alcanza

temperaturas muy altas Una vez introducido el material, se cierra el


horno y se enciende.

Para cuando los materiales salen hmedos de la autoclave, se


llevan

a un horno para que sequen a un temperatura mxima

de 65C, de lo contrario no se podran trabajar hmedos

Una vez transcurrido el tiempo

deseado se apagar y se dejar

enfriar

de

totalmente

antes

sacar

el

material.

La incubadora cumple una funcin de incubar de incubar placas


en

las

que

se

haya

sembrado

microorganismos

en

temperatura especial de desarrollo.

CAMARA DE REENCUENTRO DE MICROORGANISMOS


Es el total de microorganismos y clulas viables.
Se usa para contar microorganismos pero por cada cuadro.

una

BAO MARIA:
Se usa para incubar las muestras que necesitan calor pero que este
en constante movimiento.
Se puede usar a la temperatura que se desee, pero con fines de
incubar con calor.

El

MICROSCOPIO:
microscopio

es

el

instrumento

ms

necesario

para

un

microbilogo, ya que permite la observacin de organismos que no


pueden ser apreciados en detalle a simple vista, es decir de los
microorganismos.

Existe

una

gran

variedad de microscopios que, segn la


fuente

de

iluminacin

utilizada,

se

agrupan en:
Microscopios pticos: La fuente

de iluminacin es la luz.
De

campo

observacin

claro.
de

Permiten

preparaciones,

en

la
su

color natural o contrastado mediante


tinciones, resaltadas sobre un fondo ms
brillante.
De campo oscuro. Permiten la observacin de formas celulares que
destacan brillantes sobre un fondo oscuro. Este efecto se consigue
utilizando diafragmas especiales.
De contraste de fases. Gracias a la utilizacin de diafragmas y
objetivos especiales, que consiguen aumentar las diferencias en el
ndice de refraccin de las clulas y el medio que las rodea,
permiten la observacin de clulas vivas, ya que no es necesario
realizar ninguna tincin de las mismas.
De

interferencia.

Permiten

observar

clulas

vivas

sin

teir,

obtenindose una imagen en relieve de las mismas.


De fluorescencia. La luz ultravioleta que excita ciertas molculas
presentes en las clulas (bien de forma natural o aadida a la
preparacin) que emiten fluorescencia en el espectro visible.
Confocal. Permite obtener imgenes bi y tridimensionales de alta
resolucin. Es un microscopio computarizado que acopla un lser a
un microscopio ptico obtenindose imgenes fluorescentes. Anlisis

digital por ordenador. Tiene un diafragma especial llamado pinhole


que elimina la seal de las regiones que se encuentran fuera de
foco.
Microscopios electrnicos: La fuente de iluminacin es un

chorro de electrones y las lentes son electroimanes.


De transmisin. Permiten la observacin de muestras teidas con
sustancias que son resistentes al paso de electrones y cortadas
dando

lugar

lminas

finas,

denominadas

cortes

finos.

Los

electrones no son visibles directamente por lo que stos se envan


a una pantalla que emite fluorescencia ms o menos intensa segn
el nmero de electrones que inciden en ella. Las estructuras
celulares que se tian ms intensamente impedirn el paso de
electrones

por

lo

tanto

no

permitirn

la

emisin

de

fluorescencia, por lo que estas 4 estructuras aparecern oscuras en


un fondo ms brillante. Se consiguen entre 10.000 y
100.000 aumentos.
De

barrido.

Permiten

la

observacin

de

clulas

enteras,

sin

necesidad de cortes finos, de modo que aparecen los relieves


originales y las superficies externas. Alcanzan entre 1.000 y
10.000 aumentos.
Durante las prcticas se emplear el microscopio ptico de campo
claro, cuyos componentes fundamentales (mecnicos, de iluminacin
y pticos) se muestran en la Figura.
Esquema del microscopio ptico
La

capacidad

de

un

microscopio

para

observar

diferentes

estructuras se refleja en el nmero de aumentos y en el lmite de


resolucin (LR).
El nmero de aumentos de un microscopio resulta de multiplicar
los aumentos que proporciona cada una de las lentes presentes
entre la fuente de iluminacin y la lente ocular.

El lmite de resolucin (LR) se define como la distancia mnima a


la que se deben encontrar dos puntos para que puedan observarse
separados. El microscopio es mejor cuanto menor sea el LR del
mismo. El LR viene definido por la frmula:
LR = / 2nsen
: longitud de onda de la fuente de iluminacin.
Oculares
Objetivos
Pletina mvil
Tornillos de enfoque
Condensador
Filtros
Diafragma
Fuente de iluminacin
Soporte

RECOMENDACIONES

Entrar al laboratorio en forma ordenada y llevar puesta la bata


de laboratorio en todo momento. La misma debe permanecer
completamente cerrada.

Limpiar y descontaminar las superficies de trabajo, antes de


comenzar y al finalizar la sesin prctica.

Lavar

las manos con agua y

jabn

antes de realizar

las

actividades programadas, antes de salir del laboratorio y siempre


despus de manejar materiales que se sabe o se sospecha que
son contaminantes.

Llevar un calzado apropiado, preferiblemente cerrado y recoger el


cabello largo.

No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o


utensilios.
BIBLIOGRAFA:

1. OMS, 1994. Manual de Bioseguridad en el Laboratorio. 2da


Edicin. Ginebra.
2. Lelieveld, H.L.M. 1995 "Safe Biotechnology. Part 6. Safety
assessment, in respect of human health, of microorganisms used
in biotechnology". Appl Microbiology Biotechnol 43: 389 93.
3. CSLT Guidelines 1993. Laboratory Safety. Third Edition.
4. OPS. Manual de procedimientos de control de la calidad para los
laboratorios de serologa de los Bancos de Sangre. Washintong
DC 1994.
5. Kahrs R. F. Principios generales de la desinfeccin. Rev. Sci.
Tech. Off. Int. Epiz. 14 (1): 143 163, 1995.

PREPARADOS:
Hay dos tipos de preparados:
Preparados en frescos
Preparados en seco
Preparados en frescos:
Se deja caer una gota de agua estancada y se coloca
su laminilla porta objetos.

Preparados en seco: para observar el preparado en seco se


usa aceite de cedro una gota. Y se usa el objetivo solo de
inmersin porque el lente va a estar en contacto con la
muestra.
Luego se desplaza de acuerdo a lo que se quiere observar.

Se da por frotis y por extensin:


Por frotis: con la punta se expande muestras
semislidas

Por extensin: se coloca una gota de sangre en el extremo


de la lmina y con otra laminilla adicional se corre para extender
la muestra.

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