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Ciencias de la Salud

Medicina ADI

GUIA DIDCTICA
MICROBIOLOGA I
PROCESAMIENTO DE UROCULTIVOS
M.Sc. SANDRA ROMERO

Las infecciones del tracto urinario tienen un gran impacto en la sociedad debido a que
son una causa importante de ausentismo laboral y escolar con sus obvias
consecuencias econmicas. Adicionalmente, las infecciones del tracto urinario son la
principal causa de sepsis y choque sptico a nivel comunitario, la principal causa de
infecciones intrahospitalarias y la segunda causa en importancia de choque sptico a
nivel nosocomial.
La orina dentro del tracto urinario normal es estril y los microorganismos llegan a
colonizar solamente las porciones distales de la uretra. La orina, al pasar por las
porciones distales de la uretra durante la miccin, se puede contaminar con las
bacterias comensales. El nmero de bacterias presentes en la orina recin recolectada
de una persona saludable es relativamente bajo, usualmente 102 UFC/ml. Por

diferentes factores que se discuten luego, los microorganismos, principalmente


bacterias, pueden llegar a colonizar y provocar un cuadro inflamatorio en diferentes
sitios anatmicos del tracto urinario, causando infecciones a nivel de uretra (uretritis),
vejiga (cistitis), pelvis y parnquima renal (pielonefritis). En aproximadamente 30% de
los casos de pielonefritis se observa una bacteremia concomitante. La colonizacin y la
multiplicacin bacteriana a nivel de la vejiga con aparicin de nmeros significativos (>
102 UFC/ml) de bacterias en orina, pero sin provocar un proceso inflamatorio evidente
y, por consecuencia, sin sntomas en el paciente, se denomina bacteriuria asintomtica.
Otros tipos de infeccin en el tracto urinario incluyen abscesos perinefrticos, nefritis
aguda multifocal, pielitis, tuberculosis renal y prostatitis, entre otros.
La prevalencia de las infecciones bacterianas a nivel del tracto urinario depende de una
serie de atributos del hospedero, particularmente del sexo y de la edad del individuo.
Las infecciones urinarias se presentan, en trminos generales, ms frecuentemente en
mujeres que en hombres por varias razones anatmicas, fisiolgicas y conductuales o
sociales. La gran mayora de las infecciones del tracto urinario son causadas por
bacterias que se originan de la flora intestinal normal del mismo individuo. Sin embargo,
el espectro de los agentes etiolgicos depende, en gran parte, de si la infeccin es de
origen comunitario o de origen nosocomial. En todo caso, la Escherichia coli es el
agente etiolgico ms importante como responsable tanto de infecciones del tracto
urinario comunitarias como de infecciones nosocomiales.

Agentes Etiolgicos Bacterianos de Infecciones del Tracto Urinario


Principalmente: Staphylococcus saprophyticus. Enterococcus faecalis, Staphylococcus
aureus, Staphylococus epidermidis y Escherichia coli

Atributos del Hospedero y otros Factores Epidemiolgicos de las Infecciones del


Tracto Urinario
Rutas de ingreso: Las bacterias logran llegar hasta diferentes sitios en el tracto
urinario bsicamente por tres rutas diferentes:
Ruta ascendente. Es la principal va de inoculacin de bacterias provenientes de la
flora intestinal que contaminan la regin periuretral y uretral distal y que posteriormente
ascienden hacia las vas urinarias. Este es la ruta por la cual, por ejemplo, Escherichia
coli y otras especies de la familia Enterobacteriaceae incluyendo Proteus, Klebsiella,
Serratia y especies de Enterococcus llegan hasta las vas urinarias.
Ruta hematgena. Por medio de esta ruta, bacterias que se encuentran circulantes
en sangre como causantes de una bacteremia, con o sin sintomatologa concomitante,
llegan hasta el sistema urinario, particularmente a nivel de los riones y pueden
provocar una infeccin renal, como los abscesos renales. Esta es una ruta de infeccin
relativamente infrecuente para bacterias provenientes de la flora intestinal, pero puede
ser importante para otros patgenos como Staphylococcus aureus, Haemophilus
influenzae (en nios), Salmonella y Candida entre otros.
Diseminacin directa. Puede ocurrir una inoculacin directa de bacterias de la flora
intestinal por medio de fstulas que se originan en el intestino hacia la vejiga o el rin.

Mecanismos de Defensa del Tracto Urinario


Como sistema orgnico, el tracto urinario tiene varios mecanismos de defensa que
permiten evitar en gran medida la colonizacin y la infeccin causada por bacterias.
Algunos de los principales mecanismos de defensa son:
Mecanismos mecnicos: Estos mecanismos previenen mecnicamente el ascenso y
la colonizacin de las vas urinarias por bacterias de origen intestinal e incluyen: la
peristalsis uretrica, el vaciado normal de la vejiga y la descamacin de clulas
uroteliales.
Mecanismos qumicos: Un gran nmero de sustancias estn presentes o son
secretadas a diferentes niveles en el tracto urinario y tienen algn efecto bacteriosttico
o bactericida, de manera que ayudan a prevenir inespecficamente la multiplicacin y la
colonizacin bacteriana. En estos mecanismos qumicos se incluyen: sustancias
antibacterianas presentes en las secreciones prostticas como Zn2+, condiciones
hiperosmolares en la orina y la mdula renal, acidez urinaria, secrecin de antgenos
sanguneos como eventuales receptores para adhesinas bacterianas, ausencia del
antgeno del grupo sanguneo P que acta como receptor para adhesinas tipo P

presentes en Escherichia coli y otras especies de la familia Enterobacteriaceae


potencialmente uropatognicas.
Mecanismos inmunolgicos.: Diversos mecanismos inmunolgicos, especficos e
inespecficos, son importantes en el control de la colonizacin bacteriana y las
infecciones en el tracto urinario, incluyendo: presencia de anticuerpos tipo IgA en las
secreciones vaginales, prostticas, uretrales y vesicales, produccin de anticuerpos IgG
y consecuente opsonizacin bacteriana y factores de complemento como mediadores
de opsonizacin y lisis bacteriana.

Atributos del Hospedero


Una gran cantidad de diferentes factores del individuo pueden predisponer o llevar al
establecimiento de una infeccin en el tracto urinario, incluyendo:
Obstruccin urinaria (congnita o adquirida) como clculos, tumores, hipertrofia
prosttica, lo cual puede conducir a un aumento del volumen en estasis urinaria o un
vaciado incompleto de la vejiga.
Factores iatrognicos como la instrumentacin (cateterizacin).
Reflujo vesicoureteral. Sexo y edad del paciente.
Embarazo, el cual puede provocar aumento en la retencin urinaria, disminucin de la
peristalsis, aumento en la presin vesical y mayor reflujo vescoureteral.
Alteraciones neurolgicas como la prdida de control de esfnteres.
Lesiones renales preexistentes.
Diabetes mellitus por prdida de funcin leucocitaria y glicosuria.

Prevalencia de las Infecciones Urinarias


Existen mltiples razones por las cuales las infecciones del tracto urinario se presentan
mucho ms frecuentemente en mujeres que en hombres, incluyendo:
Razones anatmicas. La uretra de la mujer es mucho ms corta en mujeres que en
hombres (~ 5 cm versus ~ 20 cm, respectivamente), adems de que desemboca cerca
de la vagina y del ano. El orificio uretral presenta una estrecha cercana anatmica con
una regin corporal relativamente hmeda por las secreciones y con una temperatura
ligeramente ms alta, lo cual promueve la multiplicacin de aquellas bacterias
provenientes del contenido intestinal.

Razones fisiolgicas. Existen factores fisiolgicos por los cuales las infecciones del
tracto urinario son ms frecuentes en mujeres, incluyendo, por ejemplo, los cambios
hormonales que se presentan durante el embarazo, lo cual puede conducir a
alteraciones en la flora normal. Asimismo, durante el embarazo y despus del parto
puede ocurrir una disminucin del vaciamiento vesical debido a estiramiento de los
tejidos. Conforme mayor sea el nmero de hijos, mayor ser el riesgo a sufrir una
infeccin del tracto urinario. Por otra parte, la presencia de restos de sangre y de otras
secreciones, que durante la menstruacin permanecen en la regin periuretral, puede
promover la multiplicacin y la colonizacin bacteriana de la uretra distal y proximal.
Razones conductuales o sociales. Se incluyen los diferentes hbitos y
comportamientos de las mujeres:
Hbitos higinicos: se debe considerar la manera de limpiarse luego de orinar y de
defecar, lo cual puede conducir a la contaminacin con material fecal de las porciones
distales y proximales de la uretra, as como el uso de tampones o toallas sanitarias y
la frecuencia de su cambio.
Hbitos miccionales: el no orinar, sea por aguantar ganas, por rendimiento laboral
o por no tomar suficiente cantidad de lquidos, puede conducir a vejigas retencionistas
que presentan un mayor volumen total, con un menor volumen de vaciamiento y un
mayor volumen residual de orina, en la cual puede ocurrir multiplicacin de las
bacterias que all se encuentren.
Hbitos sexuales: la actividad sexual por s misma favorece el establecimiento de
infecciones en el tracto urinario por masajeo, compresin o traumatismo de la uretra,
as como otras prcticas asociadas a la actividad sexual, incluyendo el uso de
dispositivos intrauterinos, anticonceptivos orales, sustancias espermaticidas y duchas
vaginales.

Factores de Virulencia Bacterianos Asociados a las Infecciones Urinarias


Las bacterias causantes de infecciones urinarias generalmente provienen del tracto
intestinal donde forman parte de la flora normal. Las cepas uropatognicas se
caracterizan por poseer una serie de factores de virulencia que las distinguen de otras
cepas bacterianas intestinales no patgenas. Dentro de estas caractersticas se deben
considerar las siguientes:
Motilidad bacteriana. Con notables excepciones como Staphylococcus
saprophyticus, especies de Klebsiella y Enterococcus, la gran mayora de las bacterias
uropatgenas tienen la capacidad de moverse ascendentemente por la uretra hacia la
vejiga urinaria. En efecto, las cepas uropatgenas de Escherichia coli y las especies
de Proteus tienen una alta capacidad de motilidad ascendente, en forma

contracorriente a la orina, lo cual facilita grandemente la colonizacin de la vejiga


urinaria.
Produccin de adhesinas. Las cepas uropatgenas de Escherichia coli tienen la
capacidad de producir diferentes estructuras de adhesin denominadas adhesinas,
siendo las ms importantes las fimbrias tipo 1 y las fimbrias tipo P. Las fimbrias tipo 1
son producidas por un gran porcentaje de cepas de Escherichia coli y de otras
especies de la familia Enterobacteriaceae. Las fimbrias tipo 1 median la adhesin a
residuos de manosa localizados sobre la mucosa intestinal y sobre la mucosa vesical.
Se asume que las fimbrias tipo 1 son responsables de la colonizacin de la vejiga
urinaria y permiten el establecimiento de las infecciones de las vas urinarias bajas
(cistitis). Las fimbrias tipo P reconocen residuos de digalactsido (Gal-Gal) localizados
en la superficie de la pelvis renal y, por lo tanto, se presume que las fimbrias tipo P
median la colonizacin de dicho sitio anatmico facilitando el establecimiento de
infecciones de las vas urinarias altas (pielonefritis). Las fimbrias tipo P solamente se
encuentran solamente en ciertas cepas de Escherichia coli denominadas
pielonefrognicas.
Produccin de ureasa. La produccin de una enzima con actividad urealtica es
frecuente en muchos uropatgenos de origen intestinal, incluyendo Proteus mirabilis,
Klebsiella pneumoniae, Providencia stuartii y Staphylococcus saprophyticus. La
hidrlisis de urea incrementa la concentracin de amonio en la orina con la
subsiguiente elevacin del pH urinario. El pH urinario elevado puede llevar a una serie
de efectos importantes incluyendo la formacin de clculos debido a la precipitacin
de sales de fosfato de magnesio y amonio. La formacin de clculos puede provocar
la obstruccin de las vas urinarias e interferir con la miccin y favorece el
establecimiento de las infecciones bacterianas. Adicionalmente, la alcalinizacin de la
orina por la generacin de amonio favorece la multiplicacin y la sobrevivencia
bacteriana en el tracto urinario, probablemente porque se logra un pH ms adecuado
para el crecimiento bacteriano, se obtiene amonio a concentraciones elevadas como
una fuente de nitrgeno ms asimilable y el amonio puede inactivar el cuarto
componente del complemento y prevenir as algunas funciones del sistema
inmunolgico.
Produccin de hemolisinas. La gran mayora de las especies bacterianas aisladas
de infecciones en el tracto urinario son hemolticas cuando se observa su morfologa
colonial sobre placas de agar sangre. El caso ms estudiado es el de la hemolisina de
Escherichia coli, una citolisina formadora de poros que tiene la capacidad de
interactuar y muchas veces lisar diferentes tipos de clulas del hospedero. La lisis de
los eritrocitos provoca la liberacin hemoglobina, la cual sirve como una fuente de
hierro, un elemento esencial para la multiplicacin bacteriana. Adicionalmente, la
interaccin de la hemolisina sobre clulas nucleadas puede alterar la fisiologa celular,
de manera que se inhiben muchas funciones de leucocitos polimorfonucleares y otras
clulas de respuesta inflamatoria. Tales efectos inhibitorios bloquean la actividad del

sistema inmunolgico y favorecen entonces la multiplicacin de las bacterias en el


tracto urinario. Por otra parte, la hemolisina de Escherichia coli puede tener un efecto
txico sobre las clulas uroepiteliales y del parnquima renal, provocando as un dao
directo adicional. Otros casos menos estudiados incluyen las hemolisinas de Proteus
mirabilis y Proteus vulgaris, las cuales muestran una gran homologa con la hemolisina
de Escherichia coli, la hemolisina de Serratia marcescens y la toxina a de
Staphylococcus aureus, entre otras.
Produccin de endotoxinas. El lipopolisacrido (LPS), un componente estructural
de la membrana externa de las bacterias Gram-negativas, tiene un efecto txico
directo sobre clulas de respuesta inflamatoria como leucocitos polimorfonucleares,
clulas monocticas y linfocitos T y B, alterando la produccin de una serie de
citoquinas involucradas en la respuesta inmunolgica. El LPS es uno de los principales
inductores de fiebre en los individuos con infecciones bacterianas en las vas urinarias
superiores. Otros componentes estructurales bacterianos, como fragmentos de pared
celular y cidos teicoicos provenientes de bacterias Gram-positivas, tienen efectos
muy similares a los producidos por el LPS de bacterias Gram-negativas.

Manejo Clnico de las Infecciones Urinarias


Diagnstico de las infecciones del tracto urinario
Diagnstico Clnico de la Cistitis:
-Disuria
-Frecuencia
-Urgencia

-Poco volumen de orina


-Incontinencia
-Dolor suprapbico

Diagnstico Clnico de la Pielonefritis:


- Dolor localizado en los flancos, la espalda o el abdomen
- Fiebre
- Malestar general
- Sudoracin
- Dolor de cabeza
- Nuseas
- Vmito
- Postracin

Examen General de Orina


Prueba de deteccin de nitritos positiva.
Presencia de leucocitos

Urocultivo
-Recuento del nmero de microorganismos presentes por mililitro de muestra
(UFC/ml). Identificacin del/de los microorganismo(s) aislados.
-Prueba de susceptibilidad a los antibiticos.
Pacientes Asintomticos: Bacteriuria (1O~ UFC/mI) por una misma especie
bacteriana detectada en dos urocultivos en un lapso de 7 a 15 das. No se da
tratamiento con antimicrobianos a los individuos, con excepcin de pacientes
inmunosupresos y mujeres embarazadas por el riesgo de partos prematuros y
mortinatos.

Pacientes Sintomticos:
Pacientes con una primoinfeccin, definida como la primera infeccin en la vida o
un perodo superior a seis meses entre las infecciones. Se da tratamiento de rutina.
Pacientes con una infeccin a repeticin, definida como dos o ms infecciones en
un perodo igual o inferior a seis meses entre las infecciones. Se puede presentar una
de dos condiciones:
Reinfecciones, las cuales ocurren por agentes bacterianos diferentes. A estos
pacientes se les da un tratamiento de rutina y un tratamiento de profilaxis por un
periodo mnimo de seis meses. La mayora de los pacientes ( 80%) no presenta
problemas de fondo y aproximadamente un 20% de los pacientes tiene alteraciones
funcionales o anatmicas y usualmente son mujeres mayores de 45 aos o pacientes
diabticos.
Recurrencias (recadas), las cuales ocurren por el mismo agente bacteriano. A
estos pacientes se les da un tratamiento de rutina y un tratamiento de profilaxis por un
perodo mnimo de seis meses. La mayora de los pacientes ( 80%) presenta algn
problema de fondo y requieren de estudios adicionales y las patologas ms
frecuentemente encontradas en estos pacientes incluyen la presencia de clculos y de
reflujo vesicoureteral. Aproximadamente un 20% de los pacientes no presentan
problemas de fondo.

Muestras de Orina para Cultivo


Para muestras de orina recolectadas por miccin se debe realizar una cuantificacin
del nmero de microorganismos presentes por volumen de muestra mediante recuento
en medios slidos, determinando el nmero de unidades formadoras de colonias
(UFC) por mililitro de muestra. Esta metodologa se puede aplicar a muestras de orina
recolectadas por cateterizacin, pero no se debe aplicar a aquellas muestras de orina
recolectadas por puncin suprapbica por cuanto se evita la contaminacin uretral o
periuretral. En pacientes sintomticos (dolor al orinar, urgencia, frecuencia)
usualmente una nica muestra es usualmente suficiente y adecuada para el
diagnstico, siempre y cuando el paciente no haya sido sometido an a tratamientos
con antimicrobianos.
En pacientes asintomticos (bacteriuria asintomtica) se pueden necesitar hasta dos o
tres muestras recolectadas en tres das consecutivos para poder hacer el diagnstico
de laboratorio. En casos de que se sospeche de tuberculosis renal, se deben procesar
tres muestras recolectas en tres das consecutivos. Las muestras de orina deben
provenir de la primera miccin de la maana para asegurar un mejor diagnstico. La
solicitud de anlisis que acompaa la muestra clnica debe indicar si el paciente es
sintomtico o asintomtico, y no debe indicar simplemente infeccin urinaria o sepsis
urinaria. La orina puede ser un buen medio de cultivo para los diferentes
microorganismos, tanto los causantes de infecciones como los contaminantes
provenientes de la uretra o de la regin periuretral. Por lo tanto, las muestras de orina
deben ser refrigeradas a 4C hasta por 24 horas si no van a ser procesadas
inmediatamente en el laboratorio.

Recoleccin de Muestras de Orina


Recoleccin de muestras de orina por miccin (orina con tcnica orina a medio
chorro , orina de segundo chorro).
Se recomienda recolectar la primera orina de la maana siempre que sea posible,
por cuanto proporciona recuentos bacterianos ms altos luego de que las bacterias
han sido incubadas en la vejiga durante toda la noche.
No se debe forzar la recoleccin de la orina, por cuanto la muestra se puede diluir y
se pueden obtener recuentos falsamente ms bajos que 105 UFC/m1. Debido a que
es el mismo paciente quien recolecta su propia muestra de orina por miccin, es
fundamental instruir al paciente adecuadamente para la recoleccin de muestras de
orina por miccin, particularmente con respecto a la limpieza de los rganos genitales
externos femeninos. La explicacin para los pacientes debe ser clara y puede ser
verbal y/o escrita. A continuacin las instrucciones que se les deben dar a los
pacientes:

Instrucciones para la Recoleccin de Muestras de Orina con Tcnica para


Cultivo para Pacientes Femeninas
1. No recolecte la muestra de orina si usted est con la menstruacin. De ser as,
recolecte la muestra siete das despus de que la menstruacin le comenz.
2. Una vez que usted se ha lavado bien sus manos:
a. Ponga gaza impregnada con jabn lquido en una de sus manos. En su casa utilice
un paito o trapo limpio enjabonado.
b. Con la otra mano separe sus labios y proceda a limpiarse la vulva con la gaza o el
paito, de arriba hacia abajo y adentro.
c. Proceda a orinar directamente en un frasco estril, mientras que con una de sus
manos mantiene los labios separados. Evite que el frasco toque los labios.
d. Tape y rotule el frasco con su nombre y lleve la muestra de orina lo ms pronto
posible a la recepcin del laboratorio.

Recoleccin de la muestra de orina en paciente femenino

Instrucciones para la Recoleccin de Muestras de Orina con Tcnica para


Cultivo para Pacientes Masculinos
1. Retracte el prepucio (si al paciente no se le ha practicado la circuncisin).
2. Limpie el glande con agua y jabn. En su casa utilice un paito o trapo limpio
enjabonado. Enjuague con abundante agua.
3. Proceda a orinar descartando la primera porcin de la orina.
4. Sin detener la miccin recolecte la muestra de orina directamente en un frasco
estril. Evite tocar el frasco con el glande.

5. Tape y rotule el frasco con su nombre y lleve la muestra de orina lo ms pronto


posible a la recepcin del laboratorio. Si no es posible llevar la muestra de orina antes
de dos horas mantenga la muestra en refrigeracin a 4C.

Recoleccin de la muestra de orina en paciente masculino

Las muestras de orina deben ser siempre recolectadas en frascos estriles con tapa
de rosca, rotulados adecuadamente. Los recipientes conteniendo la muestra deben
estar acompaados de una solicitud de anlisis con la informacin completa cuando
llegan a la recepcin del laboratorio. Se recomienda recolectar una muestra por da
hasta un total de tres muestras en tres das consecutivos en pacientes asintomticos.

Recoleccin de Muestras de Orina por Puncin Suprapbica


La tcnica de recoleccin de muestras de orina por puncin (aspiracin) suprapbica
evita la contaminacin externa. Esta tcnica se recomienda para nios pequeos, para
pacientes con dao en la espina dorsal y para pacientes en los cuales la interpretacin
del resultado de una muestra de orina recolectada por miccin es difcil. Tambin es la

tcnica de escogencia para el procesamiento de muestras de orina por bacterias


anaerobias, las cuales pueden causar infrecuentemente infecciones de las vas
urinarias. La recoleccin por puncin suprapbica es una tcnica que puede ser
realizada nicamente por personal mdico. Para la recoleccin por puncin
suprapbica se debe inicialmente descontaminar y anestesiar la zona de la piel, para
luego introducir una aguja (22) en la vejiga llena en la lnea media entre la snfisis
pbica y el ombligo, aproximadamente 2 cm por encima de la snfisis pbica. Se debe
recolectar unos 20 ml de muestra de orina, la cual se transfiere a un recipiente estril
adecuado.

Muestra de Orina por Puncin Suprapbica

Recoleccin de Muestras de Orina por Cateterizacin


La muestra de escogencia es la orina recolectada del tubo del catter a travs del
puerto de recoleccin. Para la recoleccin, se debe limpiar el puerto de recoleccin
con un algodn impregnado con etanol al 70%, insertar posteriormente una aguja (21)
en el puerto y recolectar la orina con la jeringa. La muestra se transfiere luego a un
recipiente estril apropiado. La orina recolectada de las bolsas as como las puntas de
catter Foley son inapropiadas para el cultivo microbiolgico. Durante la recoleccin
de la muestra no se debe desconectar el tubo del catter de la bolsa de recoleccin de
orina.

Recomendaciones Adicionales para la Recoleccin de Muestras de Orina


No se deben aceptar las siguientes muestras para urocultivo:

Puntas de catter Foley.


Muestras de orina recolectadas por miccin para examen general de orina, las
cuales, generalmente, no se recolectan con la tcnica indicada anteriormente ni son
transportadas apropiadamente.
Sedimento urinario obtenido de una muestra de orina enviada al laboratorio para
examen general de orina.
Muestras de orina de 24 horas.
Muestras de orina recolectadas por miccin o por cateterizacin para bacterias
anaerobias.

Pruebas de Tamizaje
Se han diseado diversos mtodos rpidos de tamizaje, automatizados y no
automatizados, para determinar si la muestra de orina contiene bacterias y/o
leucocitos en cantidades significativas. Las pruebas de tamizaje pueden ser
necesarias en laboratorios clnicos en los cuales el nmero de muestras enviadas para
urocultivo es muy alto y se requiere algn elemento para discriminar las muestras que
pueden dar un cultivo positivo de las que no. Algunas de estas pruebas disponibles se
presentan a continuacin:

Tiras Reactivas

Mtodos Microscpicos
Se han descrito varios mtodos microscpicos que pueden ser tiles en el diagnstico
de las infecciones del tracto urinario, particularmente cuando existe la presencia de
bacteriuria superior a 105 UFC/ml.

Deteccin de Bacteriuria:
a. Tincin de Gram:
1. Colocar 10 l de la muestra de orina, bien mezclada pero sin centrifugar, sobre un
portaobjetos.
2. Permitir secar al aire sin esparcir sobre la superficie del portaobjetos.
3. Fijar la lmina al calor.
4. Teir por Gram.
5. Determinar y reportar el nmero de microorganismos por campo de inmersin.
6. La presencia de uno o ms microorganismos por campo de inmersin correlaciona
con un recuento de colonias de 105 UFC/ml.
7. La presencia de abundantes clulas escamosas y diferentes morfotipos microbianos
son indicativos de que la muestra ha sido probablemente contaminada durante la
recoleccin. En este caso, se debe solicitar una segunda muestra.

Tincin de Gram

b. Tincin con naranja de acridina:


1. Preparar un frotis como se indic para la tincin de Gram.
2. Realizar una tincin con naranja de acridina.
3. Determinar el nmero de microorganismos por campo de 400 utilizando un
microscopio de fluorescencia. En caso de una morfologa dudosa, se puede examinar
el frotis con una magnificacin de 1000.
4. La presencia de uno o ms microorganismos por campo de inmersin correlaciona
con un recuento de colonias de 105 UFC/ml.

Anlisis del Sedimento Urinario


El anlisis de sedimento urinario por la presencia de leucocitos polimorfonucleares es
vlido siempre y cuando el procedimiento se haya estandarizado con respecto al
volumen de orina centrifugada, la velocidad y el tiempo de centrifugacin y el volumen
en el cual se resuspende el sedimento.

Sedimento Urinario

Cultivo de Muestras de Orina


Cuando las muestras de orina son recolectadas por miccin puede ocurrir la
contaminacin de la muestra con bacterias habitantes de la uretra o de la regin
periuretral. Para descartar el aislamiento y la identificacin de una bacteria
contaminante como agente causal de una infeccin urinaria, se recomienda realizar un
recuento del nmero de UFC/ml de muestra de orina recolectada por miccin. Este
criterio puede ser aplicado tambin a las muestras de orina recolectadas por
cateterizacin pero, sin embargo, no se aplica cuando la muestra ha sido recolectada
por puncin suprapbica, por cuanto se evita la contaminacin uretral o periuretral.
Durante mucho tiempo se ha aceptado el criterio que si una persona sufre de una
infeccin urinaria o una bacteriuria asintomtica tendr un recuento de 10 5 UFC/ml
de un solo morfotipo colonial, dado que la mayora de las infecciones urinarias son
causadas por un solo tipo de microorganismo, mientras que una persona sin infeccin
urinaria tendr un recuento de <10 2 UFC/ml de dos o ms morfotipos bacterianos. Sin
embargo, si una persona con sintomatologa urinaria tiene un recuento de <10 5
UFC/ml, el microorganismo aislado puede tener importancia clnica y no puede ser
simplemente descartado por haber resultado de un recuento ms bajo.

Procedimiento Para el Cultivo de Orina


a. Recuento por dilucin en tubo. 1. Aadir 0.1 ml de la muestra de orina (bien
mezclada y sin centrifugar) a 9.9 ml de solucin salina estril 102.
2. Mezclar bien y transferir 0.1 ml de esta dilucin a cada una de las placas con medio
103.
3. Distribuir bien el inculo sobre la superficie del agar utilizando un asa estril o una
esptula de Drigalski.
4. Incubar las placas de los medios inoculados a 35 a 37C por 18-24 horas. Las
placas de agar sangre deben ser incubadas en jarra con candela.
5. Luego del periodo de incubacin determinar el nmero de colonias en la superficie
y el nmero de UFC/ml multiplicando el nmero de colonias por el factor de dilucin
103.

b. Recuento por inoculacin directa con asa calibrada.


1. Introducir verticalmente un asa calibrada de 0.01 ml (10 l) o de 0.001 ml (1 l)
estril justamente por debajo de la superficie de la muestra de orina (bien mezclada y
sin centrifugar).
2. Inocular por estra sobre toda la superficie del medio de cultivo.
3. Sin flamear nuevamente el asa, repetir el procedimiento para el segundo medio de
cultivo a utilizar.
4. Incubar las placas de los medios inoculados a 35 a 37C por 18-24 horas. Las
placas de agar sangre deben ser incubadas en jarra con candela.
5. Luego del perodo de incubacin determinar el nmero de colonias en la superficie
del medio de cultivo y el nmero de UFC/ml multiplicando el nmero de colonias por el
factor de dilucin (102 para un inculo de 0.01 ml [una colonia representa 100
UFC/ml], 103 para un inculo de 0,001 ml [una colonia representa 1,000 UFC/ml]).

c. Recomendaciones para la inoculacin e incubacin de las placas.


Se recomienda utilizar para cada una de las muestras de orina una placa de agar
sangre y una placa de agar MacConkey. El agar MacConkey puede ser
alternativamente sustituido por agar Eosina-Azul de Metileno.

No se deben sembrar medias placas No se deben inocular dos o ms muestras en


una misma placa por el riesgo de provocar una contaminacin cruzada de las
muestras, particularmente por el fenmeno de swarming provocado por especies de
Proteus.
La superficie del medio de cultivo debe estar libre de humedad evidente, por lo que
se recomienda incubar los medios a 35 a 37C por 1-2 horas antes de ser inoculados.
La incubacin de las placas a 35 a 37C en condiciones se realiza en condiciones
anaerbicas solamente cuando la muestra ha sido recolectada por puncin
suprapbica.

Examen de los Medios de Cultivo


1. Examinar las placas que han sido incubadas a 35 a 37C por 18-24 horas.
2. Si no se observa crecimiento y la muestra ha sido recolectada por miccin o por
cateterizacin, reportar:
-No se observa crecimiento > 103 UFC/ml. Si se inocularon las placas por dilucin en
tubo (103) o con asa calibrada de 1 l.
-No se observa crecimiento > 102 UFC/ml, si se inocularon las placas con asa
calibrada de 10 l.
3. Si no se observa crecimiento y la muestra fue recolectada por puncin suprapbica,
incubar las placas por 18-24 horas adicionales.

4. Si se observan colonias muy pequeas o diminutas, incubar las placas por 18-24
horas adicionales.
5. Si no se observa crecimiento y este resultado no correlaciona con lo observado en
la tincin de Gram de la muestra o con la condicin clnica del paciente, incubar las
placas por 18-24 horas adicionales.
6. Sin tampoco se observa crecimiento luego de una incubacin de 48 horas y este
resultado no correlaciona con lo observado en la tincin de Gram de la muestra o con
la condicin clnica del paciente, solicitar una muestra de orina recolectada por
puncin suprapbica para hacer un cultivo para bacterias anaerobias.
7. Si se observa crecimiento, examine los cultivos por nmero de colonias (UFC/ml) y
por los diferentes morfotipos coloniales.

Interpretacin de los Resultados


1. El criterio de un recuento de 105 UFC/ml se puede aplicar a la mayora de las
muestras de orina recolectadas por miccin y enviadas para cultivo
2. En el caso de recuentos inferiores a 10 5 UFC/ml se puede aplicar la siguiente gua
de anlisis de los resultados:

Cronograma de actividades
Da 1 - Entrega de muestras de orina para urocultivo:
Realizar tincin de Gram.
Realizar dilucin 1:1000 de la muestra de orina como se describe anteriormente.
Sembrar en agar sangre y MacConkey.
Incubar a 35 C por 24 horas.
Da 2 - Observar morfologa colonial:
Realizar la tincin de Gram de colonias.
Subcultivar en ATS y agar sangre.
Realizar caracterizacin bioqumica segn corresponda al grupo bacteriano.
Da 3 -Continuar pruebas bioqumicas:
Leer los resultados.
Mantener en ATS para realizar PSA.

Preguntas orientadas para evaluar el conocimiento adquirido


1. Cmo se confirm el diagnstico clnico en el paciente del caso clnico revisado?
2. Qu factores de riesgo present el paciente del caso clnico revisado?

Resumen de la prctica
El profesor junto con los alumnos correlacionar el caso clnico con el diagnstico de
laboratorio y elaborarn un esquema grfico.
Evaluacin de la actividad practica: 15% ponderacin del total de la unidad

Referencias Bibliogrficas

Bergeron MG. Tratamiento de la pielonefritis en adultos. Clin Med NA. 1995; 3: 613-42.
Ed. Interamericana.
Gmez J, Baos V., Prez Paredes M, et al. Pielonefritis agudas comunitarias:
Tratamiento, epidemiologa y factores pronsticos. Estudio prospectivo 1990-1995.
Rev. Esp. Quimioterapia. 1997;10(2):150-155
Jimnez Cruz JF. Infeccin urinaria. Monografas clnicas en Enfermedades
Infecciosas. 1991. Ed. Doyma.
Rodrguez-Juanic L., Schwedt E., Lombardi R., et al. Pautas teraputicas de las
infecciones urinarias del adulto. Rev. Med. Uruguay. 1989; 5: 115-122.

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