Esporulacin

http://diverge.hunter.cuny.edu/
~weigang/Lecture-syllabus.html

Esporulacin
Algunas especies de bacterias Gram
positivas (principalmente de los gneros
Bacillus, Clostridium, Sporosarcina y
Thermoactinomyces), disponen de una
serie de estrategias adaptativas
cuando se ven sometidas a privacin
de nutrientes en su medio ambiente.
Alcanzar un ambiente ms propicio:
sntesis de flagelos, quiomitaxis,
induccin de enzimas intracelulares y
extracelulares, produccin de
antibiticos.
Esporulacin (estado criptobitico).

Partes de la endospora
Protoplasto o ncleo, con la
membrana citoplsmica de la
espora (membrana esporal interna).
Pared de la espora (Germen de la
pared de la futura clula
vegetativa).
Corteza o crtex, rodeado
externamente de la membrana
esporal externa.
Cubiertas.
Exosporio (no universal, las esporas
de algunas especies carecen de l).

Nota: revisar notas de Microbiologa General

Propiedades biolgicas
de las endosporas
Hipometabolia. La ms baja tasa metablica.
Dormancia. Gran inercia a los sustratos
exgenos, la espora slo perder la dormancia
cuando se haya activado para la
germinacin.
Resistencia al calor. Es un subproducto de los
cambios que llevan a la deshidratacin como
medio de lograr la hipometabolia y la
dormancia.
Deshidratacin. Refrigencia al microscopio
ptico.
Resistencia a los rayos UV.
Resistencia a los agentes qumicos.

Esporulacin
Fase I. Formacin del filamento.
Fase II. Formacin del septo
acntrico.
Fase III. Formacin de la
forespora.
Fase IV. Formacin de la
corteza.
Fase V. Sntesis de las cubiertas.
Fase VI. Maduracin de la
preespora a endospora.
Fase VII. Liberacin de la
espora.

Nature Reviews Microbiology 1, 117-126 (November 2003)

Genes de la esporulacin
Participan ms de 113 genes en
el proceso de esporulacin.
Bacillus subtilis esporula cuando se
expresan los genes spo.
Los genes se clasifican de
acuerdo a la fase de esporulacin
(O, I, II, etc.) y se diferencian por
una letra.
-Mutantes de spo0A fallan en el
inicio de la esporulacin y no
procede la fase I.
-Mutantes de spoIIA completan la
fase II (septacin) pero fallan para
proceder a la fase III (formacin
de la doble membrana)

http://www.invitrogen.com/site/us/en/
home/References/Molecular-ProbesThe-Handbook/Technical-Notes-andProduct-Highlights/Fluorescent-Probesfor-Use-with-GFP.html

Genes de la esporulacin y
factores que regulan su expresin
Factores sigma. Factor de
inicio de la transcripcin en
procariontes que permite la
unin especfica de la ARN
polimerasa al promotor de
un gen.

H

E

F

G

K

Sistema de dos componentes

El estmulo es detectado
por un sensor a nivel de
membrana (o a nivel
citoplasmtico), el cual
transduce el estmulo hacia
una protena citoplsmica
produciendo un cambio
(P) que inicia una cascada
de seales, que provoca la
interaccin con secuencias
determinadas de ADN,
generando as la respuesta
adaptativa
correspondiente a la seal
ambiental.

Inicio de la esporulacin
Estmulos:
Carencia de nutrientes
Alta densidad celular

Nature Reviews Microbiology 1, 117-126 (November 2003)

Protenas involucradas
FtsZ. Polimeriza y forman una anillo en el centro de la clula durante
la divisin celular. Durante el estado II de la esporulacin las clulas
forman dos anillos en los polos para la formacin del septo
asimtrico.
Spo0J. Reconoce el origen de la replicacin OriC en el cromosoma
de la clula vegetativa y en la esporulacin se une a los polos de la
clula.
RacA. Remodeling and Anchorinin of Chromosome A. Participan en
la formacin del filamento durante la esporulacin.
DivIVA. Protena de anclaje en los polos de la bacteria, une directa o
indirectamente a Spo0J y a RacA. Se ha propuesto que une a
MinCD durante la divisin celular.
SpoIIIE. ADN translocasa de pendiente de ATP. Transloca la copia del
ADN en la forespora despus de la formacin del septo.

Segregacin del cromosoma

(fase I y II)

DivIVA. (OriC MinCD) Spo0J.

RacA.

SpoIIIE.

Nature Reviews Microbiology 1, 117-126 (November 2003)

F activa la presencia de
SpoIIE necesaria para la
trasferencia de ADN durante
la fase II.

Factor F

SpoIIAB es una protena

inestable y funciona como
anti-F.
spoIIAB est localizado en la
parte distal de OriC.
Durante el periodo
inmediato a la formacin del
septo solo bajas
concentraciones de SpoIIAB
pasan a la preespora lo que
permite la expresin de
spoIIE.
Nature Reviews Microbiology 1, 117-126 (November 2003)

Fases II y III. Envoltura de la

preespora

SpoIID, SpoIIM SpoIIP (tambin probablemente SpoIIQ) son

necesarias en las fases 2 y 3. SpoIID, SpoIIM y SpoIIP (E) conducen
la regresin del segundo tabique polar, as como para la
envoltura. SpoIIIE es implicado en el paso final de fusin de la
membrana. SpoIIB probablemente regulen este proceso.
Nature Reviews Microbiology 1, 117-126 (November 2003)

Factores G y K
La sntesis G es regulada por F, el
producto del gen spoIIIG es
inactivado por el anti- SpoIIAB (u
otro anti-) y activado por E. Esta
asociado con la activacin de
protenas de formacin de la
forespora.
La sntesis de SpoIVFB es estimulada
por G y tiene actividad de
proteasa y junto con otras SpoIV
activan de pro-K a K, que
estimula la transcripcin de genes
importantes para la sntesis de la
corteza y las cubiertas, as como
para la maduracin y liberacin de
la espora.

Nature Reviews Microbiology 3, 969-978 (December 2005)

The sporulation cascade in

Bacillus subtilis and selected
clostridia.

Partes de la endospora

Pared
Corteza
Protoplasto o ncleo

Cubiertas

Protoplasto
(ncleo de la endospora)

DPA

DPC

Sus componentes estn inmovilizados en una matriz de quelatos

de cido dipicolnico (DPA) con iones Ca2+ (dipicolinato de
calcio, DPC), que llega a representar el 15% del peso.

Protoplasto
(ncleo de la endospora)
Citoplasma muy deshidratado (10 - 30%)
Contiene el cromosoma, pocos ribosomas,
ARNt, ARN polimerasa, mono y di nucletidos
pero no tri nucletidos (no ATP).
Carece de componentes inestables:
~No ARNm
~No enzimas biosintticas
~No aminocidos ni bases nitrogenadas
~No cofactores reducidos (NADH, CoA, etc.)
Espora de Bacillus cereus
http://www.shef.ac.uk/mbb/staff/moir-a

Protoplasto
(ncleo de la endospora)
Gran cantidad de pequeas
protenas especiales, las pequeas,
cidas, solubles (SASP) que
mantienen le pH ms bajo que en
la clula vegetativa.
~Durante la germinacin se
usarn como fuente de amino
cidos.
~Acomplejan el ADN: protegen
de las radiaciones UV.
Fuente de energa:
3-fosfogliceratoPEP

Membrana interna de la espora.

Rodea al protoplasto, membrana citoplsmica que carece de
fluidez (estructura policristalina).

http://sitemaker.umich.edu/hanna_lab/home. A Bacillus anthracis endospore (False colored

transmission electron micrograph, 92,000X, as shown on the cover of the Jan. 1, 2004 issue of the
Journal of Bacteriology)

Pared de la endospora
A base de un Peptidoglucano similar al de la clula vegetativa.
Estructura muy delgada.
Constituye lo que ser la pared de la futura clula vegetativa.
Origen: se sintetiza a partir de la preespora

Pared

Corteza o crtex

Crtex

Al microscopio electrnico: gruesa, transparente a electrones,

lminas concntricas, formado de un Peptidoglucano especial:
~ 30% del NAM con tetrapptidos, pero con bajo grado de
entrecruzamiento
~ 15% del NAM tiene solo L-ala
~ 55% lactama del cido murmico

Corteza o crtex
Origen: a partir de la clula
madre.
Tiene un bajo grado de
entrecruzamiento:
~ Estructura ms laxa, floja y
flexible que el PG normal es
capaz de expandirse o
contraerse.
~ Rpida autolsis durante la
germinacin.
La lactama del murmico
presenta gran resistencia a la
lisozima.

Cubiertas

Aspecto muy
voluminoso, distinto
segn especies.
Partes densas a los
electrones.
Formada de una o ms
protenas de tipo
queratina, ricas en
cistena y amino cidos
hidrfobos.

Bacterial endospores. Panel A shows endospores from B. subtilis

one of which is still retained within the rod shaped 'mother cell'. In
B. subtilis, spores are approximately 1.2 m in length and are
ellipsoidal. Released spores have a clear protective shell known
as the spore coat and is comprised of as many as 25 different
protomeric components assembled into discrete layers. Panel B
shows a typical SDS-PAGE (12.5%) fractionation of solubilised
spore coat proteins revealing predominant species. Ricca and
Cutting Journal of Nanobiotechnology 2003
1:6 doi:10.1186/1477-3155-1-6

Estructura insoluble e
impermeable que
impide la entrada de
numerosos agentes
qumicos agresivos,
incluyendo txicos.

Exosporio
Estructura membranosa
transparente, a modo de
saco delgado y flojo a
base de protenas,
polisacridos complejos y
lpidos
Muy resistente a enzimas
proteolticas

Esporulacin
Estmulo desencadenante de la
esporulacin: estado de inanicin
(carencia de nutrientes)
Dura 7-8 horas en Bacillus subtilis o en
B. megaterium.
Las fases se nombran con un nmero
romano (I, II,....VII). Se suele indicar los
lmites de tiempo en los que
transcurre la fase (ej: t2-t3 significa
que la fase transcurre entre la 2 y la
3 hora)

Fase I (t0-t1)
Los dos cromosomas se condensan
formando un filamento.
Se inician dos tabiques, cada uno
cerca de un polo (espculas de PC
hacia el interior).
Se degradan protenas viejas y los
aminocios se emplean en fabricar
protenas especficas de la
esporulacin.
Se sintetizan y liberan al medio:
antibiticos y exoenzimas
(proteasas, amilasas, ribonucleasas,
etc.).

Fase II (t1-t2)

Se termina el septo acntrico en uno de los

polos (el otro septo no se completa, aborta).
Cada nucleoide queda en un:
~Compartimiento pequeo, la prespora.
~Compartimiento grande la clula
madre.
Sigue sntesis de antibiticos y exoenzimas
(proteasas, amilasas, ribonucleasas, etc.).

Fase III (t2-t3)

Formacin del protoplasto de la
espora debido a:
~Degradacin selectiva del PG
del septo
~La membrana citoplsmica
de la clula madre va
avanzando hacia el polo,
envolviendo a la prespora
Resultado: prespora posee dos
membranas, con polaridad
opuesta.
La sntesis de protenas sigue en la
clula madre, pero se detiene en
la prespora

Fase IV (t3-t4)
Formacin de la corteza:
deposicin de PG de la clula
madre entre las dos membranas
de la prespora. Deposicin del
PG de la pared, procedente de
la prespora
La espora puede verse ya
refrctil en fresco
Comienza sntesis de DPA y
acumulacin de Ca2+
Comienza la sntesis del
exosporio

Fase V (t4-t5.5)
Deposicin de materiales de las
cubiertas por fuera de la membrana
externa de la espora.
Contina la acumulacin de DPA,
que secuestra iones Ca2+ para formar
el DPC en el protoplasto.

Fase VI (t5.5-t7)
Maduracin de prespora a endospora.
Maduracin de la corteza (PG especial, ms
laxo, con pocos entrecruzamientos).
Maduracin de las
cubiertas.
Citoplasma se hace
ms homogneo y
denso a los
electrones.
Resistencia al calor
y al cloroformo.
Resistencia a las
radiaciones UV.
Resistencia a la
lisozima.

Fase VII (t7-t8)

Autolsis de la clula madre y liberacin de la espora.
El exosporio pierde agua y se pega a las cubiertas.

Ciclo de vida en Bacillus subtilis

Nature Reviews Microbiology 3, 214-224 (March 2005)