MEDIOS DE CULTIVOS

UNIVERSIDAD NACIONAL DE MADAGASKAR

MEDIOS DE CULTIVOS

CURSO: MICROBIOLOGA

LABORATORIO MICROBIOLOGIA

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1. INTRODUCCIN
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el
crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa depender de la
especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varan
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

2. OBJETIVOS
Conocer los diferentes medios de cultivo.
Saber preparar medios de cultivos diversos.

3. MARCO TERICO
MEDIO DE CULTIVO
Un medio de cultivo consta de un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes
necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el
crecimiento de virus, microorganismos, clulas, tejidos vegetales o incluso
pequeas plantas. Segn lo que se quiera hacer crecer, el medio requerir unas u
otras condiciones. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino
o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado
slido, semislido o lquido. El objetivo ltimo del cultivo es variado: antibiograma,
identificacin, multiplicacin. Uno de los sistemas ms importantes para la
identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el
que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presin de oxgenos adecuados, as como un grado correcto de acidez o
alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de

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crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
Los virus, por ejemplo, son obligados parsitos intracelulares, por lo que necesitan
un medio que contenga clulas vivas.
CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo pueden clasificarse segn diferentes criterios, pero los ms
importantes son aquellos que se basan en:
A. SEGN SU ESTADO FSICO (CONSISTENCIA).
1) Medios lquidos: Son los que se presentan en este estado, denominndose
por esta razn caldos. El medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo,
compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza
fundamentalmente cuando se pretende la obtencin de una suspensin bacteriana
de una determinada concentracin.
2) Medios slidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un
agente gelificante. Los ms utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina: Es una
protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que es
hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su
punto de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede
utilizarse para cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento para
muchos microorganismos. Agar-agar: Es un polmero de azcares obtenido de
algas marinas. Se trata de una molcula insoluble enagua pero soluble en agua
caliente; una solucin al 1,5% p/v forma un gel firme entre 32 y 39C y no se funde
por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica una vez fundido alrededor de los
45C. Tiene el inconveniente de que introduce compuestos orgnicos indefinidos
que pueden falsear los resultados de las necesidades nutritivas de un
microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacridos, Araki, en 1937,
los dividi en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre de cido pirvico, yagaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporcin de
agarosa a agaropectina en el agar vara segn el alga de origen. El agar puede
utilizarse para diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar comercial
para la industria alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa,
utilizada para electroforesis en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que
se produce, se utiliza en trabajo microbiolgico, por lo que es importante la
ausencia de metales txicos.
3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a
stos un agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios
slidos. Uno de sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias.
B. SEGN SU ORIGEN:

a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen

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animal
o
vegetal
como
ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce
exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida
cuali
y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento
bajo
una
forma
de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
MEDIOS DE CULTIVO COMUNES.
Son los ms corrientemente utilizados en un laboratorio de Microbiologa.
Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que no
presentan exigencias particulares. No es diferencial.
Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la investigacin
de los diversos tipos de hemlisis (, o gamma). Se utiliza para el crecimiento de
estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se puede utilizar el agar
nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado enriquecido con otras
sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La adicin de sangre a un medio
de cultivo no proporciona las sustancias que estn en el interior de los hemates,
pero s puede aadir factores inhibidores del crecimiento bacteriano presentes en
el suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre
para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras, que
son termolbiles. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre
de carnero diluida al 5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre
de otras especies (caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones
hemolticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen
sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados grmenes. Agar chocolate:
El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio
base. Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio
un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El
agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias
(gonococos y meningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos
otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en
uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de
crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma
diferente segn las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen ms de
una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas
extraordinarias. Por adicin de uno o varios antibiticos pueden lograrse medios
inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Un
ejemplo clsico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y
que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha aadido una
mezcla de tres antibiticos especficos que impedirn el crecimiento del resto de la
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flora acompaante. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e
identificacin de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los grmenes Gram
positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su
contenido en sales biliares. En su composicin lleva un azcar (lactosa) y un
indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial. Los grmenes
que fermenten la lactosa producen una acidificacin del medio que hacen
aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Las colonias lactosa
negativas sern incoloras, apareciendo del mismo color que el medio subyacente
(naranja).

Ejemplos de medios de cultivo

El agar de soya trptico (TSA por sus siglas en ingls),
utiliza nutrientes provenientes de la planta de soya, es
un ejemplo de un medio de cultivo slido complejo.
Una versin lquida es caldo de soja trptico. Estos
medios permiten el crecimiento de una amplia
variedad de microbios.
El agar selectivo es el agar MacConkey, el cual
contiene lactosa y permite la multiplicacin de los
organismos
que
suelen
invadir
el
tracto
gastrointestinal. Algunas veces un medio complejo
puede, mezclado con una sustancia particular, actuar
como un medio selectivo.
El agar TSA con sangre de oveja permite al microbilogo identificar la
presencia de bacterias patgenas que descomponen la sangre.

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4. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
4.1.

MATERIALES:

o Mechero de bunsen
o Sangre
o Botella con agar enriquecido
o Jeringa

5. PROCEDIMIENTO:
Para el agar sangre:
o Tener la botella con agar
enriquecido licuado y a una
temperatura de 45C a 50C
o Sacar de 5 a 8ml de sangre de
alguien
o Dispensar la sangre la botellita
de agar enriquecido licuado a
45C.

o Mover constantemente hasta

que se forme el agar sangre y
dispensar en placas,

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Para el agar chocolate:

o Tenemos el agar sangre en una
botellita calentndose en el
mechero movindolo para que no
se pegue.

o Una vez que adquiera un color

marrn chocolate, dispensarlo en
las placas.

6. RESULTADOS:
Pudimos obtener el agar sangre en varias placas Petri.
No se pudo obtener el agar chocolate porque, al calentarse acercndolo
demasiado el agar sangre se revent la botellita.

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7. CUESTIONARIO:
7.1.

SEALE LA COMPOSICION DE CLADO NUTRITIVO Y AGAR

SANGRE

7.1.1. CALDO NUTRITIVO: Medio de cultivo utilizado para propsitos

generales, para el desarrollo de microorganismos con escasos
requerimientos nutricionales. Su uso est descripto en muchos
procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales
de
importancia
sanitaria.
Fundamento:
Medio no selectivo, contiene pluripeptona y extracto de carne que
constituyen la fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el
adecuado desarrollo bacteriano. Puede ser utilizado adems, como
preenriquecimiento en la bsqueda de Salmonella spp. a partir de
alimentos, ya que permite recuperar clulas daadas, diluir metabolitos
txicos y sustancias inhibitorias.

7.1.2. SANGRE AGAR: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de

numerosos microorganismos. Al ser suplementado con sangre ovina,
permite el crecimiento de microorganismos nutricionalmente exigentes y
la clara visualizacin de reacciones de hemlisis.

7.2.

SEALE CINCO MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS Y SU

IMPORTANCIA

Baird Parker Medio Base: Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y

diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa positiva en
alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Manitol Salado Agar: Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el
aislamiento y diferenciacin de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento
de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos
cosmticos
y
otros
materiales
de
importancia
sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de
Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.),
aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Sabouraud Glucosado Agar: Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y
conservacin de hongos patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de
levaduras.
Selenito Cistina Caldo: Medio utilizado para el enriquecimiento selectivo de
Salmonella spp. A partir de muestras de alimentos, productos lcteos y otros
materiales
de
importancia
sanitaria.
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Mac Conkey Agar: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram
negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite
diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y
alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el
mismo.
7.3.

ESQUEMATICE LO REALIZADO Y PRECAUCIONES QUE SE DEBE

TENER EN LA PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO: PESADO,
PREPARADO Y AUTOCLAVADO.

o Al calentar el agar sangre tenemos que mover constante mente para que no
se pegue y para que no se reviente la botella y surja un accidente de
laboratorio que nos pondra en riesgo.
o Antes de pesar hay que tener esterilizada la esptula, adems tambin la
Placa Petri.
o Antes del autoclavado se tiene que envolver todo segn lo que hemos
aprendido con papel craft. Tener en cuenta que en el autoclave solo entra
los medios de cultivo, materiales platico y jebe.
8. BILIOGRAFA

Tortora, Funke & Case. Microbiologa. (9na edicin). (2007) Editorial

Mdica Panamericana, Madrid, Espaa.

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