FACULTAD

DE
INGENIERIA

Informe de Prctica de Laboratorio

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
DE ALIMENTOS

INVESTIGACION Y RECUENTO DE ESPORAS DE CLOSTRIDIUM

SULFITO REDUCTOR (ECSR)

Natalia Reyes Lpez ,Olga Alejandra Valencia Suarez., juan David gomez
Fecha de presentacin 16/10/2014
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RESUMEN

Clostridium es un gnero de bacterias anaerobias, bacilos gram positivas, parsitas

y saprfitas algunas de ellas, que esporulan, y son mviles, en general por intermedio
de flagelos peritricos; es un microorganismo que se observa solo o mximo en cadenas
cortas. Son mviles por flagelos peritrcos -con la excepcin de C. perfringens. Algunas
especies producen cpsula y forman esporas de aspectos esfricos u ovalados, situados
en el centro del bacilo o en un extremo subterminal y resistentes al calor. A pesar de ser
bacterias anaerobias obligadas, no todos tienen la misma sensibilidad al oxgeno. La
metodologa de estudio se har por recuento en tubo, de esporas de Clostridium sulfito
reductor. Dado que El fundamento del mtodo se basa en las caractersticas
bioqumicas de este microorganismo. El medio contiene sulfitos y sales de hierro, el
Clostridium perfringens es capaz de reducir los sulfitos a sulfuro y en presencia de
hierro se forma Sulfuro ferroso. Se esperaba obtener colonias de color negro en el
medio analizado. Al no presentarse aparicin de este tipo de colonias se puede deducir
que la muestra no estaba suficientemente contaminada o que las condiciones de
anaerobiosis necesarias para el crecimiento de este tipo de microorganismo no fueron
exitosas. Tras el periodo de incubacin y posterior lectura se determino ausencia de
esporas de clostridium sulfito reductor en 25 gr de leche en polvo analizada.

Palabras Clave: clostridium, recuento, anaerobio, saprofitas,

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1. INTRODUCCIN
El grupo bacterianno de los sulfito reductores
esta integrado por grmenes que pertenecen al
generoclostridium que tienen en comn reducir el
sulfito a sulfuro.

Se suelen usar para apreciar la calidad higienica

del agua y productos animales o de origen
animal. Su numero es escaso en productos
frescos. La capacidad de esporular de los
microorganismos pertenecientes a este grupo les
confiere gran resistencia.
Los Clostridium son organismos que se observan
solo, en parejas o a lo mximo en cadenas cortas.
1

Son mviles por flagelos peritrcos -con la

excepcin de C. perfringens. Algunas especies
producen cpsula y forman esporas de aspectos
esfricos u ovalados, situados en el centro del
bacilo o en un extremo subterminal y resistentes
al calor. A pesar de ser bacterias anaerobias
obligadas, no todos tienen la misma sensibilidad
al oxgeno. C. tetani, por ejemplo, requiere total
anaerobiosis y C. perfringes tiende a ser menos
exigente. [1]

Inicialmente se prepararon las diluciones a

partir de 25 gramos de la muestra seleccionada
en este caso leche en polvo.

Dentro de este grupo existen dos especies

importantesen la industria alimentaria por su
capacidad de producir toxi-infecciones: Cl.
Perfringensy
lC.
Botulinum.La
intoxicacinalimentaria
causada
por
Cl.perfringenspuede ocurrir cuando los alimentos
como la carne se cocinan sin el mantenimiento
decalentamientoo la refrigeracin adecuados
antes de servir. Los clostridios pueden fermentar
una variedad de azcares; muchos digieren las
protenas.
Sus esporas sobreviven en el suelo, en sedimentos
yen reas sujetas a contaminacin fecal humana
oanimal, por esto son excepcionalmente
resistentes acondiciones desfavorables en medios
acuticos,incluidas la irradiacin UV, los extremos
de T y Ph, yprocesos de desinfeccin, como la
coloracin. Lasesporas son muy pequeas por lo
que pueden sertiles como indicadores de la
eficacia de los procesosde filtracin.son bacilos
grandes, cortos y gruesos. Son bacilos gram - ,con
forma de bastn.[2]
El propsito principal es demostrar la tecnica
para determinar el nmero de esporas de
Clostridiumsulfito reductora partir de diferentes
alimentos de origen animal por mtodos de
siembraprofundaen tubo.
2. MATERIALES Y MTODOS
Recuento en tubo de esporas de Clostridium
sulfito reductor.

Seguidamente se procedio a Calentar 5 ml de

cada una de las diluciones en tubos de ensayoen
un
bao serolgico a 80C durante 5minutos. Esto
se realiza con el fin de obtener nicamente las
formas esporuladas de clostridium sulfito
reductores aprovechando su termo resistencia,
destruyendo las formas vegetativas.
2

Trascurrido el tiempo de bao maria se

sometieron las muestras a un bao de hielo .a
partir de las diluciones decimales, por duplicado
se sembraron 1 ml de cada dilucin , con pipeta
esteril en tubos con SPS fundido. Para la siembra
se introdujo la pipeta con cada dilucin hasta el
fondo del agar, seguidamente se fue depositando
el inoculo de abajo hacia arriba, seguidamente se
dej solidificar.

Con la finalidad de crear un ambiente de

anaerobiosis de Adiciono una segunda capa de
agar fundido a 45C, posteriormente se
dejosolidifcar los medios.

suficientemente contaminada o que las

condiciones de anaerobiosis necesarias para el
crecimiento de este tipo de microorganismo no
fueron exitosas.
Casi cualquier tipo de alimento que no es muy
cido (con un pH superior a 4.6) puede apoyar el
crecimiento y la produccin de la toxina de C.
botulinum La presencia de clostridium en
alimentos como la leche en polvo tras su
consumo Visin doble; dificultad en tragar;
dificultad con el habla y parlisis respiratoria
entre otros.

Finalmente se procedio a incubar a 46C por 2448horas.

3. RESULTADOS
Tras el periodo de incubacin y posterior lectura
se determino ausencia de esporas de clostridium
sulfito reductor en 25 gr de leche en polvo
analizada.
Dado que El fundamento del mtodo se basa en
las
caractersticas bioqumicas
de
este
microorganismo. El medio contiene sulfitos y
sales de Fe, el Clostridium perfringenses capaz de
reducir los sulfitos a sulfuro y en presencia de Fe
se forma Sulfuro ferroso. Se esperaba obtener
colonias de color negro en el medio analizado. Al
no presentarse aparicin de este tipo de colonias
se puede deducir que la muestra no estaba

4. CONCLUSION
El acido lctico que viene de la descomposicin
del azcar de la leche (lactosa) es mas debil
cuando la leche es en polvo con un pH de 6,8 en
promedio, por el tratamiento q tiene esta, por
ello su pH es ms alto, pues esta es ligeramente
menos acida que en solucin liquida (pH: 6,5 en
promedio). Indistintivamente el pH de la leche ya
sea liquida o en polvo se encuentra en el rango
(superior a 4,6) que apoya el crecimiento y
proliferacin de clostridium botulinum pero en la
leche en polvo analizada no se encontr un
control positivo de contaminacin por este tipo
de microorganismos asi su pH sea adecuado para
el crecimiento del mismo.
No se observo presencia de esporas de
clostridium sulfito reductor, ya que no hubo
crecimiento de las colonias caractersticas, se
puede deducir que la muestra no estaba
suficientemente contaminada o que las
condiciones de anaerobiosis necesarias para el
crecimiento de este tipo de microorganismo no
fueron exitosas. Tras el periodo de incubacin y
posterior lectura se determino ausencia de
esporas de clostridium sulfito reductor en 25 gr
de leche en polvo analizada.
Las toxinas de clostridium se transmiten a las
personas atraves del consumo de alimentos
4

contaminados por falta de higiene e inadecuada

manipulacin de los alimentos; mtodos de
contaminacin: por contacto con materia fecal,
contaminacin cruzada (despus de los
tratamientos de esterilizacin), por medio de los
manipuladores (portadores) o por medio del agua
contaminada por este microorganismo.
La leche y productos lcteos en este caso es un
producto de bajo riesgo de contaminacin por
toxina de clostridium, ya que pueden estar
contaminados en menor medida en comparacin
con productos alto en protena como carnes, aves
rellenas, con salsas o preparadas en grandes
cantidades con antelacin.

BIBLIOGRAFA
Textos

[1]http://books.google.com.co/books?id=9EIfkks
8uxMC&pg=PA74&lpg=PA74&dq=CLOSTRIDIUM
+SULFITO+REDUCTOR&source=bl&ots=RI7QX_ek
ah&sig=WoqurlnsdQuDQCbviitbCAlYFhs&hl=es&
sa=X&ei=8GdeVNC8HvjCsAS134KwDg&ved=0CCs
Q6AEwAg#v=onepage&q=CLOSTRIDIUM%20SUL
FITO%20REDUCTOR&f=false

[2]http://es.slideshare.net/lauravelezc10/clostri
dium-perfringens-22307979?related=4
http://es.slideshare.net/lauravelezc10/clostridiu
m-perfringens-22307979?related=4