FACULTAD

DE
INGENIERIA

Informe de Prctica de Laboratorio

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
DE ALIMENTOS

RECUENTO E IDENTIFICACIN DE STAPHYLOCOCCUS

COAGULASA POSITIVA

Juan David Gmez

Fecha de presentacin 16/10/2014
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RESUMEN

La familia Micrococcaceae comprende cocos Gram positivos, no exigentes, catalasa

positivos, con agrupacin en racimos, aerobios o anaerobios facultativos.
De los tres gneros que la integran (Micrococcus, Planococcus , Staphylococcus),
Staphylococcus es el nico de importancia mdica; Este se caracteriza por ser un
microorganismo aerobio facultativo - anaerobio facultativo, capaz de fermentar la glucosa en
anaerobiosis; dentro del gnero Staphylococcus se conocen ms de 20 especies, de las cuales
S. aureus es la ms importante pero no la nica patgena. La infeccin estafilocccica es
conocida desde la antigedad y en la actualidad la especie tipo S. aureus tiene una alta
incidencia como agente de infeccin , esta especie capaz de causar cuadros txicos por
produccin de potentes exotoxinas que generan casos de intoxicacin alimentaria, sndrome
de piel escaldada y shock txico entre otras adems es de resaltar la gran capacidad de
adaptacin y supervivencia de esta bacteria, su incremento en la resistencia contra
antimicrobianos en especial en el medio industrial, hospitalario y su facilidad para formar
biofilms. El estudio se va a realizar por la metodologa de recuento en placa en
Agar
Baird Parker este es un medio parcialmente selectivo que utiliza la capacidad de los
estafilococos de reducir el telurito a telurio y detectar la lecitinasa a partir de la lecitina
del huevo. El Agar Baird-Parker se utiliza ampliamente y se incluye en numerosos
procedimientos estndar para el anlisis de alimentos, cosmticos o agua de piscinas
con el fin de detectar la presencia de Staphylococcus aureus, posteriormente
determinando con pruebas bioqumicas la presencia de coagulasa positiva.
Palabras Clave: Staphylococcus, anaerobio, biofilm , coagulasa, exotoxinas
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1. INTRODUCCIN
El Staphylococcus aureus de tipo (coagulasa
positiva) es un coco Gram positivo, anaerobio
facultativo que produce de coagulasa y catalasa
se distribuye ampliamente llegando al punto que
uno de cada tres es portador de esta bacteria
naturalmente vive en la piel, fosas nasales y
garganta de animales y seres humanos.

Este tipo puede producir enfermedades en la piel

y mucosas adems de ser el causante muchos
brotes por intoxicacin alimentaria los cuales
afectan directamente al aparato gastrointestinal
produciendo
la
famosa
"intoxicacin
estafiloccica por alimentos" Los sntomas de
esta intoxicacin son nuseas, vmitos,
calambres abdominales, ocasionalmente diarrea,
malestar general y dolor de cabeza los cuales se

puede presentar pasados 30 minutos a las 8

horas despus de haber consumido el alimento,
aunque el periodo de incubacin es de 2 a 4 horas.
Esta intoxicacin no es considerada como una
enfermedad grave; sin embargo, se han
presentado muchos casos de muertes y brotes
principalmente en ancianos y nios, ya que su
nivel de afectacin es directamente proporcional
a la cantidad de enterotoxina ingerida
Del punto de vista de sus factores de virulencia, tanto
bioqumicos como estructurales, se lo puede definir
como una especie de patgeno perfecto el cual esta
magnficamente equipado para invadir, diseminarse
y causar enfermedad grave pero este normalmente
convive en armona con el husped humano o
animal, formando parte de su flora y habitad sin
causar dao alguno, inclusive en algunos casos se
encuentran personas sanas las cuales estn
fuertemente infectadas o colonizadas definindose
como portadores y pudiendo en ocasiones ser
reservorio y fuente de infeccin.
2. MATERIALES Y MTODOS
Recuento e identificacin de Staphylococcus
coagulasa positiva

Seguidamente se procedi a homogenizar en la

licuadora los 10,52 gramos de la muestra con 90
ml de Agua peptonada 0.1% y citrato de sodio
2% (10^-1), posterior mente tomaron
volmenes de 1 ml consecutivamente para
preparar las soluciones de concentracin ( 10^-2
; 10^-3)

Inicialmente se prepararon las diluciones a partir

de 10,52 gramos de la muestra seleccionada en
nuestro caso salchichas.

Luego de tener la soluciones de concentracin

conocida se seleccionan dos (10^-2, 10^-3), se
2

toma 0,1 ml de cada una de estas diluciones y se

pasa a realizar la siembra de cada una de estas y
por duplicado en cajas de petri con Agar Baird
Baird-Parker Agar; El medio no debe utilizarse
para el aislamiento de estafilococos diferentes de
S. aureus.

Se continua a cerrar las cajas y llevarlas a una

incubadora que tenga 37 grados centgrados
durante 24-48 horas para tener un buen
crecimiento de este microorganismo.

24 horas despues se sacan las cajas de la

incubadora para obsevar el crecimiento de
staphylococcus aureus

caracterizacin bioqumica con la prueba de la

coagulasa.
Prueba para determinar produccin de la
enzima coagulasa
Se pasan las colonias elegidas a tubos con caldo
Brain-Heart Infusion (BHI) y se posteriormente
se llevan a incubar de 20-24 horas a 35 grados
centigrados.

Se continua a tomar las cajas que posean entre

15-150 colonias y observar que se genera lipolisis
y protelisis formando colonias de color negro
con un halo blanco y estrecho.

Luego de las 24 horas en un tubo vacio verter

0,3 mL de plasma de conejo EDTA reconstituido
y aadir 0,1 mL del cultivo obtenido en caldo
BHI y llevar a incubar a 35 grados centgrados
durante 6 horas , revisando cada hora cmo va
la formacin del coagulo; si el coagulo es bien
diferenciado se determina coagulasa positiva-

Con la ayuda del cuadro 1 se selecciona el

numero de colonias tpicas de Staphylococcus
aureus en el Agar BP realizarles a cada una su
4

Se obtuvo el siguiente. recuento:

10-1

A
NN

B
NN

Diluciones
10-1 A
10-1 B
10-2 A
10-2 B

DILUCIONES
10-2
A
B
302
278

A
28

B
26

# de colonias Promedio
Incontables
Incont.
Incontables
302
290
278

10-3 A

28

-3

26

10 B
10-2
10-3

10-3

290
27

27

10,74

El resultado es mayor de 2. Entonces tomamos la

menor dilucin como el valor para el conteo de
colonias. Entonces, el resultado para el conteo de
colonias ser: 2,7 x 10-4 ufc/gr

3. RESULTADOS
Tras el periodo de incubacin y posterior lectura
se determino presencia de Staphylococcus
coagulasa positiva tipo 2.

Dado que El fundamento del mtodo se basa en

las caractersticas bioqumicas de este
microorganismo. Este medio contiene las fuentes
de carbono y nitrgeno necesarias para el
crecimiento. La glicina, el cloruro de litio y el
telurito potsico actan como agentes selectivos.
La yema de huevo constituye el sustrato para
determinar la produccin de lecitinasa y,
adems, la actividad de lipasa. Los estafilococos
producen colonias de color de gris oscuro a
negro debido a la reduccin del telurito; los
estafilococos
que
producen
lecitinasa
descomponen la yema de huevo y crean zonas
transparentes alrededor de las colonias
correspondientes. Es posible que se forme una
zona de precipitacin debido a la actividad de
lipasa. El medio no debe utilizarse para el
aislamiento de estafilococos diferentes de S.
aureus.

4. CONCLUSION
En 10,52 gramos de salchichas que se analizaron
se encontr presencia de Staphylococcus aureus
de tipo coagulasa positiva, este es el causante la
enfermedad estafilococica la cual presenta
sntomas gastrointestinales este microorganismo
se encuentra en la muestra de salchichas y puede
venir contaminada directamente en cualquier
parte del proceso de manufactura o posterior a
este; ya sea por contaminacin cruzada o por
contaminacin directa los manipuladores.
En las explotaciones y sacrificios es importante
tener buenas prcticas agronmicas adems de
una buenas prcticas de Higiene para reducir el
nmero de Staphylococcus.
Durante la transformacin del alimentos tambin
debe tenerse cuidado de no usar materias primas
que puedan estar contaminadas ya que posterior
al tratamiento trmico las enterotoxinas pueden
estar presentes dentro del alimento aun ya que
son de difcil eliminacin.

BIBLIOGRAFA
Pginas web

[1]
http://www.bd.com/europe/regulatory/assets/
ifu/hb/ce/pa/es-pa-255084.pdf
[2]
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tes
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[3]
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Limites
permisibles_18844.pdf
[4]
http://www.colpos.mx/bancodenormas/nmexicanas/
NMX-F-065-1984.PDF
[5]
http://www.ciencias.unal.edu.co/unciencias/datafile/farmacia/revista/V33N1P59-69.pdf

Se debe tener una buena cadena de frio para el

transporte recepcin y almacenamiento post y
pre tratamiento del producto tanto al comienzo
como al final de la produccin de este.
En el hogar la mayora de brotes por intoxicacin
alimentaria por Staphylococcus se dan por mala
coccin del alimento < 45 C o por una mala
refrigeracin de estos >10C, por lo que se deben
tener buenas prcticas de higiene en la
preparacin y conservacin de los alimentos.