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Estudios
Genetista
Diana Susana Martinez Corcino
con
cidos
nuclicos
(Brown
1998;
Farah
2000),
tamao)
siguientes caractersticas:
El tamao de la molcula o masa.
molecular
23/09/2014
1. Preparacin del
2. Aplicacin
gel
Agarose / Poliacrilamida
de las muestras
3. Electroforesis
4. Tincin
y visualizacin de la muestra
Poliacrilamida
Alta resolucin
NO para fragmentos grandes
Difcil de armar
Tipos:
1. Denaturante: con la presencia de
urea, se separa y purifica cadenas
simples
2. No denaturante: separa y purifica
cadenas dobles sin la presencia de
urea
Agarosa
Baja resolucin (poros grandes)
SI fragmentos grandes
Fcil de armar
Si el % es muy bajo el gel es frgil
Buffer de corrida: TAE (acetato)
o TBE (borato)
Muestra: buffer (SDS, bMercaptoetanol o DTT, azul de
bromofenol, xilencianol)
23/09/2014
Buffer de corrida
Glicerol o ficol o sacarosa
Densidad a la muestra
la [ ] de iones,
la resolucin
Loading Buffer
Colorantes de corrida
(ubicar frente de corrida)
Composicin
TAE
TBE
Azul de bromofenol
(corre como DNA 300 pb)
Xylene Cyanol
(corre como DNA 4000 pb)
Orange G
(corre como DNA 50 pb)
Tiempo
Depende del tamao de los fragmentos a separar
A
tiempo
resolucin
Temperatura
A
Temperatura
pH
23/09/2014
TINCION Y VISUALIZACIN DE
LA MUESTRA
Revelado
(tumorignico)
Agentes
intercalantes
SyBR Gold
Fluoresce amarillo
Poca afinidad gel (bajo background)
Detecta hasta 20 pg DNA ds
Seguro (no tumorignico)
Caro
Se ve un barrido:
* DNA d egradado
* Ex ceso de DNA
* La e nzima no funciona
* T e mperatura de alineacin
d e masiado b aja
SMEAR
23/09/2014